ES2837629T3 - Formulaciones de proteínas líquidas que contienen agentes reductores de la viscosidad - Google Patents

Abstract

Una formulación farmacéutica líquida para inyección que comprende: (i) por lo menos 100 mg/ml de un anticuerpo; (ii) procaína o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y (iii) un solvente farmacéuticamente aceptable; en donde la formulación farmacéutica líquida, cuando está en un volumen adecuado para inyección: (a) tiene una viscosidad absoluta de 1 mPa.s (1 cP) a 100 mPa.s (100 cP) a 25° C como se mide usando un viscosímetro de cono y plato o un viscosímetro microfluídico; y (b) la viscosidad absoluta de la formulación farmacéutica líquida es menor que una viscosidad absoluta de una composición de control que comprende el anticuerpo y el solvente farmacéuticamente aceptable pero sin la procaína o la sal farmacéuticamente aceptable de la misma; en donde la viscosidad absoluta es una viscosidad de cizallamiento cero extrapolada.

Description

DESCRIPCIÓN

Formulaciones de proteínas líquidas que contienen agentes reductores de la viscosidad

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere al campo de las formulaciones farmacéuticas de baja viscosidad inyectables de proteínas altamente concentradas y los métodos de elaboración y uso de las mismas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los anticuerpos monoclonales (mAb) son importantes agentes terapéuticos basados en proteínas para el tratamiento de varias enfermedades humanas como el cáncer, enfermedades infecciosas, inflamación y enfermedades autoinmunes. Se han aprobado más de 20 productos de mAb por la U.S. Food and Drug Administration (FDA), y aproximadamente el 20% de todos los biofármacos que se están evaluando actualmente en ensayos clínicos son mAb (Daugherty et al, Adv. DrugDeliv. Rev, 58:686-706, 2006; y Buss et al., Curr. Opinion in Pharmacol. 12:615-622, 2012).

Las terapias a base de mAb se administran habitualmente repetidamente durante un período de tiempo prolongado y requieren dosificación de varios mg/kg. Las soluciones o suspensiones de anticuerpos pueden administrarse por vías parenterales, como infusiones intravenosas (IV) e inyecciones subcutáneas (SC) o intramusculares (IM). Las vías SC o IM reducen el costo del tratamiento, aumentan el cumplimiento de los pacientes, y mejoran la comodidad para los pacientes y los proveedores de atención médica durante la administración en comparación con la vía IV. Para ser eficaces y farmacéuticamente aceptables, las formulaciones parenterales deberían ser preferiblemente estériles, estables, inyectables (por ejemplo, mediante una jeringuilla) y no irritantes en el sitio de la inyección, de acuerdo con las directrices de la FDA. Debido a los pequeños volúmenes requeridos para las inyecciones subcutáneas (habitualmente menos de 2 ml) e intramusculares (habitualmente menos de 5 ml), estas vías de administración para terapias de proteínas en dosis altas requieren soluciones de proteínas concentradas. Estas altas concentraciones dan como resultado a menudo formulaciones muy viscosas que son difíciles de administrar mediante inyección, provocan dolor en el sitio de la inyección, son a menudo imprecisas y/o pueden tener una estabilidad química y/o física disminuida.

Estas características dan como resultado requisitos de fabricación, almacenamiento y uso que pueden ser difíciles de lograr, en particular para formulaciones que tienen altas concentraciones de proteínas de alto peso molecular, como los mAb. Todos los agentes terapéuticos de proteínas están sujetos hasta cierto punto a inestabilidad física y química como agregación, desnaturalización, reticulación, desamidación, isomerización, oxidación y recorte (Wang et al, J. Pharm. Sci 96:1-26, 2007). Por tanto, el desarrollo de la formulación óptimo es fundamental en el desarrollo de productos farmacéuticos de proteínas comercialmente viables.

Las altas concentraciones de proteínas plantean desafíos relacionados con la estabilidad física y química de la proteína, así como dificultades con la fabricación, el almacenamiento y la administración de la formulación de proteínas. Un problema es la tendencia de las proteínas a agregarse y formar particulados durante el procesamiento y/o almacenamiento, lo que dificulta las manipulaciones durante el procesamiento y/o administración posteriores. La degradación y/o agregación dependientes de la concentración son desafíos importantes en el desarrollo de formulaciones de proteínas a concentraciones más altas. Además del potencial de agregación de proteínas no nativas y formación de particulados, puede producirse una autoasociación reversible en soluciones acuosas, lo que contribuye, entre otras cosas, a una viscosidad aumentada que complica la administración por inyección. (Ver, por ejemplo, Steven J. Shire et al, J. Pharm. Sci. 93:1390-1402, 2004.) La viscosidad aumentada es uno de los desafíos clave que se encuentran en las composiciones de proteínas concentradas que afectan tanto a los procesos de producción como a la capacidad de administrar fácilmente tales composiciones por medios convencionales. (Ver, por ejemplo, J. Jezek et al., Advanced Drug Delivery Reviews 63:1107-1117, 2011.)

Las formulaciones líquidas altamente viscosas son difíciles de fabricar, extraer con una jeringuilla, e inyectar por vía subcutánea o intramuscular. El uso de la fuerza en la manipulación de las formulaciones viscosas puede llevar a una formación de espuma excesiva, que puede desnaturalizar e inactivar aún más la proteína terapéuticamente activa. Las soluciones de alta viscosidad también requieren agujas de mayor diámetro para la inyección y producen más dolor en el sitio de inyección.

Los productos de mAb comerciales actualmente disponibles administrados por inyección SC o IM se formulan habitualmente en tampones acuosos, como un tampón de fosfato o L-histidina, con excipientes o surfactantes como manitol, sacarosa, lactosa, trehalosa, POLOXAMER® (copolímeros de tres bloques no iónicos compuestos de una cadena hidrófoba central de polioxipropileno(poli(óxido de propileno)) flanqueada por dos cadenas hidrófilas de porioxietileno (poli(óxido de etileno)) o pOly So RBATE® 80 (PEG(80)monolaurato de sorbitán), para prevenir la agregación y mejorar la estabilidad. Las concentraciones de anticuerpos indicadas formuladas como se ha descrito anteriormente son típicamente de hasta aproximadamente 100 mg/ml (Wang et al., J. Pharm, Sci. 96:1-26, 2007).

La Patente de Estados Unidos N° 7.758.860 describe la reducción de la viscosidad en formulaciones de proteínas de bajo peso molecular usando un tampón y una sal inorgánica reductora de la viscosidad, como cloruro de calcio o cloruro de magnesio. Estas mismas sales, sin embargo, mostraron poco efecto sobre la viscosidad de una formulación de anticuerpos de alto peso molecular (IMA-638). Como se describe en la Patente de Estados Unidos N° 7.666.413, la viscosidad de las formulaciones acuosas de proteínas de alto peso molecular se ha reducido mediante la adición de sales como clorhidrato de arginina, tiocianato de sodio, tiocianato de amonio, sulfato de amonio, cloruro de amonio, cloruro de calcio, cloruro de zinc, o acetato de sodio en una concentración de más de aproximadamente 100 mM o, como se describe en la Patente de Estados Unidos N° 7.740.842, mediante la adición de ácidos orgánicos o inorgánicos. Sin embargo, estas sales no reducen la viscosidad a un nivel deseado y en algunos casos hacen que la formulación sea tan ácida que es probable que provoque dolor en el sitio de inyección.

La Patente de Estados Unidos N° 7.666.413 describe formulaciones de viscosidad reducida que contienen sales específicas y un mAb anti-IgE reconstituido, pero con una concentración máxima de anticuerpos de sólo hasta aproximadamente 140 mg/ml. La Patente de Estados Unidos N° 7.740.842 describe formulaciones de mAb anti-IgE E25 que contienen tampón de acetato/ácido acético con concentraciones de anticuerpos de hasta 257 mg/ml. Se demostró que la adición de sales como NaCl, CaCl2 o MgCl2 disminuye la viscosidad dinámica en condiciones de alto cizallamiento; sin embargo, a bajo cizallamiento, las sales produjeron un aumento drástico e indeseable de la viscosidad dinámica. Además, las sales inorgánicas como el NaCl pueden disminuir la viscosidad de la solución y/o disminuir la agregación (EP 1981824).

También se han descrito formulaciones de proteínas o anticuerpos no acuosas. La WO2006/071693 describe una suspensión no acuosa de hasta 100 mg/ml de mAb en una formulación que tiene un potenciador de la viscosidad (polivinilpirrolidona, PVP) y un solvente (benzoato de bencilo o PEG 400). La WO2004/089335 describe formulaciones de suspensión de lisozima no acuosa de 100 mg/ml que contienen PVP, glicofurol, benzoato de bencilo, alcohol bencílico o PEG 400. La US2008/0226689A1 describe formulaciones viscosas no acuosas de fase única de hormona del crecimiento humano (hGH) de tres componentes de vehículo (polímero, surfactante y un solvente) de 100 mg/ml. La Patente de Estados Unidos N° 6.730.328 describe vehículos no acuosos, hidrófobos, no polares de baja reactividad, como perfluorodecalina, para formulaciones de proteínas. Estas formulaciones no son óptimas y tienen altas viscosidades que perjudican el procesamiento, la fabricación y la inyección; llevan a la presencia de múltiples componentes del vehículo en las formulaciones; y presentan desafíos reguladores potenciales asociados con el uso de polímeros que todavía no se han aprobado por la FDA.

Se han descrito formulaciones de proteínas o anticuerpos no acuosas alternativas que usan solventes orgánicos, como benzoato de bencilo (Miller et al., Langmuir 26:1067-1074, 2010), acetato de bencilo, etanol o metiletilcetona (Srinivasan et al, Pharm. Res. 30:1749-1757, 2013). En ambos casos, se lograron viscosidades de menos de 50 mPA.s (50 centipoises (cP)) tras la formulación a concentraciones de proteínas de por lo menos aproximadamente 200 mg/ml. La Patente de Estados Unidos N° 6.252.055 describe formulaciones de mAb con concentraciones que varían de 100 mg/ml a 257 mg/ml. Las formulaciones con concentraciones mayores de aproximadamente 189 mg/ml demostraron viscosidades radicalmente aumentadas, bajas tasas de recuperación y dificultad en el procesamiento. La Publicación de Solicitud de Patente de Estados Unidos 2012/0230982 describe formulaciones de anticuerpos con concentraciones de 100 mg/ml a 200 mg/ml. Ninguna de estas formulaciones tiene una viscosidad lo suficientemente baja para facilitar la inyección.

Du y Klibanov (Biotechnology and Bioengineering 108:632-636, 2011) describieron una viscosidad reducida de soluciones acuosas concentradas de albúmina de suero bovino con una concentración máxima de hasta 400 mg/ml y gammaglobulina bovina con una concentración máxima de hasta 300 mg/ml. Guo et al. (Pharmaceutical Research 29:3102-3109, 2012) describió soluciones acuosas de baja viscosidad de cuatro mAb modelo logradas usando sales hidrófobas. La formulación de mAb empleada por Guo tenía una viscosidad inicial, antes de añadir sales, no mayor de 73 mPa.s (73 cP). Las viscosidades de muchos mAb farmacéuticamente importantes, por otro lado, pueden superar los 1000 mPA.s (1000 cP) a concentraciones terapéuticamente relevantes.

No es un asunto trivial controlar la agregación y la viscosidad en soluciones de mAb de alta concentración (EP 2538973). Esto se evidencia en los pocos productos de mAb actualmente en el mercado como formulaciones de alta concentración (>100 mg/ml) (EP 2538973).

Las referencias citadas anteriormente demuestran que aunque muchos grupos han intentado preparar formulaciones de mAb de baja viscosidad y otras proteínas terapéuticamente importantes, todavía no se ha logrado una formulación verdaderamente útil para muchas proteínas. En particular, muchos de los informes anteriores emplean agentes para los que no se han establecido completamente perfiles de seguridad y toxicidad. Por lo tanto, estas formulaciones se enfrentan a una carga regulatoria más alta antes de la aprobación que las formulaciones que contienen compuestos que se sabe que son seguros. De hecho, incluso si se demostrase que un compuesto reduce sustancialmente la viscosidad, el compuesto puede ser finalmente inadecuado para su uso en una formulación pretendida para inyección en un humano.

Muchas proteínas de alto peso molecular farmacéuticamente importantes, como los mAb, se administran actualmente mediante infusiones IV para administrar cantidades de proteína terapéuticamente eficaces debido a problemas de alta viscosidad y otras propiedades de soluciones concentradas de proteínas grandes. Por ejemplo, para proporcionar una cantidad terapéuticamente eficaz de muchas proteínas de alto peso molecular, como los mAb, en volúmenes de menos de aproximadamente 2 ml, se requieren a menudo concentraciones de proteínas mayores de 150 mg/ml.

Es, por tanto, un objeto de la presente invención proporcionar formulaciones líquidas de baja viscosidad concentradas de proteínas farmacéuticamente importantes, especialmente proteínas de alto peso molecular, como los mAb.

Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar formulaciones líquidas de baja viscosidad concentradas de proteínas, especialmente proteínas de alto peso molecular, como los mAb, capaces de administrar cantidades terapéuticamente eficaces de estas proteínas en volúmenes útiles para inyecciones SC e IM.

Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar formulaciones líquidas concentradas de proteínas, especialmente proteínas de alto peso molecular, como los mAb, con viscosidades bajas que pueden mejorar la capacidad de inyección y/o el cumplimiento, conveniencia y comodidad del paciente.

También es un objeto de la presente invención proporcionar métodos para elaborar y almacenar formulaciones de baja viscosidad concentradas de proteínas, especialmente proteínas de alto peso molecular, como los mAb.

También se describen en la presente métodos para administrar formulaciones líquidas concentradas de baja viscosidad de proteínas, especialmente proteínas de alto peso molecular, como los mAb.

Es un objeto adicional de la presente invención proporcionar métodos para procesar productos biológicos de viscosidad reducida y alta concentración con técnicas de concentración y filtración conocidas por los expertos en la técnica.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Un primer aspecto de la invención es una formulación farmacéutica líquida para inyección que comprende: (i) por lo menos 100 mg/ml de un anticuerpo;

(ii) procaína o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(iii) un solvente farmacéuticamente aceptable;

en donde la formulación farmacéutica líquida, cuando está en un volumen adecuado para inyección:

(a) tiene una viscosidad absoluta de 1 mPa.s (1 cP) a 100 mPa.s (100 cP) a 25° C como se mide usando un viscosímetro de cono y plato o un viscosímetro microfluídico; y

(b) la viscosidad absoluta de la formulación farmacéutica líquida es menor que una viscosidad absoluta de una composición de control que comprende el anticuerpo y el solvente farmacéuticamente aceptable pero sin la procaína o la sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

en donde la viscosidad absoluta es una viscosidad de cizallamiento cero extrapolada.

En una realización, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

En una realización, el anticuerpo tiene un peso molecular de 120 kDa a 250 kDa.

En una realización, el solvente farmacéuticamente aceptable es acuoso.

En una realización, la formulación farmacéutica líquida comprende además uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, el uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables comprendiendo un azúcar, alcohol de azúcar, agente de tamponamiento, conservante, portador, antioxidante, agente quelante, polímero natural, polímero sintético, crioprotector. lioprotector, surfactante, agente de carga, agente estabilizante, o cualquier combinación de los mismos.

En una realización, el alcohol de azúcar es sorbitol o manitol.

En una realización, el uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables comprenden un polisorbato, poloxámero 188, lauril sulfato de sodio, un poliol, un poli(etilenglicol), glicerol, un propilenglicol o un poli(alcohol vinílico).

En una realización, la formulación farmacéutica líquida se proporciona en un vial de dosis unitaria, vial de múltiples dosis, cartucho o jeringuilla precargada.

En una realización, la formulación farmacéutica líquida es isotónica al suero sanguíneo humano.

En una realización, la viscosidad absoluta se mide a una tasa de cizallamiento de por lo menos 0,5 s-1 cuando se mide usando un viscosímetro de cono y placa o una tasa de cizallamiento de por lo menos 1,0 s-1 cuando se mide usando un viscosímetro microfluídico.

En una realización, la formulación farmacéutica líquida se reconstituye a partir de una composición liofilizada.

Un segundo aspecto de la invención es una formulación farmacéutica líquida del primer aspecto para su uso en un método de administración mediante inyección subcutánea o intramuscular.

En una realización, la formulación farmacéutica líquida produce un índice de irritación primaria de menos de 3 cuando se evalúa usando un sistema de puntuación de Draize.

En una realización, la fuerza de inyección es por lo menos un 10% menor que la fuerza de inyección para una composición de control, la composición de control comprendiendo el anticuerpo y el solvente farmacéuticamente aceptable, pero sin la procaína.

En una realización, la fuerza de inyección es por lo menos un 20% menor que la fuerza de inyección para una composición de control, la composición de control comprendiendo el anticuerpo y el solvente farmacéuticamente aceptable, pero sin la procaína o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

En una realización, la inyección se administra con una aguja con un calibre de entre 27 y 31 de diámetro. En una realización, la fuerza de inyección es inferior a 30 N con una aguja de calibre 27.

En una realización, la inyección subcutánea o intramuscular se realiza con una jeringuilla calentada, una jeringuilla de automezclado, un autoinyector, una jeringuilla precargada, o combinaciones de los mismos.

En una realización, el volumen de la formulación farmacéutica líquida es igual o menor a 1,5 ml para inyección subcutánea, o igual o menor a 3 ml para inyección intramuscular.

Un tercer aspecto de la invención es un método para preparar una formulación farmacéutica líquida del primer aspecto que comprende el paso de combinar el anticuerpo, el solvente farmacéuticamente aceptable y la procaína o la sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

Un cuarto aspecto de la invención es una composición liofilizada que comprende

(i) un anticuerpo;

(ii) procaína o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(iii) un excipiente farmacéuticamente aceptable.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Se han desarrollado formulaciones farmacéuticas líquidas, de bajo volumen, baja viscosidad, concentradas de proteínas. Tales formulaciones pueden administrarse rápida y convenientemente mediante inyección subcutánea o intramuscular, en lugar de mediante infusión intravenosa prolongada. Las formulaciones de la invención como se describe en las reivindicaciones adjuntas incluyen proteínas de alto peso molecular, como mAb, y agentes reductores de la viscosidad, que son típicamente compuestos orgánicos polares voluminosos, como muchos de los GRAS (lista de compuestos de la US Food and Drug Administration considerados generalmente como seguros), ingredientes inyectables inactivos y agentes terapéuticos aprobados por la FDA.

En algunas realizaciones de la divulgación, la concentración de proteínas está entre 100 mg/ml y aproximadamente 5000 mg/ml. En algunas composiciones de la invención, la concentración de proteínas es preferiblemente de aproximadamente 100 mg/ml a aproximadamente 2000 mg/ml. En algunas realizaciones, la concentración de proteínas está entre aproximadamente 100 mg/ml y aproximadamente 500 mg/ml, más preferiblemente entre aproximadamente 300 mg/ml y aproximadamente 500 mg/ml. Las formulaciones que contienen proteínas y agentes reductores de la viscosidad son estables cuando se almacenan a una temperatura de 4° C, durante un período de por lo menos un mes, preferiblemente por lo menos dos meses y lo más preferible por lo menos tres meses. La viscosidad de la formulación está por debajo de 50 mPa.s (50 cP), y lo más preferible por debajo de 20 mPa.s (20 cP) a aproximadamente 25° C. En algunas realizaciones, la viscosidad es menor de aproximadamente 15 mPa.s (15 cP) o incluso menos de o aproximadamente 10 mPa.s (10 cP) a aproximadamente 25° C. En ciertas realizaciones, la viscosidad de la formulación es de aproximadamente 10 mPa.s (10 cP). Las formulaciones que contienen proteínas y agentes reductores de la viscosidad se miden típicamente a tasas de cizallamiento de aproximadamente 0,6 s-1 a aproximadamente 450 s-1, y preferiblemente de aproximadamente 2 s-1 a aproximadamente 400s-1, cuando se mide usando un viscosímetro de cono y placa. Las formulaciones que contienen proteínas y agentes reductores de la viscosidad se miden típicamente a tasas de cizallamiento de aproximadamente 3 s-1 a aproximadamente 55000 s-1, y preferiblemente de aproximadamente 20 s-1 a aproximadamente 2000 s-1, cuando se miden usando un viscosímetro microfluídico.

La viscosidad de la formulación de proteínas se reduce por la presencia de uno o más agentes reductores de la viscosidad. A menos que se indique específicamente lo contrario, el término "agente reductor de la viscosidad" incluye tanto compuestos individuales como mezclas de dos o más compuestos. Se prefiere que el agente reductor de la viscosidad esté presente en la formulación a una concentración menor de aproximadamente 1,0 M, preferiblemente menor de aproximadamente 0,50 M, más preferiblemente menor de aproximadamente 0,30 M y lo más preferible menor de aproximadamente 0,15 M. En algunas realizaciones, el agente reductor de la viscosidad está presente en la formulación en concentraciones tan bajas como 0,01 M. Las formulaciones pueden tener una viscosidad que sea por lo menos aproximadamente un 30% menor, preferiblemente por lo menos aproximadamente un 50% menor, lo más preferible por lo menos aproximadamente un 75% menor, que la viscosidad de la formulación correspondiente en las mismas condiciones excepto por la sustitución del agente reductor de la viscosidad por un tampón o sal apropiado de aproximadamente la misma concentración. En algunas realizaciones, se proporciona una formulación de baja viscosidad en donde la viscosidad de la formulación correspondiente sin el agente reductor de la viscosidad es superior a aproximadamente 200 mPa.s (200 cP), superior a aproximadamente 500 mPa.s (500 cP), o incluso superior a aproximadamente 1000 mPa.s (1000 cP). En una realización preferida, la tasa de cizallamiento de la formulación es de por lo menos aproximadamente 0,5 s-1, cuando se mide usando un viscosímetro de cono y placa o de por lo menos aproximadamente 1,0 s-1, cuando se mide usando un viscosímetro microfluídico.

Para realizaciones en las que la proteína es una "proteína de alto peso molecular", la "proteína de alto peso molecular" puede tener un peso molecular entre aproximadamente 100 kDa y aproximadamente 1000 kDa, preferiblemente entre aproximadamente 120 kDa y aproximadamente 500 kDa, y lo más preferible entre aproximadamente 120 kDa y aproximadamente 250 kDa. La proteína de alto peso molecular es un anticuerpo, como un mAb, o una forma PEGilada o derivatizada de otro modo del mismo. Los mAb preferidos incluyen natalizumab (TYSABRI®), cetuximab (ERBITUX®), bevacizumab (AVASTIN®), trastuzumab (HERCEPTIN®), infliximab (REMICADE®), rituximab (RiTUXAN®), panitumumab (v EcTIBIX®), ofatumumab (ARZERRA®) y biosimilares de los mismos. También se divulgan, pero no forman parte de la invención, formulaciones en donde la proteína de alto peso molecular, opcionalmente PEGilada, puede ser una enzima. También se divulga, pero no forma parte de la invención, que otras proteínas y mezclas de proteínas también pueden formularse para reducir su viscosidad.

En algunas realizaciones, la proteína y el agente reductor de la viscosidad se proporcionan en una unidad de dosificación liofilizada, dimensionada para la reconstitución con un vehículo acuoso estéril farmacéuticamente aceptable, para producir las formulaciones líquidas de baja viscosidad concentradas. La presencia de los agentes reductores de la viscosidad facilita y/o acelera la reconstitución de la unidad de dosificación liofilizada en comparación con una unidad de dosificación liofilizada que no contiene un agente reductor de la viscosidad.

En la presente se proporcionan métodos para preparar formulaciones líquidas de baja viscosidad concentradas de proteínas de alto peso molecular como mAb, así como métodos para almacenar las formulaciones de proteínas de baja viscosidad y alta concentración y para la administración de las mismas a pacientes. En otra realización, el agente reductor de la viscosidad se añade para facilitar el procesamiento (por ejemplo, bombeo, concentración y/o filtración) reduciendo la viscosidad de las soluciones de proteínas

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La Figura 1 representa la viscosidad en mPa.s (cP) en función de la concentración de proteína (en mg/ml) para soluciones de cetuximab biosimilar (ERBITUX®) en tampón de fosfato 0,25 M (PB; diamantes) y una solución que contiene 0,25 M de L-lisina de ácido canforsulfónico (CSAL; cuadrados) a 25° C y pH final de 7,0. Los puntos de datos incorporan desviaciones estándar que, sin embargo, suelen ser más pequeñas que los símbolos.

La Figura 2 representa la viscosidad en mPa.s (cP)en función de la concentración de proteína (en mg/ml) para soluciones de bevacizumab biosimilar (AVASTlN®) en tampón fosfato 0,25 M (PB; diamantes) y CSAL 0,25 M (cuadrados) a 25° C y pH final de 7,0. Los puntos de datos incorporan desviaciones estándar que, sin embargo, suelen ser más pequeñas que los símbolos.

La Figura 3 es un gráfico de la viscosidad (mPa.s (cP)) de soluciones acuosas de 200 ± 9 mg/ml de bevacizumab biosimilar (AVASTIN®) como una función del pH a lo largo del eje x que contiene o un tampón de fosfato-citrato o arginina ácido canforsulfónico (CSAA) a una concentración de 0,25 M.

La Figura 4 es un gráfico de barras que compara las veces de reducción de la viscosidad en función del pH para soluciones acuosas que contienen bevacizumab biosimilar (AVASTIN®; a aproximadamente 200 mg/ml o 226 mg/ml) y 0,25 M de arginina ácido canforsulfónico (CSAA). Las veces de reducción se calculan como la relación de la viscosidad (mPa.s (cP)) en tampón de fosfato-citrato con la viscosidad (mPa.s (cP)) en la solución de CSAA 0,25 M.

La Figura 5 es un gráfico de la viscosidad (mPa.s (cP)) de soluciones acuosas de cetuximab biosimilar (ERBITUX®; a 202 ± 5 mg/ml, 229 ± 5 mg ml, o 253 ± 4 mg/ml) que contiene CSAA 0,25 M en función del pH a lo largo del eje x a 25° C.

La Figura 6 es una traza de cromatografía de exclusión por tamaño que representa la intensidad de absorbancia (a 280 nm) en función del tiempo de elución (en minutos) para una solución acuosa de 220 mg/ml de REMICADE® almacenada a 4° C durante un máximo de 100 días, en comparación con el producto farmacéutico comercial recién reconstituido.

La Figura 7 muestra la viscosidad (mPa.s (cP)) en función de la concentración de proteínas (mg/ml) de soluciones acuosas de bevacizumab biosimilar (AVASTIN®) en tampón de fosfato 0,25 M, APMI*2HCl ((l-(3 aminopropil)-2-metil-1H-imidazol bis-HCl) 0,10 M o 0,25 M.

La Figura 8 representa la viscosidad (APMI*2HCl) en función de la concentración de proteínas (mg/ml) de soluciones acuosas de bevacizumab biosimilar (AVASTIN®) en tampón de fosfato 0,25 M, pirofosfato de tiamina (TPP) 0,10 M, o TPP1-(3-aminopropil)-2-metil-1H-imidazol (A^pMI) 0,10 M.

La Figura 9 representa la viscosidad (mPa.s (cP)) de soluciones acuosas de golimumab (SIMPONI ARIA®) en función de la concentración de proteínas (mg/ml) con tampón de fosfato 0,15 M o tiamina HCl 0,15 M.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

I. DEFINICIONES

El término "proteína", como se usa de manera general en la presente, se refiere a un polímero de aminoácidos enlazados entre sí por enlaces peptídicos para formar un polipéptido para el que la longitud de la cadena es suficiente para producir por lo menos una estructura terciaria detectable. Las proteínas que tienen un peso molecular (expresado en kDa donde "Da" significa "Daltons" y 1 kDa = 1000 Da) mayor de aproximadamente 100 kDa pueden designarse "proteínas de alto peso molecular", mientras que las proteínas que tienen un peso molecular menor de aproximadamente 100 kDa pueden designarse "proteínas de bajo peso molecular". El término "proteína de bajo peso molecular" excluye los péptidos pequeños que carecen del requisito de por lo menos la estructura terciaria necesaria para ser considerados una proteína. El peso molecular de las proteínas puede determinarse usando métodos estándar conocidos por un experto en la técnica, incluyendo, pero no limitados a, espectrometría de masas (por ejemplo, ESI, MALDI) o cálculo a partir de secuencias de aminoácidos conocidas y glicosilación. Las proteínas pueden ser de origen natural o no natural, sintéticas o semisintéticas.

"Proteínas esencialmente puras" y "proteínas sustancialmente puras" se usan indistintamente en la presente y se refieren a una composición que comprende por lo menos aproximadamente un 90% en peso de proteína pura, preferiblemente por lo menos aproximadamente un 95% de proteína pura en peso. "Esencialmente homogéneo" y "sustancialmente homogéneo" se usan indistintamente en la presente y se refieren a una composición en la que por lo menos aproximadamente el 90% en peso de la proteína presente es una combinación del monómero y asociados di- y oligoméricos reversibles (no agregados irreversibles), preferiblemente por lo menos aproximadamente el 95%.

El término "anticuerpo monoclonal" o "mAb", como se usa de manera general en la presente, se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos, excepto por posibles mutaciones de origen natural que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, estadno dirigidos contra un único epítopo. Estos se sintetizan típicamente cultivando células de hibridoma, como se describe por Kohler et al. (Nature 256: 495, 1975), o pueden elaborarse mediante métodos de ADN recombinante (ver, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos N° 4.816.567), o aislarse de bibliotecas de anticuerpos de fagos usando las técnicas descritas en Clackson et al. (Nature 352:624-628, 1991) y Marks et al. (J Mol. Biol. 222: 581-597, 1991), por ejemplo. Como se usa en la presente, los "mAb" incluyen específicamente anticuerpos derivatizados, conjugados de anticuerpo-fármaco, y anticuerpos “quiméricos” en los que una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica a u homóloga a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de especies particulares o que pertenecen a una clase o subclase particular de anticuerpos, mientras que el resto de las cadenas son idénticas u homólogas a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de otra especie o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpo, así como fragmentos de tales anticuerpos, siempre que muestren la actividad biológica deseada (Patente de Estados Unidos N° 4.816.567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855, 1984).

Un "fragmento de anticuerpo" comprende una porción de un anticuerpo intacto, que incluye la región de unión al antígeno y/o la variable del anticuerpo intacto. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales (ver la Patente de Estados Unidos N° 5.641.870; Zapata et al., Protein Eng, 8:1057-1062, 1995); moléculas de anticuerpos de cadena sencilla; anticuerpos de dominio único multivalentes; y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.

Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) son inmunoglobulinas quiméricas, cadenas de inmunoglobulinas o fragmentos de los mismos (como Fv, Fab, Fab', F(ab')2 u otras subsecuencias de unión a antígenos de anticuerpos) de secuencias mayoritariamente humanas, que contienen secuencias mínimas derivadas de inmunoglobulina no humana. (Ver, por ejemplo, Jones et al., Nature 321:522-525, 1986; Reichmann et al., Nature 332:323-329, 1988; y Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596, 1992).

"Reología" se refiere al estudio de la deformación y el flujo de la materia.

"Viscosidad" se refiere a la resistencia de una sustancia (típicamente un líquido) a fluir. La viscosidad está relacionada con el concepto de fuerza de cizallamiento; puede entenderse como el efecto de diferentes capas del fluido que ejercen una fuerza de cizallamiento unas sobre otras, o sobre otras superficies, a medida que se mueven unas contra otras. Hay varias medidas de viscosidad. Las unidades de viscosidad son Ns/m2, conocidas como Pascal-segundos (Pa-s). La viscosidad puede ser "cinemática" o "absoluta". La viscosidad cinemática es una medida de la tasa a la que se transfiere el impulso a través de un fluido. Se mide en Stokes (St). La viscosidad cinemática es una medida del flujo resistivo de un fluido bajo la influencia de la gravedad. Cuando dos fluidos de igual volumen y diferente viscosidad se colocan en viscosímetros capilares idénticos y se les permite fluir por gravedad, el fluido más viscoso tarda más que el fluido menos viscoso en fluir a través del capilar. Si, por ejemplo, un fluido tarda 200 segundos (s) en completar su flujo y otro fluido tarda 400 s, al segundo fluido se le denomina dos veces más viscoso que el primero en una escala de viscosidad cinemática. La dimensión de la viscosidad cinemática es la longitud2/tiempo. Comúnmente, la viscosidad cinemática se expresa en centiStokes (cSt). La unidad SI de viscosidad cinemática es mm2/s, que es igual a 1 cSt. La "viscosidad absoluta", a veces llamada "viscosidad dinámica" o "viscosidad simple", es el producto de la viscosidad cinemática y la densidad del fluido. La viscosidad absoluta se expresa en unidades de centipoise (cP). La unidad SI de viscosidad absoluta es el miliPascal-segundo (mPa.s), donde 1 cP = 1 mPa.s.

