ES2907858T3 - Compuestos y métodos para el tratamiento de infecciones bacterianas - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la fórmula: **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde X es H, CN, C(O)NR1R2, NR1R2 o alquilo (C1-C6) sustituido opcionalmente con NHC(O)R9 o S(O)NH2; Y es NOR3; o R3 y X tomados junto con los átomos a los que están unidos, forman un heterociclilo de 4 a 6 miembros o un heteroarilo de 5 a 6 miembros, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre alquilo (C1-C6), C=O, C(O)OH y C(O)Oalquilo (C1-C6), en donde dicho alquilo (C1- C6) está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre OH, alcoxi (C1-C6), fenilo y heteroarilo de 5 a 6 miembros, en donde dicho heteroarilo de 5 o 6 miembros está opcionalmente sustituido con NH2, - NH(alquilo C1-C6) y -N(alquilo (C1-C6))2; R1 y R2 son cada uno independientemente hidrógeno, ciano, C(O)NH2, NH2, OH, alcoxi (C1-C6) o alquilo (C1-C6) sustituido opcionalmente con uno o más R7; R3 es hidrógeno, -C(O)alquilo (C1-C6), C(O)NRdRe, SO2NH2, SO2OH o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más R7; R4, R5 y R6 son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo (C1-C6) o C(O)NRaRb, en donde dicho alquilo (C1-C6) para R4, R5 y R6 está opcionalmente sustituido con uno o más R7, con la condición de que al menos uno de R4 y R5 no sea hidrógeno y con la condición de que R4 y R5 no estén presentes cuando el átomo de nitrógeno correspondiente al que están unidos R4 y R5 está conectado a un átomo de anillo adyacente a través de un doble enlace; cada R7 se selecciona independientemente entre halo, OH, ORc, alcoxi (C1-C6), CN, heterociclilo de 4 a 6 miembros, heteroarilo de 5 a 6 miembros, fenilo, C(=NH)NH2, NHC(=NH)NH2, NRdRe, C(O)OH, C=NOalquilo (C1- C6)NH2, NHC(O)alquilo (C1-C6), C(O)NRdRe, SO2Rf y S(O)Rf, en donde dicho heteroarilo de 5 a 6 miembros está opcionalmente sustituido con NH2 y dicho fenilo está opcionalmente sustituido con NH2; Ra, Rb, Rd y Re son cada uno independientemente hidrógeno, OH, alquilo (C1-C6), alcoxi (C1-C6), fenilo, OSO2OH, cicloalquilo de 4 a 6 miembros, heterociclilo de 4 a 6 miembros o heteroarilo de 5 a 6 miembros, en donde cada uno de dichos alquilo (C1-C6) y alcoxi (C1-C6) para Ra, Rb, Rd y Re están opcional e independientemente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre OH, NH2, C(O)OH, C(O)Oalquilo (C1-C6), NHC(O)NH2, NHC(O)NHalquilo (C1-C6), C(O)NH2, NHC(O)N(alquilo (C1-C6)2, NHC(O)alquilo (C1-C6), NHC(O)halo alquilo(C1- C6), heterociclilo de 4 a 6 miembros, heteroarilo de 5 a 6 miembros, NHalquilo (C1-C6) y N(alquilo (C1-C6))2, en donde cada uno de dichos fenilo, heterociclilo de 4 a 6 miembros, cicloalquilo de 4 a 6 miembros y heteroarilo de 5 a 6 miembros para Ra, Rb, Rd y Re, y dicho grupo heteroarilo opcional de 5 a 6 miembros para alquilo (C1-C6) y alcoxi (C1-C6) para Ra, Rb, Rd y Re están opcional e independientemente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre alquilo (C1-C6), NH2, NHalquilo (C1-C6) y -N(alquilo (C1-C6))2; Rc es fenilo opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre C(=NH)NH2, C(=NH)NH(heterociclilo de 5 a 6 miembros), C(=NH)NHalquilo (C1-C6), NHC(=NH)NH2, -NRdRe, C(O)NRdRe, SO2Rf y SORf en donde dicho alquilo (C1-C6) en el grupo C(=NH)NHalquilo (C1-C6) está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados entre NH2, -NH(alquilo C1-C6) y -N(alquilo (C1-C6))2; Rf es hidrógeno o alquilo (C1-C6); y Rg es heterociclilo de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre C=O y alquilo (C1-C6).

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos y métodos para el tratamiento de infecciones bacterianas

Solicitudes relacionadas

Antecedentes

Según el Centro para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC), se estima que cada año se producen 51.000 infecciones por P. aeruginosa relacionadas con la atención médica solo en Estados Unidos, y más de 6.000 (13 %) de estas infecciones se producen por cepas resistentes a múltiples fármacos. Esto ha llevado a, en promedio, aproximadamente 400 muertes anuales. El Centro Europeo para el Control y la Prevención de Enfermedades tiene valores aún más altos con una estimación en 2009 de aproximadamente 800.000 días adicionales de hospitalización y 10.000 muertes adicionales causadas por cepas resistentes de P. aeruginosa. Actualmente, la tasa de resistencia a múltiples fármacos es de aproximadamente un 20 % para P. aeruginosa y se espera que aumente a aproximadamente un 30 % para el año 2040.

Los tratamientos actuales contra P. aeruginosa incluyen antibióticos p-lactámicos. Aunque algunos antibióticos plactámicos son prometedores in vitro, la mayor parte, si no todos, están plagados de alta resistencia en entornos clínicos. Debido a la resistencia continua y al aumento estimado de infecciones, el desarrollo de nuevos antibacterianos, particularmente aquellos que no están afectados por mecanismos de resistencia, o que lo están solo levemente, actualmente observados en la clínica, es una necesidad médica importante. Los documentos WO 2014/141132, US 2009/018329 y US 2013/289012 describen varios compuestos heterocíclicos y su uso como agentes antibacterianos e inhibidores de p-lactamasa. Los documentos US 2010/093784 y WO 2013/030735 también describen compuestos heterocíclicos y su uso como agentes antibacterianos.

Sumario

En el presente documento se proporcionan compuestos antibacterianos que son útiles para, entre otros usos, el tratamiento de infecciones bacterianas. Dichos compuestos están representados por la Fórmula I,

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde X, Y, R4, R5 y R6 son como se definen en el presente documento. También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de Fórmula I.

Los compuestos desvelados actúan como inhibidores de la proteína 3 de unión a penicilina (PBP3) y, en algunos casos, también inhibidores de PBP1, y muestran actividad antibacteriana. Véanse, por ejemplo, las Tablas 6 y 7.

Los inhibidores de PBP3 desvelados también tienen una mejora sustancial in vivo sobre los inhibidores de PBP2 conocidos. Véanse, por ejemplo, el "perfilado in vivo para inhibidores de PBP de P. aeruginosa" en la sección de ejemplos así como en las figuras 1 y 2, donde el Ejemplo 40 de la presente solicitud se comparó con un inhibidor de PBP2 (Comparador 1). La única diferencia estructural entre el Ejemplo 40 y el Comparador 1 es la sustitución de un grupo aminometilo por un grupo N-metil-amidoxima. No obstante, el comparador 1 no fue activo frente a un aislado clínico de P. aeruginosa en un modelo de muslo murino neutropénico (no logró la estasis en este estudio incluso con exposiciones del 100 % del tiempo por encima de la CMI), mientras que el Ejemplo 40 de la presente solicitud mostró una eficacia sólida (reducción de más de 2 Log(UFC/g) con una exposición del 57 % de tiempo por encima de la CMI).

También se ha descubierto que el reemplazo de un carbonilo por una oxima proporciona una mejora en la actividad bioquímica de PBP3 y una disminución en la CMI en patógenos gramnegativos. Véanse, por ejemplo, los datos en las tablas 5-7, que comparan los resultados del Comparador 2 con las oximas de la presente divulgación.

Breve descripción de las figuras

La figura 1 muestra la eficacia in vivo de un compuesto PBP2 (Comparador 1) contra un aislado clínico de P. aeruginosa (ARC6347, AmpC+, PoxB+) en un modelo de muslo murino neutropénico.

La figura 2 muestra la eficacia in vivo de un compuesto PBP3 de la presente solicitud (Ejemplo 40) frente a un aislado clínico de P. aeruginosa (ARC6347, AmpC+, PoxB+) en un modelo de muslo murino neutropénico.

Descripción detallada

1. Descripción general de los compuestos

En determinadas realizaciones, la presente divulgación proporciona un compuesto de Fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

X es H, CN, C(O)NR1R2, NR1R2 o alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente con NHC(O)Rg o S(O)NH2;

Y es NOR3; o R3 y X tomados junto con los átomos a los que están unidos, forman un heterociclilo de 4 a 6 miembros o un heteroarilo de 5 a 6 miembros, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre alquilo (Ci-Ca), C=O, C(O)OH y C(O)Oalquilo (Ci-Ca), en el que dicho alquilo (Ci­ Ca) está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre OH, alcoxi (Ci-Ca), fenilo y heteroarilo de 5 a a miembros, en el que dicho heteroarilo de 5 a a miembros está opcionalmente sustituido con NH2, -NH(alquilo Ci-Ca) y -N(alquilo (Ci-Ca))2;

R1 y R2 son cada uno independientemente hidrógeno, ciano, C(O)NH2, NH2, OH, alcoxi (Ci-Ca) o alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente con uno o más R7;

R3 es hidrógeno, -C(O)alquilo (Ci-Ca), C(O)NRdRe, SO2NH2, SO2OH o alquilo (Ci-Ca) opcionalmente sustituido con uno o más R7;

R4, R5 y Ra son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo (Ci-Ca) o C(O)NRaRb, en el que dicho alquilo (Ci­ Ca) para R4, R5 y Ra están opcionalmente sustituidos con uno o más R7, con la condición de que al menos uno de R4 y R5 no sea hidrógeno y con la condición de que R4 y R5 no estén presentes cuando el átomo de nitrógeno correspondiente al que están unidos R4 y R5 está conectado a un átomo de anillo adyacente a través de un doble enlace;

cada R7 se selecciona independientemente entre halo, OH, ORc, alcoxi (Ci-Ca), CN, heterociclilo de 4 a a miembros, heteroarilo de 5 a a miembros, fenilo, C(=NH)NH2, NHC(=NH)NH2, NRdRe, C(O)OH, C=NOalquilo (Ci-Ca)NH2, NHC(O)alquilo (Ci-Ca), C(O)NRdRe, SO2Rf y S(O)Rf, en el que dicho heteroarilo de 5 a a miembros está opcionalmente sustituido con NH2 y dicho fenilo está opcionalmente sustituido con NH2;

Ra, Rb, Rd y Re son cada uno independientemente hidrógeno, OH, alquilo (Ci-Ca), alcoxi (Ci-Ca), fenilo, OSO2OH, cicloalquilo de 4 a a miembros, heterociclilo 4 a a miembros o heteroarilo de 5 a a miembros, en el que cada uno de dicho alquilo (Ci-Ca) y alcoxi (Ci-Ca) para Ra, Rb, Rd y Re están opcional e independientemente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre OH, NH2, C(O)Oh , C(O)Oalquilo (Ci-Ca), NHC(O)NH2, NHC(O)NHalquilo (Ci-Ca), C(O)NH2, NHC(O)N(alquilo (Ci-Ca)2, NHC(O)alquilo (Ci-Ca), NHC(O)halo alquilo(Ci-Ca), heterociclilo de 4 a a miembros, heteroarilo de 5 a a miembros, -NHalquilo (Ci-Ca) y -N(alquilo (Ci-Ca))2, en el que cada uno de dicho fenilo, heterociclilo de 4 a a miembros, cicloalquilo de 4 a a miembros y heteroarilo de 5 a a miembros para Ra, Rb, Rd y Re, y dicho grupo heteroarilo opcional de 5 a a miembros para alquilo (Ci-Ca) y alcoxi (Ci-Ca) para Ra, Rb, Rd y Re están opcional e independientemente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre alquilo (Ci-Ca), NH2, NHalquilo (Ci-Ca) y -N(alquilo (Ci-Ca))2;

Rc es fenilo opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre C(=NH)NH2, C(=NH)NH(heterociclilo de 5 a a miembros), C(=NH)NHalquilo (Ci-Ca), NHC(=NH)NH2, -NRdRe, C(O)NRdRe, SO2Rf y SORf en el que dicho alquilo (Ci-Ca) en el grupo C(=NH)NHalquilo (Ci-Ca) está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados entre NH2, -NH(alquilo Ci-Ca) y -N(alquilo (Ci-Ca))2;

Rf es hidrógeno o alquilo (Ci-Ca); y

Rg es heterociclilo de 4 a a miembros opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre C=O y alquilo (Ci-Ca).

2. Definiciones

Cuando se usa en conexión para describir un grupo químico que puede tener múltiples puntos de unión, un guion (-) designa el punto de unión de ese grupo a la variable a la que se define. Por ejemplo, -NRdRe significa que el punto de unión de este grupo se produce en el átomo de nitrógeno.

Los términos "halo" y "halógeno", como se usan en el presente documento, se refieren a un átomo seleccionado entre flúor (flúor, F), cloro (cloro, Cl), bromo (bromo, Br) y yodo (yodo, I).

El término "alquilo" utilizado solo o como parte de un resto más grande, tal como "alcoxi", "haloalquilo", significa radical hidrocarbonado monovalente de cadena lineal o ramificado saturado. A menos que se especifique de otra manera, un grupo alquilo tiene Normalmente 1-6 átomos de carbono, es decir, alquilo (C-i-Ca). Como se utiliza en el presente documento, un grupo "alquilo (Ci-Ca)" significa un radical que tiene de 1 a 6 átomos de carbono en una disposición lineal o ramificada.

El término "haloalquilo" incluye grupos mono, poli y perhaloalquilo en los que los halógenos se seleccionan independientemente entre flúor, cloro, bromo y yodo.

"Alcoxi" significa un radical alquilo unido a través de un átomo de enlace de oxígeno, representado por -O-alquilo. Por ejemplo, "alcoxi (C1-C4)" incluye metoxi, etoxi, propoxi y butoxi.

A menos que se especifique de otra manera, el término "heteroarilo" se refiere a un radical aromático de 5 a 12 miembros que contiene 1-4 heteroátomos seleccionados entre N, O y S. En algunos casos, los átomos de nitrógeno en un heteroarilo pueden estar cuaternizados. El término "heteroarilo" puede usarse indistintamente con las expresiones "anillo heteroarilo", "grupo heteroarilo" o "heteroaromático". Un grupo heteroarilo puede ser monocíclico o bicíclico. El heteroarilo monocíclico incluye, por ejemplo, tienilo, furanilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo. Los heteroarilos bicíclicos incluyen grupos en los que un anillo heteroarilo monocíclico está fusionado con uno o más anillos arilo o heteroarilo. Los ejemplos no limitantes ejemplos incluyen indolilo, benzooxazolilo, benzooxodiazolilo, indazolilo, benzoimidazolilo, benzotiazolilo, quinolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, pirrolopiridinilo, pirrolopirimidinilo, pirrolopiridinilo, tienopiridinilo, tienopirimidinilo, indolizinilo, purinilo, naftiridinilo, y pteridinilo. Se entenderá que a menos que se especifique otra cosa, los sustituyentes opcionales en un grupo heteroarilo pueden estar presentes en cualquier posición sustituible e, incluyen, por ejemplo, la posición en la que se une el heteroarilo.

A menos que se especifique de otra manera, el término "heterociclilo" significa un anillo heterocíclico saturado o parcialmente insaturado de 4 a 12 miembros que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S. Los términos "heterociclo", "heterociclilo", y las expresiones "anillo heterociclilo", "grupo heterocíclico", "resto heterocíclico" y "radical heterocíclico", se usan de manera intercambiable en el presente documento. El anillo heterociclilo puede estar unido a su grupo colgante en cualquier heteroátomo o átomo de carbono que dé como resultado una estructura estable. Un grupo heterociclilo puede ser mono o bicíclico. Los ejemplos de radicales heterocíclicos monocíclicos saturados o parcialmente insaturados incluyen, sin limitación, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, terahidropiranilo, pirrolidinilo, pirrolidonilo, piperidinilo, oxazolidinilo, piperazinilo, dioxanilo, dioxolanilo, morfolinilo, dihidrofuranilo, dihidropiranilo, dihidropiridinilo, tetrahidropiridinilo, dihidropirimidinilo, tetrahidropirimidinilo, dihidrooxadizolilo y dihidroisoxazolilo. Los grupos heterociclilo bicíclicos incluyen, por ejemplo, radicales heterocíclicos insaturados fusionados con otro radical heterocíclico insaturado, cicloalquilo, anillo arilo o heteroarilo, tal como, por ejemplo, benzodioxolilo, dihidrobenzodioxinilo, dihidrobenzofuranilo. Se entenderá que a menos que se especifique otra cosa, los sustituyentes opcionales en un grupo heterociclilo pueden estar presentes en cualquier posición sustituible e, incluyen, por ejemplo, la posición en la que se une el heterociclilo.

Algunos de los compuestos desvelados pueden existir en diversas formas estereoisoméricas. Los estereoisómeros son compuestos que se diferencian únicamente en su disposición espacial. Los enantiómeros son pares de estereoisómeros cuyas imágenes especulares no son superponibles, más comúnmente porque contienen un átomo de carbono sustituido asimétricamente que actúa como centro quiral. "Enantiómero" significa un par de moléculas que son imágenes especulares entre sí y no son superponibles. Los diastereómeros son estereoisómeros que contienen dos o más átomos de carbono sustituidos asimétricamente. El símbolo en una fórmula estructural representa la presencia de un centro de carbono quiral. "R" y "S" representan la configuración de sustituyentes en torno a uno o más átomos de carbono quirales. Por lo tanto, "R*" y "S*" representan las configuraciones relativas de sustituyentes en torno a uno o más átomos de carbono quirales.

"Racemato" o "mezcla racémica" significa un compuesto con cantidades equimolares de dos enantiómeros, en el que tales mezclas no muestran actividad óptica, es decir, no rotan el plano de la luz polarizada.

"Isómero geométrico" significa isómeros que difieren en la orientación de los átomos sustituyentes en relación con, por ejemplo, un doble enlace carbono-carbono, a una oxima, a un éter de oxima, a un anillo de cicloalquilo, o a un sistema bicíclico con puente. Los átomos (distintos de H) en cada lado de un doble enlace carbono-carbono pueden estar en una E (los sustituyentes están en los lados opuestos de la doble enlace carbono-carbono) o Z (los sustituyentes están orientados en el mismo lado). "R", "S", "S*", "R*", "E", "Z", "sin", "anti", "cis", y "trans" indican configuraciones relativas a la molécula central. Cuando un compuesto desvelado se nombra o se representa por la estructura sin indicar una forma de isómero geométrico particular, debe entenderse que el nombre o la estructura abarca un isómero geométrico libre de otros isómeros geométricos, mezclas de isómeros geométricos o mezclas de todos los isómeros geométricos. Para las oximas y los éteres de oxima, se puede utilizar la designación de "Z" o "E" y "sin" o "anti".

Cuando se representa solo por estructura, en los casos en que el enlace N-O de la oxima es atraído por un enlace sólido, significa que el isómero geométrico representado tiene una pureza de al menos el 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 99 % o 99,9 % en peso respecto a todos los demás isómeros. El porcentaje en peso de pureza con respecto a todos los demás isómeros es la relación entre el peso de un isómero y el peso de los otros isómeros. De forma análoga, en los casos en que se nombra el isómero geométrico del enlace N-O de la oxima (es decir, por E o Z), significa que el isómero geométrico mencionado tiene una pureza de al menos el 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 99 % o 99,9 % en peso respecto a todos los demás isómeros. En el caso de las oximas desveladas, un enlace ondulado (ctvw *) indica que la estructura abarca un isómero geométrico libre de otros isómeros geométricos, mezclas de isómeros geométricos o mezclas de todos los isómeros geométricos. De forma análoga, en los casos en que no se nombra el isómero geométrico del enlace N-O de la oxima, el compuesto abarca un isómero geométrico libre de otros isómeros geométricos, mezclas de isómeros geométricos o mezclas de todos los isómeros geométricos.

Los compuestos del presente documento pueden prepararse en forma de enantiómeros individuales mediante síntesis específica del enantiómero o resolverse a partir de una mezcla enriquecida enantioméricamente. Las técnicas de resolución óptica convencionales incluyen formar la sal de una base libre de cada isómero de un par enantiomérico usando un ácido ópticamente activo (seguido de cristalización fraccionada y regeneración de la base libre), formar la sal de la forma de ácido de cada enantiómero de un par enantiomérico usando una amina ópticamente activa (seguido de cristalización fraccionada y regeneración del ácido libre), formar un éster o amida de cada uno de los enantiómeros de un par enantiomérico usando un ácido ópticamente puro, amina o alcohol (seguido de separación cromatográfica y retirada del auxiliar quiral), o resolver una mezcla enantiomérico de un material de partida o un producto final usando diversos métodos cromatográficos bien conocidos. Además, los compuestos se pueden preparar como enantiómeros individuales separando una mezcla racémica usando técnicas de cromatografía quiral convencionales.

Cuando la estereoquímica de un compuesto desvelado se nombra o representa por su estructura, el estereoisómero nombrado o representado es al menos un 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 99 % o 99,9 % en peso puro en relación a todos los demás estereoisómeros. El porcentaje en peso de pureza con respecto a todos los demás estereoisómeros es la relación entre el peso de un estereoisómero y el peso de los otros estereoisómeros. Cuando un solo enantiómero se nombra o representa por su estructura, el enantiómero representado o nombrado es al menos un 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 99 % o 99,9 % en peso ópticamente puro. El porcentaje en peso de pureza óptica es la relación entre el peso del enantiómero y el peso del enantiómero más el peso de su isómero óptico.

Cuando la estereoquímica de un compuesto desvelado se nombra o representa por su estructura, y la estructura nombrada o representada incluye más de un estereoisómero (por ejemplo, como en un par diastereomérico), debe entenderse que se incluye uno de los estereoisómeros incluidos o cualquier mezcla de los estereoisómeros incluidos. Debe entenderse además que la pureza estereoisomérica de los estereoisómeros nombrados o representados es de al menos el 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 99 % o 99,9 % en peso puro en relación a todos los demás estereoisómeros. La pureza estereoisomérica en este caso se determina dividiendo el peso total en la mezcla de los estereoisómeros incluidos por el nombre o estructura por el peso total en la mezcla de todos los demás estereoisómeros.

Cuando un compuesto desvelado se nombra o representa por su estructura sin indicar la estereoquímica, y el compuesto tiene un centro quiral, debe entenderse que el nombre o estructura incluye un enantiómero de compuesto libre del isómero óptico correspondiente, una mezcla racémica del compuesto o mezclas enriquecidas en un enantiómero con respecto a su isómero óptico correspondiente.

Cuando un compuesto desvelado se nombra o representa por su estructura sin indicar la estereoquímica y, por ejemplo, el compuesto tiene más de un centro quiral (por ejemplo, al menos dos centros quirales), debe entenderse que el nombre o estructura incluye un estereoisómero libre de otros estereoisómeros, mezclas de estereoisómeros o mezclas de estereoisómeros en las que uno o más estereoisómeros están enriquecidos con respecto al otro u otros estereoisómeros. Por ejemplo, el nombre o estructura puede incluir un estereoisómero libre de otros diastereómeros, mezclas de estereoisómeros o mezclas de estereoisómeros en las que uno o más diastereómeros están enriquecidos con respecto al otro u otros diastereómeros.

Todos los estereoisómeros en la presente divulgación son relativos (es decir, son trans-racémicos), a menos que las designaciones R y S vayan seguidas de un asterisco (*) como en Int-29, Int-30, Ejemplo 40 y Ejemplo 41. Por ejemplo, el nombre "hidrogenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo" en el Ejemplo 1 significa que el compuesto es trans-racémico. Por el contrario, el nombre "(4R*,8S*)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-yl hidrogenosulfato de sodio" en el Ejemplo 40 significa que la estereoquímica en los centros quirales es absoluta.

Todos los estereoisómeros en la presente divulgación son relativos (es decir, son trans-racémicos), a menos que los estereocentros del compuesto, cuando se dibuja, están marcados con R y S como en Int-29, Int-30, Ejemplo 40 y Ejemplo 41. Por ejemplo,

significa que la estereoquímica es relativa y el compuesto es trans-racémico, mientras que

significa que la estereoquímica es absoluta como 4R*,8S*.

A menos que se indique de otra manera, todas las formas tautoméricas de los compuestos descritos en el presente documento están dentro del alcance de la invención.

Los compuestos del presente documento pueden estar presentes en forma de sales farmacéuticamente aceptables. Para su uso en medicinas, las sales de los compuestos de la invención se refieren a "sales farmacéuticamente aceptables" no tóxicas. Las formas de sal farmacéuticamente aceptable incluyen sales ácidas/aniónicas o básicas/catiónicas farmacéuticamente aceptables.

