ES2909086T3 - Inhibidores bicíclicos de histona desacetilasa - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la fórmula: **(Ver fórmula)** ;o**(Ver fórmula)** o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibidores bicíclicos de histona desacetilasa

SOLICITUDES RELACIONADAS

La presente solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional estadounidense N.° 62/445.022, presentada el 11 de enero de 2017 y la solicitud provisional estadounidense N.° 62/555.298, presentada el 7 de septiembre de 2017.

DECLARACIÓN CON RESPECTO A INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO CON SUBVENCIÓN DEL ESTADO

La presente invención se realizó con el apoyo del gobierno bajo la subvención del Programa de Investigación de Innovación para la Pequeñas Empresa (s B iR) 1R43AG048651-01A1, otorgada por el Instituto Nacional de la Salud (NIH). El gobierno tiene determinados derechos sobre la invención.

ANTECEDENTES

Se demostró que los inhibidores de histona desacetilasas (HDAC) modulan la transcripción e inducen la detención del crecimiento, diferenciación y apoptosis de las células. Los inhibidores de HDAC también mejoran los efectos citotóxicos de los agentes terapéuticos usados en el tratamiento del cáncer, lo que incluye radiación y fármacos quimioterapéuticas. Marks, P., Rifkind, R. A., Richon, V. M., Breslow, R., Miller, T., Kelly, W. K. Histone deacetylases and cancer: causes and therapies. Nat Rev Cancer, 1, 194-202, (2001); y Marks, P. A., Richon, V. M., Miller, T., Kelly, W. K. Histone deacetylase inhibitors. Adv Cancer Res, 91, 137-168, (2004). Asimismo, pruebas recientes indican que la desregulación transcripcional puede contribuir a la patogénesis molecular de determinados trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Huntington, atrofia muscular espinal, esclerosis lateral amiotrópica e isquemia. Langley, B., Gensert, J. M., Beal, M. F., Ratan, R. R. Remodeling chromatin and stress resistance in the central nervous system: histone deacetylase inhibitors as novel and broadly effective neuroprotective agents. Curr Drug Targets CNS Neurol Disord, 4, 41-50, (2005). Una reseña reciente resumió las pruebas de que la actividad anómala de histona acetiltransferasa (HAT) e histona desacetilasas (HDAC) puede representar un mecanismo subyacente común que contribuye a la neurodegeneración. Asimismo, usando un modelo de ratón de depresión, Nestler recientemente resaltó el potencial terapéutico de los inhibidores de desacetilación de histonas (HDAC5) en depresión. Tsankova, N. M., Berton, O., Renthal, W., Kumar, A., Neve, R. L., Nestler, E. J. Sustained hippocampal chromatin regulation in a mouse model of depression and antidepressant action. Nat Neurosci, 9, 519-525, (2006).

Existen 18 histona desacetilasas humanas, agrupadas en 4 clases según la estructura de sus dominios accesorios. La clase I incluye HDAC1, HDAC2, HDAC3 y HDAC8 y es homóloga a la levadura Rpd3. HDAC4, HDAC5, HDAC7 y HDAC9 pertenecen a la clase IIa y son homólogas a la levadura Hda1. HDAC6 y HDAC10 contienen dos sitios catalíticos y se clasifican como clase IIb. La clase III (las sirtuinas) incluye SIRT1, SIRT2 , SIRT3, SIRT4, SIRT5, SIRT6 y SIRT7. La HDAC11 es otro miembro recientemente identificado de la familia de las HDAC y conserva residuos en su centro catalítico que son compartidos por las desacetilasas de clase I y clase II y a veces se ubica en la clase IV.

Se demostró que las HDAC son reguladores negativos potentes de los procesos de memoria a largo plazo. Los inhibidores de HDAC no específicos mejoran la plasticidad sináptica así como también la memoria a largo plazo (Levenson et al., 2004, J. Biol. Chem. 279:40545-40559; Lattal et al., 2007, Behav Neurosci 121:1125-1131; Vecsey et al., 2007, J. Neurosci 27:6128; Bredy, 2008, Learn Mem 15:460-467; Guan et al., 2009, Nature 459:55-60; Malvaez et al., 2010, Biol. Psychiatry 67:36-43; Roozendaal et al., 2010, J. Neurosci. 30:5037-5046. Por ejemplo, la inhibición de HDAC puede transformar un evento de aprendizaje que genera memoria a largo plazo en un evento de aprendizaje que sí genera memoria a largo plazo de manera significativa (Stefanko et al., 2009, Proc. Natl. Acad. Sci. EE.u U.

106:9447-9452. Asimismo, la inhibición de HDAC también puede generar una forma de memoria a largo plazo que persiste más allá del punto en el que la memoria normal falla. Se demostró que los inhibidores de HDAC mejoran las deficiencias cognitivas en modelos genéticos de la enfermedad de Alzheimer (Fischer et al., 2007, Nature 447:178-182; Kilgore et al., 2010, Neuropsychopharmacology 35:870-880). Estas demostraciones sugieren que modular la memoria mediante la inhibición de HDAC tiene un potencial terapéutico considerable para muchos trastornos cognitivos y de la memoria.

El rol de las HDAC individuales en la memoria a largo plazo se exploró en dos estudios recientes. Kilgore et al. 2010, Neuropsychopharmacology 35:870-880 describió que los inhibidores de HDAC no específicos, tales como butirato de sodio, inhiben las HDAC de clase I (HDAC1, HdAc 2, HDAC3, HDAC8) con poco efecto sobre los miembros de la familia de las HDAC de clase IIa (HDAC4, HDAC5, HDAC7, HDAC9). Esto sugiere que la inhibición de las HDAC de clase I puede ser fundamental para la mejora de la cognición observada en muchos estudios. De hecho, la sobreexpresión de HDAC2, pero no de HDAC1, específica de prosencéfalo y neuronas disminuyó la densidad de la espina dendrítica, la densidad sináptica, la plasticidad sináptica y la formación de la memoria. (Guan et al., 2009, Nature, 459:55-60). En contraste, los ratones knockout de HDAC2 exhibieron mayor densidad sináptica, mayor plasticidad sináptica y mayor densidad dendrítica en las neuronas. Estos ratones con deficiencia de HDAC2 también exhibieron aprendizaje y memoria mejorados en una serie de paradigmas conductuales de aprendizaje. Este trabajo demuestra que la HDAC2 es un regulador clave de la sinaptogénesis y la plasticidad sináptica. Adicionalmente, Guan et al. demostraron que el tratamiento crónico de ratones con SAHA (un inhibidor de HDAC 1,2,3,6, 8) reprodujo los efectos observados en los ratones con deficiencia de HDAC2 y rescató el deterioro cognitivo en los ratones con sobreexpresión de HDAC2.

La inhibición de HDAC2 (de manera selectiva o en combinación con inhibición de otras HDAC de clase I; como la diana primaria o como parte de un complejo con otras proteínas) es una diana terapéutica atractiva. La inhibición selectiva se podría lograr mediante la acción sobre isoformas de HDAC específicas tales como HDAC2, de manera aislada, o como parte de un complejo multi-proteínas funcional. Tal inhibición tiene potencial para mejorar la cognición y facilitar el proceso de aprendizaje mediante el aumento de la densidad sináptica y dendrítica en las poblaciones de células neuronales. Además, la inhibición de HDAC específicas, tal como HDAC2, también puede ser terapéuticamente útil en el tratamiento de una amplia variedad de otras enfermedades y trastornos.

El documento WO 2012/149540 describe los inhibidores de HDAC que se dice que son útiles para promover la función cognitiva y mejorar la formación de aprendizaje y memoria.

Wagner, F. F. et al, Chem. Sci., 2015, 804-815 describe ciertos inhibidores de HDAC2.

RESUMEN

Las realizaciones de la invención son como se definen en las reivindicaciones. Se describen compuestos y sales de estos aceptables desde el punto de vista farmacéutico, y composiciones farmacéuticas, que son útiles en el tratamiento de afecciones asociadas con la actividad de HDAC (por ejemplo, HDAC2). (Véanse, por ejemplo, las Tablas 1 y 2).

Los compuestos descritos proporcionan una ventaja en cuanto a la seguridad hematológica y un equilibrio general de potencia, ADME y perfiles de PK en comparación con los inhibidores anteriores. Por ejemplo, el mero reemplazo de hidrógeno por metilo entre el Comparador E y el Compuesto 2 deriva en una marcada disminución de la inhibición de CYP2D6. Véase, por ejemplo, la Tabla 2. Asimismo, este reemplazo proporciona beneficios PK distintos respecto del análogo de pirimidina no sustituida, al exhibir una semivida más prolongada, depuración más baja, biodisponibilidad más alta y exposición del cerebro >5 veces más alta. Véase, por ejemplo, la Tabla 3. De manera similar, la adición de un átomo de orto-flúor adicional produjo un beneficio de seguridad significativo en los linajes de células progenitoras eritroides y mieloides para el Compuesto 1 con respecto al Comparador I. Véase, por ejemplo, la Tabla 5.

