ES3047399T3 - Pcsk9 antagonist compounds - Google Patents

Abstract

Se describen compuestos de Fórmula I, o una sal de los mismos: donde A, B, D, X, R1, R2 y R8 son como se definen en este documento, compuestos que poseen propiedades antagonizantes de PCSK9. También se describen formulaciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de Fórmula I o sus sales, y métodos para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares y afecciones relacionadas con la actividad de PCSK9, como aterosclerosis, hipercolesterolemia, cardiopatía coronaria, síndrome metabólico, síndrome coronario agudo o enfermedades cardiovasculares y afecciones cardiometabólicas relacionadas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0003] Compuestos antagonistas de PCSK9

[0005] Antecedentes de la invención

[0007] La identificación de compuestos y/o agentes que sean eficaces en el tratamiento de la afección cardiovascular es altamente deseable. En ensayos clínicos, las reducciones de los niveles de colesterol LDL se han relacionado directamente con la tasa de acontecimientos coronarios; Law et al., 2003 BMJ 326:1423-1427. Se observó que la reducción moderada de por vida de los niveles plasmáticos de colesterol LDL se correlacionaba con una reducción sustancial de la incidencia de episodios coronarios; Cohen et al., 2006 N. Engl. J. Med. 354:1264-1272. Este fue el caso incluso en poblaciones con una elevada prevalencia de factores de riesgo cardiovascular no relacionados con los lípidos;supra.Por consiguiente, el control controlado de los niveles de colesterol LDL es muy beneficioso.

[0008] La proproteína convertasa subtilisina-kexina tipo 9 (en lo sucesivo denominada "PCSK9"), también conocida como convertasa 1 regulada por apoptosis neural ("NARC-1"), es una sutilasa similar a la proteinasa K identificada como el miembro 9no de la familia de las sutilasas secretoras; véase Seidah et al., 2003 PNAS 100:928-933. La PCSK9 pertenece a la familia de las proproteína convertasas de serina de mamíferos y contiene una secuencia señal N-terminal, un prodominio, un dominio catalítico y un dominio C-terminal; véase Seidah et al., 2012 Nat. Rev. Drug Discov. 11:367-383. Un estudio de la regulación transcripcional de PCSK9 demostró que está regulada por proteínas de unión a elementos reguladores de esteroles ("SREBP"), como se observa con otros genes implicados en el metabolismo del colesterol; Maxwell et al., 2003 J. Lipid Res. 44:2109-2119, como es típico de otros genes implicados en el metabolismo de las lipoproteínas; Dubuc et al., 2004 Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24:1454-1459. Se ha demostrado que las estatinas regulan al alza la expresión de PCSK9 de una manera atribuida a los efectos reductores del colesterol de los fármacos;supra.Además, se ha demostrado que los promotores de PCSK9 poseen dos sitios conservados implicados en la regulación del colesterol, un elemento regulador de esteroles y un sitio Sp1;supra.

[0010] Mientras que, en el retículo endoplásmico, la PCSK9 realiza como única actividad catalítica un autoescisión entre los residuos Gln-152 y Ser-153; véase Naureckiene et al., 2003 Arch. Biochem. Biophys. 420:55-67; Seidah et al., 2003 Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 100:928-933. El predominio permanece estrechamente asociado al dominio catalítico durante el posterior tráfico a través de la red trans-Golgi. Se ha demostrado que la maduración mediante autoescisión es crítica para la secreción de PCSK9 y su posterior función extracelular (véase Benjannet al., 2012 J. Biol. Chem. 287:33745-33755). En consecuencia, varias líneas de evidencia demuestran que la PCSK9, en particular, disminuye la cantidad de proteína LDLR hepática y, por tanto, compromete la capacidad del hígado para eliminar el colesterol LDL de la circulación.

[0012] La sobreexpresión de PCSK9 mediada por adenovirus en el hígado de ratones da lugar a la acumulación de LDL-C circulante debido a una pérdida drástica de proteína LDLR hepática, sin efecto sobre los niveles de ARNm de LDLR; Benjannet al., 2004 J. Biol. Chem. 279:48865-48875; Maxwell & Breslow, 2004 PNAS 101:7100-7105; Park et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:50630-50638; y Lalanne et al., 2005 J. Lipid Res. 46:1312-1319. El efecto de la sobreexpresión de PCSK9 sobre el aumento de los niveles circulantes de LDL-C en ratones depende completamente de la expresión de LDLR, lo que indica una vez más que la regulación del LDL-C por PCSK9 está mediada por la regulación a la baja de la proteína LDLR. De acuerdo con estos hallazgos, los ratones que carecen de PCSK9 o en los que se ha reducido el ARNm de PCSK9 mediante inhibidores de oligonucleótidos en antisentido presentan niveles más elevados de proteína LDLR hepática y una mayor capacidad para eliminar el LDL-C circulante; Rashid et al., 2005 PNAS 102:5374-5379; y Graham et al., 2007 J. Lipid Res. 48(4):763-767. Además, la disminución de los niveles de PCSK9 en hepatocitos humanos cultivados mediante ARNsi también da lugar a mayores niveles de proteína LDLR y a una mayor capacidad para captar LDL-C; Benjannet al., 2004 J. Biol. Chem.

[0013] 279:48865-48875; y Lalanne et al., 2005 J. Lipid Res. 46:1312-1319. En conjunto, estos datos indican que la acción de la PCSK9 conduce a un aumento del LDL-C al disminuir los niveles de proteína LDLR.