Los términos "sujeto" y "paciente" se usan de manera indistinta y significan un mamífero que necesita tratamiento, por ejemplo, animales de compañía (por ejemplo, perros, gatos), animales de granja (por ejemplo, vacas, cerdos, caballos, ovejas, cabras) y animales de laboratorio (por ejemplo, ratas, ratones, conejillos de indias). Normalmente, el sujeto es un ser humano que necesita tratamiento.

El término "inhibir", "inhibición" o "inhibir" incluye una disminución en la actividad basal de una actividad o proceso biológico.

Como se utiliza en el presente documento, los términos "tratamiento", "tratar", y la expresión "que trata" se refieren a revertir, aliviar, retrasar el inicio o inhibir la evolución de una enfermedad o trastorno, o de uno o más síntomas del mismo, como se describe en el presente documento. En algunas realizaciones, el tratamiento puede administrarse después que se han desarrollado uno o más síntomas, es decir, tratamiento terapéutico. En otras realizaciones, el tratamiento se puede administrar en ausencia de síntomas. Por ejemplo, el tratamiento se puede administrar a un individuo susceptible antes del inicio de los síntomas (por ejemplo, según antecedentes de síntomas y/o a la luz de la exposición a un organismo concreto u otros factores de susceptibilidad), es decir, tratamiento profiláctico. El tratamiento también puede continuar después de que los síntomas se hayan resuelto, por ejemplo, para prevenir o retrasar la recaída.

La expresión "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" incluye una cantidad del compuesto descrito en el presente documento que provocará una respuesta biológica o médica de un sujeto, por ejemplo, la reducción o inhibición de la actividad enzimática o proteica relacionada con una infección bacteriana, la mejora de los síntomas de una infección bacteriana o la ralentización o el retraso de la progresión de una infección bacteriana. En algunas realizaciones, el lenguaje "cantidad eficaz" incluye la cantidad de un compuesto descrito en el presente documento, que cuando se administra a un sujeto, es eficaz para, al menos parcialmente, aliviar, inhibir y/o mejorar una infección bacteriana o inhibir PBP3 y/o reducir o inhibir el crecimiento bacteriano, la replicación o carga bacteriana de una bacteria en un sujeto.

La expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un vehículo que no es tóxico, adyuvante, o vehículo que no destruya la actividad farmacológica del compuesto con el que se formula. Los excipientes, adyuvantes o vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación incluyen, pero sin limitación, vehículos orgánicos o inorgánicos, excipientes o diluyentes adecuados para aplicaciones farmacéuticas.

.

En una primera realización, la presente divulgación proporciona un compuesto de Fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que las variables son como se ha descrito con anterioridad.

En una segunda realización, Y es NOR3 en el compuesto de Fórmula I y R3 y X se toman junto con los átomos a los que están unidos para formar un heterociclilo de 4 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre alquilo (C-i-Ca), C=O o C(O)OH, en el que dicho alquilo (C-i-Ca) está opcionalmente sustituido con OH, fenilo o heteroarilo de 5 a 6 miembros, en el que dicho heteroarilo de 5 a 6 miembros está opcionalmente sustituido con NH2, y en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I. Alternativamente, Y es NOR3 en el compuesto de Fórmula I y R3 y X se toman junto con los átomos a los que están unidos para formar un 4,5-dihidro-1,2,4-oxadiazol o 4,5-dihidroisoxazol, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre alquilo (C1-C4), C=O o C(O)OH, en el que dicho alquilo (C1-C4) está opcionalmente sustituido con OH, fenilo o tiazolilo, en el que dicho tiazolilo está opcionalmente sustituido con NH2, en la que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I.

En una tercera realización, dicho cicloalquilo de 4 a 6 miembros para Ra, Rb, Rd y Re en el compuesto de Fórmula I es ciclohexilo y dicho heterociclilo de 4 a 6 miembros para Rg es piperazinilo, en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o la segunda realización.

En una cuarta realización, el compuesto de Fórmula I es de la Fórmula la:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

X es H, CN, C(O)NR-R2, NR-R2 o alquilo (C1-C6);

R1 y R2 son cada uno independientemente hidrógeno, ciano o alquilo C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más R7;

R3 es hidrógeno o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más R7;

R4, R5 y R6 son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo (C1-C6) o C(O)NRaRb, en el que dicho alquilo (C1-C6) para R4, R5 y R6 están opcionalmente sustituidos con uno o más R7, con la condición de que al menos uno de R4 y R5 no sea hidrógeno y con la condición de que R4 y R5 no estén presentes cuando el átomo de nitrógeno correspondiente al que están unidos R4 y R5 está conectado a un átomo de anillo adyacente a través de un doble enlace;

cada R7 se selecciona independientemente entre halo, OH, ORc, alcoxi (C1-C6), CN, heterociclilo de 4 a 6 miembros, heteroarilo de 5 a 6 miembros, fenilo, C(=NH)NH2, NHC(=NH)NH2, NRdRe, C(O)NRdRe, SO2Rf y S(O)Rf Ra, Rb, Rd y Re son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo (C1-C6), alcoxi (C1-C6), fenilo, heterociclilo 4 a 6 miembros o heteroarilo de 5 a 6 miembros, en el que cada uno de dicho alquilo (C1-C6) y alcoxi (C1-C6) para Ra, Rb, Rd y Re están opcional e independientemente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre NH2, NH alquilo (C1-C6) y N(alquilo (C1-C6))2, y en el que cada uno de dicho fenilo, heterociclilo 4 a 6 miembros y heteroarilo de 5 a 6 miembros para Ra, Rb, Rd y Re están opcional e independientemente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre alquilo (C1-C6), NH2, -NH(alquilo C1-C6) y -N(alquilo (C1-C6))2;

Rc es fenilo opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre C(=NH)NH2, C(=NH)NHalquilo (C1-C6), NHC(=NH)NH2, NRdRe, C(O)NRdRe, SO2Rf y SORf en el que dicho alquilo (C1-C6) en el grupo C(=NH)NHalquilo (C1-C6) está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados entre NH2, -NH(alquilo C1-C6) y -N(alquilo (C1-C6))2; y

Rf es hidrógeno o alquilo (C1-C6).

En una quinta realización, el compuesto de Fórmula I es de la Fórmula II:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que las variables son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o la.

En una sexta realización, el compuesto de Fórmula I es de la Fórmula III:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que las variables son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o la.

En una séptima realización, R3 en una cualquiera de las Fórmulas I, la, II, o III es hidrógeno o alquilo (C-i-Ca) opcionalmente sustituido con amino, en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o Ia. En una alternativa, R3 en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II o III es hidrógeno, en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o Ia.

En una octava realización, R1 en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II o III es hidrógeno y R2 es alquilo (Ci-Ca), en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o Ia o la séptima realización. En una alternativa, R1 en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II o III es hidrógeno y R2 es metilo, en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o Ia o la séptima realización.

En una novena realización, R1 y R2 en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II o III son cada uno alquilo (C1-Ca), en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o la o la séptima realización. En una alternativa, R1 y R2 en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II o III son cada uno metilo, en el que las variables son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o Ia o la séptima realización.

En una décima realización, el compuesto de Fórmula I o Ia es de la Fórmula IV o V:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que las variables son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o Ia o la séptima, octava o novena realización.

En una undécima realización, R6 en una cualquiera de las Fórmulas I, la, II, III, IV o V es hidrógeno, -C(O)NRaRb o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con ORc, en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o Ia o la séptima, octava o novena realización.

En una duodécima realización, Ra en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II, III, IV o V es hidrógeno; Rb es heteroarilo de 5 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más alquilo ((C1-C6) o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con -ORc; y Rc es fenilo opcionalmente sustituido con -C(=NH)NHalquilo (C1-C6)NH2, en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o Ia o la séptima, octava, novena u undécima realización. En una alternativa, Ra en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II, III, IV o V es hidrógeno y Rb es pirazolilo opcionalmente sustituido con uno o más alquilo (C1-C6), en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la Fórmula I o Ia o la séptima, octava, novena u undécima realización.

En una decimotercera realización, el compuesto de Fórmula I o Ia es de Fórmula VI:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que las variables son como se han descrito anteriormente para la Fórmula I o la o la octava o novena realización.

En una decimocuarta realización, R4 en una cualquiera de las Fórmulas I, la, II, Ill, IV, V, o VI es C(O)NRaRb o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con NH2; Ra es hidrógeno; y Rb es alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con NH2, en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la fórmula I o Ia o la octava o novena realización. En una alternativa, R4 en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II, III, IV, V o VI es alquilo (C1-C6), en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la fórmula I o Ia o la octava o novena realización. En otra alternativa, R4 en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II, III, IV, V o VI es metilo, en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la fórmula I o Ia o la octava o novena realización.

En una decimoquinta realización, el compuesto de Fórmula I o Ia es de la Fórmula VII:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que las variables son como se han descrito anteriormente para la Fórmula I o la o la octava o novena realización.

En una decimosexta realización, R5 en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II, III, IV, VI o VI es C(O)NRaRb o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con NH2; Ra es hidrógeno; y Rb es alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con NH2, en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la fórmula I o Ia o la octava o novena realización. En una alternativa, R5 en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II, III, IV, VI o VII es alquilo (C1-C6), en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la fórmula I o Ia o la octava o novena realización. En otra alternativa, R5 en una cualquiera de las Fórmulas I, Ia, II, III, IV, VI o VII es metilo, en el que las variables restantes son como se ha descrito anteriormente para la fórmula I o Ia o la octava o novena realización.

Los ejemplos específicos de compuestos se proporcionan en los EJEMPLOS. Las sales farmacéuticamente aceptables, así como las formas neutras de estos compuestos, se incluyen en el presente documento.

4. Usos, Formulación y administración

Los compuestos descritos en el presente documento se pueden usar para tratar infecciones bacterianas causadas por una o más especies de bacterias gramnegativas o atípicas. Las bacterias gramnegativas incluyen, pero sin limitación, Haemophilus influenzae, Acinetobacter baumannii, Burkholderia spp. Citrobacter spp., Escherichia coli, Enterobacter spp., Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella spp., Stenotrophomonas maltophila, Francisella tularensis, Yersinia spp., Salmonella spp., Shigella spp., Legionella spp. y Neisseria gonorrhoeae. Las bacterias atípicas incluyen, pero sin limitación, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae y Legionella pneumophila.

En algunos aspectos, las bacterias son resistentes a uno o más antibacterianos distintos de los compuestos descritos en el presente documento. Las expresiones "resistencia" y "resistencia antibacteriana" se refieren a bacterias que pueden sobrevivir a la exposición a uno o más antibacterianos. En un aspecto, los compuestos descritos en el presente documento pueden usarse para tratar infecciones bacterianas causadas por bacterias gramnegativas o bacterias gramnegativas resistentes. En otro aspecto, los compuestos descritos en el presente documento pueden usarse para tratar infecciones bacterianas causadas por Enterobacteriaceae tales como E. coli, K. pneumoniae y

Acinetobacter spp. En otro aspecto más, los compuestos descritos en el presente documento pueden usarse para tratar infecciones bacterianas causadas por P. aeruginosa, A. baumannii o Enterobacteriaceae, así como formas resistentes a los antibacterianos. En un aspecto adicional más, los compuestos descritos en el presente documento pueden usarse para tratar infecciones bacterianas causadas por P. aeruginosa, así como formas resistentes a los antibacterianos. Por ejemplo, los mecanismos de resistencia en bacterias gramnegativas incluyen, pero sin limitación, expresión de p-lactamasa de espectro extendido, expresión de metalo-p-lactamasa, expresión de carbapenemasa, mutación de la ADN girasa, mutación de porina, sobreexpresión del sistema de salida, modificación de lipopolisacáridos y expresión de metilasa de ARNr 16S.

En un aspecto, la infección bacteriana tratada por los presentes compuestos es causada por una bacteria gramnegativa. En otro aspecto, la infección bacteriana tratada por los presentes compuestos está causada por P. aeruginosa, A. baumannii, E. coli o K. pneumoniae y otras Enterobacteriaceae. En un aspecto adicional, la infección bacteriana tratada por los presentes compuestos está causada por P. aeruginosa. En otro aspecto, la infección bacteriana tratada por los presentes compuestos está provocada por una bacteria gramnegativa resistente a antibacterianos. En otro aspecto más, la infección bacteriana tratada por los presentes compuestos está provocada por una cepa de P. aeruginosa resistente a antibacterianos. En otro aspecto más, la infección bacteriana tratada por los presentes compuestos está provocada por Enterobacteriaceae. En otro aspecto más, la infección bacteriana tratada por los presentes compuestos está provocada por E. coli, K. pneumoniae o Acinetobacter spp. En otro aspecto más, la infección bacteriana tratada por los presentes compuestos está provocada por un patógeno seleccionado entre Burkholderia spp., B. anthracis, Y. pestis y F. tularensis.

Las infecciones bacterianas tratadas por los presentes compuestos incluyen, pero sin limitación, infecciones respiratorias (por ejemplo, neumonía), del torrente sanguíneo (por ejemplo, bacteriemia), cardíacas (por ejemplo, endocarditis), del SNC (por ejemplo, meningitis, absceso cerebral), del oído (por ejemplo, otitis externa), de los ojos (por ejemplo, queratitis bacteriana, endoftalmitis), del tracto GI (diarrea, enteritis, enterocolitis), de las vías urinarias, de la piel, intraabdominales, nosocomiales y de heridas/quemaduras.

En un aspecto, los compuestos descritos en el presente documento inhiben la proteína 3 de unión a penicilina (PBP3). Por lo tanto, en un aspecto, la presente divulgación proporciona un método para la inhibición de PBP3 bacteriana, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite uno o más de los compuestos descritos en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otro aspecto, los compuestos descritos en el presente documento inhiben la proteína 1 de unión a penicilina (por ejemplo, PBP1a y/o PBplb). Por lo tanto, en un aspecto, la presente divulgación proporciona un método para la inhibición de PBP1 bacteriana, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite uno o más de los compuestos descritos en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En otro aspecto, la presente divulgación proporciona un método para inhibir la PBP1 bacteriana (por ejemplo, PBP1a y/o PBplb) y la PBP3 bacteriana, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite uno o más de los compuestos descritos en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otro aspecto más, los compuestos descritos en el presente documento no son inhibidores específicos de la proteína 2 de unión a penicilina (PBP2).

De acuerdo con otro aspecto, la presente divulgación proporciona composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden un compuesto descrito en el presente documento; y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Estas composiciones se pueden usar para tratar una o más de las infecciones bacterianas descritas anteriormente, así como inhibir la PBP3.

Las composiciones descritas en el presente documento pueden administrarse por vía oral, por vía parenteral, por pulverización por inhalación, por vía tópica, rectal, nasal, bucal, por vía vaginal o a través de un depósito implantado.

El término "parenteral", como se usa en el presente documento, incluye inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepática, intralesional e intracraneal o técnicas de infusión. En el presente documento se incluyen formas de dosificación líquidas, preparaciones inyectables, formas de dispersión sólidas y formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica de un compuesto.

La cantidad de compuestos proporcionados que pueden combinarse con materiales portadores para producir una composición en una única forma de dosificación variará dependiendo del paciente a tratar y del modo particular de administración.

Debe entenderse también que un régimen de dosificación y tratamiento específico para cualquier paciente particular dependerán de diversos factores, que incluyen la edad, peso corporal, el estado de salud general, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, el criterio del médico a cargo del tratamiento y la gravedad de la enfermedad concreta que se está tratando. La cantidad de un compuesto proporcionado en la composición también variará dependiendo del compuesto concreto en composición.

Ejemplos

Como se presenta en los siguientes Ejemplos, en ciertas realizaciones ilustrativas, los compuestos se preparan de acuerdo con los siguientes procedimientos generales. Se apreciará que, aunque los métodos generales representan la síntesis de ciertos compuestos del presente documento, los siguientes métodos generales y otros métodos conocidos por un experto en la técnica, pueden aplicarse a todos los compuestos y subclases y especies de cada uno de estos compuestos, como se describe en el presente documento.

Lsquema 1

Int-1

Se llevaron a cabo en paralelo dos lotes de la siguiente reacción con la misma escala. A una mezcla de 3,5-dioxopiperidina-1-carboxilato de ferc-butilo (275 g, 1,29 mol) en tolueno (1,951) se añadió 1,1-dimetoxi-N,N-dimetilmetanamina (247,59 ml, 1,87 mol). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 0,5 h, luego se agitó a 50 °C durante 3,5 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para dar 4-((dimetilamino)metilen)-3,5-dioxopiperidina-1-carboxilato de ferc-butilo (692 g, 99 %) como un aceite amarillo. MS: 269 ES+ (C13H20N2O4). Se usó directamente en la siguiente etapa.

Int-2

Se llevaron a cabo en paralelo dos lotes de la siguiente reacción a la misma escala. A una solución de 4-((dimetilamino)metileno)-3,5-dioxopiperidina-1-carboxilato de ferc-butilo (346 g, 1,29 mol) en etanol (1,90 l) y tolueno (1,90 l) se añadió metilhidrazina (168,1 ml, 3,21 mol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para dar un residuo. El residuo se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM/acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar 1-metil-4-oxo-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de ferc-butilo (540 g, 83 %) como un sólido amarillo. RMN de 1H (400MHz, CDCh) 8: 1,51-1,43 (m, 9H); 3,85 (s, 3H); 4,14 (s, 2H); 4,73 (s a, 2H); 7,88 (s, 1H).

Int-3

Se disolvió 1-metil-4-oxo-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de ferc-butilo (50 g, 0,199 mmol) en THF (500 ml ) y se colocó en atmósfera de N2. La mezcla de reacción se enfrió a -78 °C y se añadió LDA (2M, 397,96 ml). La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 40 minutos. Se introdujo dióxido de carbono en exceso durante 1 hora y luego se dejó que la mezcla volviera a temperatura ambiente y se agitó durante 12 horas. La mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de H2SO4 al 10 % a pH = 2,5 y se extrajo con acetato de etilo (3 x 500 ml). Se añadió solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio a las capas orgánicas combinadas hasta pH >7. La fase acuosa se separó y acidificó mediante la adición de solución de ácido cítrico (10 %). Después se extrajo acetato de etilo (4 x 500 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a presión reducida para dar ácido 6-(fercbutoxicarbonil)-1-metil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4- c]ácido piridin-7-carboxílico (58 g, 95% ) como un sólido blanco. Se usó directamente en la siguiente etapa. RMN de 1H (400MHz, CDCla) 8: 1,48 (s, 9H); 4,02 (s, 3H); 4,12 (m, 1H); 4,65-4,52 (m, 1H); 6,16 (s, 1H); 7,90 (s, 1H).

Int-4

A una solución de ácido 6-(ferc-butoxicarbonil)-1-metil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxílico (58 g, 196,42 mmol) en d Mf (300 ml) se añadió sulfato de dimetilo (196,42 ml, 245,52 mmol) y se agitó a 25 °C durante 2 horas. Se añadieron carbonato de potasio (10,86 g, 78,57 mmol) y sulfato de dimetilo (196,42 ml, 39,28 mmol) y se agitó a 25 °C durante 12 horas. Se añadió carbonato de potasio adicional (5,43 g, 39,28 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante otra hora. Se añadió agua (500 ml) a la mezcla de reacción y se extrajo con DCM (3 x 500 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl 0,1 N (300 ml), seguido de H2O (300 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar 1-metil -4-oxo-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6,7-dicarboxilato de 6-(ferc-butil) 7-metilo (50 g, 82 %) como un aceite amarillo. Se usó directamente en la siguiente etapa. RMN de 1H (400MHz, CDCh) 8: 1,49 (s, 9H); 3,03-2,82 (m, 1H); 3,80 (s, 3H); 4,02 (s, 3H); 4,59 (d, J = 18,4 Hz, 1H); 6,16 (s, 1H); 7,91 (s, 1H).

Int-5

A una solución de 1-metil-4-oxo-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6,7-dicarboxilato de 6-(ferc-butil)-7-metilo ( 50 g, 161,64 mmol) en DCM (500 ml)se añadieron piridina (25,57 g, 323,28 mmol) y clorhidrato de O-bencilhidroxilamina (25,80 g, 161,64 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 12 horas. Se añadió ácido tartárico al 10 % (200 ml). La capa orgánica se separó y se lavó con ácido tartárico al 2 % (200 ml). Las capas acuosas combinadas se lavaron con DCM (500 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar (Z)-4-((benciloxi)imino)-1-metil-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6,7-dicarboxilato de 6-(ferc-butil)7-metilo (70 g, 104 %) como un aceite amarillo. Se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.

Int-6

A una solución de (Z)-4-((benciloxi)imino)-1-metil-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6,7-dicarboxilato de 6-(ferc-butil) 7-metilo (60 g, 144,77 mmol) en MeOH (240 ml) se añadió HCl/dioxano (4N, 36,16 ml, 144,77 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. Se añadió complejo de boranopiridina (13,45 g, 144,77 mmol) a 0-2 °C y se agitó durante 1,5 horas, seguido de HCl/dioxano (4M, 180,96 ml, 723,84 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 12 horas. Se burbujeó gas HCl (31,67 g, 868,62 mmol) a través de la mezcla de reacción. Se añadió acetonitrilo (500 ml)y se agitó durante 40 minutos. La mezcla de reacción se filtró, la torta se lavó con acetonitrilo (300 ml), luego con MTBE (300 ml). La torta del filtro se disolvió en acetato de etilo (500 ml)y se añadió bicarbonato de sodio acuoso saturado para ajustar el pH >7. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 500 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron para dar 4 ((benciloxi)amino)-1-metil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxilato de metilo (37 g, 81 %) como un aceite marrón. RMN de 1H (400MHz, CDCI3) 8: 2,01-1,70 (m, 1H); 2,88 (dd, J = 2,8, 13,6 Hz, 1H); 3,32 (d, J = 13,4 Hz, 1H); 3,76 (s, 3H); 3,82-3,78 (m, 3H); 3,94 (s a, 1H); 4,56 (s, 1H); 4,70 (s, 2H); 7,38-7,25 (m, 5H); 7,42 (s, 1H).

Int-7

Se llevaron a cabo en paralelo dos lotes de la siguiente reacción con la misma escala. A una solución de 4-((benciloxi)amino)-1-metil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxilato de metilo (18,5 g, 58,48 mmol ) y trimetilamina (130,4 ml, 935,68 mmol) en THF (360 ml)a 0 °C se añadió una solución de trifosgeno (6,94 g, 23,39 mmol) en THF (80 ml). La mezcla se agitó a 0 °C durante y se dejó calentar a 25 °C durante 12 horas. La mezcla de reacción se filtró, la torta de filtración se disolvió en DCM (200 ml)y se ajustó a pH <7 con solución de HCl 1N, después se extrajo con DCM (3 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y concentraron a presión reducida para dar (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (12,00 g) como un sólido blanco. El filtrado de la mezcla de reacción se concentró y el residuo se purificó por cromatografía en columna (SO 2, éter de petróleo/acetato de etilo/DCM = 5/1/0 a 1/1/0,5) para dar (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (13,00 g) como un sólido blanco. Los dos lotes (25,00 g, 62 %) se combinaron y se usaron directamente en la siguiente etapa.

RMN de 1H (400MHz, CDCla) 8: 3,23 (d, J = 11,2 Hz, 1H); 3,43 (dd, J = 2,9, 11,5 Hz, 1H); 3,77 (s, 3H); 3,86 (s, 3H); 3,98 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 4,86 (d, J = 11,8 Hz, 1H); 5,04-4,95 (m, 1H); 5,21 (s, 1H); 7,48-7,32 (m, 6H).