Los compuestos descritos también producen cambios en la morfología de la espina dendrítica en la región CA1 del hipocampo dorsal en ratones de tipo silvestre. Véase, por ejemplo, la Tabla 7. Es probable que las medidas de la morfología de la espina dendrítica puedan identificar agentes farmacológicos que promuevan o distorsionen la función cognitiva normal y proporcionen protección contra el deterioro cognitivo o lo exacerben.

Las afecciones que se pueden tratar con los compuestos descritos incluyen, entre otras, trastornos neurológicos, trastornos o deficiencias en las funciones cognitivas o de la memoria, trastornos de extinción del aprendizaje, enfermedades o infecciones fúngicas, enfermedades inflamatorias, enfermedades hematológicas, enfermedades neoplásicas, trastornos psiquiátricos y pérdida de la memoria.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

1. Compuestos

En esta invención, se proporciona un compuesto de la Fórmula:

o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

2. Definiciones

Como se usan en esta invención, los términos “sujeto” y “paciente” se pueden usar de manera indistinta, y se refieren a un mamífero que necesita un tratamiento, por ejemplo, animales de compañía (por ejemplo, perros, gatos y similares), animales de granja (por ejemplo, vacas, cerdos, caballos, ovejas, cabras y similares) y animales de laboratorio (por ejemplo, ratas, ratones, cobayos y similares). En general, el sujeto es un ser humano que necesita tratamiento.

Se incluyen las sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico así como las formas neutrales de los compuestos descritos en esta invención. Para uso en medicamentos, las sales de los compuestos se refieren a “sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico” no tóxicas. Las formas de sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico incluyen sales ácidas/aniónicas o básicas/catiónicas aceptables desde el punto de vista farmacéutico. Las sales básicas/catiónicas aceptables desde el punto de vista farmacéutico incluyen las sales de sodio, potasio, calcio, magnesio, dietanolamina, n-metil-D-glucamina, L-lisina, L-arginina, amonio, etanolamina, piperazina y trietanolamina. Las sales ácidas/aniónicas aceptables desde el punto de vista farmacéutico incluyen, por ejemplo, acetato, bencensulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, carbonato, citrato, diclorhidrato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, bromhidrato, clorhidrato, malato, maleato, malonato, mesilato, nitrato, salicilato, estearato, succinato, sulfato, tartrato ytosilato.

La expresión “portador aceptable desde el punto de vista farmacéutico” se refiere a un portador, adyuvante o vehículo no tóxico que no destruye la actividad farmacológica del compuesto con el que se formula. Los portadores, adyuvantes o vehículos aceptables desde el punto de vista farmacéutico que se pueden usar en las composiciones descritas en esta invención incluyen, entre otros, intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como albúmina de suero humano, sustancias amortiguadoras, tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato de hidrógeno disódico, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros en bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y lanolina.

Los términos “tratamiento” y “tratar” se refieren a revertir, aliviar, reducir la posibilidad del desarrollo o inhibir la progresión de una enfermedad o un trastorno, o uno o más síntomas de estos, como se describe en esta invención. En algunas realizaciones, el tratamiento se puede administrar después de que se hayan desarrollado uno o más síntomas, es decir, tratamiento terapéutico. En otras realizaciones, el tratamiento se puede administrar en ausencia de síntomas. Por ejemplo, el tratamiento se puede administrar a un individuo susceptible antes de la aparición de síntomas (por ejemplo, en vista de antecedentes de síntomas y/o de factores genéticos o de otros factores de susceptibilidad), es decir, tratamiento profiláctico. El tratamiento también se puede continuar después de que los síntomas se resuelvan, por ejemplo, para prevenir o retrasar su recidiva.

La expresión “cantidad eficaz” o “cantidad eficaz desde el punto de vista terapéutico” incluye una cantidad de un compuesto descrito en esta invención que provocará una respuesta biológica o médica de un sujeto.

3. Usos, formulación y administración

En algunas realizaciones, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar afecciones asociadas con la actividad de HDAC. Tales afecciones incluyen, por ejemplo, aquellas que se describen a continuación.

Los informes recientes detallaron la importancia de la acetilación de histonas en las funciones del sistema nervioso central (“CNS”) tales como diferenciación neuronal, formación de memoria, adicción a las drogas y depresión (Citrome, Psychopharmacol. Bull. 2003, 37, Suppl. 2, 74-88; Johannessen, CNS Drug Rev. 2003, 9, 199-216; Tsankova et al., 2006, Nat. Neurosci. 9, 519-525; Bousiges et al., 2013, PLoS ONE 8(3), e57816). Por consiguiente, en un aspecto, los compuestos y composiciones proporcionados pueden ser útiles para tratar un trastorno neurológico. Los ejemplos de trastornos neurológicos incluyen: (i) enfermedades neurogenerativas crónicas tales como degeneración del lóbulo frontotemporal (demencia frontotemporal, FTD), FTD-GRN, esclerosis lateral amiotrófica familiar y esporádica (FALS y ALS, respectivamente), enfermedad de Parkinson familiar y esporádica, demencia por enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer familiar y esporádica, esclerosis múltiple, distrofia muscular, atrofia olivopontocerebelosa, atrofia multisistémica, enfermedad de Wilson, parálisis supranuclear progresiva, enfermedad de cuerpos de Lewy difusos, degeneración corticodentatonigral, epilepsia mioclónica familiar progresiva, degeneración estriatonigral, distonia detorsión, temblor familiar, síndrome de Down, síndrome de Gilles de la Tourette, enfermedad de Hallervorden-Spatz, neuropatía periférica diabética, demencia pugilística, demencia por SIDA, demencia relacionada con la edad, deterioro de la memoria relacionado con la edad y enfermedades neurodegenerativas relacionadas con la amiloidosis tales como aquellas causadas por la proteína priónica (PrP) que se asocia con la encefalopatía espongiforme transmisible (enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, síndrome de Gerstmann Straussler-Scheinker, tembladera y kuru), y aquellas causadas por acumulación excesiva de cistatina C (angiopatía por cistatina C hereditaria); y (ii) trastornos neurodegenerativos agudos tales como lesión cerebral traumática (por ejemplo, lesión cerebral relacionada con una cirugía), edema cerebral, daño nervioso periférico, lesión de la médula espinal, enfermedad de Leigh, síndrome de Guillain-Barre, trastornos de almacenamiento lisosomal tales como lipofuscinosis, enfermedad de Alper, síndrome de las piernas inquietas, vértigo como resultado de degeneración del CNS; patologías que surgen del abuso crónico de alcohol o drogas que incluyen, por ejemplo, la degeneración de neuronas en el locus cerúleo y cerebelo, trastornos del movimiento inducidos por las drogas; y patologías que surgen por la edad, que incluyen degeneración de las neuronas cerebelosas y neuronas corticales que producen deterioro cognitivo y motriz; y patologías que surgen del abuso crónico de anfetaminas que incluyen degeneración de neuronas de los ganglios basales que produce deficiencias motrices; cambios patológicos que derivan de traumatismos focales tales como apoplejía, isquemia focal, insuficiencia vascular, encefalopatía hipóxico-isquémica, hiperglucemia, hipoglucemia o traumatismo directo; patologías que surgen de los efectos secundarios negativos de drogas terapéuticas y tratamientos (por ejemplo, degeneración de las neuronas del cíngulo y la corteza entorrinal en respuesta a dosis anticonvulsivas de antagonistas de la clase NMDA del receptor de glutamato) y demencia relacionada con Wernicke-Korsakoff. Los trastornos neurológicos que afectan a las neuronas sensoriales incluyen ataxia de Friedreich, diabetes, neuropatía periférica y degeneración neuronal en la retina. Otros trastornos neurológicos incluyen lesión nerviosa o traumatismo asociado con una lesión de la médula espinal. Los trastornos neurológicos de los sistemas límbico y cortical incluyen amiloidosis cerebral, atrofia de Pick y síndrome de Retts. En otro aspecto, los trastornos neurológicos incluyen trastornos del estado de ánimo, tales como trastornos afectivos y ansiedad; trastornos en la conducta social, tales como defectos de carácter y trastornos de la personalidad; trastornos en el aprendizaje, memoria e inteligencia, tales como retraso mental y demencia. Por consiguiente, en un aspecto, los compuestos y composiciones descritos pueden ser útiles para tratar esquizofrenia, delirio, trastorno por déficit de atención con hiperactividad (ADHD), trastorno esquizoafectivo, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, síndrome de Rubinstein-Taybi, depresión, manía, trastornos por déficit de atención, adicción a las drogas, demencia, demencia que incluye manifestaciones de BPSD, agitación, apatía, ansiedad, psicosis, trastornos de la personalidad, trastornos bipolares, trastorno afectivo unipolar, trastornos obsesivo-compulsivos, trastornos alimenticios, trastornos por estrés postraumático, irritabilidad, trastorno de conducta adolescente y desinhibición. También pueden ser útiles para disminución del olfato y tinnitus espontánea, tóxica, neoplásica, postraumática y post-infecciosa.

