ES2693257T3 - Inhibidores de PI3K-delta y métodos para su uso y fabricación - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de Fórmula II**Fórmula** o un estereoisómero o mezcla de estereoisómeros del mismo, opcionalmente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde: X es NH o N-alquilo (C1-C6) sustituido opcionalmente; Y es alquileno (C1-C6) sustituido opcionalmente en el que hasta dos átomos de carbono del alquileno (C1-C6) son reemplazados por O, NH, N-alquilo(C1-C6), -NH-(C>=O)-, -N-alquilo(C1-C6)-(C>=O)-, o -(C>=O); Q es alquileno (C1-C6); Z es -NH-(C>=O)- o N-alquilo(C1-C6)-(C>=O); R1 es halógeno, hidroxi, ciano, arilo sustituido opcionalmente, heteroarilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, alquilo (C1-C6) sustituido opcionalmente, alcoxi (C1-C6) sustituido opcionalmente, alquilo(C1-C6)-OH, NH2, -NH-alquilo(C1-C6), -NH-(alquilo(C1-C6))2, -NH-(C>=O)-R5, -(C>=O)NR6R7, o -NH-(SO2)-R8; R2 es NH2, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, o heteroarilo sustituido opcionalmente, R5 es H, alquilo (C1-C6) sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, o heteroarilo sustituido opcionalmente; R6 y R7 son cada uno de forma independiente H, alquilo (C1-C6) sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, heteroarilo sustituido opcionalmente, o R6 y R7, junto con los átomos a los que están unidos, pueden considerarse en conjunto para formar un anillo de 3, 4, 5, 6 o 7 miembros sustituido opcionalmente; R8 es alquilo (C1-C6) sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, o heteroarilo sustituido opcionalmente.

Description

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DESCRIPCION
Inhibidores de PI3K-delta y metodos para su uso y fabricacion Campo de la invencion
Esta invencion se refiere al campo de las protema quinasas y a los inhibidores de las mismas. En particular, la invencion se refiere a inhibidores de PI3K delta, y a metodos de su uso.
Antecedentes de la invencion
Las fosfoinositida 3-quinasas (PI3Ks) son enzimas heterodimericas que utilizan actividad tanto de lfpido como de protema para regular numerosas rutas de senalizacion lipfdicas responsables de coordinar un amplio abanico de actividades celulares, que incluyen la supervivencia, la proliferacion y la diferenciacion celular, asf como respuestas inflamatorias. La funcion cntica de las Pl3Ks en esta variedad de importantes procesos celulares las convierte en una diana muy atractiva para intervencion farmaceutica. La clase de Pl3Ks relevante para esta descripcion cataliza la fosforilacion de fosfatilil-inositol (4,5)-bifosfato (PtIns(4,5)P2 o PIP2) en el grupo 3-hidroxilo del anillo de inositol para producir la molecula de senalizacion fosfatilil-inositol (3,4,5)-trifosfato (PtIns(3,4,5)P3 o PIP3).
Despues de estudios extensivos llevados a cabo sobre el papel fisiologico de la isoforma PI3K delta en enfermedades, se ha implicado a la PI3K en un gran numero de disfunciones inmunologicas, inflamatorias y de regulacion celular. Los estudios iniciales se han centrado en su papel en las patologfas inmunes e inflamatorias. La PI3K delta desempena una funcion significativa en el desarrollo, diferenciacion, proliferacion y funcion efectora de celulas B y celulas T. Ratones con activacion de PI3K delta (D910A/D910A) han mostrado respuestas afectadas o disminuidas de celulas T proliferativas y de produccion de quimiocinas cuando se estimulan con antfgenos espedficos de receptores de celula T. Ademas, estos animales que expresan PI3K delta presentan bajas respuestas de anticuerpos independientes de celula T simultaneas a un bajo desarrollo de centros germinales en el bazo, los nodos linfaticos y los placas de Peyer, e hiperplasia linfoidea tras inmunizacion. La inhibicion de la funcion de PI3K delta tambien conduce a una localizacion disfuncional de celulas T en zonas de inflamacion. La actividad de PI3K delta tambien ha sido implicada en el control de celulas Treg. Los ratones PI3K delta (D910A/D910A) presentan celulas Treg que no son capaces de: 1.) suprimir la proliferacion de celulas T CD4+ CD25- in vitro, asf como celulas Treg procedentes de animales silvestres; 2.) producir niveles detectables de la citosina anti-inflamatoria IL-10; y 3.) proteger contra colitis experimental.
Los efectos de PI3K delta en celulas B no son menos significativos. Los ratones que carecen de actividad catalftica del p110 presentan numeros reducidos de celulas B1 y B de zona marginal (MZ), niveles reducidos de inmunoglobulinas de suero, y responden mal a la inmunizacion con un antfgeno independiente de timo y son defectuosas en sus respuestas primarias y secundarias a antfgenos dependientes de timo. La inhibicion de PI3K delta a traves de inhibidores selectivos de PI3K delta ha demostrado una inhibicion de la proliferacion de celulas B inducida por receptor de celula B, y un aumento de la recombinacion de clase-cambio, y defectos en la quimiotaxis de celulas B.
Las observaciones experimentales de que la PI3K delta puede desempenar un papel significativo en la mediacion de la funcion pro-inflamatoria de celulas hematopoyeticas no linfoides han surgido de estudios que implican celulas inmunes hematopoyeticas tales como neutrofilos, macrofagos, celulas dendnticas, mastocitos y eosinofilos. Por ejemplo, la PI3K delta es requerida para la dispersion y polarizacion de neutrofilos, la regulacion de la migracion de neutrofilos, la desgranulacion de mastocitos, entre otras muchas. Una revision de las funciones importantes de PI3K delta en respuestas inmunes innatas y adaptativas, ha generado una intensa investigacion de la funcion de PI3K delta en enfermedades inmunes tales como alergia, asma, enfermedades autoinmunes e inflamacion.
Aunque una porcion significativa de la bibliograffa cientffica publicada se ha centrado en las respuestas inmunes, tal como la inflamacion, la enfermedad autoinmune, y similares, un area atractiva y productiva de investigacion incluye el papel de la PI3K delta en el cancer. Ya se han aportado modelos experimentales para las funciones putativas de la PI3K alfa y la PI3K beta en procesos celulares malignos, que incluyen: (i) la sobreexpresion es capaz de inducir la transformacion en modelos experimentales; (ii) la implicacion en la proliferacion celular y en la angiogenesis tumoral; (iii) la implicacion en la transformacion inducida por Ras y la oncogenesis; (iv) activar mutaciones en los dominios helicoidales y de quinasa en tumores colon y mama; y (v) transformacion inducida por la inactivacion de PTEN in vitro e in vivo.
Como ocurre con la PI3K alfa y la PI3K beta, la PI3K delta tambien induce una transformacion oncogenica en cultivos. Cuando se introduce PI3K delta en fibroblastos de embrion de pollo (CEFs) con un vector retroviral aviar, se forman focos distinguibles en menos de diez dfas. Cuando se introduce la PI3K delta inactiva de quinasa D910A en CEFs, no se observa la formacion de focos, lo que indica que la transformacion requiere un dominio catalttico activo. Tal como se observo en una variante oncogenica de PI3K alfa (H1047R), las CEFs infectadas con PI3K delta presentaron una activacion constitutiva de Akt en un nivel similar a la PI3K alfa, incluso en condiciones de suero limitado.
Al menos por las razones proporcionadas anteriormente, existe una necesidad de inhibidores de PI3K delta selectivos que pueden usarse para prevenir, tratar o aliviar las enfermedades mediadas por PI3K delta, particularmente en los campos del cancer, la inflamacion y las enfermedades autoinmunes.
El documento WO 2010/092340A1 describe una serie de derivados condensados de piridina y pirazina y su uso en la inhibicion de enzimas PI3K.
Sumario de la invencion
Lo incluido a continuacion solo resume determinados aspectos de la invencion y no pretender ser de naturaleza 5 limitante. Estos aspectos y otros aspectos y realizaciones se describen con mas detalle mas adelante. En caso de discrepancia entre la descripcion rapida de esta especificacion y las referencias mencionadas en la presente memoria, prevalecera la descripcion rapida de esta especificacion.
Hemos reconocido el papel importante que tiene la PI3K, particularmente la PI3K delta, en los procesos biologicos y en estados de enfermedad y, por tanto, nos hemos dado cuenta de que sena deseable disponer de inhibidores de 10 estas protema quinasas. Por consiguiente, la invencion proporciona compuestos que inhiben, regulan y/o modulan la PI3K delta que son utiles en el tratamiento de diversos canceres, enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias en mairnferos. Esta invencion tambien proporciona metodos para preparar los compuestos, el uso de dichos compuestos para el tratamiento de enfermedades, particularmente de enfermedades hiperproliferativas, en mamfferos, especialmente humanos, y composiciones farmaceuticas que contengan dichos compuestos.
15 En la presente memoria se describe un compuesto de Formula I:
imagen1
o un estereoisomero o mezcla de estereoisomeros del mismo, opcionalmente como una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en donde:
A es N, C-H o C-OH;
20 B es C-H o N;
E no esta presente o es C-R4;
G es S C-H, o C-R3;
J es C o N cuando A es C-H o C-OH, o J es C cuando A es N;
X no esta presente o es NH o es N-alquilo (Ci-Ca) opcionalmente sustituido;
25 Y no esta presente o es alquileno (Ci-Ca) opcionalmente sustituido en el que hasta dos atomos de carbono del alquileno (Ci-Ca) son sustituidos por O, NH, N-alquilo (Ci-Ca), -NH-(C=O)-, -N-alquilo(Ci-Ca)-(C=O)-, o -(C=O);
Q no esta presente o es alquileno (Ci-Ca);
Z no esta presente o es NH, N-alquilo (Ci-Ca), NH-alquileno (Ci-Ca), -NH-(C=O)-, -N-alquilo(Ci-Ca)-(C=O)-, S, SO, SO2, u O;
30 R1 es halogeno, hidroxi, ciano, arilo sustituido opcionalmente, heteroarilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente, alcoxi (Ci-Ca) sustituido opcionalmente, alquilo(Ci- Ca)-OH, NH2, -NH-alquilo(Ci-Ca), -NH-(alquilo(Ci-Ca))2, -NH-(C=O)-R5, -(C=O)NRaR7, o -NH-(SO2)-R8;
R2 es NH2, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, o heteroarilo sustituido opcionalmente,
35 R3 en cada aparicion es de forma independiente halogeno, ciano, alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente, o alcoxi (Ci-Ca);
R4 es H o alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente;
R5 es H, alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, o heteroarilo sustituido opcionalmente;
40 Ra y R7 son cada uno de forma independiente H, alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, heteroarilo sustituido opcionalmente, o Ra y R7, junto con los
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atomos a los que estan unidos, pueden considerarse en conjunto para formar un anillo de 3, 4, 5, 6 o 7 miembros sustituido opcionalmente;
R8 es alquilo (C1-Ca) sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, o heteroarilo sustituido opcionalmente.
Un primer aspecto de la invencion proporciona un compuesto como el reivindicado en la reivindicacion 1 o un estereoisomero o mezcla de estereoisomeros, opcionalmente en forma de sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
Dicho compuesto es un compuesto de Formula II:
imagen2
en el que
X es NH o es N-alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente;
Y es alquileno (Ci-Ca) sustituido opcionalmente en el que hasta dos atomos de carbono del alquileno (Ci-Ca) son reemplazados por O, Nh, N-alquilo(Ci-Ca), -NH-(C=O)-, -N-alquilo(Ci-Ca)-(C=O)-, o -(C=O);
Q es alquileno (Ci-Ca);
Z es -NH-(C=O)- o N-alquilo(Ci-Ca)-(C=O);
y cada uno de Ri y R2 son como se ha definido anteriormente para la Formula I.
Un segundo aspecto de la invencion proporciona una formulacion farmaceutica como la reivindicada en la reivindicacion i0.
En un tercer aspecto, la invencion proporciona el metodo in vitro reivindicado en la reivindicacion ii.
En un cuarto aspecto, la invencion proporciona el compuesto del primer aspecto de la invencion para uso como medicamento.
En un quinto aspecto, la invencion proporciona el compuesto para uso como se reivindica en la reivindicacion i2.
Se describe un proceso para fabricar un compuesto de Formula II-B, que comprende:
(a) convertir un compuesto de formula II-i en un compuesto de formula II-2 mediante reduccion al alcohol y conversion del alcohol en el aldehfdo, en donde Xi es halogeno;
imagen3
(b) convertir un compuesto de formula II-2 en un compuesto de formula II-3 mediante la formacion de azida y posterior reduccion;
imagen4
(c) convertir un compuesto de formula II-3 en un compuesto de formula II-4 mediante reaccion con R2-X2, en donde X2 es halogeno
imagen5
(d)
5
convertir un compuesto de formula II-4 en un compuesto de formula II-B mediante reaccion con CH3NH-Y-R1;
imagen6
Tambien se describe un proceso para fabricar un compuesto de Formula II-A, que comprende:
a) convertir el acido carbox^lico de formula II-5 en una amida de formula II-6;
imagen7
b) convertir un compuesto de formula II-6 en un compuesto de formula II-7 mediante tratamiento con cloruro de 10 2-haloacetilo, en donde X1 es halo;
imagen8
c) convertir un compuesto de formula II-7 en un compuesto de formula II-8 mediante formacion de azida y posterior reduccion;
15 d)
imagen9
convertir un compuesto de formula II-8 en un compuesto de formula II-A mediante reaccion con R2-CO2H;
imagen10
Descripcion detallada de la invencion
Las siguientes abreviaturas y terminos tienen los significados indicados a continuacion:
Abreviatura
Significado
AcOH
acido acetico
Br
ancho
°C
grados Celsius
conc.
concentrado
d
doblete
dd
doblete de doblete
dt
doblete de triplete
DCM
diclorometano
DIEA o DIPEA
W,W-di-isopropil-A/-etilamina
DMA
W,W-dimetilacetamida
DME
1,2-dimetoxietano
DMF
W,W-dimetilformamida
DMSO
dimetil sulfoxido
dppf
1,1'-bis(difenilfosfano)ferroceno
EI
ionizacion por impacto de electrones
equiv
equivalentes
g
gramo(s)
GC/MS
cromatograffa de gases/espectrometna de masas
h
hora(s)
HATU
hexafluoruro de 2-(1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3- tetrametil uronio
HPLC
cromatograffa de ffquidos de alta presion
L
litro(s)
LC/MS
cromatograffa de ffquidos/espectrometna de masas
M
molar o molaridad
m
Multiplete
MeOH
metanol
mg
miligramo(s)
MHz
megahercio (frecuencia)
min
minuto(s)
mL
mililitro(s)
ml
microlitro(s)
mm
micromolar
Abreviatura
Significado
pmol
micromol(es)
mM
Milimolar
mmol
milimol(es)
mol
mol(es)
MS
analisis espectral de masas
Ms
mesilo
N
normal o normalidad
nM
Nanomolar
RMN
espectroscopfa de resonancia magnetica nuclear
q
cuartete
cuant.
cuantitativo
rt
Temperatura ambiente
s
singlete
t o tr
triplete
THF
tetrahidrofurano
Ts
tosilo
El simbolo “-” significa enlace sencillo, “=” significa enlace doble, “=” significa enlace triple, “-------significa enlace
sencillo o enlace doble. El simbolo “>a/w” se refiere a un grupo de un doble enlace que ocupa cualquier posicion del extremo de un doble enlace al cual el simbolo esta unido; es decir, la geometria, E- o Z-, del doble enlace es ambigua.
5 Cuando un grupo se representa separado de su Formula original, el simbolo se usara en el extremo del enlace que fue roto teoricamente para separar el grupo de su Formula estructural original.
Cuando se representan o describen estructuras qmmicas, a menos que se indique expUcitamente lo contrario, se asume que todos los carbonos presentan sustituciones de hidrogeno para conformar una valencia de cuatro. Por ejemplo, en la estructura de la izquierda del esquema presentado a continuacion hay implfcitos nueve hidrogenos. Los 10 nueve hidrogenos se representan en la estructura de la derecha. A veces un atomo particular de una estructura se describe en la Formula textual como que presenta un hidrogeno o hidrogenos como sustitucion (hidrogeno definido expresamente), por ejemplo, -CH2CH2-. El especialista en la tecnica entiende que las tecnicas descriptivas mencionadas anteriormente son comunes en el arte de la qmmica para proporcionar brevedad y simplicidad en la descripcion de estructuras por otra parte complejas.
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Si el grupo “R” se representa “flotando” en un sistema de anillo, como por ejemplo en la Formula:
imagen11
imagen12
entonces, a menos que se defina de otro modo, un sustituyente “R” puede residir en cualquier atomo del sistema de anillo, suponiendo el reemplazamiento de un hidrogeno representado, implicito o definido expresamente en uno de los 20 atomos del anillo, siempre que se forme una estructura estable.
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Si un grupo “R” se muestra flotando en un sistema de anillos condensados o enlazados por puentes, como por ejemplo en la Formula e:
imagen13
entonces, a menos que se defina de otro modo, un sustituyente R puede residir en cualquier atomo del sistema de anillos fusionados o enlazados por puentes, suponiendo el reemplazamiento de un hidrogeno representado (por ejemplo el -NH- de la Formula anterior), un hidrogeno implicito (por ejemplo como en la Formula anterior, en donde los hidrogenos no se muestran pero se entiende que estan presentes), o un hidrogeno definido expresamente (por ejemplo cuando en la Formula anterior, “Z” es igual a =CH-) en uno de los atomos del anillo, siempre que se forme una estructura estable. En el ejemplo representado, el grupo “R” puede residir en cualquiera de los anillos, el de 5 miembros o el de 6 miembros, del sistema de anillos condensados o enlazados por puentes.
Cuando un grupo “R” se representa como existente en un sistema de anillos que contiene carbonos saturados, como por ejemplo en la Formula:
imagen14
en donde, en este ejemplo, “y” puede ser mas de uno, asumiendo que cada uno de ellos reemplaza un hidrogeno actualmente representado, implicito o definido expresamente en el anillo; entonces, a menos que se defina otra cosa, cuando la estructura resultante es estable, dos “R's” pueden residir sobre el mismo carbono. En otro ejemplo, dos R's sobre el mismo carbono, incluido dicho carbono, pueden formar un anillo, creando de este modo una estructura de anillo espirodclica con el anillo representado como, por ejemplo, en la Formula:
imagen15
“Acilo” significa un radical -C(O)R en donde R es alquilo, haloalquilo, alquenilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilalquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, p.ej., acetilo, trifluorometilcarbonilo, o 2-metoxietilcarbonilo, y similar.