La viscosidad puede medirse usando, por ejemplo, un viscosímetro a una tasa de cizallamiento dada o tasas de cizallamiento múltiples. Puede determinarse una viscosidad de "cizallamiento cero extrapolada" creando una línea de mejor ajuste de los cuatro puntos de cizallamiento más altos en un gráfico de viscosidad absoluta frente a la tasa de cizallamiento, y extrapolando linealmente la viscosidad de nuevo a cizallamiento cero. Alternativamente, para un fluido newtoniano, la viscosidad puede determinarse promediando los valores de viscosidad a múltiples tasas de cizallamiento. La viscosidad también puede medirse usando un viscosímetro microfluídico a tasas de cizallamiento únicas o múltiples (también denominadas tasas de flujo), en donde la viscosidad absoluta se deriva de un cambio en la presión cuando un líquido fluye a través de un canal. La viscosidad es igual al esfuerzo de cizalla sobre la tasa de cizallamiento. Las viscosidades medidas con viscosímetros microfluídicos pueden, en algunas realizaciones, compararse directamente con viscosidades de cizallamiento cero extrapoladas, por ejemplo, aquellas extrapoladas de viscosidades medidas a múltiples tasas de cizallamiento usando un viscosímetro de cono y placa.

"Tasa de cizallamiento" se refiere a la tasa de cambio de velocidad a la que una capa de fluido pasa sobre una capa adyacente. El gradiente de velocidad es la tasa de cambio de velocidad con la distancia desde las placas. Este caso simple muestra el gradiente de velocidad uniforme con tasa de cizallamiento (v1-v2)/h en unidades de (cm/seg)/(cm)=1/seg. Por tanto, las unidades de tasa de cizallamiento son segundos recíprocos o, en general, tiempo recíproco. Para un viscosímetro microfluídico, el cambio en la presión y el caudal están relacionados con la tasa de cizallamiento. "Tasa de cizallamiento" es la velocidad con la que se deforma un material. Las formulaciones que contienen proteínas y agentes reductores de la viscosidad se miden típicamente a tasas de cizallamiento que oscilan entre aproximadamente 0,5 s-1 y aproximadamente 200 s-1 cuando se mide usando un viscosímetro de cono y placa y un husillo apropiadamente elegidos por un experto en la técnica para medir con precisión las viscosidades en el intervalo de viscosidad de la muestra de interés (es decir, una muestra de 20 mPa.s (20 cP) se mide con mayor precisión en un husillo CPE40 fijado a un viscosímetro DV2T (Brookfield)); más de aproximadamente 20 s-1 a aproximadamente 3000 s-1 cuando se mide usando un viscosímetro microfluídico.

Para los fluidos "newtonianos" clásicos, como se usan de manera general en la presente, la viscosidad es esencialmente independiente de la tasa de cizallamiento. Para los "fluidos no newtonianos", sin embargo, la viscosidad o disminuye o aumenta al aumentar la tasa de cizallamiento, por ejemplo, los fluidos son "adelgazamiento por cizallamiento" o "espesamiento por cizallamiento", respectivamente. En el caso de soluciones de proteína concentradas (es decir, de alta concentración), esto puede manifestarse como un comportamiento de adelgazamiento por cizallamiento pseudoplástico, es decir, una disminución de la viscosidad con la tasa de cizallamiento.

El término "estabilidad química", como se usa de manera general en la presente, se refiere a la capacidad de los componentes de las proteínas en una formulación para resistir la degradación a través de rutas químicas, como oxidación, desamidación o hidrólisis. Una formulación de proteínas se considera típicamente químicamente estable si menos de aproximadamente el 5% de los componentes se degradan después de 24 meses a 4° C.

El término "estabilidad física", como se usa de manera general en la presente, se refiere a la capacidad de una formulación de proteínas de resistir el deterioro físico, como la agregación. Una formulación que es físicamente estable forma solo un porcentaje aceptable de agregados irreversibles (por ejemplo, dímeros, trímeros, u otros agregados) del agente de proteína bioactivo. La presencia de agregados puede evaluarse de varias maneras, incluyendo midiendo el tamaño de partícula medio de las proteínas en la formulación por medio de la dispersión dinámica de luz. Una formulación se considera físicamente estable si se forman menos de aproximadamente un 5% de agregados irreversibles después de 24 meses a 4° C. Los niveles aceptables de contaminantes agregados idealmente serían menos de aproximadamente el 2%. Pueden alcanzarse niveles tan bajos como aproximadamente el 0,2%, aunque es más típico aproximadamente el 1%.

El término "formulación estable", como se usa de manera general en la presente, significa que una formulación es tanto químicamente estable como físicamente estable. Una formulación estable puede ser una en la que más de aproximadamente el 95% de las moléculas de proteína bioactiva retienen la bioactividad en una formulación después de 24 meses de almacenamiento a 4° C, o condiciones de solución equivalentes a una temperatura elevada, como un mes de almacenamiento a 40° C. Varias técnicas analíticas para medir la estabilidad de proteínas están disponibles en la técnica y se revisan, por ejemplo, en Peptide and Protein Drug Delivery, 247­ 301, Vincent Lee, Ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, N.Y. (1991) y Jones, A., Adv. Drug Delivery Revs. 10:29-90, 1993. La estabilidad puede medirse a una temperatura seleccionada durante un cierto período de tiempo. Para una selección rápida, por ejemplo, la formulación puede mantenerse a 40° C, durante de 2 semanas a un mes, momento en el que se mide la actividad biológica residual y se compara con la condición inicial para evaluar la estabilidad. Cuando la formulación se va a almacenar a 2° C -8° C, generalmente la formulación debe ser estable a 30° C o 40° C durante por lo menos un mes y/o estable a 2° C -8° C durante por lo menos 2 años. Cuando la formulación se va a almacenar a temperatura ambiente, aproximadamente 25° C, generalmente la formulación debe ser estable durante por lo menos 2 años a aproximadamente 25° C y/o estable a 40° C durante por lo menos aproximadamente 6 meses. El grado de agregación después de la liofilización y el almacenamiento puede usarse como indicador de la estabilidad de la proteína. En algunas realizaciones, la estabilidad se evalúa midiendo el tamaño de partícula de las proteínas en la formulación. En algunas realizaciones, la estabilidad puede evaluarse midiendo la actividad de una formulación usando ensayos de unión o de actividad biológica estándar que están dentro de las capacidades del experto en la técnica.

El término "tamaño de partícula" de proteína, como se usa de manera general en la presente, significa el diámetro medio de la población predominante de particulados de moléculas bioactivas, o distribuciones de tamaño de partículas de los mismos, en una formulación como se determina usando instrumentos de dimensionamiento de partículas bien conocidos, por ejemplo, dispersión dinámica de luz, SEC (cromatografía de exclusión por tamaño) u otros métodos conocidos por los expertos en la técnica.

El término "concentrado" o "alta concentración", como se usa de manera general en la presente, describe formulaciones líquidas que tienen una concentración final de proteína de más de aproximadamente 10 mg/ml, preferiblemente de más de aproximadamente 50 mg/ml, más preferiblemente de más de aproximadamente 100 mg./ml, aún más preferiblemente de más de aproximadamente 200 mg/ml, o lo más preferible de más de aproximadamente 250 mg/ml.

Una "formulación reconstituida", como se usa de manera general en la presente, se refiere a una formulación que se ha preparado disolviendo una proteína en polvo seco, liofilizada, secada por aspersión o precipitada con solvente en un diluyente, de tal manera que la proteína se disuelve o dispersa en una solución acuosa para su administración.

Un "lioprotector" es una sustancia que, cuando se combina con una proteína, reduce significativamente la inestabilidad química y/o física de la proteína tras la liofilización y/o el almacenamiento posterior. Los lioprotectores ejemplares incluyen azúcares y sus alcoholes de azúcar correspondientes como sacarosa, lactosa, trehalosa, dextrano, eritritol, arabitol, xilitol, sorbitol y manitol; aminoácidos, como arginina o histidina; sales liotrópicas como sulfato de magnesio; polioles como propilenglicol, glicerol, poli(etilenglicol) o poli(propilenglicol); y combinaciones de los mismos. Lioprotectores ejemplares adicionales incluyen gelatina, dextrinas, almidón modificado y carboximetilcelulosa. Los alcoholes de azúcar preferidos son aquellos compuestos obtenidos por reducción de mono- y disacáridos, como lactosa, trehalosa, maltosa, lactulosa, y maltulosa. Ejemplos adicionales de alcoholes de azúcar son el glucitol, maltitol, lactitol e isomaltulosa. El lioprotector se añade generalmente a la formulación preliofilizada en una "cantidad lioprotectora". Esto significa que, tras la liofilización de la proteína en presencia de la cantidad lioprotectora del lioprotector, la proteína conserva esencialmente su estabilidad e integridad física y química.

Un "diluyente" o "portador", como se usa de manera general en la presente, es un ingrediente farmacéuticamente aceptable (es decir, seguro y no tóxico para la administración a un humano u otro mamífero) y un ingrediente útil para la preparación de una formulación líquida, como una formulación acuosa reconstituida después de la liofilización. Los diluyentes ejemplares incluyen agua estéril, agua bacteriostática para inyección (BWFI), una solución tamponada de pH (por ejemplo, solución salina tamponada con fosfato), solución salina estéril, solución de Ringer o solución de dextrosa, y combinaciones de los mismos.

Un "conservante" es un compuesto que puede añadirse a las formulaciones de la presente para reducir la contaminación y/o la acción de bacterias, hongos u otro agente infeccioso. La adición de un conservante puede, por ejemplo, facilitar la producción de una formulación de múltiples usos (múltiples dosis). Ejemplos de conservantes potenciales incluyen cloruro de octadecildimetilbencilamonio, cloruro de hexametonio, cloruro de benzalconio (una mezcla de cloruros de alquilbencildimetilamonio en la que los grupos alquilo son de cadena larga) y cloruro de bencetonio. Otros tipos de conservantes incluyen alcoholes aromáticos como fenol, alcohol butílico y bencílico, alquilparabenos como metil o propilparabeno, catecol, resorcinol, ciclohexanol, 3-pentanol y m-cresol.

Un "agente de carga", como se usa de manera general en la presente, es un compuesto que añade masa a una mezcla liofilizada y contribuye a la estructura física de la torta liofilizada (por ejemplo, facilita la producción de una torta liofilizada esencialmente uniforme que mantiene una estructura de poro abierto). Los agentes de carga ejemplares incluyen manitol, glicina, lactosa, almidón modificado, poli(etilenglicol) y sorbitol.

Una "cantidad terapéuticamente eficaz" es la concentración más baja requerida para efectuar una mejora o prevención medible de cualquier síntoma de una afección o trastorno particular, para efectuar una mejora medible de la esperanza de vida, o para mejorar en general la calidad de vida del paciente. La cantidad terapéuticamente eficaz depende de la molécula biológicamente activa específica y de la afección o trastorno específico a tratar. Las cantidades terapéuticamente eficaces de muchas proteínas, como los mAb descritos en la presente, son bien conocidas en la técnica. Las cantidades terapéuticamente eficaces de proteínas aún no establecidas o para el tratamiento de trastornos específicos con proteínas conocidas, como mAb, que se aplicarán clínicamente para tratar trastornos adicionales pueden determinarse mediante técnicas estándar que están dentro de la capacidad de un experto en la técnica, como un médico.

El término "capacidad de inyección" o "capacidad de jeringuilla", como se usa de manera general en la presente, se refiere al rendimiento de la inyección de una formulación farmacéutica a través de una jeringuilla equipada con una aguja de calibre 18-32, opcionalmente de pared delgada. La capacidad de inyección depende de factores como la presión o la fuerza requerida para la inyección, la uniformidad del flujo, las cualidades de aspiración y la ausencia de obstrucciones. La capacidad de inyección de las formulaciones farmacéuticas líquidas puede evaluarse comparando la fuerza de inyección de una formulación de viscosidad reducida con una formulación estándar sin agentes reductores de viscosidad añadidos. La reducción en la fuerza de inyección de la formulación que contiene un agente reductor de la viscosidad refleja una capacidad de inyección mejorada de esa formulación. Las formulaciones de viscosidad reducida tienen una capacidad de inyección mejorada cuando la fuerza de inyección se reduce en por lo menos un 10%, preferiblemente en por lo menos un 30%, más preferiblemente en por lo menos un 50%, y lo más preferible en por lo menos un 75% en comparación con una formulación estándar que tiene la misma concentración de proteína en condiciones por lo demás iguales, excepto por el reemplazo del agente reductor de la viscosidad con un tampón apropiado de aproximadamente la misma concentración. Alternativamente, la capacidad de inyección de las formulaciones farmacéuticas líquidas puede evaluarse comparando el tiempo requerido para inyectar el mismo volumen, como 0,5 ml, o más preferiblemente aproximadamente 1 ml, de diferentes formulaciones de proteínas líquidas cuando se presiona la jeringuilla con la misma fuerza.

El término "fuerza de inyección", como se usa de manera general en la presente, se refiere a la fuerza requerida para empujar una formulación líquida dada a través de una determinada jeringuilla equipada con un calibre de aguja dado a una velocidad de inyección dada. La fuerza de inyección se expresa típicamente en Newtons. Por ejemplo, la fuerza de inyección puede medirse como la fuerza requerida para empujar una formulación líquida a través de una jeringuilla de plástico de 1 ml que tiene un diámetro interior de 6,4 mm (0,25 pulgadas), equipada con una aguja de calibre 27 de 13 mm (0,50 pulgadas) a una velocidad de inyección de 250 mm/min. Pueden usarse equipos de prueba para medir la fuerza de inyección. Cuando se mide en las mismas condiciones, una formulación con menor viscosidad requerirá generalmente una fuerza de inyección menor total.

El "gradiente de viscosidad", como se usa en la presente, se refiere a la tasa de cambio de la viscosidad de una solución de proteínas a medida que aumenta la concentración de proteínas. El gradiente de viscosidad puede aproximarse a partir de un gráfico de la viscosidad como una función de la concentración de proteínas para una serie de formulaciones que por lo demás son iguales pero tienen diferentes concentraciones de proteínas. La viscosidad aumenta aproximadamente exponencialmente cuando aumenta la concentración de proteínas. El gradiente de viscosidad a una concentración de proteínas específica puede aproximarse a partir de la pendiente de una línea tangente a la gráfica de viscosidad como una función de la concentración de proteínas. El gradiente de viscosidad puede aproximarse a partir de una aproximación lineal al gráfico de viscosidad como una función de cualquier concentración de proteínas o en una ventana estrecha de concentraciones de proteínas. En algunas realizaciones, se dice que una formulación tiene un gradiente de viscosidad disminuido si, cuando la viscosidad en función de la concentración de proteínas se aproxima como una función exponencial, el exponente de la función exponencial es menor que el exponente obtenido para la misma formulación por lo demás igual sin el agente reductor de la viscosidad. De manera similar, puede decirse que una formulación tiene un gradiente de viscosidad menor/mayor en comparación con una segunda formulación si el exponente de la formulación es menor/mayor que el exponente para la segunda formulación. El gradiente de viscosidad puede aproximarse numéricamente a partir de un gráfico de la viscosidad como una función de la concentración de proteínas mediante otros métodos conocidos por los investigadores expertos en formulación.

El término "formulación de viscosidad reducida", como se usa de manera general en la presente, se refiere a una formulación líquida que tiene una alta concentración de una proteína de alto peso molecular, como un mAb, o una proteína de bajo peso molecular que es modificada por la presencia de uno o más aditivos para disminuir la viscosidad, en comparación con una formulación correspondiente que no contiene el aditivo(s) reductor de la viscosidad.

El término "osmolaridad", como se usa de manera general en la presente, se refiere al número total de componentes disueltos por litro. La osmolaridad es similar a la molaridad pero incluye el número total de moles de especies disueltas en solución. Una osmolaridad de 1 Osm/l significa que hay 1 mol de componentes disueltos por l de solución. Algunos solutos, como los solutos iónicos que se disocian en solución, aportarán más de 1 mol de componentes disueltos por mol de soluto en la solución. Por ejemplo, el NaCl se disocia en Na+ y Cl- en solución y, por tanto, proporciona 2 moles de componentes disueltos por 1 mol de NaCl disuelto en solución. La osmolaridad fisiológica está típicamente en el intervalo de aproximadamente 280 mOsm/l a aproximadamente 310 mOsm/l.

El término "tonicidad", como se usa de manera general en la presente, se refiere al gradiente de presión osmótica resultante de la separación de dos soluciones por una membrana semipermeable. En particular, la tonicidad se usa para describir la presión osmótica creada a través de una membrana celular cuando se expone una célula a una solución externa. Los solutos que pueden atravesar la membrana celular no contribuyen al gradiente de presión osmótica final. Solo aquellas especies disueltas que no atraviesan la membrana celular contribuirán a las diferencias de presión osmótica y, por tanto, a la tonicidad.

El término "hipertónico", como se usa de manera general en la presente, se refiere a una solución con una concentración de solutos más alta que la presente en el interior de la célula. Cuando una célula se sumerge en una solución hipertónica, la tendencia es que fluya agua fuera de la célula para equilibrar la concentración de los solutos.

El término "hipotónico", como se usa de manera general en la presente, se refiere a una solución con una concentración de solutos más baja que la presente en el interior de la célula. Cuando una célula se sumerge en una solución hipotónica, el agua fluye hacia la célula para equilibrar la concentración de solutos.

El término "isotónico", como se usa de manera general en la presente, se refiere a una solución en la que el gradiente de presión osmótica a través de la membrana celular está esencialmente equilibrado. Una formulación isotónica es aquella que tiene esencialmente la misma presión osmótica que la sangre humana. Las formulaciones isotónicas tendrán generalmente una presión osmótica de aproximadamente 250 mOsm/kg a 350 mOsm/kg.

El término "formulación líquida", como se usa en la presente, es una proteína que se suministra en un diluyente farmacéutico aceptable o una que se reconstituye en un diluyente farmacéutico aceptable antes de la administración al paciente.

Los términos "de marca" y "referencia", cuando se usan para referirse a una proteína o un producto biológico, se usan indistintamente en la presente para referirse al producto biológico único con licencia según la sección 351(a) de la U.S. Public Health Service Act (42 U.S.C. § 262).

El término "biosimilar", como se usa en la presente, se usa de manera general indistintamente con "un equivalente genérico" o "subsiguiente". Por ejemplo, un "mAb biosimilar" se refiere a una versión posterior de un mAb del innovador elaborado típicamente por una empresa diferente. "Biosimilar" cuando se usa en referencia a una proteína de marca o producto biológico de marca puede referirse a un producto biológico evaluado frente a la proteína de marca o producto biológico de marca y con licencia bajo la sección 351 (k) de la U.S. Public Health Service Act (42 U.S.C. § 262). Un mAb biosimilar puede ser uno que satisfaga una o más pautas adoptadas el 30 de mayo de 2012 por el Comité de Productos Medicinales de Uso Humano (CHMP) de la Agencia Europea de Medicamentos y publicado por la Unión Europea como " Guideline on similar biological medicinal products containing monoclonal antibodies - nonclinical and clinical issues" (Referencia de Documento EMA/CHMP/BMWP/403543/2010).

Los biosimilares pueden ser producidos por células microbianas (procariotas, eucariotas), líneas celulares de origen humano o animal (por ejemplo, mamíferos, aves, insectos) o tejidos derivados de animales o plantas. El constructo de expresión para un producto biosimilar propuesto codificará generalmente la misma secuencia de aminoácidos primaria que su producto de referencia. Pueden estar presentes modificaciones menores, como truncamientos N- o C-terminales que no tendrán un efecto sobre la seguridad, pureza o potencia.

Un mAb biosimilar es similar al mAb de referencia fisicoquímica o biológicamente tanto en términos de seguridad como de eficacia. El mAb biosimilar puede evaluarse frente a un mAb de referencia usando uno o más estudios in vitro que incluyen ensayos que detallan la unión a antígenos objetivo; unión a isoformas de los receptores Fc gamma (FcyRI, FcyRIl y FcyRIII), FcRn y el complemento (C1q); funciones asociadas a Fab (por ejemplo, neutralización de un ligando soluble, activación o bloqueo del receptor); o funciones asociadas a Fc (por ejemplo, citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos, citotoxicidad dependiente del complemento, activación del complemento). Las comparaciones in vitro pueden combinarse con datos in vivo que demuestren similitud de farmacocinética, farmacodinámica y/o seguridad. Las evaluaciones clínicas de un mAb biosimilar frente a un mAb de referencia pueden incluir comparaciones de propiedades farmacocinéticas (por ejemplo, AUC0-inf, AUC0-t, Cmax, tmax, Ctrough); criterios de valoración farmacodinámicos; o similitud de la eficacia clínica (por ejemplo, usando ensayos clínicos comparativos aleatorizados de grupos paralelos). La comparación de la calidad entre un mAb biosimilar y un mAb de referencia puede evaluarse usando procedimientos establecidos, incluyendo los descritos en la "Guideline on similar biological medicinal products containing biotechnology-derived proteins as active substance: Quality issues" (EMEA/CHMP/BWP/49348/2005), y la "Guideline on development, production, characterization and specifications for monoclonal antibodies and related substances"(EMEA/CHMP/BWP/157653/2007).

Las diferencias entre un mAb biosimilar y un mAb de referencia pueden incluir la modificación postraduccional, por ejemplo, uniendo al mAb otros grupos bioquímicos como un fosfato, varios lípidos y carbohidratos; por escisión proteolítica después de la traducción; cambiando la naturaleza química de un aminoácido (por ejemplo, formilación); o mediante muchos otros mecanismos. Otras modificaciones postraduccionales pueden ser consecuencia de las operaciones del proceso de fabricación; por ejemplo, la glicación puede producirse con la exposición del producto a azúcares reductores. En otros casos, las condiciones de almacenamiento pueden ser permisivas para ciertas vías de degradación como oxidación, desamidación o agregación. Todas estas variantes relacionadas con el producto pueden incluirse en un mAb biosimilar.

El término "agente reductor de la viscosidad", como se usa en la presente, se refiere a un compuesto que actúa para reducir la viscosidad de una solución con respecto a la viscosidad de la solución sin el agente reductor de la viscosidad. El agente reductor de la viscosidad puede ser un compuesto individual o puede ser una mezcla de uno o más compuestos. Cuando el agente reductor de la viscosidad es una mezcla de dos o más compuestos, la concentración indicada se refiere a cada agente individual, a menos que se especifique lo contrario. A modo de ejemplo, una formulación que contiene aproximadamente 0,25 M de arginina de ácido canforsulfónico como agente reductor de la viscosidad es una solución que tiene ácido canforsulfónico a una concentración de 0,25 M y arginina a una concentración de 0,25 M.

Ciertos agentes reductores de la viscosidad contienen grupos funcionales ácidos o básicos. Si estos grupos funcionales están total o parcialmente ionizados o no depende del pH de la formulación en la que se encuentran. A menos que se especifique lo contrario, la referencia a una formulación que contiene un agente reductor de la viscosidad que tiene un grupo funcional ionizable incluye tanto el compuesto original como cualquier estado ionizado posible.

Como se usa en la presente, el término "donante de enlaces de hidrógeno" se refiere a un átomo de hidrógeno conectado a un átomo relativamente electronegativo, que crea una carga positiva parcial en el átomo de hidrógeno.

Como se usa en la presente, el término “aceptor de enlaces de hidrógeno” se refiere a un átomo o grupo funcional relativamente electronegativo capaz de interactuar con un átomo de hidrógeno que lleva una carga positiva parcial.

Como se usa en la presente, el término "enlace que rota libremente" se refiere a cualquier par de átomos no de hidrógeno unidos por enlaces sencillos.

Como se usa en la presente, el término "área superficial polar molecular" se refiere al área polar total expuesta en la superficie de la molécula de interés.

Como se usa en la presente, el término "volumen molar" se refiere al volumen total que ocupa un mol de la molécula de interés en su estado nativo (es decir, sólido, líquido).

Como se usa en la presente, el término "polarizabilidad" se refiere al momento dipolar inducido cuando la molécula de interés se coloca en un campo eléctrico de fuerza unitaria.

Como se usa en la presente, el término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a partir de ácidos y bases no tóxicos farmacéuticamente aceptables, que incluyen ácidos y bases inorgánicas, y ácidos y bases orgánicas. Los ácidos no tóxicos adecuados incluyen ácidos inorgánicos y orgánicos como acético, bencenosulfónico, benzoico, canforsulfónico, cítrico, etanosulfónico, fumárico, glucónico, glutámico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, mucico, nítrico, ácido pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenosulfónico y similares. Los contraiones cargados positivamente adecuados incluyen sodio, potasio, litio, calcio y magnesio.

Como se usa en la presente, el término "líquido iónico" se refiere a una sal cristalina o amorfa, un zwiterión o una mezcla de los mismos que es un líquido a o a temperaturas cercanas en las que la mayoría de las sales convencionales son sólidos: a menos de 200° C, preferiblemente a menos de 100° C o más preferiblemente menos de 80°C. Algunos líquidos iónicos tienen temperaturas de fusión cercanas a la temperatura ambiente, por ejemplo, entre 10° C y 40° C, o entre 15° C y 35° C. El término "zwiterión" se usa en la presente para describir una molécula cargada en general neutralmente que lleva cargas formales positivas y negativas en diferentes grupos químicos en la molécula. Ejemplos de líquidos iónicos se describen en Riduan et al., Chem. Soc. Rev., 42:9055-9070, 2013; Rantwijk et al., Chem. Rev., 107:2757-2785, 2007; Earle et al., Pure Appl. Chem., 72(7):1391-1398, 2000; y Sheldon et al., Green Chem., 4:147-151,2002.

Como se usa en la presente, el término "organofosfato" se refiere a un compuesto que contiene uno o más grupos fosforilo, por lo menos uno de los cuales está conectado covalentemente a un grupo orgánico a través de un enlace fosfoéster.

Como se usa en la presente, un "tinte orgánico soluble en agua" es una molécula orgánica que tiene una solubilidad molar de por lo menos 0,001 M a 25° C y pH 7, y que absorbe ciertas longitudes de onda de luz, preferiblemente en la parte visible a infrarrojos del espectro electromagnético, mientras que posiblemente transmita o refleje otras longitudes de onda de luz.

Como se usa en la presente, el término "calcógeno" se refiere a elementos del Grupo 16, que incluyen oxígeno, azufre y selenio, en cualquier estado de oxidación. Por ejemplo, a menos que se especifique lo contrario, el término "calcógeno" también incluye SO2.

Como se usa en la presente, el término "grupo alquilo" se refiere a grupos hidrocarbonados de cadena lineal, de cadena ramificada y cíclicos. A menos que se especifique lo contrario, el término grupo alquilo abarca grupos hidrocarbonados que contienen uno o más enlaces dobles o triples. Un grupo alquilo que contiene por lo menos un sistema de anillo es un grupo "cicloalquilo". Un grupo alquilo que contiene por lo menos un enlace doble es un "grupo alquenilo" y un grupo alquilo que contiene por lo menos un enlace triple es un "grupo alquinilo".

Como se usa en la presente, el término "arilo" se refiere a sistemas de anillos de carbono aromáticos, incluyendo sistemas de anillos fusionados. En un grupo "arilo", cada uno de los átomos que forman el anillo son átomos de carbono.

Como se usa en la presente, el término "heteroarilo" se refiere a sistemas de anillos aromáticos, incluyendo sistemas de anillos fusionados, en los que por lo menos uno de los átomos que forman el anillo es un heteroátomo.

Como se usa en la presente, el término "heterociclo" se refiere a sistemas de anillos que, incluyendo los sistemas de anillos fusionados, que no son aromáticos, en donde por lo menos uno de los átomos que forman el anillo es un heteroátomo.

Como se usa en la presente, un "heteroátomo" es cualquier átomo que no es de carbono ni de hidrógeno. Los heteroátomos preferidos incluyen oxígeno, azufre y nitrógeno. Los anillos de heteroarilo y heterociclilo ejemplares incluyen: bencimidazolilo, benzofuranilo, benzotiofuranilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, benzoxazolinilo, benzotiazolilo, benzotriazolilo, benzotetrazolilo, bencisoxazolilo, bencisotiazolilo, bencimidazolinilo, carbazolilo, 4aH carbazolilo, carbolinilo, cromanilo, cromenilo, cinolinilo, decahidroquinolinilo, 2H,6H-1,5,2-ditiazolilo, dihidrofuro[2,3 b] tetrahidrofurano, furanilo, furazanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, imidazolilo, 1 H-indazolilo, indolenilo, indolinilo, indolizinilo, indolilo, 3H-indolilo, isatinoilo, isobenzofuranilo, isocromanilo, isoindazol, isoindolinilo, isoindolilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, metilendioxifenilo, morfolinilo, naftiridinilo, octahidroisoquinolinilo, oxadiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, oxazolidinilo, oxazolilo, oxindolilo, pirimidinilo, fenantridinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxatinilo, fenoxazinilo, ftalazinilo, piperazinilo, piperidinilo, piperidonilo, 4-piperidonilo, piperonilo, pteridinilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridooxazol, piridoimidazol, piridotiazol, piridinilo, piridilo, pirimidinilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, 4H-quinolizinilo, quinoxalinilo, quinuclidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrazolilo, 6H-1,2,5-tiadiazinilo, 1,2,3-tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, I , 2,5-tiadiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, tiantrenilo, tiazolilo, tienilo, tienotiazolilo, tienooxazolilo, tienoimidazolilo, tiofenilo y xantenilo.

II. FORMULACIONES

Las soluciones de proteínas de baja viscosidad biocompatibles, como las de los mAb, pueden usarse para administrar cantidades terapéuticamente eficaces de proteínas en volúmenes útiles para inyecciones subcutáneas (SC) e intramusculares (IM), típicamente de menos de o aproximadamente 2 ml para SC y de menos de o aproximadamente 5 ml para IM, más preferiblemente menos de o aproximadamente 1 ml para SC y menos de o aproximadamente 3 ml para IM. Las proteínas pueden tener generalmente cualquier peso molecular, aunque en algunas realizaciones se prefieren las proteínas de alto peso molecular. En otras realizaciones, las proteínas son proteínas de bajo peso molecular.

Se divulga que las formulaciones pueden tener concentraciones de proteínas de entre 100 mg/ml y aproximadamente 5000 mg/ml. Las formulaciones de la invención, incluyendo las formulaciones de mAB, tienen una concentración de proteínas de más de 100 mg/ml, preferiblemente de más de 150 mg/ml, más preferiblemente de más de aproximadamente 175 mg/ml, incluso más preferiblemente de más de aproximadamente 200 mg/ml, incluso más preferiblemente de más de aproximadamente 225 mg/ml, incluso más preferiblemente de más de aproximadamente 250 mg/ml y lo más preferible de más de o aproximadamente 300 mg/ml. En ausencia de un agente reductor de la viscosidad, la viscosidad de una formulación de proteínas aumenta exponencialmente a medida que aumenta la concentración. Tales formulaciones de proteínas, en ausencia de un agente reductor de la viscosidad, pueden tener viscosidades de más de 100 mPa.s (100 cP), de más de 150 mPa.s (150 cP), de más de 200 mPa.s (200 cP), de más de 300 mPa.s (300 cP), de más de 500 mPa.s (500 cP), o incluso de más de 1000 mPa.s (1000 cP) cuando se mide a 25°C. Tales formulaciones a menudo no son adecuadas para inyección SC o IM. Se divulga que el uso de uno o más agentes reductores de la viscosidad permite la preparación de formulaciones que tienen una viscosidad menor de o de aproximadamente 100 mPa.s (100 cP), preferiblemente menor de o de aproximadamente 75 mPa.s (75 cP). Las formulaciones de la invención tienen una viscosidad absoluta de menos de o de aproximadamente 50 mPa.s (50 cP), incluso más preferiblemente de menos de o de aproximadamente 30 mPa.s (30 cP), incluso más preferiblemente de menos de o de aproximadamente 20 mPa.s (20 cP), o lo más preferible de menos de o de aproximadamente 10 mPa.s (10 cP), cuando se mide a 25°C.

Para ciertas proteínas, las formulaciones que no tienen un agente reductos de la viscosidad pueden tener viscosidades mayores de aproximadamente 20 mPa.s (20 cP), mayores de aproximadamente 50 mPa.s (50 cP), o mayores de aproximadamente 80 mPa.s (80 cP). El uso de uno o más agentes reductores de la viscosidad permite la preparación de formulaciones que tienen una viscosidad menor o de aproximadamente 80 mPa.s (80 cP), preferiblemente menor o de aproximadamente 50 mPa.s (50 cP), incluso más preferiblemente menor de aproximadamente 20 mPa.s (20 cP), o los más preferible menor o de aproximadamente 10 mPa.s (10 cP), cuando se mide a 25° C.

En algunas realizaciones, las formulaciones de proteínas acuosas tienen una viscosidad que es por lo menos aproximadamente un 30% menor que la formulación análoga sin los agentes reductores de la viscosidad, cuando se mide en las mismas condiciones. En otras realizaciones, las formulaciones tienen una viscosidad que es un 40% menor, un 50% menor, un 60% menor, un 70% menor, un 80% menor, un 90% menor o incluso más de un 90% menor que la formulación análoga sin los agentes reductores de la viscosidad. En una realización preferida, la formulación contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más proteínas de alto peso molecular, como mAb, en un volumen de menos de aproximadamente 2 ml, preferiblemente menos de aproximadamente 1 ml, o más preferiblemente menos de aproximadamente 0,75 ml.

Las formulaciones de viscosidad reducida tienen una capacidad de inyección mejorada y requieren menos fuerza de inyección en comparación con la formulación análoga sin el agente reductor de la viscosidad (por ejemplo, en tampón fosfato) en condiciones por lo demás iguales. En algunas realizaciones, la fuerza de inyección se reduce en más de aproximadamente un 20%, más de aproximadamente un 30%, más de aproximadamente un 40%, más de aproximadamente un 50% o más de aproximadamente 2 veces, en comparación con las formulaciones estándar sin los agentes reductores de la viscosidad en las mismas condiciones de inyección. En algunas realizaciones, las formulaciones poseen "características de flujo newtoniano", definidas por tener una viscosidad que es sustancialmente independiente de la tasa de cizallamiento. Las formulaciones de proteínas pueden inyectarse fácilmente a través de agujas de calibre 18-32 aproximadamente. Los calibres de aguja preferidos para la administración de formulaciones de baja viscosidad incluyen calibre 27, 29, y 31, opcionalmente de paredes delgadas.