Se cree que la transcripción es una etapa clave para la formación de memoria a largo plazo (Alberini, 2009, Physiol. Rev. 89:121-145). La transcripción se promueve mediante modificaciones de cromatina específicas, tales como acetilación de histonas, que modulan las interacciones de histona-ADN (Kouzarides, 2007, Cell, 128:693-705), así como interacciones de factor de transcripción-ADN. Las enzimas modificadoras, tales como histona acetiltransferasas (HAT) e histona desacetilasas (HDAC), regulan el estado de acetilación en las colas de histona. En general, la acetilación de histonas promueve la expresión del gen, mientras la desacetilación de histonas provoca el silenciamiento génico, aunque el tratamiento con inhibidores de HDAC puede producir tanto la regulación ascendente como la regulación descendente de los niveles de expresión de genes específicos. Numerosos estudios demostraron que es necesaria una proteína de fijación (CBP) a la proteína de fijación a los elementos de respuesta de cAMP (CREB) de HAT potente para formas duraderas de plasticidad sináptica y memoria a largo plazo (para reseña, véase Barrett, 2008, Learn Mem 15:460-467). Por consiguiente, en un aspecto, los compuestos y composiciones proporcionados pueden ser útiles para promover la función cognitiva y mejorar el aprendizaje y la formación de la memoria.

Los compuestos y composiciones descritos en esta invención también se pueden usar para tratar enfermedades o infecciones fúngicas.

En otro aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención se pueden usar para tratar enfermedades inflamatorias tales como apoplejía, artritis reumatoide, lupus eritematoso, colitis ulcerosa y lesiones cerebrales traumáticas (Leoni et al., PNAS, 99(5); 2995-3000(2002); Suuronen et al. J. Neurochem. 87; 407-416 (2003) and Drug Discovery Today, 10: 197-204 (2005).

Aun en otro aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención se pueden usar para tratar cáncer causado por la proliferación de células neoplásicas. Dichos tipos de cáncer incluyen, por ejemplo, tumores sólidos, neoplasmas, carcinomas, sarcomas, leucemias, linfomas y similares. En un aspecto, los tipos de cáncer que se pueden tratar mediante lo compuestos y composiciones descritos en esta invención incluyen, entre otros: cáncer de corazón, cáncer de pulmón, cáncer gastrointestinal, cáncer del tracto genitourinario, cáncer de hígado, cáncer del sistema nervioso, cáncer ginecológico, cáncer hematológico, cáncer de piel y cáncer de la glándula suprarrenal. En un aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar tipos de cáncer de corazón seleccionados de sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma y teratoma. En otro aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar un cáncer de pulmón seleccionado de carcinoma broncogénico (de células escamosas, de célula pequeña no diferenciada, de célula grande no diferenciada, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso y mesotelioma. En un aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar un cáncer gastrointestinal seleccionado de esófago (carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma), de estómago (carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma), de páncreas (adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), del intestino delgado (adenocarcinoma, linterna, tumores carcinoides, sarcoma de Kaposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma) y del intestino grueso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma velloso, hamartoma, leiomioma). En un aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar un cáncer del tracto genitourinario seleccionado de riñón (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma, leucemia), de vejiga y uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células transitorias, adenocarcinoma), de próstata (adenocarcinoma, sarcoma) y de testículo (seminoma, teratoma, carcinoma embrionario, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiales, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma). En un aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar un cáncer de hígado seleccionado de hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular y hemangioma.

En algunas realizaciones, los compuestos descritos en esta invención se refieren a tratar un cáncer óseo seleccionado de sarcoma osteogénico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células de retículo), mieloma múltiple, cordoma de tumor celular gigante maligno, osteocondroma (exostosis osteocartilaginosa), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide y tumores celulares gigantes.

En un aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar un cáncer del sistema nervioso seleccionado de cráneo (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteítis deformante), de meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), de cerebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, tumores congénitos) y de la médula espinal (neurofibroma, meningioma, glioma, sarcoma).

En un aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar un cáncer ginecológico seleccionado de útero (carcinoma endometrial), de cuello uterino (carcinoma cervical, displasia cervical pretumor), de ovarios (carcinoma de ovarios [cistoadenocarcinoma seroso, cistoadenocarcinoma mucinoso, carcinoma no clasificado], tumores de células de la granulosa, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), de vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), de vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma botrioide (rabdomiosarcoma embrionario) y trompas de Falopio (carcinoma).

En un aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar un cáncer de piel seleccionado de melanoma maligno, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Karposi, nevo displásico de lunares, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides y psoriasis.

En un aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar un cáncer de las glándulas suprarrenales seleccionado de neuroblastoma.

En un aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar tipos de cáncer que incluyen, entre otros, leucemias que incluyen leucemias agudas y leucemias crónicas, tales como leucemia linfocítica aguda(ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mielógena crónica (CML) y leucemia de tricoleucocitos; linfomas tales como linfomas cutáneos de linfocitos T (CTCL), linfomas de linfocitos T periféricos y no cutáneos, linfomas asociados al virus linfotrópico de linfocitos T humanos (HTLV), tales como leucemia de linfocitos T en adultos/linfoma (ATLL), enfermedad de Hodgkin y linfomas no Hodgkin, linfomas de células grandes, linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL); linfoma de Burkitt; mesotelioma, linfoma del sistema nervioso central primario (CNS); mieloma múltiple; tumores sólidos en niños, tales como tumores cerebrales, neuroblastoma, retinoblastoma, tumor de Wilm, tumores en los huesos y sarcomas del tejido blando, tumores sólidos comunes en adultos, tales como cáncer de cabeza y cuello (por ejemplo, oral, laringe y esófago), cáncer genitourinario (por ejemplo, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, cáncer renal, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer de testículo, cáncer rectal y de colon), cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de páncreas, melanoma y otros tipos de cáncer de piel, cáncer de estómago, tumores cerebrales, cáncer de hígado y cáncer de tiroides.

En un aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar una afección en un sujeto seleccionado de un trastorno neurológico, trastorno o deterioro en las funciones cognitivas o de la memoria, trastorno de extinción del aprendizaje, enfermedad o infección fúngica, enfermedad inflamatoria, enfermedad hematológica, trastornos psiquiátricos y enfermedad neoplásica. En otro aspecto, los compuestos y composiciones descritos en esta invención son útiles para tratar una afección seleccionada de a) un trastorno o deterioro en la función cognitiva asociado con la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, pérdida de la memoria inducida por convulsiones, esquizofrenia, síndrome de Rubinstein Taybi, síndrome de Rett, cromosoma X frágil, demencia de cuerpos de Lewy, demencia vascular, degeneración del lóbulo frontotemporal (demencia frontotemporal, FTD), FTD-GRN, ADHD, dislexia, trastorno bipolar y trastornos sociales, cognitivos y de aprendizaje asociados con autismo, lesión de cabeza con traumatismo, trastorno por déficit de atención, trastorno de ansiedad, respuesta al miedo condicionado, trastorno de pánico, trastorno obsesivo compulsivo, trastorno por estrés postraumático (PTSD), fobia, trastorno de ansiedad social, recuperación de la dependencia a las sustancias, deterioro de la memoria relacionado con la edad (AAMI), deterioro cognitivo relacionado con la edad (ARCD), ataxia o enfermedad de Parkinson; b) una enfermedad hematológica seleccionada de leucemia mieloide aguda, leucemia promielocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielogena crónica, síndromes mielodisplásicos y anemia de células falciformes; c) una enfermedad neoplásica; y d) un trastorno de extinción del aprendizaje seleccionado de extinción del miedo y trastorno por estrés postraumático. En un aspecto, la afección tratada con los compuestos y composiciones descritos en esta invención es enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, demencia frontotemporal, ataxia de Freidreich, trastorno por estrés postraumático (PTSD), enfermedad de Parkinson, depresión o recuperación de la dependencia a sustancias.

En un aspecto, la presente descripción proporciona un procedimiento para tratar una afección descrita en esta invención que comprende administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto, o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico descrita en esta invención, o una composición de este.