“Acilamino” significa un radical -NRR' en donde R es hidrogeno, hidroxilo, alquilo o alcoxi, y R' es acilo, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Aciloxi” significa un radical -OR en donde R es acilo, tal como se ha definido en la presente memoria, p.ej. cianometilcarboniloxi, y similares.
“Administracion” y variantes de este termino (p.ej., “administrar” un compuesto) en referencia a un compuesto de la invencion significa introducir el compuesto de la invencion en el organismo del animal que necesita el tratamiento. Cuando se proporciona un compuesto de la invencion, o un profarmaco del mismo, en combinacion con uno o mas agentes activos (p.ej., cirugfa, radiacion y quimioterapia, etc.), “administracion” y sus variantes deben entenderse como que incluyen la introduccion concurrente y secuencial del compuesto o su profarmaco y otros agentes.
“Alquenilo” significa un radical de hidrocarburo monovalente lineal de dos a seis atomos de carbono o un radical de hidrocarburo monovalente ramificado de tres a 6 atomos de carbono, radical que contiene al menos un doble enlace, p.ej., etenilo, propenilo, 1-but-3-enilo, y 1-pent-3-enilo, y similares.
“Alcoxi” significa un grupo -OR en el que R es un grupo alquilo como se ha definido en la presente memoria. Los ejemplos incluyen metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, y similares.
“Alcoxialquilo” significa un grupo alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con al menos uno, espedficamente uno, dos o tres grupos alcoxi, tal como se ha definido en la presente memoria. Los ejemplos representativos incluyen metoximetilo y similares.
“Alcoxicarbonilo” significa un grupo -C(O)R en el que R es alcoxi, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Alquilo” significa un radical de hidrocarburo monovalente saturado lineal de una a seis atomos de carbono o un radical de hidrocarburo monovalente saturado ramificado de tres a 6 atomos de carbono, p.ej., metilo, etilo, propilo, 2-propilo, butilo (incluyendo todas las formas isomericas), o pentilo (incluyendo todas las formas isomericas), y similares.
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“Alquilamino” significa un grupo -NHR en el que R es alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria.
“AlquNaminoalquNo” significa un grupo alquilo sustituido con uno o mas grupos alquilamino, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Alquilaminoalquiloxi” significa un grupo -OR en el que R es alquilaminoalquilo, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Alquilcarbonilo” significa un grupo -C(O)R en el que R es alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Alquileno” significa un radical de hidrocarburo divalente de cadena lineal o ramificada sustituido opcionalmente, que preferiblemente tiene entre uno y diez atomos de carbono, a menos que se especifique lo contrario. Los ejemplos de “alquileno” tal como se usa en la presente memoria incluyen, aunque sin limitacion, metileno, etileno, n-propileno, n- butileno, y similares.
“Alquilsulfonilo” significa un grupo -S(O)2R en el que R es alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Alquilsulfonilalquilo” significa un grupo alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con al menos uno, preferiblemente uno o dos, grupos alquilsulfonilo, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Alquinilo” significa un radical de hidrocarburo monovalente lineal de dos a seis atomos de carbono o un radical de hidrocarburo monovalente ramificado de tres a 6 atomos de carbono, radical que contiene al menos un enlace triple, p.ej., etinilo, propinilo, butinilo, pentin-2-ilo y similares.
“Amino” significa -NH2.
“Aminoalquilo” significa un grupo alquilo sustituido con al menos uno, espedficamente uno, dos o tres grupos amino. “Aminoalquiloxi” significa un grupo -OR en el que R es aminoalquilo, tal como se ha definido en la presente memoria. “Aminocarbonilo” significa un grupo -C(O)NH2.
“Alquilaminocarbonilo” significa un grupo -C(O)NHR en el que R es alquilo tal como se ha definido en la presente memoria.
“Arilo” significa un anillo mono- o bi-carbodclico monovalente de seis a catorce miembros, en donde el anillo monodclico es aromatico y al menos uno de los anillos del anillo bidclico es aromatico. A menos que se indique lo contrario, la valencia del grupo puede estar localizada en cualquier atomo de cualquier anillo dentro del radical, siempre que lo permitan las reglas de valencia. Los ejemplos representativos incluyen fenilo, naftilo e indanilo, y similares.
“Arilalquilo” significa un radical alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con uno o dos grupos arilo, tal como se ha definido en la presente memoria, p.ej., bencilo y fenetilo, y similares.
“Arilalquiloxi” significa un grupo -OR en el que R es arilaquilo, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Cianoalquilo” significa un grupo alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con uno o dos grupos ciano.
“Cicloalquilo” significa un radical de hidrocarburo monovalente, saturado o parcialmente insaturado (pero no aromatico), monodclico o bidclico o tridclico condensado o enlazado por puentes, de tres a diez atomos en el anillo. A menos que se indique lo contrario, la valencia del grupo puede estar localizada sobre cualquier atomo de cualquier anillo dentro del radical, siempre que lo permitan las reglas de valencia. Uno o dos atomos de carbono del anillo pueden ser reemplazados por un grupo -C(O)-, -C(S)- o -C(=NH)-. Mas espedficamente, el termino cicloalquilo incluye, aunque sin limitacion, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclohex-3-enilo, o (1r,3r,5R,7R)- triciclo[3.3.1.137]decan-2-ilo, y similares.
“Cicloalquilalquilo” significa un grupo alquilo sustituido con al menos uno, espedficamente uno o dos, grupo(s) cicloalquilo tal como se ha definido en la presente memoria.
“Dialquilamino” significa un radical -NRR' en el que R y R' son alquilo tal como se ha definido en la presente memoria, o un derivado de N-oxido, o un derivado protegido del mismo, p.ej., dimetilamino, dietilamino, W,A/-metilpropilamino o W,W-metiletilamino, y similares.
“Dialquilaminoalquilo” significa un grupo alquilo sustituido con uno o dos grupos dialquilamino, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Dialquilaminoalquiloxi” significa un grupo -OR en el que R es dialquilaminoalquilo, tal como se ha definido en la presente memoria. Los ejemplos representativos incluyen 2-(W,W-dietilamino)-etiloxi, y similares.
“Dialquilaminocarbonilo” significa un grupo -C(O)NRR' en el que R y R' son alquilo tal como se ha definido en la presente memoria.
“Halogeno” o “halo” se refiere a fluor, cloro, bromo y yodo.
“Haloalcoxi” significa un grupo -OR' en el que R' es haloalquilo tal como se ha definido en la presente memoria, p.ej., 5 trifluorometoxi o 2,2,2-trifluoroetoxi, y similares.
“Haloalquilo” significa un grupo alquilo sustituido con uno o mas halogenos, espedficamente 1, 2, 3, 4, 5 o 6 atomos de halogeno, p.ej., trifluorometilo, 2-cloroetilo y 2,2-difluoroetilo, y similares.
“Heteroarilo” significa un radical monovalente monodclico o bidclico condensado o enlazado por puente de 5 a 14 atomos de anillo, que contiene uno o mas, espedficamente uno, dos, tres o cuatro heteroatomos de anillo, donde cada 10 heteroatomo es de forma independiente -O-, -S(O)n- (n es 0, 1 o 2), -NH-, -N=, o N-oxido, siendo el resto de atomos del anillo carbonos, donde el anillo que comprende un radical monodclico es aromatico y donde al menos uno de los anillos condensados comprendidos en el radical bidclico es aromatico. Uno o dos atomos de carbono del anillo de cualquiera de los anillos no aromaticos comprendidos en un radical bidclico puede ser reemplazado por un grupo - C(O)-, -C(S)- o -C(=NH)-. A menos que se indique lo contrario, la Valencia puede estar localizada sobre cualquier 15 atomo de cualquier anillo del grupo heteroarilo, siempre que lo permitan las reglas de Valencia. Mas espedficamente, el termino heteroarilo incluye, aunque sin limitacion, 1,2,4-triazolilo, 1,3,5-triazolilo, ftalimidilo, piridinilo, pirrolilo, imidazolilo, tienilo, furanilo, indolilo, 2,3-dihidro-1H-indolilo (que incluye, por ejemplo, 2,3-dihidro-1H-indol-2-ilo o 2,3- dihidro-1H-indol-5-ilo, y similares), isoindolilo, indolinilo, isoindolinilo, bencimidazolilo, benzodioxol-4-ilo, benzofuranilo, cinnolinilo, indolizinilo, naftiridin-3-ilo, ftalazin-3-ilo, ftalazin-4-ilo, pteridinilo, purinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 20 tetrazoilo, pirazolilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, oxazolilo, isooxazolilo, oxadiazolilo, benzoxazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo (que incluye, por ejemplo, tetrahidroisoquinolin-4-ilo o tetrahidroisoquinolin-6-ilo, y similares), pirrolo[3,2-c]piridinilo (que incluye, por ejemplo, pirrolo[3,2-c]piridin-2-ilo o pirrolo[3,2-c]piridin-7-ilo, y similares), benzopiranilo, 2,3-dihidrobenzofuranilo, benzo[d][1,3]dioxolilo, 2,3-dihidrobenzo[d][1,4]dioxinilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, benzotiazolilo, benzotienilo, y los derivados del mismo, o N-oxido o un derivado protegido del 25 mismo. El termino “heteroarilo de 5 o 6 miembros” describe un subconjunto del termino “heteroarilo”.
“Heteroarilalquilo” significa un grupo alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con al menos uno, espedficamente uno o dos grupo(s) heteorarilo, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Heterocicloalquilo” significa un grupo monodclico monovalente saturado o parcialmente insaturado (pero no aromatico) de 3 a 8 atomos de anillo, o un grupo bidclico o tridclico monovalente condensado o enlazado por puentes 30 saturado o parcialmente insaturado (pero no aromatico) de 5 a 12 atomos de anillo, donde hay uno o mas, espedficamente uno, dos, tres o cuatro heteroatomos de anillo, donde cada heteroatomo es de forma independiente O, S(O)n (n es 0, 1 o 2), -N= o -NH-, siendo el resto de atomos de anillo carbonos. Uno o dos atomos de carbono del anillo pueden ser reemplazados por un grupo -C(O)-, -C(S)- o -C(=NH)-. A menos que se indique lo contrario, la valencia del grupo puede estar localizada en cualquier atomo de cualquier anillo dentro del radical, siempre que lo 35 permitan las reglas de valencia. Cuando el punto de valencia esta localizado sobre un atomo de nitrogeno, Ry no esta presente. Mas espedficamente, el termino heterocicloalquilo incluye, aunque sin limitacion, azetidinilo, pirrolidinilo, 2- oxopirrolidinilo, 2,5-dihidro-1H-pirrolilo, piperidinilo, 4-piperidonilo, morfolinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo, tetrahidropiranilo, 2-oxopiperidinilo, tiomorfolinilo, tiamorfolinilo, perhidroazepinilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, dihidropiridinilo, tetrahidropiridinilo, oxazolinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolinilo, tiazolidinilo, 40 quinuclidinilo, isotiazolidinilo, octahidrociclopenta[c]pirrolilo, octahidroindolilo, octahidroisoindolilo,
decahidroisoquinolilo, tetrahidrofurilo, tetrahidropiranilo, (3aR,6aS)-5-metiloctahidrociclopenta[c]pirrolilo, y (3aS,6aR)- 5-metil-1,2,3,3a,4,6a-hexahidrociclopenta[c]pirrolilo, y los derivados de los mismos y N-oxido o un derivado protegido del mismo.
“Heterocicloalquilalquilo” significa un radical alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con 45 uno o dos grupos heterocicloalquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, p.ej., morfolinilmetilo, N- pirrolidiniletilo, y 3-(N-azetidinil)propilo, y similares.
“Heterocicloalquiloxi” significa un grupo -OR en el que R es heterocicloalquilo, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Hidroxialquilo” significa un grupo alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con al menos 50 uno, preferiblemente 1, 2, 3 o 4 grupos hidroxi.
“Fenilaquilo” significa un grupo alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con uno o dos grupos fenilo.
“Fenilalquiloxi” significa un grupo -OR en el que R es fenilalquilo, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Opcional” u “opcionalmente” significa que el evento o circunstancia descrito a continuacion puede producirse o no, y 55 que la descripcion incluye ejemplos en los que dicho evento o circunstancia se produce y ejemplos en los que no. El especialista en la tecnica entendera que, en relacion a cualquier molecula que se describa que contiene uno o mas
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sustituyentes opcionales, solo se pretende incluir aquellos compuestos que sean estericamente practicos y/o sinteticamente viables. “Sustituido opcionalmente” se refiere a todas las modificaciones posteriores de un termino, a menos que indique lo contrario. A continuacion se presenta una lista de ejemplos de sustituciones opcionales incluidas en la definicion de “sustituido”.
“Arilo sustituido opcionalmente” significa un grupo arilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes, de forma independiente acilo, acilamino, aciloxi, alquilo, haloalquilo, alquenilo, alcoxi, alqueniloxi, halo, hidroxi, alcoxicarbonilo, alqueniloxicarbonilo, amino, alquilamino, dialquilamino, nitro, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, carboxi, ciano, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo, alquilsulfonilamino, o aminoalcoxi; o arilo es pentafluorofenilo. Dentro de los sustituyentes opcionales para “arilo”, el alquilo y alquenilo, tanto solos o como parte de otro grupo (que incluye, por ejemplo, el alquilo de un alcoxicarbonilo), estan sustituidos opcionalmente de forma independiente con uno, dos, tres, cuatro o cinco halogenos.
“Arilalquilo sustituido opcionalmente” significa un grupo alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con arilo sustituido opcionalmente, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Cicloalquilo sustituido opcionalmente” significa un grupo cicloalquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con uno, dos o tres grupos, de forma independiente acilo, aciloxi, acilamino, alquilo, haloalquilo, alquenilo, alcoxi, alqueniloxi, alcoxicarbonilo, alqueniloxicarbonilo, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo, alquilsulfonilamino, halo, hidroxi, amino, alquilamino, dialquilamino, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, nitro, alcoxialquiloxi, aminoalcoxi, alquilaminoalcoxi, dialquilaminoalcoxi, carboxi o ciano. Dentro de los sustituyentes opcionales anteriores para “cicloalquilo”, el alquilo y alquenilo, tanto solos o como formando parte de otro sustituyente del anillo de cicloalquilo, estan sustituidos opcionalmente de forma independiente con uno, dos, tres, cuatro o cinco halogenos, p.ej., haloalquilo, haloalcoxi, haloalqueniloxi o haloalquilsulfonilo.
“Cicloalquilalquilo sustituido opcionalmente” significa un grupo alquilo sustituido con al menos uno, espedficamente uno o dos grupos cicloalquilo sustituidos opcionalmente, tal como se define en la presente memoria.
“Heteroarilo sustituido opcionalmente” significa un grupo heteroarilo sustituido opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes, de forma independiente, acilo, acilamino, aciloxi, alquilo, haloalquilo, alquenilo, alcoxi, alqueniloxi, halo, hidroxi, alcoxicarbonilo, alqueniloxicarbonilo, amino, alquilamino, dialquilamino, nitro, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, carboxi, ciano, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo, alquilsulfonilamino, aminoalcoxi, alquilaminoalcoxi o dialquilaminoalcoxi. Dentro de los sustituyentes opcionales para “heteroarilo”, el alquilo y alquenilo, tanto solos o como parte de otro grupo (que incluye, por ejemplo, el alquilo de un alcoxicarbonilo), estan sustituidos opcionalmente de forma independiente con uno, dos, tres, cuatro o cinco halogenos.
“Heteroarilalquilo sustituido opcionalmente” significa un grupo alquilo, tal como se define en la presente memoria, sustituido con al menos uno, espedficamente uno o dos, grupo(s) heteroarilo sustituido(s) opcionalmente, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Heterocicloalquilo sustituido opcionalmente” significa un grupo heterocicloalquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes, de forma independiente acilo, acilamino, aciloxi, haloalquilo, alquilo, alquenilo, alcoxi, alqueniloxi, halo, hidroxi, alcoxicarbonilo, alqueniloxicarbonilo, amino, alquilamino, dialquilamino, nitro, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, carboxi, ciano, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo, alquilsulfonilamino, aminoalcoxi o fenilalquilo. Dentro de los sustituyentes opcionales para “heterocicloalquilo”, el alquilo y el alquenilo, tanto solos como formando parte de otro grupo (que incluye, por ejemplo, el alquilo del alcoxicarbonilo), estan sustituidos opcionalmente de forma independiente con uno, dos, tres, cuatro o cinco halogenos.
“Heterocicloalquilalquilo sustituido opcionalmente” significa un grupo alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con al menos uno, espedficamente uno o dos, grupo(s) heterocicloalquilo sustituido(s) opcionalmente tal como se ha definido en la presente memoria.
“Fenilo sustituido opcionalmente” significa un grupo fenilo sustituido opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes, de forma independiente acilo, acilamino, aciloxi, alquilo, haloalquilo, alquenilo, alcoxi, alqueniloxi, halo, hidroxi, alcoxicarbonilo, alqueniloxicarbonilo, amino, alquilamino, dialquilamino, nitro, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, carboxi, ciano, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo, alquilsulfonilamino, o aminoalcoxi, o arilo es pentafluorofenilo. Dentro de los sustituyentes opcionales para “fenilo”, el alquilo y el alquenilo, tanto solos como formando parte de otro grupo (que incluye, por ejemplo, el alquilo del alcoxicarbonilo), estan sustituidos opcionalmente de forma independiente con uno, dos, tres, cuatro o cinco halogenos.
“Fenilalquilo sustituido opcionalmente” significa un grupo alquilo, tal como se ha definido en la presente memoria, sustituido con uno o dos grupos fenilo sustituidos opcionalmente, tal como se ha definido en la presente memoria.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
“Fenilsulfonilo sustituido opcionalmente” significa un grupo -S(O)2R en el que R es fenilo sustituido opcionalmente, tal como se ha definido en la presente memoria.
“Oxo” significa un ox^geno que esta unido a traves de un enlace doble.
“Rendimiento” para cada una de las reacciones descritas en la presente memoria se expresa como un porcentaje del rendimiento teorico.
“Paciente” para los propositos de la presente invencion incluye humanos y otros animales, particularmente mairnferos, y otros organismos. De esta manera, los metodos son aplicables tanto a terapia para humanos como a aplicaciones veterinarias. En una realizacion espedfica el paciente es un mairnfero, y en una realizacion mas espedfica el paciente es humano.