Las formulaciones pueden contener uno o más excipientes adicionales como tampones, surfactantes, azúcares y alcoholes de azúcar, otros polioles, conservantes, antioxidantes y agentes quelantes. Las formulaciones tienen un pH y una osmolalidad adecuados para la administración sin provocar efectos secundarios adversos significativos. En algunas realizaciones, las formulaciones concentradas de baja viscosidad tienen un pH entre 5 y 8, entre 5,5 y 7,6, entre 6,0 y 7,6, entre 6,8 y 7,6 o entre 5,5 y 6,5.

Las formulaciones de proteínas de baja viscosidad pueden permitir una mayor flexibilidad en el desarrollo de la formulación. Las formulaciones de baja viscosidad pueden mostrar cambios en la viscosidad que son menos dependientes de la concentración de proteínas en comparación con por lo demás la misma formulación sin el agente reductor de viscosidad. Las formulaciones de proteínas de baja viscosidad pueden permitir concentraciones aumentadas y frecuencias de dosificación disminuidas de la proteína. En algunas realizaciones, las formulaciones de proteínas de baja viscosidad contienen 2 o más, 3 o más, o 4 o más proteínas diferentes. Por ejemplo, pueden proporcionarse combinaciones de 2 o más mAb en una única formulación de proteína de baja viscosidad.

Como las formulaciones de proteínas (como mAb) pueden administrarse a pacientes a concentraciones de proteínas más altas que las formulaciones de proteínas por lo demás similares que no contienen un agente reductor de la viscosidad, puede reducirse la frecuencia de dosificación de la proteína. Por ejemplo, las proteínas que antes requerían la administración una vez al día pueden administrarse una vez cada dos días, cada tres días o incluso con menos frecuencia cuando las proteínas se formulan con agentes reductores de la viscosidad. Las proteínas que actualmente requieren múltiples administraciones el mismo día (ya sea en el mismo momento o en diferentes momentos del día) pueden administrarse en menos inyecciones al día. En algunos casos, la frecuencia puede reducirse a una sola inyección una vez al día. Al aumentar la dosificación administrada por inyección varias veces, puede disminuirse la frecuencia de dosificación, por ejemplo de una vez cada 2 semanas a una vez cada 6 semanas.

En algunas realizaciones, las formulaciones líquidas tienen una osmolaridad fisiológica, por ejemplo, entre aproximadamente 280 mOsm/l y aproximadamente 310 mOsm/l. En algunas realizaciones, las formulaciones líquidas tienen una osmolaridad mayor de aproximadamente 250 mOsm/l, mayor de aproximadamente 300 mOsm/l, mayor de aproximadamente 350 mOsm/l, mayor de aproximadamente 400 mOsm/l, o mayor de aproximadamente 500 mOsm/l. En algunas realizaciones, las formulaciones tienen una osmolaridad de aproximadamente 200 mOsm/l a aproximadamente 2000 mOsm/l o de aproximadamente 300 mOsm/l a aproximadamente 1000 mOsm/l. En algunas realizaciones, las formulaciones líquidas son esencialmente isotónicas para la sangre humana. En algunos casos, las formulaciones líquidas pueden ser hipertónicas.

Los aditivos, incluyendo los agentes reductores de la viscosidad, pueden incluirse en cualquier cantidad para lograr los niveles de viscosidad deseados de la formulación líquida, siempre que las cantidades no sean tóxicas o dañinas de otro modo, y no interfieran sustancialmente con la estabilidad química y/o física de la formulación. Los agentes reductores de la viscosidad en algunas realizaciones pueden estar presentes independientemente en una concentración de menos de aproximadamente 1,0 M, preferiblemente de menos de aproximadamente 0,50 M, menor o igual a aproximadamente 0,30 M o menor o igual a 0,15 M. Las concentraciones especialmente preferidas incluyen aproximadamente 0,15 M y aproximadamente 0,30 M. Para algunas realizaciones que tienen dos o más agentes reductores de la viscosidad, los agentes están presentes preferiblemente, pero no necesariamente, a la misma concentración.

Los agentes reductores de la viscosidad permiten una reconstitución más rápida de una unidad de dosificación liofilizada. La unidad de dosificación es una torta liofilizada de proteína, agente reductor de la viscosidad y otros excipientes, a los que se añade agua, solución salina u otro fluido farmacéuticamente aceptable. En ausencia de agentes reductores de la viscosidad, a menudo se requieren períodos de 10 minutos o más para disolver completamente la torta liofilizada a una alta concentración de proteínas. Cuando la torta liofilizada contiene uno o más agentes reductores de la viscosidad, el período requerido para disolver completamente la torta a menudo se reduce en un factor de dos, cinco o incluso diez. En ciertas realizaciones, se requiere menos de un minuto para disolver completamente una torta liofilizada que contiene más de o aproximadamente 150, 200 o incluso 300 mg/ml de proteína.

Las formulaciones de proteínas de baja viscosidad permiten una mayor flexibilidad en el desarrollo de la formulación. Las formulaciones de baja viscosidad muestran una viscosidad que cambia menos con concentraciones de proteína crecientes en comparación con por lo demás la misma formulación sin los agentes reductores de la viscosidad. Las formulaciones de proteínas de baja viscosidad muestran un gradiente de viscosidad reducido en comparación con la misma formulación sin el agente reductor de la viscosidad.

El gradiente de viscosidad de la formulación de proteína puede ser 2 veces menor, 3 veces menor o incluso más de 3 veces menor que el gradiente de viscosidad de por lo demás la misma formulación de proteína sin los agentes reductores de la viscosidad. El gradiente de viscosidad de la formulación de proteína puede ser menor de 2,0 mPa,s ml/mg (2,0 cP ml/mg), menor de 1,5 mPa,s ml/mg (1,5 cP ml/mg), menor de 1,0 mPa,s ml/mg (1,0 cP ml/mg), menor de 0,8 mPa,s ml/mg (0,8 cP ml/mg), menor de 0,6 mPa,s ml/mg (0,6 cP ml/mg), o menor de 0,2 mPa,s ml/mg (0,2 cP ml/mg) para una formulación de proteína que tiene una concentración de proteína entre 10 mg/ml y 2.000 mg/ml. Al reducir el gradiente de viscosidad de la formulación, la concentración de proteína puede aumentarse en mayor grado antes de que se observe un aumento exponencial de la viscosidad.

A. Proteínas

Se divulga que puede formularse cualquier proteína, incluyendo proteínas, glicoproteínas o lipoproteínas recombinantes, aisladas o sintéticas. Estas pueden ser anticuerpos (incluyendo fragmentos de anticuerpos y anticuerpos recombinantes), enzimas, factores de crecimiento u hormonas, inmunomodificadores, antiinfecciosos, antiproliferativos, vacunas u otras proteínas terapéuticas, profilácticas o de diagnóstico. En las formulaciones de la invención, la proteína es un anticuerpo. En ciertas realizaciones, la proteína tiene un peso molecular de más de aproximadamente 150 kDa, de más de 160 kDa, de más de 170 kDa, de más de 180 kDa, de más de 190 kDa o incluso de más de 200 kDa.

En ciertas realizaciones, la proteína puede ser una proteína PEGilada. El término "proteína PEGilada'', como se usa en la presente, se refiere a una proteína que tiene uno o más grupos de poli(etilenglicol) u otros grupos poliméricos furtivos unidos covalentemente a la misma, opcionalmente a través de un conector químico que puede ser diferente del uno o más grupos poliméricos. Las proteínas PEGiladas se caracterizan por su filtración renal típicamente reducida, su captación disminuida por el sistema reticuloendotelial, y la degradación enzimática disminuida que lleva, por ejemplo, a vidas medias prolongadas y biodisponibilidad mejorada. Los polímeros furtivos incluyen poli(etilenglicol); poli(propilenglicol); polímeros de poli(aminoácidos) como poli(ácido glutámico), poli(hidroxietil-L-asparagina) y poli(hidroxietil-L-glutamina); poli(glicerol); polímeros de poli(2-oxazolina) como poli(2-metil-2-oxazolina) y poli(2-etil-2-oxazolina); poli(acrilamida); poli(vinilidona); poli(N-(2-hidroxipropil)metacrilamida); y copolímeros y mezclas de los mismos. En realizaciones preferidas, el polímero furtivo en una proteína PEGilada es poli(etilenglicol) o un copolímero del mismo. Las proteínas PEGiladas pueden PEGilarse aleatoriamente, es decir, tener uno o más polímeros furtivos unidos covalentemente en sitios no específicos en la proteína, o pueden PEGilarse de una manera específica del sitio uniendo covalentemente el polímero furtivo a sitios específicos en la proteína. La PEGilación específica del sitio puede lograrse, por ejemplo, usando polímeros furtivos activados que tienen uno o más grupos funcionales reactivos. Se describen ejemplos, por ejemplo, en Hoffman et al, Progress in Polymer Science, 32: 922-932, 2007.

En la realización preferida, la proteína es de alto peso molecular y un anticuerpo, más preferiblemente un mAb, y tiene una alta viscosidad en solución tamponada acuosa cuando se concentra lo suficiente para inyectar una cantidad terapéuticamente eficaz en un volumen que no excede de 1,0 a 2,0 ml para administración SC y de 3,0 a 5,0 ml para administración IM. Las proteínas de alto peso molecular pueden incluir las descritas en Scolnik, mAbs 1:179-184, 2009; Beck, mAbs 3:107-110, 2011; Baumann, Curr. Drug Meth. 7:15-21, 2006; o Federici, Biologicals 41:131-147, 2013. Las proteínas para su uso en las formulaciones descritas en la presente son preferiblemente esencialmente puras y esencialmente homogéneas (es decir, están sustancialmente libres de proteínas contaminantes y/o agregados irreversibles de las mismas).

Los mAb preferidos en la presente incluyen natalizumab (TYSABRI®), cetuximab (ERBITUX®), bevacizumab (AVASTIN®), trastuzumab (HERCEPTIN®), infliximab (R^eMICADE®), rituximab (RITUXAN®), panitumumab (VECTIBIX®), ofatumumab (ARZERRA®),, y biosimilares de los mismos. Las proteínas de alto peso molecular ejemplares pueden incluir tocilizumab (ACTEMRA®), alemtuzumab (comercializado con varios nombres comerciales), brodalumab (desarrollado por Amgen, Inc (''Amgen'')), denosumab (PROLIA® y XGEVA®) y biosimilares de los mismos.

Los objetivos moleculares ejemplares para anticuerpos descritos en la presente incluyen proteínas CD, como CD3, CD4, CDS, CD19, CD20 y CD34; miembros de la familia de receptores de HER como el receptor de EGF, el receptor de HER2, HER3 o HER4; moléculas de adhesión celular, como LFA-1, Mol, p150,95, VLA-4, ICAM-1, VCAM y av/p3 integrina, incluyendo las subunidades a o p de las mismas (por ejemplo, anticuerpos anti-CD11a, anti-CD18, o anti-CD11b); factores de crecimiento, como VEGF; IgE; antígenos de grupos sanguíneos; receptor flk2/flt3; receptor de obesidad (OB); proteína C; PCSK9; etc.

Agentes terapéuticos de anticuerpos actualmente en el mercado

Muchos agentes terapéuticos de proteínas actualmente en el mercado, especialmente los anticuerpos como se definen en la presente, se administran mediante infusiones IV debido a los altos requisitos de dosificación. Las formulaciones pueden incluir uno de los agentes terapéuticos de anticuerpos actualmente en el mercado o un biosimilar de los mismos. Algunos agentes terapéuticos de proteínas actualmente en el mercado no son de alto peso molecular, pero aun así se administran por infusión IV porque se necesitan dosis altas para la eficacia terapéutica. En algunas realizaciones, se proporcionan formulaciones líquidas de estas proteínas de bajo peso molecular como se definen en la presente con concentraciones para administrar cantidades terapéuticamente eficaces para inyecciones SC o IM.

Los agentes terapéuticos de anticuerpos actualmente en el mercado incluyen belimumab (BENLYSTA®), golimumab (SIMPONI ARIA®), abciximab (REOPRO®), la combinación de tositumomab y yodo-131 tositumomab, comercializada como BEXXAR®, alemtuzumab (CAMPATH®), palivizumab (S^y N^a GIS®), basiliximab (SIMULECT®), ado-trastuzumab emtansine (KADCYLA®), pertuzumab (PERJETA®), capromab pendetide (PROSTASCINT KIT®), caclizumab (ZENAPAX®), ibritumomab tiuxetan (ZEVALIN®), eculizumab (SOLIRIS®), ipilimumab (YERVOY®), muromonab-CD3 (ORThOc LONE OKT3®), raxibacumab, nimotuzumab (THERACIM®), brentuximab vedotin (^a D^c ETRIS®), adalimumab (HUMIRA®), golimumab (SIMPONI®), palivizumab (SYNAGIS®), omalizumab (XO-LAⁱR®), y ustekinumab (STELA^rA®).

El natalizuraab, un mAb humanizado contra la a4-integrina de la molécula de adhesión celular, se usa en el tratamiento de la esclerosis múltiple y la enfermedad de Crohn. Anteriormente comercializado con el nombre comercial ANTEGREN®, el natalizumab se co-cormecializa actualmente como TYSABPI® por Biogen Idec (''Biogen'') y Elan Corp. ("Elan") El TYSABRI® se produce en células de mieloma murino. Cada dosis de 15 ml contiene 300 mg de natalizumab; 123 mg de cloruro de sodio, USP; 17,0 mg de fosfato de sodio, monobásico, monohidrato, USP; 7,24 mg de fosfato de sodio, dibásico, heptahidratado, USP; 3,0 mg de polisorbato 80, USP/NF, en agua para inyección IV, USP a pH 6,1. El natalizumab se administra típicamente mediante infusiones intravenosas (IV) mensuales y ha demostrado ser eficaz para tratar los síntomas de tanto la esclerosis múltiple como la enfermedad de Crohn, así como para prevenir recaídas, pérdida de visión, deterioro cognitivo, y mejorar significativamente la calidad de vida del paciente.

Como se usa en la presente, el término "natalizumab" incluye el mAb contra la a4-integrina de la molécula de adhesión celular conocida con el nombre genérico internacional "NATALIZUMAB" o una parte de unión al antígeno de la misma. El natalizumab incluye anticuerpos descritos en la Patente de Estados Unidos N° 5.840.299, Patente de Estados Unidos N° 6.033.665,Patente de Estados Unidos N° 6.602.503, Patente de Estados Unidos N° 5.168.062, Patente de Estados Unidos N° 5.385.839 y Patente de Estados Unidos N° 5.730.978. El natalizumab incluye el agente activo en los productos comercializados con el nombre comercial TYSABRI® por Biogen Idec y Elan Corporation o un producto biosimilar del mismo.

El cetuximab es un inhibidor del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) usado para el tratamiento del cáncer colorrectal metastásico y del cáncer de cabeza y cuello. El cetuximab es un mAb quimérico (ratón/humano) que se administra típicamente por infusión IV. El cetuximab se comercializa para uso IV únicamente con el nombre comercial ERBITUX® por Bristol-Myers Squibb Company (Norteamérica; "Bristol-Myers Squibb"), Eli Lilly and Company (Norteamérica; "Eli Lilly") y Merck KGaA. El ERBITUX® se produce en cultivos de células de mamífero (mieloma murino). Cada vial de 50 ml de un solo uso de ERBITUX® contiene 100 mg de cetuximab a una concentración de 2 mg/ml y está formulado en una solución libre de conservantes que contiene 8,48 mg/ml de cloruro de sodio, 1,88 mg/ml de heptahidratado dibásico de fosfato de sodio, 0,42 mg/ml de monohidrato monobásico de fosfato de sodio y agua para inyección IV, USP.

El cetuximab está indicado para el tratamiento de pacientes con cáncer colorrectal metastásico (mCRC) de tipo salvaje de KRAS que expresan el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), en combinación con quimioterapia, y como agente individual en pacientes que no han respondido a terapia a base de oxaliplatino e irinotecán o que son intolerantes al irinotecán. El cetuximab está indicado para el tratamiento de pacientes con carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello en combinación con quimioterapia a base de platino para el tratamiento de primera línea de la enfermedad recurrente y/o metastásica y en combinación con terapia de radiación para la enfermedad localmente avanzada. Aproximadamente el 75% de los pacientes con cáncer colorrectal metastásico tienen un tumor que expresa EGFR y, por lo tanto, se consideran elegibles para el tratamiento con cetuximab o panitumumab, de acuerdo con las pautas de la FDA.

Como se usa en la presente, el término "cetuximab" incluye el mAb conocido con el nombre genérico internacional "CETUXIMAB" o una porción de unión al antígeno del mismo. El cetuximab incluye los anticuerpos descritos en la Patente de Estados Unidos N° 6.217.866. El cetuximab incluye el agente activo en los productos comercializados con el nombre comercial ERBITUX® y productos biosimilares de los mismos. Los biosimilares del ERBITUX® pueden incluir los que actualmente están siendo desarrollado por Amgen, AlphaMab Co., Ltd. ("AlphaMab"), y Actavis plc ("Actavis").

El bevacizumab, un mAb humanizado que inhibe el factor de crecimiento endotelial vascular A (VEGF-A), actúa como un agente antiangiogénico. Se comercializa con el nombre comercial AVASTIN® por Genentech, Inc. ("Genentech") y F. Hoffmann-La Roche, LTD ("Roche"). Tiene licencia para tratar varios cánceres, incluyendo el colorrectal, el de pulmón, el de mama (fuera de Estados Unidos), el glioblastoma (solo en Estados Unidos), el de riñón y de ovario. El AVASTIN® fue aprobado por la FDA en 2004 para su uso en el cáncer colorrectal metastásico cuando se usa con tratamiento de quimioterapia estándar (como tratamiento de primera línea) y con terapia basada en 5-fluorouracilo para el cáncer colorrectal metastásico de segunda línea. En 2006, la FDA aprobó el AVASTIN® para su uso en cáncer de pulmón de células no pequeñas no escamoso avanzado de primera línea en combinación con quimioterapia con carboplatino/paclitaxel. El AVASTIN® se administra como una infusión IV cada tres semanas a la dosis de 15 mg/kg o 7,5 mg/kg. La dosis más alta se administra habitualmente con quimioterapia a base de carboplatino, mientras que la dosis más baja se administra con quimioterapia a base de cisplatino. En 2009, la FDA aprobó el AVASTIN® para su uso en el carcinoma de células renales metastásico (una forma de cáncer de riñón). La FDA también concedió la aprobación acelerada del AVASTIN® para el tratamiento del glioblastoma multiforme recurrente en 2009. El tratamiento para el crecimiento inicial todavía está en ensayo clínico de fase III.

La National Comprehensive Cancer NetWork ("NCCN") recomienda el bevacizumab como tratamiento estándar de primera línea en combinación con cualquier quimioterapia a base de platino, seguido de bevacizumab de mantenimiento hasta la progresión de la enfermedad. La NCCN actualizó sus Pautas de práctica clínica para la oncología (Pautas de la NCCN) para el cáncer de mama en 2010 para afirmar la recomendación sobre el uso del bevacizumab (AVASTIN®, Genentech/Roche) en el tratamiento del cáncer de mama metastásico.

Como se usa en la presente, el término "bevacizumab" incluye el mAb que inhibe el factor de crecimiento endotelial vascular A (VEGF-A) conocido con el nombre genérico internacional/nombre común "BEVACIZUMAB" o una porción de unión al antígeno del mismo. El bevacizumab se describe en la Patente de Estados Unidos N° 6.054.297. El bevacizumab incluye el agente activo en los productos comercializados con el nombre comercial AVASTIN® y productos biosimilares de los mismos. Los biosimilares del AVASTIN® pueden incluir los que se están desarrollando actualmente por Amgen, Actavis, AlphaMab, y Pfizer, Inc ("Pfizer"). Los biosimilares de AVASTIN® pueden incluir el biosimilar conocido como BCD-021 producido por Biocad y actualmente en ensayos clínicos en los Estados Unidos.

El trastuzumab es un mAb que interfiere con el receptor de HER2/neu. El trastuzumab se comercializa con el nombre comercial HERCEPTIN® por Genentech, Inc. El HERCEPTIN® es producido por una línea celular de mamífero (ovario de hámster chino (CHO)). El HERCEPTIN® es un polvo estéril, blanco a amarillo pálido, liofilizado libre de conservantes para administración IV. Cada vial de HERCEPTIN® contiene 440 mg de trastuzumab, 9,9 mg de L-histidina HCl, 6,4 mg de L-histidina, 400 mg de a,a-trehalosa dihidrato y 1,8 mg de polisorbato 20, USP. La reconstitución con 20 ml de agua produce una solución multidosis que contiene 21 mg/ml de trastuzumab. El HERCEPTIN® se administra actualmente a través de infusión IV tan a menudo como semanalmente y a una dosificación que varía de aproximadamente 2 mg/kg a aproximadamente 8 mg/kg.

El trastuzumab se usa principalmente para tratar ciertos cánceres de mama. El gen HER2 se amplifica en el 20-30% de los cánceres de mama en etapa temprana, lo que hace que sobreexprese los receptores del factor de crecimiento epidérmico (EGF) en la membrana celular. El trastuzumab generalmente se administra como terapia de mantenimiento para pacientes con cáncer de mama positivo para HER2, típicamente durante un año después de la quimioterapia. Actualmente, el trastuzumab se administra mediante infusión IV tan a menudo como semanalmente y a una dosificación que varía de aproximadamente 2 mg/kg a aproximadamente 8 mg/kg.

Como se usa en la presente, el término "trastuzumab" incluye el mAb que interfiere con el receptor de HER2/neu conocido con el nombre genérico internacional/nombre común "TRASTUZUMAB" o una porción de unión al antígeno del mismo. El trastuzumab se describe en la Patente de Estados Unidos N° 5.821.337. El trastuzumab incluye el agente activo en los productos comercializados con el nombre comercia1HERCEPTIN® y biosimilares de los mismos. El término "trastuzumab" incluye el agente activo en los productos HERCEPTIN® biosimilares comercializados con los nombres comerciales HERTRAZ® por Mylan, Inc. ("Mylan") y CANMAB® por Biocon, Ltd. ("Biocon"). El trastuzumab puede incluir el agente activo en los productos HERCEPTIN® biosimilares que están siendo desarrollados por Amgen y por PlantForm Corporation, Canadá

El infliximab es un mAb contra el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a) usado para tratar enfermedades autoinmunes. Se comercializa con el nombre comercial REMICADE® por Janssen Global Services, LLC ("Janssen") en los Estados Unidos, Mitsubishi Tanabe Pharma en Japón, Xian Janssen en China y Merck & Co ("Merck"); en otras partes. El infliximab es un anticuerpo monoclonal quimérico de ratón/humano con un alto peso molecular de aproximadamente 144 kDa. En algunas realizaciones, las formulaciones contienen un biosimilar de REMICADE®, como REMSIMA™ o INFLECTRA™. Tanto el REMSIMA™, desarrollado por Celltrion, Inc. ("Celltrion") como el INFLECTRA™, desarrollado por Hospira Inc, Reino Unido, han sido recomendados para aprobación regulatoria en Europa. Celltrion ha presentado una solicitud para el REMSIMA™ a la FDA. En la actualidad, el infliximab se administra mediante infusión IV a dosis que varían entre aproximadamente 3 mg/kg y aproximadamente 10 mg/kg.

El infliximab contiene aproximadamente un 30% de secuencia de aminoácidos de región variable murina, lo que confiere especificidad de unión al antígeno para TNFa humana. El 70% restante corresponde a una región constante de cadena pesada de IgG1 humana y una región constante de cadena ligera kappa humana. El infliximab tiene una alta afinidad para TNFa humana, que es una citoquina con múltiples acciones biológicas, incluyendo la mediación de respuestas inflamatorias y la modulación del sistema inmunológico.

El infliximab es un anticuerpo recombinante que generalmente se produce y secreta a partir de células de mieloma de ratón (células SP2/0). El anticuerpo se fabrica actualmente mediante cultivo celular de perfusión continua. El anticuerpo monoclonal infliximab se expresa usando genes de anticuerpos quiméricos que consisten de las secuencias de la región variable clonadas del hibridoma A2 anti-TNFa murino y secuencias de la región constante del anticuerpo humano suministradas por los vectores de expresión del plásmido. La generación del hibridoma anti-TNFa murino se realiza mediante inmunización de ratones BALB/c con TNFa humana recombinante purificada. Las construcciones de vectores de cadena pesada y ligera se linealizan y transfectan en las células Sp2/0 mediante electroporación. Los pasos de purificación estándar pueden incluir purificación cromatográfica, inactivación viral, nanofiltración y ultrafiltración/diafiltración.

Como se usa en la presente, el término "infliximab" incluye el anticuerpo monoclonal quimérico de ratón/humano conocido con la denominación genérica internacional "INFLIXIMAB" o una porción de unión al antígeno del mismo. El infliximab neutraliza la actividad biológica de TNFa al unirse con alta afinidad a las formas solubles y transmembrana de TNFa e inhibe la unión de TNFa con sus receptores. El infliximab se describe en la Patente de Estados Unidos N° 5.698.195. El término "Infliximab" incluye el agente activo en los productos comercializados o propuestos para ser comercializados con los nombres comerciales REMICADE® por múltiples entidades; REMSⁱM^a ™ de Celltrion e INFLECTRA™ de Hospira, Inc ("Hospira"). El infliximab se suministra como una torta liofilizada estéril para reconstitución y dilución. Cada vial de infliximab contiene 100 mg de infliximab y excipientes como monohidrato de fosfato de sodio monobásico, dihidrato de fosfato de sodio dibásico, sacarosa y polisorbato 80.

El denosumab (PROLIA® y XGEVA®) es un mAb humano, y el primer inhibidor de RANKL, aprobado para su uso en mujeres posmenopáusicas con riesgo de osteoporosis y pacientes con metástasis óseas de tumores sólidos. El denosumab se encuentra en ensayos de fase II para el tratamiento de la artritis reumatoide.

El panitumuinab es un mAb completamente humano aprobado por la FDA para el tratamiento del cáncer metastásico que expresa EGFR con progresión de la enfermedad. El panitumumab se comercializa con el nombre comercial VECTIBIX® por Amgen. El VECTIBIX® se envasa como un concentrado de panitumumab de 20 mg/ml en viales de 5 ml, 10 ml, y 15 ml para infusión IV. Cuando se prepara de acuerdo con las instrucciones del envasado, la concentración final de panitumumab no excede los 10 mg/ml. El VECTIBIX® se administra a una dosificación de 6 mg/kg cada 14 días como una infusión intravenosa. Como se usa en la presente, el término "panitumumab" incluye el receptor del factor de crecimiento epidérmico antihumano conocido por la denominación genérica internacional "PANITUMUMAB". El término "panitumumab" incluye el agente activo en los productos comercializados con el nombre comercial VECTIBIX® por Amgen y biosimilares de los mismos. El término "panitumumab" incluye anticuerpos monoclonales descritos en la Patente de Estados Unidos N° 6.235.883. El término "panitumumab" incluye el agente activo en productos de VECTIBIX® biosimilares, incluyendo el VECTIBIX® biosimilar que está siendo desarrollado por BioXpress, SA ("BioXpress").

El belimumab (BENLYSTA®) es un mAb humano con un peso molecular de aproximadamente 151,8 kDa que inhibe el factor de activación de células B (BAFF). El belimumab está aprobado en Estados Unidos, Canadá y Europa para el tratamiento del lupus eritematoso sistémico. Actualmente, el belimumab se administra a pacientes con lupus mediante infusión IV a una dosificación de 10 mg/kg. Una formulación de proteína de alto peso molecular y baja viscosidad puede incluir belimumab, preferiblemente a una concentración de aproximadamente 400 mg/ml a aproximadamente 1000 mg/ml. Los intervalos preferidos se calculan en base al peso corporal de 40-100 kg (aproximadamente 80-220 libras) en un volumen de 1 ml.

El abciximab (REOPRO®) es fabricado por Janssen Biologics BV y distribuido por Eli Lilly & Company ("Eli Lilly"). El abciximab es un fragmento Fab del anticuerpo monoclonal quimérico humano-murino 7E3. El abciximab se une al receptor de glicoproteína (GP) Ilb/IIIa de las plaquetas humanas e inhibe la agregación de plaquetas evitando la unión de fibrinógeno, factor de von Willebrand y otras moléculas adhesivas. También se une al receptor de vitronectina (avp3) que se encuentra en las plaquetas y en las células endoteliales de la pared vascular y del músculo liso. El abciximab es un inhibidor de la agregación plaquetaria que se usa principalmente durante y después de procedimientos de las arterias coronarias. El abciximab se administra por infusión IV, primero en un bolo de 0,25 mg/kg y luego en infusión IV continua de 0,125 mcg/kg/minuto durante 12 horas.

El tositumomab (BEXXAR®) es un fármaco para el tratamiento del linfoma folicular. Es un mAb anti-CD20 de IgG2a derivado de células de ratón inmortalizadas. El tositumomab se administra en infusiones secuenciales: mAb frío seguido de yodo (1311) tositumomab, el mismo anticuerpo unido covalentemente al radionúclido yodo-131. Los ensayos clínicos han establecido la eficacia del régimen de tositumomab/yodo tositumomab en pacientes con linfoma folicular refractario recidivante. El BEXXAR® se administra actualmente a una dosis de 450 mg a través de infusión IV.

El alemtuzumab (comercializado como CAMPATH®, MABCAMPATH®, o CAMPATH-1H® y actualmente en desarrollo adicional como LEMTRADA®) es un mAb usado en el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma cutáneo de células T (CTCL), y linfoma de células T. También se usa en protocolos de ensayos clínicos para el tratamiento de algunas enfermedades autoinmunes, como la esclerosis múltiple. El alemtuzumab tiene un peso de aproximadamente 145,5 kDa. Se administra en infusiones IV diarias de 30 mg para pacientes con leucemia linfocítica crónica de células B.

El palivizumab (SYNAGIS®) es un mAb humanizado dirigido contra un epítopo en el sitio antigénico A de la proteína F del virus respiratorio sincitial. En dos ensayos clínicos de fase III en la población pediátrica, el palivizumab redujo el riesgo de hospitalización debida a infección por virus respiratorio sincitial en un 55% y un 45%. El palivizumab se dosifica una vez al mes mediante una inyección IM de 15 mg/kg.

El ofatumumab es un mAb anti-CD20 humano que parece inhibir la activación de linfocitos B en etapa temprana. El ofatumumab se comercializa con el nombre comercial ARZERRA® por GlaxoSmithKline, plc ("GlaxoSmithKline"). El ARZERRA® se distribuye en viales de un solo uso que contienen 100 mg/5 ml y 1000 mg/50 ml de ofatumumab para infusión IV. El ofatumumab está aprobado por la FDA para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica y también ha demostrado potencial para el tratamiento de linfoma no de Hodgkin folicular, linfoma difuso de células B grandes, artritis reumatoide y esclerosis múltiple remitente recidivante. El ofatumumab tiene un peso molecular de aproximadamente 149 kDa. Actualmente se administra por infusión IV a una dosis inicial de 300 mg, seguida de infusiones semanales de 2000 mg. Como se usa en la presente, el término "ofatumumab" incluye el mAb anti-CD20 conocido por el nombre genérico internacional "OFATUMUMAB". El término "ofatumumab" incluye el agente activo en los productos comercializados con el nombre comercial ARZERRA® y biosimilares de los mismos. El término "ofatumumab" incluye el agente activo en productos ARZERRA® biosimilares que están siendo desarrollados por BioExpress. Las formulaciones de proteínas líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir ofatumumab, preferiblemente a una concentración de aproximadamente 300 mg/ml a aproximadamente 2000 mg/ml.

El trastuzumab emtansina (en los Estados Unidos, ado-trastuzumab emtansina, comercializado como KADCYLA®) es un conjugado anticuerpo-fármaco que consiste de trastuzumab mAb enlazado al agente citotóxico mertansina (DM1®). El trastuzumab, descrito anteriormente, detiene el crecimiento de las células cancerosas uniéndose al receptor de HER2/neu, mientras que la mertansina se introduce en las células y las destruye uniéndose a la tubulina. En los Estados Unidos, el trastuzumab emtansina se aprobó específicamente para el tratamiento del cáncer de mama metastásico recurrente positivo para HER2. Se han planificado o están en curso múltiples ensayos de fase III de trastuzumab emtansina en 2014. Actualmente, trastuzumab emtansina se administra mediante infusión IV de 3,6 mg/kg. Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir trastuzumab emtansina, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 144 mg/ml a aproximadamente 360 mg/ml.

El pertuzumab (PERJETA®) es un mAb que inhibe la dimerización de HER2. El pertuzumab recibió la aprobación de la FDA para el tratamiento del cáncer de mama metastásico positivo para HER2 en 2012. La dosificación recomendada actualmente de Pertuzumab es de 420 mg a 840 mg por infusión IV. Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir pertuzumab, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 420 mg/ml a aproximadamente 840 mg/ml.