También se proporciona el uso de uno o más de los compuestos o sales de este aceptables desde el punto de vista farmacéutico descritas en esta invención, o una composición proporcionada, para tratar una afección descrita en esta invención.

También se proporciona el uso de uno o más de los compuestos o sales de este aceptables desde el punto de vista farmacéutico descritas en esta invención, para la fabricación de un medicamento para tratar una afección descrita en esta invención.

También se pueden seleccionar sujetos que padezcan una o más de las afecciones descritas antes de que comience el tratamiento con uno o más de los compuestos descritos o sales o composiciones aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

La presente descripción proporciona también composiciones aceptables desde el punto de vista farmacéutico que comprenden un compuesto descrito en esta invención, o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico; y un portador aceptable desde el punto de vista farmacéutico. Estas composiciones se pueden usar para tratar una o más de las afecciones descritas con anterioridad.

Las composiciones descritas en esta invención se pueden administrar por vía oral, parenteral, mediante spray para inhalar, por vía tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal o mediante depósito implantado. El término "parenteral", como se usa en esta invención, incluye inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intrasternal, intratecal, intrahepática, intralesional e intracraneal o técnicas de infusión. Se incluyen en esta invención las formas de dosificación líquidas, preparaciones inyectables, formas de dispersión sólidas y formas de dosificación para administración tópica o transdérmica de un compuesto.

La cantidad de compuestos proporcionados que se puede combinar con materiales portadores para producir una composición en forma de dosis única variará según el paciente que se va a tratar y el modo de administración particular. En algunas realizaciones, se pueden formular las composiciones proporcionadas de tal manera que se pueda administrar una dosis de 0,01 -100 mg/kg de peso corporal/día del compuesto proporcionado, tal como, por ejemplo, 0,1 -100 mg/kg de peso corporal/día, a un paciente que recibe estas composiciones.

Cabe destacar que un régimen de dosificación y tratamiento específicos para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores, que incluyen la edad, el peso corporal, el estado de salud general, el sexo, la alimentación, el tiempo de administración, la velocidad de excreción, la combinación de fármacos, el criterio del médico y la gravedad de la enfermedad que se trata. La cantidad de un compuesto proporcionado en la composición dependerá también del compuesto particular en la composición.

EJEMPLIFICACIÓN

Se visualizaron manchas mediante luz UV (254 y 365 nm). Se llevó a cabo la purificación mediante cromatografía en columna flash usando gel de sílice (malla de 200-300). Los sistemas de solventes se notificaron como la relación de los solventes.

Se registraron los espectros de NMR en un espectrómetro Bruker 400 (400 MHz). Se notificaron desplazamientos químicos 1H en valores 8 en ppm con tetrametilsilano (TMS, = 0,00 ppm) como el estándar interno. Véanse, por ejemplo, los datos proporcionados en la Tabla 1.

Los espectros de LCMS se obtuvieron en un espectrómetro de masa Agilent 1200 serie 6110 o 6120 con modo de ionización ESI (+). Véanse, por ejemplo, los datos proporcionados en la Tabla 1.

Síntesis de SM-A.

A una mezcla de 6-doro-3-nitropiridin-2-amina (4,58 g, 26,4 mmol), ácido 2,4-difluorofenilborónico (5,00 g, 31,7 mmol) y Cs2CÜ3(25,73 g, 79,2 mmol) en dioxano/H2O (100 ml/10 ml) se agregó Pd(PPh3)4(1,10 g, 0,95 mmol) en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a 100 °C durante 2 h y, a continuación, se concentró al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc (200 ml) y la solución se lavó con salmuera (100 mlx3). La capa orgánica se secó en Na2SO4 anhidro y, a continuación, se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (PE : EtOAc = 7 : 1 ~ 5 :1 ) para obtener SM-A (4,0 g, 61 %) como un sólido amarillo. MS 252.1 [M H]+.

Síntesis de SM-B.

A una solución agitada de SM-A (4,0 g, 15,94 mmol) en piridina (60 ml) se agregó fenil carbonoclorhidrato (7,50 g, 47,81 mmol) por goteo a 0 °C. Después de completar la adición, la mezcla se agitó a 50 °C durante 4 h. La mezcla se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (PE : DCM = 3: 2 ~ 1 : 1) para obtener SM-B (7,1 g, 91 %) como un sólido amarillo. MS 492.1 [M H]+.

Síntesis de 1672-1.

A una solución de prop-2-in-1-amina (5,0 g, 90,9 mmol) y Et3N (18,4 g, 181,8 mmol) en DCM (100 ml) se agregó (Boc)2O (23,8 g, 109,1 mmol) por goteo mientras se enfriaba la mezcla de reacción con un baño de hielo. La mezcla resultante se retiró del baño de hielo una vez que se completó la adición y, a continuación, se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Cuando la reacción ya estaba completa, la mezcla se diluyó con DCM (200 ml), se lavó con salmuera (100 ml * 3) y la capa orgánica se secó a continuación en Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (PE : EtOAc = 100 : 1 ~ 10 : 1) para obtener 1672-1 (10 g, 71 %) como un aceite incoloro. MS 178.3 [M 23]+, 100.3 [m - 56]+.

Síntesis de 1672-2.

A una solución de 1672-1 (10 g, 64,5 mmol) en DMF (200 ml) se agregó NaH (60 % en aceite mineral) (2,84 g, 71 mmol) lentamente en un baño de hielo. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después de lo cual se agregó 3-bromoprop-1-ina (9,2 g, 77,4 mmol) a dicha mezcla y la mezcla de reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se inactivó con agua (500 ml) y, a continuación, se extrajo con t BuOMe (250 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (200 ml * 3), se secaron en Na2SO4 anhidro y, a continuación, se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (PE : EtOAc = 100 : 1 ~ 10 : 1) para obtener 1672-2 (12 g, 96 %) como un aceite amarillo. MS 138.1 [M - 56]+.

Síntesis de 1672-3.

A una solución de 2-cloroacetonitrilo (3,13 g, 41,4 mmol) y [Cp*RuCl(cod)] (394 mg, 1,0 mmol) en DCE (40 ml) se agregó una solución de 1672-2 (4,0 g, 20,7 mmol) en DCE (80 ml) por goteo durante 30 min en una atmósfera de N2. La mezcla resultante se agitó a 40 °C durante 16 h. El solvente se retiró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (PE : EtOAc = 10 : 1 ~ 2 : 1) para obtener 1672-3 (2,1 g, 22 %) como un sólido caqui. MS 269.3 [M H]+.

Síntesis de 1672-4.

A una solución de MeOH (30 ml) se agregó NaH (60 % en aceite mineral) (940 mg, 23,5 mmol) en un baño de hielo y se agitó durante 30 min. A continuación, se agregó 1672-C (2,1 g, 7,8 mmol) a la mezcla anterior y se agitó a 35 °C durante 16 h. La mezcla se inactivó con agua (30 ml), se extrajo con DCM (10 m lx 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml * 3), se secaron en Na2SO4 anhidro y, a continuación, se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (PE : EtOAc = 100 : 1 ~ 10 : 1) para obtener 1672-4 (1,8 g, 94 %) como un sólido tostado. MS 265.1 [M H]+.

Síntesis de 1672-5.

A una solución de 1672-4 (120 mg, 0,45 mmol) en DCM (6 ml) enfriada en un baño de hielo se agregó TFA (2 ml) por goteo. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después de lo cual el solvente se retiró al vacío para obtener 1672-5 como un producto crudo, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. MS 165.1 [M H]+.

Síntesis de 1672-6.

A una mezcla de 1672-5 (0,45 mmol, producto crudo de la última etapa) y SM-B (150 mg, 0,30 mmol) en DMSO (10 ml) se agregó Na2CO3 (259 mg, 3,44 mmol), y la mezcla de reacción resultante se agitó a 25 °C durante 2 h. A continuación, la mezcla se diluyó con agua (30 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml * 3), se secaron en Na2SO4 anhidro y, a continuación, se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (DCM : MeOH = 100 : 1 ~ 30 : 1) para obtener 1672-6 (120 mg, 89 %) como un sólido amarillo. MS 442.1 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 1.

Una mezcla de 1672-6 (120 mg, 0,27 mmol) y Pd/C (120 mg) en MeOH (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h en una atmósfera de H2. A continuación, se retiró el Pd/C por filtración a través del Celite. El filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante Prep-TLC (DCM : MeOH = 15 : 1) para obtener el Compuesto 1 (70 mg, 70 %) como un sólido amarillo. MS 412.1 [M H]+, 434.1 [M 23]+.

