ES2659877T3 - Un gen que codifica un homólogo de glicoproteína p humana multifármaco-resistente en el cromosoma 7p15-21 y usos del mismo - Google Patents

Abstract

Una proteína sustancialmente pura que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

Description

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Los anticuerpos para la glicoproteína P del cromosoma 7p pueden utilizarse también en procedimientos de purificación (véase en general, Dean et al., Affinity Chromatography, A Practical Approach, IRL Press (1986)). Típicamente, el anticuerpo se inmoviliza en una matriz cromatográfica tal como Sepharosa, 4B. La matriz se introduce luego como relleno en una columna y la preparación que contiene la glicoproteína P del cromosoma 7p se hace pasar a su través en condiciones que promueven la fijación, v.g., condiciones bajas en sal. La columna se lava luego, y la proteína se eluye utilizando tampón que promueve la disociación del anticuerpo, v.g., un tampón que tiene un pH o concentración de sal alterados. La proteína eluida puede transferirse a un tampón, por ejemplo por diálisis, y almacenarse después de ello o utilizarse directamente. Pueden utilizarse también anticuerpos en transferencia Western para la detección de la glicoproteína P del cromosoma 7p en una muestra. Para estos tipos de ensayos, puede utilizarse un anticuerpo que o bien se ha desarrollado específicamente para reaccionar con la glicoproteína P del cromosoma 7p o que reacciona con un epítope de la proteína.

La detección de la glicoproteína P del cromosoma 7p puede utilizarse para determinar si las células tumorales son multifármaco-resistentes. Análogamente, la detección de cambios en la expresión de la glicoproteína P puede ser útil en la predicción del desarrollo de multifármaco-resistencia en las células. El cDNA de esta glicoproteína P puede ser útil en el diseño de iniciadores para PCR de diagnóstico, diseño de sondas para transferencia Northern de diagnóstico, ensayos de protección de RNAsas, y para el diseño de los oligonucleótidos antisentido complementarios al cDNA predicho para uso en estrategias de direccionamiento de genes para la inversión de la multifármaco-resistencia. Se contemplan usos diagnósticos y terapéuticos tanto in vitro como in vivo para secuencias de nucleótidos antisentido para la glicoproteína P del cromosoma 7p.

La secuencia de aminoácidos primaria y la estructura proteínica de la glicoproteína P del cromosoma 7p pueden utilizarse en la producción de anticuerpos monoclonales (mAbs) que pueden emplearse en la diagnosis y terapia del cáncer multifármaco-resistente. Por ejemplo, péptidos sintéticos que se asemejan a secuencias nativas de aminoácidos de dominios extracelulares particulares como se determinan por predicción de topología de membrana pueden ser útiles para desarrollar mAbs inhibidores dirigidos contra epítopes extracelulares de la glicoproteína P del cromosoma 7p. Adicionalmente, secuencias peptídicas sintéticas de 10-20 meros derivadas de la secuencia primaria de aminoácidos no incluidas en las secuencias de bucle extracelular arriba mencionadas pueden ser útiles en el desarrollo de anticuerpos monoclonales específicos de diagnóstico. Pueden emplearse mAbs específicos en el análisis diagnóstico por FACS, transferencia Western, e inmunohistoquímica. Tales mAbs pueden emplearse también para usos diagnósticos in vivo, donde pueden utilizarse mAbs conjugados a un marcador para evaluar la carga tumoral, la localización del tumor o la masa residual tumoral después de quimioterapia o terapia quirúrgica de tumores que expresan la glicoproteína P 7p15

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Pueden utilizarse también mAbs específicos para propósitos terapéuticos en pacientes de cáncer. En particular, aquéllos pueden administrarse para invertir la resistencia multifármaco del cáncer en pacientes que reciben agentes quimioterapéuticos que son sustratos para el eflujo de glicoproteína P 7p, v.g., cisplatino. Adicionalmente, pueden utilizarse terapéuticamente mAbs específicos en pacientes de cáncer para destrucción de las células especificas del tumor, sea administrados en una forma no conjugada, que da como resultado la destrucción del tumor mediada por el sistema inmunitario, o en una forma conjugada con una toxina celular (por ejemplo conjugada a yodo reactivo o toxinas químicas), dando como resultado la destrucción directa de las células específicas del tumor.

Pueden utilizarse también mAbs específicos para propósitos terapéuticos distintos de la resistencia del cáncer a multifármacos. Basándose en la función inmunorreguladora predicha de la glicoproteína P 7p, estos mAbs pueden administrarse a pacientes a fin de prevenir y/o tratar el rechazo de trasplantes de órganos, así como diversas enfermedades autoinmunes tales como artritis reumatoide y esclerosis múltiple. Adicionalmente, dado que las glicoproteínas P funcionan en la captura, excreción y distribución específica de tejido de una diversidad de compuestos farmacológicos y químicos, y se han visto implicadas en mecanismos de biodisponibilidad oral, función de la barrera hematoencefálica y mecanismos de excreción renal, hepática y biliar de diversos fármacos, pueden administrarse mAbs específicos terapéuticamente para alterar la farmacocinética y la disponibilidad de dichos fármacos terapéuticos que son sustratos para la función de trasporte mediada por la glicoproteína P 7p.

Las composiciones y métodos de la presente invención pueden tener cierto número de usos en además de los arriba descritos. Por ejemplo, se sabe que las células madre pluripotentes y células progenitoras tisulares tales como células madre hematopoyéticas, células neuroprogenitoras y células progenitoras musculares poseen actividades de eflujo afines a la glicoproteína P para pequeñas moléculas y colorantes fluorescentes. La glicoproteína P del cromosoma 7p puede jugar un papel en el transporte de dichos sustratos, y puede servir por tanto como marcador para el aislamiento de tales células madre y células progenitoras mediante, por ejemplo, análisis FACS. Asimismo, dado que la glicoproteína P MDR1 parece estar implicada en la diferenciación celular, la proliferación celular, la supervivencia celular, y ciertas respuestas inmunitarias, la glicoproteína P del cromosoma 7p, debido a su homología con la glicoproteína P MDR1, se espera que juegue también un papel en dichas funciones fisiológicas. Así pues, las secuencias del gen de la glicoproteína P y de la proteína del cromosoma 7p pueden ser útiles en la modulación de las alteraciones patofisiológicas de estas funciones relacionadas con MDR.

Ejemplos

Dado que actualmente está produciéndose nueva información de secuencias genómicas a un ritmo rápido por el

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Claims (1)

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