Int-8

Una solución de borohidruro de litio (2N en THF, 146,04 ml, 292,1 mmol) se añadió a una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo [3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (20 g, 58,42 mmol) en metanol (960 ml)y THF (480 ml)a -10 °C. La mezcla resultante se agitó a -5 °C durante 1,5 horas. A continuación se inactivó con solución de cloruro de amonio acuoso saturado. La mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. El material en bruto se volvió a disolver en DCM (1000 ml) y se añadió agua (500 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró. El residuo resultante se trituró con acetato de etilo para dar (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(hidroximetil)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[ 3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (12,5 g, 68 %) como un sólido blanco. Se usó directamente en la siguiente etapa. MS: 315 ES+ (C17H18N4O4)

Int-9

A una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(hidroximetil)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (12,36 g, 39,36 mmol) en diclorometano (500 ml)a temperatura ambiente se añadió peryodinano de Dess-Martin (20,06 g, 47,23 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 1 horas. Se añadieron a la mezcla de reacción solución acuosa de tiosulfato de sodio (IN, 300 ml)y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (200 ml)y se agitó durante 15 minutos. La mezcla bifásica se separó y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (500 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato magnésico anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar el producto en bruto. La cromatografía ultrarrápida (120 g de gel de sílice, 0 %-100 % de acetato de etilo/hexanos) proporcionó (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbaldehído (9,72 g, 79 %) como un sólido blanco. MS: 313 ES+ (C16H16N4O3)

Int-10

A una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbaldehído (8,62 g, 27,6 mmol) en piridina (120 ml) temperatura ambiente se añadió clorhidrato de hidroxilamina (2,11 g, 30,36 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos. Se añadieron cloruro de amonio acuoso (500 ml) y acetato de etilo (500 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró para dar (E)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbaldehído oxima [9,03 g, 99 %) como un sólido blanco. Se usó directamente en la siguiente etapa. MS: 328 ES+ (C16H17N8O3)

Int-11

A una solución de (E)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbaldehído oxima (9,03 g, 27,6 mmol) en DMF (300 ml)a temperatura ambiente se añadió N-clorosuccinimida (4,05 g, 30,36 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante 2 horas, después se dejó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron agua helada (500 ml) y acetato de etilo (500 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró para dar cloruro de ((4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-N-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (9,98 g, 99% ) como un sólido amarillo claro. Se usó directamente en la siguiente etapa. MS: 362 ES+(C16H16ClN5O3)

Int-12

A una solución de cloruro de ((4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-N-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (9,98 g, 27,6 mmol) en DCM (360 ml) a temperatura ambiente se añadió metilamina (2 N en THF, 2,02ml, 56,05 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadieron una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (300 ml) y DCM (200 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. El producto bruto se trituró con una mezcla de DCM y acetona y se filtró para dar (Z)-5-(benciloxi)-N-hidroxi-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (7,27 g, 74%) como un sólido blanco. Se usó directamente en la siguiente etapa. MS: 357 ES+ (C17H20N6O3)

Int-13

A una solución de (Z)-5-(benciloxi)-N-hidroxi-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (6,88 g, 19,31 mmol) en DCM (500 ml)a temperatura ambiente, se añadió trifluorometanosulfonato de terc-butildimetilsililo (4,88 ml, 21,24 mmol) y 2,6-lutidina (2,7 ml, 23,17 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 2 horas. Se añadieron DCM (300 ml)y una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (300 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. El producto bruto se trituró con una mezcla de hexanos y acetato de etilo y se filtró para dar (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N,1-dimetil-6 -oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (9,17 g, 99 %) como un sólido blanco. MS: 471 ES+ (C23H34N6O3Si)

Int-14

Una solución de (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (1,3 g, 2,76 mmol) en MeOH (60 ml)y acetato de etilo (150 ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (294 mg, 0,28 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar (4R,8S,Z)-N-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-hidroxi-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro- 1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (1,02 g, 97 %) como un sólido blanco. MS: 381 ES+ (C16H2sN6O3Si)

Int-15

A una solución de (4R,8S,Z)-N-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-hidroxi-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (400 mg, 1,05 mmol) en piridina (20 ml)a temperatura ambiente se añadió complejo de trióxido de azufre y piridina (1338 mg, 8,41 mmol) ). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. El material se purificó en una almohadilla de sílice corta, eluyendo con hexanos (100 ml), seguido de acetato de etilo/hexanos (1 :1 , 100 ml), acetato de etilo (100 ml)y acetona (200 ml). Las fracciones que contenían el producto se juntaron y concentraron para dar hidrogenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (400 mg, 83%) como un sólido blanco. MS: 461 ES+ (C-|6H28N6O6SSi)

Int-16

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (130 mg, 0,28 mmol) en acetato de etilo (15ml)a temperatura ambiente se añadió HF-Piridina (0,01 ml, 0,31 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 2 horas, y después se concentró. El sólido resultante se purificó mediante cromatografía de fase inversa (Sepabeads, 100 % de agua) para producir la sal de piridio de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6 -oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (71 mg, 59% ) como un sólido blanco. MS: 345 ES-(C1qH14N6O6S)

Ejemplo 1

La sal de piridio de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6 -oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (71 mg, 0,17 mmol) se disolvió en agua (2 ml) y se eluyó a través de un cartucho de resina de intercambio iónico en forma de Na+ Dowex® 50WX8 con agua como eluyente. Las fracciones que contenían el producto se agruparon y liofilizaron para producir sulfato sódico de (4R,8S)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (55 mg, 88 %) como un sólido blanco.

MS: 345 ES-(CioHi4N6OaS) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,08 (s, 3H); 3,46 (m, 1H); 3,57 (m, 1H); 3,61 (s, 3H); 4,92 (m, 1H); 5,75 (s, 1H); 7,60 (s, 1H).

Ejemplo 2

Se sintetizó hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N'-hidroxi-N,N-dimetilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4 -e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo siguiendo una secuencia de reacción similar a la que se muestra en el Ejemplo 1, utilizando una solución de dimetilamina en THF en la etapa 12. El ejemplo 2 se purificó y se presentó como sulfato libre en la etapa 16. MS: 359 ES-(CiiHi6N6OaS) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,01 (s, 6H); 3,49 (m, 2H); 3,60 (s, 3H); 4,90 (m, 1H); 5,64 (s, 1H); 7,57 (s, 1H).

Ejemplo 3

Se sintetizó sulfato sódico de (4R,8S)-8-((Z)-N'-hidroxicarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo siguiendo una secuencia de reacción similar a la que se muestra en el Ejemplo 1, usando una solución de amoníaco en THF en la etapa 12 MS: 331 ES-(CgH-i2N6O6S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8:3,17 (m, 2H); 3,64 (s, 1H); 4,96 (m, 1H); 5,38 (s, 1H); 7,59 (s, 1H).

A una solución de (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-W-hidroxi-W,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-12, 15 mg, 0,042 mmol) en DMF (2 ml)a 0 °C se añadió NaH (2,53 mg, 0,063 mmol, 60 %). Después de que la mezcla de reacción se agitase a 0 °C durante 10 minutos, se añadió yoduro de metilo (7,17 ml, 0,050 mmol). Después se calentó a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadieron acetato de etilo y una solución saturada de cloruro de amonio. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (0-100% de acetona en DCM) para producir (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-A-metoxi-A/, 1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepina-8-carboximidamida (8 mg, rendimiento, 51,3 % ) como un sólido blanco. MS: 371 ES+ (C18H22N6O3).

Int-18

Una solución de (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-W-metoxi-W,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-17, 8 mg, 0,0216 mmol) en MeOH (3 ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y Pd/C al 10 % (4,58 mg, 0,0043 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar (4R,8S,Z)-5-hidroxi-W-metoxi-A/,1-dimetil-a-oxo-4,5,a,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (4,5 mg, 74,3 %) como un sólido blanco. MS: 281 ES+ (CnHiaNaOa).

Ejemplo 4

A una solución de (4R,8S,Z)-5-hidroxi-W-metoxi-A/,1-dimetil-a-oxo-4,5,a,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-18, 4,5 mg, 0,016 mmol) en piridina (2 ml) a temperatura ambiente se añadió complejo de trióxido de azufre y piridina (25,5 mg, 0,16 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 16 horas, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. Se trituró con DCM y se filtró para eliminar los sólidos. El filtrado se concentró y se purificó mediante cromatografía de fase inversa (Sepabeads, 12 g, ACN/agua 0-50%) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-W-metoxi-W-metilcarbamimidoil)-1-metil-a-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (2,2 mg, 30,4%) como un sólido blanco. MS: 359 ES-(C-nH-iaNaOaS) RMN de 1H (300 MHz, D2O-d2) 8: 3,07 (s, 3H); 3,52-3,66 (m, 2H); 3,69 (m, 6H); 4,96 (s, 1H); 5,73 (s, 1H); 7,64 (s, 1H).

Datos analíticos para ejemplos adicionales

Los ejemplos 6 y 7 se sintetizaron siguiendo una secuencia de síntesis similar a la que se muestra en el ejemplo 4. Los otros ejemplos de la Tabla 1 se sintetizaron de manera similar al Esquema 1 usando reacciones similares fácilmente conocidas por un experto en la técnica. Todos los compuestos se aislaron como trans-racémicos.

Tabla 1

continuación

Int-19 e Int 20

A una solución de (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-N'-hidroxi-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo [3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-12, 229 mg, 0,64 mmol) en DCE (15ml)a temperatura ambiente se añadió DIEA (0. 11 ml, 0,64 mmol) y (4-nitrofenil)carbonocloridato (129,52 mg, 0,64 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para proporcionar una solución de (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-N,1-dimetil-N'-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int 19).

A la solución de Int-19 descrita anteriormente a temperatura ambiente se le añadió DIEA (0,11 ml, 0,64 mmol) y una solución de amoníaco en THF (0,64 ml, 0,64 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El disolvente se retiró para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (20 g de gel de sílice, 0% -100% de acetato de etilo/hexanos) para producir (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-N-(carbamoiloxi)-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (87 mg, 34% ) como un sólido blanco. MS: 400 ES+ (C18H21N7O4).

Int-21

Una solución de (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-N-(carbamoiloxi)-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-20, 87 mg, 0,22 mmol) en acetona (10ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd al 10 %/C (23 mg, 0,022 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para producir ((4R,8S,Z)-N'-(carbamoiloxi)-5-hidroxi-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (66 mg, 67% ) como un sólido blanco. MS: 310 ES+ (C11H15N7O4).

Ejemplo 14

A una solución de ((4R,8S,Z)-N-(carbamoiloxi)-5-hidroxi-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-21, 66 mg, 0,21 mmol) en piridina (5 ml)a temperatura ambiente se añadió complejo de trióxido de azufre y piridina (271 mg, 1,71 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. Se purificó en una almohadilla de sílice corta, eluyendo con hexanos (50 ml), seguido de acetato de etilo/hexanos (1:1, 50 ml), acetato de etilo (50 ml)y acetona (100 ml) para producir piridio hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z) -N'-(carbamoiloxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (13 mg, 14 %) como un sólido blanco. MS: 388 ES^C^H^N/O /S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,57-3,63 (m, 5H); 4,90 (m, 1H); 5,72 (m, 1H); 7,58 (s, 1H); 8,01 (m, 2H); 8,58 (m, 1H); 8,74 (m, 2H) relación compuesto/piridina (1:1).

Datos analíticos para ejemplos adicionales

Todos los compuestos de la Tabla 2 se sintetizaron de acuerdo con el Esquema 3 o usando reacciones similares fácilmente conocidas por un experto en la técnica. Todos los compuestos se aislaron como trans-racémicos.

Tabla 2

continuación

continuación

continuación

continuación

Esquema 4

lnt-24 Ejemplo 35

Int-22

A una solución de (E)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbaldehído oxima (Int-10, 88 mg, 0,27 mmol) en cloroformo (10 ml) a temperatura ambiente se añadió NCS (52 mg, 0,30 mmol) y piridina (0,02 ml, 0,27 mmol). Se agitó a 40 °C durante 1 hora y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron prop-2-enoato de ferc-butilo (0,04 ml, 0,30 mmol) y DIEA (0,06 ml, 0,32 mmol) y se agitaron a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadieron DCM (10 ml) y solución saturada de cloruro de amonio (10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (12 g de gel de sílice, 0-100 % de EtOAc en hexano) para producir 3-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4, 5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4,5-dihidroisoxazol-5-carboxilato de ferc-butilo (51 mg, 41 %) como un sólido blanco. MS: 454 ES+ (C23H27N5O5).

Int-23

Una solución de 3-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4 -e][1,3]diazepin-8-il)-4,5-dihidroisoxazol-5-carboxilato de ferc-butilo (Int-22, 41 mg, 0,094 mmol) en acetona (10ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió % Pd/C al 10 % (1 mg, 0,001 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para producir 3-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4,5-dihidroisoxazol-5-carboxilato de ferc-butilo (32 mg, 97%) como un sólido blanco. MS: 364 e S+ (C16H21N5O5).

Int-24

A una solución de 3-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4- e][1,3]diazepin-8-il)-4,5-dihidroisoxazol-5-carboxilato de ferc-butilo (Int-23, 32 mg, 0,088 mmol) en piridina (5 ml)a temperatura ambiente se añadió complejo de trióxido de azufre y piridina (112 mg, 0,70 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, 20 g, acetonitrilo/agua = 0/100 a 1/5) para producir 3-((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4,5-dihidroisoxazol-5-carboxilato de ferc-butilo (17 mg, 43 %) como un sólido blanco. MS: 442 ES-(Ci6H2iN 5O8S).

Ejemplo 35

A una solución de 3-((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4,5-dihidroisoxazol-5-carboxilato de ferc-butilo (Int-24, 17 mg, 0,038 mmol) en DCM (1 ml)a 0 °C se añadió TFA (1 ml, 13,05 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. El disolvente se retiró para dar el producto en bruto. Se disolvió en agua y se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, 12 g, 100 % agua) para producir ácido 3-((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4,5-dihidroisoxazol-5-carboxílico (12 mg, 64 %) como un sólido blanco. MS: 386 ES-(C12H13N5OsS) Rm N de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,26-3,34 (m, 2H); 2,52-3,68 (m, 5H); 4,72 (m, 1H); 4,85-5,02 (m, 1H); 5,55 (m, 1H); 7,53 (s, 1H). Datos analíticos para ejemplos adicionales

Todos los compuestos de la Tabla 3 se sintetizaron según el esquema 4 o utilizando reacciones similares fácilmente conocidas por un experto en la materia. Todos los compuestos se aislaron como trans-racémicos.

Tabla 3

Esquema 5

Int-25

A una solución de 3-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4,5-dihidroisoxazol-5-carboxilato de ferc-butilo (Int-22, 90 mg, 0,198 mmol) en MeOH (3 ml) y THF (6 ml) a -10° C se añadió una solución de LiBH4 (5,94 ml, 5,94 mmol) en THF (1 N). La mezcla de reacción se agitó a -10 °C durante 2 horas. Se añadieron DCM (50 ml)y una solución saturada de cloruro de amonio (50 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (12 g de gel de sílice, 0-100 % de EtOAc en hexano) para producir (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(5-(hidroximetil)-4,5-dihidroisoxazol-3 -il)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (40 mg, 52%) como un sólido blanco. Ms : 384 ES+ (C19H21N5O4).

Int 26

A una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(5-(hidroximetil)-4,5-dihidroisoxazol-3-il)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (Int-25, 40 mg, 0,10 mmol) en DCM (10 ml) a temperatura ambiente se añadió 2,6-lutidina (0,01 ml, 0,13 mmol) y trifluorometanosulfonato de ferc-butildimetilsililo (0,03 ml, 0,11 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 35 °C durante 2 horas. Se añadieron DCM (10 ml)y una solución saturada de cloruro de amonio (10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (12 g de gel de sílice, 0-100 % de EtOAc en hexano) para producir (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(5-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4,5-dihidroisoxazol-3-il)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (50 mg, 96 %) como un sólido blanco. MS: 498 ES+ (C25H35N5O4Si).

Int 27

Una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(5-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4,5-dihidroisoxazol-3-il)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (Int-26, 50 mg, 0,10 mmol) en acetona (10ml)con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (1 mg, 0,001 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para producir (4R,8S)-8-(5-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4,5-dihidroisoxazol-3-il)-5-hidroxi-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (40 mg, 97 %) como un sólido blanco. MS: 408 ES+ (C1sH29N5O4Si).

Int-28

A una solución de (4R,8S)-8-(5-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4,5-dihidroisoxazol-3-il)-5-hidroxi-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (Int-27, 40 mg, 0,098 mmol) en piridina (5 ml)a temperatura ambiente se añadió complejo de trióxido de azufre y piridina (125 mg, 0,785 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. Se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, 4 g, 0-100 % de EtOAc en hexano) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-(5-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4,5-dihidroisoxazol -3-il)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (5 mg, 10 %) como un sólido blanco. MS: 486 ES-(C1sH29N5O7SiS).

Ejemplo 38

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-(5-(((ferc-butildimetilsilM)oxi)metil)-4,5-dihidroisoxazol-3-il)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-28, 5mg, 0,0103 mmol) en acetato de etilo (2 ml) y se añadió THF (1 ml) a temperatura ambiente HF.piridina (0,001 ml, 0,09 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 2 horas, y después se concentró. El sólido resultante se disolvió en agua y se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, 4 g, 100 % agua) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-(5-(hidroximetil)-4,5-dihidroisoxazol-3-il)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H -4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (0,8 mg, 19 %) como un sólido blanco. MS: 372 E S - ^ H - ^ O / S ) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: (300 MHz, D2O) 8: 3,25-3,30 (m, 3H); 3,59-3,65 (m, 5H); 3,62-3,79 (m, 1H); 4,93 (m, 2H); 5,60 (m, 1H); 7,60 (s, 1H); 7,98 (m, 1H); 8,48 (m, 0.5H); 8,72 (m, 1H) relación compuesto/piridina (2:1).

Ejemplo 39

Se sintetizó hidrógenosulfato de piridio (4R,8S)-8-((5-(hidroximetN)-4-metN-4,5-dihidroisoxazol-3-N)-1-metN-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo siguiendo una secuencia de reacción similar a la que se muestra en el Ejemplo 38, usando (E)-but-2-enoato de metilo y KF.2H2O en la etapa 1 del Esquema 4. MS: 386 ES-(C13H17N5O7S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8:1,42 (d, 3H); 3,25 (m, 1H); 3,56 (m, 1H); 3,60 (m, 2H); 3,65 (s, 3H); 3,81 (m, 1H); 4,50 (m, 1H); 4,93 (m, 1H); 5,65 (m, 1H); 7,61 (s, 1H); 8,04 (m, 2H); 8,61 (m, 1H); 8,77 (m, 2H) relación compuesto/piridina (1 :1 ).

Int-29 e Int-30

La (Z)-5-(bencNoxi)-N'-((ferc-butNdimetNsilN)oxi)-N,1-dimetN-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida trans-racémica (Int-13, 8 g) se separó por SFC usando una columna Chiralpak AD-H, 25 % de isopropanol como codisolvente de CO2 a 75 g/min, presión del sistema 6,6 MPa (120 bares), temperatura de la columna 25 °C para producir:

Int-29: (4R*,8S*,Z)-5-(benciloxi)-N'-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazol[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Chiral, 3,06g, 34 %). MS: 471 ES+ (C23H34N6O3Si) RMN de 1H (300 MHz, MeOD) 8: 0,01 (s, 6H); 0,81 (s, 9H); 3,07 (s, 3H); 3,32 (m, 1H); 3,47 (m, 1H); 3,62 (s, 3H); 4,31 (m, 1H); 4.95 (m, 2H); 5,48 (m, 1H); 7,35 - 7,44 (m, 6H). ee > 99 %.

Int-30: (4S*,8R*,Z)-5-(benciloxi)-N'-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazol[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Chiral, 2,38 g, 26 %). MS: 471 ES+ (C23H34N6O3SO RMN de 1H (300 MHz, MeOD) 8: 0,01 (s, 6H); 0,81 (s, 9H); 3,07 (s, 3H); 3,32 (m, 1H); 3,47 (m, 1H); 3,62 (s, 3H); 4,31 (m, 1H); 4.95 (m, 2H); 5,48 (m, 1H); 7,35 - 7,44 (m, 6H). ee > 99 %.

Ejemplo 40

El hidrógenosulfato de sodio de (4R*,8S*)-8-((Z)-N-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (quiral) se sintetizó siguiendo una secuencia de reacción similar a la que se muestra en el Ejemplo 1, usando Int-29 en la etapa 14 del Esquema 1. MS: 345 ES-(C10H14N6O6S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8:3,08 (s, 3H); 3,52 (m, 2H); 3,61 (s, 3H); 4,93 (m, 1H); 5,69 (s, 1H); 7,60 (s, 1H). La estereoquímica absoluta se confirmó mediante cristalografía.

Ejemplo 41

El hidrógenosulfato de sodio de (4S*,8R*)-8-((Z)-N-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (quiral) se sintetizó siguiendo una secuencia de reacción similar a la que se muestra en el Ejemplo 1, usando Int-30 en la etapa 14 del Esquema 1. MS: 345 ES-(C10H14N6O6S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8:3,05 (s, 3H); 3,52 (m, 2H); 3,60 (s, 3H); 4,92 (m, 1H); 5,68 (s, 1H); 7,58 (s, 1H).

Ejemplo 42

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-(((2-aminoetil)carbamoil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Ejemplo 18, 8,3 mg, 0,0192 mmol) en piridina (0,5 ml)a 0 °C se añadió trimetilsililisocianato (2,35 mg, 0,0192 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. El disolvente se retiró para dar el producto en bruto. Se disolvió en agua y se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, 4 g, 100% de agua) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-metil-8-((Z)-N-metil-N-(((2-ureidoetil)carbamoil)oxi)carbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (2 mg, 19 %) como un sólido blanco. MS: 474 ES-(C14H21NcA sS) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,05 (s, 3H); 3,14 (m, 4H); 3,57 (m, 2H); 3,63 (s, 3H); 4,90 (m, 1H); 5,72 (m, 1H); 7,59 (s, 1H).

Ejemplo 43

El Ejemplo 43 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las del Ejemplo 42. Tomando hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-(((2-aminoetil)carbamoil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Ejemplo 18, 8,3 mg, 0,0192 mmol) como sustrato, para producir hidrogenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-carbamoil-N-metil-N-(((2-ureidoetil)carbamoil)oxi)carbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (0,7 mg, 6% ) como un sólido blanco. MS: 517 ES-(C15H22N10O9S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,05 (s, 3H); 3,24 (m, 4H); 3,56 (m, 2H); 3,62 (s, 3H); 4,90 (m, 1H); 5,71 (m, 1H); 7,58 (s, 1H).

Ejemplo 44

El ejemplo 44 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran en el Ejemplo 42. Tomando hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-(((2-aminoetil)carbamoil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Ejemplo 18, 8 mg, 0,0185 mmol) como sustrato y cloruro de acetilo (0,001 ml, 0,0185 mmol ) como reactivo para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N'-(((2-acetamidoetil)carbamoil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (4 mg, 41 %) como un sólido blanco. MS: 473 ES-(C15H22N8OsS) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 1,88 (s, 3H); 3,05 (2, 3H); 3,19 (m, 4H); 3,57 (m, 2H); 3,62 (s, 3H); 4,90 (m, 1H); 5,71 (m, 1H); 7,59 (s, 1H); 8,01 (m, 1H); 8,55 (m, 0.5H); 8,72 (m, 1H) relación compuesto/piridina (2:1).

Ejemplo 45

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-(((4-aminobutil)carbamoil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro -1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (lnt-19, 70 mg, 0,125 mmol) en DCM (10 ml)a 0 °C se añadió TFA (0,956 ml, 12,48 mmol), La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. El disolvente se retiró. El residuo se disolvió en agua y se purificó por cromatografía de fase inversa (40 g de Sepabeads, 100 % de agua) para producir hidrógenosulfato de ((4R,8S)-1-metil-8-((Z)-N-metil-N'-((( 4-(2,2,2-trifluoroacetamido)butil)carbamoil)oxi)carbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (48 mg, 59 %) como un sólido blanco. MS: 555 ES^C-iy^aFaNeOeS) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 1,47 (m, 4H); 3,05-3,25 (m, 7H); 3,57-3,69 (m, 5H); 4,95 (m, 1H); 5,75 (m, 1H); 7,59 (s, 1H).

A una solución agitada de ferc-butanol (1,9 ml, 20 mmol) en DCM (12 ml) a 0 °C se le añadió isocianato de clorosulfonilo (1,4 ml, 15 mmol) gota a gota en el transcurso de 10 minutos. Después de agitar a 0°C durante 5 minutos, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 20 minutos. Se concentró al vacío hasta un tercio del volumen. El matraz se volvió a colocar en el baño a 0 °C y el producto cristalizó fuera de la solución. Después de 50 min, el producto se filtró y se lavó con hexanos (20 ml) para proporcionar (clorosulfonil)carbamato de ferc-butilo (1,41 g, 40 %) como un sólido blanco. Se usó inmediatamente en la siguiente etapa.

Int-32

A una solución agitada de (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-N'-hidroxi-N,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-12, 248 mg, 0,696 mmol) en DCM (30 ml)a 0 °C se añadió (clorosulfonil)carbamato de ferc-butilo (Int-31, 225 mg, 1,044 mmol), seguido de DIEA (0,36 ml, 2,09 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 16 horas. Se añadieron a la mezcla de reacción solución saturada de cloruro de amonio (20 ml)y DCM (20 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar un producto en bruto. Se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (4 g, 0-100 % de EtOAc en hexanos) para producir (((((Z)-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo -4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)sulfonil)carbamato de ferc-butilo (88 mg, 24 %) como un sólido blanco. MS: 536 ES+ (C22H29N7O7S).

Int-33

Una solución de (((((Z)-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7 -metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)sulfonil)carbamato de ferc-butilo (Int-32, 88 mg, 0,164 mmol) en acetona (20 ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (1,7 mg, 0,0016 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para producir (((((Z)-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)sulfonil)carbamato de ferc-butilo (60 mg, 82 %) como un sólido blanco. MS: 446 ES+ (C15H23N7O7S).

Int-34

A una solución de (((((Z)-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)sulfonil)carbamato de ferc-butilo (Int-33, 60 mg, 0,135 mmol) en piridina (10 ml) a temperatura ambiente temperatura se añadió complejo de trióxido de azufre y piridina (172 mg, 1,078 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, 4 g, 0-100 % de EtOAc en hexano, luego acetona) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-((N-(fercbutoxicarbonil)sulfamoil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (70 mg, 99 %) como un sólido blanco. MS: 524 ES-(C15H23N7O1üS2).