Una “sal farmaceuticamente aceptable” de un compuesto significa una sal que es farmaceuticamente aceptable y que posee la actividad farmacologica deseada del compuesto original. Debe entenderse que las sales farmaceuticamente aceptables no son toxicas. Se puede obtener informacion adicional sobre sales farmaceuticamente aceptables adecuadas en Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, que se incorpora a la presente memoria a modo de referencia, o en S. M. Berge, y col., “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci., 1977; 66:1-19, las cuales se incorporan ambas a modo de referencia a la presente memoria.
Los ejemplos de sales de adicion acida farmaceuticamente aceptables incluyen aquellas formadas con acidos inorganicos tales como acido clorlddrico, acido bromddrico, acido sulfurico, acido mtrico, acido fosforico, y similares; asf como acidos organicos tales como acido acetico, acido trifluoroacetico, acido propionico, acido hexanoico, acido ciclopentanopropionico, acido glicolico, acido piruvico, acido lactico, acido oxalico, acido maleico, acido malonico, acido sucdnico, acido fumarico, acido tartarico, acido dtrico, acido benzoico, acido cinnamico, acido 3-(4- hidroxibenzoil)benzoico, acido mandelico, acido metanosulfonico, acido etanosulfonico, acido 1,2-etanosulfonico, acido 2-hidroxietanosulfonico, acido bencenosulfonico, acido 4-clorobencenosulfonico, acido 2-naftalenosulfonico, acido 4-toluenosulfonico, acido canforsulfonico, acido glucoheptonico, 4,4'-metilenbis-(acido 3-hidroxi-2-eno-1- carboxflico), acido 3-fenilpropionico, acido trimetilacetico, acido butilacetico terciario, acido lauril sulfurico, acido gluconico, acido glutamico, acido hidroxinaftoico, acido salidlico, acido estearico, acido muconico, acido p- toluensulfonico y acido salidlico, y similares.
Los ejemplos de sales de adicion basica farmaceuticamente aceptables incluyen aquellas formadas cuando un proton acido presente en el compuesto de partida es reemplazado por un ion metalico, tal como sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio, hierro, zinc, cobre, manganeso, aluminio, y similares. Las sales espedficas son las sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio. Las sales derivadas de bases organicas no toxicas que son farmaceuticamente aceptables incluyen, aunque sin limitacion, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas naturales, aminas dclicas y resinas de intercambio ionico basicas. Los ejemplos de bases organicas incluyen isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafema, procama, hidrabamina, colina, betama, etilendiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, trometamina, N-metilglucamina, resinas de poliamina, y similares. Los ejemplos de bases organicas son isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetilamina, diciclohexilamina, colina y cafema. El/los “platino(s)” y el(los) “agente(s) que contienen platino” incluyen, por ejemplo, cisplatino, carboplatino y oxaliplatino.
“Cantidad terapeuticamente efectiva” es una cantidad de un compuesto de la invencion que cuando se administra a un paciente, alivia un smtoma de la enfermedad. La cantidad de un compuesto de la invencion que constituye una “cantidad terapeuticamente efectiva” variara dependiendo del compuesto, el estado de la enfermedad y su gravedad, la edad del paciente a tratar, y de otros similares. La cantidad terapeuticamente efectiva puede ser determinada de forma rutinaria por el especialista en la tecnica, en base a los conocimientos del mismo y a la presente descripcion.
“Prevenir” o “prevencion” referido a una enfermedad, trastorno o smdrome incluye la inhibicion de la enfermedad para que no se produzca en un humano, es decir, hacer que los smtomas clmicos de la enfermedad, trastorno o smdrome no se desarrollen en un animal que pueda estar expuesto o que tenga predisposicion a una enfermedad, trastorno o smdrome, pero que aun no haya experimentado o manifestado smtomas de la enfermedad, trastorno o smdrome.
“Tratar” o “tratamiento” referido a una enfermedad, trastorno o smdrome, tal como se usa en la presente memoria, incluye (i) inhibir la enfermedad, trastorno o smdrome, es decir, detener su desarrollo; y (ii) aliviar la enfermedad, trastorno o smdrome, es decir, producir la regresion de la enfermedad, trastorno o smdrome. Como es sabido en la tecnica, pueden ser necesarios ajustes en funcion de si la administracion es sistemica o localizada, la edad, el peso corporal, el estado de salud general, el sexo, la dieta, el momento de la administracion, interacciones del farmaco y la gravedad de la afeccion, y los especialistas en la tecnica podran establecerlos con una experimentacion rutinaria.
Los siguientes parrafos presentan una serie de realizaciones de los compuestos de la invencion. En cada ejemplo, la realizacion incluye el compuesto mencionado, asf como un estereoisomero individual o una mezcla de estereoisomeros del mismo, asf como una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
Un compuesto de Formula II es:
imagen16
En una realizacion, el compuesto de Formula II es un compuesto de Formula II-B1 o II-B2.
imagen17
En otra realizacion, en el compuesto de Formula II, Q es CH2 o CH(CH3).
5 En otra realizacion, en el compuesto de Formula II, Z es -NH-(C=O)-.
En otra realizacion, en el compuesto de Formula II, R1 es halo, -OH, -NH2 o ciano, o es alquilo (C1-C6), alcoxi (C1-C6), pirrolidinilo, piperidinilo, piperizinilo, octahidropiridopirazinilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, fenilo, piridilo, imidazolilo, diazepinilo, morfolinilo, -SO2-alquilo (C1-C6), -SO2-arilo, -NH-alquilo (C1-C6), -NH-(alquilo (Ci-C6))2,
octahidroisoquinolinilo, dihidroisoquinolinilo, bencimidazolilo, furanilo, pirazinilo, tiazolilo, diazabicilo[2.2.1]hept-2-ilo, 10 piranilo, tetrahidropiranilo, cualquiera de los cuales puede estar sustituido opcionalmente.
En otra realizacion, en el compuesto de Formula II, R1 es bromo, -OH, -NH2, ciano, -CH3, -OCH3, SO2-CH3,
imagen18
imagen19
En otra realizacion, en el compuesto de Formula II, R2 es NH2, purinilo, pirazinilo, pirazolopirimidinilo, benzodioxinilo, fenilo, morfolinilo, oxadiazolilo, ciclopropilo o piridinilo, cualquiera de los cuales puede estar sustituido opcionalmente.
En otra realizacion, en el compuesto de Formula II, R2 es NH2,
I
1
imagen20
H2N
imagen21
En otra realizacion, en el compuesto de Formula II, II-B1, o II-B2, Z es NH(C=O)- y R1 y R2 son como se ha definido anteriormente.
Compuestos representativos
5 A continuacion se muestran los compuestos representativos de Formula II. Los ejemplos son meramente ilustrativos. Los compuestos estan nombrados segun la aplicacion sistematica de las reglas de nomenclatura acordadas por la “International Union of Pure and Applied Chemistry” (IUPAC), la “International Union of Biochemistry and Molecular Biology” (IUBMB) y el “Chemical Abstracts Service” (CAS). Espedficamente, los nombres de la Tabla 1 fueron generados usando el software de nomenclatura ACD/Labs, plataforma 8.00, version de producto 8.08 o superior.
10 Tabla 1
Compuesto
Estructura Nombre
30
CH3 |^YnYN'ch3 HN^O 3-amino-N-[8-metil-2-{metil[1-metilpiperidin-3- il)metil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina-2- carboxamida
Compuesto
Estructura Nombre
31
ch3 A^Y^hj k/k/s. HN^O ■jV2 3-amino-N-[(8-metil-2-{metil[1-metilpiperidin-4- il)metil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina-2- carboxamida
39
ch3 A^N N CH3 UU^ cHs HN^O fr™2 3-amino-N-[8-metil-2-{metil[1-metilpiperidin-2- il)metil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina-2- carboxamida
40
ch3 ch3 Ay yn^n'CH3 HNAa'-. o o N-metil-N'-[8-metil-2-{metil[2- (metilamino)etil]amino}quinolin-3- il)metil]ciclopropano-1,1-dicarboxamida
42
ch3 ch3 0 n-n &rxw HNyO h^nY^n 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(1H-tetrazol-1- ilacetil)amino]etil}amino)quinolin-3- il]metil}pirazina-2-carboxamida
43
.ch3 CH3 CH3 0 N==\ ch3 ch3 HNyO o 3-amino-N-({2-[(2-{[(3,5-dimetiMH-1,2,4-triazoM- il)acetil](metil)amino}etil)(metil)amino]-8- metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
49
CH3 CH3 O N«=\ XyvA^O ch3 HN^O H2NY^n 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(1H-pirazol-1- ilacetil)amino]etil}amino)quinolin-3- il]metil}pirazina-2-carboxamida
Compuesto
Estructura Nombre
51
o n=n. CH3 XyJ HN^O ^Ny^N 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[1H-1,2,3-triazol-1- ilacetil)amino]etil}amino)quinolin-3- il]metil}pirazina-2-carboxamida
67
ch3 ch3 0 rYiSV) ch3 N-~y hnY° ^ch3 H2NY^n IJ N-^ Quiral 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(1-propil-D- prolil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina- 2-carboxamida
68
ch3 CH3 CH3 N ]| ^| HN^O hVn -U 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(piridin-2- ilmetil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina- 2-carboxamida
73
CH3 CH3 0 [Quiral) rVVN^V> ch3 .n hnY° gh3ch3 H2NV^n nJ 3-amino-N-{[8-metil-2-[metil(2-{metil[1-(1-metiletil)- D-prolil]amino}etil)amino]quinolin-3- il}metil)pirazina-2-carboxamida
76
H3C«V N ch3 ch3 n-^Y 'ch3 /U^NJ 0 HN^O h^vJ-n 3-amino-N-({8-metil-2-[metil(2-{metil[2- (metilamino)-2-oxoetil]amino}etil)amino]quinolin-3- il}metil)pirazina-2-carboxamida
Compuesto
77
78
79
80
81
Estructura
imagen22
imagen23
imagen24
imagen25
Nombre
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(2-morfolin-4-
il-2-oxoetil)amino]etil}amino)quinolin-3-
il]metil}pirazina-2-carboxamida
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(pirazin-2-
ilcarbonil)amino]etil}amino)quinolin-3-
il]metil}pirazina-2-carboxamida
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(piridin-4-
ilcarbonil)amino]etil}amino)quinolin-3-
il]metil}pirazina-2-carboxamida
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(piridin-3-
ilcarbonil)amino]etil}amino)quinolin-3-
il]metil}pirazina-2-carboxamida
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-{metil(piridin-2-
ilcarbonil)amino]etil}amino)quinolin-3-
il]metil}pirazina-2-carboxamida
Compuesto
Estructura Nombre
82
HtAo 3-amino-N-({8-metil-2-[metil(2-{metil[(4- metilfenil)sulfonil]amino}etil)amino]quinolin-3- il}metil)pirazina-2-carboxamida
83
H3Cx CH3 CH3 N V HN^O h2n^Xn iu 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(piridin-3- ilmetil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina- 2-carboxamida
84
H3°' at ch3 ch3 n HN_^0 H3NV^n o 3-amino-N-({2-[{2- [(cianometil)(metil)amino]etil}(metil)amino]-8- metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
85
CH3 CH3 o rN XN LAA. ch3 hAo o 3-amino-N-({2-[{2-[(1H-imidazol-1- ilacetil)(metil)amino]etil}(metil)amino]-8- metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
86
CH3 CHs CH3 0 A^n yn^nnA.nV 0^3^ ch3 HNyO HaNsA-N u 3-amino-N-({8-metil-2-[metil(2-{metil[(2-metil-1H- imidazol-1-il)acetil]amino}etil)amino]quinolin-3- il}metil)pirazina-2-carboxamida
Compuesto
Estructura Nombre
87
o nh2 3-amino-N-({8-metN-2-[metN(piridin-3- NmetN)amino]quinoNn-3-N}metN)pirazina-2- carboxamida
88
?Ha orNi o0C"^ o nh2 3-amino-N-({8-metN-2-[metil(2-piridin-2- iletil)amino]quinolin-3-M}metil)pirazina-2- carboxamida
89
„ ch3 CH3 N ch3 ch3 n^Y 'ch3 ° HN^O h*nY^n >U 3-amino-N-({2-[(2-{[2-(dimetNamino)-2- oxoetil](metil)amino}etil)(metil)amino]-8- metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
90
h3c i l ch3 ch3 rTNTN^ HN X) h2nJn 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(pirazin-2- il)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2- carboxamida
94
CHj CH3 0 N=\ HN^O h2n^Xn Xj 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(2H-1,2,3- triazol-2-ilacetil)amino]etil}amino)quinolin-3- il]metil}pirazina-2-carboxamida
Compuesto
Estructura Nombre
95
iH3 H f HNyXyN O nh2 3-amino-N-({8-metil-2-[(piridin-3- NmetN)amino]quinoNn-3-N}metN)pirazina-2- carboxamida
96
A^n nh K^> u*A ^ hnYt N o nh2 3-amino-N-({8-metil-2-[(2-piridin-2- iletil)amino]quinolin-3-M}metil)pirazina-2- carboxamida
97
0 nh2 3-amino-N-({8-metil-2-[(2-piridin-3- iletil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2- carboxamida
98
,CH3 /—N CHj 9 |T^YNYN'CH3 HNy^N o nh2 3-amino-N-({8-metil-2-[metil(1-metilpirrolidin-3- il)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
99
ch3 A hnYt N 0 nh2 3-amino-N-({8-metil-2-[metil(1-metilpiperidin-4- il)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
Compuesto
Estructura Nombre
100
ch3 ch3 0 n»n CHj HN^O H2NV^N JO 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(1H-1,2,3- triazol-1-ilacetil)amino]etil}amino)quinolin-3- il]metil}pirazina-2-carboxamida
101
?* ?H3 °**o as, a HNyO h*nY^n -O 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2- [metil(metilsulfonil)amino]etil}amino)quinolin-3- il]metil}pirazina-2-carboxamida
102
CHj CH3 0 Quiral 1Ay'N<yN'-^N^V^> CH3HN-y HN^O h’nV^N IJ 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(D- prolil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina- 2-carboxamida
103
CH3 CHa O Quiral (^N~XiD HN^O H2N^Jvn o 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(L- prolil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina- 2-carboxamida
104
ch3 ch3 o'CH3 ArNTN^ HN^O H2NY^n IJ 3-amino-N-[(8-metil-2-{metil[2- (metiloxi)etil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina-2- carboxamida
Compuesto
Estructura Nombre
109
CH3 ^JU> Aj.n O HN^O H2NY^n o 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-metil(pirrolidin-1- ilacetil)amino]etil}amino)quinolin-3- il]metil}pirazina-2-carboxamida
110
o ch3 H3C X ' cn3 ch3 nO > An^nJ A HN^.0 n2NvIN o 3-amino-N-({8-metil-2-[metil(2-{metil[(1-metil-1H- imidazol-5-il)carbonil]amino}etil)amino]quinolin-3- il}metil)pirazina-2-carboxamida
113
ch3 ch3 o (VA(Ao AAA CH3 .N-V 1 ch3 HN^O H2NY^n o 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(1-metil-L- prolil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina- 2-carboxamida
114
ch3 ch3 0 ch3 kAA CH3 HN^O H2NY^n o 3-amino-N-({2-[{2-[(N,N- dimetilglicil)(metil)amino]etil}(metil)amino]-8- metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
115
O ch3 ch3 ^—NH2 Aj.nO hnYtn o nh2 3-amino-N-({2-[{2- [glicil(metil)amino]etil}(metil)amino]-8- metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
Compuesto
Estructura Nombre
116
0 ch3 CH, hnYtn o nh2 3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(N- metilglicil)amino]etil}amino)quinolin-3- il]metil}pirazina-2-carboxamida
121
CH3 (^OH HN tVn 0 nh2 3-amino-N-({2-[(2-hidroxietil)(metil)amino]-8- metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
125
CH3 (^^OH JyN NH UU^ ^ HNW 0 nh2 3-amino-N-({2-[(2-hidroxietil)airiino]-8- metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
128
ch3 ch3 ch3 HfOo h2nvXn jo 3-amino-N-[(2-{[2-(dimetilamino)etil](metil)amino}- 8-metilquinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida
129
9h3 H IO'Oa CH3 HfOo H2NV^n Jo 3-amino-N-[(2-{[2-(dimetilamino)etil]amino}-8- metilquinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida
130
ch3 ch3 A/nvn^/h3 HN^O So 3-amino-N-[(8-metil-2-{metil[2- (metilamino)etil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina- 2-carboxamida
Compuesto
Estructura Nombre
133
,ch3 HN ch3 ch3 \ p hntYn o nh2 3-amino-N-[(8-metil-2-{metil[3- (metilamino)propil]amino}quinolin-3- il)metil]pirazina-2-carboxamida
136
ch3 °a ;n-ch3 h3c ys N ch3 ch3 \ p o nh2 3-amino-N-({2-[{3-[(N,N- dimetilglicil)(metil)amino]propil}(metil)amino]-8- metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida
138
ch3 h3c-n f3 H ) HnyV 0 nh2 3-amino-N-[(2-{[3-(dimetilamino)propil]amino}-8- metilquinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida
En la presente memoria tambien se describe una composicion farmaceutica que comprende 1) un compuesto, como estereoisomero individual o como mezcla de los mismos, segun uno cualquiera de los compuestos de Formula II, o segun una cualquiera de las realizaciones anteriores, o un compuesto de la Tabla 1, opcionalmente en forma de sal 5 farmaceuticamente aceptable del mismo, y 2) un vehmulo, excipiente y/o diluyente farmaceuticamente aceptable del mismo.
En la presente memoria tambien se describe un compuesto para uso en un metodo de tratamiento de una enfermedad, trastorno o smdrome, donde la enfermedad esta asociada a actividades celulares incontroladas, anormales y/o no deseadas, efectuadas directa o indirectamente por PI3K delta, metodo que comprende administrar a un humano que 10 lo necesite una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de uno cualquiera de los compuestos de Formula II, un compuesto de una cualquiera de las anteriores realizaciones, o un compuesto de la Tabla 1, opcionalmente como sal farmaceuticamente aceptable o como composicion farmaceutica del mismo. En otra realizacion de la realizacion (V), la enfermedad es cancer. En otra realizacion de la realizacion (V), la enfermedad es cancer y el compuesto tiene la Formula II o es un compuesto de la Tabla 1.
15 En la presente memoria tambien se describe un compuesto para uso en un metodo de tratamiento de una enfermedad, trastorno o smdrome, metodo que comprende administrar a un paciente una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de cualquiera de la Formula II, un compuesto de una cualquiera de las realizaciones anteriores, o un compuesto de la Tabla 1, opcionalmente en forma de sal farmaceuticamente aceptable del mismo, o una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de Formula II, un compuesto 20 de una cualquiera de las anteriores realizaciones, o un compuesto de la Tabla 1, y un vehmulo, excipiente o diluyente farmaceuticamente aceptable.