[0015] Varias mutaciones en el gen PCSK9 también se han asociado de forma concluyente con la hipercolesterolemia autosómica dominante ("ADH"), un trastorno hereditario del metabolismo caracterizado por marcadas elevaciones de las partículas de lipoproteína de baja densidad ("LDL") en el plasma que pueden conducir a un fallo cardiovascular prematuro; véase Abifadel et al., 2003 Nature Genetics 34:154-156; Timms et al., 2004 Hum. Genet.

[0016] 114:349-353; Leren, 2004 Clin. Genet. 65:419-422. Un estudio publicado posteriormente sobre la mutación S127R de Abifadelet al., supra,informó de que los pacientes portadores de dicha mutación presentaban un mayor nivel de colesterol total y apoB100 en el plasma atribuido a (1) una sobreproducción de lipoproteínas que contienen apoB100, como lipoproteínas de baja densidad ("LDL"), lipoproteínas de muy baja densidad ("VLDL") y lipoproteínas de densidad intermedia ("IDL"), y (2) una reducción asociada en el aclaramiento o conversión de dichas lipoproteínas; Ouguerram et al., 2004 Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24:1448-1453.

[0018] En consecuencia, no cabe duda de que PCSK9 desempeña un papel en la regulación de LDL. La expresión o regulación al alza de la PCSK9 se asocia a un aumento de los niveles plasmáticos de colesterol LDL, y la correspondiente inhibición o falta de expresión de la PCSK9 se asocia a una reducción de los niveles plasmáticos de colesterol LDL. Se ha descubierto que la disminución de los niveles de colesterol LDL asociada a variaciones en la secuencia de PCSK9 confiere protección frente a la cardiopatía coronaria; Cohen, 2006 N. Engl. J. Med.

[0019] 354:1264-1272.

[0020] Por lo tanto, la identificación de compuestos y/o agentes eficaces en el tratamiento de la aflicción cardiovascular es altamente deseable, incluyendo el antagonismo del papel de PCSK9 en la regulación de LDL, sin embargo, en general, debido a que PCSK9 circula en la sangre y tiene una modesta afinidad de unión a los receptores de LDL de la superficie celular hasta ahora los intentos de utilizar este mecanismo en el tratamiento de enfermedades relacionadas con altos niveles séricos de LDL se han centrado en la utilización de grandes biomoléculas, por ejemplo, anticuerpos. En consecuencia, hay escasas publicaciones que reflejen actividad hacia este objetivo utilizando pequeños péptidos o pequeñas moléculas para inhibir la PCSK9, véase, por ejemplo, Zhang et al., 2014 J. Biol. Chemistry, 289(2): 942-955. NI-YA HE ET AL: "Lowering serum lipids via PCSK9-targeting drugs: current advances and future perspectives", ACTA PHARMACOLOGICA SINICA, vol. 38, no. 3, (2017-01-23), páginas 301­ 311 and RAHUL CHAUDHARY ET AL: "PCSK9 inhibitors: A new era of lipid lowering therapy", WORLD JOURNAL OF CARDIOLOGY, vol. 9, n° 2, 1 de enero de 2017 (2017-01-01) divulgan inhibidores de PCSK9 como el péptido pep2-8 o anticuerpos. Por otra parte, hay una escasez de compuestos que son susceptibles de formulación en una forma de dosificación para la utilización de una vía de administración oral de la dosificación de tales compuestos, una ruta que sería muy deseable para la prestación de la terapia para las condiciones en las que la regulación de las actividades de PCSK9 podría desempeñar un papel.

[0021] La presente invención avanza estos intereses proporcionando antagonistas de PCSK9 que se cree que son de uso para inhibir las actividades de PCSK9 y el papel correspondiente que PCSK9 desempeña en diversas afecciones para las que la administración de un antagonista de PCSK9 proporciona terapia.

[0022] Sumario de la invención

[0023] En un aspecto la invención proporciona un compuesto deFórmula I:

[0026]

[0029] en el que:

[0030] X es H, F, Cl o Br;

[0031] R1 se selecciona entre:

[0032] (a) -H; o

[0033] (b) -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

[0034] (i) -H;

[0035] (ii) -NH2;

[0036] (iii) -N+H3;

[0037] (iv) -N+(H3C)3;

[0038] (v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B en el que R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CHa)2; o -N+(CH3)3;

[0039] (vi) -NH-C(O)-[(CH2)yi2-O-]2-(CH2)yi3R14B en el que:

[0040] y12 e y13 no son a la vez 2 y son independientemente de 2 a 4; y

[0041] R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

[0042] (vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C

[0043] es -O-(CH2)za-N+(CH3)3, en el que za es 3 o 4; o

[0044] (viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

[0045] (ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;

[0046] (aii) -N+(CH3)3; o

[0047] (aiii) una fracción de la fórmula:

[0050]

[0052] R2 se selecciona entre:

[0053] (a) -H; y

[0054] (b) -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A se selecciona de:

[0055] (i) -H;

[0056] (ii) -NH2;

[0057] (iii) -N+H3;

[0058] (iv) -N+(H3C)3;

[0059] (v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B en el que R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

[0060] (vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B en el que:

[0061] y12 e y13 no son a la vez 2 y son independientemente de 2 a 4; y

[0062] R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

[0063] (vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C

[0064] es -O-(CH2)zb-N+(CH3)3, en el que zb es 3 o 4; y

[0065] (viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

[0066] (ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;

[0067] (aii) -N+(CH3)2R14ca, en el que R14ca es -CH3 o -(CH2K 4-OCH3;

[0068] (aiii) una fracción de la fórmula:

[0071]

[0073] (aiv) una fracción de fórmula:

[0074]

[0077] en el que y14Cb e y14Cc son 1 a 4; o

[0078] R1 y R2 pueden unirse entre sí para formar una fracción de la fórmula:

[0081]

[0083] en el que:

[0084] G1, RG1a y RG1b se definen como sigue:

[0085] (a) G1 es una fracción de enlace de la fórmula:

[0088]

[0091] en el que nq1 es de 1 a 6, mq1 es 0, 1 o 2 y juntos el valor de nq1 y mq1 se seleccionan de tal manera que la longitud de la fracción de enlace que definen no supera un total de 8 átomos de carbono y/o de oxígeno que comprenden la cadena, que incluye el átomo de carbono de la cadena que forma la fracción de carbonilo;

[0092] RG1a se selecciona entre: (i) -H; y (ii) alquilo de hasta 4 átomos de carbono; y

[0093] RG1b se selecciona entre:

[0094] (i) una fracción de la fórmula:

[0097]

[0099] y

[0100] (ii) una fracción de fórmula:

[0103]

[0105] o

[0106] (b) G1 es una fracción de enlace de la fórmula:

[0107]

[0109] en el que nq2 es 0, 1 o 2, mq2 es 1 a 6, y conjuntamente el valor de nq2 y mq2 se seleccionan de tal manera que la longitud de la fracción de enlace que definen no exceda de un total de 8 átomos de carbono y/o de oxígeno que comprenden la cadena, que incluye el átomo de carbono de la cadena que forma la fracción de carbonilo;

[0110] RG1a se selecciona entre:

[0111] (i) una fracción de la fórmula:

[0114]

[0117] y

[0118] (ii) una fracción de fórmula:

[0121]

[0124] y

[0125] RG1b se selecciona entre: (i) -H; y (ii) alquilo de hasta 4 átomos de carbono; R8 es -CH3 o una fracción de la fórmula:

[0128]

[0131] en el que R8a es -H, o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono;

[0132] A se selecciona entre:

[0133] (a) una fracción de la fórmula:

[0135]

[0137] (c) una fracción de fórmula:

[0138]

[0141] , en el que Ab1 es:

[0142] (i) una fracción de la fórmula:

[0145]

[0148] en el que x es de 1 a 6; o

[0149] (ii) una fracción de fórmula:

[0152]

[0155] en el que y es de 1 a 5;

[0156] (d) una fracción de fórmula: -CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-, en el que m = 1 a 5, y n= 0 o 1 a 4;

[0157] Bes:

[0158] (a) un enlace;

[0159] (b) -(CH2)1-2; o

[0160] (c) una fracción de la fórmula:

[0163]

[0165] Des:

[0166] (a) una fracción de la Fórmula:

[0169]

[0172] en el queEes -CH2- o -(CH2)2-4-O-, yAyBson como se han definido anteriormente; (b) una fracción de fórmula:

[0175]

[0176] , en el queAyBson como se definen anteriormente;

[0177] (c) una fracción de fórmula:

[0180]

[0182] en el que na es 1, 2 o 3, ma es 2, 3 o 4, y na ma es > 3, y en el queAyBson como se han definido anteriormente;

[0183] (d) una fracción de fórmula:

[0186]

[0188] en el que, R34b es -H o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono, yAyBson como se han definido anteriormente,

[0189] o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0190] En otra realización, la invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que X es F. En algunas realizaciones, es preferente queDsea una fracción de la fórmula:

[0193]

[0195] en el queEes -CH2- o -(CH2)2-O-, yAyBson como se definen en el presente documento.

[0196] En algunas realizaciones, es preferente que D sea una fracción de la fórmula:

[0199]

[0201] en el queEes -CH2- o -(CH2)2-O-, yAyBson como se definen en el presente documento.

[0202] En algunas realizaciones es preferente que D sea una fracción de la Fórmula:

[0203]

[0205] en el queAyBson como se definen en el presente documento.

[0206] En algunas realizaciones, es preferente queDsea una fracción de la fórmula:

[0209]

[0211] en el queAyBson como se definen en el presente documento.

[0212] En algunas realizaciones, es preferente que D sea una fracción de la fórmula:

[0215]

[0217] en el que A y B son como se definen en el presente documento.

[0218] En algunas realizaciones, es preferente queDsea una fracción de la fórmula:

[0221]

[0223] en el queAyBson como se definen en el presente documento.

[0224] En algunas realizaciones, es preferente queDsea una fracción de la fórmula:

[0227]

[0229] en el queAyBson como se definen en el presente documento.

[0230] En algunas realizaciones, es preferente queDsea una fracción de la fórmula:

[0231]

[0233] en el queAyBson como se definen en el presente documento.