Ejemplo 46

A una solución agitada de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-((N-(ferc-butoxicarbonil)sulfamoil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (lnt-34, 50 mg, 0,095 mmol) en DCM (0,5 ml)a 0 °C se añadió TFA (2,7 ml, 36,3 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. El disolvente se retiró para dar el producto en bruto. Se disolvió en agua y se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, 12 g, 100 % de agua) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-metil-8-((Z)-N-metil-N'-(sulfamoiloxi)carbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (8 mg, 17 %) como un sólido blanco. MS: 424 ES-(C10H15N70bS2) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: (300 MHz, D2O) 8: 3,14 (s, 3H); 3,65­ 3,76 (m, 5H); 4,98 (m, 1H); 5,85 (m, 1H); 7,67 (s, 1H); 8,11 (m, 4H); 8,63 (m, 2H); 8,82 (m, 4H) relación compuesto/piridina/TFA (1:2:1).

Int-35

Se cargó un matraz de fondo redondo de 2000 ml con 4-[(dimetilamino)metiliden]-3,5-dioxopiperidina-1-carboxilato de ferc-butilo (Int-1, 170 g, 633,60 mmol) y etanol (675 ml). Se añadió 2-hidraziniletan-1-ol (48 g, 630,77 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se concentró al vacío. El residuo se diluyó con acetato de etilo (2000 ml) y se lavó con salmuera (2 x 500 ml). La capa orgánica se recogió, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío para dar el producto en bruto. Se aplicó sobre una columna de gel de sílice eluida con acetato de etilo/éter de petróleo para producir 1-(2-hidroxietil)-4-oxo-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4- c]piridin-6-carboxilato de ferc-butilo (95 g, 53 %) como un aceite de color amarillo claro. MS: 282 ES+ (C13H19N3O4).

Int-36

Se cargó un matraz de fondo redondo de 2000 ml con 1-(2-hidroxietil)-4-oxo-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato (Int-35, 95 g, 337,71 mmol), imidazol (46 g, 676,47 mmol) y DCM (1000 ml)a 0 °C. Se añadió gota a gota una solución de terc-butil(cloro)dimetilsilano (66 g, 437,89 mmol) en d Cm (100 ml). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla resultante se lavó con salmuera (2x500 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice y se eluyó con acetato de etilo/éter de petróleo para producir 1-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)-4-oxo-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de terc-butilo (130 g, 97 %) como un sólido blanco. MS: 396 ES+ (C19H33N3O4SO.

Int-37

Un matraz de fondo redondo de 2000 ml se cargó con 1-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)-4-oxo-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de terc-butilo (Int-36, 73 g, 184,54 mmol), MeOH (365 ml) y THF (730 ml)a 0 °C. Se añadió NaBH4 (7 g, 185 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó durante 2 horas a 0 °C. Después se inactivó mediante la adición de agua (1000 ml). La solución resultante se extrajo con EtOAc (3 x 1000 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (2 x 500 ml), se separó, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío para producir 1-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)-4-hidroxi -1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de terc-butilo (77,5 g, rendimiento cuantitativo) como un aceite amarillo claro. MS: 398 ES+ (C-igH35N3O4Si).

Int-38

Un matraz de fondo redondo de 2000 ml se cargó con 1-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)-4-hidroxi-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de terc-butilo (Int-37, 51 g, 128 mmol), N-(benciloxi)-2-nitrobenceno-1-sulfonamida (59 g, 191 mmol), PPh3 (67 g, 255 mmol) y THF (1000 ml) a 0 °C. Se añadió gota a gota una solución de DIAD (52 g, 255 mmol) en THF (100 ml). La mezcla de reacción resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice y se eluyó con acetato de etilo/éter de petróleo para proporcionar 4-((N-(benciloxi)-4-nitrofenil)sulfonamido)-1-(2-((terc-butildimetilsililo))oxi)etil)-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de terc-butilo (68 g, 77 %) como un aceite amarillo claro. MS: 688 ES+ (C32H45N5OsSSi).

Int-39

Un matraz de fondo redondo de 2000 ml se cargó con 4-((N-(benciloxi)-4-nitrofenil)sulfonamido)-1-(2-((tercbutildimetilsililo))oxi)etil)-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de terc-butilo (Int-38, 68 g, 98,85 mmol), DCM (680 ml) y ZnBr2 (67 g, 296,55 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 días a temperatura ambiente. Los sólidos se retiraron por filtración. A continuación, la reacción se inactivó mediante la adición de una solución saturada de cloruro de amonio (500 ml) y se extrajo con DCM (3 x 500 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron con sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice y se eluyó con acetato de etilo/éter de petróleo para proporcionar N-(benciloxi)-N-(1-(2-((tercbutildimetilsilil)oxi)etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-4-il)-4-nitrobencenosulfonamida (55 g, 94,7 %) como aceite amarillo claro. MS: 588 ES+ (C27H37N5O6SSi).

Int-40

Se cargó un matraz de fondo redondo de 2000 ml con N-(benciloxi)-N-(1-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[ 3,4-c]piridin-4-il)-4-nitrobencenosulfonamida (Int-39, 53 g, 90,17 mmol) y DCM (530 ml)a 0 °C. Se añadió NCS (15,7 g, 117,22 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 1,5 horas a temperatura ambiente y luego se enfrió a 0 °C. Se añadió DBU (20,6 g, 135,25 mmol), la mezcla de reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 3 horas más. La solución resultante se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional. MS: 586 ES+ (C27H35N5O6SSi).

Int-41

Se añadió TMSCN (35,7 g, 360,7 mmol) a la solución de N-(benciloxi)-N-(1-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-4-il)-4-nitrobencenosulfonamida (Int-40). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Se diluyó con una solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio (500 ml) y se extrajo con DCM (2 x 500 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice y se eluyó con acetato de etilo/éter de petróleo para producir N-(benciloxi)-N-(1-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)-7-ciano-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-4-il)-4-nitrobencenosulfonamida (46 g, 83% ) como aceite de color marrón claro. MS: 613 ES+ (C28H36N6O6SSi).

Int-42

Se cargó un matraz de fondo redondo de 1000 ml con N-(benciloxi)-N-(1-(2-((ferc-butildimetilsilil)oxi)etil)-7-ciano-4.5.6.7- tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-4-il)-4-nitrobencenosulfonamida (Int-41, 44,7 g, 72,95 mmol) y metanol (450 ml)a 0 °C. Se añadió gota a gota cloruro de acetilo (148 g, 1896 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y luego durante 2 horas a 55 °C. Se enfrió a temperatura ambiente. El valor de pH de la mezcla de reacción se ajustó a 9 con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío para producir 4-((N-(benciloxi)-4-nitrofenil)sulfonamido)-1-(2-hidroxietil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxilato de metilo (38 g, 98 %) como aceite marrón. MS: 532 ES+ (C23H25N5O8S).

Int-43

Se cargó un matraz de fondo redondo de 1000 ml con 4-((N-(benciloxi)-4-nitrofenil)sulfonamido)-1-(2-hidroxietil)-4.5.6.7- tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxilato de metilo (lnt-42, 38 g, 71,49 mmol), DCM (380 ml) e imidazol (9,7 g, 142,98 mmol) a 0 °C. Se añadió gota a gota una solución de TBSCl (14 g, 92,94 mmol) en DCM (50 ml). La mezcla de reacción resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se lavó con salmuera (2 x 500 ml). El extracto orgánico se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice y se eluyó con acetato de etilo/éter de petróleo para producir 4-((N-(benciloxi)-4-nitrofenil)sulfonamido)-1-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxilato de metilo (39 g, 85 %) como aceite amarillo. MS: 646 ES+ ^gHagNsOaSSi).

Int-44

Se cargó un matraz de fondo redondo de 250 ml con 4-((N-(benciloxi)-4-nitrofenil)sulfonamido)-1-(2-((tercbutildimetilsilil)oxi)etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxilato (lnt-43, 10 g, 15,48 mmol)), DMF (100 ml), ácido tioglicólico (3,56 g, 30,96 mmol) y LiOH (1,86 g, 77,40 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc (200 ml). Se lavó con salmuera (200 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (100 ml) y las capas orgánicas se combinaron. El extracto orgánico se lavó con salmuera (5 x 100 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice y se eluyó con acetato de etilo/éter de petróleo para producir 4-((benciloxi)amino)-1-(2-((tercbutildimetilsilil)oxi)etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxilato (5,4 g, 76 %) como aceite amarillo. MS: 461 ES+ (C23H36N4O4SO.

Int-45

Se cargó un matraz de fondo redondo de 2000 ml con 4-((benciloxi)amino)-1-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo [3,4-c]piridin-7-carboxilato de metilo (Int-44, 27 g, 58,61 mmol), acetonitrilo (540 ml), DIEA (30 g, 234,44 mmol) a 0 °C. Se añadió gota a gota una solución de trifosgeno (7 g, 23,44 mmol) en acetonitrilo (100 ml) a la mezcla de reacción con agitación durante 2 horas, seguido de 4-dimetilaminopiridina (1,4 g, 11,72 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente y se concentró al vacío. Se diluyó con EtOAc (500 ml) y se lavó con salmuera (2 x 100 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar un producto en bruto. Se aplicó sobre una columna de gel de sílice, se eluyó con acetato de etilo/éter de petróleo, para producir (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7 de metilo -metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (16 g, 56%). MS: 487 ES+ (C24H34N4O5Si).

Esquema 9

Int 46

Se cargó un matraz de fondo redondo de 250 ml con (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2-((íerc-butildimetMsilil)oxi)etil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1 H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-45, 3820 mg, 7,85 mmol), HF. Piridina (0,32 ml, 8,63 mmol) y EtOAc (100 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (100 ml) y EtOAc (100 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. Se trituró con EtOAc (20 ml). El precipitado se filtró y se lavó con EtOAc (5 ml)para proporcionar (4R,8S)-5-(bencNoxi)-1-(2-hidroxietil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (2724 mg, 93%) como un sólido blanco. MS: 373 ES+ (C18H20N4O5).

Int-47

Se cargó un matraz de fondo redondo de 100 ml con (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2-hidroxietN)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-46, 1910 mg, 5,13 mmol), DCM (30 ml)a 0 °C. Se añadió una solución de cloruro de metanosulfonilo (0,48 ml, 6,16 mmol) en DCM (5 ml), seguido de DIEA (1,34 ml, 7,69 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 20 minutos. Se añadió agua (100 ml). El pH de la mezcla se ajustó a aproximadamente 3 añadiendo una solución de HCl 0,5N. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron para producir (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2-((metilsulfonil)oxi)etil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (2070 mg, 89 %) como una espuma pegajosa blanca. MS: 451 ES+ (C19H22N4O7S).

Int-48

Se cargó un matraz de fondo redondo de 100 ml con (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2-((metilsulfonil)oxi)etil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-47, 2070 mg, 4,6 mmol) y DMF (50 ml). Se añadió azida sódica (3584 mg, 55,14 mmol), la mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante 4 horas y después a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se repartió entre agua (200 ml)y EtOAc (200 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con agua (100 ml), salmuera (100 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. Se purificó con cromatografía ultrarrápida (40 g, eluyendo con EtOAc/hexano) para producir (4R,8S)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (1810 mg, 99 %) como un sólido blanquecino. MS: 398 ES+ (C18H19N7O4).

Int-49

A una solución de (4R,8S)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-48, 354 mg, 0,89 mmol) en metanol (60 ml) y THF (30 ml) a -10 °C se añadió una solución de LiBH4 (4,46 ml, 8,90 mmol) en THF. La mezcla resultante se agitó a -10 °C durante 2 horas. Se añadieron DCM (100ml)y una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (100 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar un producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (40 g de gel de sílice, 0-100 % de EtOAc en hexanos, luego 100 % de acetona) para producir (4R,8S)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-8-(hidroximetil)-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo [3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (310 mg, 94 %) como un sólido blanco. MS: 370 ES+ (C17H19N7O3).

Int-50

A una solución de (4R,8S)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-8-(hidroximetil)-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (Int-49, 310 mg, 0,84 mmol) en DCM (60 ml) a temperatura ambiente se añadió peryodinano de Dess-Martin (427 mg, 1,01 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas. Se añadieron agua (10 ml), solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (30 ml) y solución de Na2S2O32N (50 ml) y se agitó durante 5 minutos. La mezcla bifásica se separó y la capa acuosa se extrajo con DCM (100 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y concentraron para producir (4R,8S)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H -4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbaldehído (300 mg, 97 %) como un aceite incoloro. MS: 368 ES+ (C17H17N7O3).

Int-51

Int-51 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-10 (Esquema 1, etapa 10) , usando (4R,8S)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbaldehído (Int-50, 300 mg, 0,816 mmol) como sustrato y producir (E )-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbaldehído oxima (283 mg, 91 %) como un sólido blanco. MS: 383 ES+ (C17H18N8O3).

Int-52

Int-52 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-11 (Esquema 1, etapa 11) , usando (E)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbaldehído oxima (Int-51, 283 mg, 0,74 mmol) como sustrato, y producir cloruro de (4R, 8S,Z)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-N-hidroxi-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (308 mg, 99 %) como un sólido amarillo. MS: 417 ES+ (C17H-i7ClN8O3).

Int-53

Int-53 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-12 (Esquema 1, etapa 12) , usando cloruro de (4R,8S,Z)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-N-hidroxi-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (Int-52, 308 mg, 0,74 mmol) como sustrato y producir (4R,8S,Z)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-N'-hidroxi-N-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (247 mg, 81 %) como un sólido blanco. MS: 412 ES+ (C18H21N9O3).

Int-54

Int-54 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-13 (Esquema 1, etapa 13) , usando (4R,8S,Z)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-N'-hidroxi -N-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-53, 247 mg, 0,60 mmol) como sustrato y proporciona (4R,8S,Z)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metil-6-oxo -4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (308 mg, 97%) como un sólido blanco. MS: 526 ES+ (C24H35N9O3SO.

Int-55

A una solución de (4R,8S,Z)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi--N-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-54, 308 mg, 0,586 mmol) en metanol (20 ml) y THF (10 ml) a -10 °C se añadió una solución de LiBH4 (1,46 ml, 2,93 mmol) y CuSO4 (93,52 mg, 0,59 mmol). Se agitó a -10 °C durante 1 hora. Se añadieron Boc2O (127,87 mg, 0,59 mmol) y DIEA (0,1 ml, 0,59 mmol) y se agitó a 0 °C durante 2 horas. Se añadió solución saturada de cloruro de amonio (20 ml)y se agitó durante 5 minutos. Se eliminó la mayor parte del disolvente orgánico. Se añadieron DCM (100 ml)y una solución saturada de cloruro de amonio (100 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar un producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (20 g de gel de sílice, 0-50 % de EtOAc en hexano) para producir (2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etil)carbamato de ferc-butilo (86 mg, 24 %) como un aceite incoloro. MS: 600 ES+ (C29H45N7O5SO.

Int-56

Int-56 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-14 (Esquema 1, etapa 14) , usando 2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3] diazepin-1-il)etil)carbamato de ferc-butilo (Int-55, 86 mg, 0,14 mmol) como sustrato, y proporciona (2-((4R,8S)-8-((Z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-5-hidroxi-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etil)carbamato de ferc-butilo (68 mg, 93 %) como un sólido blanco. MS: 510 ES+ (C22Ha9NyO5Si).

Int-57

Int-57 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-15 (Esquema 1, etapa 15) , usando (2-((4R,8S)-8-((Z)-N'-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-5-hidroxi-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etil)carbamato de ferc-butilo (Int-56, 68 mg, 0,13 mmol) como sustrato y proporciona hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-(2-((ferc-butoxicarbonil)amino)etil)-8-((Z )-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (78 mg, 99% ) como un sólido blanco. MS: 588 ES-(C22H39N7OsSSi).

Int-58

Int-58 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-16 (Esquema 1, etapa 16) , usando hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-(2-((ferc-butoxicarbonil)amino)etil)-8-(( Z)-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-57, 78 mg, 0,13 mmol) como sustrato, y se obtiene hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (31 mg, 49% ) como un sólido blanco. MS: 474 ES-(C16H25N7ObS).

Ejemplo 47

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-(2-((ferc-butoxicarbonil)amino)etil)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-58, 31 mg, 0,07 mmol) en DCM (10 ml)a 0 °C se añadió TFA (0,25 ml, 3,28 mmol).

La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 6 horas y se concentró a presión reducida. El material bruto se disolvió en agua y se purificó por cromatografía de fase inversa (sepabeads 12 g, 100% de agua) para proporcionar hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-(2-aminoetil)-8-((Z)-N-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (7 mg, 25 % ) como un sólido blanco. MS: 376 ES+ (C11H17N7O6S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8:3,05 (s, 3H); 3,42 (m, 2H); 3,57 (m, 2H); 4,17 (m, 2H); 4,91 (m, 1H); 5,71 (m, 1H); 7,70 (s, 1H).

Esquema 10

^lnt-62 Ejemplo 48

Int-59

Int-59 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-55 (Esquema 9, etapa 10) , usando (4R,8S,Z)-1-(2-azidoetil)-5-(benciloxi)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-54, 89 mg, 0,17 mmol) como sustrato y no se añadió Boc2O, para producir (4R,8S,Z)-1-(2-aminoetil)-5-(benciloxi)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (84 mg, 99% ) como un sólido blanco. MS: 500 ES+ (C24H37N7O3SO.

Int-60

A una solución de (4R,8S,Z)-1-(2-aminoetil)-5-(benciloxi)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-59, 84 mg, 0,17 mmol) en piridina (5 ml)a -10 °C se añadió anhídrido acético (0,01 ml, 0,17 mmol). Se agitó a -10 °C durante 1 hora. Se añadieron solución saturada de cloruro de amonio (20 ml)y DCM (20 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar un producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (20 g de gel de sílice, 0-50 % de EtOAc en hexano) para producir N-(2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etil)acetamida (74 mg, 81 %) como un aceite pegajoso incoloro. MS: 542 ES+ (C26H3gN7O4Si).

Int-61

Int-61 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-56 (Esquema 9, etapa 11) , utilizando N-(2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepina-1-il)etil)acetamida (Int-60, 74 mg, 0,136 mmol) como sustrato y dar N-(2-((4R,8S)-8-((Z)-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-5-hidroxi-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etil)acetamida (50 mg, 81% ) como un sólido blanco. MS: 452 ES+ (C1gH33N7O4Si).

Int-62

Int-62 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-57 (Esquema 9, etapa 12), utilizando N-(2-((4R,8S)-8-((Z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-5-hidroxi-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etil)acetamida (Int-61, 50 mg, 0,11 mmol) como sustrato, y proporcionar hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-(2-acetamidoetil)-8-((Z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (57 mg, 97% ) como un sólido blanco. MS: 530 ES-(C-igH33N7O7SiS).

Ejemplo 48

El ejemplo 48 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-16 (Esquema 1, etapa 16), usando hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-(2-acetamidoetil)-8-((Z)-N-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-62, 57 mg, 0,107 mmol) como sustrato y proporcionar hidrogenosulfato de (4R,8S)-1-(2-acetamidoetil)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo -4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (10 mg, 20% ) como un sólido blanco. MS: 416 ES^C-iaH^NyOyS) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 1,93 (s, 3H); 3,08 (s, 3H); 3,55 (m, 4H); 4,01 (m, 2H); 4,94 (m, 1H); 5,45 (m, 1H); 7,68 (s, 1H); 8,02 (m, 0.5H); 8,61 (m, 0.25H); 8,79 (0,5H) relación compuesto/piridina (1:0,25).

Int-63 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-9 (Esquema 1, etapa

9), utilizando (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2-hidroxietil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-46, 234,3 mg, 0,63 mmol) como sustrato y producir (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2,2-dihidroxietil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (244,3 mg, 100 %) como un sólido de color amarillo claro. MS: 389 ES+ (C18H20N4O6).

Int-64

A una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2,2-dihidroxietil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-63, 244,3 mg, 0,63 mmol) en piridina (0,5 ml)a 0 °C se añadió (2-(aminooxi)etil)carbamato de ferc-butilo (110,84 mg, 0,63 mmol) en piridina (0,5 ml). La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 15 minutos, luego se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y se lavó con cloruro de amonio saturado (20 ml)y salmuera (20 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron y se concentraron. La cromatografía en gel de sílice (0 %-80 % acetato de etilo/hexanos) produjo (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-((E)-10,10-dimetil-8-oxo-4,9-dioxa)-3,7-diazaundec-2-en-1-il)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin -8-carboxilato de metilo (241,1 mg, 73%) como un sólido blanquecino. MS: 529 ES+ (C25H32N6O7).

Int-65

A una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-((E)-10,10-dimetil-8-oxo-4,9-dioxa-3,7-diazaundec-2-en-1-il)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-64, 248,5 mg, 0,47 mmol) en THF (4 ml) y agua (1 ml)a 0 °C se añadió hidróxido de litio (0,66 ml, 0,66 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos a 0 °C y luego se neutralizó con HCl 1N. Se eliminó el THF y la fase acuosa se congeló y liofilizó para dar un sólido blanco. El sólido se disolvió en agua para dar una solución turbia. El pH se ajustó a ~3-4 y el producto se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml). Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y concentraron para producir ácido (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-((E)-10,10-dimetil-8-oxo-4,9-dioxa-3,7-diazaun-dec-2-en-1-il)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxílico (236,4 mg, 98% ) como una espuma blanquecina. MS: 515 ES+ (C24H30N6O7).

Int-66

A una suspensión de ácido (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-((E)-10,10-dimetil-8-oxo-4,9-dioxa-3,7-diazaundec-2-en-1-il)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxílico (Int-65, 236,4 mg, 0,46 mmol) en DCM (4 ml) a temperatura ambiente, se añadió O-(ferc-butildimetilsilil)hidroxilamina (87,98 mg, 0,59 mmol) y EDC (105,63 mg, 0,55 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante ~2 horas, luego se diluyó con diclorometano y se lavó una vez con salmuera:agua 1:1. Se secaron las fases orgánicas sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. Cromatografía en gel de sílice (0 %-50 % de acetato de etilo/hexanos) (2-((((E)-2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(((ferc-butildimetilsilil))oxi)carbamoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etiliden)amino)oxi)etil)carbamato de ferc-butilo (148,2 mg, 50%) como una espuma blanca. MS: 644 ES+ (C30H45N7O7Si).

Int-67

A una solución de (2-((((E)-2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)carbamoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etiliden)amino)oxi)etil)carbamato de ferc-butilo (Int-66, 141 mg, 0,22 mmol) y trietilamina (0,06 ml, 0,44 mmol) en DCM (3 ml)a -78 °C se añadió anhídrido tríflico (0,07 ml, 0,44 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos. A la solución se añadió gota a gota metilamina (0,05 ml, 1,31 mmol). Después, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó una vez con cloruro de amonio saturado. Se secaron las fases orgánicas sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. La cromatografía en gel de sílice (0 %-50 % acetato de etilo/hexanos) proporcionó (2-((((E)-2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N'-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etiliden)amino)oxi)etil)carbamato de ferc-butilo como espuma blanca (60,6 mg, 42 %). MS: 657 ES+ (C31H48NsO6Si).

Int-68

A una solución de (2-((((E)-2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N'-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etiliden)amino)oxi )etil)carbamato de ferc-butilo (Int-67, 60,6 mg, 0,09 mmol) en acetato de etilo (3 ml) se desgasificó con nitrógeno y se añadió Pd/C (9,82 mg, 0,01 mmol). La mezcla se desgasificó nuevamente y se colocó bajo un globo de hidrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas. Cantidad traza de producto observada. La mezcla de reacción se lavó con nitrógeno y se añadió metanol (1 ml). La mezcla de reacción se desgasificó. Se añadió más Pd/C (9,82 mg, 0,01 mmol) y la mezcla de reacción se desgasificó y se colocó de nuevo bajo globo de hidrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante ~40 minutos, luego se lavó con nitrógeno y se filtró para eliminar el catalizador. El filtrado se concentró para proporcionar (2-((((E)-2-((4R,8S)-8-((Z)-N'-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil))-5-hidroxi-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etiliden)amino)oxi )etil)carbamato de ferc-butilo (52,28 mg, 100%) como un aceite incoloro. MS: 567 ES+ (C24H42N8O6SÍ).

Int-69

A una solución de (2-((((E)-2-((4R,8S)-8-((Z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-5-hidroxi-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)etiliden)amino)oxi)etil)carbamato de ferc-butilo (Int-68, 52,2 mg, 0,09 mmol) en piridina (2 ml) a temperatura ambiente se añadió complejo de piridina de trióxido de azufre (87,96 mg, 0,55 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, luego se diluyó con DCM y se filtró para eliminar los sólidos. El filtrado se concentró y se secó al vacío. El aceite resultante se trituró con DCM y acetona, se filtró para eliminar los sólidos. El filtrado se concentró para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N'-((fercbutildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-((E)-10,10-dimetil-8 -oxo-4,9-dioxa-3,7-diazaundec-2-en-1-il)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (59,57 mg, 100%) como una espuma blanquecina. MS: 645 ES-(C24H42N8OgSiS).