Por ejemplo, la enfermedad puede ser cancer y el compuesto puede ser el compuesto de Formula II o un compuesto de la Tabla 1.
Administracion general
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
En un aspecto, la invencion proporciona composiciones farmaceuticas que comprenden un inhibidor de PI3K delta segun la invencion y un vehuculo, excipiente o diluyente farmaceuticamente aceptable. En otras determinadas realizaciones espedficas, la administracion es mediante ruta oral. La administracion de los compuestos de la invencion, o de sus sales farmaceuticamente aceptables, en forma pura o en una composicion farmaceutica apropiada, puede llevarse a cabo a traves de cualquiera de los modos de administracion aceptados o de agentes que tengan una utilidad similar. De esta manera, la administracion puede realizarse, por ejemplo, oralmente, nasalmente, parenteralmente (intravenosa, intramuscular o subcutanea), topicamente, transdermicamente, intravaginalmente, intravesicularmente, intracistemalmente o rectalmente, en formas de dosis solidas, semi-solidas, de polvo liofilizado o lfquidas, tales como, por ejemplo, comprimidos, supositorios, pfldoras, capsulas de gelatina blandas elasticas o duras, polvos, disoluciones, suspensiones o aerosoles, o similares, espedficamente en formas de dosis unitarias adecuadas para una administracion individual de dosis precisas.
Las composiciones incluiran un veldculo o excipiente farmaceutico convencional y un compuesto de la invencion como el/un ingrediente activo, y, adicionalmente, pueden incluir veldculos y adyuvantes, etc.
Los adyuvantes incluyen agentes conservantes, humectantes, de suspension, edulcorantes, aromatizantes, perfumes, emulsionantes y dispersantes. La prevencion de la accion de microorganismos se puede asegurar mediante diversos agentes antibacterianos y antifungicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, acido sorbico, y similares. Tambien puede ser deseable incluir agentes isotonicos, por ejemplo azucares, cloruro sodico, y similares. La absorcion prolongada de la forma farmaceutica inyectable puede conseguirse mediante el uso de agentes de absorcion retardada, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.
Si se desea, una composicion farmaceutica de la invencion tambien puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes y emulsionantes, agentes de tamponado del pH, antioxidantes, y similares, tales como, por ejemplo, acido dtrico, monolaurato de sorbitan, oleato de trietanolamina, hidroxitolueno butilado, etc.
La seleccion de formulacion depende de diversos factores, tales como el modo de administracion del farmaco (p.ej., para administracion oral, formulaciones en forma de comprimidos, pfldoras o capsulas) y de la biodisponibilidad de la sustancia farmaco. Recientemente, se han desarrollado formulaciones farmaceuticas especialmente para farmacos que muestran una baja biodisponibilidad en base al principio de que la biodisponibilidad se puede incrementar aumentando el area superficial, es decir, disminuyendo el tamano de partfcula. Por ejemplo, la Patente de EE.UU. n° 4.107.288 describe una formulacion farmaceutica que presenta partfculas en el rango de tamanos de 10 a 1.000 nm, en las que el material activo esta soportado sobre una matriz reticulada de macromoleculas. La Patente de EE.UU. n° 5.145.684 describe la produccion de una formulacion farmaceutica en la que la sustancia farmacologica es pulverizada en nanopartfculas (tamano medio de partfcula de 400 nm) en presencia de un modificador superficial, y despues se dispersa en un medio lfquido para proporcionar una formulacion farmaceutica que exhibe una biodisponibilidad marcadamente elevada.
Las composiciones adecuadas para inyeccion parenteral pueden comprender disoluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas esteriles fisiologicamente aceptables, y polvos esteriles para reconstitucion en disoluciones o dispersiones inyectables esteriles. Los ejemplos de veldculos, diluyentes, disolventes o veldculos acuosos y no acuosos adecuados incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol, y similares), mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales (tal como aceite de oliva) y esteres organicos inyectables tales como oleato de etilo. Se puede mantener una fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como la lecitina, mediante el mantenimiento del tamano de partfcula requerido en el caso de dispersiones, y mediante el uso de tensioactivos.
Una ruta espedfica de administracion es la oral, usando un regimen de dosificacion diaria conveniente que pueda ajustarse segun el grado de gravedad del estado de enfermedad que se va a tratar.
Las formas de dosis solidas para administracion oral incluyen capsulas, comprimidos, pfldoras, polvos y granulos. En dichas formas de dosis solidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un excipiente (o veldculo) inerte usual, tal como citrato sodico o fosfato dicalcico o (a) rellenos o expansores, como por ejemplo, almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y acido silfcico, (b) aglomerantes, como por ejemplo, derivados de celulosa, almidon, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y goma arabiga, (c) humectantes, como por ejemplo, glicerol, (d) agentes desintegrantes, como por ejemplo, agar-agar, carbonato calcico, almidon de patata o tapioca, acido algmico, croscarmelosa sodica, silicatos complejos, y carbonato sodico, (e) retardantes de disolucion, como por ejemplo parafina, (f) acelerantes de la absorcion, como por ejemplo, compuestos de amonio cuaternarios, (g) agentes humectantes, como por ejemplo, alcohol cetflico, y monoestearato de glicerol, e (i) lubricantes, como por ejemplo, talco, estearato calcico, estearato magnesico, polietilenglicoles solidos, lauril sulfato sodico, o mezclas de los mismos. En el caso de capsulas, comprimidos, y pfldoras, las formas de dosis tambien pueden comprender agentes tamponantes.
Las formas de dosis solidas descritas anteriormente pueden prepararse con recubrimientos y envoltorios, tales como recubrimientos entericos y otros bien conocidos en la tecnica. Pueden contener agentes calmantes, y tambien puede de una composicion tal que liberen el compuesto o compuestos activos de una determinada parte del tracto intestinal de un modo retardado. Los ejemplos de composiciones embebidas que pueden usarse son sustancias polimericas y
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ceras. Los compuestos activos tambien pueden presentarse en forma microencapsulada, si es apropiado, con uno o mas de los excipientes mencionados anteriormente.
Las formas de dosis Kquidas para administracion oral incluyen emulsiones, disoluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmaceuticamente aceptables. Dichas formas de dosis se preparan, por ejemplo, disolviendo, dispersando, etc., un compuesto(s) de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y adyuvantes farmaceuticos adicionales en un vehfculo, tal como, por ejemplo, agua, salino, dextrosa acuosa, glicerol, etanol y similares; agentes de solubilizacion y emulsionantes, como por ejemplo, alcohol etilico, alcohol de isopropilo, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bendlico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida; aceites, en particular, aceite de semilla de algodon, aceite de cacahuete, aceite de germen de mafz, aceite de oliva, aceite de ricino y aceite de sesamo, glicerol, alcohol de tetrahidrofurilo, polietilenglicoles y esteres de acidos grasos de sorbitan; o mezclas de dichas sustancias, y similares, para formar de este modo una disolucion o una suspension.
Las suspensiones, ademas de los compuestos activos, pueden contener agentes de suspension, como por ejemplo, alcoholes de isoestearilo etoxilados, polioxietilen sorbitol y esteres de sorbitan, celulosa microcristalina, metahidroxido de aluminio, bentonina, agar-agar y tragacanto, o mezclas de dichas sustancias, y similares.
Las composiciones para administraciones rectales son, por ejemplo, supositorios que pueden prepararse mezclando compuestos de la presente invencion con, por ejemplo, excipientes o veldculos no irritantes adecuados, tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera de supositorio, que son solidos a temperaturas ordinarias pero lfquidos a temperatura corporal, y por tanto se funden cuando entran en una cavidad corporal adecuada y liberan el componente activo.
Las formas de dosis para administracion topica de un compuesto de esta invencion incluyen pomadas, polvos, espray e inhaladores. El componente activo se mezcla en condiciones esteriles con un vehfculo fisiologicamente aceptable y con cualesquier conservantes, tamponantes o propelentes, segun sea requerido. Tambien se contemplan dentro del alcance de esta invencion las formulaciones oftalmicas, pomadas, polvos y disoluciones oculares.
Se pueden usar gases comprimidos para dispersar un compuesto de esta invencion en forma de aerosol. Los gases inertes adecuados para este fin son nitrogeno, dioxido de carbono, etc.
De forma general, dependiendo del modo de administracion pretendido, las composiciones farmaceuticamente aceptables contendran entre aproximadamente 1% y aproximadamente 99% en peso de un compuesto(s) de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y entre 99% y 1% en peso de un excipiente farmaceutico adecuado. En un ejemplo, la composicion estara entre aproximadamente 5% y aproximadamente 75% en peso de un compuesto(s) de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, siendo el resto excipientes farmaceuticos adecuados.
Los metodos reales de preparacion de dichas formas de dosis son conocidos, o seran evidentes, por los especialistas de esta tecnica; por ejemplo, vease Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990). La composicion a administrar, en cualquier caso, contendra una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la invencion, o de una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de un estado de enfermedad en concordancia con el contenido de esta invencion.
Los compuestos de la invencion, o sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, se administran en una cantidad terapeuticamente efectiva que variara dependiendo de una variedad de factores, que incluyen la actividad del compuesto espedfico empleado, la estabilidad metabolica y el tiempo de accion del compuesto, la edad, peso corporal, estado general de salud, sexo, dieta, modo y calendario de administracion, tasa de excrecion, combinacion de farmacos, la gravedad de los estados de enfermedad particulares, y la terapia a la que este sometido el hospedante. Los compuestos de la presente invencion se pueden administrar a un paciente en niveles de dosis en el rango de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1.000 mg al dfa. Para un humano adulto normal, que tenga un peso corporal de aproximadamente 70 kilogramos, un ejemplo de dosis estana en el rango de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal al dfa. La dosis espedfica usada, sin embargo, puede variar. Por ejemplo, la dosis puede depender de una serie de factores que incluyen los requisitos del paciente, la gravedad de la condicion que este siendo tratada, y la actividad farmacologica del compuesto que este siendo usado. La determinacion de las dosis optimas para un paciente particular es algo bien conocido por los especialistas en la tecnica.
Si se formula como una dosis fija, dichos productos de combinacion emplean los compuestos de esta invencion dentro del rango de dosis descrito anteriormente y los demas agente(s) farmaceuticamente activo(s) dentro de su rango de dosis aprobado. Los compuestos de la presente invencion alternativamente pueden usarse secuencialmente con agente(s) farmaceuticamente aceptable(s) conocido(s) cuando una formulacion de combinacion sea inapropiada.
Utilidad
Los compuestos de la invencion presentan actividad para PI3K-delta. Los compuestos de esta invencion han sido evaluados usando los ensayos descritos en los Ejemplos Biologicos y se ha determinado que son inhibidores de PI3K- delta. En la tecnica se conocen ensayos in vitro adecuados para medir la actividad de PI3K delta y su inhibicion por accion de compuestos. Para mas detalles sobre un ensayo in vitro de medida de PI3K delta, ver los Ejemplos
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Biologicos de la presente memoria. En la tecnica se conocen ensayos basados en celulas para determinar la eficacia in vitro del tratamiento de cancer. Adicionalmente, en los Ejemplos Biologicos proporcionados en la presente memoria se describen ensayos. Los modelos in vivo adecuados para cancer son conocidos por los especialistas en la tecnica. Para mas detalles de modelos in vivo para adenocarcinoma de prostata, glioblastoma, carcinoma pulmonar y melanoma, ver los Ejemplos Biologicos descritos en la presente memoria. Siguiendo los ejemplos descritos en la presente memoria, asf como los descritos en la tecnica, una persona especialista en la tecnica puede determinar la actividad de un compuesto de esta invencion.
Los compuestos de Formula I son utiles para tratar enfermedades, que incluyen trastornos autoinmunes, enfermedades inflamatorias y canceres, que se enumeran a continuacion.
Canceres: Cardfaco: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma), mixoma, rabomioma, fibroma, lipoma y teratoma; Pulmon: carcinoma broncogenico (de celula escamosa, de celula pequena no diferenciada, de celula grande no diferenciada, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hanlartoma condromatoso, mesotelioma; Gastrointestinal: esofago (carcinoma de celula escamosa, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma), estomago (carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma), pancreas (adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Karposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grueso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma velloso, hamartoma, leiomioma); tracto genitourinario: rinon (adenocarcinoma, tumor de Wilm [neplrroblastoma], linfoma, leucemia), vejiga y uretra (carcinoma de celula escamosa, carcinoma de celula transicional, adenocarcinoma), prostata (adenocarcinoma, sarcoma), testiculos (seminoma, teratoma, carcinoma embrionario, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de celula intersticial, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); Hfgado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma; Hueso: sarcoma osteogenico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcom, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de celula reticular), mieloma multiple, cordoma tumoral de celula gigante maligna, osteocronfroma (exostosas osteocartilaginosas), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide y tumores de celula gigante; Sistema nervioso: craneo (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteitis deformans), meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), cerebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, tumores congenitos), neurofibroma de medula espinal, meningioma, glioma, sarcoma); Ginecologico: utero (carcinoma endometrial), cervix (carcinoma cervical, displasia cervical pretumoral), ovarios (carcinoma de ovario [cistadenocarcinoma serosos, cistadenocarcinoma mucinoso, carcinoma sin clasificar], tumores de celula granulosa- tecal, tumores de celula de SertoliLeydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de celula escamosa, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de celula clara, carcinoma de celula escamosa, sarcoma botriode (rabdomiosarcoma embrional), trompas de Falopio (carcinoma); Hematologico: sangre (leucemia mieloide [aguda y cronica], leucemia linfoblastica aguda, leucemia linfodtica cronica, enfermedades mieloproliferativas, mieloma multiple, smdrome mielodisplasico), enfermedad de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin [linfoma maligno]; Piel: melanoma maligno, carcinoma de celula basal, carcinoma de celula escamosa, sarcoma de Karposi, nevus displasicos de verruga, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, soriasis; y Glandulas adrenales: neuroblastoma.
Enfermedades autoinmunes: Tiroiditis de Hashimoto, lupus sistemico eritematoso (LSE), smdrome de Goodpasture, penfigo, enfermedades autoinmunes de receptor, enfermedad de Basedow (enfermedad de Graves), miastenia gravis, anemia hemolftica autoinmune, purpura trombocitopenica autoinmune, encefalomielitis autoinmune, reumatismo, artritis reumatoide, escleroderma, enfermedad de tejido conectivo mixto, polimiositis, anemia perniciosa, enfermedad de Addison idiopatica, algunos tipos de infertilidad, glomerulonefritis, penfigo bulloso, smdrome de Sjogren, algunos tipos de diabetes, resistencia a agentes adrenergicos, hepatitis activa cronica, cirrosis biliar primaria, fallo endocrino, vitiligo, angiitis, smdrome post-cirugfa cardfaca, urticaria, dermatitis atopica y esclerosis multiple, enfermedad poliglandular autoinmune (tambien conocida como smdrome poliglandular autoinmune), alopecia autoinmune; anemia perniciosa; vitiligo; hipopituatarismo autoinmune, y smdrome de Guillain-Barre.
Enfermedades inflamatorias: asma, rinitis alergica, soriasis, artritis inflamatoria, artritis reumatoide, artritis soriatica u osteoartritis, smdrome de intestino irritable, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, alergias respiratorias (asma, fiebre del heno, rinitis alergica) o alergias cutaneas, escleracierma, micosis fungoides, respuestas inflamatorias agudas (tales como smdrome de sufrimiento respiratorio agudo y lesion por isquemia/reperfusion), dermatomiositis, alopecia greata, dermatitis actinica cronica, eczema, enfermedad de Behcet, Pustulosis palmoplanteris, Pyoderma gangrenum, smdrome de Sezary, dermatitis atopica, esclerosis sistemica y morfea.
Por tanto, en la presente memoria se describe un metodo para inhibir PI3K delta que comprende poner en contacto la PI3K delta con una cantidad efectiva de un compuesto como el descrito en la presente memoria.
Tambien se describe un metodo para tratar una enfermedad modulada por PI3K delta que comprende la administracion a un mairnfero que necesite dicho tratamiento de una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto como el descrito en la presente memoria.
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Tambien se describe un metodo para tratar la enfermedad de cancer mediada por PI3K delta que comprende la administracion a un mai^ero que necesite dicho tratamiento de una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de las reivindicaciones 1-20.
Los compuestos de la invencion tambien son utiles como inhibidores de PI3K delta in vivo para estudiar el papel in vivo de la PI3K delta en los procesos biologicos, que incluyen las enfermedades descritas en la presente memoria. Tambien se describe en la presente memoria un metodo para inhibir la PI3K delta in vivo, que comprende administrar un compuesto o composicion de la invencion a un mairnfero.
Smtesis general
Los compuestos de esta invencion pueden prepararse mediante los procedimientos sinteticos descritos a continuacion. Los materiales y reactivos de partida usados para preparar estos compuestos se encuentran disponibles en proveedores comerciales tales como Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wis.), o Bachem (Torrance, Calif.), o son preparados mediante metodos conocidos por los especialistas en la tecnica siguiendo procedimientos establecidos en referencias tales como “Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis”, volumenes 1-17 (John Wiley and Sons, 1991); “Rodd's Chemistry of Carbon Compounds”, volumenes 1-5 y los Suplementos (Elsevier Science Publishers, 1989); “Organic Reactions”, volumenes 1-40 (John Wiley and Sons, 1991), “March's Advanced Organic Chemistry”, (John Wiley and Sons, 4a Edicion) y Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989). Estos esquemas son meramente ilustrativos de algunos metodos mediante los cuales se pueden sintetizar los compuestos de esta invencion, y se pueden realizar diversas modificaciones en dichos esquemas, y seran sugeridas por el especialista en la tecnica en referencia a esta descripcion. Los materiales de partida y los intermedios de reaccion pueden aislarse y purificarse si se desea empleando tecnicas convencionales, que incluyen, aunque sin limitacion, filtracion, destilacion, cristalizacion, cromatograffa y similares. Dichos materiales pueden caracterizarse empleando medios convencionales, que incluyen constantes ffsicas y datos espectrales.
A menos que se especifique lo contrario, las reacciones descritas en la presente memoria tienen lugar a presion atmosferica y en un rango de temperaturas de entre aproximadamente -78°C y aproximadamente 150°C, mas espedficamente de entre aproximadamente 0°C y aproximadamente 125°C, y mas espedficamente a aproximadamente temperatura ambiente, p.ej., aproximadamente 20°c. A menos que se fije de otro modo (como en el caso de una hidrogenacion), todas las reacciones se llevan a cabo en atmosfera de nitrogeno.