El daclizumab es un mAb anti-CD25 humanizado y se usa para prevenir el rechazo en el trasplante de órganos, especialmente en los trasplantes de riñón. El fármaco también está bajo investigación para el tratamiento de la esclerosis múltiple. El daclizumab tiene un peso molecular de aproximadamente 143 kDa. El daclizumab se comercializó en los Estados Unidos por Hoffmann-La Roche, Ltd. ("Roche") como ZENAPAX® y se administra por infusión IV de 1 mg/kg. El proceso de alto rendimiento de daclizumab (DAC HYP; BIIB019; Biogen Idec ("Biogen") y Abb Vie, Inc. ("AbbVie")) se encuentra en ensayos clínicos de fase III como una inyección subcutánea mensual de 150 mg para tratar la esclerosis múltiple con recaída, en remisión. Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir daclizumab, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 40 mg/ml a aproximadamente 300 mg/ml.

El eculizumab (SOLIRIS®) es un mAb humanizado aprobado para el tratamiento de enfermedades raras de la sangre, como la hemoglobinuria paroxística nocturna y el síndrome urémico hemolítico atípico. Alexion Pharmaceuticals, Inc ("Alexion") está desarrollando eculizumab, con un peso molecular de aproximadamente 148 kDa. Se administra por infusión IV en una cantidad de aproximadamente 600 mg a aproximadamente 1200 mg. Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir eculizumab, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 500 mg/ml a aproximadamente 1200 mg/ml.

El tocilizumab (ACTEMRA®) es un mAb humanizado contra el receptor de interleucina-6. Es un fármaco inmunosupresor, principalmente para el tratamiento de la artritis reumatoide (AR) y la artritis idiopática juvenil sistémica, una forma grave de AR en niños. El tocilizumab se administra comúnmente por infusión IV en dosis de aproximadamente 6 mg/kg a aproximadamente 8 mg/kg. Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir tocilizumab, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 240 mg/ml a aproximadamente 800 mg/ml.

El rituximab (RITUXAN®) es un mAb anti-CD20 quimérico usado para tratar una variedad de enfermedades caracterizadas por un número excesivo de células B, células B hiperactivas o células B disfuncionales. El rituximab se usa para tratar cánceres del sistema leucocitario, como leucemias y linfomas, incluyendo el linfoma de Hodgkin y su subtipo predominante de linfocitos. Se ha demostrado que es un tratamiento eficaz para la artritis reumatoide. El rituximab se usa ampliamente fuera del uso indicado para tratar casos difíciles de esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico y anemias autoinmunes.

El rituximab se comercializa en forma conjunta en los Estados Unidos con el nombre comercial RITUXAN® por Biogen y Genentech y fuera de los Estados Unidos con el nombre comercial MABTHERA® por Roche. El RITUXAN® se distribuye en viales de un solo uso que contienen 100 mg/10 ml y 500 mg/50 ml. El RITUXAN® se administra típicamente por infusión IV de aproximadamente 375 mg/m2. El término "rituximab", como se usa en la presente, incluye el mAb anti-CD20 conocido con el nombre genérico internacional/nombre común "RITUXIMAB". El rituximab incluye los mAb descritos en la Patente de Estados Unidos N° 5.736.137. El rituximab incluye el agente activo en los productos comercializados con el nombre comercial RITUXAN® y MABTHERA® y biosimilares de los mismos.

Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir rituximab, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 475 mg/ml a aproximadamente 875 mg/ml (aproximada usando un intervalo de área de superficie corporal de 1,3 a 2,3 metros cuadrados, derivada de la fórmula de Mosteller para personas de entre 1,5 m (5 pies), 40 kg y 1,8 m (6 pies), 100 kg). Las concentraciones se calculan para una formulación de 1 ml.

El ipilimumab es un mAb humano desarrollado por Bristol-Myers Squibb Company ("Bristol-Myers Squibb"). Comercializado como YERVOY®, se usa para el tratamiento de melanoma y también se está sometido a ensayos clínicos para el tratamiento de carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de pulmón de células pequeñas (SCLC), y cáncer de próstata refractario a hormonas metastásico. Actualmente, el ipilimumab se administra mediante infusión IV de 3 mg/kg. Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir ipilimumab, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 120 mg/ml a aproximadamente 300 mg/ml.

El raxibacumab (ABthrax®) es un mAb humano destinado a la profilaxis y el tratamiento del ántrax inhalado. Actualmente se administra por infusión IV. La dosificación sugerida en adultos y niños de más de 50 kg es de 40 mg/kg. Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir raxibacumab, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 1000 mg/ml a aproximadamente 4000 mg/ml.

El nimotuzumab (THERACIM®, BIOMAB EGFR®, THERALOC®, CIMAher®) es un mAb humanizado con un peso molecular de aproximadamente 151 kDa usado para tratar carcinomas de células escamosas de la cabeza y cuello, glioma maligno de alto grado recurrente o refractario, astrocitomas anaplásicos, glioblastomas y glioma pontino intrínseco difuso. Típicamente, el nimotuzumab se administra mediante infusión IV de aproximadamente 200 mg a la semana. Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir nimotuzumab, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 200 mg/ml.

El brentuximab vedotin (ADCETRIS®) es un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido a la proteína CD30, expresada en el linfoma de Hodgkin clásico y el linfoma anaplásico sistémico de células grandes. Se administra mediante infusión IV de aproximadamente 1,8 mg/kg. Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir brentuximab vedotina, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 80 mg/ml a aproximadamente 200 mg/ml.

El itolizumab (ALZUMAB®) es un mAb de IgG1 humanizado desarrollado por Biocon. El itolizumab completó con éxito estudios de fase III en pacientes con psoriasis moderada a grave. El itolizumab ha recibido la aprobación de comercialización en India; no se ha presentado una solicitud para la aprobación de la FDA.

El obinutuzumab (GAZYVA®), originalmente desarrollado por Roche y que está siendo desarrollado adicionalmente bajo un acuerdo de colaboración con Biogen es un mAb anti-CD20 humanizado aprobado para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica. También se está investigando en ensayos clínicos de fase III para pacientes con varios linfomas. Se administran dosificaciones de aproximadamente 1000 mg mediante infusión IV.

El certolizumab pegol (CIMZIA®) es un fragmento Fab' de anticuerpo humanizado recombinante, con especificidad para el factor de necrosis tumoral alfa (TNFa) humano, conjugado con un polietilenglicol de aproximadamente 40 kDa (PEG2MAL40K). El peso molecular del certolizumab pegol es de aproximadamente 91 kDa.

Otros agentes terapéuticos de anticuerpos que pueden formularse con agentes reductores de la viscosidad incluyen CT-P6 de Celltrion, Inc. (Celltrion).

Agentes terapéuticos de anticuerpos en ensayos de etapa avanzada y desarrollo

La progresión de los agentes terapéuticos de anticuerpos hacia el desarrollo clínico en etapa avanzada y la revisión reguladora avanza a un ritmo rápido. En 2014, hay más de 300 mAb en ensayos clínicos y 30 agentes terapéuticos de anticuerpos patrocinados comercialmente que se están evaluando en estudios de etapa avanzada. Recientemente, se presentaron a la FDA las primeras solicitudes de comercialización de dos mAb (vedolizumab y ramucirumab). Actualmente, Amgen patrocina múltiples ensayos de fase III en curso sobre el uso de brodalumab en pacientes con psoriasis en placas, con ensayos adicionales planificados o en reclutamiento de pacientes. XBiotech, Inc. ha patrocinado dos ensayos clínicos de fase I de MABp1 (Xilonix) para pacientes con cáncer avanzado o diabetes tipo 2. Los ensayos adicionales de MABp1 están reclutando pacientes. Múltiples ensayos están patrocinados por Medlmmune, LLC ("Medlmmune") y están en curso o reclutando pacientes para el tratamiento de la leucemia con moxetumomab pasudotox. Se están realizando estudios de seguridad y eficacia a largo plazo para el uso de tildrakizumab para el tratamiento de la psoriasis en placas crónica. Recientemente se han completado múltiples ensayos de fase II para el uso de rilotumumab para el tratamiento de varios cánceres.

Por lo menos 28 mAb son proteínas de alto peso molecular que se encuentran actualmente en estudios de fase III o que han finalizado recientemente para el tratamiento de enfermedades inflamatorias o trastornos inmunológicos, cánceres, colesterol alto, osteoporosis, enfermedad de Alzheimer y enfermedades infecciosas. Los mAbs en ensayos de fase III o que los han finalizado recientemente incluyen AMG 145, elotuzumab, epratuzumab, farletuzumab (MORAb-003), gantenerumab (RG1450), gevokizumab, inotuzumab ozogamicina, itolizumab, ixekizumab, lebrikizumab, mepolizumab, naptumomab estafenatox, necitumumab, nivolumab, ocrelizumab, onartuzumab, racotumomab, ramucirumab, reslizumab, romosozumab, sarilumab, secukinumab, sirukumab, solanezumab, tabalumab, y vedolizumab. También se está evaluando una mezcla de mAb (actoxumab y bezlotoxumab) en ensayos de fase III. Ver, por ejemplo, Reichert, MAbs 5:1-4, 2013.

El vedolizumab es un mAb que está siendo desarrollado por Millennium Pharmaceuticals, Inc ("Millennium"; una subsidiaria de Takeda Pharmaceuticals Company, Ltd. ("Takeda")). Se descubrió que el vedolizumab es seguro y altamente eficaz para inducir y mantener la remisión clínica en pacientes con colitis ulcerosa de moderada a grave. Los ensayos clínicos de fase III demostraron que cumple los objetivos de inducir una respuesta clínica y mantener la remisión en pacientes con enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa. Los estudios que evalúan los resultados clínicos a largo plazo muestran que cerca del 60% de los pacientes logran la remisión clínica. Una dosis común de vedolizumab es de 6 mg/kg por infusión IV.

El ramucirumab es un mAb humano que se está desarrollando para el tratamiento de tumores sólidos. Se están realizando ensayos clínicos de fase III para el tratamiento del cáncer de mama, adenocarcinoma gástrico metastásico, cáncer de pulmón de células no pequeñas y otros tipos de cáncer. El ramucirumab, en algunos ensayos de fase III, se administra a aproximadamente 8 mg/kg por infusión intravenosa.

El rilotumumab es un mAb humano que inhibe la acción del factor de crecimiento/factor de dispersión de hepatocitos. Desarrollado por Amgen, se encuentra en ensayos de fase III como tratamiento para tumores sólidos. En un estudio de fase III abierto del tratamiento con rilotumumab en pacientes con cáncer de esófago avanzado o metastásico se administrará rilotumumab a aproximadamente 15 mg/kg por infusión IV.

El evolocumab (AMG 145), también desarrollado por Amgen, es un mAb que se une a PCSK9. El evolocumab está indicado para la hipercolesterolemia y la hiperlipidemia.

El alirocumab (REGN727) es un mAb humano de Regeneron Pharmaceuticals, Inc. ("Regeneron") y Sanofi-Aventis US LLC ("Sanofi"), indicado para hipercolesterolemia y síndrome coronario agudo.

El naptumomab estafenatox, ABR-217620 de Active Biotech AB ("Active Biotech") es un mAb indicado para el carcinoma de células renales.

El racotumomab de CIMAB, SA ("CIMAB"); Laboratorio Elea S.A.C.I.F.y A. es un mAb indicado para el cáncer de pulmón de células no pequeñas.

Otros anticuerpos que pueden formularse con agentes reductores de la viscosidad incluyen bococizumab (PF-04950615) y tanezumab; ganitumab, blinatumomab, trebananib de Amgen; inmunoglobulina de ántrax de Cangene Corporation; teplizumab de MacroGenics, Inc.; MK-3222, MK-6072 de Merck & Co ("Merck"); girentuximab de Wilex AG; RIGScan de Navidea Biopharmaceuticals ("Navidea"); PF-05280014 de Pfizer; SA237 de Chugai Pharmaceutical Co. Ltd. ("Chugai"); guselkumab de Janssen/Johnson and Johnson Services, Inc. ("J&J"); Antitrombina Gamma (W-3357) de Kyowa;; y CT-P10 de Celltrion.

Anticuerpos en ensayos clínicos de etapa temprana

Muchos mAb han entrado recientemente, o están entrando, en ensayos clínicos. Pueden incluir proteínas que se administran actualmente mediante infusión IV, preferiblemente aquellas que tienen un peso molecular de más de aproximadamente 120 kDa, típicamente de aproximadamente 140 kDa a aproximadamente 180 kDa. También pueden incluir proteínas de alto peso molecular, como fármacos o péptidos conjugados con albúmina que también están entrando en ensayos clínicos o han sido aprobados por la FDA. Muchos mAb de Amgen se encuentran actualmente en ensayos clínicos. Estas pueden ser proteínas de alto peso molecular, por ejemplo, AMG 557, que es un anticuerpo monoclonal humano desarrollado conjuntamente por Amgen y AstraZeneca y actualmente en ensayos de fase I para el tratamiento del lupus. De igual manera, el AMG 729 es un mAb humanizado desarrollado por Amgen y actualmente en ensayos de fase I para el tratamiento del lupus y la artritis reumatoide. Adicionalmente, el AMG 110 es un mAb para la molécula de adhesión de células epiteliales; el AMG 157, desarrollado conjuntamente por Amgen y AstraZeneca, es un mAb humano actualmente en Fase I para el tratamiento del asma; el AMG 167 es un mAb humanizado que se ha evaluado en múltiples ensayos de fase I para el tratamiento de la osteopenia; el AMG 334, que ha completado los estudios de dosificación de fase I y actualmente en estudios de fase II para el tratamiento de migrañas y sofocos, es un mAb humano que inhibe el péptido relacionado con el gen de calcitonina; el AMG 780 es un mAb anti-angiopoyetina humano que inhibe la interacción entre el receptor Tie2 selectivo de células endoteliales y sus ligandos Ang1 y Ang2, y recientemente completó los ensayos de fase I como tratamiento contra el cáncer; el AMG 811 es un anticuerpo monoclonal humano que inhibe el interferón gamma que está siendo investigado como tratamiento para el lupus eritematoso sistémico; el AMG 820 es un mAb humano que inhibe c-fms y disminuye la función de macrófagos asociada a tumores (TAM) y se está investigando como tratamiento contra el cáncer; el AMG 181, desarrollado conjuntamente por Amgen y AstraZeneca, es un mAb humano que inhibe la acción de alfa4/beta7 y se encuentra en ensayos de fase II como tratamiento para la colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn.

Muchos mAb se encuentran actualmente en ensayos clínicos para el tratamiento de trastornos autoinmunes. Estos mAb pueden incluirse en formulaciones líquidas de baja viscosidad y alto peso molecular. El RG7624 es un mAb completamente humano diseñado para unirse específica y selectivamente a la familia de la interleucina-17 humana de las citoquinas. Está en curso un ensayo clínico de fase I que evalúa el RG7624 para enfermedades autoinmunes. El BIIB033 es un mAb anti-LINGO-1 de Biogen actualmente en ensayos de fase II para el tratamiento de la esclerosis múltiple.

Las proteínas de alto peso molecular también pueden incluir AGS-009, un mAb dirigido a IFN-alfa desarrollado por Argos Therapeutics, Inc. que ha completado recientemente los ensayos de fase I para el tratamiento del lupus. A los pacientes se les administran hasta 30 mg/kg de AGS-009 mediante infusión IV. El BT-061, desarrollado por Abb Vie, está en ensayos de fase II para pacientes con artritis reumatoide. El certolizumab pegol (CIMZIA®) es un mAb en ensayos de fase II para la espondilitis anquilosante y la artritis reumatoide juvenil. El clazakizumab, un mAb anti-IL6, está en ensayos de fase II por Bristol-Myers Squibb,

El CNTO-136 (sirukumab) y el CNTO-1959 son mAB que han completado recientemente los ensayos de fase II y fase III por Janssen. El daclizumab (anteriormente comercializado como ZENAPAX® por Roche) se encuentra actualmente o ha completado recientemente múltiples ensayos de fase III por ABB Vie para el tratamiento de la esclerosis múltiple. El epratuzumab es un mAb humanizado en ensayos de fase III para el tratamiento del lupus. El canakinumab (ILARIS®) es un mAb humano dirigido a la interleucina-1 beta. Ha sido aprobado para el tratamiento de síndromes periódicos asociados con la criopirina. El canakinumab se encuentra en ensayos de fase I como posible tratamiento para la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, la gota y la enfermedad de las arterias coronarias. El mavrilimumab es un mAb humano diseñado para el tratamiento de la artritis reumatoide. El mavrilimumab, descubierto como CAM-3001 por Cambridge Antibody Technology, está siendo desarrollado por Medlmmune.

El MEDI-546 y el MEDI-570 son mAb actualmente en ensayos de fase I y fase II por AstraZeneca para el tratamiento del lupus. El MEDI-546 se administra en el estudio de fase II mediante infusiones IV regulares de 300­ 1000 mg. El MEDI-551, otro mAb que está siendo desarrollado por AstraZeneca para numerosas indicaciones, también se administra actualmente por infusión IV. El NN8209, un mAb que bloquea el receptor de C5aR en desarrollo por Novo Nordisk A/S ("Novo Nordisk''), ha completado un estudio de dosificación de fase II para el tratamiento de la artritis reumatoide. El NN8210 es otro mAb antiC5aR que está siendo desarrollado por Novo Nordisk y actualmente se encuentra en ensayos de fase I. El IPH2201 (NN8765) es un mAb humanizado dirigido a NKG2A que está siendo desarrollado por Novo Nordisk para tratar pacientes con afecciones inflamatorias y enfermedades autoinmunes. El NN8765 ha completado recientemente los ensayos de Fase I.

El olokizumab es un mAb humanizado que se dirige de manera potente a la citoquina IL-6. La IL-6 está implicada en varias vías autoinmunes e inflamatorias. El olokizumab ha completado los ensayos de fase II para el tratamiento de la artritis reumatoide. El otelixizumab, también conocido como TRX4, es un mAb, que se está desarrollando para el tratamiento de la diabetes tipo 1, la artritis reumatoide y otras enfermedades autoinmunes. El ozoralizumab es un mAb humanizado que ha completado ensayos de fase II.

Actualmente, Pfizer tiene ensayos de fase I para los mAb PD-360324 y PF-04236921 para el tratamiento del lupus. Pfizer ha desarrollado un biosimilar de rituximab, el PF-05280586, que se encuentra en ensayos de fase I/II para la artritis reumatoide.

El rontalizumab es un mAb humanizado que está siendo desarrollado por Genentech. Recientemente completó los ensayos de fase II para el tratamiento del lupus. El SAR113244 (anti-CXCR5) es un mAb de Sanofi en ensayos de fase I. El sifalimumab (mAb anti-IFN-alfa) es un mAb en ensayos de fase II para el tratamiento del lupus.

Una formulación líquida de alto peso molecular y baja viscosidad puede incluir uno de los mAb en desarrollo clínico en etapa temprana para tratar varios trastornos sanguíneos. Por ejemplo, el belimumab (BENLYSTA®) ha completado recientemente los ensayos de fase I para pacientes con vasculitis. Otros mAb en ensayos de etapa temprana para trastornos sanguíneos incluyen el BI-655075 de Boehringer Ingelheim GmbH "Boehringer Ingelheim'', mAb de ferroportina y mAb de hepcidina de Eli Lily y el SelG1 de Selexys Pharmaceuticals, Corp. (''Selexys").

En una formulación líquida de baja viscosidad y alto peso molecular pueden incluirse uno o más mAb en etapa temprana de desarrollo para tratar varios cánceres y afecciones relacionadas. United Therapeutics, Corporation tiene dos mAb en ensayos de fase I, el mAb 8H9 y el mAb chl4.18. Los mAb ABT-806, enavatuzumab y volociximab de AbbVie se encuentran en desarrollo en etapa temprana. Actinium Pharmaceuticals, Inc ha realizado ensayos en etapa temprana para los mAb Actimab-A (mAb M195), mAb anti-CD45 e Iomab-B. Seattle Genetics, Inc. (''Seattle Genetics") tiene varios mAb en ensayos de etapa temprana para el cáncer y afecciones relacionadas, incluyendo el ADC anti-CD22 (RG7593; pinatuzumab vedotin), ADC anti-CD79b (RG7596), ADC anti-STEAPl (RG7450), ASG-5ME y ASG-22ME de Agensys, Inc. (''Agensys") el conjugado anticuerpo-fármaco RG7458 y vorsetuzumab mafodotin. Los agentes terapéuticos contra el cáncer en etapa temprana de Genentech pueden incluirse en formulaciones de baja viscosidad, incluyendo el ALT-836, los conjugados anticuerpo-fármaco RG7600 y DEDN6526A, ADC anti-CD22 (RG7593), mAb anti-EGFL7 (RG7414), mAb anti-HER3/EGFR DAF (RG7597), mAb anti-PD-Ll (RG7446), DFRF4539A, un MINT1526A. Bristol-Myers Squibb está desarrollando mAb en etapa temprana para agentes terapéuticos contra el cáncer, incluyendo los identificados como anti-CXCR4, anti-PD-Ll, IL-21 (BMS-982470), lirilumab y urelumab (anti-CD137). Otros mAb en ensayos en etapa temprana como agentes terapéuticos contra el cáncer incluyen APN301 (hul4.18-IL2) de Apeiron Biologies AG, AV-203 de AVEO Pharmaceuticals, Inc. ("AVEO"), AVX701 y AVX901 de AlphaVax, Ba X-69 de Baxter International, Inc. ("Baxter"), BAY 79-4620 y Ba Y 20­ 10112 de Bayer HealthCare AG, BHQ880 de Novartis AG, 212-Pb-TCMCtrastuzumab de AREVA Med, AbGn-7 de AbGenomics International Inc, y ABIO-0501 (TALL-104) de Abiogen Pharma S.p.A.

Otras agentes terapéuticos de anticuerpos que pueden formularse con agentes reductores de la viscosidad incluyen alzumab, GA101, daratumumab, siltuximab, ALX-0061, ALX-0962, ALX-0761, bimagumab (BYM338), CT-011 (pidilizumab), actoxumab/bezlotoxumab (MK-3515A), MK-3475 (pembrolizumab), dalotuzumab (MK-0646), icrucumab (IMC-18F1, LY3012212), AMG 139 (MEDI2070), SAR339658, dupilumab (REGN668), SAR156597, SAR256212, SAR279356, SAR3419, SAR153192 (REGN421, enoticumab), SAR307746 (nesvacumab), SAR650984, SAR566658, SAR391786, SAR228810, SAR252067, SGN-CD19A, SGN-CD33A, SGN-LIV1A, ASG 15ME, Anti-LINGO, BIIB037, ALXN1007, teprotumumab, concizumab, anrukinzumab (IMA-638), ponezumab (PF-04360365), PF-03446962, PF-06252616, etrolizumab (RG7413), quilizumab, ranibizumab, lampalizumab, onclacumab, gentenerumab, crenezumab (RG7412), IMCRON8 (narnatumab), tremelimumab, vantictumab, eemcizumab, ozanezumab, mapatumumab, tralokinumab, XmAb5871, XmAb7195, cixutumumab (LY3012217), LY2541546 (blosozumab), olaratumab (LY3012207), MEDI4893, MEDI573, MEDI0639, MEDI3617, MEDI4736, MEDI6469, MEDI0680, MEDI5872, PF-05236812 (AAB-003), PF-05082566, BI 1034020, RG7116, RG7356, RG7155, RG7212, RG7599, RG7636, RG7221, RG7652 (MPSK3169A), RG7686, HuMaxTFADC, MOR103, BT061, MOR208, OMP59R5 (anti-notch 2/3), VAY736, MOR202, BAY94-9343, LJM716, OMP52M51, GSK933776, GSK249320, GSK1070806, NN8828, CEP-37250/KHK2804 AGS-16M8F, AGS-16C3F, LY3016859, LY2495655, LY2875358, y LY2812176.

Otros mAb en etapa temprana que pueden formularse con agentes reductores de la viscosidad incluyen benralizumab, MEDI-8968, anifrolumab, MEDI7183, sifalimumab, MEDI-575, tralokinumab de AstraZeneca y Medlmmune; BAN2401 de Biogen Idec/Eisai Co. LTD ("Eisai")/ BioArctic Neuroscience AB; CDP7657 un fragmento de anticuerpo Fab pegilado monovalente anti-CD40L, St X-100 un mAb anti-avB6, BIIB059, Anti-TWEAK (BIIB023), yBIIB022 de Biogen; fulranumab de Janssen y Amgen; BI-204/RG7418 de Biolnvent International/Genentech; BT-062 (indatuximab ravtansine) de Biotest Pharmaceuticals Corporation; XmAb de Boehringer Ingelheim/Xencor; anti-IP10 de Bristol-Myers Squibb; J 591 Lu-177 de BZL Biologics LLC; CDX-011 (glembatumumab vedotin), CDX-0401 de Celldex Therapeutics; foravirumab de Crucell; tigatuzumab de Daiichi Sankyo Company Limited; MORAb-004, MORAb-009 (amatuximab) de Eisai; LY2382770 de Eli Lilly; DI17E6 de EMD Serono Inc; zanolimumab de Emergent BioSolutions, Inc.; FG-3019 de FibroGen,Inc.; catumaxomab de Fresenius SE & Co. KGaA; pateclizumab, rontalizumab de Genentech; fresolimumab de Genzyme & Sanofi; GS-6624 (simtuzumab) de Gilead; CNTO-328, bapineuzumab (AAB-001), carlumab, CNTO-136 de Janssen; KB003 de KaloBios Pharmaceuticals, Inc.; ASKP1240 de Kyowa; RN-307 de Labrys Biologics Inc.; ecromeximab de Life Science Pharmaceuticals; LY2495655, LY2928057, LY3015014, LY2951742 de Eli Lilly; MBL-HCV1 de MassBiologics; AME-133v de MEN-TRIK Biotech, LLC; abituzumab de Merck KGaA; MM-121 de Merrimack Pharmaceuticals, Inc.; MCS110, QAX576, QBX258, QGE031 de Novartis AG; HCD122 de Novartis AG y XOMA Corporation ("XOMA"); NN8555 de Novo Nordisk; bavituximab, cotara de Peregrine Pharmaceuticals, Inc.; PSMA-ADC de Progenics Pharmaceuticals, Inc.; oregovomab de Quest Pharmatech, Inc.; fasinumab (REGN475), REGN1033, SAR231893, REGN846 de Regeneron; RG7160, CIM331, RG7745 de Roche; ibalizumab (TMB-355) de TaiMed Biologics Inc.; TCN-032 de Theraclone Sciences; TRC105 de TRACON Pharmaceuticals, Inc.; UB-421 de United Biomedical Inc.; VB4-845 de Viventia Bio, Inc.; ABT-110 de AbbVie; Caplacizumab, Ozoralizumab de Ablynx; PRO 140 de CytoDyn, Inc.; GS-CDA1, MDX-1388 de Medarex, Inc.; AMG 827, AMG 888 de Amgen; ublituximab de TG Therapeutics Inc.; TOL101 de Tolera Therapeutics, Inc.; huN901-DM1 (lorvotuzumab mertansine) de ImmunoGen Inc.; combinación de epratuzumab Y-90/veltuzumab (IMMU-102) de Immunomedics, Inc.; mAb anti-fibrina/3B6/22 Tc-99m de Agenix, Limited; ALD403 de Alder Biopharmaceuticals, Inc.; RN6G/ PF-04382923 de Pfizer; CG201 de CG Therapeutics, Inc.; KB001-A de KaloBios Pharmaceuticals/Sanofi; KRN-23 de Kyowa.; Y-90 hPAM 4 de Immunomedics, Inc.; Tarextumab de Morphosys AG & OncoMed Pharmacetuicals, Inc.; LFG316 de Morphosys AG & Novartis AG; CNTO3157, CNTO6785 de Morphosys AG & Jannsen; RG6013 de Roche & Chugai; MM-111 de Merrimack Pharmaceuticals, Inc. ("Merrimack"); GSK2862277 de GlaxoSmithKline; AMG 282, AMG 172, AMG 595, AMG 745, AMG 761 de Amgen; BVX-20 de Biocon; CT-P19, CT-P24, CT-P25, CT-P26, CT-P27, CT-P4 de Celltrion; GSK284933, GSK2398852, GSK2618960, GSK1223249, GSK933776A de GlaxoSmithKline; anetumab ravtansine de Morphosys AG & Bayer AG; BI-836845 de Morphosys AG & Boehringer Ingelheim; NOV-7, NOV- 8 de Morphosys AG & Novartis AG; MM-302, MM-310, MM-141, MM-131, MM-151 de Merrimack, RG7882 de Roche & Seattle Genetics; RG7841 de Roche/Genentech; PF-06410293, PF-06438179, PF-06439535, PF-04605412, PF-05280586 de Pfizer; RG7716, RG7936, gentenerumab, RG7444 de Roche; MEDI-547, MEDI-565, MEDI1814, MEDI4920, MEDI8897, MEDI-4212, MEDI-5117, MEDI-7814 de Astrazeneca; ulocuplumab, PCSK9 adnectin de Bristol-Myers Squibb; FPA009, FPA145 de FivePrime Therapeutics, Inc.; GS-5745 de Gilead; BIW-8962, KHK4083, KHK6640 de Kyowa Hakko Kirin; MM-141 de Merck KGaA; REGN1154, REGN1193, REGN1400, REGN1500, REGN1908-1909, REGN2009, REGN2176-3, REGN728 de Regeneron; SAR307746 de Sanofi; SGN-CD70A de Seattle Genetics; ALX-0141, ALX-0171 de Ablynx; milatuzumab-DOX, milatuzumab, TF2, de Immunomedics, Inc.; MLN0264 de Millennium; ABT-981 de AbbVie; AbGn-168H de AbGenomics International Inc.; ficlatuzumab de AVEO; BI-505 de Biolnvent International; CDX-1127, CDX-301 de Celldex Therapeutics; CLT-008 de Cellerant Therapeutics Inc.; VGX-100 de Circadian; U3-1565 de Daiichi Sankyo Company Limited; DKN-01 de Dekkun Corp.; flanvotumab (proteína TYRP1), anticuerpo IL-1 p, IMC-CS4 de Eli Lilly; mAb VEGFR3, IMC-TR1 (LY3022859) de Eli Lilly e ImClone, LLC; Anthim de Elusys Therapeutics Inc.; HuL2G7 de Galaxy Biotech LLC; IMGB853, IMGN529 de ImmunoGen Inc.; CNTO-5, CNTO-5825 de Janssen; KD-247 de Kaketsuken; KB004 de KaloBios Pharmaceuticals; MGA271, MGAH22 de MacroGenics, Inc.; XmAb5574 de MorphoSys AG/Xencor; ensituximab (NPC-1C) de Neogenix Oncology, Inc.; LFA102 de Novartis AG y XOMA; ATI355 de Novartis AG; SAN-300 de Santarus Inc.; SelG1 de Selexys; HuM195/rGel de Targa Therapeutics, Corp.; VX15 de Teva Pharmaceuticals, Industries Ltd. ("Teva") and Vaccinex Inc.; TCN-202 de Theraclone Sciences; XmAb2513, XmAb5872 de Xencor; x OmA 3AB de XOMA y National Institute for Allergy and Infectious Diseases; vacuna de anticuerpos de neuroblastoma de MabVax Therapeutics; Cytolin de CytoDyn, Inc.; Thravixa de Emergent BioSolutions Inc.; y FB 301 de Cytovance Biologics; mAb de la rabia de Janssen y Sanofi; mAb de la gripe de Janssen y financiado parcialmente por National Institutes of Health; MB-003 y ZMapp de Mapp Biopharmaceutical, Inc.; y ZMAb de Defyrus Inc.

Otras agentes terapéuticos de proteínas

En la presente invención, la proteína es un anticuerpo. También se divulgan formulaciones, pero no forman parte de la invención, en las que la proteína puede ser una enzima, una proteína de fusión, una proteína furtiva o pegilada, una vacuna o una proteína biológicamente activa de otro modo (o una mezcla de proteínas). El término "enzima", como se usa en la presente, se refiere a la proteína o fragmento funcional de la misma que cataliza una transformación bioquímica de una molécula objetivo en un producto deseado.

Las enzimas como fármacos tienen por lo menos dos características importantes, concretamente i) a menudo se unen y actúan sobre sus objetivos con alta afinidad y especificidad, y ii) son catalíticas y convierten múltiples moléculas objetivo en los productos deseados. En ciertas realizaciones, la proteína puede PEGilarse, como se define en la presente.

El término "proteína de fusión", como se usa en la presente, se refiere a una proteína que se crea a partir de dos genes diferentes que codifican dos proteínas separadas. Las proteínas de fusión se producen generalmente mediante técnicas de ADN recombinante conocidas por los expertos en la técnica. Dos proteínas (o fragmentos de proteínas) se fusionan covalentemente entre sí y muestran propiedades de ambas proteínas originales.

Hay una serie de proteínas de fusión que están en el mercado.

El ENBREL® (etanercept), es una proteína de fusión comercializada por Amgen que inhibe competitivamente TNF.

El ELOCTATE®, factor antihemofílico (recombinante), proteína de fusión Fc, es un factor antihemofílico derivado de ADN recombinante indicado en adultos y niños con hemofilia A (deficiencia del factor VIII congénita) para el control y prevención de episodios de sangrado, manejo perioperatorio, profilaxis rutinaria o reducir la frecuencia de episodios de sangrado.