Int-70

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-1-((E)-10,10-dimetil-8-oxo-4,9-dioxa-3,7-diazaundec-2-en-1-il)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-69, 59,57 mg, 0,09 mmol) en acetato de etilo (2 ml) y THF (1 ml) a temperatura ambiente. HF.piridina (0,0026 ml, 0,10 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. Se añadió más HF. piridina (0,0026 ml, 0,10 mmol). Después de otros 30 minutos, se añadió una piridina HF adicional (0,0026 ml, 0,10 mmol). Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se concentró para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-((E)-10,10-dimetil-8-oxo-4,9-dioxa-3,7-diazaundec-2-en-1-il)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (49 mg, 100 %) como un sólido blanco. MS: 533 ES+ (C18H28N8O9S).

Ejemplo 49

A una suspensión de hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-((E)-10,10-dimetil-8-oxo-4,9-dioxa-3,7-diazaundec-2-en-1-il)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-70, 49 mg, 0,09 mmol) en DCM (2 ml)a 0 °C se añadió ácido trifluoroacético (0,14 ml, 1,84 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. Se añadió más ácido trifluoroacético (0,14 ml, 1,84 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente durante 15 minutos. La mezcla de reacción se concentró con DCM varias veces para eliminar el exceso de TFA. El aceite resultante se secó al vacío. Purificación por C18 ISCO (100 % de agua, 4 min, 0 %-50 % de ACN/agua, 3 min) proporcionó hidrógenosulfato de 1-((E)-2-((2-aminoetoxi)imino)etil)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (14,8 mg, 37 %) como un sólido blanco, mezcla de ~3:2 de isómeros E/Z. MS: 431 E S ^C -ia^t^O /S ). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8: 2,89 (m, 3H); 3,03 (m, 2H); 4,13 (m, 2H); 4,70 (m, 3H); 5,44 (d, 1H); 5,75 (m, 1H); 6,95 (m, 0.4H); 7,35 (m, 1H); 7,51 (m, 0.6H); 7,74 (s a, 3H); 9,45 (m, 1H).

Esquema 12

^lnt-77 lnt-78 ^nt-79

Int-71

Un matraz de fondo redondo de 1000 ml se cargó con 4-[(dimetilamino)metiliden]-3,5-dioxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (Int-1, 63 g, 234,80 mmol), etanol (600 ml), NH2NH2.H2O (62 g, 992 mmol). La solución resultante se agitó durante la noche a 53 °C en un baño de aceite. La mezcla resultante se concentró al vacío. Se añadió MTBE (500 ml), el sólido formado se recogió por filtración. El sólido se secó en un horno a presión reducida para producir (E)-4-hidrazineliden-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de ferc-butilo (40 g, 68 %) como un sólido amarillo. MS: 252 ES+ (C11H17N5O2).

Int-72

Un matraz de fondo redondo de 2000 ml se cargó con 4-hidraziniliden-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de ferc-butilo (Int-71, 80 g, 318,36 mmol), acetona (800 ml)y cloruro de hidrógeno (1 M) (800 ml). La solución resultante se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. Se añadió agua (700 ml) y la mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x 500 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (3 x 2 l), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío para producir 4-oxo-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4 -c]piridin-6-carboxilato de ferc-butilo (75 g, 99 %) como aceite amarillo. Se usó directamente en la siguiente etapa. MS: 182 ES+ (C11H15N3O3).

Int-73

Un matraz de fondo redondo de 2000 ml se reemplazó con 4-oxo-1,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de ferc-butilo (Int-72, 75 g, 316,12 mmol), diclorometano (750 ml), (clorodifenilmetil)benceno (97 g, 347,95 mmol) y trietilamina (38 g, 375,53 mmol). La solución resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente. A continuación, la reacción se inactivó mediante la adición de agua (6000 ml). La mezcla de reacción se extrajo con diclorometano (2 x 400 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron con salmuera (3 x 100 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (1:10). Las fracciones recolectadas se combinaron y concentraron al vacío para producir 4-oxo-2-tritil-2,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridina-6-carboxilato de ferc-butilo (50 g, 33 %) como un sólido blanco. RMN de 1H (400 MHz, cloroformod) 87,96 (s, 1H); 7,41-7,30 (m, 9H); 7,20-7,12 (m, 6H); 4,76 (s, 2H); 4,22 (s, 2H); 1,50 (s, 9H).

Int-74

Un matraz de fondo redondo de 3 bocas y 1000 ml se purgó y se mantuvo con una atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadieron 4-oxo-2-tritil-2,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de ferc-butilo (Int-73, 46 g, 95,92 mmol), tetrahidrofurano ( 460 ml) y metanol (230 ml), seguido de la adición de NaBH4 (3,65 g, 96,48 mmol) en varios lotes a 10 °C en 5 minutos. La solución resultante se agitó durante 1 hora a 10 °C en un baño de agua/hielo y se inactivó mediante la adición de agua (500 ml). La solución resultante se extrajo con acetato de etilo (3 x 500 ml)y las capas orgánicas se combinaron. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (3 x 1000 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (1:10-1:0). Las fracciones recolectadas se combinaron y concentraron al vacío para producir 4-hidroxi-2-tritil-2,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de ferc-butilo (33 g, 71 %) como un sólido blanco. RMN de 1H (300 MHz, cloroformod) 87,41 (s, 1H); 7,37-7,28 (m, 9H); 7,21-7,11 (m, 6H); 4,81 (d, J = 28,0 Hz, 2H); 4,34 (d, J = 16,5 Hz, 1H); 3,96 (dd, J = 13,7, 4,3 Hz, 1H); 3,50 (dd, J = 13,7, 3,4 Hz, 1H); 1,49 (s, 9H).

Int-75

Un matraz de fondo redondo de 3 bocas y 1000 ml se purgó y se mantuvo con una atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadieron 4 hidroxi -2-tritil-2,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6-carboxilato de ferc-butilo (Int-74, 18 g, 37,38 mmol) y tetrahidrofurano (360 ml), seguido de la adición de n-BuLi (22,5 ml, 56,13 mmol) gota a gota con agitación a -30 °C durante 5 minutos. La solución se agitó a -20 °C durante 20 minutos. Se añadió gota a gota clorotrimetilsilano (4,5 g, 41,42 mmol) con agitación a -30 °C durante 5 minutos. La solución se agitó a -20 °C durante 30 minutos. A la mezcla se añadió gota a gota n-BuLi (45 ml, 112,3 mmol) con agitación a -50°C durante 10 minutos. La solución se agitó a -50 °C durante 2 horas. Luego se purgó CO2 en la reacción a -50 °C en 20 minutos. La solución resultante se agitó durante 20 minutos a temperatura ambiente. A continuación, la reacción se inactivó mediante la adición de agua (1000 ml). El valor del pH de la solución se ajustó a 3 con cloruro de hidrógeno (1 mol/l). La solución resultante se extrajo con acetato de etilo (3 x 1000 ml)y las capas orgánicas se combinaron. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (2 x 2000 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El residuo se trituró con éter de petróleo (200 ml). El sólido se filtró y se secó para producir ácido 6-(ferc-butoxicarbonil)-4-hidroxi-2-tritil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxílico (19 g, 96,7%) como un sólido amarillo. Se usó directamente en la siguiente etapa.

Int-76

Se cargó un matraz de fondo redondo de 500 ml con ácido 6-(ferc-butoxicarbonil)-4-hidroxi-2-tritil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxílico (Int-75, 19 g, 36,15 mmol), acetona (190 ml), carbonato de potasio (7,5 g, 54,27 mmol), sulfato de dimetilo (4,9 g, 38,85 mmol). La solución resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Los sólidos se retiraron por filtración y se lavaron con EtOAc (500 ml). El filtrado se concentró al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (1:10-1:3). Las fracciones recolectadas se combinaron y concentraron al vacío para producir 4-hidroxi-2-tritil-2,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6,7-dicarboxilato de 6-(ferc-butil) 7-metilo (13,24 g, 68 %) como un sólido blanco. MS: 562 ES+1+Na (C32H33N3O5).

Int-77

Un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 500 ml se purgó y se mantuvo con una atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadieron 4-hidroxi-2-tritil-2,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6,7-dicarboxilato de 6-(ferc-butil) 7-metilo (Int-76, 8 g, 14,83 mmol) y diclorometano (160 ml), seguido de trietilamina (3 g, 29,65 mmol) gota a gota con agitación a -60 °C durante 2 minutos. A esto se añadió gota a gota una solución de metanosulfonato de metanosulfonilo (5,2 g, 29,85 mmol) en diclorometano (35 ml) con agitación a -60 °C durante 30 minutos. La solución se agitó a -60 °C durante 2 horas. Se añadió a la mezcla una solución de O-bencilhidroxilamina (5,5 g, 44,66 mmol) en diclorometano (35 ml)gota a gota con agitación a -60 °C durante 30 minutos. La solución se agitó a -60 °C durante 30 minutos. La solución resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente y luego se inactivó mediante la adición de agua (500 ml). La solución resultante se extrajo con diclorometano (2 x 500 ml) y las capas orgánicas se combinaron. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (3 x 1000 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (1:30-1:10). Las fracciones recogidas se combinaron y se concentraron al vacío. Para producir 4-((benciloxi)amino)-2-tritil-2,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6,7-dicarboxilato de 6-(ferc-butil) 7-metilo (5,6 g, 58,6 %) como un sólido blanco. MS: 645 ES+ (C39H40N4O5).

Int-78

Un matraz de fondo redondo de 250 ml se purgó y se mantuvo con una atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadieron 4-((benciloxi)amino)-2-tritil-2,4,5,7-tetrahidro-6H-pirazolo[3,4-c]piridin-6,7-dicarboxilato de 6-(ferc-butil) 7-metilo (Int-77, 7 g, 10,86 mmol) y dioxano (28 ml), seguido de cloruro de hidrógeno (4 M en dioxano) (105 ml) gota a gota con agitación a 0 °C durante 20 minutos. La solución resultante se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. El precipitado se recogió por filtración. El sólido se secó a presión reducida para proporcionar 4-((benciloxi)amino)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxilato de metilo (2,81 g, 85,8% ) como un sólido blanco. MS: 303 ES+ (C15H18N4O3).

Int-79

Un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 3000 ml se purgó y se mantuvo con una atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadieron 4-((benciloxi)amino)4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-7-carboxilato de metilo (Int-78, 4,5 g, 12,03 mmol) y acetonitrilo (1350 ml). Esto fue seguido de la adición de una solución de trietilamina (7,3 g, 72,14 mmol) en acetonitrilo (36 ml) gota a gota con agitación a 0 °C durante 5 minutos. La solución se agitó a 0 °C durante 30 minutos. A esto se añadió gota a gota una solución de carbonato de ditriclorometilo (1,25 g, 4,21 mmol) en acetonitrilo (125 ml)con agitación a 0°C durante 5 horas. La solución resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se diluyó con EtOAc (1000 ml). Se lavó con salmuera (2 x 1000 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío para dar el producto en bruto. Se recristalizó en EtOAc:MTBE en una proporción de 1:10 para producir (4R,8S)-5-(benciloxi)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (1,3 g, 33%) como un sólido blanco. MS: 329 ES+ (C16H16N4O4) RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 87,80 (s, 1H); 7,49-7,34 (m, 5H); 5,02 (s, 1H); 4,94-7,88 (m, 2H); 4,57 (s, 1H); 3,75 (s, 3H); 3,44-3,35 (m, 2H).

Int-80 e Int-81

A una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-79, 7530 mg, 22,92 mmol) y en DMF (210 ml) a temperatura ambiente se añadió bromoacetato de ferc-butilo (33,89 ml, 229,34 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua dos veces. Se secaron las fases orgánicas sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. La cromatografía en gel de sílice (0 %-5 % de acetona/DCM) proporcionó ambos regioisómeros (Int-80 e Int-81) juntos. Repurificado para separar (0 %-5 % de acetona/DCM). Primera elución: (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2-(ferc-butoxi)-2-oxoetil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-80, 2,928 g, 29%), MS: 443 ES+ (C22H26N4O6). Segunda elución: (4R,8S)-5-(benciloxi)-2-(2-(ferc-butoxi)-2-oxoetil)-6-oxo-2,5,6,8-tetrahidro-4H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-81, 0,47 g, 5 %), MS: 443 ES+ (C22H26N4O6).

Int-82

A una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2-(ferc-butoxi)-2-oxoetil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-80, 2928 mg, 6,62 mmol) en THF (40 ml)y agua (20 ml)a 0 °C se añadió hidróxido de litio 1 M (6,62 ml, 6,62 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añaden otros 0,5 eq. de hidróxido de litio a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Todavía solo material de partida. Se añaden 0,2 eq de hidróxido de litio cada hora hasta añadir 1 eq más. La mezcla de reacción se mantuvo en el congelador durante la noche. Por la mañana todavía hay solo un 50% de producto. Se añadieron otros 0,2 eq de LiOH y después de 30 minutos la reacción se completó en ~70-80 %. Se continuó agitando a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C, se acidificó a ~pH 4 con HCl 0,5 N y se extrajo con acetato de etilo 4 veces. La fase acuosa se acidificó adicionalmente a ~pH 2 y se extrajo cuatro veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron para ácido producir (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)-6oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxílico (1,953 g, 69% ) como una espuma de color amarillo claro. MS: 429 ES+ (C21H24N4O6).

Int-83

A una suspensión de (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepina-8-carboxílico (Int-82, 1453 mg, 3,39 mmol) en DCM (30 ml)a temperatura ambiente O-(terc-butildimetilsililo) hidroxilamina (599,42 mg, 4,07 mmol) y EDC (780,15 mg, 4,07 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se añadieron otros 0,4 eq. de NH2OTBS y se agitó durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró y se purificó por cromatografía en gel de sílice dos veces (0 %-30 % de acetato de etilo/hexanos) para producir 2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(((terc-butildimetilsilil )oxi)carbamoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)acetato de terc-butilo (369 mg, 20% ) como una espuma blanca. MS: 558 ES+ (C27H3gN5O6S¡).

Int-84

A una solución de 2.(4R, 8S)-5-(benciloxi)-8-(((terc-butildimetilsilil)oxi)carbamoil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)acetato de terc-butilo (Int-83, 616,4 mg, 1,11 mmol) y trietilamina (0,15 ml, 1,11 mmol) en DCM (12 ml)a -78 °C se añadió anhídrido tríflico (0,19 ml, 1,11 mmol). La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 5 minutos. A la mezcla de reacción se le añadió metilamina (6,63 ml, 13,26 mmol). La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 6 horas. Se concentró y se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (20 g de gel de sílice, 0 %-30 % de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z))-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3 ]diazepin-1-il)acetato de terc-butilo (138,5 mg, 22 %). MS: 571 ES+ (C2sH42N6O5Si).

Int-85

A una solución de 2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z))-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3 ]diazepin-1-il)acetato de terc-butilo (Int-84, 138,5 mg, 0,24 mmol) en DCM (2 ml) a 0 °C se añadió TFA (1,02 ml, 13,35 mmol). La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró dos veces con DCM y el aceite amarillo resultante se secó al vacío durante 2 horas para producir un sólido amarillo. Esto se disolvió en ~2 ml de tampón de fosfato 1:1 ACN/pH 7 y se purificó mediante C18 iSCO (100 % agua, 3 min y luego a 50 % de ACN, 4 min) para producir ácido 2-((4R,8S)-5- (benciloxi)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)acético (67,9 mg, 70 %) como un sólido amarillo claro. MS: 401 ES+ (C18H20N6O5).

Int-86

A una solución de ácido 2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)acético (Int-85, 67,9 mg, 0,17 mmol) en DMF (2 ml)a temperatura ambiente se añadió cloruro amónico (36,29 mg, 0,68 mmol), HATU (128,96 mg, 0,34 mmol) y DIEA (0,12 ml, 0,68 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos a temperatura ambiente, luego se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera/agua (1:1). La capa acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron. La cromatografía en gel de sílice (0 %-90 % de acetona/DCM) produjo 2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)acetamida (48,9 mg, 72 %). MS: 400 ES+ (C18H21N7O4).

Int-87

A una solución de 2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N'-hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo- 4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)acetamida (Int-86, 48,9 mg, 0,12 mmol) (~50-60 % puro) en DCM a 0 °C se añadió trifluorometanosulfonato de terc-butildimetilsililo (0,03 ml, 0,12 mmol) y 2,6-lutidina (0,01 ml, 0,12 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Véase una mezcla de material de partida, mono y bis TBS protegido. Se añadieron más trifluorometanosulfonato de terc-butildimetilsililo (0,03 ml, 0,12 mmol) y 2,6-lutidina (0,01 ml, 0,12 mmol). Después de 1 hora, el producto principal es bis TBS protegido. Se añadieron de nuevo más trifluorometanosulfonato de terc-butildimetilsililo (0,03 ml, 0,12 mmol) y 2,6-lutidina (0,01 ml, 0,12 mmol). Después de otra hora, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con solución saturada de cloruro de amonio. Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. La cromatografía en gel de sílice (0% -100% de acetato de etilo/hexanos) proporcionó 2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N'-((tercbutildimetilsilil)oxi)-N -metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)-N-(terc-butildimetilsilil)acetamida (23,9 mg, 31 %). MS: 628 ES+ (C3qH49N704S¡2).

Int-88

Una solución de 2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((Z)-N'-((terc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,5,6,8tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)-N-(ferc-butildimetilsilil)acetamida (Int-87, 31,1 mg, 0,05 mmol ) en metanol (1 ml)y acetato de etilo (1 ml)se purgó con nitrógeno. Se añadió paladio sobre carbono (5,27 mg, 0,005 mmol) y la mezcla de reacción se purgó de nuevo y se colocó bajo un globo de hidrógeno y se agitó durante 1 hora y 45 minutos. La mezcla de reacción se filtró a través de un filtro de 0,45 pm y se concentró para producir N-(ferc-butildimetilsilil)-2-((4R,8S)-8-((Z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-5-hidroxi-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)acetamida (24,5 mg, 92%). MS: 538 ES+ (C23H43N7O4Si2).

Int-89 e Int-90

A una solución de N-(íerc-butildimetilsilil)-2-((4R,8S)-8-((Z)-N'-((íerc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-5-hidroxi-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-1-il)acetamida (Int-88, 24,5 mg, 0,05 mmol) en piridina (1 ml)a temperatura ambiente se añadió complejo de piridina de trióxido de azufre (43,5 mg, 0,27 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, después se concentró y se secó al vacío. La cromatografía en gel de sílice (0% -100% de acetona/diclorometano) proporcionó una mezcla 1:1 de hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-(2-((ferc-butildimetilsilil)amino)-2-oxoetil)-8-((Z )-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-89). MS: 618 Es (C23H43N7O7Si2S); e hidrógenosulfato de (4R)-1-(2-amino-2-oxoetil)-8-((z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro -1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-90) (16,4 mg, 64%). MS: 504 ES+ (C-iy^gNyOySiS).

Ejemplo 50

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-(2-((ferc-butildimetilsilil)amino)-2-oxoetil)-8-((Z)-N-((fercbutildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-89) e hidrógenosulfato de (4R)-1-(2-amino-2-oxoetil)-8-((Z)-N-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-90) (16,4 mg, 0.03 mmol) en DCM (1 ml) a temperatura ambiente se añadió difluorotrifenilsilicato de tetrabutilamonio (21,49 mg, 0,04 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 35 minutos, luego se cargó en una columna de gel de sílice de 4 g y se purificó (0 %-100 % de acetona/DCM). El producto eluyó en acetona al 100 %. Las fracciones se combinaron y concentraron para dar una película incolora. La película resultante se disolvió en agua/acetonitrilo (1:1), se congeló y liofilizó para producir la sal TBA de sulfato de (4R,8S)-1-(2-amino-2-oxoetil)-8-((Z)-N' -hidroxi-N-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo como sólido blanco (11,9 mg, 70 %). MS: MS 390 ES^C^H ^N/O /S) RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8: 0,85 (m, 9H); 1,23 (m, 6H); 1,47 (m, 6H); 2,82 (m, 3H); 3,09 (m, 6H); 3,30 (m, 2H); 4,41 (m, 2H); 4,61 (m, 1H); 5,47 (s, 1H); 7,17 (s a, 1H); 7,28 (s, 1H); 7,39 (s a, 1H); 9,50 (s, 1H). Compuesto:TBA = 1:0,75.

Int-91

A una suspensión de (2-formiltiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (500 mg, 2,19 mmol) en metanol (100 ml) y THF (50 ml) a -16 °C se le añadió una solución de LiBH4 (5,48 ml, 10,95 mmol) en THF gota a gota. Después de agitar a -16 °C durante 2 horas, la reacción se inactivó con una solución de cloruro de amonio saturado (100 ml). El disolvente se retiró. El residuo se repartió entre DCM (100 ml) y solución saturada de cloruro de amonio (100 ml). La capa orgánica se recogió, se lavó con agua (50 ml), salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró. El residuo se trituró con EtOAc para proporcionar (2-(hidroximetil)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (504 mg, 99 %) como un sólido blanco. MS: 231 ES+ (C9H14N2O3S).

Int-92

A una solución de (2-(hidroximetil)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (Int-91, 500 mg, 2,18 mmol) en DCM (50 ml)a 0 °C se le añadió DIEA (0,76 ml. 4,36 mmol), seguido de cloruro de metanosulfonilo (0,19 ml, 2,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. Se añadieron DCM (50 ml) y una solución saturada de cloruro de amonio (100 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con agua (50 ml), salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar metanosulfonato de (4-((ferc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)metilo (673 mg, 99 %) como un sólido blanco. Ms : 309 ES+ (C10H16N2O5S2).

Int-93

A una solución de (4-((ferc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)metilmetanosulfonato (Int-92, 606 mg, 1,96 mmol) en DMF (20 ml) a 0 °C se le añadió azida sódica (255 mg, 3,93 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se añadieron DCM (100 ml)y una solución saturada de cloruro de amonio (100 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con agua (50 ml), salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró para dar el producto en bruto. Se trituró con EtOAc para proporcionar (2-(azidometil)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (501 mg, 99 %) como un sólido blanco. MS: 255 e S+ (C9H13N5O2S).

Int-94

El Int-94 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para el Int-14 (Esquema 1, etapa 14), utilizando (2-(azidometil)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (Int-93, 501 mg, 01,96 mmol) como sustrato y EtOH como disolvente, para proporcionar (2-(aminometil)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (380 mg, 84 %) como un sólido blanco. MS: 230 ES+ (C9H15N3O2S).

Esquema l s

Int-95

Int-95 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-14 (Esquema 1, etapa 14), utilizando (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-7, 2298 mg, 6,71 mmol) como sustrato, para producir (4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3] diazepina-8-carboxilato (722 mg, 42%). MS: 253 ES+ (C10H12N4O4).

Int-96

A una suspensión de (4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (lnt-95, 406 mg, 1,61 mmol) en DMF (5 ml), carbonato de cesio (629,34 mg, 1,93 mmol) y bromuro de alilo (0,14 ml, 1,61 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron agua (20 ml)y EtOAc (50 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar un producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (20 g de gel de sílice, 0-100 % de EtOAc en hexanos) para producir (4R,8S)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8 -tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato (350 mg, 74 %) como un sólido blanco. MS: 293 ES+ (C13H16N4O4).

Int-97

Int-97 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-8 (Esquema 1, etapa 8), utilizando (4R,8S)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8 -tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato (Int-96, 350 mg, 1,19 mmol) como sustrato, para producir (4R,8S)-5-(aliloxi)-8-(hidroximetil)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (106 mg, 33% ) como un sólido blanco. MS: 265 ES+ (C12H16N4O3).

Int-98

Int-98 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-9 (Esquema 1, etapa 9), usando (4R,8S)-5-(aliloxi)-8-(hidroximetil)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e ][1,3]diazepin-6-one (Int-97, 106 mg, 0,40 mmol) como sustrato, para producir (4R,8S)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepina-8-carbaldehído (105 mg, 99%) como un sólido blanco. MS: 263 ES+ (C12H14N4O3).

Int-99

Int-99 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-10 (Esquema 1, etapa 10) , usando (4R,8S)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepina-8-carbaldehído (Int-98, 647 mg, 2,467 mmol) como sustrato, para producir (E)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metano-opirazol[3,4-e][1,3 ]oxima de diazepina-8-carbaldehído (684 mg, 99%) como un sólido blanco. MS: 278 ES+ (C12H15N5O3).

Int-100

Int-100 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-11 (Esquema 1, etapa 11) , usando (E)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbaldehído oxima (Int-99, 614 mg, 2,21 mmol) como sustrato, para producir cloruro de (4R,8S,Z)-5-(aliloxi)-N-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazol[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (690 mg, 99 %) como un sólido blanco. MS: 312 ES+ (C12H14ClN5O3).