Los profarmacos se pueden preparar mediante tecnicas conocidas por el especialista en la tecnica. Estas tecnicas generalmente modifican grupos funcionales apropiados de un compuesto dado. Dichos grupos funcionales modificados regeneran los grupos funcionales originales mediante manipulacion rutinaria o in vivo. Las amidas y esteres de los compuestos de la presente invencion se pueden preparar de acuerdo a metodos convencionales. Se pueden encontrar una profunda discusion sobre profarmacos en T. Higuchi y V. Stella, “Pro-drugs as Novel Delivery Systems”, Vol. 14 de la A.C.S. Symposium Series, y en Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987.
Los compuestos de la invencion, o sus sales farmaceuticamente aceptables, pueden presentar atomos de carbono asimetricos o atomos de nitrogeno cuaternario en su estructura. Los compuestos de la invencion que pueden prepararse a traves de las sintesis descritas en la presente memoria pueden existir como estereoisomeros individuales, como racematos y como mezclas de enantiomeros y diastereomeros. Los compuestos tambien pueden existir como isomeros geometricos. Todos dichos estereoisomeros individuales, racematos y mezclas de los mismos, y los isomeros geometricos entran dentro del alcance de esta invencion.
Algunos de los compuestos de la invencion contienen una cetona -C(O)CF3 activa y pueden existir parcial o totalmente como la forma -C(OH2)CF3. Independientemente de si el compuesto es dibujado como la forma -C(O)CF3 o la forma - C(OH2)CF3, ambas estan incluidas dentro del alcance de la invencion. Aunque un compuesto individual se puede dibujar como la forma -C(O)CF3, el especialista en la tecnica entendera que el compuesto puede existir parcial o totalmente como la forma -C(OH2)CF3, y que la proporcion de las dos formas puede variar dependiendo del compuesto y de las condiciones en las que se encuentra.
Algunos de los compuestos de la invencion pueden existir como tautomeros. Por ejemplo, cuando hay presente una cetona o un aldeddo, la molecula puede existir en la forma enolica; cuando hay presente una amida, la molecula puede existir como el acido imfdico; y cuando hay presente una enamina, la molecula puede existir como una imina. Todos estos tautomeros entran dentro del alcance de la invencion. Independientemente de la estructura y de la terminologfa usada, se incluyen todos los tautomeros dentro del alcance de la invencion. Se describen adicionalmente derivados de N-oxido y derivados protegidos de compuestos de la invencion. Por ejemplo, cuando los compuestos de la invencion contienen un atomo de nitrogeno oxidable, el atomo de nitrogeno puede convertirse en un N-oxido mediante metodos bien conocidos en la tecnica. Cuando los compuestos de la invencion contienen grupos tales como hidroxi, carboxi, tiol o cualquier grupo que contenga atomo(s) de nitrogeno, dichos grupos pueden protegerse con un “grupo protector” adecuado. Se puede encontrar una lista exhaustiva de grupo protectores adecuados en T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Inc. 1991. Los derivados protegidos de los compuestos de la invencion pueden prepararse mediante metodos bien conocidos en la tecnica.
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Los metodos para la preparacion y/o separacion y aislamiento de estereoisomeros individuales a partir de mezclas racemicas o de mezclas no racemicas de estereoisomeros son bien conocidos en la tecnica. Por ejemplo, se pueden preparar isomeros (R)- y (S)- activos opticamente usando sintonas quirales o reactivos quirales, o resolverse usando tecnicas convencionales. Los enantiomeros (isomeros R- y S-) se pueden resolver mediante metodos conocidos por el especialista en la tecnica, por ejemplo mediante: la formacion de sales o complejos diastereoisomericos que pueden separarse, por ejemplo, mediante cristalizacion; via formacion de derivados diastereoisomericos con un reactivo espedfico de enantiomero, por ejemplo oxidacion o reduccion enzimatica, seguida de separacion de los enantiomeros modificados y no modificados; o mediante cromatograffa de gases-lfquidos o de lfquidos en un entorno quiral, por ejemplo sobre un soporte quiral, tal como sflice con un ligando quiral unido o en presencia de un disolvente quiral. Cabe destacar que cuando un enantiomero deseado es convertido en otra entidad qrnmica por uno de los procedimientos de separacion descritos anteriormente, puede requerirse una etapa adicional para liberar la forma enantiomerica deseada. Alternativamente, se puede sintetizar un enantiomero espedfico mediante smtesis asimetrica usando reactivos, sustratos, catalizadores o disolventes activos opticamente, o convirtiendo un enantiomero en el otro mediante transformacion asimetrica. Para una mezcla de enantiomeros, enriquecida en un enantiomero particular, el enantiomero de componente principal puede ser enriquecido adicionalmente (con la correspondiente perdida de rendimiento) mediante recristalizacion.
Adicionalmente, los compuestos de la presente invencion pueden existir en forma no solvatada y solvatada con disolventes farmaceuticamente aceptables tales como agua, etanol y similares. En general, las formas solvatadas se consideran equivalentes a las formas no solvatadas para los propositos de la presente invencion.
La qrnmica para la preparacion de los compuestos de esta invencion es conocida por los especialistas en la tecnica. De hecho, puede existir mas de un proceso para preparar los compuestos de la invencion. Los siguientes ejemplos ilustran compuestos de la invencion y compuestos de referencia. Solo los ejemplos relacionados con compuestos de la tabla 1 corresponden a la invencion.
Ejemplos sinteticos
W-(2-((3-(9H-Purm-6-Nammo)metM)-8-metNqumoMn-2-N)(metNammo)etM)-W-metN-2-(1H-1,2,3-triazoM- il)acetamida (7)
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2-Cloro-3-(clorometil)-8-metilquinolina (2)
A una disolucion agitada de 2-cloro-8-metilquinolina-3-carboxaldel'ndo (1, 7,59 g, 36,9 mmol) en THF (150 mL) se anadio NaBH4 (1,40 g, 37,0 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a rt durante 2 h. La mezcla de reaccion se concentro a presion reducida y el residuo se trituro con una disolucion saturada de NaHCO3 (ac., 200 mL). Los precipitados fueron recogidos mediante filtracion, lavados con H2O y secados a alto vado para proporcionar el alcohol (7,47 g, 97%) en forma de solido blanco. MS (EI) para ChH1qCINO, experimental 208 (MH+).
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A una suspension agitada del alcohol obtenido anteriormente (7,47 g, 36,0 mmol) en CHCI3 (150 mL) se anadio SOCI2 (13,1 mL, 180 mmol) lentamente y la mezcla resultante se agito a rt durante 3 h. La mezcla de reaccion se detuvo con cuidado mediante la adicion de H2O (10 mL), se diluyo con una disolucion saturada de NaHCO3 (ac., 200 mL), y la capa acuosa separada se extrajo con CH2O2 (200 mL). Los extractos combinados se secaron sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a presion reducida para proporcionar 2-cloro-3-(clorometil)-8-metilquinolina (2, 8,01 g, 98%) en forma de un aceite incoloro. MS (EI) para C-nHgC^N, experimental 226 (MH+).
1 (2-Cloro-8-metilquinolina-3-il)metanamina (3)
A una disolucion agitada de 2 (8,01 g, 35,4 mmol) en DMSO (150 mL) se anadio NaN3 (4,61 g, 70,9 mmol) en porciones y la mezcla resultante se agito a rt durante 4 h. La mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc (300 mL)/H2O (200 mL). La capa organica separada se lavo con salmuera, se seco sobre sulfato sodico anhidro, y se concentro a presion reducida para dar lugar a la azida (7,66 g, 32,9 mmol). MS (EI) para CnHgClN4, experimental 233 (MH+).
A una disolucion agitada de la azida en THF (150 mL)/H2O (20 mL) se anadio Ph3P (12,9 g, 49,2 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a rt durante 4 h, momento en el cual se diluyo con HCl 1N (150 mL)/CH2Cl2 (300 mL). La capa acuosa separada se lavo con CH2Cl2 (100 mL) y se alcalinizo con NaOH 1N hasta pH > 10. El producto 3 precipitado (5,12 g) se recogio por filtracion, se lavo con H2O, y se seco en condiciones de alto vado. Los filtrados se extrajeron con CH2Cl2 (3X100 mL). Los extractos combinados se secaron sobre sulfato sodico anhidro y se concentraron a presion reducida para proporcionar una alfcuota adicional del producto (0,77 g). El rendimiento combinado fue del 87% (5,89 g). MS (EI) para C^H-hCN experimental 207 (MH+).
N-((2-Cloro-8-metilquinolin-3-il)metil)-9H-purin-6-amina (4)
Una mezcla de 3 (620 mg, 3,00 mmol), 6-cloropurina (487 mg, 3,15 mmol) y la base de Hunig (0,627 mL, 3,60 mmol) se agito 1 h a 80°C en EtOH (30 mL). El precipitado se filtro y el solido se lavo con agua y EtOH para proporcionar 4 (726 mg, 75%) MS (EI) para C^H-iaCl^, experimental 325 (MH+).
N1-(3-((9H-Purin-6-ilamino)metil)-8-metilquinolin-2-il)-N1,N2-dimetiletano-1,2-diamina (5)
Una mezcla de 4 (187 mg, 0,58 mmol) y N,N'-dimetiletilendiamina (0,624 mL, 5,8 mmol) en DMA (1,5 mL) se agito a 140°C durante 1,5h. La mezcla de reaccion se concentro a presion reducida y el residuo se purifico mediante cromatograffa flash para proporcionar 5 (165 mg, 76%). MS (EI) para C20H24N8, experimental 377 (MH+).
W-(2-((3-((9H-Purm-6-Nammo)metM)-8-metMqumolm-2-N)(metNammo)etM)-W-metN-2-(1H-1,2,3-triazoM- il)acetamida (7)
A una mezcla agitada de 5 (65 mg, 0,173 mmol), 1-1,2,3-triazolacetico (6, 22 mg, 0,173 mmol), y base de Hunig (0,091 mL, 0,522 mmol) en DMF (2 mL) se anadio HATU (66 mg, 0,174 mmol) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 min. La mezcla sin purificar se purifico directamente mediante HPLC preparativa para proporcionar 7 (39 mg, 46%). RMN de 1H (400 MHz, d6-DMSO): 6 13,0 (s, 1H), 8,34 (bs, 1H), 8,15-8,11 (m, 2H), 8,00-7,95 (m, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,55-7,42 (m, 2H), 7,19 (q, 1H), 5,51-5,43 (2s, 2H), 4,86-4,83 (m, 2H), 3,81-3,52 (m, 4H), 3,13-3,12 (2s, 3H), 3,04-2,97 (2s, 3H), 2,64-2,63 (2s, 3H). MS (EI) para C24H27N11O, experimental 486 (MH+).
De un modo similar, se prepararon los siguientes compuestos:
N,8-dimetil-N-[(1-metilpiperidin-4-il)metil]-3-[(9H-purin-6-iltio)metil]quinolin-2-amina (COMP. 1);
3-[(6-amino-9H-purin-il)metil]-N,8-dimetil-N-[(1-metilpirrolidin-2-il)metil]quinolin-2-amina (COMP. 2); 3-[(6-amino-9H-purin-il)metil]-N,8-dimetil-N-[(1-metilpiperidin-2-il)metil]quinolin-2-amina (COMP. 3); 3-[(6-amino-9H-purin-il)metil]-N,8-dimetil-N-[(1-metilpiperidin-4-il)metil]quinolin-2-amina (COMP. 4); N-{[2-(2-clorofenil)-8-metilquinolin-3-il]metil}-2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-5-amina (COMP. 5); N-{[8-metil-2-(octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazin-2-il)quinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 12); 9-{[8-metil-2-(octahidroisoquinolin-2(1H)-il)quinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 13); 9-{[2-(3,4-dihidroisoquinolin-2(1H)-il)-8-metilquinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 14); N-{[2-(3,4-dihidroisoquinolin-2(1H)-il)-8-metilquinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 19); N,8-dimetil-N-[2-(metiloxi)etil]-3-[(9H-purin-6-ilamino)metil]quinolin-2-amina (COMP. 25); N-butil-N,8-dimetil-3-[(9H-purin-6-ilamino)metil]quinolin-2-amina (COMP. 26); N-[(8-metil-2-piperidin-1-ilquinolin-3-il)metil]-9H-purin-6-amina (COMP. 27);
5
10
15
20
25
30
35
N-{2-[{3-[(6-amino-9H-purin-9-il)metil]-8-metilquinolin-2-il}(metil)amino]etil}-N-metil-2-(1H-pirazol-1-il)acetamida (COMP. 28);
N,8-dimetil-N-[(1-metilpiperidin-3-il)metil]-3-[(9H-purin-6-ilamino)metil]quinolin-2-amina (COMP. 32);
N,8-dimetil-N-[(1-metilpiperidin-4-il)metil]-3-[(9H-purin-6-ilamino)metil]quinolin-2-amina (COMP. 33);
N-{2-[{3-[(6-amino-9H-purin-9-il)metil]-8-metilquinolin-2-il}(metil)amino]etil}-N-metil-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)acetamida (COMP. 34);
N,N'-dimetil-N-{8-metil-3-[(9H-purin-6-ilamino)metil]quinolin-2-il}etano-1,2-diamina (COMP. 36); N-[(8-metil-2-piperazin-1-ilquinolin-3-il)metil]-9H-purin-6-amina (COMP. 37); N,8-dimetil-N-[(1-metilpiperidin-2-il)metil]-3-[(9H-purin-6-ilamino)metil]quinolin-2-amina (COMP. 38); 3-iodo-1-{1-[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]etil}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (COMP. 117); 3-iodo-1-{[5-metil-3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (COMP. 119); 9-{[3-(2-metilfenil)naftalen-2-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 120);
3-iodo-1-{[8-metil-2-(2-metilfenil)quinolin-3-il]metil}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (COMP. 134); 3-iodo-N-{[8-metil-2-(2-metilfenil)quinolin-3-il]metil}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (COMP. 135); 3-bromo-N-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (COMP. 141); N-{[2-(4-acetilpiperazin-1-il)-8-metilquinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 143); N-{[2-(4-etilpiperazin-1-il)-8-metilquinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 144); 3-iodo-1-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (COMP. 145); N-{[8-metil-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)quinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 146); N-{3-[(6-amino-9H-purin-9-il)metil]-8-metilquinolin-2-il}-N,N'-dimetiletano-1,2-diamina (COMP. 149); 9-{[8-metil-2-(5-metil-2,5-diazabicido[2.2.1]hept-2-il)quinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 150); N-{1-[2-(2-clorofenil)-8-metilquinolin-3-il]etil}-9H-purin-6-amina (COMP. 152); N-{3-[(6-amino-9H-purin-9-il)metil]-8-metilquinolin-2-il}metanosulfonamida (COMP. 153); N-{[2-(2-clorofenil)-8-metilquinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 154); N-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 155); N-{3-[(6-amino-9H-purin-9-il)metil]-8-metilquinolin-2-il}bencenosulfonamida (COMP. 156);
2- [(6-amino-9H-purin-9-il)metil]-3-(2-metilfenil)tieno[3,2-d]pirimidin-4(3H)-ona (COMP. 162);
3- (2-metilfenil)-2-[(7H-purin-6-iltio)metil]tieno[3,2-d]pirimidin-4(3H)-ona (COMP. 163); 3-[(6-amino-9H-purin-9-il)metil]-8-metil-N-(1-metilpiperidin-4-il)quinolin-2-amina (COMP. 164); 3-[(6-amino-9H-purin-9-il)metil]-8-metil-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)quinolin-2-amina (COMP. 165); 9-{[2-(4-acetilpiperazin-1-il)-8-metilquinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 166); 3-[(6-amino-9H-purin-9-il)metil]-8-metil-N-[2-(metiloxi)etil]quinolin-2-amina (COMP. 167); 9-{[4-metil-3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 168);
7-{[4-metil-3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}-7H-purin-6-amina (COMP. 169); 9-{[8-metil-2-(2-metilpirrolidin-1-il)quinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 170); 9-[(8-metil-2-pirrolidin-1-ilquinolin-3-il)metil]-9H-purin-6-amina (COMP. 171); 9-[(8-metil-2-piperazin-1-ilquinolin-3-il)metil]-9H-purin-6-amina (COMP. 172);
9-{[8-metil-2-(4-metMpiperazin-1 -il)quinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 173); 9-[(8-metil-2-morfolin-4-ilquinolin-3-il)metil]-9H-purin-6-amina (COMP. 177);
7- {[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}-7H-purin-6-amina (COMP. 178); 9-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 179);
5 9-{[2-(2,3-dimetilfenil)-8-metilquinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 180);
9-{[2-(2,5-dimetilfenil)-8-metilquinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 181); 9-({8-metil-2-[2-(trifluorometil)fenil]quinolin-3-il}metil)-9H-purin-6-amina (COMP. 182); 9-{[8-metil-2-(3-metilfenil)quinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 183); 9-{[8-metil-2-(3-([2-(metiloxi)etil]oxi}fenil)quinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 184);
10 9-({8-metil-2-[3-(metiloxi)fenil]quinolin-3-il}metil)-9H-purin-6-amina (COMP. 185);
9-({2-[2-(etiloxi)fenil]-8-metilquinolin-3-il}metil)-9H-purin-6-amina (COMP. 186); 9-{[2-(2-clorofenil)-8-metilquinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 187);
8- metil-2-(2-metilfenil)-3-[(9H-purin-6-iltio)metil]quinolina (COMP. 188);
9- {[8-metil-2-(2-metilfenil)quinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 189);
15 9-{[3-(2-metilfenil)quinoxalin-2-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 190); y
9-{[2-(2-metilfenil)quinolin-3-il]metil}-9H-purin-6-amina (COMP. 191).
3-Amino-N-{[5-metil-3-(2-metilfenil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-2-il]metil}pirazina-2-carboxamida (13)
imagen27
2-Amino-6-metil-N-o-tolilbenzamida 2-amino-6-metilbenzoato (9)
20 Se anadio cloruro de tionilo (20,0 mL, 274 mmol) y acido 2-amino-6-metilbenzoico (8, 10,0 g, 66,2 mmol) a tolueno (100 mL) y la mezcla se calento a 110°C durante 1 h y despues se concentro. El cloruro de acido sin purificar se
disolvio en THF (100 mL), se enfrio a 0 °C y se anadio lentamente o-toluidina (21 mL, 196 mmol). La mezcla de reaccion se calento a 80 °C y el producto se formo y precipito a lo largo de 2 h. A continuacion la mezcla de reaccion se detuvo mediante la adicion de K2CO3 (10% en agua), se extrajo con EtOAc, se diluyo con Na2SO4, se filtro y se concentro. El producto se recristalizo en DCM/hexanos para proporcionar 9 (14,7 g, 92% en las dos etapas) en forma 5 de solido blanquecino.