El EYLEA® (afiibercept) es una proteína de fusión recombinante que consiste de porciones de los dominios extracelulares de los receptores 1 y 2 de VEGF humanos fusionados con la porción Fc de la IgG 1 humana formulada como una solución isoosmótica para administración intravítrea. El EYLEA (afiibercept) es una proteína de fusión recombinante que consiste de porciones de dominios extracelulares de los receptores 1 y 2 de VEGF humanos fusionados con la porción Fc de IgG1 humana formulada como una solución isoosmótica para administración intravítrea. El afiibercept es una glicoproteína dimérica con un peso molecular de proteína de 97 kilodaltons (kDa) y contiene glicosilación, lo que constituye un 15% adicional de la masa molecular total, lo que da como resultado un peso molecular total de 115 kDa. El afiibercept se produce en células recombinantes de ovario de hámster chino (CHO), comercializado por Regeneron.

El ALPROLIX™, factor de coagulación IX (recombinante), proteína de fusión Fc, es un concentrado de factor IX de coagulación derivado de ADN recombinante indicado en adultos y niños con hemofilia B para el control y prevención de episodios de sangrado, manejo perioperatorio, profilaxis de rutina para prevenir o reducir la frecuencia de episodios de sangrado.

La pegloticasa ((KRYSTEXXA®) es un medicamento para el tratamiento de gota crónica refractaria al tratamiento grave, desarrollado por Savient Pharmaceuticals, Inc. y es el primer fármaco aprobado para esta indicación. La pegloticasa es una uricasa de tipo porcino recombinante pegilada con un peso molecular de aproximadamente 497 kDa. La pegloticasa se administra actualmente mediante infusiones IV de aproximadamente 8 mg/kg. Las formulaciones líquidas de alto peso molecular y baja viscosidad pueden incluir pegloticasa, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 300 mg/ml a aproximadamente 800 mg/ml.

La alteplasa (ACTIVASE®) es un activador del plasminógeno tisular producido por tecnología de ADN recombinante. Es una glicoproteína purificada que comprende 527 aminoácidos y sintetizada usando el ADN complementario (ADNc) para el activador del plasminógeno de tipo tisular humano natural obtenido de una línea celular de melanoma humano. La alteplasa se administra mediante infusión IV de aproximadamente 100 mg inmediatamente después de los síntomas de un ataque cerebral. En algunas realizaciones, se proporcionan formulaciones de baja viscosidad que contienen alteplasa, preferiblemente en una concentración de aproximadamente 100 mg/ml.

La glucarpidasa (VORAXAZE®) es un fármaco aprobado por la FDA para el tratamiento de niveles elevados de metotrexato (definido como por lo menos 1 micromol/l) durante el tratamiento de pacientes con cáncer que tienen una función renal deteriorada. La glucarpidasa se administra por vía IV en una única dosis de aproximadamente 50 UI/kg. En algunas realizaciones, se proporcionan formulaciones de baja viscosidad que contienen glucarpidasa.

La alglucosidasa alfa (LUMIZYME®) es un fármaco huérfano de terapia de reemplazo enzimático para el tratamiento de la enfermedad de Pompe (enfermedad de almacenamiento de glucógeno tipo II), un trastorno de almacenamiento lisosómico raro. Tiene un peso molecular de aproximadamente 106 kDa y actualmente se administra mediante infusiones IV de aproximadamente 20 mg/kg. En algunas realizaciones, se proporciona una formulación farmacéutica de alglucosidasa alfa de baja viscosidad, preferiblemente con una concentración de aproximadamente 100 mg/ml a aproximadamente 2000 mg/ml.

La pegdamasa bovina (ADAGEN®) es una enzima modificada usada para la terapia de reemplazo de enzimas para el tratamiento de enfermedad de inmunodeficiencia combinada grave (SCID) asociada con una deficiencia de adenosina desaminasa. La pegdamasa bovina es un conjugado de numerosas cadenas de monometoxipolietilenglicol (PEG), de 5000 Da de peso molecular, unidas covalentemente a la enzima adenosina desaminasa que se deriva del intestino bovino.

La a-galactosidasa es una enzima lisosomal que cataliza la hidrólisis del glicolípido, globotriaosilceramida (GL-3), a galactosa y ceramida dihexósido. La enfermedad de Fabry es una enfermedad de almacenamiento lisosomal hereditaria poco común caracterizada por una actividad enzimática anormal de la a-galactosidasa y la acumulación resultante de GL-3. La agalsidasa alfa (REPLAGAL®) es una enzima a-galactosidasa A humana producida por una línea celular humana. La galsidasa beta (FABRAZYME®) es una a-galactosidasa humana recombinante expresada en una línea celular de CHO. El replagal se administra a una dosis de 0,2 mg/kg cada dos semanas mediante infusión intravenosa para el tratamiento de la enfermedad de Fabry y, fuera de indicación, para el tratamiento de la enfermedad de Gaucher. El FABRAZYME® se administra a una dosis de 1,0 mg/kg de peso corporal cada dos semanas mediante infusión IV. También pueden usarse otras enzimas lisosomales. Por ejemplo, la proteína puede ser una enzima lisosomal como se describe en la US 2012/0148556.

La rasburicasa (ELITEK®) es un urato-oxidasa recombinante indicada para el manejo inicial de los niveles de ácido úrico en plasma en pacientes pediátricos y adultos con leucemia, linfoma y enfermedades malignas de tumores sólidos que están recibiendo terapia anticáncer que se espera que dé como resultado la lisis tumoral y la posterior elevación de ácido úrico en plasma. EL ELITEK® se administra por infusión diaria IV en una dosis de 0,2 mg/kg.

La imiglucerasa (CEREZYME®) es un análogo recombinante de p-glucocerebrosidasa humana. Las dosificaciones iniciales varían de 2,5 U/kg de peso corporal 3 veces por semana a 60 U/kg una vez cada 2 semanas. El CEREZYME® se administra por infusión IV.

El abraxane, albúmina conjugada con paclitaxel, está aprobado para cáncer de mama metastásico, cáncer de pulmón de células no pequeñas y cáncer de páncreas en etapa avanzada.

La taliglucerasa alfa (ELEYSO®) es una enzima específica de glucocerebrosida lisosomal hidrolítica indicada para la terapia de reemplazo enzimático a largo plazo para la enfermedad de Gaucher Tipo 1. La dosis recomendada es de 60 U/kg de peso corporal administrados una vez cada 2 semanas mediante infusión intravenosa.

La laronidasa (ALDURAZYME®) es una variante polimórfica de la enzima humana a-L-iduronidasa que se produce a través de una línea celular de CHO. El régimen de dosificación recomendado de ALDURAZYME® es de 0,58 mg/kg administrados una vez a la semana como una infusión intravenosa.

La elosufasa alfa (VIMIZIM®) es una N-acetilgalactosamina-6-sulfatasa humana producida por la línea celular de CHO por BioMarin Pharmaceuticals Inc (''BioMarin''). Fue aprobada por la FDA el 14 de febrero de 2014 para el tratamiento de la mucopolisacaridosis tipo IVA. Se administra semanalmente por infusión intravenosa a una dosis de 2 mg/kg. Otros agentes biológicos que pueden formularse con los agentes reductores de la viscosidad, pero que no forman parte de la invención, incluyen asparaginasa erwinia chrysanthemi (ERWINAZE®), incobotulinumtoxin A (XEO-MIN®), EPOGEN® (epoetina Alfa), PROCRIT® (epoetin Alfa), ARANESP® (darbepoetina alfa), ORENCIA® (abatacept), Ba TASERON® (interferon beta-lb), NAGLAZYME® (galsulfasa); ElAp RASE® (Idursulfasa); MYOZYME® (LUMIZYME®, algucosidasa alfa); V^p RⁱV® (velaglucerasa), abobotulinumtoxina A (DYS^pO^rT®); BAX-326, Octocog alfa de Baxter; Syncria de GlaxoSmithKline; liprotamasa de Eli Lilly; Xiaflex (colagenasa clostridium histolyticum) de Auxilium y BioSpecifics Technologies Corp.; anakinra de Swedish Orphan Biovitrum AB; metreleptina de Bristol-Myers Squibb; Avonex, Plegridy (BIIB017) de Biogen; NN1841, NN7008 de Novo Nordisk; KRN321 (darbepoetin alfa), AMG531 (romiplostim), KRN125 (pegfilgrastim), KW-0761 (mogamulizumab) de Kyowa; IB1001 de Inspiration Biopharmaceuticals; Iprivask de Canyon Pharmaceuticals Group.

Agentes terapéuticos de proteínas en desarrollo

En la presente invención, la proteína es un anticuerpo. Otras proteínas divulgadas, que no forman parte de la invención incluyen la VRS-317 de Versartis, Inc. que es una proteína de fusión de hormona de crecimiento humana recombinante (hGH) que utiliza la tecnología de extensión de la vida media XTEN. Su objetivo es reducir la frecuencia de las inyecciones de hGH necesarias para los pacientes con deficiencia de hGH. La VRS-317 ha completado un estudio de fase II, comparando su eficacia con inyecciones diarias de hGH no derivatizada, con resultados positivos. Están planeados estudios de fase III.

La vibriolisina es una enzima proteolítica secretada por el microorganismo marino Gram-negativo, Vibrio proteolyticus. Esta endoproteasa tiene una afinidad específica por las regiones hidrófobas de las proteínas y es capaz de escindir proteínas adyacentes a los aminoácidos hidrófobos. La vibriolisina está siendo investigada actualmente por BioMarin para la limpieza y/o tratamiento de quemaduras. Las formulaciones de vibriolisina se describen en la patente WO 02/092014.

La PEG-PAL (fenilalanina amoniaco liasa recombinante PEGilada o "PAL") es una terapia de sustitución enzimática en investigación para el tratamiento de la fenilcetonuria (PKU), una enfermedad metabólica hereditaria provocada por una deficiencia de la enzima fenilalanina hidroxilasa (PAH). La PEG-PAL está siendo desarrollada como un tratamiento potencial para pacientes cuyos niveles de fenilalanina (Phe) en sangre no son adecuadamente controlados por el KUVAN®. La PEG-PAL se encuentra ahora en fase 2 de desarrollo clínico para tratar a pacientes que no responden adecuadamente al KUVAN®.

Otras proteínas terapéuticas divulgadas que pueden formularse con agentes reductores de la viscosidad, pero que no forman parte de la invención, incluyen Alprolix/rFIXFc, Eloctate/rFVIIIFc, BMN-190; BMN-250; Lamazyme; Galazyme; ZA-011; Sebelipase alfa; SBC-103; y HGT-1110. Además, las proteínas de fusión que contienen la tecnología de extensión de la vida media XTEN incluyen, pero no están limitadas a: VRS-317 GH-XTEN; Factor VIIa, Factor VIII, Factor IX; PF05280602, VRS-859; Exenatide-XTEN; AMX-256; GLP2-2G/XTEN; y AMX-179 Folato-XTEN-DM1 pueden formularse con agentes reductores de la viscosidad, pero no forman parte de la invención.

Otros agentes terapéuticos de proteínas en etapa avanzada divulgados que pueden formularse con agentes reductores de la viscosidad pero que no forman parte de la invención incluyen CM-AT de CureMark LLC; NN7999, NN7088, Liraglutide (NN8022), n N9211, Semaglutide (NN9535) de Novo Nordisk; AMG 386, Filgrastim de Amgen; CSL-654, Factor VIII de CSL Behring; LA-EP2006 (biosimilar de pegfilgrastim) de Novartis AG; Multikine (interleucina de leucocitos) de CEL-SCI Corporation; LY2605541, Teriparatide (PTH 1-34 recombinante) de Eli Lilly; NU-100 de Nuron Biotech, Inc.; Calaspargasa Pegol de Sigma-Tau Pharmaceuticals, Inc.; ADI-PEG-20 de Polaris Pharmaceuticals, Inc.; BMN-110, BMN-702 de BioMarin; NGR-TNF de Molmed S.p.A.; inhibidor de esterasa C1 recombinante humana de Pharming Group/Santarus Inc.; biosimilar de Somatropin de LG Life Sciences LTD; Natpara de NPS Pharmaceuticals, Inc.; ART123 de Asahi Kasei Corporation; BAX-111 de Baxter; OBI-1 de Inspiration Biopharmaceuticals; Wilate de Octapharma AG; Talactoferrina alfa de Agennix AG; Desmoteplasa de Lundbeck; Cinryze de Shire; RG7421 de Roche y Exelixis, Inc.; Midostaurin (PKC412) de Novartis AG; Damoctocog alfa pegol, BAY 86-6150, BAY 94-9027 de Bayer AG; Peginterferon lambda-1a, Nulojix (Belatacept) de Bristol-Myers Squibb; Pergoveris, Corifollitropin alfa (MK-8962) de Merck KGaA; proteína de fusión Fc de Factor IX de coagulación recombinante (rFIXFc; BIIB029) y proteína de fusión Fc de Factor VIII de coagulación recombinante (rFVIIIFc; BIIB031) de Biogen; y Myalept de AstraZeneca.

Otros agentes biológicos de proteínas en etapa avanzada divulgados que pueden formularse con agentes reductores de la viscosidad, pero que no forman parte de la invención incluyen Alferon LDO de Hemispherx BioPharma, Inc.; SL-401 de Stemline Therapeutics, Inc.; PRX-102 de Protalix Biotherapeutics, Inc.; KTP-001 de Kaketsuken/Teijin Pharma Limited; Vericiguat de Bayer AG; BMN-111 de BioMarin; ACC-001 (PF-05236806) de Janssen; LY2510924, LY2944876 de Eli Lilly; NN9924 de Novo Nordisk; péptido de INGAP de Exsulin; ABT-122 de Abbvie; AZD9412 de AstraZeneca; NEUBLASTIN (BG00010) de Biogen; Luspatercept (ACE-536), Sotatercept (ACE-011) de Celgene Corporation; inmunoterapéutico PRAME de GlaxoSmithKline; acetato de Plovamer (PI-2301) de Merck KGaA; PREMIpLEX (607) de Shire; BMN-701 de BioMarin; Ontak de Eisai; rHuPH20/insulina de Halozyme, Inc.; PB-1023 de PhaseBio Pharmaceuticals, Inc.; ALV-003 de Alvine Pharmaceuticals Inc. y Abbvie; NN8717 de Novo Nordisk; PRT-201 de Proteon Therapeutics Inc.; PEGPH20 de Halozyme, Inc.; Amevive® alefacept de Astellas Pharma Inc.; F-627 de Regeneron; AGN-214868 (senrebotase) de Allergan, Inc.; BAX-817 de Baxter; PRT4445 de Portola Pharmaceuticals, Inc.; VEN100 de Ventria Bioscience; Onconasa/ranpirnasa de Tamir Biotechnology Inc.; infusión de interferon alfa-2b de Medtronic, Inc.; sebelipase alfa de Synageva BioPharma; IRX-2 de IRX Therapeutics, Inc.; GSK2586881 de GlaxoSmithKline; SI-6603 de Seikagaku Corporation; ALXN1101, asfotasa alfa de Alexion; SHP611, SHP609 (Elaprasa, idursulfasa) de Shire; PF-04856884, Pf-05280602 de Pfizer; ACE-031, Dalantercept de Acceleron Pharma; ALT-801 de Altor BioScience Corp.; BA-210 de BioAxone Biosciences, Inc.; immunoterapeútico WT1 de GlaxoSmithKline; GZ402666 de Sanofi; MSB0010445, Atacicept de Merck KGaA; Leucina (sargramostim) de Bayer AG; KUR-211 de Baxter; factor de crecimiento de fibroblastos-1 de CardioVascular BioTherapeutics Inc.; SPI-2012 de Hanmi Pharmaceuticals Co., LTD /Spectrum Pharmaceuticals; FGF-18 (sprifermin) de Merck KGaA; MK-1293 de Merck; interferon-alfa-2b de HanAll Biopharma; CYT107 de Cytheris SA; RT001 de Revance Therapeutics, Inc.; MEDI6012 de AztraZeneca; E2609 de Biogen; BMN-190, ^b Mⁿ -270 de BioMarin; ACE-661 de Acceleron Pharma; AMG 876 de Amgen; GSK3052230 de GlaxoSmithKline; RG7813 de Roche; SAR342434, Lantus de Sanofi; AZ01 de Allozyne Inc.; ARX424 de Ambrx, Inc.; FP-1040, FP-1039 de FivePrime Therapeutics, Inc.; ATX-MS-1467 de Merck KGaA; proteínas de fusión de XTEN de Amunix Operating Inc.; entolimod (CBLB502) de Cleveland BioLabs, Inc.; HGT2310 de Shire; HM10760A de Hanmi Pharmaceuticals Co., LTD; ALXN1102/ALXN1103 de Alexion; C^s L-689, CSL-627 de CSL Behring; factor de crecimiento glial 2 de Acorda Therapeutics, Inc.; NX001 de Nephrx Corporation; NN8640, NN1436, NN1953, NN9926, NN9927, NN9928 de Novo Nordisk; NHS-IL 12 de eMd Serono; 3K3A-APC de ZZ Biotech lLc ; PB-1046 de PhaseBio Pharmaceuticals, Inc.; RU-101 de R-Tech Ueno, Ltd.; insulina lispro/BC106 de Adocia; hl-con1 de Iconic Therapeutics, Inc.; PRT-105 de Protalix BioTherapeutics, Inc.; PF-04856883, CVX-096 de Pfizer; ACP-501 de AlphaCore Pharma LLC; BAX-855 de Baxter; CdX-1135 de Celldex Therapeutics; PRM-151 de Promedior, Inc.; TS01 de Thrombolytic Science International; TT-173 de Thrombotargets Corp.; QBI-139 de Quintessence Biosciences, Inc.; Vatelizumab, GBR500, GBR600, GBR830, and GBR900 de Glenmark Pharmaceuticals; y CYT-6091 de Cytimmune Sciences, Inc.

Otros agentes biológicos

Otros fármacos biológicos divulgados que pueden formularse con agentes reductores de la viscosidad, pero que no forman parte de la invención, incluyen PF-05285401, PF-05231023, RN317 (PF-05335810), PF-06263507, PF-05230907, Dekavil, PF-06342674, PF06252616, RG7598, RG7842, RG7624d, OMP54F28, GSK1995057, BAY1179470, IMC-3G3, IMC-18F1, IMC-35C, IMC-20D7S, PF-06480605, PF-06647263, PF-06650808, PF-05335810 (RN317) PD-0360324, PF-00547659 de Pfizer; MK-8237 de Merck; BI033 de Biogen; GZ402665, SAR438584/REGN2222 de Sanofi; IMC-18F1; e Icrucumab, IMC-3G3 de ImClone LLC; Ryzodeg, Tresiba, Xultophy de Novo Nordisk; Toujeo (U300), LixiLan, Lyxumia (lixisenatida) de Sanofi; inmunoterapéuticos de MAGE-A3 de GlaxoSmithKline; Tecemotide de Merck KGaA; Sereleaxin (RLX030) de Novartis AG; Eritropoyetina; Pegfilgrastim; L

B. Agentes reductores de la viscosidad

La viscosidad de las formulaciones de anticuerpos líquidas se reduce mediante la adición de uno o más agentes reductores de la viscosidad. Las formulaciones farmacéuticas pueden convertirse de fluidos no newtonianos a newtonianos mediante la adición de una cantidad eficaz de uno o más agentes reductores de la viscosidad. Las composiciones de la invención comprenden procaína o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

Cuando se emplea en una formulación destinada a la administración a un humano u otro mamífero, los agentes reductores de la viscosidad, como la propia formulación, deben ser farmacéuticamente aceptables. Los agentes reductores de la viscosidad son típicamente compuestos orgánicos que contienen por lo menos un átomo que no es de carbono ni de hidrógeno. Preferiblemente, los agentes reductores de la viscosidad contienen hidrógeno, carbono, oxígeno y por lo menos otro tipo de átomo. En ciertas realizaciones, los agentes reductores de la viscosidad se caracterizan por al menos uno de los siguientes:

1) compuestos orgánicos que tienen por lo menos cuatro átomos de carbono y cuatro átomos de hidrógeno y por lo menos un átomo de azufre, oxígeno, nitrógeno o fósforo;

2) un peso molecular entre aproximadamente 85 y 1000 Da;

3) la presencia de por lo menos una fracción cargada u otra fracción hidrófila;

4) la presencia de por lo menos uno, preferiblemente dos, y más preferiblemente tres, enlaces que rotan libremente;

5) la presencia de por lo menos un anillo sustituido;

6) un área superficial polar molecular de por lo menos 24 Á2, preferiblemente por lo menos 50 Á2, y más preferiblemente por lo menos 80 Á 2;

7) un volumen molar de por lo menos 75 cm3, preferiblemente por lo menos 85 cm3, más preferiblemente por lo menos 100 cm3 y lo más preferible por lo menos 120 cm3;

8) una polarizabilidad de por lo menos 10 cm3, preferiblemente por lo menos 15 cm3, más preferiblemente por lo menos 20 cm3 y lo más preferible por lo menos 25 cm3; y

9) la presencia de por lo menos uno, preferiblemente dos y más preferiblemente tres donantes y/o aceptores de enlaces de hidrógeno.

En ciertas realizaciones, el agente reductor de la viscosidad se caracteriza por al menos dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho o los nueve atributos enumerados anteriormente. En ciertas realizaciones, el agente reductor de la viscosidad se caracteriza además porque no contiene un grupo funcional aldehído o enlace triple de carbonocarbono.

En otras realizaciones, el agente reductor de la viscosidad es una combinación de dos o más compuestos, cada uno de los cuales se caracteriza por al menos dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho o los nueve atributos enumerados anteriormente.

En algunas realizaciones, los agentes reductores de la viscosidad se enumeran como GRAS por la U.S. Food and Drug Administration ("la FDA"), al 11 de septiembre de 2014. "GRAS" es un acrónimo de la frase “Generalmente Reconocido como Seguro”. Según las secciones 201(s) y 409 de la Ley Federal de Alimentos, Medicamentos y Cosméticos (la Ley), cualquier sustancia que se añada intencionalmente a los alimentos es un aditivo alimentario y está sujeta a revisión y aprobación previas a la comercialización por parte de la FDA, a menos que la sustancia sea generalmente reconocida, entre expertos calificados, por haber demostrado adecuadamente ser segura en las condiciones de su uso previsto, o a menos que el uso de la sustancia esté excluido de la definición de aditivo alimentario. Otra fuente de compuestos es la Guía de ingredientes inactivos de la FDA (IIG), y equivalentes enumerados por el International Pharmaceutical Excipients Council (IPEC) y la Agencia Europea de Medicamentos (EMA), al 11 de septiembre de 2014. Las sustancias usadas en las formulaciones deben ser seguras para inyección. Preferiblemente, el agente reductor de la viscosidad incluido en GRAS se caracteriza por al menos dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho o los nueve atributos enumerados anteriormente.

En otras realizaciones, el agente reductor de la viscosidad es un producto farmacéutico aprobado por la FDA o la EMA al 11 de septiembre de 2014. Al igual que los compuestos extraídos de las listas GRAS e IIG, los perfiles de toxicidad y seguridad de los productos farmacéuticos aprobados por la FDA y la EMA están bien establecidos. Además de reducir la viscosidad de la solución de proteínas, el uso de un producto farmacéutico aprobado por la FDA o la EMA brinda la oportunidad de realizar terapias de combinación. Preferiblemente, un agente reductor de la viscosidad de un producto farmacéutico aprobado por la FDA o la EMA se caracteriza por al menos dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho o los nueve atributos enumerados anteriormente.

En algunas realizaciones, el agente reductor de la viscosidad incluye por lo menos un compuesto de Fórmula (I):

selecciona

en donde R3 se selecciona independientemente de hidrógeno, R2, -OH, NH2, -F, -Cl, -Br, -I, -NO2, -CN, -C(=O)R4a, -C(=NR4a)R4, -C(=O)OH, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4, -OC(=O)OR4, -SO3H, -SO2N(R4a)2, -SO2R4, -SO2NR4aC(=O)R4, -PO3H2, -R4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NHC(=NR4a)NH-CN, -NR4aC(=O)R4, -NR4aSO2R4, -NR4aC(=NR4a)NR4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NR4aC(=O)N(R4a)2, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R4a)2, -OR4, -SR4a, y -N(R4a)2; en donde R2 se selecciona independientemente de alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroarilo C1-12 y heterociclilo C2-12;

en donde cada alquilo C1-12 puede estar sustituido una o más veces con cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroarilo C1-12, heterociclilo C2-12, -OH, NH2, (=O), (=NR4a), -F, -Cl, -Br, -I, -NO2, -CN, -C(=O)R4a, -C(=NR4a)R4, -C(=O)OH, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4, -OC(=O)OR4, -SO3H, -SO2N(R4a)2, -SO2R4, -SO2NR4aC(=O)R4, -PO3H2, -R4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NHC(=NR4a)NH-CN, -NR4aC(=O)R4, -NR4aSO2R4, -NR4aC(=NR4a)NR4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NR4aC(=O)N(R4a)2, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R4a)2, -OR4, -SR4a, o -N(R4a)2;

en donde cada cicloalquilo C3-12 puede estar sustituido una o más veces con alquilo C1-12, arilo C6-12, heteroarilo C1-12, heterociclilo C2-12, -OH, NH2, -F, -Cl, -Br, -I, -NO2, -CN, -C(=O)R4a, -C(=NR4a)R4, -C(=O)OH, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4, -OC(=O)OR4, -SO3H, -SO2N(R4a)2, -SO2R4, -SO2NR4aC(=O)R4, -P3H2, -R4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NHC(=NR4a)NH-CN, -NR4aC(=O)R4, -NR4aSO2R4, -NR4aC(=NR4a)NR4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NR4aC(=O)N(R4a)2, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R4a)2, -OR4, -SR4a, o -N(R4a)2;

en donde cada arilo C6-12 puede estar sustituido una o más veces con alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12, heteroarilo C1-12, heterociclilo C2-12, -OH, NH2, -F, -C, -Br, -I, -NO2, -CN, -C(=O)R4a, -C(=NR4a)R4, -C(=O)OH, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4, -OC(=O)OR4, -SO3H, -SO2N(R4a)2, -SO2R4, -SO2NR4aC(=O)R4, -PO3H2, -R4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NHC(=NR4a)NH-CN, -NR4aC(=O)R4, -NR4aSO2R4, -NR4aC(=NR4a)NR4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NR4aC(=O)N(R4a)2, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R4a)2, -OR4, -SR4a, o -N(R4a)2;

en donde cada heteroarilo C1-12 puede estar sustituidos una o más veces con alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heterociclilo C2-12, -OH, NH2, -F, -C, -Br, -I, -NO2, -CN, -C(=O)R4a, -C(=NR4a)R4, -C(=O)OH, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4, -OC(=O)OR4, -SO3H, -SO2N(R4a)2, -SO2R4, -SO2NR4aC(=O)R4, -PO3H2, -R4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NHC(=NR4a)NH-CN, -NR4aC(=O)R4, -NR4aSO2R4, -NR4aC(=NR4a)NR4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NR4aC(=O)N(R4a)2, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R4a)2, -OR4, -SR4a, o -N(R4a)2;

en donde cada heterociclilo C2-12 puede estar sustituido una o más veces con alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroarilo C1-12, -OH, NH2, -F, -C, -Br, -I, -NO2, -CN, -C(=O)R4a, -C(=NR4a)R4, -C(=O)OH, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4, -OC(=O)OR4, -SO3H, -SO2N(R4a)2, -SO2R4, -SO2NR4aC(=O)R4, -PO3H2, -R4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NHC(=NR4a)NH-CN, -NR4aC(=O)R4, -NR4aSO2R4, -NR4aC(=NR4a)NR4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NR4aC(=O)N(R4a)2, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R4a)2, -OR4, -SR4a, o -N(R4a)2;

en donde R4 se selecciona independientemente de alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12, arilo C6-12; heteroarilo C1-12 y heterociclilo C2-12, cada uno de los cuales puede estar sustituido una o más veces por -OH, -NH2, -F, -Cl, -Br, -I, -NO2, -CN, -C(=O)OH, -SO3H, -PO3H2, o -C(=O)NH2;

en donde R4a puede ser R4 o hidrógeno;

en el que dos o más de los grupos R2, R3, R4 y R4a pueden formar juntos un anillo;

en donde cuando dos grupos R3 están unidos al mismo átomo de carbono, los dos grupos R3 pueden formar juntos un (=O), (=NR4a) o (= C(R4a)2);

en donde z se selecciona en cada caso independientemente de 1 o 2, siempre que cuando el sustituyente (R3)z esté conectado a un carbono hibridado sp2, z sea 1, y cuando el sustituyente (R3)z esté conectado a un carbono hibridado sp3, z sea 2.

Cuando el sustituyente -NR4aC(-NR4a)NR4aC(=NR4a)N(R4a)2 está presente, se prefiere que R4a se seleccione para dar -NHC(=NH)NHC(=NH)NH2.

En ciertas realizaciones, el compuesto de Fórmula (1) contiene por lo menos un sustituyente seleccionado de -C(=O)OH, -SO3H, -SO2NHC(=O)R4 y -PO3H2. En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula (1) contiene por lo menos un grupo -SO3H.

En ciertas realizaciones uno o más de los sustituyentes R3 pueden ser:

en donde R3a y R3b se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroarilo C1-12 y heterociclilo C2-12, C(=O)R4a, -C(=O)OH, -C(=O)OR4, -SO3H, -SO2N(R4a)2, -SO2R4, -SO2NHC(=O)R4, C(=O)NH2, -C(=O)N(R4a)2, -OR4, -SR4, y -N(R4a)2, y cuando dos R3b cualesquiera están unidos al mismo átomo de carbono, los dos grupos R3b pueden formar juntos un (=O), (=NR4a) o (=C(R4a)2);

en donde cada alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroarilo C1-12 y heterociclilo C2-12 puede estar sustituido una o más veces con -OH, NH2, -F, -Cl, -Br, -I, -NO2, -CN, -C(=O)R4a, -C(=NR4a)R4, -C(=O)OH, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4, -OC(=O)OR4, -SO3H, -SO2N(R4a)2, -SO2R4, -SO2NR4aC(=O)R4, -PO3H2, -R4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NHC(=NR4a)NH-CN, -NR4aC(=O)R4, -NR4aSO2R4, -NR4aC(=NR4a)NR4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NR4aC(=O)N(R4a)2, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R4a)2, -OR4, -SR4a, o -N(R4a)2;

en donde R4 y R4a son como se han definido anteriormente;

en donde x se selecciona de 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9 o 10; y

en donde dos cualquiera o más de los grupos R3, R3a, R4 y R4a pueden formar juntos un anillo.

En ciertas realizaciones, el compuesto de Fórmula (1) puede estar representado por cualquiera de los compuestos de Fórmula (1 a) o (1b):

en donde R3 tiene los significados dados anteriormente.

En ciertas realizaciones, el compuesto de Fórmula (1a) puede estar representado por los compuestos de Fórmula (1 a-i-iv):

en donde R3 se selecciona independientemente de hidrógeno, NH2, CH3, Cl, OR4 y NHR4;

en donde x es 1 o 2;

en donde R3a y R3b se seleccionan independientemente de hidrógeno y alquilo C1-12;

en donde dicho alquilo C1-12 puede estar sustituido una o más veces con cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroarilo C1-12, heterociclilo C2-12, -OH, NH2, -F, -Cl, -Br, -I, -NO2, -CN, -C(=O)R4a, -C(=NR4a)R4, -C(=O)OH, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4, -OC(=O)OR4, -SO3H, -SO2N(R4a)2, -SO2R4, -SO2NR4aC(=O)R4, -PO3H2, -R4aC(=NR4a)N(R4a)2, -NHC(=NR4a)NH-CN, -NR4aC(=O)R4, -NR4aSO2R4, -NR4aC(=NR4a)NR4aC(=NR4a)N(R4a)2, NR4aC(=O)N(R4a)2, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R4a)2, -OR4, -SR4a, o -N(R4a)2;

R4 y R4a son como se han definiedo anteriormente; y

en donde dos cualquiera o más R3a, R3b, R4, R4a pueden formar juntos un anillo.

El compuesto de Fórmula (1) puede estar representado por el compuesto de Fórmula (1 a-v, vi o vii):

en donde R3f se selecciona de -C(=O)OH, -SO3H, -SO2NHC(=O)R4 y -PO3H2; y R3 es como se ha definido anteriormente. En ciertas realizaciones preferidas, R3 se selecciona independientemente de hidrógeno, OH, NH2, alquilo C1-6 y COOH.

En otras realizaciones, el compuesto de Fórmula (1) puede estar representado por cualquiera de los compuestos de Fórmula (1c), (1d), (1e) o (1f):

en donde R3 tiene los significados dados anteriormente.

En otras realizaciones, el compuesto de Fórmula (1) puede estar representado por un compuesto de Fórmula (1g):

en donde R3c se selecciona independientemente de hidrógeno y R2, en donde R2 tiene los significados dados anteriormente;

en donde R3d se selecciona independientemente de hidrógeno, OH, NH2, NH(alquilo C1-6), N(alquilo C 1-6)2; NHC(=O)(alquilo C1-6), COOH y CH2OH;

o dos grupos cualquiera R3c y R3d conectados al mismo carbono pueden formar juntos un oxo (=O), imino (=NR4a) o una olefina (=C(R4a)2), en donde R4a tiene los significados dados anteriormente;

en donde R3e se selecciona de hidrógeno, -OH u OR4; y

en donde R4 tiene los significados dados anteriormente.

En ciertas realizaciones, el a ente reductor de la viscosidad adicional incluye un compuesto de Fórmula

en donde R3e se selecciona de OH y -Oalquilo C1-12, que además está sustituido con por lo menos un OH y por lo menos un COOH; y

en donde R3d se selecciona de COOH y CH2OH.