A una mezcla de 6-doro-3-nitropiridin-2-amina (10,00 g, 57,6 mmol), ácido tiofen-2-ilborónico (8,12 g, 63,4 mmol) y CS2CO3 (37,56 g, 115,2 mmol) en dioxano/^O (200 ml/20 ml) se agregó Pd(PPh3)4 (2,44g, 2,88 mmol) en una atmósfera de N2. La mezcla se agitó a 95 °C durante 2 h y, a continuación, se concentró al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc (200 ml) y la solución se lavó con salmuera (100 ml x3). La capa orgánica se secó en Na2SO4 anhidro y, a continuación, se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (Pe : EtOAc = 5 : 1 ~ 3 : 1) para obtener 156-A (10,0 g, 79 %) como un sólido amarillo.

Síntesis de 156-B.

A una solución agitada de 156-A (1,30 g, 5,88 mmol) en piridina (20 ml) se agregó fenil carbonoclorhidrato (2,29 g, 14,7 mmol) por goteo. Una vez completa la adición, la mezcla se calentó hasta 50 °C y se agitó durante 4 h. A continuación, la mezcla se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (PE : EtOAc = 8: 1 ~ 3 : 1) para obtener 156-B (2,4 g, 89 %) como un sólido amarillo.

Síntesis de 213-A.

Una solución de ter-butil 3-oxopirrolidina-1-carboxilato (150,0 g, 809,8 mmol) y DMF-DMA (289,5 g, 2,4 mol) en THF (1500 ml) se agitó a 70 °C durante 16 h. La solución se concentró al vacío para obtener 213-A como un producto crudo, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.

Síntesis de 213-B.

A una solución de 213-A (809,8 mmol, producto crudo de la última etapa) en EtOH (1000 ml) se agregó Et3N (409,7 g, 4,0 mol) y clorhidrato de acetimidamida (306,2 g, 3,2 mol). La solución resultante se agitó a 80 °C durante 24 h. Después de enfriar la mezcla hasta temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua (500 ml) y se extrajo con DCM (500 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (500 ml * 3), se secaron en Na2SO4 anhidro y, a continuación, se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (PE : DCM = 10: 1 ~ 1 : 2) para obtener 213-B (105,0 g, 55 %) como un sólido marrón.

Síntesis de 213-C.

A una solución de 213-B (105,0 g, 446,3 mmol) en DCM (1000 ml), se agregó TFA (333 |jl) por goteo. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después de lo cual la solución se concentró al vacío para obtener 213-C como un producto crudo que se usó directamente en la siguiente etapa.

Síntesis de 213-D.

Una mezcla de 213-C (325,1 mmol, producto crudo de la última etapa) y 156-B (75,0 g, 162,5 mmol) en DMSO (750 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 10 min, a continuación se agregó Na2CO3 (137,8 g, 1,3 mol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, la mezcla se diluyó con agua (1000 ml) y se extrajo con EtOAc (500 ml * 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (500 ml * 3), se secaron en Na2SO4 anhidro y, a continuación, se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (PE : EA = 10 : 1 ~ 1 : 2) para obtener 213-D (44,0 g, 71 %) como un sólido amarillo.

Síntesis de Compuesto 2.

Una mezcla de 213-D (44,0 g, 115,1 mmol) y Pd/C (22,0 g) en MeOH (250 ml) y DCM (250 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h en una atmósfera de H2. Se retiró el Pd/C por filtración a través de Celite. El filtrado se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía de columna en gel de sílice (DCM : MeOH = 50 : 1 ~ 15 : 1) para obtener el Compuesto 2 (26,0 g, 64 %) como un sólido amarillo claro.

Procedimientos de ensayo generales

Ensayo enzimático de HDAC2 y HDAC1

A continuación se describe un protocolo de ensayo para medir la desacetilación de un sustrato peptídico mediante las enzimas HDAC2 o HDAC1.

La totalidad de las HDAC humanas recombinantes se adquirió de BPS Bioscience. El sustrato, FAM-TSRHK(AC)KL-CONH, se sintetizó en NanoSyn. Las reacciones de ensayo finales contenían 100 mM de HEPES (pH 7.5), 50 mM de KCl, 0,1 % de BSA, 0,01 % de Triton X-100, 1 % de DMSO, 1 uM de sustrato y 5 nM de enzima HdAC. La enzima y los compuestos se pre-incubaron a 25 °C durante 5 horas y se iniciaron las reacciones mediante la adición del sustrato. Las reacciones de 10 ul se incubaron durante 17 horas a 25 °C y se terminaron mediante la adición de 40 ul de amortiguador que contenía 100 mM de HEPES (pH 7.5), 0,1 % de BSA, 0,01 % de Triton X-100 y 0,05 % de SDS. Los péptidos del sustrato y el producto presentes en cada muestra se separaron mediante electroforesis usando el instrumento de electroforesis capilar LabChip 3000. El cambio en la intensidad de fluorescencia relativa de los picos de sustrato y producto reflejan la actividad enzimática. El progreso de la reacción se determinó como la relación del producto con respecto a la suma (PSR): P/(S+P), donde P es la altura del pico del producto peptídico, y S es la altura del pico del sustrato peptídico. Las reacciones se llevaron a cabo en duplicado en 12 concentraciones, (diluciones en serie 3X que comenzaron en 30 uM). Los valores IC50se calcularon usando un modelo logístico de 4 parámetros.

Ensayo de inhibición enzimática HDAC2 en lisado de células SY5Y con sustrato HDAC-Glo2

Cultivo de células y tratamientos inhibidores

Las células SH-SY5Y (Sigma) se cultivaron en medio esencial modificado por Eagle enriquecido con un 10 % de suero bovino fetal y pen/estrep. 24 horas antes de la dosificación del compuesto, 20 ul de células se colocaron en placas blancas de 384 cavidades a una densidad de 1.500 células/cavidad. Los compuestos se diluyeron en serie en DMSO puro y, a continuación, se diluyeron 1:100 v/v en un medio sin FBS y se mezclaron. Se retiró el medio de las células colocadas en placas, se agregaron los compuestos diluidos en medio libre de suero (1 % v/v de DMSO final) y se incubaron a 37 °C durante 5 horas. A continuación, se agregaron 10 ul de HDAC-Glo 2 reactivo con 0,1 % de Triton X-100, la placa se mezcló y se dejó que alcanzara la temperatura ambiente durante 100 minutos. A continuación, se leyeron las placas con un luminómetro Spectramax LMax usando un tiempo de integración de 0,4 s. Las curvas de respuesta a la dosis se construyeron con datos normalizados donde CI-994 a 100 uM se definió como el 100 % de inhibición y DMSO solo como el 0 % de inhibición.

Ensayo de CFU eritroide y mieloide

Los compuestos se probaron para evaluar los efectos potenciales en los progenitores eritroides y mieloides humanos usando ensayos de células formadoras de colonias. Los progenitores clonogénicos de linajes de eritroides humanos (CFU-E, BFU-E), granulocito-monocitos (CFU-GM) y multipotenciales (CFU-GEMM) se evaluaron en una formulación de medio a base de metilcelulosa semi-sólida que contenía rhIL-3 (10 ng/ml), rhGM-SCF (10 ng/ml), rhSCF (50 ng/ml) y Epo (3 U/ml).

Células

Las células de densidad liviana de médula espinal humana normal derivadas de médula espinal normal (NorCal Biologics, California), y calificadas en ReachBio, se almacenaron en la fase gaseosa de nitrógeno líquido (-152 °C) hasta que se las necesitó para el ensayo. El día del experimento, las células se descongelaron rápidamente, el contenido de cada vial se diluyó en 10 ml de medio de Dulbecco modificado por Iscove que contiene un 10 % de suero bovino fetal (IMDM 10 % de FBS) y se lavó mediante centrifugado (aproximadamente 1200 r.p.m. durante 10 minutos, temperatura ambiente). El sobrenadante se descartó y las pastillas de células se volvieron a suspender en un volumen conocido de IMDM 10 % de FBS. Se realizó un recuento de células (3 % de ácido acético glacial) y evaluación de viabilidad (prueba de exclusión Trypan Blue) para la muestra de médula ósea.

Compuestos

El día del experimento, los compuestos se disolvieron en DMSO a una concentración de reserva de 10 mM. Las diluciones en serie se prepararon a partir de la concentración de reserva para lograr concentraciones de 2 y 0,4 mM. Al agregarlas al medio a base de metilcelulosa a 1:1000 (v/v), se lograron las concentraciones de prueba finales de 10, 2 y 0,4 ^|j M. Adicionalmente, se evaluó 5-FU a 1,0, 0,1 y 0,01 jg/ml.