2-(ClorometM)-5-metil-3-o-toMlqumazolm-4(3H)-ona (10)
Al compuesto 9 (13,7 g, 57,0 mmol) en AcOH (50 mL) se anadio cloruro de 2-cloroacetilo (13,6 mL, 171 mmol) y la mezcla de reaccion se calento a 120 °C. Despues de 15 minutos la mezcla de reaccion se diluyo con H2O y se extrajo con EtOAc (2X). La capa organica se lavo con H2O (2X), se lavo con salmuera, se seco con Na2SO4, se filtro, y se 10 concentro. La cromatograffa en columna flash (de hexanos a hexanos/EtOAc 3:1) seguida de trituracion en EtOAc proporciono el compuesto 10 (5,13 g, 26%) en forma de solido incoloro.
2- (Ammometil)-5-metM-3-o-tolilqumazolm-4(3H)-ona (11)
Al compuesto 10 (1,00 g, 3,36 mmol) en DMF (10 mL) se anadio azida sodica (0,436 g, 6,71 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 15 minutos. La mezcla de reaccion sin purificar se diluyo entonces con metanol 15 (20 mL) y formiato de amonio (1,0 g, 16 mmol) seguido de la adicion de Pd/C (10%, 200 mg). La mezcla de reaccion
se calento a 80 °C durante 30 minutos, momento en el cual se enfrio hasta temperatura ambiente, se filtro a traves de Celite y se diluyo con EtOAc y H2O. La capa organica se lavo con H2O, salmuera, se seco con Na2SO4, se filtro y se concentro. El compuesto 11 sin purificar obtenido de este modo se llevo a purificacion adicional.
3- Ammo-W-{[5-metil-3-(2-metilfeml)-4-oxo-3,4-dihidroqumazolm-2-il]metM}pirazma-2-carboxamida (13)
20 Acido 3-aminopirazina-2-carboxflico (12, 39,0 mg, 0,280 mmol), base de Hunig (0,1 mL, 0,6 mmol) y HATU (108 mg,
0,280 mmol) se disolvieron en DMF (0,5 mL) y se anadio el producto 11 sin purificar obtenido anteriormente (39,0 mg, 0,140 mmol). La mezcla de reaccion resultante se agito a temperatura ambiente durante 20 minutos y a continuacion se diluyo con metanol y se purifico mediante HPLC preparativa para proporcionar el compuesto 13 (39,9 mg, 71%). RMN de 1H (400 MHz, d6-DMSO): 6 9,07 (t, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,79 - 7,63 (m, 1H), 7,57 - 7,38 (m, 5H), 25 7,34 (d, 1H), 4,11 (dd, 1H), 3,81 (dd, 1H), 2,75 (s, 3H), 2,11 (s, 3H). MS (EI) para C22H20N6O2, experimental 401 (MH+).
De un modo similar, se prepararon los siguientes compuestos:
1- [2-(2-clorofenil)-8-metilquinolin-3-il]-N-{[3-(metiloxi)fenil]metil}metanamina (COMP. 6); 3-({[2-cloro-4-(metiloxi)fenil]oxi}metil)-2-(2-clorofenil)-8-metilquinolina (COMP. 7); 3-[(1,3-benzodioxol-5-iloxi)metil]-2-(2-clorofenil)-8-metilquinolina (COMP. 8);
30 N-{[2-(2-clorofenil)-8-metilquinolin-3-il]metil}-3,5-bis(metiloxi)anilina (COMP. 9); N-{[2-(2-clorofenil)-8-metilquinolin-3-il]metil}-3,4-bis(metiloxi)anilina (COMP. 10); N-{[2-(2-clorofenil)-8-metilquinolin-3-il]metil}-2-(metiloxi)anilina (COMP. 11); 3-({[3,5-bis(metiloxi)fenil]oxi}metil)-2-(2-clorofenil)-8-metilquinolina (COMP. 15);
2- (2-clorofenil)-8-metil-3-({[4-(metiloxi)fenil]oxi}metil)quinolina (COMP. 16);
35 2-(2-clorofenil)-8-metil-3-(1-{[4-(metiloxi)fenil]oxi}etil)quinolina (COMP. 17);
N-{[2-(2-clorofenil)-8-metilquinolin-3-il]metil}-3-(metiloxi)anilina (COMP. 18); N,N'-dimetil-N-[8-metil-3-({[4-(metiloxi)fenil]amino}metil)quinolin-2-il]etano-1,2-diamina (COMP. 20); N,N'-dimetil-N-[8-metil-3-(morfolin-4-ilmetil)quinolin-2-il]etano-1,2-diamina (COMP. 21); N,N'-dimetil-N-[8-metil-3-({[3-(metiloxi)fenil]oxi}metil)quinolin-2-il]etano-1,2-diamina (COMP. 22);
40 N,N'-dimetil-N-[8-metil-3-({[4-(metiloxi)fenil]oxi}metil)quinolin-2-il]etano-1,2-diamina (COMP. 23);
N,N'-dimetil-N-[8-metil-3-({[3-(metiloxi)fenil]amino}metil)quinolin-2-il]etano-1,2-diamina (COMP. 24); N-{3-[5-(3-aminopirazin-2-il)-1,3,4-oxadiazol-2-il]-8-metilquinolin-2-il}-N,N'-dimetiletano-1,2-diamina (COMP. 29);
3- amino-N-[(8-metil-2-{metil[(1-metilpiperidin-3-il)metil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 30); 3-amino-N-[(8-metil-2-{metil[(1-metilpiperidin-4-il)metil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 31);
45 3-amino-N-[(8-metil-2-{metil[(1-metilpiperidin-2-il)metil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 39);
imagen28
3-amino-N-[(3-{2-[(dimetilamino)metil]fenil}-5-metilquinolin-2-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 52);
3-amino-N-({2-[4-( 1 H-imidazol-1 -ilacetil)-1,4-diazepan-1 -il]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP.
imagen29
LO
CM
LO
CO
O
3-amino-N-[(2-{4-[2-(dimetilamino)-2-oxoetil]-1,4-diazepan-1-il}-8-metilquinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 66);
5
10
15
20
25
30
35
40
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(1-propil-D-prolil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 67);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(piridin-2-ilmetil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 68);
3-amino-N-[(3-{3-[(dimetilamino)metil]fenil}quinolin-2-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 69);
3-amino-N-({3-[2-(morfolin-4-ilmetil)fenil]quinolin-2-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 70);
3-amino-N-({3-[4-(morfolin-4-ilmetil)fenil]quinolin-2-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 71);
3-amino-N-({3-[3-(morfolin-4-ilmetil)fenil]quinolin-2-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 72);
3-amino-N-({8-metil-2-[metil(2-{metil[1-(1-metiletil)-D-prolil}amino}etil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 73);
2- amino-N-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}pirimidina-5-carboxamida (COMP. 74);
3- amino-N-{1-[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]etil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 75);
3-amino-N-({8-metil-2-[metil(2-{metil[2-(metilamino)-2-oxoetil]amino}etil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2- carboxamida (COMP. 76);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(2-morfolin-4-il-2-oxoetil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2- carboxamida (COMP. 77);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(pirazin-2-ilcarbonil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 78);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(piridin-4-ilcarbonil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 79);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(piridin-3-ilcarbonil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 80);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(piridin-2-ilcarbonil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 81);
3-amino-N-({8-metil-2-[metil(2-{metil[(4-metilfenil)sulfonil]amino}etil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 82);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(piridin-3-ilmetil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 83);
3-amino-N-({2-[{2-[(cianometil)(metil)amino]etil}(metil)amino]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 84);
3-amino-N-({2-[{2-[(1H-imidazol-1-ilacetil)(metil)amino]etil}(metil)amino]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2- carboxamida (COMP. 85);
3-amino-N-({8-metil-2-[metil(2-{metil[(2-metil-1H-imidazol-1-il)acetil]amino}etil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2- carboxamida (COMP. 86);
3-amino-N-({8-metil-2-[metil(piridin-3-ilmetil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 87);
3-amino-N-({8-metil-2-[metil(2-piridin-2-iletil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 88);
3-amino-N-({2-[(2-{[2-(dimetilamino)-2-oxoetil](metil)amino}etil)(metil)amino]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2- carboxamida (COMP. 89);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(pirazin-2-il)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 90);
3-amino-N-{[3-(1,3-tiazol-4-il)quinolin-2-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 91); 3-amino-N-[(3-{2-[(dimetilamino)metil]fenil}quinolin-2-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 92); 3-amino-N-[(3-bromoquinolin-2-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 93);
5
10
15
20
25
30
35
40
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(2H-1,2,3-triazol-2-ilacetil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2- carboxamida (COMP. 94);
3-amino-N-({8-metil-2-[(piridin-3-ilmetil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 95);
3-amino-N-({8-metil-2-[(2-piridin-2-iletil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 96);
3-amino-N-({8-metil-2-[(2-piridin-3-iletil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 97);
3-amino-N-({8-metil-2-[metil(1-metilpirrolidin-3-il)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 98);
3-amino-N-({8-metil-2-[metil(1-metilpiperidin-4-il)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 99);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(1H-1,2,3-triazol-1-ilacetil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2- carboxamida (COMP. 100);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(metilsulfonil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 101);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(D-prolil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 102);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(L-prolil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 103); 3-amino-N-[(8-metil-2-{metil[2-(metiloxi)etil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 104); 3-amino-N-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}-5-morfolin-4-ilpirazina-2-carboxamida (COMP. 105); 3-amino-5-(metiloxi)-N-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 106);
3- amino-5-cloro-N-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 107);
4- amino-N-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}pirimidina-5-carboxamida (COMP. 108);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(pirrolidin-1-ilacetil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 109);
3-amino-N-({8-metil-2-[metil(2-{metil[1-metil-1H-imidazol-5-il)carbonil]amino}etil)amino]quinolin-3-il}metil)pirazina-2- carboxamida (COMP. 110);
3-amino-N-{[2-(1H-imidazol-1-il)-8-metilquinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 111);
3-amino-N-{[2-(1H-benzimidazol-1-il)-8-metilquinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 112);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(1-metil-L-prolil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 113);
3-amino-N-({2-[{2-[(N,N-dimetilglicil)(metil)amino]etil}(metil)amino]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 114);
3-amino-N-({2-[{2-[glicil(metil)amino]etil}(metil)amino]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 115);
3-amino-N-{[8-metil-2-(metil{2-[metil(N-metilglicil)amino]etil}amino)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 116);
3-amino-N-{[5-metil-3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 118);
3-amino-N-({2-[(2-hidroxietil)(metil)amino]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 121);
3-amino-N-[(8-metil-2-{[2-(metilamino)etil]oxi}quinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 122);
3-amino-N-({2-[(2R,5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-il]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 123);
N-{[2-(4-acetilpiperazin-1-il)-8-metilquinolin-3-il]metil}-3-aminopirazina-2-carboxamida (COMP. 124);
3-amino-N-({2-[(2-hidroxietil)amino]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 125);
1,1-dimetiletil {1-[3-({[(3-aminopirazin-2-il)carbonil]amino}metil)-8-metilquinolin-2-il]piperidin-4-il}metilcarbamato (COMP. 126);
3-amino-N-({2-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 127);
5
10
15
20
25
30
35
40
3-amino-N-[(2-{[2-(dimetilamino)etil](metil)amino}-8-metilquinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 128); 3-amino-N-{(2-{[2-(dimetilamino)etil]amino}-8-metilquinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 129);
2- amino-N-[(8-metil-2-{metil[2-(metilamino)etil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 130);
3- amino-N-[(8-metil-2-piperazin-1-ilquinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 131); N~5~-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}pirimidina-4,5-diamina (COMP. 132);
3-amino-N-[(8-metil-2-{metil[3-(metilamino)propil]amino}quinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 133);
3-amino-N-({2-[{3-[(N,N-dimetilglicil)(metil)amino]propil}(metil)amino]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 136);
3-amino-N-({2-[4-(N,N-dimetilglicil)-1,4-diazepan-1-il]-8-metilquinolin-3-il}metil)pirazina-2-carboxamida (COMP. 137); 3-amino-N-[(2-{[3-(dimetilamino)propil]amino}-8-metilquinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 138); 3-amino-N-{[2-(1,4-diazepan-1-il)-8-metilquinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 139); 3-amino-N-{[8-metil-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)quinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 140); 3-amino-N-{[3-(2-metilfenil)quinolin-2-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 142); 3-amino-N-[(8-metil-2-piperidin-1-ilquinolin-3-il)metil]pirazina-2-carboxamida (COMP. 147); 3-amino-N-{[2-(2-clorofenil)-8-metilquinolin-3-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 148);
N-{[5-metil-3-(2-metilfenil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-2-il]metil}-3-morfolin-4-ilpirazina-2-carboxamida (COMP. 151);
2- (2-aminoetil)-5-metil-3-(2-metilfenil)quinazolin-4(3H)-ona (COMP. 157);
3- ({[3,5-bis(metiloxi)fenil]metil}oxi)-8-metil-2-(2-metilfenil)quinolina (COMP. 158);
3-cloro-N-{[5-metil-3-(2-metilfenil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-2-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 159);
3-amino-6-bromo-N-{[5-metil-3(2-metilfenil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-2-il]metil}pirazina-2-carboxamida (COMP. 160);
3-amino-N-{[5-metil-3-(2-metilfenil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-2-il]metil}piridina-2-carboxamida (COMP. 161); 2-amino-N-{[5-metil-3-(2-metilfenil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-2-il]metil}piridina-4-carboxamida (COMP. 174); y 2-amino-N-{[5-metil-3-(2-metilfenil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-2-il]metil}piridina-3-carboxamida (COMP. 176). Ejemplos biologicos Ejemplo 1. Ensayos bioquimicos
Se investigo la actividad de quinasa y la inhibicion de compuesto usando uno o mas de los formatos de ensayo descritos a continuacion. Las concentraciones de ATP usadas en los diversos ensayos fueron aproximadamente iguales o inferiores a las Km correspondientes a cada una de las respectivas quinasas. Se llevaron a cabo experimented de dosis-respuesta usando un esquema de dilucion intra-placa con 10 concentraciones diferentes de inhibidor en una placa de microtitulacion de 384 pocillos. Se calcularon los valores de IC50 mediante analisis de regresion no lineal usando la ecuacion de cuatro parametros presentada a continuacion:
Ecuacion 1; Y = min + (max - min) / (1 + (X / IC5o)N)
en donde Y es la senal observada, X es la concentracion de inhibidor, min es la senal de ruido de fondo en ausencia de enzima (0% de actividad enzimatica), max es la senal en ausencia de inhibidor (100% de actividad enzimatica), IC50 es la concentracion de inhibidor para una inhibicion enzimatica del 50% y N representa la pendiente de Hill emprnca como medida de la cooperatividad. Tfpicamente, N debena aproximarse a la unidad. El ajuste de la curva se llevo a cabo usando XLFit o ActivityBase.
Protocolo de ensayo de quimioluminiscencia acoplado a luciferasa
La actividad de quinasa se mide como el porcentaje de ATP consumido tras la reaccion de quinasa usando quimioluminiscencia acoplada a luciferasa-luciferina. Las reacciones se llevaron a cabo en placas de microtitulacion de union a medio blanco de 384 o 1536 pocillos (Greiner). Las reacciones de quinasa se iniciaron combinando los compuestos de ensayos, quinasa y ATP en un volumen de 20 pL (volumen de 6 pL para la placa de 1536 pocillos). La
mezcla de reaccion se incubo a temperatura ambiente durante 2 h. Despues de la reaccion de quinasa, se anadio una aKcuota de 20 pL (o 3 pL para la placa de 1536 pocillos) de KinaseGlo (Promega) y se midio la senal de quimioluminiscencia usando un lector de placas EnVision (Perkin Elmer). El consumo total de ATP se limito al 25-60% y los valores de IC50 se correlacionan bien con los determinados mediante ensayos radiometricos.
5 Las actividades de PI3K delta de los compuestos de Formula I se proporcionan en la Tabla 2.
10
Tabla 2. Actividad de PI3K Delta de los compuestos de Formula I A 0 < Actividad de PI3K Delta < 50 nM B 50 < Actividad de PI3K Delta < 250 nM C 250 < Actividad de PI3K Delta < 500 nM
D 500 < Actividad de PI3K Delta < 1500 nM
Compuesto
Actividad IC50
1
B
2
A
3
A
4
A
5
D
6
D
7
D
8
D
9
D
10
D
11
D
12
A
13
D
14
D
15
D
16
D
17
D
18
D
19
D
20
D
21
D
22
D
23
D
24
D
25
A
Compuesto
Actividad IC50
35
A
36
A
37
A
38
A
39
A
40
B
41
B
42
A
43
A
44
D
45
D
46
C
47
D
48
A
49
A
50
D
51
B
52
A
53
D
54
D
55
D
56
C
57
D
58
D
59
B
Compuesto
Actividad IC50
26
B
27
B
28
A
29
D
30
A
31
A
32
A
33
A
34
A
69
C
70
C
71
D
72
D
73
A
74
D
75
C
76
B
77
B
78
D
79
B
80
C
81
C
82
D
83
A
84
B
85
A
86
A
87
B
88
D
89
A
90
D
91
D
92
B
93
D
Compuesto
Actividad IC50
60
C
61
D
62
D
63
B
64
C
65
D
66
D
67
A
68
B
104
D
105
D
106
D
107
D
108
D
109
B
110
B
111
C
112
D
113
B
114
B
115
B
116
B
117
A
118
C
119
A
120
D
121
B
122
D
123
C
124
C
125
D
126
D
127
D
128
A
Compuesto
Actividad IC50
94
B
95
D
96
D
97
D
98
B
99
B
100
A
101
B
102
B
103
B
139
C
140
C
141
D
142
D
143
A
144
A
145
A
146
A
147
D
148
B
149
A
150
D
151
D
152
A
153
D
154
A
155
B
156
D
157
D
158
D
159
D
160
D
161
D
162
D
Compuesto
Actividad IC50
129
D
130
C
131
D
132
D
133
B
134
A
135
B
136
A
137
C
138
D
166
B
167
D
168
D
169
D
170
B
171
B
172
B
173
B
174
D
175
A
176
D
177
B
178
B
179
D
180
D
181
B
182
B
183
C
184
C
185
C
186
C
187
B
188
B
189
B
5
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15
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25
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35
40
45
Compuesto
Actividad IC50
163
D
164
D
165
D
Compuesto
Actividad IC50
190
D
191
D
Reversibilidad de la inhibicion
Se evaluo la reversibilidad de la inhibicion enzimatica para PI3K delta midiendo la actividad enzimatica residual tras dilucion de un complejo enzima-inhibidor en condiciones de saturacion de ATP. Los complejos de inhibidor se formaron incubando PI3K delta (2 pM) durante 30 minutos a temperatura ambiente. El complejo EI se diluyo a continuacion en serie en tampon y se dejo alcanzar el equilibrio. La inhibicion cuantitativa (aproximadamente el 75%) del complejo EI se obtiene midiendo la actividad enzimatica sin dilucion en tampon. A continuacion se transfiere una muestra de 5 pL de cada dilucion a una placa blanca de union de medio bajo en volumen de 384 pocillos y entonces se anade una alfcuota de 5 pL de sustrato (PIP2 40 pM) y ATP 1 mM a la placa. Despues de una incubacion de la reaccion (5-60 minutos) se anade una alfcuota de 10 pL de Reactivo n°1 ADP-Glo y se incuba durante 40 minutos. Finalmente, se anaden 10 pL de Reactivo n°2 ADP-Glo a la placa, y despues de una incubacion de 60 minutos las reacciones son lefdas en el lector de microplacas Envision.