En algunas realizaciones, el agente reductor de la viscosidad incluye un compuesto de Fórmula (2):

Formula (2),

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;

t i

t i

#1

en donde representa un enlace sencillo o doble;

X se selecciona independientemente de calcógeno, N(R3)z y C(R3)z;

XI está ausente o es calcógeno, N(R3)z, C(R3)z o:

en donde R3 tiene los significados dados para el compuesto de Fórmula (1); o 1; cuando el sustituyente (R3)z está conectado a un carbono hibridado sp2 o un nitrógeno hibridado sp3, z es 1, y cuando el sustituyente (R3)z está conectado a un carbono hibridado sp3, z es 2;

en donde por lo menos uno de X o X1 es calcógeno o N(R3)2.

En ciertas realizaciones, el compuesto puede ser un anillo aromático. Los anillos aromáticos ejemplares incluyen los compuestos de fórmulas (2a-e);

en donde R3 y X tienen los significados anteriores, y X2 se selecciona de N(R3)^z y C(R3)^z.

En ciertas realizaciones, el agente reductor de la viscosidad adicional es un compuesto de Fórmula (2a-i):

en donde R4 es como se ha definido anteriormente y es preferiblemente hidrógeno o CH3;

en donde R6 es heteroarilo C1-12, que puede estar sustituido una o más veces por alquilo C1-6;

en donde dijo alquilo C1-6 puede estar sustituido una o más veces por OH, -NH2, -F, -Cl, -Br, -I, -NO2, -CN, -C(=O)R4, -C(=NR4a)R4, -C(=O)OH, -C(=O)OR4, -SO3H, -SO2NR4-, -SO2R4, -PO3H2, -NHC(=O)R4, -NHC(=O)N(R4)2, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R4)2, -OR4b, -SR4b, -N(R4b)2, en donde R4 tiene los significados dados anteriormente; o

en donde R4 es como se ha definido anteriormente, y R7 se selecciona de SR 4 y -C(=O)R4. El enlace doble en el grupo anterior puede estar en la geometría E o Z.

En realizaciones preferidas, R6 es un heterociclo que tiene la estructura:

en donde X4 es un calcógeno y R6a es hidrógeno o alquilo C1-6, en donde el alquilo C1-6 puede estar sustituido una o más veces por -OH, -NH2, -F, -Cl, -Br, -I, -NO2, -Cn , -C(=O)OH. En una realización incluso más preferida, R6 es un heterociclo que tiene la estructura:

en donde R6a se selecciona de alquilo C1-6 alquilo y alquilo C1-6 sustituido una o más veces con -OH.

El agente reductor de la viscosidad adicional puede ser un imidazol de fórmula (2b-i)

en donde R3 es como se ha definido anteriormente. En ciertas realizaciones, R3 se selecciona independientemente de hidrógeno, NO2 y R4. En ciertas realizaciones preferidas, el compuesto de fórmula (2b-i) tiene la estructura:

en donde R3 se selecciona independientemente de alquilo C1-6, que puede estar no sustituido o sustituido una o más veces con un grupo seleccionado de OH, NH2, SR4, F, Cl, Br e I; y

R3 es o hidrógeno o NO2.

En otras realizaciones, el agente reductor de la viscosidad adicional tiene la estructura de Fórmula (2a-ii) o Fórmula (2c-i):

En realizaciones adicionales, por lo menos un sustituyente R3 es NHR4, en donde R4 es un alquilo C1-6, opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de Cl, Br, F, I, OH, C (=O)OH, NH2, NH(alquilo C1-6) y N(alquilo C1-6)2.

En otras realizaciones, el agente reductor de la viscosidad adicional es una sal de piridinio de fórmula (2aiii):

En otras realizaciones, el anillo heterocíclico no es un anillo heteroarilo. Ejemplos de anillos no aromáticos incluyen los compuestos de fórmulas (2f-k):

en donde R5 y X tienen los significados anteriores, y X3 es calcógeno o N(R3)z.

En ciertas realizaciones, el compuesto de Fórmula (2f) es beta-lactama de Fórmula (2f-i),

La beta-lactama de fórmula (2f-i) incluye compuestos de tipo penicilina, así como compuestos de tipo cefalosporina y de tipo cefamicina de fórmula (2f-ii) y (2f-iii):

en donde X y R3 son como se han definido anteriormente. En realizaciones preferidas, X es azufre.

En ciertas realizaciones, el compuesto de Fórmula (2i) es un compuesto de Fórmula (2i-i):

en donde X y R3 son como se han definido anteriormente. En ciertas realizaciones, X es en ambos casos NR4, en donde R4 tiene los significados dados anteriormente, y R3 es en ambos casos hidrógeno.

En otras realizaciones, el compuesto de Fórmula (2) está representado por un compuesto de Fórmula (2i-ii):

en donde X, X1 y R3 son como se han definido anteriormente.

El compuesto de Fórmula (2j) puede estar representado por el compuesto de Fórmula (2j-i):

en donde X3 y R3 son como se han definido anteriormente, y R8 se selecciona de NHC(=O)R2 y OC(=O)R2. En realizaciones preferidas, X3 es N+(CH3)2, R3 son ambos hidrógeno, o R3 juntos forman un epóxido o doble enlace.

El compuesto de Fórmula (2k) puede estar representado por el compuesto de Fórmula (2k-i):

en donde X3 y R8 son como se han definido anteriormente.

En otras realizaciones, el agente reductor de la viscosidad adicional incluye un compuesto de la estructura de Fórmula (3):

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;

en donde R5 se selecciona en cada caso independientemente de hidrógeno, y R2,

R5’ es R5 o está ausente;

con la condición de que por lo menos un sustituyente R5 no sea hidrógeno, en donde R2 tiene los mismos significados dados para el compuesto o la Fórmula (1).

En ciertas realizaciones, el agente reductor de la viscosidad es una mezcla de dos o más compuestos seleccionados de compuestos de Fórmula (1), Fórmula (2) y Fórmula (3).

En realizaciones preferidas, el agente reductor de la viscosidad adicional es ácido canforsulfónico (CSA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como una sal de metal alcalino o alcalinotérreo. El ácido canforsulfónico o una sal del mismo se combina con uno o más compuestos de Fórmula (1), (2) o (3) para dar mezclas como CSA-piperazina, CSA-TRIS, CSA-4-amino piridina, CSA-1-(o-tolil)biguanida, cSA-procaína, CSA-Naácido aminociclohexano carboxílico, CSA-Na-creatinina y CSA-Na-ornidazol. Otros agentes reductores de la viscosidad adicionales preferidos incluyen tiamina, biotina, procaína, creatinina, metoclopramida, escopolamina, cimetidina, fosfato de cloroquina, mepivacaína, granisetrón, sucralosa, HEPES-tris, nicotinamida, ácido lactobiónico-TRIS, ácido glucurónico-TRIS, sulfacetamida, CSA-4-aminopiridina, CSA-piperazina y cefazolina. Dos cualquiera o más de los agentes reductores de la viscosidad enumerados anteriormente pueden combinarse además en la misma formulación.

En otras realizaciones, el agente reductor de la viscosidad adicional es un ácido organosulfónico. Los ácidos organosulfónicos ejemplares incluyen, pero no están limitados a, ácido canforsulfónico, ácido naftalen-2-sulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido ciclohexilsuflónico, ácidos xilenosulfónicos (incluyendo ácido p-xileno-2-sulfónico, ácido m-xileno-2-sulfónico, ácido m-xileno-4-sulfónico y ácido o-xileno-3-sulfónico), ácido metanosulfónico, ácido 1,2 etano disulfónico, ácido 4-(2-hidroxietil)-1 -piperazina etanosulfónico, ácido 2-hidroxietano-1-sulfónico, ácido 3-hidroxipropano-1-sulfónico, ácido cimenosulfónico, ácido 4-hidroxibutano-1-sulfónico y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. El ácido organosulfónico puede estar en forma de una sal de metal alcalino o alcalinotérreo, como sal de litio, sodio, potasio, magnesio y calcio. El ácido organosulfónico (o una sal del mismo) puede combinarse con uno o más compuestos de Fórmula (2) o Fórmula (3).

En ciertas realizaciones, el agente reductor de la viscosidad adicional contiene por lo menos un ácido carboxiico. El ácido carboxílico puede estar en forma de una sal de metal alcalino o alcalinotérreo como sal de litio, sodio, potasio, magnesio y calcio. Los compuestos de ácido carboxílico ejemplares incluyen ácido lactobiónico, ácido glucurónico, ácido 1-aminociclohexano carboxílico, biotina, brocrinat, ácido ciclopentano propiónico, ácido hidroxinaftoico, ácido fenilpropiónico, ácido gentísico, ácido salicílico, ácido canfórico, ácido mandélico, ácido sulfosalicíclico ácido hidroxibenzoil benzoico, ácido fenilacético, ácido acetilsalicílico, ácido cinámico, ácido tbutilacético, ácido ftálico, ácido trimetilacético, ácido antralítico y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. El ácido carboxílico (o una sal del mismo) puede combinarse con uno o más compuestos de Fórmula (2) o Fórmula (3).

Los siguientes compuestos también pueden usarse como agentes reductores de la viscosidad adicionales: colistina, articaína, tetracaína, proximetacaína, metoclopramida, lidocaína, ciclometilcaína, piperocaína, cloroprocaína, etidocaína, benzocaína, fenilefrina, bupivacaína, mepivacaína, cinchocaína, mezclas de los mismos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Otros agentes que pueden emplearse como agentes reductores de la viscosidad incluyen ácido 1-aminociclohexano carboxílico, 1 -(o-tolil)biguanida, cloruro de bencetonio, ácido benzoico, brocrinat, carragenano cálcico, ciclamato cálcico, calcobutrol, ácido caloxético, ácido canforsulfónico, creatinina, dalfampridina, ácido deshidroacético, diazolidinil urea, alcohol diclorobencílico, dimetil isosorbida, epitetraciclina, etil maltol, etil vainillina, oraidazol, etanolamida de ácido gentísico, HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)-1 -piperazina etanosulfónico), ácido gentísico, ácido glucurónico, ácido iodoxámico, mentol, galactosa, ácido medrónico, m-cresol, glutatión, ácido lactobiónico, maltitol, octisalato, oxiquinolina, ácido pentético, piperazina, propenil guaetol, galato de propilo, carbonato de propileno, propilparabeno, sulfato de protamina, QUATERNIUM-15, QUATERNIUM-52, satialgina H 1,2-etanodisulfonato de sodio, cocoil sarcosinato de sodio, lauroil sarcosinato de sodio, polimetafosfato de sodio, sodio, pirofosfato de sodio, ácido piroglutámico, trimetafosfato de sodio, tripolifosfato de sodio, sorbitán, ácido tartárico, ácido láctico, iofetamina, sucralosa, cloruro de 1-(4-piridil)piridinio, ácido aminobenzoico, sulfacetamida sódica, ácido naftalen-2-sulfónico, terc-butilhidroquinona, timerosal, trolamina, tromantadina, vainillina, versetamida, nioxima, niacinamida, metilisotiazolinona, manosa D, maltosa, lidofenina, lactosa, lactitol, isomalt, imidurea, gluconolactona, ácido metanosulfónico, ácido xilensulfónico, sulfobutiléter p-ciclodextrina y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En ciertas realizaciones, el agente reductor de la viscosidad adicional incluye una base orgánica. Las bases orgánicas ejemplares incluyen N-metilglucamina, morfolina, piperidina y aminas primarias, secundarias, terciarias y cuaternarias, aminas sustituidas y aminas cíclicas. Por ejemplo, pueden ser isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dietilaminoetanol, trimetamina, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, lidocaína, hidrabamina, colinas, betaínas, colina, betaína, etilendiamina, teobromina, purinas, piperazina, N-etilpiperidina, N-metilpiperidinapoliamina. Las bases orgánicas particularmente preferidas son arginina, histidina, lisina, etanolamina, tiamina, 2-amino-2-hidroximetil-propano-1,3-diol (TRIS), 4-aminopiridina, ácido aminociclohexano carboxílico, 1-o-tolibiguanida, ornidazol, urea, nictoinamida, cloruro de bencetonio, 5-amino-1-pentanol, 2-(2-aminoetoxi)etanol, trans-ciclohexano-1,4-diamina, trans-ciclohexano-1R,2R-diamina, etilendiamina, propano-1,3-diamina, butano-1,4-diamina, pentano-1,5-diamina, hexano-1,6-diamina, octano-1,8-diamina, 5-amino-1-pentanol, 2-(2-aminoetoxi)etanamina, 2-(2-(2-aminoetoxi)-etoxi)etanamina, 3-(4-(3-aminopropoxi)-butoxi)propan-1 -amina, 3-(2-(2-(3-aminopropoxi)-etoxi)-etoxi)propan-1 -amina, N-(2-(2-aminoetilamino)etil)etano-1,2-diamina, N-(2-aminoetil)etano-1,2-diamina, N-1 -(2-(2-(2-aminoetilamino)etilamino)-etil)etano-1,2-diamina, N,N-dimetilhexano-1,6-diamina, N,N,N,N-tetrametilbutano-1,4-diamina, sales de feniltrimetilamonio, isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetamina, colina, 1-(3-aminopropil)-2-metil-1H-imidazol, piperazina, 1-(2-aminoetil)piperazina, 1-[3-(dimetilamino)propil] piperazina, 1-(2-aminoetil)piperidina, 2-(2-aminoetil-1 -metilpirrolidina, mezclas de los mismos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Los betalactámicos ejemplares incluyen bencilpenicilina (penicilina G), fenoximetilpenicilina (penicilina V), cloxacilina, dicloxacilina, flucloxacilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, temocilina, amoxicilina, ampicilina, mecilinam, carbenicilina, ticarcilina, azlocilina, mezlocilina, piperacilina, cefoxitina, cefazolina, cefalexina, cefalosporina C, cefalotina, cefaclor, cefamandol, cefuroxima, cefotetán, cefixima, cefotaxima, cefpodoxima, ceftazidima, ceftriaxona, cefepima, cefpiroma, ceftobiprol, biapenem, doripenem, ertapenem faropenem, imipenem, meropenem, panipenem, razupenem, tebipenem, tienamicina, aztreonam, tigemonam, nocardicina a, tabtoxinina, ácido clavulánico, ácido clavulánico, tazobactam, sulbactam y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Otros agentes reductores de la viscosidad adicionales incluyen tropano N-heterociclos como atropina, hiosciamina, escopolamina y sales de los mismos, así como sales de tiotropio e ipratropio, tiamina, alitiamina, prosultiamina, fursultiamina, benfotiamina, sulbutiamina, cuaternio 15; dihidrocloruro de 1-(3-aminopropil)-2-metil-1H-imidazol; creatinina; biotina, cimetidina, piperocaína, ciclometilcaína, granisetrón, moxifloxacina, cloroquina, mepivacaína, levetriacetam, bupivacaína, cinchocaína, clindamicina y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. La tiamina es un agente reductor de la viscosidad adicional especialmente preferido.

En ciertas formulaciones, no se prefieren los siguientes compuestos: creatinina, cadaverina, lidocaína, arginina y lisina, y se excluyen del alcance de las fórmulas y definiciones anteriores de agentes reductores de la viscosidad útiles.

C. Excipientes

Los expertos en la técnica conocen una amplia variedad de excipientes farmacéuticos útiles para formulaciones de proteínas líquidas. Incluyen uno o más aditivos, como solventes o cosolventes líquidos; azúcares o alcoholes de azúcar como manitol, trehalosa, sacarosa, sorbitol, fructosa, maltosa, lactosa o dextranos; surfactantes como TWEEN® 20, 60 u 80 (polisorbato 20, 60 u 80); agentes de tamponamiento; conservantes como cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, sales de amonio terciario y clorhexidinadiacetato; portadores como poli(etilenglicol) (PEG); antioxidantes como ácido ascórbico, metabisulfito de sodio y metionina; agentes quelantes como EDTA o ácido cítrico; o polímeros biodegradables como poliésteres solubles en agua; crioprotectores; lioprotectores; agentes de carga; y agentes estabilizantes.

Otros portadores, excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables, como los descritos en Remington: "The Science and Practice of Pharmacy", 20a edición, Alfonso R. Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2000) también pueden incluirse en una formulación de proteínas descrita en la presente, siempre que no afecten negativamente a las características deseadas de la formulación.

Los agentes reductores de la viscosidad descritos en la presente pueden combinarse con uno o más de otros tipos de agentes reductores de la viscosidad, por ejemplo, organofosfatos descritos en la solicitud de PCT presentada conjuntamente titulada "LIQUID PROTEIN FORMULATIONS CONTAINING ORGANOPHOSPHATES" por Arsia Therapeutics; colorantes orgánicos solubles en agua descritos en la solicitud de PCT presentada conjuntamente titulada "LIQUID PROTEIN FORMULATIONS CONTAINING WATER SOLUBLE ORGANIC DYES" por Arsia Therapeutics; líquidos iónicos descritos en la solicitud de PCT presentada conjuntamente titulada "LIQUID PROTEIN FORMULATIONS CONTAINING IONIC LIQUIDS" por Arsia Therapeutics.

III. Métodos de elaboración

La proteína, como un mAb, que se va a formular puede producirse mediante cualquier técnica conocida, como cultivando células transformadas o transfectadas con un vector que contiene una o más secuencias de ácidos nucleicos que codifican la proteína, como es bien conocido en la técnica, o mediante técnicas sintéticas (como técnicas recombinantes y síntesis de péptidos o una combinación de estas técnicas), o puede aislarse de una fuente endógena de la proteína.

La purificación de la proteína a formular puede realizarse mediante cualquier técnica adecuada conocida en la técnica como, por ejemplo, precipitación con etanol o sulfato de amonio, HPLC de fase inversa, cromatografía sobre sílice o resina de intercambio catiónico (por ejemplo, DEAE-celulosa), diálisis, cromatoenfoque, filtración en gel usando columnas de proteína A SEPHAROSE® (por ejemplo, SEPHADEX® G-75) para eliminar contaminantes, columnas quelantes de metales para unir formas marcadas con epítopos y ultrafiltración/diafiltración (los ejemplos no limitativos incluyen filtración centrífuga y filtración de flujo tangencial (TFF)).

La inclusión de agentes reductores de la viscosidad a concentraciones reductoras de la viscosidad como de 0,010 M a 1,0 M, preferiblemente de 0,050 M a 0,50 M, lo más preferible de 0,10 M a 0,30 M, permite que una solución del mAb farmacéuticamente activo se purifique y/o concentre a concentraciones de mAb más altas usando métodos comunes conocidos por los expertos en la técnica, que incluyen pero no están limitados a filtración de flujo tangencial, concentración centrífuga y diálisis.

En algunas realizaciones, se proporcionan formulaciones liofilizadas de las proteínas y/o se usan en la preparación y fabricación de las formulaciones de proteínas concentradas de baja viscosidad. En algunas realizaciones, la proteína preliofilizada en forma de polvo se reconstituye por disolución en una solución acuosa. En esta realización, la formulación líquida se llena en un recipiente de unidad de dosificación específica, como un vial o jeringuilla de mezclado precargada, se liofiliza, opcionalmente con lioprotectores, conservantes, antioxidantes y otros excipientes farmacéuticamente aceptables típicos, luego se almacena en condiciones de almacenamiento estériles hasta poco antes de su uso, momento en el que se reconstituye con un volumen definido de diluyente, para llevar el líquido a la concentración y viscosidad deseadas.

Las formulaciones descritas en la presente pueden almacenarse mediante cualquier método adecuado conocido por un experto en la técnica. Los ejemplos no limitativos de métodos para preparar las formulaciones de proteínas para el almacenamiento incluyen congelar, liofilizar y secar por pulverización la formulación de proteínas líquida. En algunos casos, la formulación liofilizada se congela para su almacenamiento a temperaturas bajo cero, como a aproximadamente -80° C o en nitrógeno líquido. En algunos casos, una formulación liofilizada o acuosa se almacena a 2-8° C.

Ejemplos no limitativos de diluyentes útiles para reconstituir una formulación liofilizada antes de la inyección incluyen agua estéril, agua bacteriostática para inyección (BWFI), una solución tamponada de pH (por ejemplo, solución salina tamponada con fosfato), solución salina estéril, solución de Ringer, solución de dextrosa, o soluciones acuosas de sales y/o tampones. En algunos casos, la formulación se seca por pulverización y luego se almacena.

IV. Administración a un individuo con necesidad de ello

Las formulaciones de proteínas de la invención incluyendo, pero no limitadas a, las formulaciones reconstituidas, pueden usarse en un método de administración a una persona con necesidad de ello mediante inyección intramuscular, intraperitoneal (es decir, en una cavidad corporal), intracerobrospinal o subcutánea usando una de aguja de calibre 18-32 (opcionalmente una aguja de pared delgada), en un volumen de menos de aproximadamente 5 ml, menos de aproximadamente 3 ml, preferiblemente menos de aproximadamente 2 ml, lo más preferible menos de aproximadamente 1 ml.

La dosificación apropiada ("cantidad terapéuticamente eficaz") de la proteína, como un mAb, dependerá de la afección a tratar, la gravedad y el curso de la enfermedad o afección, si la proteína se administra con propósitos preventivos o terapéuticos, terapia previa, el historial clínico del paciente y la respuesta a la proteína, el tipo de proteína usada y la discreción del médico tratante. La proteína se administra adecuadamente de una vez en inyecciones únicas o múltiples, o durante una serie de tratamientos, como único tratamiento, o junto con otros fármacos o terapias.

Las formulaciones de dosificación están diseñadas de tal manera que las inyecciones no provoquen signos significativos de irritación en el sitio de inyección, por ejemplo, en donde el índice de irritación primaria sea inferior a 3 cuando se evalúa usando un sistema de puntuación de Draize. En una realización alternativa, las inyecciones provocan niveles de irritación macroscópicamente similares en comparación con inyecciones de volúmenes equivalentes de solución salina. En otra realización, la biodisponibilidad de la proteína es mayor en comparación con por lo demás la misma formulación sin los agentes reductores de la viscosidad administrados de la misma manera. En otra realización, la formulación es por lo menos aproximadamente tan eficaz farmacéuticamente como aproximadamente la misma dosis de la proteína administrada por infusión intravenosa.

En una realización preferida, la formulación se inyecta para producir niveles aumentados de la proteína terapéutica. Por ejemplo, el valor de AUC puede ser por lo menos un 10%, preferiblemente por lo menos un 20%, mayor que el mismo valor calculado para la misma formulación sin los agentes reductores de viscosidad administrada de la misma manera.

El agente reductor de la viscosidad también puede afectar a la biodisponibilidad. Por ejemplo, el porcentaje de biodisponibilidad de la proteína puede ser por lo menos 1,1 veces, preferiblemente por lo menos 1,2 veces el porcentaje de biodisponibilidad de por lo demás la misma formulación sin el agente reductor de la viscosidad administrado de la misma manera.

El agente reductor de la viscosidad también puede afectar a la farmacocinética. Por ejemplo, la C^max después de la inyección SC o IM puede ser por lo menos un 10%, preferiblemente por lo menos un 20%, menor que la C^max de una dosis administrada por vía intravenosa farmacéuticamente eficaz aproximadamente equivalente.

En algunas realizaciones, las proteínas pueden administrarse a una dosificación más alta y con una frecuencia más baja que por lo demás las mismas formulaciones sin los agentes reductores de la viscosidad.

Las formulaciones de viscosidad más baja requieren menos fuerza de inyección. Por ejemplo, la fuerza de inyección puede ser por lo menos un 10%, preferiblemente por lo menos un 20%, más baja que la fuerza de inyección para por lo demás la misma formulación sin los agentes reductores de viscosidad administrada de la misma manera. En una realización, la inyección se administra con una aguja de calibre 27 y la fuerza de inyección es menor de 30 N. Las formulaciones pueden administrarse en la mayoría de los casos usando una aguja de calibre muy pequeño, por ejemplo, un calibre entre 27 y 31, típicamente calibre 27, 29 o 31.

El agente reductor de la viscosidad puede usarse para preparar una formulación de unidad de dosificación adecuada para reconstitución para elaborar una formulación farmacéutica líquida para inyección subcutánea o intramuscular. La unidad de dosificación puede contener un polvo seco de una o más proteínas; uno o más agentes reductores de la viscosidad; y otros excipientes. Las proteínas están presentes en la unidad de dosificación de tal manera que después de la reconstitución en un solvente farmacéuticamente aceptable, la formulación resultante tiene una concentración de proteínas de aproximadamente 100 mg a aproximadamente 2000 mg por 1 ml (mg/ml). Tales formulaciones reconstituidas pueden tener una viscosidad absoluta de aproximadamente 1 mPa.s (1 cP) a aproximadamente 50 mPa.s (50 cP) a 25°C.

La formulación de baja viscosidad puede proporcionarse como una solución o en una forma de unidad de dosificación donde la proteína se liofiliza en un vial, con o sin el agente reductor de la viscosidad y los otros excipientes, y el solvente, con o sin el agente reductor de la viscosidad y otros excipientes, se proporciona en un segundo vial. En esta realización, el solvente se añade a la proteína poco antes o en el momento de la inyección para asegurar un mezclado y disolución uniformes.

Los agentes reductores de la viscosidad están presentes en las formulaciones a concentraciones que no provocan signos significativos de toxicidad y/o ningún signo irreversible de toxicidad cuando se administran por vía subcutánea, intramuscular u otros tipos de inyección. Como se usa en la presente, los "signos significativos de toxicidad" incluyen intoxicación, letargo, modificaciones de comportamiento como las que se producen con daño al sistema nervioso central, infertilidad, signos de cardiotoxicidad grave como arritmia cardíaca, cardiomiopatía, infartos de miocardio e insuficiencia cardíaca o de corazón congestiva, insuficiencia renal, insuficiencia hepática, dificultad para respirar y muerte.

En realizaciones preferidas, las formulaciones no provocan irritación significativa cuando se administran no más de dos veces al día, una vez al día, dos veces a la semana, una vez a la semana o una vez al mes. Las formulaciones de proteínas pueden administrarse sin provocar signos significativos de irritación en el sitio de la inyección, medido por un índice de irritación primaria de menos de 3, menos de 2 o menos de 1 cuando se evalúa usando un sistema de puntuación de Draize. Como se usa en la presente, "signos significativos de irritación" incluyen eritema, enrojecimiento y/o hinchazón en el sitio de inyección que tienen un diámetro mayor de 10 cm, mayor de 5 cm o mayor de 2,5 cm, necrosis en el sitio de inyección, dermatitis exfoliativa en el sitio de inyección y dolor grave que impide la actividad diaria y/o requiere atención médica u hospitalización. En algunas realizaciones, las inyecciones de las formulaciones de proteínas provocan niveles macroscópicamente similares de irritación cuando se comparan con inyecciones de volúmenes equivalentes de solución salina.

Las formulaciones de proteínas pueden mostrar una biodisponibilidad aumentada en comparación con por lo demás la misma formulación de proteínas sin los agentes reductores de la viscosidad cuando se administran mediante inyección subcutánea o intramuscular. "Biodisponibilidad" se refiere al grado y la tasa a la que la especie bioactiva, como un mAb, alcanza la circulación o el sitio de acción. La biodisponibilidad general puede aumentarse para inyecciones SC o IM en comparación con por lo demás las mismas formulaciones sin los agentes reductores de viscosidad. "Porcentaje de biodisponibilidad" se refiere a la fracción de la dosis administrada de la especie bioactiva que entra en circulación, determinada con respecto a una dosis administrada por vía intravenosa. Una manera de medir la biodisponibilidad es comparando el "área bajo la curva" (AUC) en un gráfico de la concentración plasmática en función del tiempo. La AUC puede calcularse, por ejemplo, usando la regla trapezoidal lineal. "AUC~", como se usa en la presente, se refiere al área bajo la curva de concentración plasmática desde el momento cero hasta el momento en el que la concentración plasmática vuelve a los niveles de referencia. "AUCo-t", como se usa en la presente, se refiere al área bajo la curva de concentración plasmática desde el momento cero hasta un momento t, posterior, por ejemplo, hasta el momento en que se alcanza el valor de referencia. Típicamente, el tiempo se medirá en días, aunque también pueden usarse horas, como resultará evidente por el contexto. Por ejemplo, la AUC puede aumentarse en más del 10%, 20%, 30%, 40% o 50% en comparación con por lo demás la misma formulación sin los agentes reductores de la viscosidad y administrada de la misma manera.

Como se usa en la presente, "tmax" se refiere al tiempo después de la administración en el que la concentración plasmática alcanza un máximo.

Como se usa en la presente, "Cmax" se refiere a la concentración plasmática máxima después de la administración de la dosis y antes de la administración de una dosis posterior.

Como se usa en la presente, "Cmin" o "Ctrough" se refiere a la concentración plasmática mínima después de la administración de la dosis y antes de la administración de una dosis posterior.

La Cmax después de una inyección SC o IM puede ser menor de, por ejemplo, por lo menos un 10%, más preferiblemente por lo menos un 20%, menor que la Cmax de una dosis administrada por vía intravenosa. Esta reducción en la Cmax también puede dar como resultado una toxicidad disminuida.

Los parámetros farmacocinéticos y farmacodinámicos pueden aproximarse entre especies usando enfoques que son conocidos por el experto en la técnica. La farmacocinética y la farmacodinamia de los agentes terapéuticos de anticuerpos pueden diferir notablemente en base al anticuerpo específico. Se demostró que un mAb murino aprobado tiene una vida media en humanos de ~1 día, mientras que un mAb humano tendrá típicamente una vida media de ~25 días (Waldmann et al, Int. Immunol, 2001, 13:1551-1559). La farmacocinética y la farmacodinamia de los agentes terapéuticos de anticuerpos pueden diferir notablemente en base a la vía de administración. El tiempo para alcanzar la concentración plasmática máxima después de la inyección IM o SC de IgG típicamente varía de 2 a 8 días, aunque pueden encontrarse tiempos más cortos o más largos (Wang et al, Clin. Pharm. Ther., 2008, 84(5):548-558). La farmacocinética y la farmacodinamia de los agentes terapéuticos de anticuerpos pueden diferir notablemente en base a la formulación.

Las formulaciones de proteínas de baja viscosidad pueden permitir una mayor flexibilidad en la dosificación y frecuencias de dosificación reducidas en comparación con aquellas formulaciones de proteínas sin los agentes reductores de la viscosidad. Por ejemplo, al aumentar múltiples veces la dosificación administrada por inyección, la frecuencia de dosificación puede, en algunas realizaciones, disminuirse de una vez cada 2 semanas a una vez cada 6 semanas. Las formulaciones de proteínas, que incluyen, pero no se limitan a, formulaciones reconstituidas, pueden administrarse usando una jeringuilla o autoinyector calentado y/o de automezclado. Las formulaciones de proteínas también pueden precalentarse en una unidad de calentamiento separada antes de llenar la jeringuilla.

i. Jeringuillas calentadas

La jeringuilla calentada puede ser una jeringuilla estándar que se precalienta usando un calentador de jeringuillas. El calentador de jeringuillas tendrá generalmente una o más aberturas, cada una capaz de recibir una jeringuilla que contiene la formulación de proteínas y un medio para calentar y mantener la jeringuilla a una temperatura específica (típicamente por encima de la ambiente) antes de su uso. A esto se hará referencia en la presente como jeringuilla precalentada. Los calentadores de jeringuillas calentadas adecuados incluyen los disponibles de Vista Dental Products e Inter-Med. Los calentadores son capaces de acomodar jeringuillas de varios tamaños y calentar, típicamente dentro de 1° C, a cualquier temperatura de hasta aproximadamente 130° C. En algunas realizaciones, la jeringuilla se precalienta en un baño de calentamiento, como un baño de agua, mantenido a la temperatura deseada.

La jeringuilla calentada puede ser una jeringuilla autocalentada, es decir, capaz de calentar y mantener la formulación líquida dentro de la jeringuilla a una temperatura específica. La jeringuilla autocalentada también puede ser una jeringuilla médica estándar que tiene un dispositivo de calentamiento acoplado a la misma. Los dispositivos de calentamiento adecuados que pueden acoplarse a una jeringuilla incluyen calentadores de jeringuillas o cinta calentadora de jeringuillas disponible de Watlow Electric Manufacturing Co. de St. Louis, MO, y bloques calentadores de jeringuillas, calentadores de etapas y calentadores de perfusión en línea disponibles de Warner Instruments of Hamden, CT, como el calentador de jeringuillas modelo SW-61. El calentador puede controlarse a través de un controlador central, por ejemplo, los controladores de calentadores modelo TC-324B o TC-344B disponibles de Warner Instruments.