[0234] En algunas realizaciones en las que R1 y R2 están unidos, junto con el anillo peptídico al que están unidos formando así una estructura cíclica, es preferente que R1 y R2 formen una fracción de la estructura:

[0236]

[0238] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tenga la estructura deFórmula IIB:

[0240]

[0242] B1 es -((CH2)0-2)-; y

[0243] D1 es:

[0244] (a) una fracción de la fórmula:

[0246]

[0248] (b) una fracción de la fórmula:

[0249]

[0251] (c) una fracción de la fórmula:

[0253]

[0255] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tenga la estructura deFórmula IIC:

[0257]

[0259] en el que

[0260] D2 es:

[0261] una fracción de la fórmula:

[0263]

[0265] (b) una fracción de la fórmula:

[0267]

[0269] (c) una fracción de la fórmula:

[0270]

[0272] (d) una fracción de la fórmula:

[0274]

[0276] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tenga la estructura deFórmula IID:

[0278]

[0280] en el queD2 es:

[0281] (a) una fracción de fórmula:

[0283]

[0285] tal como

[0287]

[0289] (b) una fracción de la fórmula:

[0290]

[0292] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tenga la estructura deFórmula IIE:

[0294]

[0296] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tenga la estructura de FórmulaIIF:

[0298]

[0300] En algunas realizaciones es preferente queAsea:

[0301] (a) -(CH2K

[0302] (b) una fracción de fórmula:

[0305]

[0308] en el que x es de 1 a 3; o

[0309] (c) una fracción de la fórmula:

[0312]

[0315] En algunas realizaciones es preferente que R2 sea -(CH2)z-R14A, en el que z es 1-6, y R14A es:

[0316] (a) -H;

[0317] (b) -NH2;

[0318] (c) -N+H3;

[0319] (d) -N+(HaC)a;

[0320] (e) -NH-C(O)-[(CH2)2-4-O-]2-4-(CH2)2-4R14B en el que R14B

[0321] es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

[0322] (f) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

[0323] (ai) -O-(CH2)2-4-N+(CH3)3;

[0324] (aii) -N+(CH3)3; o

[0325] (aiii) una fracción de la fórmula:

[0328]

[0330] En algunas realizaciones es preferente que R1 se seleccione de:

[0331] (a) -H;

[0332] (b) -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

[0333] (i) -H;

[0334] (ii) -N+H3; o

[0335] (iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N+(CH3)3.

[0336] En algunas realizaciones es preferente que R8 sea una fracción de la fórmula:

[0337]

[0340] en el que R8b es -H, -CH3, o -C(CHa)a.

[0341] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, sea un compuesto de Fórmula I, en el que:

[0342] X es F;

[0343] R1 es -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

[0344] (i) -H;

[0345] (ii) -NH2;

[0346] (iii) -N+H3; o

[0347] (iv) -N+(H3C)3;

[0348] R2 es -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A se selecciona entre:

[0349] (i) -H;

[0350] (ii) -NH2;

[0351] (iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B en el que R14B

[0352] es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3^;

[0353] (iv) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B en el que:

[0354] y12 e y13 no son a la vez 2 y son independientemente de 2 a 4; y

[0355] R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

[0356] (v) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C

[0357] es -O-(CH2)zb-N+(CH3)3, en el que zb 3 o 4; y

[0358] (vi) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

[0359] (ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;

[0360] (aii) -N+(CH3)2R14ca, en el que R14ca es -CH3 o -(CH2)1-4-OCH3;

[0361] (aiii) una fracción de la fórmula:

[0364]

[0366] (aiv) una fracción de fórmula:

[0369]

[0370] en el que y14Cb e y14Cc son de 1 a 4;

[0371] R8 es -CH3 o una fracción de la fórmula:

[0374]

[0377] en el que R8a es -H, o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono;

[0378] Ase selecciona entre:

[0379] (a) una fracción de la fórmula:

[0382]

[0384] (b) -CH2-(CH2)y-CH2-, en el que y de 1 a 6 ;

[0385] (c) una fracción de fórmula:

[0388]

[0390] en el que Ab1 es:

[0391] (i) una fracción de la fórmula:

[0394]

[0397] en el que x es de 1 a 6 ; o

[0398] (ii) una fracción de fórmula:

[0401]

[0404] en el que y es de 1 a 5; y

[0405] (d) una fracción de fórmula: -CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-, en el que m = 1 a 5, y n= 0 o 1 a 4;

[0406] Bes:

[0407] (a) -(CH2K 2-; o

[0408] (b) una fracción de la fórmula:

[0409]

[0411] Des:

[0412] (a) una fracción de la Fórmula:

[0415]

[0418] en el queEes -CH2- o -(CH2)2-4-O-, yAyBson como se han definido anteriormente;

[0419] (b) una fracción de fórmula:

[0422]

[0425] en el queAyBson como

[0426] (c) una fracción de fórmula:

[0429]

[0432] en el que, R34b es -H o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono, yAyBson como se han definido anteriormente.

[0433] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, sea un compuesto de Fórmula I, en el que:

[0434] X es F; y

[0435] Aes -CH2-(CH2)y-CH2-, en el que y es 3-5, opcionalmente en el que A es -(CH2)a-.

[0436] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, sea un compuesto de Fórmula I, en el que:

[0437] X es F; y

[0438] Bes una fracción de la fórmula:

[0439]

[0441] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, sea un compuesto de Fórmula I, en el que:

[0442] X es F; y

[0443] R1 es -(CH2)z-R14A, en el que z es 1-6 y R14A es -H, opcionalmente en el que z es 1.

[0444] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, sea un compuesto de Fórmula I, en el que:

[0445] X es F; y

[0446] R2 es -(CH2)z-R14A, en la que z es de 1-6 y R14A es -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es -N+(CH3)2R14ca, en el que R14ca es -CH3.

[0447] En algunas realizaciones, el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:

[0450]

[0451]

[0452]

[0454] en el que A- es un anión farmacéuticamente aceptable.