Mecanismo de la inhibicion de quinasa
Los compuestos de Formula I presentados en la Tabla 1 se caracterizan por la reversibilidad de union, el tipo de inhibicion y los valores de Ki. Se llevan a cabo estudios de variacion de ATP determinando los valores de IC50 para el compuesto A frente a PI3K delta usando concentraciones crecientes de ATP. Los ensayos se llevan a cabo mezclando 2 pL de PI3K delta con 0,1 pL de compuesto en una placa de union de medio blanco de bajo volumen de 384 pocillos. Tras una incubacion de 15 minutos, se anaden 2 pL de sustrato (PIP2) y ATP en concentraciones variables (1500, 1000, 500, 250, 1 pM final) a la placa. Despues de la incubacion de la reaccion de quinasa (15-120 minutos) se anaden 4 pL de Reactivo n°1 ADP-Glo (Promega) a toda la placa y se incuba durante 40 minutos. Finalmente, se anaden 8 pL de Reactivo n°2 ADP-Glo a toda la placa y se incuba durante 60 minutos, y a continuacion la placa es lefda usando un lector de microplacas Envision. Los valores de IC50 resultantes se representan en funcion de la concentracion de ATP, y se deducen los valores de Ki usando la siguiente ecuacion.
Ecuacion 2 IC50 = Ki/KM [ATP] + Ki + [E]/2
donde [E] representa la concentracion de enzima
Determinacion del valor de Km para ATP
El valor de Km correspondiente a ATP se determina usando el formato de ensayo ADP-GLO descrito anteriormente. La Km para ATP se deduce variando la concentracion de ATP (en el rango de 15 a 1600 pM) para una concentracion de PIP2 fija (50 pM).
Ejemplo 2. Ensayos celulares
Ensayo ELISA de fosforilacion de AKTT308 endogena en celulas Raji estimuladas anti-IgM
Se sembraron celulas Raji (ATCC, CCL-86) con una concentracion de 1x106 celulas/pocillo en placas de 96 pocillos (Corning, Costar 3960) en medio RPMI 1640 (ATCC, 30-2001) que contema FBS al 10% (Desactivado termicamente, Gibco, 10082), y penicilina/estreptomicina al 1% (Cellgro, 30-002-CI). Se anaden diluciones en serie de los compuestos de ensayo a una concentracion final de 0,3% de DMSO (vehnculo) a las celulas y se incuba durante 90 minutos. Las celulas se estimulan con 0,25 pg/mL de anti-IgM (Southern Biotech, 9023-01) durante 30 minutos. Los pocillos de minima senal son celulas tratadas con 0,3% de DMSO sin estimulacion de anti-IgM; los pocillos de maxima senal son los de 0,3% de DMSO con estimulacion de anti-IgM. Tras la estimulacion, las celulas son centrifugadas a 290 x g durante 4 minutos y lisadas inmediatamente con 120 pL de tampon de lisis fno (Tris-HCl 50 mM, pH 7,6; NaCl 150 mM; 0,1% de Triton X-100; EDTA 1 mM; Coctel inhibidor de proteasa (Roche, 11697498001) y PhosSTOP (Roche, 04906837001)). Para detectar la fosfo-AKTT308 y la AKT total, se usan kits ELISA disponibles comercialmente (Invitrogen, kHo0201 y KHO0101). Se transfieren 100 o 10 pL de lisato celular a placas de fosfo-AKTT308 o de AKT total, respectivamente. Se anaden 90 pL adicionales de tampon de lisis a las placas de AKT total. Las placas son incubadas durante una noche a 4°C y lavadas cuatro veces con 200 pL de tampon ish proporcionado por el fabricante (Invitrogen, WB01). Las placas son incubadas con 100 pL de disolucion de anticuerpo de deteccion durante 1,5 h. Las placas son ishadas cuatro veces con 200 pL de tampon ish, a continuacion son incubadas durante 1 h con anticuerpo secundario usando el tampon correspondiente. Las placas son ishadas como antes, seguido de la adicion de 100 pL/pocillo de disolucion de cromogeno estabilizada durante 20 minutos. La reaccion se detiene anadiendo 100 pL de disolucion de parada. Se mide la absorbancia a la longitud de onda de 450 nm usando un espectrometro (Molecular
5
10
15
20
25
30
35
40
45
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55
60
Devices, SpectraMax Plus). Se lleva a cabo una normalizacion intra-pocillo dividiendo los valores de DO de fosfo- AKTT308 entre los valores de DO de AKT total. A continuacion se estiman los valores de IC50 comparando los valores de muestras tratadas con el compuesto con los promedios de los pocillos de condicion de mmima y maxima senal mencionados anteriormente.
Analisis de perfil de transferencia Western de celulas Raji estimuladas con anti-IgM
Se sembraron 1x107 celulas Raji (ATCC, CCL-86) en tubos de fondo redondo de 14 mL en medio RPMI 1640 (ATCC, 30-2001) que contiene FBS al 10% (desactivado termicamente, Gibco, 10082), y 1% de penicilina/estreptomicina (Cellgro, 30-002-CI). Se anaden diluciones en serie del compuesto de ensayo en una concentracion final de 0,3% de DMSO (vehmulo) y se incuban durante 90 minutos seguido de 0,25 pg/mL de estimulacion de anti-IgM (Southern Biotech, 9023-01) durante 30 minutos. Tras la estimulacion, las celulas son centrifugadas a 290 x g durante 4 minutos, lavadas una vez con salino tamponado con fosfato fno (PBS; Cellgro, 21-030-CV) y lisadas inmediatamente con 120 pL de tampon de lisis fno (Tris-HCl 50 mM, pH 7,6; NaCl 150 mM; Triton X-100 al 0,1%; EDTA 1 mM; coctel inhibidor de proteasa (Roche, 11697498001); y PhosSTOP (Roche, 04906837001)) durante 30 minutos. Los lisatos son recolectados y aclarados mediante centrifugacion a 17.800 x g durante 15 minutos. Las concentraciones de protema se miden mediante el metodo BCA (Pierce, 23227). Los lisatos se mezclan con tampon de muestra NuPage LDS (Invitrogen, NP0007) y agente reductor (Invitrogen, NP0004), a continuacion se calientan a 70°C durante 10 minutos. Se cargan 26 pg de protema en geles Bis-Tris NuPage al 4-12% (Invitrogen, NP0323). Las protemas se transfieren a membranas de nitrocelulosa (Invitrogen, LC2001), se bloquean durante 1 h en tampon de bloqueo Odyssey (Li-Cor, 927-40000), y se incuban a 4°C durante una noche con los siguientes anticuerpos diluidos en tampon de bloqueo Odyssey que contiene un 0,1% de Tween-20: Anti-phospho-AKTT308 (1:500, Cell Signaling Technology, 2695), Anti- phospho-AKTS473 (1:1.000, Cell Signaling Technology, 4060), Anti-AKT (1:2.000, R&D Systems, MAB 2055); Anti- phospho-PRAS40T246 (1:500, Cell Signaling Technology, 2640), anti-phospho-GSK3pS9 (1:500, Cell Signaling Technology, 9336), Anti-phospho-S6S240/244 (1:500, Cell Signaling Technology, 2215), Anti-S6 (1: 1.000, Cell Signaling Technology, 2217), Anti-GAPDH (1:100.000, Advanced Immunochemical Inc., MAB6C5). Las membranas fueron lavadas cuatro veces durante 10 minutos cada vez con tampon TBS-T (Tris-HCl 50 mM, pH 7,2; NaCl 150 mM; Tween- 20 al 0,1%) y se trataron con anticuerpos secundarios anti-raton de cabra IRDye680 (Li-Cor, 926-32220) y anti-conejo de cabra IRDye800 (Li-Cor, 926-32211) en tampon de bloqueo Odyssey que contema un 0,1% de Tween-20 durante 60 minutos a temperatura ambiente. Las membranas se lavaron cuatro veces durante 10 minutos cada vez con tampon TBS-T y se lavaron con PBS dos veces. Las membranas se escanean usando el escaner Odyssey (Li-Cor) y se cuantifica la intensidad de senal de cada banda usando ImageQuant (Molecular Devices). Los valores de IC50 se calculan en base a la senal del tratamiento con compuesto en comparacion con el control de vehmulo (DMSO).
Analisis de transferencia Western de fosforilacion de AKT inducida por anti-IgM en linfocitos B sanguineos perifericos humanos
Se sembraron linfocitos B primarios humanos (celulas B, AllCells, PB010) a 6x105 celulas/pocillo en placas agrupadas de 48 pocillos (Nunc 150687) en medio RpMi 1640 (ATCC, 30-2001) que contema un 10% de FbS (desactivado termicamente, Gibco, 10082), 1% de penicilina/estreptomicina (Cellgro, 30-002-CI), 1% de L-glutamina (Cellgro, 25- 015-CI) y p-mercaptoetanol 50 pM (Gibco, 21985-023). Se anaden diluciones en serie del compuesto de ensayo en una concentracion final de 0,3% de DMSO (vehmulo) a las celulas y se incuban durante 2 h seguido de estimulacion con 10 pg/mL de anti-IgM (Southern Biotech, 9023-01) durante 5 minutos. Tras la estimulacion, las celulas son centrifugadas a 290 x g durante 4 minutos, se lavan una vez con salino tamponado con fosfato fno (PBS; Cellgro, 21- 030-CV) y se lisan inmediatamente con 40 pL de tampon de lisis fno (Tris-HCl 50 mM, pH 8,0, NaCl 150 mM, NP-40 al 1%, SDs al 0,1%, desoxicolato sodico al 0,5%, EDTA 1 mM, NaF 50 mM, pirofosfato sodico 1 mM, ortovanadato sodico 1 mM, fluoruro de fenilmetilsulfonilo 2 mM, 10 pg/mL de aprotinina, 5 pg/mL de leupeptina y 5 pg/mL de pepstatina A) durante 30 minutos. Los lisatos se recolectan y se clarifican mediante centrifugacion a 17.800 x g durante 15 minutos. Los lisatos se mezclan con tampon de muestra NuPage LDS (Invitrogen NP0007) y agente reductor (Invitrogen, NP0004), a continuacion se calientan a 70°C durante 10 minutos. La muestra se carga en geles Bis-Tris NuPage al 4-12% (Invitrogen, NP0323). Las protemas se transfieren a membranas de celulosa (Invitrogen, LC2001), se bloquean durante 1 h en tampon de bloqueo Odyssey (Li-Cor, 927-40000), y se incubaron a 4°C durante una noche con los siguientes anticuerpo diluidos en tampon de bloqueo Odyssey: Anti-phospho-AKTT308 (1:200, Cell Signaling Technology, 2695), Anti-phospho-AKTS473 (1:200, Cell Signaling Technology, 4060), Anti-AKT (1:1.000, R&D Systems, MAB 2055); y Anti-GAPDH (1:100.000, Advanced Immunochemical Inc., mAb6C5). Las membranas se lavaron cuatro veces durante 10 minutos cada vez con tampon TBS-T (Tris-HCl 50 mM, pH 7,2; NaCl 150 mM, 0,1% de Tween-20) y se tineron con anticuerpos secundarios anti-raton de cabra IRDye680 (Li-Cor, 926-32220) y anti-conejo de cabra IRDye800 (Li-Cor, 926-32211) en tampon de bloqueo Odyssey que contema 0,1% de Tween-20 durante 60 minutos a temperatura ambiente. Las membranas se lavan cuatro veces durante 10 minutos cada vez con tampon TBS-T y se lavan con PBS dos veces. Las membranas se escanean usando el escaner Odyssey (Li-Cor) y se cuantifica la intensidad de senal de cada banda usando ImageQuant (Molecular Devices). Los valores de IC50 se calculan en base a la senal del tratamiento con compuesto en comparacion con el control de vehmulo (DMSO).
Ensayo de liberacion de citocina TNF-alfa de celulas Raji estimuladas con anti-IgM
Se siembran celulas Raji (ATCC, CCL-86) con una concentracion de 2x105 celulas/pocillo en placas de fondo redondo de agrupacion de cultivo celular de 96 pocillos (Corning, Costar 3790) en medio RPMI 1640 (ATCC, 30-2001) que
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contema FBS al 10% (Desactivado termicamente, Gibco, 10082) con penicilina/estreptomicina al 1% (Cellgro, 30-002- CI). Las celulas son tratadas con los compuestos diluidos en serie durante 2 h a 37°C en una atmosfera con un 5% de CO2. Las celulas se estimulan con 1 pg/mL de anticuerpo anti-IgM (Southern Biotech, 9023-01) durante 4 h. Los pocillos de minima senal son tratados con PI-103 disponible comercialmente (CAS 371935-74-9) y los pocillos de maxima senal son los de 0,3% de DMSO, ambos estimulados con anti-IgM. Tambien se incluyen como control negativo las celulas no estimuladas. Despues del tratamiento, los sobrenadantes del cultivo se filtran usando placas de filtro de PVDF de 96 pocillos de 0,2 pm (Corning, Costar 3504). El medio acondicionado filtrado se anade a las placas MSD (K151BHB-2) y se incuba durante 3 h a temperatura ambiente con agitacion en un sistema de agitacion (600 rpm). Las placas se lavan tres veces con salino tamponado con fosfato (PBS; NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 6,5 mM, KH2PO4 1,7 mM) que contiene Tween-20 al 0,05% (Bio-Rad, 161-0781). Se anade a cada pocillo disolucion de anticuerpo de deteccion (Meso Scale Discovery, K151BHB-2) y se incuba durante 2 h a temperatura ambiente. A continuacion las placas se lavan tres veces con salino tamponado con fosfato (PBS; NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 6,5 mM, KH2PO4 1,7 mM) que contiene 0,05% de Tween-20 (Bio-Rad, 161-0781). Se anade tampon de lectura T (Meso Scale Discovery, K151BHB-2) a cada pocillo, y a continuacion se analizan las placas en el equipo MSD SECTOR Imager. Se calculan los valores de IC50 en base a la senal de celulas con tratamiento de compuesto en comparacion con aquella correspondiente a los pocillos de maxima y minima senal.
Ensayo de liberacion de citocina de linfocitos B de sangre periferica humana estimulados con anti-IgM
Se siembran celulas B sangumeas perifericas primarias humanas (seleccionadas negativamente, CD19+, AllCells, PB010) a una concentracion de 1X105 celulas/pocillo en placas microtitulacion de agrupaciones de 96 pocillos (Costar, 3790) en medio RPMI 1640 (ATCC, 30-2001) que contema un 10% de FBS (desactivado termicamente, Gibco, 10082), 1% de penicilina/estreptomicina (Cellgro, 30-002-CI), 1% de L-glutamina (Cellgro, 25-015-CI), y p-mercaptoetanol 50 pM (Gibco, 21985-023). Se anaden diluciones en serie de compuesto en una concentracion final de DMSO al 0,3% (vehmulo) a las celulas y se incuban a 37°C, 5% de CO2 durante 2 h. Se usan pocillos duplicados para cada concentracion de compuesto. Los pocillos de senal minima recibieron PI-103 30 pM, un inhibidor pan-PI3K. Las celulas de todos los pocillos son estimuladas entonces con anti-IgM (Jackson Immunoresearch, 109-006-129) durante otras 4 h adicionales a 37°C, 5% de CO2. Las celulas son transferidas entonces a placas de filtracion de 96 pocillos (Corning Costar, 3504), y los sobrenadantes se recolectan mediante filtracion a vado. Los sobrenadantes se congelan a -80°C hasta el momento del ensayo. Segun las instrucciones del fabricante, se evaluan los sobrenadantes para determinar los niveles de citocina usando el Kit de cultivo de tejidos Human Pro-inflammatory 9-Plex (GM-CSF, IFN-gamma, IL- 1p, IL-10, IL-12 p70, IL-2, IL-6, IL-8, TNF-alfa; Meso Scale Discovery, K15007B-1). Resumidamente, se anaden los sobrenadantes sobre placas de ensayo pre-bloqueadas y se incuban a temperatura ambiente durante 2 h con agitacion vigorosa a 600 rpm. A continuacion se anaden anticuerpos de deteccion a los sobrenadantes y se incuban a temperatura ambiente durante otras 2 h adicionales con agitacion vigorosa a 600 rpm. Las placas se lavan tres veces con salino tamponado con fosfato (PBS; NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 6,5 mM, KH2PO41,7 mM) que contema Tween-20 al 0,05% (Bio-Rad, 161-0781) y se detecta la electroquimioluminiscencia usando el lector de placas MSD SI2400. Se calculan los valores de IC50 en base a la concentracion de citocina calculada con el tratamiento con compuesto menos la senal minima comparada con el control de vehmulo de DMSO.