La jeringuilla calentada mantiene la formulación de proteínas líquida a una temperatura especificada o dentro de 1° C, dentro de 2° C, o dentro de 5° C de una temperatura especificada. La jeringuilla calentada puede mantener la formulación de proteínas a cualquier temperatura desde la temperatura ambiente hasta aproximadamente 80° C, hasta aproximadamente 60° C, hasta aproximadamente 50° C, o hasta aproximadamente 45° C siempre que la formulación de proteínas sea lo suficientemente estable a esa temperatura. La jeringuilla calentada puede mantener la formulación de proteínas a una temperatura entre 20° C y 60° C, entre 21° C y 45° C, entre 22° C y 40° C, entre 25° C y 40° C, o entre 25° C y 40° C y 37° C. Manteniendo las formulaciones de proteínas a una temperatura elevada durante la inyección, se reduce la viscosidad de la formulación líquida, se aumenta la solubilidad de la proteína en la formulación, o ambas cosas.

ii. Jeringuillas de automezclado

La jeringuilla puede ser de automezclado o puede tener un mezclador acoplado. El mezclador puede ser un mezclador estático o un mezclador dinámico. Ejemplos de mezcladores estáticos incluyen los divulgados en las Patentes de Estados Unidos N° 5.819.988, 6.065.645, 6.394.314, 6.564.972 y 6.698.622. Los ejemplos de algunos mezcladores dinámicos pueden incluir los divulgados en las Patentes de Estados Unidos N° 6.443.612 y 6.457.609, así como en la Publicación de Solicitud de Patente de Estados Unidos N° US 2002/0190082. La jeringuilla puede incluir múltiples cilindros para mezclar los componentes de la formulación de proteínas líquida. La Patente de Estados Unidos N° 5.819.998 describe jeringuillas con dos cilindros y una punta mezcladora para mezclar sustancias viscosas de dos componentes.

iii. Autoinyectores y jeringuillas precargadas de formulaciones de proteínas

La formulación de proteínas líquida puede administrarse usando un autoinyector de jeringuilla precargada o un dispositivo de inyección sin aguja. Los autoinyectores incluyen un soporte de cartucho de mano, a menudo similar a una pluma, para sostener cartuchos precargados reemplazables y un mecanismo a base de resortes o análogo para inyecciones subcutáneas o intramusculares de dosificaciones de fármacos líquidos de un cartucho precargado. Los autoinyectores están diseñados típicamente para autoadministración o administración por personal no capacitado. Los autoinyectores están disponibles para dispensar o dosificaciones individuales o dosificaciones múltiples de un cartucho precargado. Los autoinyectores permiten diferentes configuraciones de usuario que incluyen, entre otras cosas, la profundidad de inyección, la velocidad de inyección y similares. Otros sistemas de inyección pueden incluir los descritos en la Patente de Estados Unidos N° 8.500.681.

La formulación de proteínas liofilizada puede proporcionarse en jeringuillas precargadas o de dosis unitaria. Las Patentes de Estados Unidos N° 3.682.174; 4.171.698; y 5.569.193 describen jeringuillas estériles que contienen dos cámaras que pueden prellenarse con una formulación seca y un líquido que puede mezclarse inmediatamente antes de la inyección. La Patente de Estados Unidos N° 5.779.668 describe un sistema de jeringuillas para liofilización, reconstitución y administración de una composición farmacéutica. En algunas realizaciones, la formulación de proteínas se proporciona en forma liofilizada en una jeringuilla precargada o de dosis unitaria, reconstituida en la jeringuilla antes de la administración y se administra como una única inyección subcutánea o intramuscular. Los autoinyectores para la administración de fármacos liofilizados en dosis unitarias se describen en la WO 2012/010.832. Los autoinyectores como el Safe Click Lyo™ (comercializado por Future Injection Technologies, Ltd., Oxford, Reino Unido) pueden usarse para administrar una formulación de proteínas de dosis unitaria donde la formulación se almacena en forma liofilizada y se reconstituye justo antes de la administración. En algunas realizaciones, la formulación de proteínas se proporciona en cartuchos de dosis unitaria para fármacos liofilizados (algunas veces denominados cartuchos Vetter). Los ejemplos de cartuchos adecuados pueden incluir los descritos en las Patentes de Estados Unidos N° 5.334.162 y 5.454.786.

V. Métodos de purificación y concentración

Los agentes reductores de la viscosidad también pueden usarse para ayudar en la purificación y concentración de proteínas. Los agentes reductores de la viscosidad y los excipientes que se añaden a la proteína en una cantidad eficaz para reducir la viscosidad de la solución de proteínas. Por ejemplo, el agente reductor de la viscosidad se añade a una concentración de entre aproximadamente 0,01 M y aproximadamente 1,0 M, preferiblemente entre aproximadamente 0,01 M y aproximadamente 0,50 M, y lo más preferible entre aproximadamente 0,01 M y aproximadamente 0,25 M.

La solución de agente reductor de viscosidad que contiene proteína se purifica o concentra luego usando un método seleccionado del grupo que consiste de ultrafiltración/diafiltración, filtración de flujo tangencial, concentración centrífuga y diálisis.

Ejemplos

Lo anterior se entenderá mejor mediante los siguientes ejemplos no limitativos.

Todas las viscosidades de las soluciones de mAb acuosas bien mezcladas se midieron usando un viscosímetro microfluídico mVROC (RheoSense) o un viscosímetro de placa y cono DV2T (Brookfield; "C&P") después de un equilibrado de 5 minutos a 25° C (a menos que se indique lo contrario). El viscosímetro mVROC estaba equipado con un chip "A" o "B", cada uno fabricado con un canal de 50 micrones. Típicamente, se volvieron a cargar 0,10 ml de solución de proteína en una jeringuilla de instrumento de microlaboratorio hermética a los gases (Hamilton; 100 pl), fijada al chip y se midió a múltiples caudales, aproximadamente 20%, 40% y 60% de la presión máxima para cada chip. Por ejemplo, una muestra de aproximadamente 50 mPa.s (50 cP) se mediría a alrededor de 10, 20 y 30 pl/min (aproximadamente 180, 350 y 530 s-1, respectivamente, en un chip" A ") hasta que estabilizase la viscosidad, típicamente después de por lo menos 30 segundos. Luego se calculó una viscosidad absoluta media y una desviación estándar a partir de por lo menos estas tres mediciones. El viscosímetro C&P estaba equipado con un husillo CPE40 o CPE52 (ángulo de cono de 0,8° y 3,0°, respectivamente) y se midieron muestras de 0,50 ml a múltiples tasas de cizallamiento entre 2 y 400 s-1. Específicamente, las muestras se midieron durante 30 segundos cada una a 22,58, 24,38, 26,25, 28,13, 30, 31,88, 45, 67,5, 90, 112,5,135, 157,5, 180, 202,5, 247, 270, 292,5, 315, 337,5, 360, 382, 400 s-1, comenzando con una tasa de cizallamiento que proporcionó por lo menos un 10% de par y continuando hasta que el par del instrumento alcanzó el 100%. Luego se determinó una viscosidad de cizallamiento cero extrapolada a partir de un gráfico de viscosidad dinámica frente a la tasa de cizallamiento para las muestras medidas en un viscosímetro de placa y cono DV2T. Las viscosidades de cizallamiento cero extrapoladas informadas son la media y la desviación estándar de por lo menos tres mediciones.

Ejemplo de Referencia 1: Efecto de un agente reductor de la viscosidad, lisina de ácido canforsulfónico (CSAL), sobre la viscosidad de las soluciones de ERBITUX® biosimilar

Materiales y métodos

Se purificó un ERBITUX® biosimilar obtenido comercialmente (100-400 mg) que contenía excipientes farmacéuticos (polisorbato 80, tampón de fosfato, y NaCI). Primero, se eliminó el polisorbato 80 usando DETERGENT-OUT® TWEEN®Medi Columns (G-Biosciences). Luego, las soluciones resultantes se intercambiaron en tampón extensivamente en tampón de fosfato de sodio 20 mM (PB; pH 7,0) o CSAL 20 mM (pH 7,0) y se concentraron hasta un volumen final de menos de 10 ml en concentradores centrífugos Jumbosep (Pall Corp.). La solución de proteína recogida se secó por congelación. Las tortas de proteínas secas, que contienen proteína y sales tampón o agente, se reconstituyeron a un volumen final de 0,15 - 1,3 ml. Estas muestras se reconstituyeron usando PB (pH 7,0) o CSAL (pH 7,0) adicional suficiente para llevar la concentración final de PB o CSAL a 0,25 M. La concentración final de mAb en solución se determinó mediante absorbancia de luz a 280 nm. Las concentraciones de proteínas informadas representan el intervalo de todas las muestras de proteína incluidas en cada Tabla o Figura. Específicamente, los valores informados son la mediana más o menos la mitad del intervalo. Se midieron el cizallamiento cero extrapolado usando un coeficiente de extinción determinado experimentalmente de 1,4 l/ gcm y las viscosidades informadas en un viscosímetro de placa y cono DV2T.

Resultados

Los datos de la Figura 1 demuestran el efecto de disminución de la viscosidad de CSAL en soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar. La viscosidad de una solución de ERBITUX® biosimilar en tampón de fosfato (PB) aumenta exponencialmente al aumentar la concentración de mAb. Se observa que la viscosidad de una solución de ERBITUX® biosimilar en presencia de CSAL aumenta exponencialmente al aumentar la concentración de mAb, pero en menor grado que la formulación en PB, es decir, se reduce el gradiente de viscosidad. Los datos de la Figura 1 muestran que cuanto mayor es la concentración de mAb, mayor es el efecto reductor de la viscosidad. La magnitud de los efectos reductores de la viscosidad proporcionados por el reemplazo de PB con CSAL varió de 1,1 veces a 100 ± 5 mg/ml a 10,3 veces a 227 ± 5 mg/ml de mAb.

Ejemplo de Referencia 2: efecto reductor de la viscosidad de un agente reductor de la viscosidad, lisina ácido canforsulfónico (CSAL), como una función de la concentración de AVASTIN® biosimilar

Materiales y métodos

Se purificó un AVASTIN® biosimilar obtenido comercialmente y que contenía excipientes farmacéuticos (polisorbato 20, tampón de fosfato, tampón de citrato, manitol y NaCl), se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó y se analizó como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de 1,7 l/gcm a 280 nm). La proteína se formuló para contener tampón de fosfato 0,25 M o CSAL 0,25 M.

Resultados

La Figura 2 representa la viscosidad de las soluciones de mAb acuosas en función de la concentración de mAb en una solución tamponada acuosa y con CSAL. La viscosidad del AVASTIN® biosimilar en tampón de fosfato acuoso y en presencia de CSAL aumenta exponencialmente al aumentar la concentración; sin embargo, como en el caso del ERBITUX® biosimilar, este aumento es mucho menos marcado para la formulación que contiene CSAL, es decir, se reduce el gradiente de viscosidad. En general, cuanto mayor es la concentración de mAb, mayor es el efecto reductor de la viscosidad observado. La magnitud de los efectos reductores de la viscosidad producidos por el reemplazo de PB con CSAL varió de 2,1 veces a 80 mg/ml a 3,7 veces a 230 ± 5 mg/ml de mAb.

Ejemplo de Referencia 3: Efecto reductor de la viscosidad en función de la concentración de CSAL para soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar

Materiales y métodos

Las muestras se purificaron, intercambiaron en tampón, concentraron, secaron, reconstituyeron y analizaron de manera similar al Ejemplo 1 anterior. La concentración final de CSAL tras la reconstitución en una solución de CSAL acuosa varió de 0,25 M a 0,50 M.

Resultados

La Tabla 1 muestra la viscosidad de soluciones de ERBITUX® biosimilar formulado en tampón de fosfato 0,25 M (sin CSAL como control) y con concentraciones variables de CSAL. Se ve que el efecto reductor de la viscosidad de CSAL aumenta de 8,4 a 12,1 veces con el aumento de la concentración del agente reductor de la viscosidad. Los datos de la Tabla 1 muestran que cuanto mayor es la concentración de CSAL, mayor es el efecto reductor de la viscosidad, por lo menos dentro del intervalo de concentración del agente probado.

Tabla 1. Viscosidades de las soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar (155 ± 5 mg/ml, pH 7,0) en presencia de diferentes concentraciones de CSAL a 25° C.

Veces de reducción de viscosidad (en comparación sin CSAL presente) [CSAL], M Viscosidad, mPa.s

(C P )

0 154 0 1

0.25 18.3±0.0 8.4

038 149±0.1 10.3

0.50 12.7 ±0.1 12.1

Ejemplo de Referencia 4: Viscosidades de soluciones de ERBITUX® biosimilar en función de la temperatura en presencia de varios agentes reductores de la viscosidad

Materiales y métodos

Se prepararon soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar que contenían varios agentes reductores de la viscosidad como se describe en el Ejemplo 1. Específicamente, se usaron soluciones 20 mM de los agentes reductores de la viscosidad de interés para el intercambio en tampón, y las tortas liofilizadas se reconstituyeron a 0,25 M de cada agente reductor de la viscosidad. Para la muestra que contiene CSA-APMI, el ERBITUX® biosimilar se intercambió ampliamente en tampón en PB 2 mM (pH 7,0) y se concentró hasta un volumen final de menos de 10 ml en concentradores centrífugos Jumbosep (Pall Corp.). La muestra se distribuyó primero en alícuotas. Luego, se añadió una cantidad apropiada de solución de CSAAPMI (pH 7,0) a cada alícuota de tal manera que tras la reconstitución con agua, la concentración final de excipiente fuese de 0,25 M. Luego las soluciones de proteínas se secaron por congelación. Las tortas de proteínas secas, que contienen proteína y agente reductor de la viscosidad (y una cantidad insignificante de sales tampón) se reconstituyeron hasta un volumen final de aproximadamente 0,10 ml y la concentración de agente reductor de la viscosidad como se ha descrito anteriormente.

Resultados

La Tabla 2 muestra los datos de viscosidad para el ERBITUX® biosimilar en presencia de seis agentes reductores de la viscosidad - ácido canforsulfónico lisina (CSAL), ácido canforsulfónico arginina (CSAA), ácido bencenosulfónico lisina (BSAL), ácido bencenosulfónico arginina (BSAA), ácido naftalenosulfónico arginina (NSAA) y ácido canforsulfónico 1-(3-aminopropil)-2-metil-1H-imidazol (CSAAPMI). Los datos de la Tabla 2 muestran una reducción en la viscosidad de por lo menos alrededor de 9 veces para los seis agentes reductores de la viscosidad en comparación con una solución de ERBITUX® biosimilar en tampón de fosfato en por lo demás las mismas condiciones. El agente reductor de la viscosidad más eficaz, el CSAAPMI, redujo la viscosidad en >40 veces.

Además, los datos de la Tabla 3 muestran que a múltiples temperaturas que varían de 20° C a 30° C, una solución de 225 mg/ml de ERBITUX® biosimilar preparada con CSAA 0,25 M tenía la viscosidad más baja de los cinco agentes reductores de viscosidad. Por tanto, las tendencias observadas en las viscosidades a 25° C parecen predecir aquellas a temperaturas de por lo menos 20° C y 30° C.

Tabla 2. Reducción de la viscosidad de soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar (226 ± 6 mg ml, pH 7,0) formuladas con varios agentes reductores de la viscosidad 0,25 M, en comparación con la de tampón fosfato de sodio (PB) 0,25 M a 25° C.

Agente Viscosidad, mPa.s (cP) Veces de reducción

PB 1130+7 -

CSAL 109 ±1 104

CSAA 58.0 ±0.3 195

BSAL 126+1 9.0

BSAA 61.3+0.9 184

NSAA 69 4 ±0.6 163

CSAAPMI 25 7 ±1.5 44.0

Tabla 3. Viscosidades de soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar (225 ± 5 mg/ml, pH 7,0) formuladas con varios agentes reductores de viscosidad 0,25 M.

Ejemplo de Referencia 5: El efecto de la temperatura sobre la viscosidad de soluciones acuosas de AVASTIN® biosimilar formulado con varios agentes reductores de la viscosidad Materiales y métodos

Se prepararon soluciones de AVASTIN® biosimilar que contienen diferentes agentes reductores de la viscosidad como se describe en el Ejemplo 1 anterior. En particular, se usaron soluciones 20 mM de los agentes reductores de la viscosidad de interés para el intercambio de tampón, y las tortas liofilizadas se reconstituyeron en un agente reductor de la viscosidad 0,15 o 0,25 M.

Resultados

Como se ve en la Tabla 4, CSAL 0,25 M redujo la viscosidad de una solución de 230 ± 5 mg/ml de AVASTIN® biosimilar a las tres temperaturas entre 20 y 30° C. Además, el CSAL 0,15 M reduce la viscosidad a aproximadamente el mismo valor absoluto que CSAL 0,25 M a 20 y 25° C y es igualmente eficaz a 30° C.

Los datos de la Tabla 5 comparan los efectos de CSAL y BSAL a una concentración de 0,15 M. El CSAL es un agente reductor de la viscosidad superior en comparación con BSAL a las tres temperaturas.

Tabla 4. Las viscosidades de las soluciones acuosas de AVASTIN® biosimilar (230 ± 5 mg/ml, pH 7,0) formulado con CSAL 0,25 y 0,15 M a diferentes temperaturas.

Viscosidad, mPa.s (cP)

Temperatura 0.25 M PB 0.25 M CSAL 0.15 M CSAL

2CTC 563 2 152 0 157 0

25°C 397 2 107 4 113 0

30 °C 31 1 4 95.5 ±5.4 91 7+3 3

Tabla 5. Viscosidades de soluciones acuosas de AVASTIN® biosimilar (230 ± 5 mg/ml, pH 7.0) formuladas con CSAL 0,15 M y BSAL a diferentes temperaturas

Viscosidad, mPa.s (cP)

Temperatura 0.25 M PB 0.15 M CSAL 0.15 M BSAL

20“ C 563 ±2 157 ± 0 395 ±3

25°C 397 ±2 113 ±0 227 ±5

30°C 311 ±4 91.7 ±3.3 175 ±7

Ejemplo de Referencia 6: La eliminación de CSAL invierte el efecto reductor de la viscosidad en soluciones de mAb

Materiales y métodos

Se prepararon tres muestras de cada ERBITUX® biosimilar y AVASTIN® biosimilar. En primer lugar, se eliminó el polisorbato de las soluciones de mAb obtenidas comercialmente. La solución resultante con los excipientes farmacéuticos restantes se concentró (i) en un dispositivo centrífugo con un límite de peso molecular de 100 kDa (MWCO) (Pall Corp.) como muestra de control (excipientes originales), (ii) se intercambió de tampón en CSAL 0,25 M como se describe en el Ejemplo 1, o (iii) se intercambió de tampón en CSAL 0,25 M como se describe en el Ejemplo 1, se reconstituyó y luego se intercambió adicionalmente en PB 0,25 M. En este tercer caso, el intercambio en tampón de fosfato 0,25 M procedió primero mediante diálisis durante la noche contra PB 20 mM (MWCO de 50 kDa, Spectrum Labs). Las muestras parcialmente dializadas se diluyeron luego a 60 ml en PB 0,25 M y se sometieron a concentración centrífuga (MWCO Jumbosep de 30 kDa (Pall Corp.), seguido de un dispositivo MWCO Macrosep de 100 kDa (Pall Corp.)). Las viscosidades de estas tres soluciones acuosas se determinaron como se describe en el Ejemplo 1 anterior.

Resultados

Las viscosidades de las soluciones acuosas tanto del ERBITUX® biosimilar como del AVASTIN® biosimilar disminuyeron en presencia de CSAL, 2,7 y 1,5 veces, respectivamente, pero luego aumentaron cuando se eliminó el CSAL (ver Tablas 6 y 7). Además, tras la eliminación de CSAL, las viscosidades de la solución de mAb volvieron aproximadamente al mismo nivel que las soluciones originales, lo que sugiere que CSAL no daña la proteína y muestra que es necesario para la reducción de viscosidad observada.

Tabla 6. Viscosidades de las soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar (80 ± 5 mg/ml, pH 7,0) a 25° C.

Tabla 7. Viscosidades de soluciones acuosas del AVASTEN® biosimilar (101 5 mg/ml, pH 7.0) a 25° C.

Ejemplo de Referencia 7: Los agentes reductores de la viscosidad que contienen ácido canforsulfónico proporcionan grandes reducciones de viscosidad en soluciones acuosas de AVASTIN® y AVASTIN® biosimilar

Materiales y métodos

El AVASTIN® y un AVASTIN® biosimilar obtenidos comercialmente y que contenían excipientes farmacéuticos (AVASTIN®: trehalosa, tampón de fosfato de sodio y polisorbato 20; AVASTIN® biosimilar: polisorbato 20, tampón de fosfato, tampón de citrato, manitol y NaCl) se purificaron, se intercambiaron en tampón, se concentraron, se liofilizaron y se reconstituyeron como se ha descrito anteriormente. Las muestras de la Tabla 8 se prepararon como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de proteínas de 1,7 l/gcm a 280 nm) y se midieron en un viscosímetro C & P. Las muestras de viscosidad reducida de la Tabla 9 se prepararon como se describe en el Ejemplo 4 anterior, pero el mAb se intercambió de tampón extensamente en PB 2 mM. Posteriormente, se añadió la cantidad apropiada de agente reductor de la viscosidad para dar como resultado una concentración final de agente reductor de la viscosidad de 0,15-0,35 M tras la reconstitución. Las viscosidades se midieron usando un viscosímetro microfluídico Rheo Sense mVROC equipado con un chip "A" o "B".

Resultados

Los datos de las Tablas 8 y 9 demuestran el efecto reductor de la viscosidad de diferentes agentes reductores de la viscosidad en soluciones acuosas de AVASTIN® biosimilar. Se observan reducciones de viscosidad de hasta 2,5 veces (en comparación con soluciones de mAb en PB) para soluciones acuosas de AVASTIN® biosimilar en presencia de agentes reductores de la viscosidad que contienen CSA.

Tabla 8. Viscosidades de soluciones acuosas de AVASTIN® biosimilar (200 ± 5 mg/ml, pH 7.0) a 25° C con varios agentes reductores de viscosidad.

Agente [Sal] (Mofanión) Viscosidad (mPa.s

(cP)) PB 0.25 96.8 ±0.9

NaCI 0.25 121 ± 8

Arginina HCI 0.25 83.2 ± 2 8 Arginina HCI 0.3 71.8 ±2.2

Usina HCI 0.25 137 ± 2

BSA sal de sodio 0.25 133 ± 3 CSAsal de sodio 0.25 55 7 ± 02

BSAA 025 75 3 ±0.4

Ácido benzoico arginina 0.15 52.2 ±0.5 Ácido benzoico arginina 0 25 51.4+0 5

CSAA 025 48.5 ±1.9

CSA betaina* 0 25 66.0+0.7 diCSA cadaverina 0 25 85 5+5.2 diCSA cadaverina 0 35 65 6 1.6 CSA canavanina 0 15 60.5+0.6 CSA canavanina 0 25 756+3.0 CSA camitina’ 025 72.4 1.7 CSA dimetilpiperazina 025 47.4 1.3

CSA dimetilpiperazina 035 51 7+0.9

CSAL 0 25 54 9+0 9

Cloroteofilina arginina 0 25 104.5+6.5 Etandisulfonato diarginina* 015 77 1 0.3 Etoandisuifonato diarginina* 025 105 ±4

MSA arginina 025 93 1 09 Ácido toluenosulfónico arginina 025 159 ±5

Ácido toluenosulfónico lisina 025 118 ± 1

* Contiene NaCI equimolar; CSA = Áddocanforsultónico, BSA =Áodobencenosulfónico, MSA = Ácido metanosulfónico, PB = Tampón de fosfato

Tabla 9. Viscosidades de las soluciones acuosas de AVASTIN® biosimilar (pH 7,0) a 25° C con agentes ____________ reductores de la viscosidad 0,15 M (a menos que se indique ¡o contrario).____________ Agente [AVASTIN biosimilar] (mg/ml_) Viscosidad (mPa.s (cP))

0.25 M PB 220 213+10

0.25 M PB 200 96.8 ±0.9

CSA-piperazina 212 64.5 ±13.1 ácido lactobiónico-tris 219 109 ±5

CSA-4-aminopiridina 229 86 4 ±1.1

Ácido glucoronico-tris 221 151 ±5

Se midió la viscosidad de una solución acuosa de 200 ± 9 mg/ml de AVASTIN® biosimilar con CSAA en función del pH como se representa en la Figura 3. A medida que aumenta el pH, la magnitud del efecto de reducción de la viscosidad resultante de la presencia del CSAA en soluciones acuosas de AVASTIN® biosimilar también aumenta, alcanzando un efecto reductor de la viscosidad mínima y la viscosidad máxima alrededor de pH 7. La reducción de la viscosidad por CSAA fue comparada como una función del pH para dos concentraciones diferentes de AVASTIN® biosimilar. La Figura 4 demuestra que CSAA 0,25 M da como resultado una reducción superior de la viscosidad con el aumento de (i) la concentración del AVASTIN® biosimilar y (ii)el pH.

La Tabla 10 compara la reducción de la viscosidad del AVASTIN® biosimilar con la del AVASTIN® de marca con y sin CSAL. La solución de AVASTIN® de marca tiene una viscosidad mucho más alta que una solución del mAb biosimilar en ausencia del agente. Sin embargo, la presencia de CSAL 0,25 M da como resultado una reducción de 1,8 y 3,3 veces en la viscosidad del AVASTIN® biosimilar y de marca respectivamente; las viscosidades del AVASTIN® biosimilar y de marca se observa que son similares en presencia de CSAL 0,25 M. Tabla 10. Viscosidades de soluciones acuosas que contienen 205 ± 5 mg/ml de AVASTIN® biosimilar o AVASTIN® de marca con o sin CSAL 0,25 M medido a 25° C y pH 7,0.

Sal AVASTIN® biosimilar (mPa.s (cP)) AVASTIN® de marca (mPa.s (cP)) Tampón de fosfato 96.8 ±0.9 154 ±4

0.25 M CSAL 54.9 ±0.9 46.7 ±0.9

CSAL = ácido canforsulfónico lisina

Como se demuestra en la Tabla 11, CSA 1-(3-aminopropil)-2-metil-1H-imidazol (CSAAPMI) con HCl proporciona una reducción de viscosidad superior que CSAL, reduciendo la viscosidad más de 5 veces en comparación con el control de PB para una solución de 210 mg/ml AVASTIN® biosimilar.

Tabla 11. Viscosidades de las soluciones acuosas de AVASTIN® biosimilar con varios agentes reductores de la viscosidad a 25° C y pH 7,0.

Agente [Agente], M [Proteína], mg/mL Viscosidad, mPa.s (cP)

PB 0.25 220 10

CSAL 0 25 210 63.0 ± 1.8

CSAAPMI-2HCI 0.25 210 40 9 ± 0.5

APMI = 1-(3-aminoprop¡l)-2-metil- 1 H-imidazol

Para una solución que contiene ~230 mg/ml del AVASTIN® biosimilar, la Tabla 12 demuestra una reducción de la viscosidad de aproximadamente 5 veces con agentes reductores de la viscosidad que contienen ácido sulfosalicílico, así como con CSAAPMI y CSA tiamina.

Tabla 12. Viscosidades de soluciones acuosas que contienen 228 ± 5 mg/ml de AVASTIN® biosimilar con agentes reductores de la viscosidad a 25° C y pH 7.0.

Agente Concentración de agente [M] Viscosidad (mPa.s (cP))

PB 0.25 397 2

CSAA 0.25 116 ±2

CSAL 0.25 113+0

Ácido sulfosalicilco diarginina 0.15 81.6 H .7

ÁCido sulfosalicílico dílisina 0.25 73 4+0 4

CSAAPMI-2HCI 0.25 71.8+3.2

CSAtiamina-2NaCI 0.15 83.7+2.2

APMI = 1-(3-aminopropil)-2-metil-1 H-imidazol; CSA = ácido canforsulfónico

Ejemplo de Referencia 8. El efecto de los agentes reductores de la viscosidad en soluciones acuosas de ERBITUX® y ERBITUX® biosimilar

Materiales y métodos

Se prepararon soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar y de marca que contenían varios agentes reductores de la viscosidad como se describe en el Ejemplo 1. Específicamente, se usaron soluciones 20 mM de las sales de interés para el intercambio en tampón, y las tortas liofilizadas se reconstituyeron para contener 0,25 M de cada una. agente. Las viscosidades se midieron usando un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC equipado con un chip "A" o "B" o un viscosímetro de placa y cono DV2T.

Resultados

La Tabla 13 muestra los datos para ERBITUX® biosimilar (222 ± 5 mg/ml) en presencia de cinco agentes reductores de la viscosidad: CSAA, CSAL, BSAA, BSAL, y NSAA. La Tabla 14 compara la reducción de viscosidad de soluciones ERBITUX® biosimilares que usan CSAA y CSAL para arginina o lisina sola.

Tabla 13. Viscosidades de las soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar (222 ± 5 mg/ml, pH 7,0) con agentes reductores de la viscosidad 0,25 M a 25° C.

Agente Viscosidad (mPa.s (cP)) Veces de reducción

Tampón de fosfato 1130 ± 7 1.0

CSA Arginina 52.5 ± 10 21.5

CSA Lisina 109 ±1 10.4

BSA Arginina 53.4 ±5.5 21.2

BSA Lisina 126 ± 1 9 0

NSA Arginina 69.4 ±0.6 16.3

Tabla 14. Viscosidades de soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar (222 ± 5 mg/ml, pH 7,0) con agentes reductores de la viscosidad 0,25 M a 25° C.

Agente Viscosidad (mPa.s (cP)) Veces de reducción

Tampón de fosfato 1130 ±7 1.0

CSAA 52.5 ±1.0 21.5

CSA Sodio 393+14 2 9

Arginina HCI 45.3 ±0.5 24.9

CSAL 109 ±1 10.4

Lisina HCI 128 ±2 8.8

Los datos de la Tabla 13 muestran una reducción de la viscosidad de por lo menos 9,0 veces para los cinco agentes reductores de la viscosidad en comparación con una solución acuosa de ERBITUX® biosimilar en tampón de fosfato bajo por lo demás las mismas condiciones. Los agentes reductores de la viscosidad más eficaces, CSAA y BSAA, redujeron la viscosidad de la solución en unas 21 veces. Las viscosidades de las soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar que contiene CSAA 0,25 M se compararon como una función del pH a diferentes concentraciones de proteína. La Figura 5 demuestra que se observa un mínimo de viscosidad alrededor de pH 7,0 para todas las concentraciones de proteína. El efecto del pH sobre la viscosidad es más pronunciado para concentraciones de proteína más altas (253 mg/ml en el ejemplo).

Como se ve en la Tabla 15, las soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar y de marca tienen viscosidades similares en presencia de la sal de arginina BSAA a 0,25 M.

Tabla 15. Viscosidades de 224 ± 4 mg ml de soluciones acuosas de ERBITUX® biosimilar o ERBITUX® de marca con o sin BSAA 0,25 M a 25° C y pH 7,0.

Agente Viscosidad de ERBITUX® Viscosdiad de ERBITUX® de marca biosimilar (mPa.s (cP)) (mPa.s (cP))

Tampón de fosfato 1130 ± 7 556 ± 20

0.25 M BSAA 53.4 ± 5.5 44 1 ± 0.5

Se examinó el impacto de los agentes reductores de la viscosidad sobre la formación de agregados de proteínas irreversibles para ERBITUX® biosimilar. Se prepararon formulaciones líquidas acuosas de (i) ERBITUX® biosimilar y (ii) ERBITUX® biosimilar que contenía CSAL 0,25 M. Estas soluciones se almacenaron durante 90 días a 4° C y pH 5,4 y 7,0, respectivamente. Las muestras almacenadas se examinaron usando cromatografía de exclusión por tamaño (columna: Tosoh TSKgel UltraSW Aggregate; fase móvil: fosfato de potasio 0,1 M/sulfato de sodio 0,1 M, pH 6,8 a 0,8 ml/min; inyección: 20 gl de una solución de mAb de 5 mg/ml). Los datos de la Tabla 16 no revelan formación de agregados significativa en el producto farmacéutico comercial o en la formulación de viscosidad disminuida de alta concentración.

Tabla 16. Porcentaje de formación de agregados de proteínas después de 90 días de almacenamiento a 4° C, medido por cromatografía de exclusión por tamaño para soluciones acuosas que contienen ERBITUX® biosimilar con o sin CSAL 0,25 M.

Muestra % Monómero % Dimero % Agregado

ERBITUX® Biosimilar 5 mg/mL 99.0 1.0 0.0

ERBITUX® Biosimilar 210 mg/mL _{98.4 0.9 0.7}

con 0.25 M CSAL

DU

Ejemplo de Referencia 9. El efecto de los agentes reductores de la viscosidad sobre soluciones acuosas de REMICADE®

Materiales y métodos

Se preparó REMICADE® obtenido comercialmente que contenía excipientes farmacéuticos (sacarosa, polisorbato 80, tampón de fosfato de sodio) según las instrucciones en la hoja de información de prescripción. Posteriormente, el producto farmacéutico acuoso se purificó, se cambió en tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó y se analizó como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de 1,4 l/g*cm a 280 nm). Las viscosidades se midieron usando un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC equipado con un chip "A" o "B".

Resultados

Los datos para soluciones de REMICADE® acuosas en la Tabla 17 demuestran que (i) los agentes reductores de la viscosidad que contienen un grupo cíclico voluminoso proporcionan reducciones de viscosidad superiores a 15 veces, y (ii) CSAA, CSAAPMI y ácido sulfosalicílico diarginina (SSA DiArg) proporcionan la mayor reducción de viscosidad de aproximadamente 29 veces. Las viscosidades de las soluciones en presencia de ArgHCl solo son significativamente más altas que las de los grupos cíclicos voluminosos.

Tabla 17. Viscosidades de las soluciones acuosas de REMICADE® que contienen agentes reductores de la viscosidad 025 M a 25a C H 70.

La dependencia de la reducción de la viscosidad sobre la concentración del agente se examinó para soluciones acuosas de REMICADE® en presencia de CSAA. Los resultados presentados en la Tabla 18 demuestran que la reducción de la viscosidad aumenta al aumentar la concentración del agente. La reducción de la viscosidad, por ejemplo, es más del doble (la viscosidad es menos de la mitad) con un agente 0,35 M en comparación con un agente 0,20 M.