[0455] En algunas realizaciones el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:

[0457]

[0458]

[0459]

[0460]

[0461]

[0462]

[0463]

[0465] ; y

[0467]

[0469] o cualquier forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

[0470] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto tenga la estructura:

[0472]

[0474] , en el que A- es un anión farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, en el que el compuesto es:

[0475]

[0477] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto tenga la estructura:

[0479]

[0481] , en el que A- es un anión farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, en el que el compuesto es:

[0483]

[0485] En algunas realizaciones es preferente que el compuesto tenga la estructura:

[0487]

[0488] en el que A- es un anión farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, en el que el compuesto es:

[0491]

[0494] En una realización, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la invención, por ejemplo, un compuesto de Fórmula I, y al menos un excipiente farmacéutico, preferiblemente una composición dirigida a la administración oral.

[0496] En un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto o composición de la invención para su utilización en el tratamiento de la hipercolesterolemia.

[0498] La información técnica expuesta a continuación puede en algunos aspectos ir más allá del alcance de la presente invención, que se define por las reivindicaciones. La información técnica adicional se proporciona para situar la presente invención en un contexto técnico más amplio y para ilustrar posibles desarrollos técnicos relacionados.

[0499] Las referencias a métodos de tratamiento en el presente documento deben interpretarse como referencias a compuestos y composiciones farmacéuticas de la presente invención para su utilización en dichos métodos.

[0500] Descripción detallada de la invención

[0502] En la descripción que sigue se emplea representación estructural convencional e incluye notación estereoquímica convencional para ciertos centros de carbono asimétricos.

[0504] Así, la representación estructural de los compuestos de la invención incluye notación estereoquímica convencional para algunos centros de carbono asimétricos mostrados en los compuestos de ejemplo. Por lo tanto, en estos casos, los enlaces en "cuña" de color negro sólido representan enlaces que sobresalen del plano del medio de reproducción, los enlaces en "cuña alisada" representan enlaces descendentes hacia el plano del medio de reproducción, y una línea "ondulada" añadida a un carbono con un doble enlace indica que se incluyen tanto las posibles orientaciones cis como trans. Como es habitual, las líneas continuas representan todas las configuraciones espaciales de la unión representada. Por consiguiente, cuando no se proporciona una notación estereoquímica específica, la representación contempla todas las orientaciones estereoquímicas y espaciales de las características estructurales.

[0506] Como se muestra en los ejemplos de la invención, y se ha mencionado anteriormente, los centros de carbono asimétricos particulares se representan estructuralmente utilizando la representación de enlace convencional "Cuña Sólida" y "Cuña de Salteado". En su mayor parte, la configuración absoluta no se ha determinado para los compuestos de ejemplo, sino que se ha asignado por analogía a compuestos de ejemplo específicos de configuraciones estereoquímicas conocidas (determinadas por cristalografía de rayos X) preparados utilizando las mismas condiciones de reacción o análogas y reactivos de partida y aislados en las mismas condiciones cromatográficas. En consecuencia, la asignación específica de las configuraciones representadas estructuralmente en el presente documento tiene por objeto identificar los compuestos específicos preparados que tienen un exceso de un estereoisómero particular y no se presenta necesariamente en el presente documento como una declaración de la determinación absoluta de la estructura estereoquímica de dicho compuesto, a menos que se indique lo contrario en los datos presentados.

[0508] Se apreciará que cuando se obtienen mezclas isoméricas, la preparación de estereoisómeros individuales en porcentajes significativos de exceso enantiomérico puede llevarse a cabo, si se desea, mediante separación de la mezcla utilizando métodos habituales, por ejemplo, por cromatografía o cristalización, o mediante la utilización de materiales de partida estereoquímicamente uniformes para la síntesis descrita, o mediante síntesis estereoselectiva. Opcionalmente, puede realizarse una derivatización antes de la separación de los estereoisómeros. La separación de una mezcla de estereoisómeros puede llevarse a cabo en un paso intermediario durante la síntesis de un compuesto de Fórmula I o puede realizarse sobre un producto racémico final.

[0509] Donde se indica en el presente documento, la estereoquímica absoluta se determina mediante cristalografía de rayos X de productos cristalinos o intermediarios cristalinos que se derivatizan, si es necesario, con un reactivo que contiene un centro estereogénico de configuración conocida. A menos que se indique un isómero, sal, solvato (que incluye hidratos) o sal solvatada particular de dicho racemato, enantiómero o diastereómero, la presente invención incluye todos dichos isómeros, así como sales, solvatos (que incluye hidratos) y sales solvatadas de dichos racematos, enantiómeros, diastereómeros y mezclas de los mismos.

[0511] La presente invención también abarca compuestos marcados isotópicamente de la presente invención que son estructuralmente idénticos a los recitados en el presente documento, pero por el hecho de que un porcentaje estadísticamente significativo de uno o más átomos en esa forma del compuesto se sustituyen por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico del isótopo más abundante que se encuentra normalmente en la naturaleza, alterando así la abundancia natural de ese isótopo presente en un compuesto de la invención. La presente invención pretende incluir todas las variaciones isotópicas adecuadas de los compuestos de Fórmula I.

[0513] Ejemplos de isótopos que pueden incorporarse preferiblemente en compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, yodo, flúor y cloro, por ejemplo, pero sin limitarse a: 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 180 , 31P, 32P, 35S, 18F, y 36Cl, 123I, e 125I. Se apreciará que también pueden incorporarse otros isótopos por medios conocidos.