Int-101

Int-101 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-12 (Esquema 1, etapa 12) , usando cloruro de (4R,8S,Z)-5-(aliloxi)-N-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (Int-100, 470 mg, 1,51 mmol) y (2-(aminometil)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (Int-94, 380 mg, 1,66 mmol) como sustratos, para producir (2-(((4R,8S,Z)-5-(aliloxi)-N'-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamido)metil)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (115 mg, 15 %) como un sólido blanco. MS: 505 Es (C21H28N8O5S).

Int-102

Int-102 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-13 (Esquema 1, etapa 13) , usando (2-(((4R,8S,Z)-5-(aliloxi)-N'-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamido)metil)tiazol-4 -il)carbamato de ferc-butilo (Int-101, 58 mg, 0,11 mmol) como sustratos, para producir (2-((Z)-3-((4R,8S)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-6,6,7,7-tetrametil-5-oxa-2,4-diaza-6-silaoct-3-en-1-il)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (65 mg, 92 %) como un sólido blanco. MS: 619 ES+ (C27H42N8O5SÍS).

Int-103

A una solución de (2-((Z)-3-((4R,8S)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-6,6,7,7-tetrametil-5-oxa-2,4-diaza-6-silaoct-3-en-1-il)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (Int-102, 65 mg, 0,10 mmol) en MeOH (5 ml) a temperatura ambiente se añadió ácido 1,3-dimetilbarbitúrico (32,8 mg, 0,21 mmol) y tetrakis (trifenilfosfina)paladio(0) (121,38 mg, 0,11 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y se concentró.

Al material bruto descrito anteriormente a temperatura ambiente se le añadió piridina (5 ml) y complejo de trióxido de azufre y piridina (132 mg, 0,83 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. Se purificó en una almohadilla de sílice corta, eluyendo con hexanos (100 ml), seguido de acetato de etilo/hexanos (1 :1, 100 ml), acetato de etilo (100 ml)y acetona (200 ml)para producir hidrógeno sulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-((4-((te rc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)metil)-N-hidroxicarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (54 mg, 79 %) como un sólido blanco. MS: 659 ES+ (C24H38N8OsSiS2).

Int-104

Int-104 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-16 (Esquema 1, etapa 16), usando (4R,8S)-8-((Z)-N-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)metil)-N'-hidroxicarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-103, 54 mg, 0,082 mmol) como sustratos, para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-((4-((ferc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)metil)-N-hidroxicarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (38 mg, 85 %) como un sólido blanco. MS: 545 ES+ (C18H24N8O8S2).

Ejemplo 51

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-((4-((ferc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)metil)-N-hidroxicarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-104, 25 mg, 0,046 mmol) en Dc M (2 ml)a 0 °C se añadió TFA (1,2 ml, 15,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. El disolvente se retiró. El residuo se disolvió en agua y se purificó por cromatografía de fase inversa (12 g de sepabeads, 100 % agua) para producir la sal de TBA de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-N-4-aminotiazol-2-il)metil)-N'-hidroxicarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (4 mg, 15,6 %) como un sólido blanco. MS: 445 ES+ (C13H16N8O6S2) RMN de 1 (300 MHz, D2O) 8: 3,39-3,49 (m, 5H); 4,35 (m, 1H); 4,56 (m, 1H); 4,86 (m, 1H); 5,51 (m, 1H); 6,56 (s, 1H); 7,54 (s, 1H). Compuesto/TBA=1:1.

Esquema 16

Int-105 e Int-106

Int-105 e Int-106 se sintetizaron siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-20 (Esquema 3, etapas 1 y 2), usando (2-(((4R,8S,Z)-5-(aliloxi)-N'-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8 -carboximidamido)metil)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (Int-101, 52,3 mg, 0,10 mmol) como sustrato, para producir (Z)-3-((4R,8S)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-1-(4-((ferc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)-8,8-dimetil-6-oxo-5- oxa-2,4,7-triazanon-3-en-9-oato de ferc-butilo (In t-l05 , 18 mg, 25 %) MS: 690 ES+ (C30H43N9O9S); y (2-((3-((4R,8S)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-5-oxo-1,2,4-oxadiazol-4(5H)-il)metil)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (Int-106, 27 mg, 49 %). MS: 531 ES+ (C22H26N8O6S).

Int-107

Int-107 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para Int-103 (Esquema 15, etapa 7), usando (Z)-3-((4R,8S)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-1-(4-((ferc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)-8,8-dimetil-6-oxo-5-oxa-2,4,7-triazanon-3-en-9-oato de ferc-butilo (Int-105, 18 mg, 0,03 mmol ) como sustrato, para proporcionar (Z)-1-(4-((ferc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)-8,8-dimetil-3-((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-6-oxo-5-oxa-2,4,7-triazanon-3-en-9-oato de ferc-butilo (15 mg, 95 %) como un sólido blanco. MS: 730 ES+ (C27H39N9O11S2).

Ejemplo 52

El Ejemplo 52 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran en el Ejemplo 51 (Esquema 15, etapa 9), usando (Z)-1-(4-((ferc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)-8,8-dimetil-3-((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-6-oxo-5-oxa-2,4,7-triazanon-3-en-9-oato de ferc-butilo (Int-107, 15 mg, 0,02 mmol) como el sustrato, para producir ácido (Z)-1-(4-aminotiazol-2-il)-8,8-dimetil-3-((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-6-oxo-5-oxa-2,4,7-triazanon-3-en-9-oico (1,5 mg, 10 %) como un sólido blanco. MS: 574 ES+ (C18H23N9O9S2) Rm N de 1 (300 MHz, D2O) 8: 1,48 (s, 3H); 1,54 (s, 3H); 3,56 (m, 2H); 3,63 (s, 3H); 4,67 (m, 2H); 4,92 (m, 1H); 5,66 (m, 1H); 6,65 (s, 1H); 7,60 (s, 1H).

Int-108 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para el Int-107 (Esquema 16, etapa 2), usando (2-((3-((4R,8S)-5-(aliloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-5-oxo-1,2,4-oxadiazol-4(5H)-il)metil)tiazol-4-il)carbamato de ferc-butilo (Int-106, 27 mg, 0,05 mmol) como sustrato, para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-(4-((4-((ferc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2-il)metil)-5-oxo-4,5-dihidro-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (13 mg, 99 %) como un sólido blanco. MS: 571 ES+ (C19H22N8O9S2).

Ejemplo 53

El Ejemplo 53 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran en el Ejemplo 52 (Esquema 16, etapa 3), usando hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-(4-((4-((ferc-butoxicarbonil)amino)tiazol-2- il)metil)-5-oxo-4,5-dihidro-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-108, 13 mg, 0,02 mmol) como sustrato, para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-(4-((4-aminotiazol-2-il)metil)-5-oxo-4,5-dihidro-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (1 mg, 8,2 %) como un sólido blanco. MS: 471 ES+ (C14H14N8O7S2) RMN de 1 (300 MHz, D2O) 8: 3,31 (m, 1H); 3,52 (m, 1H); 3,59 (s, 3H); 4,95 (m, 3H); 5,92 (m, 1H); 6,78 (s, 1H); 7,64 (s, 1H).

Ejemplo 54

Una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-metil-8-((Z)-N-metil-N-((((1-metil-1H-pirazol-4-il)metil)carbamoil)oxi)carbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Ejemplo 15, 18 mg, 0,04 mmol) en DMF (0,3 ml)a 0 °C se añadió tetrafluoroborato de trimetiloxonio (27 mg, 0,19 mmol) en porciones. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 15 minutos. La mayor parte de la DMF se retiró para dar el producto en bruto. Se purificó mediante cromatografía de fase inversa (12 g de Sepabeads, eluyendo con 0-15% de acetonitrilo/agua) para producir 1,2-dimetil-4-((Z)-3-((4R,8S)-1-metil- 6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-6-oxo-5-oxa-2,4,7-triazaoct-3-en-8-il)-1H-pirazol-2-io (5 mg, 27 %) como un sólido blanco. MS: 498 ES+ (C17H23N9O7S) RMN de 1H 300 MHz, DMSO-d6) 8: 2,99 (d, 3H); 3,36 (m, 2H); 3,63 (s, 3H); 4,05 (s, 6H); 4,08 (m, 2H); 4,70 (s, 1H); 5,64 (s, 1H); 4,80 (d, 1H); 7,20 (t, 1H); 7,36 (s, 1H); 8,31 (s, 2H).

Esquem a 18

Int-109

A una solución de cloruro de cloruro de ((4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-W-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (Int-11, 500 mg, 1,38 mmol) en DCM (8 ml) a temperatura ambiente se añadió cianuro de trimetilsililo (0,21 ml, 1,66 mmol) y DIEA ( 0,36 ml, 2,07 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadieron solución saturada de cloruro de amonio y DCM. La capa orgánica se separó, se lavó con agua, salmuera y se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. La cromatografía en gel de sílice (0 %-50 % acetato de etilo/hexanos) produjo cianuro de ((4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-N-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (150 mg, 30,8 % de rendimiento) como un sólido blanco. MS: 353 ES+ (C17H16N6O3).

Int-110

A una solución de cianuro de ((4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-W-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (Int-109, 150 mg, 0,43 mmol) en DCM (50 ml)a temperatura ambiente se añadió trifluorometanosulfonato de ferc-butildimetilsililo (0,21 ml, 0,64 mmol) y 2,6-lutidina (0,074 ml, 0,64 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadieron DCM y solución saturada de cloruro de amonio. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera y se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró. La cromatografía en gel de sílice (0 %-50 % acetato de etilo/hexanos) produjo cianuro de ((4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-W-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (120 mg, 60,4 % de rendimiento) como un sólido blanco. MS: 467 ES+ (C23H3üN6O3Si).

Int-111

A la mezcla de cianuro de ((4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-A/-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (Int-110, 120 mg, 0,26 mmol) y cloruro de níquel (II) hexahidratado (50,0 mg, 0,39 mmol) en MeOH (10 ml)a 0 °C se añadió NaBH4 (77,8 mg, 2,06 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 30 minutos. Se añadió una solución saturada de cloruro de amonio. Después se extrajo la mezcla con acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se lavó con agua, salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró para producir la (4R,8S)-8-((E)-2-amino-1-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil-5-(benciloxi)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (80 mg, 66,1 % de rendimiento) como un sólido blanco. Se usó directamente en la siguiente etapa. MS: 471 ES+ (C23H34N6O3SO.

Int-112

A una solución de (4R,8S)-8-((E)-2-amino-1-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil-5-(benciloxi)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (Int-111, 80 mg, 0,17 mmol) en piridina (3 ml) se añadió cloruro de 4-etil-2,3-dioxo-piperazin-1-carbonilo (41,7 mg, 0,20 mmol) y TEA (34,4 mg, 0,34 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se añadió una solución saturada de cloruro de amonio. Después se extrajo la mezcla con acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera y se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró. La cromatografía en gel de sílice (0% -100% acetato de etilo/hexanos) proporcionó A/-((E)-2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-2-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil)-4-etil-2,3-dioxopiperazin-1-carboxamida (20 mg, 18,4% de rendimiento) como un sólido blanco. MS: 639 ES+ (C3oH42NaO6Si).

Int-113

Una solución de A/-((E)-2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-2-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil)-4-etil-2,3-dioxopiperazin-1-carboxamida (Int-112, 20 mg, 0,031 mmol) en MeOH (2 ml) y acetato de etilo (4 ml) se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (9,02 mg, 0,0094 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar A/-((E)-2-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)-2-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][l,3]diazepin-8-il)etil)-4-etil-2,3-dioxopiperazin-1-carboxamida ( 15 mg, rendimiento 87,3 %) como un sólido blanco. MS: 549 ES+ (C23H36NsO6Si).

Int-114

A una solución W-((E)-2-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)-2-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)etil)-4-etil-2,3-dioxopiperazin-1-carboxamida (Int-113, 15 mg, 0,0273 mmol) en piridina (2 ml) a temperatura ambiente se añadió complejo de piridina de trióxido de azufre (13,0 mg, 0,082 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 3 horas, y después se concentró a presión reducida. El material se trituró con DCM y los sólidos se eliminaron por filtración. El filtrado se concentró para dar el producto en bruto. Se disolvió en tampón de pH ~ 7 y se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, 12 g, ACN/agua 0-50 %) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-1-(4-etil-2,3-dioxopiperazin-1-il)-7,7,8,8-tetrametil-1-oxo-6-oxa-2,5-diaza-7-silanon-4-en-4-il)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (10 mg, rendimiento del 58,2 %) como un sólido blanco. MS: 627 ES-(C23H36NaOgSiS).

Ejemplo 55

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-1-(4-etil-2,3-dioxopiperazin-1-il)-7,7,8,8-tetrametil-1-oxo-6-oxa-2,5-diaza-7-silanon-4-en-4-il)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-114, 8 mg, 0,0127 mmol) en acetato de etilo (1 ml) y THF (0,5 ml)a temperatura ambiente se añadió HF.piridina (1,27 mg, 0,0383 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 3 horas, y después se concentró. El sólido resultante se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para producir la sal de piridinio de hidrógenosulfato (4R,8S)-8-((E)-2-(4-etil-2,3-dioxopiperazin-1-carboxamido)-1-(hidroxiimino)etil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (4,5 mg, 61,9%) como un sólido blanco. MS: 513 ES- ( ^ 7^ 2^ 09 S) RMN de 1H (300 MHz, D20) 8: 1,20 (m, 3H); 3,26-3,85 (m, 9H); 4,12 (m, 2H); 4,53 (m, 2H); 4,97 (m, 1H); 5,51 (s, 1H); 7,65 (s, 1H); 7,90 (m, 0.8H); 0,41 (m, 0.4H); 8,74 (m, 0,8H). relación compuesto/piridina (1:0,4).

Int-115

A una solución agitada de (4R,8S)-8-((E)-2-amino-1-(((terc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil-5-(benciloxi)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (Int-111, 200 mg, 0,42 mmol) en DCM (10ml)a 0 °C se añadió TEA (86,2 mg, 0,849 mmol) y (clorosulfonil)carbamato de terc-butilo (Int-29, 109,9 mg, 0,509 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se añadieron a la mezcla de reacción una solución saturada de cloruro de amonio y DCM. La capa orgánica se separó, se lavó con agua, salmuera y se secó se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. Se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (0-100% de EtOAc en hexanos) para producir (A/-((E)-2-((4R,8S)-5-(bencilox¡)-1-met¡l-6-oxo -4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil)sulfamoil)carbamato de terc-butilo (50 mg, rendimiento del l8,1%) como un sólido blanco. MS: 648 e S-(C2sH43N707S¡S).

Int-116

Una solución de (A/-((E)-2-((4R,8S)-5-(bencilox¡)-1-met¡l-6-oxo -4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil)sulfamoil)carbamato de terc-butilo (Int-115, 50 mg, 0,0769 mmol) en acetato de etilo (8 ml) y metanol (4 ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (22,2 mg, 0,023 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar (N-((E)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)imino-2-(4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4.7- metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-)etil)sulfamoil)carbamato de terc-butilo (38 mg, 88,2%) como un sólido blanco. MS: 560 ES+ (C2i Hs7N707S¡S).

Int-117

A una solución de (N-((E)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)imino-2-(4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4.7- metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-)etil)sulfamoil)carbamato de terc-butilo (Int-116, 38 mg, 0,0679 mmol ) en piridina (2 ml)a temperatura ambiente se añadió complejo de piridina de trióxido de azufre (32,4 mg, 0,204 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, y después se concentró a presión reducida. El material se trituró con DCM y los sólidos se eliminaron por filtración. El filtrado se concentró. El sólido resultante se purificó mediante cromatografía de fase inversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) a hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-2-((N-(terc-butoxicarbonil)sulfamoil)amino)-1-(((terc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (30 mg, 69,1 %) como un sólido blanco. MS: 638 ES-(C2i H37N70 iüSÍS2).

Int-118

A una solución agitada de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-2-((N-(terc-butoxicarbonil)sulfamoil)amino)-1-(((tercbutildimetilsilil)oxi)imino)etil-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-117, 20 mg, 0,0313 mmol) en DCM (2 ml) se añadió TBAT (20,2 mg, 0,0375 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se retiró. El sólido resultante se purificó mediante cromatografía de fase inversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para proporcionar hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-2-((N-(tercbutoxicarbonil)sulfamoil)amino)-1-(hidroxiimino)etil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo como una sal de tetrabutilamonio (20 mg, 83,3 %) MS: 524 ES-(Ci 5H23N70 iqS2).

Ejemplo 56

A una solución agitada de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-2-((W-(terc-butoxicarbonil)sulfamoil)amino)-1-(hidroxiimino)etil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo tetrabutilamonio (Int-118, 20 mg, 0,026 mmol) en DCM ( 2 ml)se añadió TFA (297 mg, 2,60 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se retiró para dar el producto en bruto. Se disolvió en tampón de pH ~ 7 y se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, 12 g, ACN/agua 0-50%) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-1-(hidroxiamino)-2-(sulfamoil)amino)etil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (4,0 mg, 28,9%) como un sólido blanco. MS: 424 ES-(Ci0Hi5N7OsS2) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: (300 MHz, D2O) 8: 3,37 (m, 1H); 3,51-3,72 (m, 4H); 4,03 (m, 1H); 4,53 (m, 1H); 4,96 (m, 1H); 5,70 (s, 1H); 7,65 (s, 1H).

A una solución de (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-W-hidroxi-A/,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-12, 70 mg, 0,2 mmol) en DMF (1 ml) a 0 °C se añadió NaH (11,8 mg, 0,29 mmol, 60 % ) y se agitó durante 10 minutos, se añadió 2-bromoacetamida (32,5 mg, 0,24 mmol). Después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 10 minutos. Se añadieron acetato de etilo y una solución saturada de cloruro de amonio. La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró para dar el producto bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (0-100% de acetona en DCM) para producir 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetamida (58 mg, rendimiento del 71 % ) como un sólido blanco. MS: 414 ES+ (C19H23N7O4).

Int-120

A una solución de 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetamida (Int-119, 58 mg, 0,14 mmol) en MeOH (5 ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (29,9 mg, 0,03 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar 2-((((Z)-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetamida (40 mg, 88,1%) como un sólido blanco. Ms : 324 ES+ (C12H17N7O4).

Ejemplo 57

A una solución de 2-((((Z)-((4R,8S)-5-h¡drox¡-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetamida (Int-120, 40 mg, 0,12 mmol) en piridina (1 ml)a temperatura ambiente se añadió complejo de trióxido de piridina azufre (59,1 mg, 0,38 mmol). La mezcla de reacción se agitó 6 horas, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. El material se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, 12 g, ACN/agua 0-50 %) para producir hidrógenosulfato de piridio (4R,8S)-8-((Z)-W-(2-am¡no-2-oxoetox¡)-W-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-1-met¡l-6-oxo -4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (15 mg, 27% ) como un sólido blanco. MS: 402 E S -^H -i/N yO /S ) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,00 (s, 3H); 3,31 (m, 2H); 3,57 (s, 3H); 4,07 (m 2H); 4,67 (m, 1H); 5,50 (s, 1H); 6,48 (a, 1H); 7,25 (m, 2H); 7,31 (s, 1H); 7,90 (m, 1.4H); 8,39 (m, 0.7H); 8,86 (m, 1.4H) relación compuesto/piridina (1:0,7).

Int-121 e Int-122

A una solución de (4R,8S,Z)-5-(benc¡lox¡)-W-l^¡drox¡-A/,1-d¡met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetral^¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-carbox¡m¡dam¡da (Int-12, 150 mg, 0,42 mmol) en DMF (2 ml)a 0 °C se añadió NaH (25,2 mg, 0,63 mmol, 60 %). Después de agitar a 0 °C durante 10 minutos, se añadió bromoacetato de ferc-butilo (0,014 ml, 0,51 mmol). Después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 10 minutos. Se añadieron acetato de etilo y una solución saturada de cloruro de amonio. La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar el producto bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (0-100 % de acetona en DCM) para proporcionar dos productos. Int-121: 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)(met¡lam¡no)met¡len)am¡no)ox¡)acetato de ferc-butilo (120 mg, rendimiento del 60% ) como un sólido blanco. MS: 471 ES+ (C23H30N6O5). Int-122: 3-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1 H-4,-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)-4-met¡l-4H-1,2,4-oxad¡az¡n-5(6H)-ona (30 mg, rendimiento, 17,9 %) como un sólido blanco. Ms : 397 ES+ (C19H20N6O4).

Int-123 e Int-124

Se sintetizaron 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metileno)amino)oxi)-2-metilpropanoato de ferc-butilo (Int-123) y 3-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)-4,6,6-tr¡met¡l-4H-1,2,4-oxad¡az¡n-5(6H)-ona (Int-124) s¡gu¡endo reacc¡ones s¡m¡lares a las que se muestran para Int-121 e Int-122 en el Esquema 21, etapa 1, ut¡l¡zando 2-bromo-2-met¡l-propanoato de ferc-but¡lo.

Int-125

A una soluc¡ón de 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)(met¡lam¡no)met¡len)am¡no)ox¡)acetato de ferc-but¡lo (Int-121, 100 mg, 0,21 mmol) en DCM (3 ml) se añad¡ó TFA (0,81 ml, 10, 63 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 2 horas. Se el¡m¡nó el TFA para produc¡r ác¡do 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)(met¡lam¡no)met¡len)am¡no)ox¡)acét¡co (88 mg, rend¡m¡ento del 99 %) como un sól¡do blanco. MS: 415 e S+ (C19H22N6O5).

Int-126

A una soluc¡ón de ác¡do 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)(met¡lam¡no)met¡len)am¡no)ox¡)acét¡co (Int-125, 30 mg, 0,07 mmol) en DMF (1,5 ml) se añad¡ó hAt U (55,1 mg, 0,14 mmol), (2-am¡noet¡l)carbamato de ferc-but¡lo (17,4 mg, 0,11 mmol) y base de Hun¡g (0,03 ml, 0,14 mmol). La mezcla de reacc¡ón se agitó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos. Se añad¡eron acetato de etilo y una soluc¡ón saturada de cloruro de amon¡o. La capa orgán¡ca se separó, se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro y se concentró para dar el producto bruto. Se pur¡f¡có por cromatografía ultrarrápida (0-100% de EtOAc/Hexanos) para produc¡r ((Z)-3-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)-7-oxo-5-oxa-2,4,8-tr¡azadec-3-en-10-¡l)carbamato de ferc-but¡lo (35 mg, 86,7 %) como un sól¡do blanco. MS: 557 ES+ (C26H36N8O6).

Int-127

Una soluc¡ón de ((Z)-3-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo [3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)-7-oxo-5-oxa-2,4,8-tr¡azadec-3-en-10-¡l)carbamato de ferc-but¡lo (Int-126, 35 mg, 0,06 mmol) en MeOH (3 ml)se purgó con n¡trógeno 3 veces y se añad¡ó Pd/C al 10 % (13,1 mg, 0,126 mmol). La mezcla de reacc¡ón se purgó con n¡trógeno 3 veces y luego se ag¡tó en atmósfera de h¡drógeno a temperatura amb¡ente durante 2 horas. La mezcla de reacc¡ón se f¡ltró a través de Cel¡te. El f¡ltrado se concentró para dar ((Z)-3-((4R,8S)-5-h¡drox¡-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)-7-oxo-5-oxa-2,4,8-tr¡azadec-3-en-10-¡l)carbamato de ferc-but¡lo (25 mg, 85 %) como un sólido blanco. MS: 467 ES+ (C19H30N8O6).

Int-128

A una soluc¡ón de ((Z)-3-((4R,8S)-5-h¡drox¡-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)-7-oxo-5-oxa-2,4,8-tr¡azadec-3-en-10-¡l)carbamato de ferc-but¡lo (Int-127, 25 mg, 0,05 mmol) en p¡r¡d¡na (2 ml)a temperatura amb¡ente se añad¡ó complejo de p¡r¡d¡na de tr¡óx¡do de azufre (25,6 mg, 0,16 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó 6 horas, después se concentraron a pres¡ón reduc¡da para dar el producto en bruto. El mater¡al se pur¡f¡có med¡ante cromatografía de fase ¡nversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para produc¡r h¡drógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-W-(2-((2-((ferc-butox¡carbon¡l)am¡no)et¡l)am¡no)-2-oxoetox¡)-A/-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-1-met¡l-6-oxo-4,8-d¡h¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-5(6H)-¡lo (20 mg, 68,2 %) como un sólido blanco. MS: 545 ES-(CigH3oN8OgS)

Ejemplo 58

A una solución agitada de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-W-(2-((2-((ferc-butoxicarbonil)amino)etil)amino)-2-oxoetoxi)-A/-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-128, 20 mg, 0,04 mmol) en DCM (2 ml)a temperatura ambiente se añadió TFA (0,14 ml, 1,83 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El disolvente se retiró para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-W-(2-((2-aminoetil)amino)-2-oxoetoxi)-W-metilcarbamimidoil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (10 mg, 55,1 %) como un sólido blanco. MS: MS 447 ES-(C14H22NsO7S) RMN de 1H (300 MHz, DMSO-dg) 8: 2,82 (m, 2H); 3,01 (m, 3H); 3,31 (m, 2H); 3,58 (s, 3H); 4,14 (m 2H); 4,70 (m, 1H); 5,52 (s, 1H); 6,37 (m, 1H); 7,25 (m, 2H); 7,31 (s, 1H); 7,60 (m, 2H); 7,92 (m, 1H).