Resumen del procedimiento

Los progenitores clonogénicos de los linajes de eritroides (CFU-E y BFU-E) y mieloides (CFU-GM) humanos se establecieron en las formulaciones de medio a base de metilcelulosa descritos con anterioridad. Todos los compuestos se agregaron al medio para obtener las concentraciones deseadas finales (10, 2 y 0,4 j M). Se usó 5-fluorouracilo (Sigma Aldrich) como control positivo para la proliferación de progenitores (inhibición de crecimiento de colonia) y se introdujo a los cultivos de médula ósea humana a 1,0, 0,1 y 0,01 jg/ml. También se iniciaron los cultivos de control de solvente (que no contenían compuesto, pero sí el 0,1 % de DMSO) así como los controles estándar (que no contenían compuesto ni DMSO).

Los ensayos de progenitores eritroides y mieloides humanos se iniciaron a 2,0 x 104 células por cultivo. Después de 14 días de cultivo, las colonias mieloide y eritroide fueron evaluadas con microscopio y calificadas por personal calificado. Las colonias se dividieron en las siguientes categorías en función de su tamaño y morfología: CFU-E, BFU-E, CFU-GM y CFU-GEMM.

Análisis estadístico de números de CFC

Se calculó una desviación estándar de la media ± de 3 cultivos replicados para los progenitores de cada categoría (CFU-E, BFU-E, etc.). Se realizaron pruebas t bilaterales para evaluar si había una diferencia en el número de colonias generadas entre los cultivos de control de solvente y los cultivos tratados. Debido a la subjetividad potencial de la enumeración de colonias, un valor p menor de 0,01 se consideró significativo. Para calcular la concentración del 50 % de inhibición de crecimiento de colonia (IC50) para cada compuesto, se generó una curva de respuesta a la dosis mediante la representación del registro de la concentración del compuesto contra el porcentaje de crecimiento de colonia de control usando el software XLfit (IDBS). Se calculó la concentración del 50 % de inhibición de crecimiento de colonia (IC50) en función del ajuste de la curva sigmoidea usando la fórmula modelo de un sitio de respuesta a la dosis: y = A [(B - A)/(1 ((C/x) A D))], donde A = valor inicial (respuesta inicial), B = respuesta máxima, C = centro (concentración de fármaco que provoca una respuesta a la mitad entre A y B) y D= pendiente de la curva en el punto medio. Asimismo, se generaron las representaciones gráficas y las curvas de respuesta a la dosis adicional usando GraphPad Prism 7.0.

Evaluación morfológica de colonias

Se realizaron fotografías de las colonias representativas derivadas de progenitores hematopoiéticos de distintos linajes, que ilustraban colonias en presencia del control de solvente así como colonias en la presencia de los compuestos de prueba.

La enumeración de las colonias eritroides (CFU-E y BFU-E), mieloides (CFU-GM) y multi-potenciales (CFU-GEMM) fue realizada por personal calificado. Se analizó la distribución de los tipos de colonias así como la morfología de la colonia general y la morfología celular. Para el análisis estadístico, se compararon los números de colonia en cultivos tratados con el compuesto a los de cultivos de control de solvente. Se usó 5-FU como control positivo para toxicidad en estos ensayos y los efectos inhibitorios obtenidos para este compuesto fueron exactamente como se esperaba. El experimento se usó para evaluar el efecto potencial de los compuestos de prueba en la proliferación de progenitores eritroides y mieloides humanos en un medio a base de metilcelulosa. Los valores IC50 se calcularon a partir de XLfit. Las curvas de respuesta a la dosis para toxicidad eritroide y mieloide se generaron mediante XLfit. Finalmente, se calculó el ajuste de la curva de regresión no lineal y IC5os ± 95 % CI mediante Prism 7.0.-GEMM.

Ensayo de inhibición de CYP

Los compuestos se probaron para evaluar su potencial inhibitorio en CYP2D6 y CYP3A4 (midazolam) usando microsomas de hígado humano. Los microsomas de hígado humano se obtuvieron a partir de BD Gentest y se ejecutó cada compuesto en duplicado.

Los compuestos de prueba e inhibidores de referencia (quinidina para 2D6, cetoconazol para 3A4) se colocaron en placas de 96 cavidades al transferir 8 pL de soluciones de reserva de 10 mM del compuesto en DMSO a 12 pL de acetonitrilo. Se prepararon soluciones de adición de inhibidores individuales para CYP2D6 y CYP3A4 (8 pL de reserva de DMSO añadidos a 12 pL de acetonitrilo). A continuación, se agregaron 400 pL de HLM de 0,2 mg/ml a las cavidades de ensayo y, a continuación, se agregaron 2 pL de compuesto de prueba 400 x a las cavidades designadas en hielo. A continuación, se agregaron 200 pL de HLM de 0,2 mg/ml a las cavidades de ensayo y, a continuación, se agregó 1 pL de soluciones de inhibidor de referencia a las cavidades designadas. Se agregaron las siguientes soluciones (en duplicado) a una placa de 96 cavidades en hielo: se evaluaron los compuestos de prueba e inhibidores de referencia (quinidina para 2 D6 , cetoconazol para 3A4) usando el siguiente procedimiento experimental:

1. Preparar el compuesto de prueba y los inhibidores de referencia (400 *) en una placa de 96 cavidades:

1.1. Transferir 8 pL de compuestos de prueba de 10 mM a 12 pL de ACN.

1.2. Preparar una solución de adición de inhibidor individual para CYP3A4, CYP2D6: 8 pL de reserva de DMSO a 12 pLde ACN.

2. Preparar el cofactor NADPH 4 * (66,7 mg de NADPH en 10 ml de amortiguador K 0,1 M , pH 7.4 )

3. Preparar el sustrato 4 * (2 ml para cada isoforma) como se indica en la tabla que sigue (agregar HLM cuando sea necesario en hielo).

4. Preparar 0,2 mg/ml de solución de HLM (10 pL de 20 mg/ml a 990 pL de amortiguador K 0,1 M) en hielo. 5. Agregar 400 pL de HLM de 0,2 mg/ml a las cavidades de ensayo y, a continuación, agregar 2 pL de compuesto de prueba 400 x a las cavidades designadas en hielo.

6. Agregar 200 pL de HLM de 0,2 mg/ml a las cavidades de ensayo y, a continuación, agregar 1 pL de solución de inhibidor de referencia a las cavidades designadas en hielo.

7. Agregar las siguientes soluciones (en duplicado) en una placa de 96 cavidades en hielo:

7.1. Agregar 30 pL de compuesto de prueba 2 * y compuesto de referencia en solución HML de 0,2 mg/ml; 7.2. Agregar 15 pL de solución de sustrato 4*.

8. Pre-incubar la placa de ensayo de 96 cavidades y la solución de NADPH a 37 °C durante 5 minutos.

9. Agregar 15 pL de solución NADPH de 8 mM precalentada a las placas de ensayo para iniciar la reacción. 10. Incubar la placa de ensayo a 37 °C. 5 min para 3A4, 10 min para 2D6.

11. Detener la reacción mediante la adición de 120 pL de ACN que contiene un estándar interno. Para CYP3A4, el estándar interno es 1'OH-midazolam-D4(10 pM de solución diluida a una concentración final de 0,1 pM al agregar 100 pL de reserva de estándar interno a 10 ml de ACN). Para CYP2D6, el estándar interno es 1-OH-bufuralolmaleato-[Dg] (49 pM de solución diluida a una concentración final de 0,1 pM al agregar20 pLde reserva de estándar interno a 10 ml de ACN).

12. Después de la inactivación, agitar las placas en el vibrador (IKA, MTS 2/4) durante 10 min (600 rpm/min) y, a continuación, centrifugar en 5594 g durante 15 min (Thermo Multifuge * 3R).

13. Transferir 50 pL del sobrenadante desde cada cavidad a una placa de muestra de 96 cavidades que contiene 50 pL de agua ultra pura (Millipore, ZMQS50F01) para análisis de LC/MS.

La evaluación sobre inhibición de isoforma de CYP es como se muestra a continuación con base en los resultados del ensayo: si el porcentaje de inhibición de CYP es mayor del 50 %, esto indica inhibición potente; si el porcentaje de inhibición de CYP está entre el 30 - 50 %, indica inhibición moderada; si el porcentaje de inhibición de CYP es menor del 30 %, indica inhibición moderada o sin inhibición. Si el porcentaje de inhibición de CYP es menor de -30 %, esto indica que el compuesto puede tener algún tipo de activación de su isoforma.