[0515] En particular, se reconoce que ciertos compuestos marcados isotópicamente de la invención (por ejemplo, los marcados con 3H, 11C, y 14C) son particularmente útiles en ensayos de distribución tisular de compuestos y/o sustratos utilizando una variedad de técnicas conocidas. Además, los compuestos de la invención contemplan la sustitución isotópica incluyen diferentes formas isotópicas de hidrógeno (H), incluyendo protio (1H) y deuterio (2H o D). El protio es el isótopo de hidrógeno predominante en la naturaleza. El enriquecimiento en deuterio puede ofrecer ciertas ventajas terapéuticas, como el aumento de la semividain vivoo la reducción de los requisitos de dosificación, o puede proporcionar un compuesto útil como patrón para la caracterización de muestras biológicas. Los compuestos enriquecidos isotópicamente dentro de la Fórmula I pueden prepararse sin experimentación indebida mediante técnicas convencionales bien conocidas por los expertos en la materia o mediante procesos análogos a los descritos en los Esquemas y Ejemplos del presente documento utilizando reactivos y/o productos intermediarios enriquecidos isotópicamente apropiados.

[0517] Cuando una línea ondulada termina un enlace convencional (en contraposición a la conexión de dos átomos dentro de una estructura) indica un punto de enlace a una estructura, por ejemplo:

[0520]

[0523] indica que la fracción de butilo secundario está unida a través del grupo metileno mediante el enlace terminado con la línea ondulada. Cuando se utiliza una notación alfabética para representar una fracción sustituyente, se emplea un guion para indicar el punto de unión al sustrato indicado, por ejemplo: -CH2-C(O)-CH2Cl indica que la fracción de cloruro de acetilo está unida a través de la porción de metileno de la fracción.

[0525] Cuando cualquier variable (por ejemplo, n, Ra, Rb, etc.) aparece más de una vez en cualquier constituyente o en la Fórmula I, su definición en cada aparición es independiente de su definición en cada otra aparición a menos que se especifique lo contrario en el punto de definición. Un experto en la materia reconocerá que la elección de las combinaciones de los diversos sustituyentes definidos en una representación estructural,es decir.R1, RA, etc., deben elegirse de conformidad con principios bien conocidos de conectividad y estabilidad de estructuras químicas, y las combinaciones de sustituyentes y/o variables sólo son permisibles si tales combinaciones dan lugar a compuestos estables.

[0527] Un compuesto "estable" es un compuesto que puede prepararse y aislarse y cuya estructura y propiedades permanecen o puede hacerse que permanezcan esencialmente inalteradas durante un periodo de tiempo suficiente para permitir la utilización del compuesto para los fines descritos en el presente documento(por ejemplo,administración terapéutica a un sujeto). Los compuestos de la presente invención se limitan a compuestos estables abarcados por la Fórmula I.

[0529] Cuando cualquier variable o fracción se expresa en forma de intervalo, por ejemplo (-CH2O1-4, se incluyen tanto los extremos del intervalo especificado (es decir, 1 y 4 en el ejemplo) como todos los valores numéricos enteros intermediarios (es decir, 2 y 3 en el ejemplo).

[0531] El término "halógeno" incluye flúor, cloro, bromo y yodo a menos que se especifique lo contrario en el punto de uso.

[0532] Tal como se utiliza el término en el presente documento, "sujetos" (alternativamente "pacientes") se refiere a un animal, preferiblemente un mamífero, y en particular un humano o un animal no humano incluyendo animales de ganado y animales domésticos incluyendo, pero no limitándose a, ganado vacuno, caballos, ovejas, cerdos, cabras, conejos, gatos, perros y otros mamíferos que necesitan tratamiento. En algunas realizaciones, el sujeto es preferiblemente un ser humano. Como se utiliza en el presente documento, el término "administración" y sus variantes (por ejemplo, "administrar" un compuesto) en referencia a un compuesto de Fórmula I significa proporcionar el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un sujeto que necesita tratamiento.

[0533] Como se ha mencionado anteriormente, en un aspecto la presente invención incluye la provisión de compuestos deFórmula I,o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, que tienen propiedades que antagonizan la función de PCSK9.

[0534] En una realización, los compuestos de Fórmula I tienen la estructura de Fórmula IA:

[0537]

[0540] en el que:

[0541] R1 se selecciona entre:

[0542] (a) -H; o

[0543] (b) -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

[0544] (i) -H;

[0545] (ii) -NH2;

[0546] (iii) -N+H3;

[0547] (iv) -N+(H3C)3;

[0548] (v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B en el que R14B

[0549] es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3^;

[0550] (vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]1-4-(CH2)y13R14B, preferiblemente -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B en el que:

[0551] y12 e y13 no son a la vez 2 y son independientemente de 2 a 4; y

[0552] R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

[0553] (vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C

[0554] es -O-(CH2)za-N+(CHs)3, en el que za es 3 o 4; y

[0555] (viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

[0556] (ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;

[0557] (aii) -N+(CH3)3; o

[0558] (aiii) una fracción de la fórmula:

[0561]

[0563] R2 se selecciona entre:

[0564] (a) -H; y

[0565] (b) -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A se selecciona de:

[0566] (i) -H;

[0567] (ii) -NH2;

[0568] (iii) -N+H3;

[0569] (iv) -N+(H3C)3;

[0570] (v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]1-4-(CH2)2R14B, preferiblemente -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B en el que R14B es:

[0571] -NH2; -N+H3; -N(CH3)2 ; o -N+(CH3)3;

[0572] (vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B en el que:

[0573] y12 e y13 no son a la vez 2 y son independientemente de 2 a 4; y

[0574] R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

[0575] (vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C

[0576] es -O-(CH2)zb-N+(CH3)3, en el que zb 3 o 4; y

[0577] (viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

[0578] (ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;

[0579] (aii) -N+(CH3)2R14ca, en el que R14ca es -CH3 o -(CH2K 4-OCH3;