Datos analíticos para ejemplos adicionales

Todos los compuestos de la Tabla 4 se sintetizaron de acuerdo con lo anterior o usando reacciones similares fácilmente conocidas por un experto en la técnica. Todos los compuestos se aislaron como trans-racémicos.

Tabla 4

continuación

Esquema 24

^{ln t}-121 ^{lnl-129 lnl-130 Ejemplo 62}

Int-129

Una solución de 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetato de ferc-butilo (Int-121, 30 mg, 0,0638 mmol) en MeOH (3 ml)con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (10 mg, 0,094 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar una solución de 2-((((Z)-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetato de ferc-butilo (23 mg, 94,8 %) como un sólido blanco. m S: 381 ES+ (C16H24N6O5).

Int-130

A una solución de 2-((((Z)-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetato de ferc-butilo (Int-129, 23 mg, 0,0605 mmol) en piridina (1 ml)a temperatura ambiente. se añadió complejo de trióxido de azufre y piridina (28,87 mg, 0,181 mmol). La mezcla de reacción se agitó 16 horas, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para producir 2-((((Z)-((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-( sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetato de ferc-butilo (18 mg, 58,2 %) como un sólido blanco. MS: 459 Es -(C16H24N60bS).

Ejemplo 62

A una solución agitada de 2-((((Z)-((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetato (Int-130, 14 mg, 0,030 mmol) en DCM (3 ml)a temperatura ambiente se añadió TFA (0,12 ml, 1,52 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se retiró para dar el producto en bruto. Luego se disolvió en agua (2 ml)y se eluyó a través de un cartucho de resina de intercambio iónico en forma de Na+ Dowex® 50WX8 con agua como eluyente. Las fracciones que contenían el producto se juntaron y liofilizaron para dar un sólido blanquecino. El sólido se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para producir la sal sódica de ácido 2-((((Z)-((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acético (2,0 mg, 13,8 %) como un sólido blanco. MS: 405 ES+ (C12H16N6O8S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,13 (s, 3H); 3,60 (m, 2H); 3,67 (s, 3H); 4,27 (m, 2H); 4,98 (m, 1H); 5,73 (s, 1H); 7,63 (s, 1H).

Ejemplo 63

El Ejemplo 63 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran para el Ejemplo 62. Uso de 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metileno)amino)oxi)-2-metilpropanoato (Int-123) como sustrato en el Esquema 24, etapa 1. MS 433 (C14H20N6O8S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 1,38 (m, 6H); 3,05 (s, 3H); 3,10 (m, 5H); 4,93 (m, 1H); 5,68 (s, 1H); 7,59 (s, 1H); 8,10 (m, 0.6H); 8,61 (m, 0.3H); 8,80 (m, 0.6H) Relación compuesto/piridina (1:0,3).

Una solución 3-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4-metil-4H-1,2,4-oxadiazin-5(6H)-ona (Int-122, 30 mg, 0,0757 mmol) en MeOH (3 ml) se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (8,05 mg, 0,0076 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar 3-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4-metil-4H-1,2,4-oxadiazin-5(6H)-ona (20 mg, 86,3 %) como un sólido blanco. MS: 307 ES+ (C12H14N6O4).

Ejemplo 64

A una solución de 3-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4-metil-4H-1,2,4-oxadiazin-5(6H)-ona (Int-131, 20 mg, 0,0653 mmol) en piridina (2 ml)a temperatura ambiente temperatura se añadió complejo de trióxido de azufre y piridina (31,18 mg, 0,196 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 3 horas, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. El material se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para producir hidrógenosulfato de ((4R,8S)-1-metil-8-(4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H-1,2,4-oxadiazin-3-il)-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-il) (15 mg, 56,5 %) como un sólido blanco. MS: 387 ES+ (C12H14N6O7S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,45­ 3,57 (m, 4H); 3,61-3,78 (m, 4H); 4,41-4,69 (m, 2H); 4,99 (m, 1H); 6,02 (s, 1H); 7,69 (s, 1H); 8,08 (m, 1.4H); 8,64 (m, 0.7H); 8,79 (m, 1.4H) Relación compuesto/piridina (1:0,7).

Ejemplo 65

El ejemplo 65 se sintetizó siguiendo condiciones de reacción similares a las que se muestran en el ejemplo 64 usando 3-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazol[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4,6,6-trimetil-4H-1,2,4-oxadiazin-5(6H)-ona (Int -124) como sustrato en el Esquema 25, etapa 1. MS: 415 (C14H18N6O7S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 8: 1,41 (s, 3H); 1,52 (s, 3H); 3,53 (m, 4H); 3,73 (m, 4H); 5,02 (m, 1H); 6,02 (s, 1H); 7,69 (s, 1H); 8,10 (m, 2H); 8,67 (m, 1H); 8,80 (m, 2H) Relación compuesto/piridina (1:1).

Int-132

A una solución agitada de (4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-W-hidroxi-A/,1-dimetil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-12, 50 mg, 0,143 mmol) en DCM (25 ml)a 0 °C se añadió base de Hunig (0,029 ml, 0,168 mmol). Se añadió gota a gota una solución de trifosgeno (20,8 mg, 0,701 mmol) en DCM (15 ml). Después de la adición, la reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La reacción se diluyó con DCM. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar el producto bruto. Se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (0-100 % EtOAc/Hexanos) para producir 3-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro- 1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4-metil-1,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona (30 mg, 55,9% ) como un sólido blanco. MS: 383 ES+ (C18H18N6O4).

Int-133

Una solución de 3-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4-metil-1,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona (Int-132, 15 mg, 0,0392 mmol) en metanol (3 ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (4,17 mg, 0,0039 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar 3-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-4-metil-1,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona (8 mg, 69,8 %) como un sólido blanco. MS: 293 ES+ (C11H12N6O4).

Ejemplo 66

A una solución de 3-((4R,8S)-5-h¡drox¡-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)-4-met¡l-1,2,4-oxad¡azol-5(4H)-ona (8 mg, 0,027 mmol) en p¡r¡d¡na (2 ml)se añad¡ó complejo de tr¡óx¡do de azufre y p¡r¡d¡na (43,57 mg, 0,27 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 16 horas, y después se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al se trituró con DCM y los sól¡dos se el¡m¡naron por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se concentró para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía de fase ¡nversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para produc¡r h¡drógenosulfato de ((4R,8S)-1-met¡l-8-(4-met¡l-5-oxo-4,5-d¡h¡dro-1,2,4-oxad¡azol-3-¡l)-6-oxo-4,8-d¡h¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-5(6H)-¡lo (5 mg, 41,7%) como un sól¡do blanco. MS: 371 ES-(C11H12N6O7S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,41 (m, 1H); 3,51 (s, 3H); 3,67 (m, 1H); 3,72 (s, 3H); 5,01 (m, 1H); 6,15 (s, 1H); 7,71 (s, 1H); 8,09 (m, 4H); 8,66 (m, 2H); 8,79 (m, 4H) Relac¡ón compuesto/p¡r¡d¡na (1:2)

Int-134

A una soluc¡ón ag¡tada de (4-h¡drox¡but¡l)carbamato de terc-but¡lo (1,4 g, 7,4 mmol) en DCM (50 ml) a 0 ° se le añad¡ó TEA (2,04 ml, 14,6 mmol). Se añad¡ó gota a gota cloruro de metanosulfon¡lo (0,69 ml, 8,88 mmol). Después de la ad¡c¡ón, la mezcla de reacc¡ón se calentó a temperatura amb¡ente y se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 3 horas. Se añad¡ó DCM. La capa orgán¡ca se lavó con una soluc¡ón de HCl d¡lu¡da, agua, salmuera, se secó sobre sulfato de sod¡o anh¡dro y se concentró para dar Int-134 metanosulfonato de 4-((terc-butox¡carbon¡l)am¡no)but¡lo (1,8 g, rend¡m¡ento del 91 %) como un ace¡te amar¡llo. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8: 1,30 (s, 9H); 1,40-1,50 (m, 2H); 1,60-1,70 (m, 2H); 2,92 (m, 2H), 3,15 (s, 3H); 4,25 (m, 2H); 6,79 (m, 1H).

Esquem a 28

Etapa 1 lnt-135

Int-135

El metanosulfonato de 2-((terc-butox¡carbon¡l)am¡no)et¡lo se s¡ntet¡zó s¡gu¡endo una reacc¡ón s¡m¡lar a la que se muestra para Int-134, usando de (2-h¡drox¡et¡l)carbamato de terc-but¡lo como sustrato. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8: 1,39 (s, 9H); 3,15 (s, 3H); 3,35 (m, 2H); 4,25 (m, 2H); 7,12 (m, 1H).

Esquema 29

Int-136

A una solución agitada de cianuro de((4R,8S,Z)-5-(benciloxi)-W-((terc-butildimetilsilil)oxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (Int-110, 100 mg, 0,214 mmol) en tolueno (5 ml) se añadió oxima de acetaldehído (101,3 mg, 1,71 mmol) e InCh (47,4 mg, 0,214 mmol). La reacción se calentó a 60 °C durante 8 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron a la mezcla de reacción solución saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se lavó con agua, salmuera, se secó se secó sobre sulfato magnésico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (0-100% de EtOAc en hexanos) para producir (Z)-2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)imino)acetamida (32 mg, rendimiento del 30,8 %) como un sólido blanco. MS: 485 ES+ (C23H32N6O4Si).

Int-137

Una solución de (Z)-2-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)imino)acetamida (Int-136, 32 mg, 0,066 mmol) en acetato de etilo (5 ml)y metanol (2,5 ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (19,02 mg, 0,0198 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar (Z)-2-(((tercbutildimetilsilil)oxi)imino)-2-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)acetamida (25 mg, 95,9 %) como un sólido blanco. MS: 395 ES+ (C16H26N6O4SO.

Int-138

A una solución de (Z)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)imino)-2-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)acetamida (Int-137, 25 mg, 0,063 mmol) en piridina (2 ml) se añadió complejo de trióxido de piridina y azufre (30,3 mg, 0,19 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, y después se concentró a presión reducida. El material se trituró con DCM y los sólidos se eliminaron por filtración. El filtrado se concentró para dar el producto en bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (0-100 % de acetona en DCM) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-2-amino-1-(((terc-butildimetilsilil)oxiimino)-2-oxoetilo-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (20 mg, 66,5 %) como un sólido blanco. MS: 473 ES-(C-,6H26N6OySiS).

Ejemplo 67

A una solución agitada de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-2-amino-1-(((terc-butildimetilsilil)oxiimino)-2-oxoetilo-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (Int-138, 20 mg, 0,042 mmol) en DCM (5 ml) se añadió TBAT (27,3 mg, 0,051 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El disolvente se retiró. El sólido resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (0-100% de acetona en DCM) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((Z)-2-amino-1-(hidroxiimino)-2-oxoetil-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo como sal de tetrabutilamonio (14 mg, 71,1 %) MS: 359 ES-(CiüHi2N6OyS) RMN de 1H (300 MHz, DMSO-da) 8: 0,94 (m, 10H); 1,30 (m, 7H); 1,58 (m, 7H); 3,04-3,40 (m, 9 H); 3,56 (s, 3H); 4,70 (m, 1H); 5,47 (s, 1H); 7,36 (s, 1H); 7,79 (m, 2H); 11,86 (s, 1H) relación compuesto/tetrabutilamonio (1:0,9).

Esquema 30

Int-139

A una solución agitada de ((4R,8S)-5-(benciloxi)-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-79, 700 mg, 2,13 mmol) en DMF (8 ml) se añadió metanosulfonato de 4-((fercbutoxicarbonil)amino)butilo (Int-134, 1424 mg, 2,13 mmol) y Cs2CO3 (4,17 g, 12,8 mmol). La reacción se calentó a 80 °C durante 20 minutos y se enfrió a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se añadieron acetato de etilo y agua. La capa orgánica se separó, se lavó con agua, salmuera, se secó se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el producto en bruto. Se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (0-100% de EtOAc en hexanos) para producir ((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(4-((ferc-butoxicarbonil)amino)butil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (230 mg, rendimiento del 21,6 %) como un sólido blanco. MS: 500 ES+ (C25H33N5O6).

Int-140

A una solución de ((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(4-((ferc-butoxicarbonil)amino)butil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxilato de metilo (Int-139, 230 mg, 0,46 mmol) en THF (5 ml) y agua (1 ml) a 0 °C se añadió hidróxido de litio (0,48 ml, 0,48 mmol). La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se retiró el THF. Se añadió HCl 1N a la fase acuosa para ajustar el pH a ~3-4 y el producto se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y concentraron para producir ácido (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-(4-((ferc-butoxicarbonil)amino)butil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxílico (200 mg, 89,5%) como un sólido blanco. MS: 486 ES+ (C24H31N5O6).

Int-141

A una solución de ácido (4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-1-(4-((ferc-butox¡carbon¡l)am¡no)but¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboxílico (Int-140, 200 mg, 0,41 mmol) en DCM (5 ml) a temperatura amb¡ente se añad¡ó O-(ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)h¡drox¡lam¡na (78,9 mg, 0,54 mmol) y EDC (94,8 mg, 0,49 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 40 m¡nutos. La mezcla de reacc¡ón se cargó d¡rectamente sobre gel de síl¡ce y se pur¡f¡có med¡ante cromatografía ultrarráp¡da (20 g de gel de síl¡ce, 0 %-50 % de acetato de et¡lo/hexanos) para produc¡r (4-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡) -8-((((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)carbamo¡l)-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1 H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-1-¡l)but¡l)carbamato de ferc-but¡lo (103 mg, 40,6 %) como una espuma blanca. MS: 615 ES+ (C30H46N6O6S¡).

Int-142

A una soluc¡ón de (4-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-8-(((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)carbamo¡l)-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro)-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-1-¡l)but¡l)carbamato de ferc-but¡lo (Int-141, 100 mg, 0,16 mmol) y tr¡et¡lam¡na (0,090 ml, 0,65 mmol) en DCM (2 ml)a -78 °C se le añad¡ó anhídr¡do trífl¡co (0,055 ml, 0,33 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó durante 5 m¡nutos. A la soluc¡ón se añad¡ó gota a gota met¡lam¡na (0,36 ml, 0,72 mmol, 2N en THF). Después, la mezcla de reacc¡ón se dejó calentar a temperatura amb¡ente y se ag¡tó durante 2 horas. La mezcla de reacc¡ón se d¡luyó con DCM y se lavó una vez con una soluc¡ón de cloruro de amon¡o saturado. Se secaron las fases orgán¡cas sobre sulfato de magnes¡o, se f¡ltraron y se concentraron. La cromatografía en gel de síl¡ce (0 %-50 % acetato de et¡lo/hexanos) proporc¡onó (4-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-8-((Z)-N'-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡lo)ox¡)-W-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-1-¡l)but¡l)carbamato como espuma blanca (18 mg, 17,7 %). MS: 628 ES+ (C3-iH49N7O5S¡).

Int-143

A una soluc¡ón de (4-((4R,8S)-5-(benc¡lox¡)-8-((Z)-N'-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-W-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-6-oxo)-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-1-¡l)but¡l)carbamato de ferc-but¡lo (Int-142, 18 mg, 0,0287 mmol) en acetato de et¡lo (3 ml)se desgas¡f¡có con n¡trógeno y se añad¡ó Pd/C (3,6 mg, 0,0057 mmol). La mezcla se desgas¡f¡có nuevamente y se colocó bajo un globo de h¡drógeno. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó durante 2 horas. La mezcla de reacc¡ón se f¡ltró a través de Cel¡te. El f¡ltrado se concentró para proporc¡onar (4-((4R,8S)-8-((Z)-N-((fercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-W-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-5-h¡drox¡-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-1-¡l)but¡l)carbamato de ferc-but¡lo (14 mg, rend¡m¡ento del 90,8%) como un ace¡te ¡ncoloro. MS: 538 ES+ (C24H43N7O5SO.

Int-144

A una soluc¡ón de (4-((4R,8S)-8-((Z)-W-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-W-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-5-h¡drox¡-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-1-¡l)but¡l)carbamato de ferc-but¡lo (Int-143, 14 mg, 0,03 mmol) en p¡r¡d¡na (2 ml)a temperatura amb¡ente se añad¡ó complejo de tr¡óx¡do de azufre y p¡r¡d¡na (33,15 mg, 0,21 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 3 horas, luego se d¡luyó con DCM y se f¡ltra para el¡m¡nar los sól¡dos. El f¡ltrado se concentró. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía ultrarráp¡da (0-100 % de acetona en DCM) para produc¡r h¡drógenosulfato de (4R,8S)-1-(4-((ferc-butox¡carbon¡l)am¡no)but¡l)-8-((Z)-W-((fercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-W-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-6-oxo-4,8-d¡h¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-5(6H)-¡lo (13 mg, 80,8 %) como un ace¡te ¡ncoloro. MS: 616 ES-(C24H43N7OsS¡S).

Int-145

A una soluc¡ón de h¡drogenosulfato de (4R,8S)-1-(4-((ferc-butox¡carbon¡l)am¡no)but¡l)-8-((Z)-W-((fercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-W-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-6-oxo-4,8-d¡h¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-5(6H)-¡lo (Int-144, 13 mg, 0,021 mmol) en acetato de et¡lo (1 ml )y THF (0,5 ml) a temperatura amb¡ente se añad¡ó HF.p¡r¡d¡na (0,0006 ml, 0,023 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó durante 30 m¡nutos. Después de 30 m¡nutos, la mezcla de reacc¡ón se concentró para produc¡r h¡drógenosulfato de (4R,8S)-1-(4-((ferc-butox¡carbon¡l)am¡no)but¡l)-8-((Z)-W-h¡drox¡-A/-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-6-oxo-4,8-d¡h¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-5(6H)-¡lo (11 mg, 100 %) como un sól¡do blanco. MS: 504 ES+ (C18H29N7O8S).

Ejemplo 68

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-1-(4-((terc-butox¡carbon¡l)am¡no)but¡l)-8-((Z)-W-h¡drox¡-W-metilcarbamimidoil)-6-oxo-4,8-dihidro-1 H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-5(6H)-¡lo (Int-145, 10 mg, 0,0199 mmol) en DCM (1 ml)a 0 °C se añad¡ó ác¡do tr¡fluoroacét¡co (0,076 ml, 0,99 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos. La mezcla de reacc¡ón se concentró con DCM var¡as veces para el¡m¡nar el exceso de TFA. El res¡duo se d¡solv¡ó en tampón de pH ~7 y se pur¡f¡có med¡ante cromatografía de fase ¡nversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50%) para produc¡r h¡drógenosulfato de (4R,8S)-1-(4-am¡nobut¡l)-8-((Z)-A/-h¡drox¡-W-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-6-oxo-4,8-d¡h¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-5(6H)-¡lo (3,5 mg, 37,1 %) como un sólido blanco. MS: 404 ES+ (C13H21N7O6S) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 1,42-1,75 (m, 2H); 1,79-2,04 (m, 2H); 2,94 (m, 2H); 3,10 (s, 3H); 3,51-3,72 (m, 2H); 3,88-4,14 (m, 2H); 4,99 (m, 1H); 5,62 (s, 1H); 7,69 (s, 1H).

Int-146

A una soluc¡ón ag¡tada de (4R,8S,Z)-5-(benc¡lox¡)-W-h¡drox¡-W-1-d¡met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-carbox¡m¡dam¡da (Int-12, 110 mg, 0,31 mmol) en DCM (10 ml), se añad¡ó TEA (0,064 ml, 0,46 mmol) y cloruro de acet¡lo (0,029 ml, 0,37 mmol). La reacc¡ón se agitó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos. Se añad¡ó una soluc¡ón saturada de cloruro de amon¡o para ¡nact¡var la reacc¡ón. La capa orgán¡ca se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro y se concentró para dar el producto bruto. Se pur¡f¡có por cromatografía ultrarrápida (0-100 % de acetona en DCM) para produc¡r (4R,8S,Z)-W-acetox¡-5-(benc¡lox¡)-W,1-d¡met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-carbox¡m¡dam¡da (70 mg, rend¡m¡ento del 56,9 %) como un sól¡do blanco. MS: 399 ES+ (C19H22N6O4).

Int-147

Una soluc¡ón de (4R,8S,Z)-W-acetox¡-5-(benc¡lox¡)-A/, 1-d¡met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-carbox¡m¡dam¡da (Int-146, 70 mg, 0,175 mmol) en metanol (5 ml) se purgó con n¡trógeno 3 veces y se añad¡ó Pd/C al 10 % (12,9 mg, 0,012 mmol). La mezcla de reacc¡ón se purgó con n¡trógeno 3 veces y luego se ag¡tó en atmósfera de h¡drógeno a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos. La mezcla de reacc¡ón se f¡ltró a través de Cel¡te. El f¡ltrado se concentró para dar (4R,8S,Z)-W ,-acetox¡-5-h¡drox¡-A/,1-d¡met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-carbox¡m¡dam¡da (50 mg, 92,3%) como un sól¡do blanco. MS: 309 ES+ (C12H16N6O4).

E je m p lo 69

A una solución de (4R,8S,Z)-W-acetox¡-5-h¡drox¡-A/,1-d¡met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carboximidamida (Int-147, 50 mg, 0,16 mmol) en p¡r¡d¡na (1 ml)se añad¡ó complejo de tr¡óx¡do de azufre y p¡r¡d¡na (77,4 mg, 0,49 mmol). La mezcla de reacdón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 6 horas, y después se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al se tr¡turó con DCM y los sól¡dos se el¡m¡naron por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se concentró para dar el producto en bruto. Se pur¡f¡có por cromatografía de fase ¡nversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para produc¡r p¡r¡d¡o (4R,8S)-8-((Z)-W-acetox¡-W-met¡lcarbam¡m¡do¡l)-1-met¡l-6-oxo -4,8-d¡h¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-5(6H)-h¡drógenosulfato (35 mg, 55,6%) como un sól¡do blanco. MS: 387 ES-(C12H16N6O7S) RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8: 2,03 (s, 3H); 3,00 (m, 2H); 3,36 (m, 2H); 3,65 (s, 3H); 4,71 (m, 1H); 5,62 (s, 1H); 6,84 (a, 2H); 7,31 (s, 1H); 7,90 (m, 2H); 8,39 (m, 1H); 8,86 (m, 2H) Relac¡ón compuesto/p¡r¡d¡na (1:1).

Ejemplo 70

El h¡drógenosulfato p¡r¡d¡o de (4R,8S)-8-((Z)-N'-acetox¡carbam¡m¡do¡l)-1-met¡l-6-oxo-4,8-d¡h¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-5(6H)-¡lo se s¡ntet¡zó s¡gu¡endo reacc¡ones s¡m¡lares a las que se muestran en el Ejemplo 69, ut¡l¡zando una soluc¡ón de amoníaco en THF en la etapa 12 del Esquema 1, Step12. MS 373 ES-(C11H14N6O7S) RMN de 1H 300 MHz, DMSO-d6) 8: 2,03 (s, 3H); 3,34 (m, 2H); 3,68 (s, 3H); 4,67 (m, 1H); 5,22 (s, 1H); 6,84 (s a, 2H); 7,31 (s, 1H); 7,90 (m, 3H); 8,39 (m, 1.5H); 8,86 (m, 3H) Relac¡ón compuesto/p¡r¡d¡na (1:1,5).

Esquema 32

Ejemplo 71

Int-148

A una solución agitada de (4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3] diazepin-8-carbaldehído (Int-9, 200 mg, 0,64 mmol) en THF (10 ml)a 0 °C se añadió MeMgBr (0,38 ml, 1,15 mmol, 3N en Et2O). La reacción se agitó a 0 °C durante 4 horas. Se añadió una solución saturada de cloruro de amonio para inactivar la reacción. Se añadió acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para producir (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((R)-1-hidroxietil)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (100 mg, 47,6%) como un sólido blanco. Se usó directamente en la siguiente etapa MS: 329 ES+ (C17H20N4O3).

Int-149

A una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((R)-1-hidroxietil)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (Int-148, 100 mg, 0,30 mmol) en diclorometano (10 ml) a temperatura ambiente se añadió peryodinano de Dess-Martin (155 mg, 0.37 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. Se añadieron a la mezcla de reacción solución acuosa de tiosulfato de sodio (IN) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se agitó durante 15 minutos. La mezcla bifásica se separó y la acuosa se extrajo con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato magnésico anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar el producto en bruto. La cromatografía ultrarrápida (0 %-100 % acetato de etilo/hexanos) proporcionó (4R,8S)-8-acetil-5- (benciloxi)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (40 mg, 40,2%) como un sólido blanco. MS: 327 ES+ (C17H18N4O3)

Int-150

A una solución de (4R,8S)-8-acetil-5-(benciloxi)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6- ona (Int-149, 40 mg, 0,12 mmol) en piridina (2 ml)a temperatura ambiente se añadió clorhidrato de hidroxilamina (10,2 mg, 0,15 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. Se añadieron solución de cloruro de amonio acuoso y acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para producir (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-((R)-1-hidroxietil)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (30 mg, 71,7 %) como un sólido blanco. Se usó directamente en la siguiente etapa. MS: 342 ES+ (C17H19N5O3).