Medición de solubilidad cinética acuosa

Los compuestos se evaluaron con respecto a su solubilidad cinética en amortiguador o agua. Se agregaron alícuotas de 8 |jL de soluciones de reserva de referencia y de prueba (10 mM en DMSO) a 792 j L de 100 mM de amortiguador de fosfato (NaPO40,1 M, pH 7.4). La concentración de DMSO final es del 1 %. Los tubos de muestra se agitaron durante 1 hora (1000 rpm) a temperatura ambiente. Se preparó una curva de calibración usando 300 j M de solución de adición (SS) en MeOH/ACN(4:1) (SS = agregar 6 j L de compuesto de 10 mM en 194 j L de MeOH/ACN(4:1)). Las muestras se centrifugaron durante 10 min (12000 rpm) para precipitar partículas no disueltas y los sobrenadantes se transfirieron a un nuevo tubo o placa. Los sobrenadantes se diluyeron 10 veces y 100 veces con 100 mM de amortiguador. A continuación, se prepararon las muestras para análisis mediante LC-MS/MS (agregar 5 j L de muestras de compuestos (no diluidas, diluidas 10 veces y diluidas 100 veces) y las muestras de curva estándar a 95 j L de ACN que contenía un estándar interno. Los estándares internos usados son Propranolol, Ketoconazole y Tamoxifen.

Evaluación de exposición de cerebro y plasma para compuestos tras la administración intravenosa (IV) y oral (PO) a ratones

Los compuestos se dosificaron en ratones en 10 mg/kg o a 30 mg/kg PO, y se dosificaron a 1 mg/kg IV. Tres animales para recolección en cada punto temporal para plasma mediante sangrado a 0,25, 0,5, 1,4, 12 y 24 h. Sangrado terminal para plasma y muestreo para cerebro a 0,25, 0,5, 1, 4,12 y 24 h (también tres animales por grupo de punto temporal de exposición del cerebro). Un total de seis puntos temporales para el plasma y seis puntos temporales para el cerebro.

Recolección de muestra:

Plasma: el animal se retuvo manualmente en los puntos temporales designados; se recolectó aproximadamente 150 j L de sangre/punto temporal en un tubo K2EDTA mediante punción retroorbital o punción cardiaca en anestesia con Isoflurano. La muestra de sangre se centrifugó (2000 g, 4 °C, 5 min) para generar plasma dentro de los 30 min posteriores al sangrado.

Cerebro: en los puntos temporales designados, se realizó una incisión en la línea media del cuero cabelludo del animal y se retiró la piel. Con cortadoras y pinzas de huesos pequeños, se retiró el cráneo que recubre el cerebro. Se retiró el cerebro usando una espátula y se enjuagó con salina fría. El cerebro se colocó en tubo de tapa a rosca y, a continuación, los tubos se almacenaron por debajo de -70 °C hasta el análisis.

Determinadas ventajas de los Compuestos 1 y 2

Desde el punto de vista del descubrimiento de fármacos, es importante que los compuestos tengan perfiles de tipo fármaco aceptables a lo largo de un intervalo de parámetros. Es típico de los compuestos de perfil no solo la potencia in vitro, sino también en los estudios predictivos de absorción, distribución, excreción y metabolismo (ADME) in vitro y en experimentos farmacocinéticos (PK) in vivo. En algunos casos, también se obtienen los perfiles de los compuestos en los estudios de seguridad in vitro predictivos. Recolectar datos de ADME y seguridad in vitro, junto con datos PK, ayuda a identificar beneficios de determinadas características estructurales, y permite la optimización de la relación estructura-actividad (SAR) para compuestos de diseño con perfiles tipo fármaco optimizados para perfilar in vivo. Los compuestos presentes no solo proporcionan una ventaja con respecto a la seguridad hematológica, sino que también proporcionan un equilibrio general de los perfiles de potencia, ADME y PK.

Los compuestos de urea de aminoanilina tales como el Comparador A y el Comparador B en la Tabla 2 se describieron previamente en los documentos WO 2017/007755 y WO 2017/007756. Al cribar en un ensayo de unidades formadoras de colonias (CFU) in vitro en células de médula ósea humanas, observar las células progenitoras eritroides y mieloides (predictivo para neutropenia) y comparar con el compuesto de urea de aminopiridina de par emparejado, Comparador B, el cambio de un solo átomo en el núcleo de urea de diaminopiridina del Comparador B tiene como resultado una mejora significativa en la seguridad prevista tanto en los linajes eritroide como mieloide en relación con la urea de la estructura de aminoanilina del Comparador A . Véase la Tabla 2. Más adelante, cuando se reemplaza un grupo 4-fluorofenilo del Comparador B con un grupo tiofeno (Comparador C), pero el componente de pirrolopirazina de la urea se mantiene igual, se logra una mejora similar en el perfil de seguridad previsto en relación con la urea de aminoanilina del Comparador A . Esto demuestra que las ureas de los compuestos de diaminopiridina con componentes de urea de pirrolidina idénticos son más seguros que las ureas de aminoanilina correspondientes.

Aunque los compuestos de urea de pirrolopirazina, el Comparador B y el Comparador C, mostraron buena potencia en los ensayos de potencia in vitro, los valores del ensayo de CFU in vitro CFU todavía necesitan mejorar. Un linaje mieloide IC50 >5 j M (que corresponde aproximadamente a >30 % restante a 10 j M) prevé bajas posibilidades de neutropenia clínica, y así es el valor umbral para seguridad aceptable (Referencias: Pessina et al. Toxicological Sciences 2003, 75, 355-367; Clarke et al. Gen. Eng. & Biotech. News 2010, 14-15.). Se descubrió que al cambiar la pirrolopirazina a una pirrolopirimidina, se lograba un perfil de seguridad in vitro significativamente mejorado. Al comparar el par emparejado de Comparador B (pirrolopirazina) con el Comparador D (pirrolopirimidina), se observó una mejora significativa tanto en las células progenitoras eritroides y mieloides de CFU. Esto también se aplica a que los pares emparejados de urea de aminopiridina posean un reservorio inferior de tiofeno, Comparador C (pirrolopirazina) y Comparador E (pirrolopirimidina). Aunque la pirimidina trajo consigo un perfil de seguridad mejorado, los compuestos de pirimidina no sustituida Comparador D y Comparador E mostraron una inhibición significativa de CYP2D6 a 10 j M. Sin embargo, con la sustitución en el anillo de pirimidina en la posición entre los átomos de nitrógeno, el Compuesto 2 (pirrolopirimidina sustituida con metilo) no mostró una inhibición significativa de CYP2D6 o CYP3A4 a 10 j M.

Estos resultados demuestran que las modificaciones químicas moderadas tales como el cruce de un átomo de nitrógeno en posición 1 en un anillo en los Comparadores B y D y el reemplazo de hidrógeno por metilo (los Comparadores E y el Compuesto 2) producen aumentos marcados en la seguridad.

Además de que la sustitución entre los átomos de nitrógeno de la pirimidina mejora el perfil de inhibición de CYP de los compuestos de pirrolopirimidina, el perfil PK del Compuesto 2 mejora también en relación con el Comparador E no sustituido. Véase la Tabla 3. La metil-pirimidina del Compuesto 2 proporciona beneficios PK distintos con respecto al análogo de pirimidina no sustituida, exhibiendo una semivida más prolongada, depuración más baja, biodisponibilidad más alta y una exposición del cerebro >5 veces más alta. Estos resultados muestran que las modificaciones químicas leves también producen beneficios sustanciales en PK.

Tabla 3. Comparación en perfiles de PK de pares emparejados de pirimidina no sustituida y pirimidina sustituida con metilo.

Se ganaron ventajas similares al explorar los efectos de los regioisómeros y patrones de sustitución en ureas de pirrolopiridina de diaminopiridinas. Por ejemplo, mientras el compuesto de pirrolopiridina del Comparador F mostró una buena potencia in vitro, mostró niveles altos de inhibición CYP 2D6 y solubilidad extremadamente baja. Véase la Tabla 4. Se descubrió que mover el nitrógeno de piridina de la pirrolopiridina (Comparador G) mejoró la solubilidad. Sin embargo, tanto CYP2D6 como CYP3A4 se inhibieron a niveles altos. Se descubrió que agregar un sustituyente de metilo adyacente al nitrógeno de piridina de la pirrolopiridina mejoró el perfil de inhibición de CYP hacia 2D6 y 3A4 de alguna manera, y a la vez mantuvo la potencia y solubilidad (Comparador H). La sustitución de metoximetilo electroaceptor adyacente al nitrógeno de piridina (Comparador H) mejoró el perfil de inhibición de CYP 2D6 y 3A4 aún más, y también mantuvo los perfiles de potencia y solubilidad deseables. Se obtuvieron resultados similares entre los análogos de mono-fluoro y di-fluoro del Comparador I y el Compuesto 1, donde el Compuesto 1 mostró una solubilidad levemente reducida. Véase la Tabla 4.