Tabla 18. Viscosidad de una solución acuosa de REMICADE® (215 ± 5 mg/ml) en presencia de varias concentraciones de CSAA medidas a 25° C y pH 7,0.

[CSAA], (M) Viscosidad (mPa.s (cP))

0 1557 22

0.20 81.3 ± 1.0

0.25 53.7 ± 9.3

035 38 2 ± 0.9

Se evaluaron las propiedades biofísicas de las soluciones de REMICADE® formuladas con CSAA 0,25 M durante 90 días. Se prepararon muestras de REMICADE® formuladas con CSAA 0,25 M como se describe en el Ejemplo 1 anterior. Como se ve en la Tabla 19 y la Figura 6, el contenido de monómero de las soluciones concentradas de REMICADE® en CSAA 0.25 M según se determina por cromatografía de exclusión por tamaño (columna Tosoh TSKgel UltraSW Aggregate; tampón de fosfato de potasio 0.1 M/sulfato de sodio 0.1 M, pH 6.8 a 0,8 ml/min; 20 pl de inyección de soluciones de ~4,5 mg/ml), es similar al producto farmacéutico en todos los puntos temporales y no se observa agregación detectable después del almacenamiento durante 100 días a 4° C. Se demostró que la viscosidad, medida usando un viscosímetro microfluídico, permanecía estable después del almacenamiento durante 30 días a 4° C (Tabla 20). Además, la unión al antígeno de esta proteína de REMICADE® procesada se midió con un ensayo ELISA específico de REMICADE® y no se observó disminución en la unión al antígeno entre los días 0 y 100 (Tabla 20). De manera similar, el contenido de monómero (Tabla 21) y de unión a antígeno (normalizada a la del producto farmacéutico, Tabla 22) de soluciones concentradas de REMICADE® en CSAA 0,25 M son comparables al producto farmacéutico después de 1 semana de almacenamiento a temperatura ambiente. Por último, la Tabla 23 demuestra que el almacenamiento de una torta liofilizada que contiene CSAA a 4° C durante 75 días no tiene efectos negativos sobre la viscosidad de la solución o el grado de agregación de proteínas cuando se reconstituye la muestra. Los resultados de las Tablas 19-23 y la Figura 6 demuestran la estabilidad biofísica de REMICADE® formulado con CSAA antes y después del almacenamiento durante por lo menos 100 días a 4° C.

Tabla 19. No se observa aumento de la agregación (comparado con el producto farmacéutico) en una solución acuosa de REMICADE® (227 mg/ml, pH 7) después de la formulación con 0,25 M CSAA y almacenamiento a 4° C.

Día % de monómero

Producto farmacéutico 99.9+0.03

0 99.7+0 07

30 99.7+0 04

100 99.9+0.1

Tabla 20. Se retienen la viscosidad reducida y la unión al antígeno durante el tiempo en una solución acuosa de REMICADE® (227 mg/ml, pH 7) después de la formulación con CSAA 0,25 M y almacenamiento a 4° C.

Día Viscosidad (mPa.s (cP)) % de unión (ELISA)

0 65.2 ±0.7 105 14

30 62 2 14 98 12

100 n d 101 5

Tabla 21. No se observa agregación aumentada (comparada con el producto farmacéutico) en una solución acuosa de REMICADE® (219 mg/ml, pH 7) después de la formulación con CSAA 0,25 M y almacenamiento a temperatura ambiente.

% de monómero

Día

Producto farmacéutico 0.25 M CSAA

0 99.7 ± 0.1 99 9 ± 0.1

4 99.9 ±0.1 97.9 ± 0

7 100 ± O 100 ± 0

Tabla 22. La unión al antígeno persiste en una solución acuosa de REMICADE® (219 mg/ml, pH 7) después de la formulación con CSAA 0,25 M y almacenamiento a temperatura ambiente.

Tabla 23. El REMICADE® almacenado como un polvo liofilizado retiene la baja viscosidad y el contenido de monómero tras la reconstitución después de su almacenamiento a 4° C durante 75 días Tiempo de almacenamiento (días) Viscosidad, mPa.s (cP) % de Monómero (SEC)

0 65.2±07 99 760.1

75 59.3+1.0 98 960.1

Ejemplo de Referencia 10. El efecto de los agentes reductores de la viscosidad sobre soluciones acuosas de HERCEPTIN®

Materiales y métodos

Se preparó HERCEPTIN® obtenido comercialmente que contenía excipientes farmacéuticos (tampón de histidina, trehalosa, polisorbato 20) según las instrucciones en la hoja de información de prescripción.

Posteriormente, el producto farmacéutico acuoso se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó y se analizó como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de 1,5 l/g*cm a 280 nm). Las viscosidades se midieron usando un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC equipado con un chip "A" o "B".

Resultados

Los datos presentados en la Tabla 24 muestran que la viscosidad de una solución acuosa de HERCEPTIN® que contiene agentes reductores de la viscosidad, en comparación con los que contienen PB, es menor en presencia de CSAA. A concentraciones de proteína más altas (es decir, >250 mg/ml), el arginina HCl solo reduce la viscosidad significativamente y CSA mejora adicionalmente el efecto.

Tabla 24. Viscosidades de las soluciones acuosas de HERCEPTIN® que contienen sales 0,25 M a 25° C y pH

7,0.

Viscosidad (mPa.s (cP))

[n tK L -tK i ir*&j (mg/mi_)

PB ArgHCI CSAA BSAA

270 6 400+4 179 ± 17 96 7 4.7 115 6

254 3 172 5 116 ±24 78.0 ±8.7 75.4 ±5.0

216 ± 0 n.d. 44.8±1.1 55.7 ±2.3 n.d.

PB = tampón de fosfato; ArgHCI = arginina HCl; n.d. = no determinado

Ejemplo de Referencia 11. El efecto de los agentes reductores de la viscosidad sobre soluciones acuosas de TYSABRI®

Materiales y métodos

El TYSABRI® obtenido comercialmente que contiene excipientes farmacéuticos (tampón de fosfato de sodio, cloruro de sodio, polisorbato 80) se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó, y se analizó como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de 1,5 L/g*cm a 280 nm). Las viscosidades se midieron usando un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC equipado con un chip "A" o "B".

Resultados

Los datos presentados en la Tabla 25 muestran que la reducción de la viscosidad de una solución acuosa de TYSABRI® que contiene agentes reductores de la viscosidad es de aproximadamente 2,5 veces (en comparación con solución que contiene PB) cerca de 276 mg/ml de proteína.

Tabla 25. Viscosidades de soluciones acuosas de TYSABRI® que contienen agentes reductores de la viscosidad 0,25 M a 25° C y pH 7,0.

Viscosidad (mPa.s (cP))

ITYRA R RIífiíl ím n /m l \

PB ArgHCI CSAA BSAA

276 ± 8 255 ± 5 97.2 ±5.7 92.9 ± 2.6 n.d.

237 ± 4 182 ± 6 52.3 ±4.5 47.1 ±2.1 n.d.

230 ±2 n d 37.0 ± 0.1 nd. 34.9 ± 1.3 PB = tampón de fosfato; ArgHCI = arginina HCl; n.d. = no determinado.

Ejemplo de Referencia 12. El efecto de los agentes reductores de la viscosidad sobre soluciones acuosas de RITUXAN® biosimilar

Materiales y métodos

El RITUXAN® biosimilar obtenido comercialmente que contenía excipientes farmacéuticos (tampón de citrato, cloruro sódico, y TWEEN® 80) se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó, y se analizó como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de 1,7 L/g*cm a 280 nm). Las viscosidades se midieron usando un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC equipado con un chip "A" o "B".

Resultados

Los datos presentados en la Tabla 26 muestran que la reducción de la viscosidad de una solución acuosa de RITUXAN® biosimilar que contiene agentes reductores de la viscosidad es de más de 13 veces a aproximadamente 213 mg de proteína ml y de más de 5 veces a aproximadamente 202 mg/ml, en comparación con el mAb formulado en PB.

Tabla 26. Viscosidades de las soluciones acuosas de RITUXAN® biosimilar con agentes reductores de la viscosidad a 25° C H 70.^

Ejemplo de Referencia 13. El efecto de los agentes reductores de la viscosidad sobre soluciones acuosas de VECTIBIX®

Materiales y métodos

El VECTIBIX® obtenido comercialmente que contenía excipientes farmacéuticos se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó, y se analizó como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de 1,25 l/g*cm a 280 nm). Las viscosidades se midieron usando un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC equipado con un chip "A" o "B".

Resultados

Los datos presentados en la Tabla 27 muestran que la reducción de la viscosidad de una solución acuosa de VECTIBIX® que contiene agentes reductores de la viscosidad es aproximadamente 2 veces mayor a 291 mg/ml y 3 veces mayor a 252 mg/ml, en comparación con soluciones con PB pero sin agentes reductores de la viscosidad. Tabla 27. Viscosidades de soluciones acuosas de VECTIBIX® con agentes reductores de viscosidad 0,25 M a _______________________________________ 25° C y pH 7,0.______________________________________ Viscosidad (mPa.s (cP))

[VECTIBIX®] (mg/mL)

PB AngHCI CSAA

291 ± 3 328±12 n.d. 162 ±1 264 n.d n.d. 44.3 ±2.3

252 ± 3 80.3±3.3 36.2 ±1.0 27.4 ±1.2

233 ±4 38.7±1.8 24.7 ±1.3 26.2 ±6.5

Ejemplo de Referencia 14. El efecto de los agentes reductores de la viscosidad sobre soluciones acuosas de ARZERRA®

Materiales y métodos

El ARZERRA® obtenido comercialmente que contiene excipientes farmacéuticos se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó, y se analizó como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de 1,5 L/g*cm a 280 nm). Las viscosidades se midieron usando un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC equipado con un chip "A" o "B".

Resultados

Los datos presentados en la Tabla 28 muestran que la reducción de la viscosidad de una solución acuosa de ARZERRA® que contiene agentes reductores de la viscosidad es aproximadamente 3 veces mayor a 274 mg/ml y 2 veces mayor a 245 mg/ml, en comparación con soluciones con PB pero sin agentes reductores de la viscosidad. Tabla 28. Las viscosidades de soluciones acuosas de ARZERRA® con agentes reductores de la viscosidad 0,25 M a 25° C y pH 7,0.

Viscosidad (mPa.s (cP))

[ARZERRA®] (mg/mL) _PB CSAA CSAAPMI

274 ± 10 349 ± 2 125 ± 7 98 9 ± 0.7

245 ± 4 120 ± 4 n.d. 53 6 ± 0.6

Ejemplo de Referencia 15. Comparación de diferentes métodos para medir la viscosidad

Materiales y métodos

Se prepararon soluciones acuosas que contenían 220 mg/ml de REMICADE® y CSAA 0,25 M como en el Ejemplo 1 descrito anteriormente. Las viscosidades a 25° C y pH 7,0 se presentan en la Tabla 29 como viscosidades de cizallamiento cero extrapoladas de mediciones viscosímetro de cono y placa y como viscosidades absolutas medidas con un viscosímetro microfluídico. Las mediciones de cono y placa usaron un viscosímetro de placa y cono DV2T (Brookfield) equipado con un husillo CPE40 o CPE52 medidas a múltiples tasas de cizallamiento entre 2 y 400 s-1. Se determinó una viscosidad de cizallamiento cero extrapolada a partir de un gráfico de viscosidad absoluta frente a tasa de cizallamiento. Las mediciones del viscosímetro microfluídico se realizaron usando un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC equipado con un chip "A" o "B" a múltiples caudales (aproximadamente 20%, 40% y 60% de la presión máxima para cada chip).

Resultados

Los datos de la Tabla 29 demuestran que las viscosidades absolutas del viscosímetro microfluídico pueden compararse directamente con las viscosidades de cizallamiento cero extrapoladas determinadas a partir del viscosímetro de cono y placa.

Tabla 29. Viscosidades de las soluciones acuosas de REMICADE® (220 mg/ml) con CSAA 0,25 M a 25° C y pH 7,0 medidas en dos viscosímetros diferentes.

Instrumento Viscosidad (mPa.s (cP)) Viscosímetro de cono y placa (C&P) 62.3 ±0.1

Viscosímetro microfluídico en un chip (mVROC) 53.7 ± 9.3

Para comparar un intervalo más amplio de viscosidades y concentraciones de proteínas, se prepararon soluciones acuosas de un anticuerpo modelo, gammaglobulina bovina, con y sin CSAL 0,25 M. Las viscosidades se midieron como se ha descrito anteriormente a concentraciones de proteína que variaban de 110 mg/ml a 310 mg/ml. Los datos presentados en la Tabla 30 demuestran que las viscosidades absolutas del viscosímetro microfluídico pueden compararse directamente con las viscosidades de cizallamiento cero extrapoladas para soluciones de proteínas de baja y alta viscosidad.

Tabla 30. Viscosidades de soluciones de gammaglobulina acuosas con y sin CSAL 0,25 M a 25° C y pH 7,0 medidas en dos viscosímetros diferentes.

Viscosidad (mPa.s (cP))

[gammaglobulina] sin CSAL con CSAL

(mg/mL) c&P microfluídico C&P microfluídico 110 3.81=0.19 2.66 ±0.01 n.d. n.d.

170 12.0±0.6 11.0+0.1 10.3 1.0 10.6 ±0.1 260 167 1 161 ±1 93.5 ±1.2 85 3 ±0.3

310 399 1 377+2 223 1 203 ±2

Ejemplo de Referencia 16. Los agentes reductores de la viscosidad no muestran signos de toxicidad cuando se inyectan por vía subcutánea.

Materiales y métodos

Se separaron treinta ratas Sprague-Dawley de 11 semanas de edad en 6 grupos de 5 ratas cada uno (3 grupos de control de solución salina y 3 grupos de CSAA). A las ratas se les inyectaron por vía subcutánea 0,5 ml de solución salina tamponada con fosfato libre de endotoxinas o CSAA 0,25 M libre de endotoxinas de acuerdo con el siguiente programa: a un grupo de cada condición se le inyectó una vez el día 1 y luego se sacrificó 1 hora después; a un grupo de cada condición se le inyectó una vez el día 1 y una vez el día 2 y luego se sacrificó 24 horas después de la segunda inyección; y a un grupo de cada condición se le inyectó una vez el día 1, una vez el día 2 y una vez el día 3, y luego se sacrificó 24 horas después de la tercera inyección.

Se registraron las observaciones clínicas de cualquier signo farmaco-toxicológico antes de la dosis, inmediatamente después de la dosis, 1 y 4 horas (± 15 minutos) después de la dosis, y a partir de ahí diariamente. La irritación, si la hubo, en los sitios de inyección se puntuó usando las puntuaciones de evaluación de Draize antes de la dosis, inmediatamente después de la dosis, 1 hora (± 15 minutos) después de la dosis y antes del sacrificio. Resultados

En general, las consecuencias observadas de las inyecciones de solución salina y CSAA fueron macroscópicamente similares durante el transcurso del estudio. Ambas indujeron desde ninguna irritación hasta una ligera irritación con puntuaciones de edema de 0-2 en varios puntos temporales. El examen microscópico de los sitios de inyección sugiere un efecto irritante muy menor, clínicamente insignificante, con CSAA que ya no era evidente el día 4.

Ejemplo de Referencia 17. Las soluciones acuosas concentradas de REMICADE® formuladas con agentes reductores de la viscosidad muestran fuerzas de extrusión en jeringuilla bajas y alto contenido de monómero cuando se expulsan a través de agujas de varios calibres.

Materiales y métodos

Se preparó REMICADE® obtenido comercialmente que contiene excipientes farmacéuticos (sacarosa, polisorbato 80, tampón de fosfato de sodio) según las instrucciones de la hoja de información de prescripción. Posteriormente, el producto farmacéutico acuoso se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó y se analizó como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de 1,4 l/g*cm a 280 ciclos). Se usaron soluciones 20 nM de tampón de fosfato, CSAAPMI o CSAA para el intercambio de tampón, y las tortas liofilizadas se reconstituyeron a 0,25 M de cada agente reductor de la viscosidad. Después de la reconstitución, se midió la viscosidad de cada solución usando el viscosímetro microfluídico como se describe en los ejemplos anteriores. Luego, las soluciones se volvieron a cargar en jeringuillas de insulina BD de 1 ml con agujas fijas de calibre 27, 29 o 31. Luego se midió la fuerza requerida para extruir las soluciones de REMICADE® concentradas usando un Instron a una tasa de desplazamiento equivalente a un caudal de fluido de 3 ml/min. La solución expulsada se recogió de la jeringuilla y se analizó mediante cromatografía de exclusión por tamaño.

Resultados

Todas las soluciones REMICADE® que contenían agentes reductores de la viscosidad fueron capaces de ser expulsadas a través de las jeringuillas a fuerzas de extrusión relativamente bajas (Tabla 31). La solución que contenía tampón de fosfato no pudo expulsarse debido a su alta viscosidad. Ambas soluciones que contenían agentes reductores de la viscosidad retuvieron un alto contenido de monómero después de la extrusión independientemente del calibre de la aguja, como se indica en la Tabla 31.

Tabla 31. Capacidad de jeringuilla de soluciones acuosas concentradas de REMICADE® extruidas a través de varios calibres de a ua.

Ejemplo 18: Los agentes reductores de la viscosidad reducen la viscosidad de soluciones acuosas concentradas de AVASTIN® biosimilar

Materiales y métodos

Se purificó un AVASTIN® biosimilar obtenido comercialmente que contiene excipientes farmacéuticos (polisorbato 20, tampones de fosfato y de citrato, manitol y NaCl). Primero, se eliminó el polisorbato 20 usando DETERGENT-OUT®TWEEN Medi Columns (G-Biosciences). Después, las soluciones resultantes se intercambiaron extensamente de tampón en tampón de fosfato de sodio (PB) 20 mM para muestras de PB y PB 2 mM para muestras de agentes reductores de la viscosidad, y se concentraron a un volumen final de menos de 10 ml en concentradores centrífugos Jumbosep (Pall Corp.). Luego, se añadió el agente reductor de la viscosidad a las muestras de PB 2 mM como se describe en el Ejemplo 4 anterior. Los agentes reductores de la viscosidad se añadieron en una cantidad suficiente para dar concentración tras la reconstitución como se especifica a continuación. En los casos de combinaciones de agentes, la concentración de cada componente es de 0,15 M. Luego, se secaron por congelación las soluciones de proteínas. Las tortas de proteínas secas se reconstituyeron en tampón de fosfato (para muestras de PB) o agua (para muestras que contienen agentes reductores de la viscosidad) hasta un volumen final de aproximadamente 0,10 ml. La concentración final de mAb en solución se determinó o mediante un ensayo de cuantificación de proteínas Coomassie comparando concentraciones desconocidas de muestras con una curva estándar de AVASTIN® biosimilar o mediante A280 usando el coeficiente de extinción de 1,7 L/g*cm, cuando era posible. Las viscosidades informadas se midieron en un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC. Los resultados se presentan en la Tabla 32.

Resultados

Muchos compuestos de GRAS, IIG, y API son capaces de reducir la viscosidad de soluciones de AVASTIN® biosimilares concentradas con respecto a las muestras tamponadas con fosfato. De los compuestos incluidos en la Tabla 32, los anestésicos locales como la procaína y la lidocaína, así como los agentes de GRAS como la biotina, se encuentran entre los excipientes reductores de la viscosidad más eficaces.

Tabla 32: Efecto de los a entes reductores de la viscosidad sobre las soluciones de AVASTIN® biosimilar.

continuación

Ejemplo de Referencia 19. La reducción de la viscosidad es un efecto dependiente de la concentración del agente

Materiales y métodos

Se prepararon soluciones acuosas de un AVASTIN® biosimilar obtenido comercialmente como se describe en el Ejemplo 4. Las tortas de proteínas secas se reconstituyeron en tampón de fosfato o agua hasta un volumen final de aproximadamente 0,10 ml y una concentración final de diclorhidrato de 1-(3-aminopropil)-2-metil-1H-imidazol (APMI*2HCl) de 0,10 o 0,25 M. La concentración final de mAb en solución se determinó mediante un ensayo de cuantificación de proteínas de Coomassie comparando concentraciones desconocidas de muestras con una curva estándar de AVASTIN® biosimilar. Las viscosidades informadas se midieron en un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC.

Resultados

Como se representa en la Figura 7, el efecto reductor de la viscosidad aumentó a medida que aumentaba la concentración de APMI*2HCl.

Ejemplo de Referencia 20. Un solo agente reductor de la viscosidad reduce la viscosidad de muchos anticuerpos monoclonales terapéuticamente relevantes.

Materiales y métodos

Se prepararon soluciones acuosas de un AVASTIN® biosimilar obtenido comercialmente como se describe en el Ejemplo 4. Las tortas de proteínas secas se reconstituyeron en tampón de fosfato o agua hasta un volumen final de aproximadamente 0,10 ml y una concentración de tiamina HCl final del 0,10 o 0,25 M. La concentración final de mAb en solución se determinó mediante un ensayo de cuantificación de proteínas de Coomassie comparando concentraciones desconocidas de muestras con una curva estándar de AVASTIN® biosimilar.

El TYSABRI® obtenido comercialmente que contiene excipientes farmacéuticos (tampón de fosfato de sodio, NaCl, polisorbato 80) se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó, y se analizó de la misma manera. El HERCEPTTN® obtenido comercialmente que contiene excipientes farmacéuticos (tampón de fosfato de sodio, NaCl, polisorbato 80) se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó y se analizó de la misma manera. El ERBITUX® biosimilar obtenido comercialmente que contiene excipientes farmacéuticos (polisorbato 80, tampón de fosfato, y NaCl) se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó y se analizó de la misma manera. El REMICADE® obtenido comercialmente que contiene excipientes farmacéuticos (sacarosa, polisorbato 80, tampón de fosfato de sodio) se preparó según las instrucciones de la hoja de información de prescripción. Posteriormente, el producto farmacéutico acuoso se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó y se analizó como se describe de la misma manera. Las viscosidades informadas se midieron en un viscosímetro microfluídico RheoSense mVROC.

Resultados

Los datos de la Tabla 33 demuestran que la tiamina HCl puede reducir la viscosidad de las soluciones acuosas concentradas de muchos mAb terapéuticamente relevantes. La tiamina HCl puede producir una reducción de la viscosidad de más de 4 veces para cada mAb.

Tabla 33: Efecto de tiamina HCl sobre la viscosidad de la solución.

Ejemplos 21-24. Los agentes reductores de la viscosidad reducen la viscosidad de las soluciones acuosas de muchos anticuerpos monoclonales terapéuticamente relevantes

Materiales y métodos

Las soluciones acuosas de RITUXAN® biosimilar, TYSABRI®, HERCEPTIN®, ERBITUX® biosimilar, y REMICADE® obtenidos comercialmente se prepararon como se describe en los Ejemplos 18 y 19. Las tablas 34-38 demuestran que los agentes reductores de la viscosidad pueden emplearse ventajosamente para muchos anticuerpos monoclonales diferentes.

Resultados

Tabla 34: Viscosidades de soluciones acuosas de RITUXAN® biosimilar en presencia de agentes reductores de la viscosidad 015 M

continuación

Tabla 35: Viscosidades de soluciones acuosas de TYSABRI® en presencia de agentes reductores de viscosidad 0,15 M (a menos que se indique lo contrario).

Agente [TISABRI®],mg/mL Viscosidad, mPa.s (cP)

310 715 106

P B " 278 255 ± 5

237 182 ± 6

Creatinina (0.30 M)” 219 40.8 1.8

Procaína HCl 228 45.1 1.5

Biotina Na** 233 75.8 4 0.4 TiaminaHCI (0.10M)" 244 43.4 4 0.7

"Ejemplos de referencia

Tabla 36: Viscosidades de soluciones acuosas de HERCEPTIN® en presencia de agentes reductores de la _____________________ viscosidad 0,15 M (a menos que se indique lo contrario)._____________________

272 400 4

253 172 4- 5

PB**

239 122 4 17

218 71.6 4 3.9

Creatinina (0.3 M)** 222 45.7 4 0.3 Procaína HCl 222 41.8 0.6

CSA piperazina" 236 50.3 0.6

CSA-Na Omidazol" 232 60.1 4 0.6 Biotina-Na” 230 69.9 4 2.3 Tiamina HCl (0.10 M)** 245 41.5 4 0.5

"Ejemplos de referencia

Tabla 37: Viscosidades de soluciones acuosas de E RBITUX® en presencia de agentes reductores de la

Tabla 38: Viscosidades de soluciones acuosas de REMICADE® en presencia de agentes reductores de la viscosidad 0,15 M (a menos que se indique lo contrario).

Agente [REMICADE®], mg/mL Viscosidad, mPa.s (cP)

PB** 176 432 30 Creatinina** 144 37.1 0.5 Procaína HCl 174 23.4 0.2 Tiamina HCl ** 173 40.7 0.3

“ Ejemplos de referencia

Ejemplo de Referencia 25. Efecto reductor de la viscosidad de TPP y TPPAPMI, como una función de la concentración de AVASTIN biosimilar®

Se prepararon soluciones acuosas de un AVASTIN® biosimilar obtenido comercialmente como se describe en el Ejemplo 1 anterior. La proteína se formuló para contener tampón de fosfato 0,25 M, pirofosfato de tiamina 0,10 M (TPP) o TPP- 1-(3-aminopropil)-2-metil-1H-imidazol (TPPAPMI) 0,10 M.

La Figura 8 representa la viscosidad de soluciones de AVASTIN® biosimilares acuosas en función de la concentración de mAb con tampón de fosfato, TPP o TPPAPMI. La viscosidad de AVASTIN biosimilar® en tampón de fosfato aumenta exponencialmente dentro del intervalo de concentraciones de proteínas probados. En presencia de excipientes que contienen TPP, el aumento de la viscosidad se atenúa, es decir, se reduce el gradiente de viscosidad.

Ejemplo 26: Efecto de un agente reductor de la viscosidad, tiamina HC1 reductor de la viscosidad, como una función de la concentración de biosimilar SIMPONI ARIA®

Materiales y métodos

El SIMPONI ARIA® obtenido comercialmente y que contiene excipientes farmacéuticos (histidina, sorbitol, polisorbato 80), se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó y se analizó como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de 1,4 l /gcm a 280 nm). La proteína se formuló para contener o tampón fosfato 0,15 M o tiamina HCl 0,15 M.

Resultados

La Figura 9 representa la viscosidad de las soluciones de SIMPONI ARIA® acuosas en función de la concentración de mAb con tampón de fosfato o tiamina HCl. La viscosidad de SIMPONI ARIA® en tampón fosfato aumenta exponencialmente dentro del intervalo de concentraciones de proteínas probadas. En presencia de tiamina HCl, se atenúa el aumento de viscosidad, es decir, se reduce el gradiente de viscosidad.

Ejemplo de referencia 27. Efecto reductor de la viscosidad de tiamina HCl, como una función de la concentración de ENBREL®

Materiales y métodos

El ENBREL® obtenido comercialmente y que contiene excipientes farmacéuticos (manitol, sacarosa, trometamina) se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó, y se analizó como se describe en el Ejemplo 1 anterior (usando el coeficiente de extinción de 0,96 l/gcm a 280 nm). La proteína se formuló para contener o tampón fosfato 0,15 M o tiamina HCl 0,15 M.

Resultados

La Tabla 39 representa la viscosidad de las soluciones de ENBREL® acuosas con tampón fosfato o tiamina HCl. La adición de tiamina HCl reduce la viscosidad de ENBREL® hasta aproximadamente 2 veces.

Tabla 39: Las viscosidades de soluciones acuosas de ENBREL® en presencia de PB 0,15 M o Tiamina HCl [ENBR ELj, mg/mL 0.15 MIPB 0.15 M Tiamina HCl

271 ± 0 1120 ± 26 626 ± 32

250 ± 3 439 ± 11 305 ± 7

212 ± 7 316 ± 11 141 ± 3

Ejemplo de referencia 28. Las soluciones isotónicas de excipientes reductores de la viscosidad reducen la viscosidad de las soluciones concentradas de REMICADE®

Materiales y métodos

El REMICADE® obtenido comercialmente que contiene excipientes farmacéuticos (sacarosa, polisorbato 80, tampón de fosfato de sodio) se preparó según las instrucciones en la hoja de información de prescripción. Posteriormente, el producto farmacéutico acuoso se purificó, se intercambió de tampón, se concentró, se secó, se reconstituyó y se analizó como se describe en el Ejemplo 1, excepto que se añadieron cantidades isotónicas de compuestos hidrófobos cargados.

Resultados

Como se demuestra en la Tabla 40, las cantidades isotónicas de CSAA y CSAAPMI son capaces de reducir sustancialmente la viscosidad de las soluciones concentradas de REMICADE®, en algunos casos hasta aproximadamente 10 veces.

Tabla 40. Viscosidades de soluciones de REMICADE® en presencia de excipientes reductores de la viscosidad isotónicos (0,3 molal)

Sal [REMICADE®] (mg/mL) Viscosidad

^{P B 1 7 1} 432

CSAAPMI 167 41.4 ± 0.7

^{P B 1 3 1} 175 ± 15

CSAAPMI 124 1±.4 ±1.2

CSAA 12S 25.8 ± 0.8

A menos que se defina expresamente lo contrario anteriormente, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen los mismos significados que los entendidos comúnmente por un experto en la técnica.

Claims (21)

REIVINDICACIONES

1. Una formulación farmacéutica líquida para inyección que comprende:

(i) por lo menos 100 mg/ml de un anticuerpo;

(ii) procaína o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(iii) un solvente farmacéuticamente aceptable;

en donde la formulación farmacéutica líquida, cuando está en un volumen adecuado para inyección:

(a) tiene una viscosidad absoluta de 1 mPa.s (1 cP) a 100 mPa.s (100 cP) a 25° C como se mide usando un viscosímetro de cono y plato o un viscosímetro microfluídico; y

(b) la viscosidad absoluta de la formulación farmacéutica líquida es menor que una viscosidad absoluta de una composición de control que comprende el anticuerpo y el solvente farmacéuticamente aceptable pero sin la procaína o la sal farmacéuticamente aceptable de la misma;

en donde la viscosidad absoluta es una viscosidad de cizallamiento cero extrapolada.

2. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

3. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el anticuerpo tiene un peso molecular de 120 kDa a 250 kDa.

4. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el solvente farmacéuticamente aceptable es acuoso.

5. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende además uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, el uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables comprendiendo un azúcar, alcohol de azúcar, agente tamponante, conservante, portador, antioxidante, agente quelante, polímero natural, polímero sintético, crioprotector, lioprotector, surfactante, agente de carga, agente estabilizante, o cualquier combinación de los mismos.

6. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el alcohol de azúcar es sorbitol o manitol.

7. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables comprenden un polisorbato, poloxámero 188, lauril sulfato de sodio, un poliol, poli(etilenglicol), glicerol, propilenglicol o un poli(alcohol vinílico).

8. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en un vial de dosis unitarias, un vial de dosis múltiples, cartucho, o jeringuilla precargada.

9. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde la formulación farmacéutica líquida es isotónica para el suero de sangre humana.

10. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde la viscosidad absoluta se mide a una tasa de cizallamiento de por lo menos 0,5 s-1 cuando se mide usando un viscosímetro de cono y placa o una tasa de cizallamiento de por lo menos 1,0 s-1 cuando se mide usando un viscosímetro microfluídico.

11. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde la formulación farmacéutica líquida se reconstituye a partir de una composición liofilizada.

12. Una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para su uso en un método de administración mediante inyección subcutánea o intramuscular.

13. Una formulación farmacéutica líquida para el uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la formulación farmacéutica líquida produce un índice de irritación primario de menos de 3 cuando se evalúa usando un sistema de puntuación de Draize.

14. Una formulación farmacéutica líquida para el uso de acuerdo con la reivindicación 12 o 13, en donde la fuerza de inyección es por lo menos un 10% menor que la fuerza de inyección para una composición de control, la composición de control comprendiendo el anticuerpo y el solvente farmacéuticamente aceptable, pero sin la procaína o la sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

15. Una formulación farmacéutica líquida para el uso de acuerdo con la reivindicación 12 o 13, en donde la fuerza de inyección es por lo menos un 20% menor que la fuerza de inyección para una composición de control, la composición de control comprendiendo el anticuerpo y el solvente farmacéuticamente aceptable, pero sin la procaína 0 la sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

16. Una formulación farmacéutica líquida para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, en donde la inyección se administra con una aguja entre calibre 27 y 31 de diámetro.

17. Una formulación farmacéutica líquida para el uso de acuerdo con la reivindicación 16, en donde la fuerza de inyección es menor de 30 N con una aguja de calibre 27.

18. Una formulación farmacéutica líquida para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 17, en donde la inyección subcutánea o intramuscular se realiza con una jeringuilla calentada, una jeringuilla de automezclado, un autoinyector, una jeringuilla precargada, o combinaciones de las mismas.

19. Una formulación farmacéutica líquida para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 18, en donde el volumen de formulación farmacéutica líquida es igual a menor de 1,5 ml para inyección subcutánea, o igual a o menor de 3 ml para inyección intramuscular.

20. Un método para preparar una formulación farmacéutica líquida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 que comprende el paso de combinar el anticuerpo, el solvente farmacéuticamente aceptable, y la procaína o la sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

21. Una composición liofilizada que comprende:

(i) un anticuerpo;

(ii) procaína o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(iii) un excipiente farmacéuticamente aceptable;