[0580] (aiii) una fracción de fórmula:

[0582]

[0584] (aiv) una fracción de fórmula:

[0585]

[0587] donde y14Cb e Y14Cc son 1 a 4; o

[0588] R1 y R2 pueden unirse entre sí para formar una fracción de la fórmula:

[0591]

[0594] en el que:

[0595] G1, RG1a y RG1b se definen como sigue:

[0596] (a) G1 es una fracción de enlace de la fórmula:

[0599]

[0602] en el que nq1 es de 1 a 6, mq1 es 0, 1 o 2 y juntos el valor de nq1 y mq1 se seleccionan de tal manera que la longitud de la fracción de enlace que definen no supera un total de 8 átomos de carbono y/o de oxígeno que comprenden la cadena, que incluye el átomo de carbono de la cadena que forma la fracción de carbonilo;

[0603] RG1a se selecciona entre: (i) -H; y (ii) alquilo de hasta 4 átomos de carbono; y

[0604] RG1b se selecciona entre:

[0605] (i) una fracción de la fórmula:

[0608]

[0611] ; y

[0612] (ii) una fracción de fórmula:

[0615]

[0618] o

[0619] (b) G1 es una fracción de enlace de la fórmula:

[0620]

[0623] en el que nq2 es 0, 1 o 2, mq2 es 1 a 6, y conjuntamente el valor de nq2 y mq2 se seleccionan de tal manera que la longitud de la fracción de enlace que definen no exceda de un total de 8 átomos de carbono y/o de oxígeno que comprenden la cadena, que incluye el átomo de carbono de la cadena que forma la fracción de carbonilo;

[0624] RG1a se selecciona entre:

[0625] (i) una fracción de la fórmula:

[0628]

[0631] y

[0632] (ii) una fracción de fórmula:

[0635]

[0638] y

[0639] RG1b se selecciona entre: (i) -H; y (ii) alquilo de hasta 4 átomos de carbono; R8 es -CH3 o una fracción de la fórmula:

[0642]

[0645] en el que R8a es -H, o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono;

[0646] A se selecciona entre:

[0647] (a) una fracción de la fórmula:

[0649]

[0652] (b) -CH2-(CH2)y-CH2-, en el que y de 1 a 6 ;

[0653] (c) una fracción de fórmula:

[0654]

[0657] , en el que Ab1 es:

[0658] (i) una fracción de la fórmula:

[0661]

[0664] en el que x es de 1 a 6; o

[0665] (ii) una fracción de fórmula:

[0668]

[0671] en el que y es de 1 a 5;

[0672] (d) una fracción de fórmula: -CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-, en el que m = 1 a 5, y n= 0 o 1 a 4; B es:

[0673] (a) un enlace;

[0674] (b) -(CH2)1-4; o

[0675] (c) una fracción de la fórmula:

[0677]

[0680] (a) una fracción de la Fórmula:

[0683]

[0686] en el que E es -CH2- o -(CH2)2-4-O-, y A y B son como se han definido anteriormente; (b) una fracción de fórmula:

[0689]

[0690] en el que A y B son como se definen anteriormente;

[0691] (c) una fracción de fórmula:

[0694]

[0697] en el que na es 1, 2 o 3, ma es 2, 3 o 4, y na ma es al menos 3, y en el que A y B son como se han definido anteriormente;

[0698] (d) una fracción de la fórmula:

[0701]

[0703] en el que, R34b es -H o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono, y A y B son como se han definido anteriormente,

[0704] o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de ellos.

[0705] En una realización de los compuestos de Fórmula IA, R1 es -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

[0706] (i) -H;

[0707] (ii) -NH2;

[0708] (iii) -N+H3; o

[0709] (iv) -N+(H3C)3;

[0710] R2 es -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A se selecciona entre:

[0711] (i) -H;

[0712] (ii) -NH2;

[0713] (iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]1-4-(CH2)2R14B, preferiblemente -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B en el que R14B es: -NH2;

[0714] -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

[0715] (iv) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B en el que:

[0716] y12 e y13 no son a la vez 2 y son independientemente de 2 a 4; y

[0717] R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

[0718] (v) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C

[0719] es -O-(CH2)zb-N+(CH3)3, en el que zb 3 o 4; y

[0720] (vi) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

[0721] (ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;

[0722] (aii) -N+(CH3)2R14ca, en el que R14ca es -CH3 o -(CH2)1-4-OCH3;

[0723] (aiii) una fracción de fórmula:

[0724]

[0726] (aiv) una fracción de fórmula:

[0728]

[0731] donde Y14Cb e Y14Cc son 1 a 4; o

[0732] R8 es -CH3 o una fracción de la fórmula:

[0734]

[0736] en el que R8a es -H, o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono; A se selecciona entre:

[0737] (a) una fracción de la fórmula:

[0739]

[0741] (c) una fracción de fórmula:

[0744]

[0747] en el que Ab1 es:

[0748] (i) una fracción de la fórmula:

[0751]

[0754] en el que x es de 1 a 6 ; o

[0755] (ii) una fracción de fórmula:

[0758]

[0761] en el que y es de 1 a 5; y

[0762] (d) una fracción de fórmula: -CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-, en el que m = 1 a 5, y n= 0 o 1 a 4;

[0763] B es:

[0764] (a) -(CH2)1-4; o

[0765] (b) una fracción de la fórmula:

[0768]

[0771] D es:

[0772] (a) una fracción de la Fórmula:

[0775]

[0778] en el que E es -CH2- o -(CH2)2-4-O-, y A y B son como se han definido anteriormente;

[0779] (b) una fracción de fórmula:

[0782]

[0785] en el que A y B son como

[0786] (c) una fracción de fórmula:

[0789]

[0792] en el que, R34b es -H o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono, y A y B son como se han definido anteriormente,

[0793] o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de ellos.