Sin embargo, el Compuesto 1 tuvo un rendimiento ampliamente mejor que el Comparador I con respecto a la seguridad in vitro, a pesar de la diferencia del único átomo de halógeno. Véase la Tabla 5. Se produjo un beneficio significativo en los linajes de células progenitoras tanto eritroides como mieloides tras el tratamiento con el Compuesto 1 sustituido con 2,4-difluoro en relación con el Comparador I.

La Tabla 6 a continuación muestra los resultados de la exposición del cerebro y el plasma tras la administración intravenosa (IV) y oral (PO) de compuestos en ratones.

Tabla 6

Los efectos de 14 días de tratamiento oral con bajas dosis de compuestos en la morfología de espina dendrítica en el hipocampo dorsal (CA1) de ratones de tipo silvestre

Los compuestos se evaluaron para determinar si el tratamiento subcrónico podía producir cambios en la morfología de la espina dendrítica en la región CA1 del hipocampo dorsal en ratones de tipo silvestre. Los compuestos se administraron oralmente a ratones de tipo silvestre, diariamente durante 14 días. Las dosis se determinaron según los datos farmacocinéticos, exposición del cerebro y potencia. A continuación, se evaluaron los efectos de tratamientos de compuestos en la morfología de la espina dendrítica en la región CA1 del hipocampo dorsal.

Procedimientos: en vida

Los ratones macho C57BL/6J ( 7-8 semanas de vida, n=7 por grupo) recibieron dosis orales con compuestos de Rodin o vehículo (20 % de HPI3CD) diariamente durante 14 días. Las dosis para los compuestos se determinaron según los datos de exposición de los experimentos farmacocinéticos. Las dosis de algunos compuestos se eligieron para determinar dosis no eficaces, como una extensión de estudios anteriores que mostraban aumentos en la densidad de la espina dendrítica tras el tratamiento con el Compuesto 2 (en dosis de 1, 3, 6 y 20 mg/kg/día) y el Compuesto 1 (10 mg/kg/día). Los ratones se sacrificaron 24 horas después de la última dosis y se sometieron a perfusión transcardiaca para la preparación de muestras cerebrales.

Procedimiento de perfusión y muestreo cerebral

Se anestesiaron ratones con hidrato de cloral (4 % hidrato de cloral en salina, 10ml/kg) antes de someterlos a perfusión transcardiaca con un 4 % de PFA en 1X PBS (pH 7.4, temperatura ambiente) a 20 ml/min durante 54 segundos. Inmediatamente después de la perfusión, los ratones se decapitaron y se extrajo su cerebro. Los cerebros se fijaron posteriormente en viales de centelleo que contenían un 4 % de PFA (5-10 ml) durante 4 min. Los cerebros se dividieron usando un vibratomo tisular (Leica VT1000) para recolectar secciones (300 gm de espesor) de los extremos anterior a posterior de cada cerebro.

Etiquetado balístico con tinte y microscopía

Se llevó a cabo una microscopía confocal de escaneo láser de superresolución (Zeiss LSM880, Airyscan) usando un objetivo 63X (1,42 NA) para escanear neuronas etiquetadas individualmente a alta resolución (resolución de escaneo = 0,06 um pm/pixel; resolución axial = 0,06 um pm/etapa focal). Las neuronas diana se identificaron en la región de interés del cerebro mediante navegación epifluorescente usando ubicación anatómica y morfología celular. La microscopía se realizó en ciego a las condiciones experimentales. Se evaluó un mínimo de 7 ratones en cada condición experimental. Se midió un mínimo de 5 muestras por ratón (intervalo = 5 - 6 ) para cada segmento.

Análisis de espina dendrítica por ESP y evaluación de la integridad de la membrana dendrítica.

Se aplicó deconvolución ciega (AutoQuant) a imágenes digitales tridimensionales crudas que se analizaron a continuación en cuanto a densidad y morfología espinal por analistas calificados. Se midieron las espinas individuales manualmente con respecto a (a) diámetro de cabeza, (b) longitud y (c) espesor del cuello a partir de apilado en Z de imágenes usando software Afraxis ESP a medida. Cada dendrita fue analizada por 3 (en promedio) analistas independientes. El software de asignación automática de imágenes distribuyó las imágenes a los analistas de manera aleatoria y así se aseguró que cada analista realizara las mediciones de aproximadamente el mismo número de dendritas por grupo. Los analistas se cegaron con respecto a todas las condiciones experimentales (lo que incluye tratamiento, región cerebral y tipo de célula). El análisis estadístico de la variabilidad entre analistas para cada dendrita se examinó en línea y se usó para eliminar las dendritas que no cumplían con los criterios de fiabilidad entre analistas: Para la densidad espinal y la clasificación morfológica espinal, se promediaron los datos de los analistas para notificar datos para cada dendrita.

Posiciones de muestreo dendrítico:

dHIPP, CA1 Apical 2° (0 - 50 pm):

Región del cerebro: Hipocampo dorsal (dHIPP)

Tipo celular: Neurona piramidal CA1 (CA1)

Tipo de ramificación: Apical

Orden de ramificación: Secundario (2°)

Posición de la muestra: 0 - 50 pm del punto de ramificación

Cada espina dendrítica identificada se midió con respecto a (a) longitud espinal, (b) diámetro de cabeza espinal y (c) ancho de cuello. Las distribuciones de población de cada medida se compilaron para cada muestra dendrítica y se agruparon por grupo. Los valores morfométricos de la espina dendrítica sin procesar (longitud espinal, diámetro de cabeza, ancho de cuello) se reunieron en un esquema usado para describir fenotipos espinales clásicos (por ejemplo, hongo, corto y grueso, etc.) La densidad de espinas totales se notificó también como la suma de la densidad de todas las subclases.

Resultados:

Observaciones generales. el procesamiento tisular no demostró indicaciones patológicas observable, que incluye interrupción anormal de membranas somáticas, ampollas dendríticas o modificaciones anormales de diámetros dendríticos para el tipo de célula diana u otros tipos de células dentro de las regiones cerebrales evaluadas. Para un estudio adecuado para el estudio de comparaciones, los datos de densidad de espinas totales se normalizaron a % de niveles de vehículo.

Los datos se notificaron a continuación como la media /- SEM de la densidad de espinas totales (% de aumento respecto del vehículo). Los resultados se indican en la Tabla 7.

Tabla 7. Efectos sobre la morfolo ía es inal en ratones WT des ués de 14 días de dosificación.

A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos que se usan en esta invención tienen el significado generalmente conocido por el experto en la materia.

Claims (8)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula:

o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que los compuestos son de la fórmula:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el compuesto es de la fórmula:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico; y un portador aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

5. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica de la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento de afecciones asociadas con la actividad de HDAC.

6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica de la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento de una afección seleccionada de un trastorno neurológico, trastorno o deterioro en las funciones cognitivas o de la memoria, trastorno de extinción del aprendizaje, enfermedad o infección fúngica, enfermedad inflamatoria, enfermedad hematológica, trastornos psiquiátricos y enfermedad neoplásica.

7. El compuesto o la composición para su uso en la reivindicación 6, en el que la afección es:

a. un trastorno o deterioro en la función cognitiva asociado con la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, pérdida de la memoria inducida por convulsiones, esquizofrenia, síndrome de Rubinstein Taybi, síndrome de Rett, depresión, cromosoma X frágil, demencia de cuerpos de Lewy, demencia vascular, degeneración del lóbulo frontotemporal (demencia frontotemporal, FTD), FTD-GRN, a Dh D, dislexia, trastorno bipolar y trastornos sociales, cognitivos y de aprendizaje asociados con autismo, lesión de cabeza con traumatismo, trastorno por déficit de atención, trastorno de ansiedad, respuesta al miedo condicionado, trastorno de pánico, trastorno obsesivo compulsivo, trastorno por estrés postraumático (PTSD), fobia, trastorno de ansiedad social, recuperación de la dependencia a las sustancias, deterioro de la memoria relacionado con la edad (AAMI), deterioro cognitivo relacionado con la edad (ARCD), ataxia, enfermedad de Parkinson o demencia por enfermedad de Parkinson; o

b. una enfermedad hematológica seleccionada de leucemia mieloide aguda, leucemia promielocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielogena crónica, síndromes mielodisplásicos y anemia de células falciformes; o

c. una enfermedad neoplásica; o

d. un trastorno de extinción del aprendizaje seleccionado de extinción del miedo y trastorno por estrés postraumático.

8. El compuesto o composición para su uso en la reivindicación 7, en el que la afección es enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, demencia frontotemporal, ataxia de Freidreich, trastorno por estrés postraumático (PTSD), enfermedad de Parkinson o recuperación de la dependencia a sustancias.