Ensayo de liberacion de citocina de linfocitos B de sangre periferica humana estimulados con CpG ODN
Se siembran celulas B sangumeas perifericas primarias humanas (seleccionadas negativamente, CD19+, AllCells, PB010) a una concentracion de 1X105 celulas/pocillo en placas microtitulacion de agrupaciones de 96 pocillos (Corning, Costar 3790) en medio RPMI 1640 (ATCC, 30-2001) que contema un 10% de FBS (desactivado termicamente, Gibco, 10082), 1% de penicilina/estreptomicina (Cellgro, 30-002-CI), 1% de L-glutamina (Cellgro, 25- 015-CI), y p-mercaptoetanol 50 pM (Gibco, 21985-0233). Se anaden diluciones en serie de compuesto en una concentracion final de DMSO al 0,3% (vehmulo) a las celulas y se incuban a 37°C, 5% de CO2 durante 2 h. Se usan pocillos duplicados para cada concentracion de compuesto. Los pocillos de senal minima recibieron PI-103 30 pM disponible comercialmente (CAS 371935-74-9), un inhibidor pan-PI3K. Las celulas de todos los pocillos son estimuladas entonces con CpG ODN (Imgenex, IMG-2209H) durante otras 4 h adicionales a 37°C, 5% de CO2. Las celulas son transferidas entonces a placas de filtracion de 96 pocillos (Corning Costar, 3504), y los sobrenadantes se recolectan mediante filtracion a vado. Los sobrenadantes se congelan a -80°C hasta el momento del ensayo. Segun las instrucciones del fabricante, se evaluan los sobrenadantes para determinar los niveles de citocina usando el Kit de cultivo de tejidos Human Pro-inflammatory 9-Plex (GM-CSF, IFN-gamma, IL-1 beta, IL-10, IL-12 p70, IL-2, IL-6, IL-8, TNF-alfa; Meso Scale Discovery, K15007B-1). Resumidamente, se anaden los sobrenadantes sobre placas de ensayo pre-bloqueadas y se incuban a temperatura ambiente durante 2 h con agitacion vigorosa a 600 rpm. A continuacion se anaden anticuerpos de deteccion a los sobrenadantes y se incuban a temperatura ambiente durante otras 2 h adicionales con agitacion vigorosa a 600 rpm. Las placas se lavan tres veces con salino tamponado con fosfato (PBS; NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 6,5 mM, KH2PO41,7 mM) que contema Tween-20 al 0,05% (Bio-Rad, 161-0781) y se detecta la electroquimioluminiscencia usando el lector de placas MSD SI2400. Se calculan los valores de IC50 en base a la concentracion de citocina calculada con el tratamiento con compuesto menos la senal minima comparada con el control de vehmulo de DMSO.
Ensayo de liberacion de citocina de linfocitos T de sangre periferica humana mediada por anti-CD3
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Se a^slan celulas mononucleares de sangre periferica humana (PBMCs) a partir de donantes humanos sanos usando un gradiente de diatrizoato polisacarosa sodica (Accuspin System Histopaque-1077, Sigma-Aldrich, A7054). A continuacion las celulas son seleccionadas negativamente segun las instrucciones del fabricante usando el kit de enriquecimiento de celulas T humanas EasySep (Stem Cell Technologies, 19051). Las celulas tienen una pureza superior al 95%. Se siembran celulas T CD3+ a una concentracion de 1x105 celulas/pocillo en placas de microtitulacion de agrupaciones de 96 pocillos (Corning, Costar 3790) en medio RPMI 1640 (ATCC, 30-2001) que contema un 10% de FBS (desactivado termicamente, Gibco, 10082), 1% de penicilina/estreptomicina (Cellgro, 30-002-CI), 1% de L- glutamina (Cellgro, 25-015-CI), y p-mercaptoetanol 50 pM (Gibco, 21985-023). Se anaden diluciones en serie de compuesto en una concentracion final de DMSO al 0,3% (vehuculo) a las celulas y se incuban a 37°C, 5% de CO2 durante 2 h. Se usan pocillos duplicados para cada concentracion de compuesto. Los pocillos de minima senal recibieron PI-103 30 pM disponible comercialmente (CAS 371935-74-9), un inhibidor pan-PI3K. Las celulas de todos los pocillos se siembran entonces sobre placas de microtitulacion de 96 pocillos recubiertas de CD3 anti-humano (BD Biosciences, 354725) durante otras 4 h adicionales a 37°C, 5% CO2. A continuacion las celulas son transferidas a placas de filtracion de 96 pocillos (Corning, Costar 3504) y los sobrenadantes se recolectan mediante filtracion a vado. Los sobrenadantes se congelan a -80°C hasta el momento del ensayo. Segun las instrucciones del fabricante, se evaluan los sobrenadantes para determinar los niveles de citocina usando el Kit de cultivo de tejidos Human TH1/TH2 10-Plex (GM-CSF, IFN-gamma, IL-1beta, IL-10, IL-12 p70, IL 13, IL-2, IL-4, IL-5, IL-8, TNF-alfa; Meso Scale Discovery, K15010-1). Resumidamente, se anaden los sobrenadantes sobre placas de ensayo pre-bloqueadas y se incuban a temperatura ambiente durante 2 h con agitacion vigorosa a 600 rpm. A continuacion se anaden anticuerpos de deteccion a los sobrenadantes y se incuban a temperatura ambiente durante otras 2 h adicionales con agitacion vigorosa a 600 rpm. Las placas se lavan tres veces con salino tamponado con fosfato (PBS; NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 6,5 mM, KH2PO4 1,7 mM) que contema Tween-20 al 0,05% (Bio-Rad, 161-0781) y se detecta la electroquimioluminiscencia usando el lector de placas MSD SI2400. Se calculan los valores de IC50 en base a la concentracion de citocina calculada con el tratamiento con compuesto menos la senal minima comparada con el control de vehfculo de DMSO.
Ensayo de liberacion de citocina de celula mononuclear de sangre periferica estimulada con LPS
Se siembran celulas mononucleares de sangre periferica primaria humana (PBMC, AllCells, PB001) a una concentracion de 2x105 celulas/pocillo en placas de microtitulacion de agrupaciones de 96 pocillos (Corning, Costar 3790) en medio RPMI 1640 (ATCC, 30-2001) que contema un 10% de FBS (desactivado termicamente, Gibco, 10082), 1% de penicilina/estreptomicina (Cellgro, 30-002-CI), 1% de L-glutamina (Cellgro, 25-015-CI), y p-mercaptoetanol 50 pM (Gibco, 21985-023). Se anaden diluciones en serie de compuesto en una concentracion final de DMSO al 0,3% (velmculo) a las celulas y se incuban a 37°C, 5% de CO2 durante 2 h. Se usan pocillos duplicados para cada concentracion de compuesto. Los pocillos de minima senal recibieron PI-103 30 pM disponible comercialmente (CAS 371935-74-9), un inhibidor pan-PI3K. Las celulas de todos los pocillos se estimulan entonces con lipopolisacarido (LPS, Sigma, L4391) durante otras 6 h adicionales a 37°C, 5% CO2. A continuacion las celulas son transferidas a placas de filtracion de 96 pocillos (Corning, Costar 3504) y los sobrenadantes se recolectan mediante filtracion a vacfo. Los sobrenadantes se congelan a -80°C hasta el momento del ensayo. Segun las instrucciones del fabricante, se evaluan los sobrenadantes para determinar los niveles de citocina usando el Kit de cultivo de tejidos Human Proinflammatory 9-Plex (GM-CSF, IFN-gamma, IL-1beta, IL-10, IL-12 p70, IL-2, IL-6, IL-8, TNF-alfa; Meso Scale Discovery, K15007-B). Resumidamente, se anaden los sobrenadantes, sin diluir o diluidos 1:2, sobre placas de ensayo pre-bloqueadas y se incuban a temperatura ambiente durante 2 h con agitacion vigorosa a 600 rpm. A continuacion se anaden anticuerpos de deteccion a los sobrenadantes y se incuban a temperatura ambiente durante otras 2 h adicionales con agitacion vigorosa a 600 rpm. Las placas se lavan tres veces con salino tamponado con fosfato (PBS; NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 6,5 mM, KH2PO41,7 mM) que contema Tween-20 al 0,05% (Bio-Rad, 161-0781) y se detecta la electroquimioluminiscencia usando el lector de placas MSD SI2400. Se calculan los valores de IC50 en base a la concentracion de citocina calculada con el tratamiento con compuesto menos la senal minima comparada con el control de vehfculo de DMSO.
Ensayo de proliferacion de BrdU de linfocitos T y B humanos primarios
Se siembran linfocitos B primarios humanos (celulas B, AllCells, PB010) a una concentracion de 1x105 celulas/pocillo en placas de microtitulacion de agrupaciones de 96 pocillos (Corning, Costar 3790) y se siembran linfocitos T primarios humanos (celulas T, AllCells, PB009-1) a una concentracion de 2x105 celulas/pocillo sobre placas de microtitulacion de 96 pocillos recubiertas con anti-CD3 humano (BD Biosciences, 354725) en medio RPMI 1640 (ATCC, 30-2001) que contema un 10% de FBS (desactivado termicamente, Gibco, 10082), 1% de penicilina/estreptomicina (Cellgro, 30-002-CI), 1% de L-glutamina (Cellgro, 25-015-CI), y p-mercaptoetanol 50 pM (Gibco, 21985-023). Las celulas B primarias humanas se estimulan con IgM anti-humana (Jackson Immunoresearch, 109-006-129) a una concentracion final de 25 pg/mL o con CpG ODN (Imgenex, IMG-2209H) a una concentracion final de 2 pg/mL. Tanto las celulas B como las celulas T son tratadas inmediatamente despues de la estimulacion con una dilucion en serie de compuesto en el medio (que contema una concentracion final de 0,3% de DMSO). Se usan pocillos por triplicado para cada concentracion de compuesto en celulas B, y se usan pocillos por duplicado para cada concentracion de compuesto en celulas T. Los pocillos de control recibieron medio con 0,3% de DMSO. Los pocillos de senal minima recibieron PI- 103 30 pM disponible comercialmente (CAS 371935-74-9), un inhibidor pan-PI3K. Los cultivos se incuban a 37°C, 5% de CO2 durante 72h (celulas B) o 96h (celulas T). Para evaluar las celulas, estas son marcadas con bromodesoxiuridina 20 pM (BrdU, Sigma, B5002-500MG), se transfieren a placas de filtracion de 96 pocillos (Costar 3504), y a continuacion
se fijan con disolucion FixDenat (70% de etanol + NaOH 0,1M). Se anade a las celulas conjugado ant-BrdU-POD (1:2.000; Roche, 11585860001), tras lo cual las placas son lavadas 3 veces con salino tamponado con fosfato (PBS; NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 6,5 mM, KH2PO4 1,7 mM). Se anade una disolucion de sustrato preparada a partir de 1 parte de peroxido (Thermo Scientific, 37075A) y 1 parte de luminol (Thermo Scientific, 37075B), y las placas 5 son lefdas en terminos de luminiscencia (0,1 s) usando el luminometro Victor Wallac. Se calculan los valores de IC50 en base a la proliferacion celular con el tratamiento con compuesto menos la senal minima en comparacion con el control de vetnculo de DMSO.
Ensayo de desgranulacion de p-hexosaminidasa de mastocitos de raton MC/9
Se siembran celulas MC/9 (ATCC, CRL-8306) a una concentracion de 1x106 celulas/mL sobre matraces de cultivo de 10 tejido (Nunc, 144903) en dMeM (Cellgro, 10-013-CV) que contema un 10% de FBS (desactivado termicamente, Gibco, 10082), 1,5 g/L de bicarbonato sodico, 2-mercaptoetanol 0,05 mM, 10% de T-STIM de rata (BD, 354115) y 1% de penicilina/estreptomicina (Cellgro, 30-002-CI). Las celulas son incubadas con 200 ng/mL de IgE anti-DNP (Sigma, D8406) a lo largo de una noche a 37°C en 5% de CO2. Las celulas se lavan dos veces con tampon de Tyrode (NaCl 135 mM, KCl 5 mM, glucosa 5,6 mM, CaCh 1,8 mM, MgCh 1 mM, HEPES 20 mM y 0,5 mg/mL de BSA; pH 7,3) y se 15 siembran a una concentracion de 2x10s celulas/pocillo en placas de microtitulacion de 96 pocillos (Costar, 3904) en 70 |jL de tampon de Tyrode. Se anaden a las celulas 30 jL de los compuestos de ensayo diluidos en serie en tampon de Tyrode con una concentracion final de 0,3% de DMSO (vetnculo) y se incuba durante 75 minutos. Las celulas son estimuladas con 200 ng/mL de DNP/HSA (Sigma, A6661) durante 45 minutos. Los pocillos de fondo son celulas en DMSO al 0,3% sin estimulacion de DNP-HSA. Los pocillos de senal minima son tratados con PI-103 disponible 20 comercialmente (CAS 371935-74-9, 10 jM) y los pocillos de senal maxima son en DMSO al 0,3%, ambos estimulados con DNP-HSA. El volumen final por pocillo es de 110 jL. Tras la estimulacion, las celulas son centrifugadas a 400 x g durante 4 minutos. Se recogen con cuidado 50 jL de sobrenadante y se transfieren a una placa de96 pocillos (Nunc, 260895) y se incuban con 75 jL de p-nitrofenil acetil-D-glucosamina 1 mM (Sigma, N9376) en tampon de citrato (pH 4,5) durante 2h a 37°C. La reaccion se detiene anadiendo 75 jL de NaOH 2 M. Los pocillos se miden para determinar 25 la absorbancia a la longitud de onda de 405 nm con correccion a 630 nm usando un espectrofotometro (Molecular Devices, SpectraMax Plus). Los valores de ruido de fondo promedio de pocillo se restan para todos los pocillos. Los valores de IC50 se calculan en base a la absorbancia de celulas con tratamiento con compuesto en comparacion con aquellas de los correspondientes pocillos de maxima y minima senal.
Ejemplo 3. Modelos tumorales de xenoinjerto farmacodinamico
30 En los siguientes modelos se usan ratones nude atfmicos (NCr) hembras y machos de 5-8 semanas de edad y con un peso de aproximadamente 20-25 g. Antes del inicio del estudio, se permite que los animales se aclimaten durante un mmimo de 48 h. Durante estos estudios, se proporciona a los animales alimento y agua ad libitum y son alojados en un cuarto acondicionado a 21-24°C (70-75°F) y con un 60% de humedad relativa. Se mantiene un clico de 12 h de luz y 12 h de oscuridad con temporizadores automaticos. Todos los animales son examinados diariamente para 35 determinar muertes inducidas por el compuesto o relacionados con el tumor.
El peso tumoral (TW, del ingles “tumor weight”) de los modelos anteriores se determina midiendo los diametros perpendiculares con un calibre, usando la siguiente formula:
Peso tumoral (mg) = [volumen del tumor = longitud (mm) x anchura2 (mm2)]/2
Estos datos se registran y se representan en una grafica lineal de peso de tumor frente a dfas post-implante, y se 40 presentan graficamente como indicio de las tasas de crecimiento tumoral. El porcentaje de inhibicion del crecimiento tumoral (TGI) se determina con la siguiente formula:
imagen30
donde:
X0 = TW promedio de todos los tumores en el grupo en el dfa 0 45 Xf = TW del grupo tratado en el dfa f
Yf = TW del grupo de control de vetnculo en el dfa f
Si el tumor retrocede por debajo de sus dimensiones de partida, entonces el porcentaje de regresion tumoral se determina con la siguiente formula:
imagen31
El tamano del tumor se calcula individualmente para cada tumor para obtener un valor de media ± SEM para cada grupo experimental. La significancia estadfstica se determina usando el test de t de Student de 2 ramas (significancia definida como P<0,05).
5 La invencion precedente ha sido descrita con cierto detalle a modo de ilustracion y ejemplo, con fines de claridad y comprension. La invencion ha sido descrita en referencia a varias realizaciones y tecnicas espedficas. Sin embargo, debe considerarse que se pueden realizar muchas variaciones y modificaciones, manteniendose dentro del alcance de la invencion. Sera evidente para los especialistas en la tecnica que se pueden realizar cambios y modificaciones dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. Por tanto, debe entenderse que la anterior descripcion pretende 10 ser ilustrativa y no restrictiva. El alcance de la invencion, por tanto, no debena determinarse en referencia a la anterior descripcion, sino que debena determinarse en referencia a las siguientes reivindicaciones anexas.

Claims (6)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    REIVINDICACIONES
    Lo que se reivindica es:
    1. Un compuesto de Formula II
    imagen1
    o un estereoisomero o mezcla de estereoisomeros del mismo, opcionalmente en la forma de una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, donde:
    X es NH o N-alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente;
    Y es alquileno (Ci-Ca) sustituido opcionalmente en el que hasta dos atomos de carbono del alquileno (Ci-Ca) son reemplazados por O, NH, N-alquilo(Ci-Ca), -NH-(C=O)-, -N-alquilo(Ci-Ca)-(C=O)-, o -(C=O);
    Q es alquileno (Ci-Ca);
    Z es -NH-(C=O)- o N-alquilo(Ci-Ca)-(C=O);
    Ri es halogeno, hidroxi, ciano, arilo sustituido opcionalmente, heteroarilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente, alcoxi (Ci-Ca) sustituido opcionalmente, alquilo(Ci-Ca)-OH, NH2, -NH-alquilo(Ci-Ca), -NH-(alquilo(Ci-Ca))2, -NH-(C=O)-R5, -(C=O)NRaR7, o -NH-(SO2)-R8;
    R2 es NH2, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, o heteroarilo sustituido opcionalmente,
    R5 es H, alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, o heteroarilo sustituido opcionalmente;
    Ra y R7 son cada uno de forma independiente H, alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, heteroarilo sustituido opcionalmente, o Ra y R7, junto con los atomos a los que estan unidos, pueden considerarse en conjunto para formar un anillo de 3, 4, 5, a o 7 miembros sustituido opcionalmente;
    R8 es alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, o heteroarilo sustituido opcionalmente.
  2. 2. El compuesto de la reivindicacion i, que es un compuesto de Formula II-Bi o II-B2.
    imagen2
  3. 3. El compuesto de la reivindicacion 2, en el que Q es CH2 o CH(CH3).
  4. 4. El compuesto de la reivindicacion 3, en el que Z es NH-(C=O)-.
  5. 5. El compuesto de la reivindicacion 4, en el que R1 es halo, -OH, -NH2 o ciano, o es alquilo (Ci-Ca), alcoxi (Ci-Ca), pirrolidinilo, piperidinilo, piperizinilo, octahidropiridopirazinilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, fenilo, piridilo, imidazolilo, diazepinilo, morfolinilo, -SO2-alquilo (Ci-Ca), -SO2-arilo, -NH-alquilo (Ci-Ca), -NH-(alquilo (Ci-Ca))2,
    octahidroisoquinolinilo, dihidroisoquinolinilo, bencimidazolilo, furanilo, pirazinilo, tiazolilo, diazabicilo[2.2.1]hept-2-ilo, piranilo, tetrahidropiranilo, cualquiera de los cuales puede estar sustituido opcionalmente.
  6. 6. El compuesto de la reivindicacion 5, en el que R1 es bromo, -OH, -NH2, ciano, -CH3, -OCH3, SO2-CH3,
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