Int-151

A una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(E)-1-(hidroxiimino)etil)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (Int-150, 30 mg, 0,088 mmol) en DCM (5 ml)a 0 °C se añadió trifluorometanosulfonato de terc-butildimetilsililo (0,022 ml, 0,097 mmol) y 2,6-lutidina (0,012 ml, 0,11 mmol). La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Se añadieron DCM y solución saturada de cloruro de amonio. La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (0-100% de EtOAc/Hexanos) para producir (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(E)-1-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (25 mg, 62,4 %) como un sólido blanco. MS: 456 ES+ (C23H33N5O3S¡).

Int-152

Una solución de (4R,8S)-5-(benciloxi)-8-(E)-1-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil)-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro -6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (lnt-151, 25 mg, 0,055 mmol) en MeOH (10ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (5,84 mg, 0,0055 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar (4R,8S)-8-((E)-1-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil)-5-hidroxi-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (17 mg, 84,7 %) como un sólido blanco. MS: 366 ES+ (C16H27N5O3SO.

Int-153

A una solución de (4R,8S)-8-((E)-1-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil)-5-hidroxi-1-metil-1,4,5,8-tetrahidro-6H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-6-ona (Int-152, 17 mg, 0,047 mmol) en piridina (2 ml)a temperatura ambiente se añadió complejo de trióxido de azufre y piridina (1338 mg, 8,41 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. El material se trituró con DCM y se eliminaron más sólidos por filtración. El filtrado se concentró. El residuo se purificó con cromatografía ultrarrápida (0 %-100 % acetona/DCM) para producir hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-1-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (18 mg, 86,9 %) como n sólido blanco. MS: 446 ES+ (C16H27N5O6SSi).

Int-154 y Ejemplo 71

A una solución de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-1-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)imino)etil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo (lnt-153, 18 mg, 0,040 mmol) en THF (2 ml) a temperatura ambiente se añadió TBAF (0,014 ml, 0,049 mmol, IN en THF). Se agitó la mezcla de reacción durante 2 horas, y después se concentró. El residuo se purificó por cromatografía de fase inversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para producir la sal de tetrabutilamonio de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-1-(hidroxiimino)etil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo Int-154 como un sólido blanco. Luego se disolvió en agua (2 ml)y se eluyó a través de un cartucho de resina de intercambio iónico en forma de Na+ Dowex® 50WX8 con agua como eluyente. Las fracciones que contenían el producto se agruparon y liofilizaron para dar una sal sódica de hidrógenosulfato de (4R,8S)-8-((E)-1-(hidroxiimino)etil)-1-metil-6-oxo-4,8-dihidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-5(6H)-ilo hidrogenosulfato (10 mg, 67,2%) como un sólido blanco. MS: MS 332 ES-(C1üH13N506S) RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8: 3,04 (m, 1H); 3,25 (m, 1H); 3,30 (s, 3H); 3,54 (s, 3H); 4,62 (m, 1H); 5,23 (s, 1H); 7,30 (s, 1H); 11,16 (s, 1H).

A una solución de cloruro de ((4R,8S,Z)-5-(bencilox¡)-W-h¡drox¡-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-carbimidoilo (Int-11, 80 mg, 0,221 mmol) en DCM (10ml)a temperatura ambiente N-(metilamino)carbamato de ferc-butilo (48,5 mg, 0,332 mmol) y base de Hunig (85,7 mg, 0,66 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadieron solución saturada de cloruro de amonio y DCM. La capa orgánica se separó, se lavó con agua, salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró para producir 2-((Z)-((4R,8S)-5-(bencilox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)(h¡drox¡¡m¡no)met¡l)-2-met¡lh¡draz¡na-1-carbox¡lato de ferc-butilo (60 mg, 57,5%) como un sólido blanco. Se usó directamente en la siguiente etapa. MS: 357 ES+ (C22H29N7O5).

Int-156

A una solución de 2-((Z)-((4R,8S)-5-(bencilox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)(h¡drox¡¡m¡no)met¡l)-2-met¡lh¡draz¡na-1-carbox¡lato de ferc-butilo (Int-155, 60 mg, 0,127 mmol) en DCM (8 ml)a 0 °C se añadió trifluorometanosulfonato de ferc-butildimetilsililo (0,064 ml, 0,28 mmol) y 2,6-lutidina (0,037 ml, 0,32 mmol). La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadieron DCM y solución saturada de cloruro de amonio. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera y se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró. La cromatografía en gel de sílice (0 %-100% acetato de etilo/hexanos) proporcionó (Z)-4-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)-3,7,7,8,8-pentamet¡l-6-oxa-2,3,5-tr¡aza-7-s¡lanon-4-enoato de ferc-butilo (30 mg, rendimiento del 40,2 %) como un sólido blanco. MS: 586 ES+ (C2sH43N7O5S¡).

Int-157 e Int-158

Una solución de (Z)-4-((4R,8S)-5-(bencilox¡)-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazep¡n-8-¡l)-3,7,7,8,8-pentametil-6-oxa-2,3,5-tr¡aza-7-s¡lanon-4-enoato de ferc-butilo (In t-l56 , 28 mg, 0,0478 mmol) en MeOH (2 ml)y acetato de etilo (4 ml)se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (10,1 mg, 0,0096 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar la mezcla de (Z)-4-((4R,8S)-5-hidrox¡-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazep¡n-8-¡l)-3,7,7,8,8-pentametil-6-oxa-2,3,5-tr¡aza-7-s¡lano -4-enoato de ferc-butilo (Int-157) MS: 496 ES+ (C21H37N7O5SO y 2-((Z)-((4R,8S)-5-h¡droxi-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)(h¡droxi¡m¡no)met¡l)-2-met¡lh¡draz¡na-1-carbox¡lato de ferc-butilo (Int-158) como un sólido blanco (18 mg). MS: 382 ES+ (C15H23N7O5).

Int-159

A una mezcla de (Z)-4-((4R,8S)-5-h¡droxi-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)-3,7,7,8,8-pentametil-6-oxa-2,3,5-triaza-7-s¡lanon-4-enoato de ferc-butilo (Int-157) y 2-((Z)-((4R,8S)-5-hidrox¡-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7- metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)(h¡drox¡¡mino)met¡l)-2-met¡lh¡draz¡na-1-carboxilato de ferc-butilo (Int-158) (18 mg) en piridina (2 ml) a temperatura ambiente se añadió complejo de trióxido de azufre y piridina (17,3 mg, 0,11 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, después se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto. Se trituró con DCM y el sólido se eliminó por filtración. El filtrado se concentró. El residuo se purificó con cromatografía de fase inversa (Sepabeads, ACN/agua 0-50 %) para producir ácido ((((Z)-(2-(ferc-butoxicarbon¡l)-1-met¡lh¡draz¡ne¡l)((4R,8S)-1-met¡l-6-oxo-5-(sulfoox¡)-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7 metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)metilen)amino)oxi)sulfónico (18 mg, 86,9%) como un sólido blanco. MS: 539 ES-(C15H23NyO11S2)

Ejemplo 72

A una solución de ácido ((((Z)-(2-(ferc-butoxicarbonil)-1-metilhidrazineil)((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)metilen)amino)oxi)sulfónico (Int-159, 2 mg, 0,037 mmol) en DCM (2 ml) a temperatura ambiente se le añadió ácido trifluoroacético (0,0283 ml, 0,369 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se concentró con DCM varias veces para eliminar el exceso de TFA. El residuo se disolvió en ACN/agua y se secó en un liofilizador para producir la sal TFA de ácido ((((Z)-((4R,8S)-1-metil-6-oxo-5-(sulfooxi)-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(1-metilhidrazineil)metilen)amino)oxi)sulfónico (2,2 mg, 100 %) como un sólido blanco. MS: 442 ES+(Ci0Hi5N7OgS2) r Mn de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,23-4,95 (m, 8H); 5,02 (m, 1H); 5,99 (m, 1H); 7,67 (s, 1H); 8,09 (m, 1.36H); 8,66 (m, 0.68H); 8,80 (m, 1.36H) Relación compuesto/piridina (1:0,68).

Int-160

A una solución de ácido 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7 -metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acético (Int-125, 60 mg, 0,14 mmol) en DMF (3 ml) a 0 °C se añadió hAt U (110 mg, 0,29 mmol), O-(íerc-butildimetilsilil)hidroxiamina (31,9 mg, 0,22 mmol) y base de Hunig (0,050 ml, 0,299 mmol). La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadieron acetato de etilo y una solución saturada de cloruro de amonio. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar el producto bruto. Se purificó por cromatografía ultrarrápida (0-100% acetona/DCM) para producir 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)-W-hidroxiacetamida (30 mg, rendimiento del 48,3 %) como un sólido blanco. MS: 430 ES+ (C19H27N3O5).

Int-161

A la solución de 2-((((Z)-((4R,8S)-5-(benciloxi)-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)-W-hidroxiacetamida (Int-160, 25 mg, 0,058 mmol) en MeOH (3 ml) se purgó con nitrógeno 3 veces y se añadió Pd/C al 10 % (6,19 mg, 0,0058 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno 3 veces y luego se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para producir W-hidroxi-2-((((Z)-((4R,8S)-5-hidroxi-1-metil-6-oxo-4,5,6,8-tetrahidro-1H-4,7-metanopirazolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetamida (16 mg, 80,9 %) como un sólido blanco. MS: 338 ES-(C12H17NyO5).

A una solución de W-h¡drox¡-2-((((Z)-((4R,8S)-5-h¡drox¡-1-met¡l-6-oxo-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]diazepin-8-il)(metilamino)metilen)amino)oxi)acetamida (Int-161, 16 mg, 0,047 mmol) en p¡r¡d¡na (2 ml)a temperatura amb¡ente se añad¡ó complejo de tr¡óx¡do de azufre y p¡r¡d¡na (22,5 mg, 0,14 mmol). La mezcla de reacdón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 6 horas, después se concentraron a pres¡ón reduc¡da para dar el producto en bruto. El mater¡al se tr¡turó con DCM y los sól¡dos se el¡m¡naron por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se concentró para dar el producto en bruto. Se pur¡f¡có por cromatografía de fase ¡nversa (Sepabeads, ACN/agua de 0-50 %) dos veces para produc¡r ác¡do de p¡r¡d¡o ((2-((((Z)-((4R,8S)-1-met¡l-6-oxo-5- (sulfoox¡)-4,5,6,8-tetrah¡dro-1H-4,7-metanop¡razolo[3,4-e][1,3]d¡azep¡n-8-¡l)(met¡lam¡no)met¡len)am¡no)ox¡)acetam¡do)ox¡)sulfón¡co (6 mg, 21,6 %) como un sól¡do blanco. MS: 498 ES-(C12H17NyOnS2) RMN de 1H (300 MHz, D2O) 8: 3,13 (s, 3H); 3,58 (m, 2H); 3,64 (s, 3H); 4,50 (m, 2H); 4,98 (m, 1H); 5,72 (s, 1H); 7,67 (s, 1H); 8,11 (m, 2H); 8,67 (m, 1H); 8,82 (m, 2H) Relac¡ón compuesto/p¡r¡d¡na (1:1).

Los s¡gu¡entes compuestos ad¡c¡onales se pueden preparar de acuerdo con proced¡m¡entos s¡m¡lares a los descr¡tos en el presente documento o proced¡m¡entos que se encuentran en la l¡teratura.

Medición de constantes de velocidad de acilación para PBP1a, PBP2 y PBP3 de P. aeruginosa

Las constantes de veloc¡dad de ac¡lac¡ón de segundo orden con PBP1a, PBP2 y PBP3 de P. aeruginosa se m¡d¡eron ut¡l¡zando el método de ensayo de an¡sotropía de fluorescenc¡a de pen¡c¡l¡na BOCILLIN FL (Anal. B¡ochem. 463, 15­ 22 (2014)). La concentrac¡ón de BOCILLIN FL (Thermo-F¡sher Sc¡ent¡f¡c, Waltham, MA) fue de 30 nM en cada caso. Las concentrac¡ones de PBP fueron 60 nM para PBP1a y PBP3 de P. aeruginosa y 300 nM para PBP2 de P. aeruginosa. El tampón de ensayo fue fosfato de sod¡o 0,1 M con Tr¡ton X-100 al 0,01 %. El pH fue de 7,0 para todas las PBP con excepc¡ón de PBP2 de P. aeruginosa, cuyo pH fue de 6,2. Se usaron d¡luc¡ones senadas por dos de los compuestos, con concentrac¡ones que osc¡lan entre 328 y 0,02 pM para las PBP de P. aeruginosa. Los resultados se muestran a cont¡nuac¡ón en la Tabla 5.

Tabla 5

continuación

CMI frente a aislados clínicos gramnegativos

Los valores de concentración mínima inhibitoria (CMI) contra P. aeruginosa y sus compuestos se determinaron usando la metodología de microdilución en caldo (CLSI M07-A10) de las pautas del Clinical and Laboratory Standards Institute Ċ

(CLSI). Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 6.

continuación

Los valores de concentración mínima inhibitoria (CMI) contra E. coli, K. pneumoniae y A. baumannii se muestran a continuación en la Tabla 7.

Tabla 7

continuación

CMI contra B. pseudom allei, B. m allei, F. tularensis, Y. pestis y B. anthracis

Se demostró que el Ejemplo 40 exhibía actividad inhibidora (CMI <4 mg/l) contra B. pseudomallei, B. mallei, F. fularensis, Y. pestis y B. anthracis.

Perfilado in vivo para inhibidores de PBP de P. aeruginosa

La eficacia in vivo del Comparador 1 (un compuesto dirigido a PBP2) y el ejemplo 40 de la presente divulgación se evaluó frente a un aislado clínico de P. aeruginosa (ARC6347, AmpC+, PoxB+) en un modelo de muslo murino neutropénico. Véanse las Fig. 1 y 2. La única diferencia estructural entre el ejemplo 40 y el Comparador 1 es la sustitución de un grupo aminometilo por un grupo N-metil-amidoxima. Sin embargo, el compuesto dirigido a PBP2 (Comparador 1) no fue activo (no logró la estasis en este estudio incluso con exposiciones del 100 % del tiempo por encima de la CMI) mientras que el compuesto inhibidor de PBP3 (ejemplo 40) mostró una eficacia sólida (más de 2 Log(UFC/g) de reducción con una exposición del 57 % Tiempo por encima de la CMI).

Se permitió que ratones hembra CD-1 de Charles River Laboratories se aclimataran durante 5 días antes del comienzo del estudio. Los animales se alojaron 5 por jaula con libre acceso a comida y agua. Para inducir un estado transitorio de neutropenia, los ratones recibieron dos dosis de ciclofosfamida los días -4 y -1 con 150mg/kg y 100 mg/kg administrados por vía intraperitoneal, respectivamente. Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo con la política corporativa de bienestar animal con los procedimientos y pautas de IACUC, así como con los estándares de OLAW. La cepa ARC 6347 de P. aeruginosa (AmpC+, PoxB+) se preparó para la infección a partir de un cultivo en placa durante la noche. Una parte de la placa se resuspendió en solución salina estéril y se ajustó a una DO de 0,1 a 625 nm. La suspensión bacteriana ajustada se diluyó aún más para apuntar a un inóculo infectante de aproximadamente 5,0 * 105 UFC/ratón. Se realizaron recuentos en placa del inóculo para confirmar la concentración del inóculo. Los ratones se infectaron con 100 ul del inóculo bacteriano preparado en los músculos del muslo derecho e izquierdo. A partir de las dos horas posteriores a la infección, los ratones recibieron dosis de cualquiera de los artículos de ensayo, antibiótico de control positivo (levofloxacino) o vehículo. A los ratones que recibieron el ejemplo 40 o el Comparador 1 o el vehículo se les administró una dosis subcutánea de 10 ml/kg durante 8 dosis separadas por 3 horas. Los animales que recibieron levofloxacino recibieron una dosis oral única de 160 mg/kg dos horas después de la infección.

Se administraron las dosis a tres animales por grupo/concentración. Se sacrificó a un grupo de tres ratones al inicio de la terapia (T-Rx) y se determinaron las UFC. Todos los ratones restantes fueron sacrificados las 26 horas después de la infección. Ambos muslos fueron retirados asépticamente, se pesaron, se homogeneizaron a una consistencia uniforme, se diluyeron en serie y se sembraron en medios de crecimiento bacteriano. Las UFC se enumeraron después de la incubación durante la noche.

A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos que se utilizan en el presente documento tienen el mismo significado que el normalmente entendido por alguien con una habilidad habitual en la técnica.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de la fórmula:

   

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

   X es H, CN, C(O)NR1R2, NR1R2 o alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente con NHC(O)R9 o S(O)NH2;

   Y es NOR3; o R3 y X tomados junto con los átomos a los que están unidos, forman un heterociclilo de 4 a 6 miembros o un heteroarilo de 5 a 6 miembros, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre alquilo (Ci-Ca), C=O, C(O)OH y C(O)Oalquilo (Ci-Ca), en donde dicho alquilo (Ci­ Ca) está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre OH, alcoxi (Ci-Ca), fenilo y heteroarilo de 5 a a miembros, en donde dicho heteroarilo de 5 o a miembros está opcionalmente sustituido con NH2, -NH(alquilo Ci-Ca) y -N(alquilo (Ci-Ca))2;

   R1 y R2 son cada uno independientemente hidrógeno, ciano, C(O)NH2, NH2, OH, alcoxi (Ci-Ca) o alquilo (Ci-Ca) sustituido opcionalmente con uno o más R7;

   R3 es hidrógeno, -C(O)alquilo (Ci-Ca), C(O)NRdRe, SO2NH2, SO2OH o alquilo (Ci-Ca) opcionalmente sustituido con uno o más R7;

   R4, R5 y Ra son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo (Ci-Ca) o C(O)NRaRb,

   en donde dicho alquilo (Ci-Ca) para R4, R5 y Ra está opcionalmente sustituido con uno o más R7, con la condición de que al menos uno de R4 y R5 no sea hidrógeno y con la condición de que R4 y R5 no estén presentes cuando el átomo de nitrógeno correspondiente al que están unidos R4 y R5 está conectado a un átomo de anillo adyacente a través de un doble enlace;

   cada R7 se selecciona independientemente entre halo, OH, ORc, alcoxi (Ci-Ca), CN, heterociclilo de 4 a a miembros, heteroarilo de 5 a a miembros, fenilo, C(=NH)NH2, NHC(=NH)NH2, NRdRe, C(O)OH, C=NOalquilo (Ci-C6)NH2, NHC(O)alquilo (Ci-Ca), C(O)NRdRe, SO2Rf y S(O)Rf, en donde dicho heteroarilo de 5 a a miembros está opcionalmente sustituido con NH2 y dicho fenilo está opcionalmente sustituido con NH2;

   Ra, Rb, Rd y Re son cada uno independientemente hidrógeno, OH, alquilo (Ci-Ca), alcoxi (Ci-Ca), fenilo, OSO2OH, cicloalquilo de 4 a a miembros, heterociclilo de 4 a a miembros o heteroarilo de 5 a a miembros, en donde cada uno de dichos alquilo (Ci-Ca) y alcoxi (Ci-Ca) para Ra, Rb, Rd y Re están opcional e independientemente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre OH, NH2, C(O)o H, C(O)Oalquilo (Ci-Ca), NHC(O)NH2, NHC(O)NHalquilo (Ci-Ca), C(O)NH2, NHC(O)N(alquilo (Ci-Ca)2, NHC(O)alquilo (Ci-Ca), NHC(O)halo alquilo(Ci-Ca), heterociclilo de 4 a a miembros, heteroarilo de 5 a a miembros, NHalquilo (Ci-Ca) y N(alquilo (Ci-Ca))2, en donde cada uno de dichos fenilo, heterociclilo de 4 a a miembros, cicloalquilo de 4 a a miembros y heteroarilo de 5 a a miembros para Ra, Rb, Rd y Re, y dicho grupo heteroarilo opcional de 5 a a miembros para alquilo (Ci-Ca) y alcoxi (Ci-Ca) para Ra, Rb, Rd y Re están opcional e independientemente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre alquilo (Ci-Ca), NH2, NHalquilo (Ci-Ca) y -N(alquilo (Ci-Ca))2;

   Rc es fenilo opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre C(=NH)NH2, C(=NH)NH(heterociclilo de 5 a a miembros), C(=NH)NHalquilo (Ci-Ca), NHC(=NH)NH2, -NRdRe, C(O)NRdRe, SO2Rf y SORf en donde dicho alquilo (Ci-Ca) en el grupo C(=NH)NHalquilo (Ci-Ca) está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados entre NH2, -NH(alquilo Ci-Ca) y -N(alquilo (Ci-Ca))2;

   Rf es hidrógeno o alquilo (Ci-Ca); y

   Rg es heterociclilo de 4 a a miembros opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre C=O y alquilo (Ci-Ca).

   2. El compuesto de la reivindicación i, en donde el compuesto es de la fórmula:

   

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

   X es H, CN, C(O)NR1R2, NR1R2 o alquilo (Ci-Ca);

   R1 y R2 son cada uno independientemente hidrógeno, ciano o alquilo (Ci-Ca) opcionalmente sustituido con uno o más R7;

   R3 es hidrógeno o alquilo (Ci-Ca) opcionalmente sustituido con uno o más R7;

   R4, R5 y Ra son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo (Ci-Ca) o C(O)NRaRb,en donde dicho alquilo (Ci­ Ca) para R4, R5 y Ra está opcionalmente sustituido con uno o más R7,

   con la condición de que al menos uno de R4 y R5 no sea hidrógeno y con la condición de que R4 y R5 no estén presentes cuando el átomo de nitrógeno correspondiente al que están unidos R4 y R5 está conectado a un átomo de anillo adyacente a través de un doble enlace;

   cada R7 se selecciona independientemente entre halo, OH, ORc, alcoxi (Ci-Ca), CN, heterociclilo de 4 a a miembros, heteroarilo de 5 a a miembros, fenilo, C(=NH)NH2, NHC(=NH)NH2, NRdRe, C(O)NRdRe, SO2Rf y S(O)Rf; Ra, Rb, Rd y Re son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo (Ci-Ca), alcoxi (Ci-Ca), fenilo, heterociclilo de 4 a a miembros o heteroarilo de 5 a a miembros, en donde cada uno de dichos alquilo (Ci-Ca) y alcoxi (Ci-Ca) para Ra, Rb, Rd y Re están opcional e independientemente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre NH2, NH alquilo (Ci-Ca) y N(alquilo (Ci-Ca))2, y en donde cada uno de dichos fenilo, heterociclilo 4 a a miembros y heteroarilo de 5 a a miembros para Ra, Rb, Rd y Re están opcional e independientemente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre alquilo (Ci-Ca), NH2, NH(alquilo Ci-Ca) y N(alquilo (Ci-Ca))2;

   Rc es fenilo opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre C(=NH)NH2, C(=NH)NHalquilo (Ci-Ca), NHC(=NH)NH2, NRdRe, C(O)NRdRe, SO2Rf y SORf en donde dicho alquilo (Ci-Ca) en el grupo C(=NH)NHalquilo (Ci-Ca) está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados entre NH2, -NH(alquilo Ci-Ca) y N(alquilo (Ci-Ca))2; y

   Rf es hidrógeno o alquilo (Ci-Ca).

   3. El compuesto de las reivindicaciones i o 2, en donde el compuesto es de la fórmula:

   

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

   4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones i a 3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R3 es hidrógeno o alquilo (Ci-Ca) opcionalmente sustituido con amino.

   5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones i a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 es hidrógeno y R2 es alquilo (Ci-Ca).

   a. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el compuesto es de las fórmulas:

   

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

   7. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R6 es hidrógeno, C(O)NRaRb o alquilo (C-i-Ca) sustituido opcionalmente con ORc.

   8. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que Ra es hidrógeno;

   Rb es heteroarilo de 5 a 6 miembros opcionalmente sustituido con uno o más alquilo (Ci-Ca) o alquilo (Ci-Ca) opcionalmente sustituido con ORc; y Rc es fenilo opcionalmente sustituido con C(=NH)NHalquilo (Ci-Ca)NH2.

   9. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el compuesto es de la fórmula:

   

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

   10. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R4 es C(O)NRaRb o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con NH2; Ra es hidrógeno; y Rb es alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con NH2.

   11. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, 9 y 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R4 es alquilo (C1-C6).

   12. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y 9 a 11, en donde el compuesto es de la fórmula:

   

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

   13. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona de las Fórmulas:

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de cualquiera de los anteriores.

   14. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es de la fórmula:

   

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

   15. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

   16. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición de la reivindicación 15, para su uso en el tratamiento de una infección bacteriana.