[0795] En una realización del compuesto de Fórmula IA, D es una fracción de la fórmula:

[0798]

[0801] en el que, E es -CH2- o -(CH2)2-O-, y A y B son como se definen anteriormente en la Fórmula IA.

[0803] En una realización del compuesto de Fórmula IA, A es:

[0804] (a) -(CH2)a;

[0805] (b) una fracción de fórmula:

[0808]

[0811] en el que x es de 1 a 3; o

[0812] (c) una fracción de la fórmula:

[0815]

[0818] En otra realización del compuesto de Fórmula IA, R2 es:

[0819] (a) -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

[0820] (a) -H;

[0821] (b) -CH3;

[0822] (c) -NH2;

[0823] (d) -N+H3;

[0824] (e) -N+(H3C)3;

[0825] (f) -NH-C(O)-[(CH2)2-4-O-]2-4-(CH2)2-4R14B en el que R14B

[0826] es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3^;

[0827] (g) -NH-C(O)-[(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

[0828] (ai) -O-(CH2)2-4-N+(CH3)3;

[0829] (aii) -N+(CH3)3; o

[0830] (aiii) una fracción de la fórmula:

[0831]

[0833] (b) una fracción de la fórmula

[0836]

[0839] En otra realización del compuesto de Fórmula IA, R1 se selecciona de:

[0840] (a) -H;

[0841] (b) -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

[0842] (i) -H;

[0843] (ii) -N+H3; o

[0844] (iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N+(CH3)3.

[0845] En otra realización más del compuesto de Fórmula IA, A es-CH2-(CH2)y-CH2-, en el que y es 3-5. En otra realización, A es -(CH2)a.

[0846] En otra realización del compuesto de Fórmula IA, B es una fracción de la fórmula:

[0849]

[0852] En otra realización del compuesto de Fórmula IA, R1 es -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es -H. En otra realización del compuesto de Fórmula IA, R1 es -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1, y R14A es -H.

[0853] En otra realización del compuesto de Fórmula IA, R2 es -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1 a 6, y R14A es -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es -N+(CH3)2R14ca, en el que R14ca es -CH3.

[0854] En otra realización del compuesto de Fórmula IA, R8 es una fracción de la fórmula:

[0857]

[0859] en el que R8a es -H o alquilo lineal de hasta cuatro átomos de carbono. En otra realización, R8 es una fracción de la fórmula:

[0860]

[0862] en el que R8b es -H, -CH3, o -C(CH3)3.

[0863] En algunas realizaciones, es preferente que los compuestos de Fórmula I tengan la estructura de Fórmula II o Fórmula IIA, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:

[0865]

[0867] en el que, A, R1 y R2 son como se definen anteriormente en la Fórmula IA y B1 es -(CH2)ü-2, y D' se selecciona entre:

[0868] a) una fracción de fórmula:

[0869]

[0872] y

[0873] b) una fracción de la fórmula:

[0876]

[0879] En algunas realizaciones de Fórmula II o Fórmula IIA, es preferente que D1 sea una fracción de la fórmula:

[0882]

[0884] En algunas realizaciones Fórmula II o Fórmula IIA, es preferente que D1 sea una fracción de la fórmula:

[0887]

[0889] En algunas realizaciones de Fórmula II o Fórmula IIA, es preferente que D1 sea una fracción de la fórmula:

[0892]

[0894] En algunas realizaciones de Fórmula II o Fórmula IIA, es preferente que D1 sea una fracción de la fórmula:

[0897]

[0899] En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula I es preferiblemente un compuesto de Fórmula III:.

[0900]

[0902] en el que, A, R1 y R2 son como se definen anteriormente en la Fórmula IA y D2 es una fracción de la fórmula:

[0905]

[0907] En algunas realizaciones de la Fórmula III, es preferente que D2 sea una fracción de la fórmula:

[0910]

[0912] En algunas realizaciones de la Fórmula III, es preferente que D2 sea una fracción de la fórmula:

[0915]

[0917] En algunas realizaciones de la Fórmula III, es preferente que D2 sea una fracción de la fórmula:

[0920]

[0922] En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula I es preferiblemente un compuesto de Fórmula IV:.

[0923]

[0925] en el que, A, R1 y R2 son como se definen anteriormente en la Fórmula IA.

[0927] En algunas realizaciones el compuesto de Fórmula I es un compuesto de Fórmula V:

[0930]

[0933] en la que

[0934] A, B, R1 y R2 son como los definidos anteriormente en la fórmula IA; y

[0935] D2 es:

[0936] (a) una fracción de la fórmula:

[0937]

[0939] (b) una fracción de la fórmula:

[0942]

[0944] (c) una fracción de fórmula:

[0947]

[0949] ; o

[0950] (d) una fracción de la fórmula:

[0953]

[0955] En algunas realizaciones de Fórmula I, Fórmula IA, Fórmula II, Fórmula IIA, Fórmula III, Fórmula IV o Fórmula V, es preferente que A sea una fracción de la fórmula: -(CH2)ya, en el que ya de 4 a 6. En algunas realizaciones de Fórmula I, Fórmula IA, Fórmula II o Fórmula IIA, es preferente que A sea una fracción de la fórmula: -CH2-(CH2)ma-O-(CH2)na-, donde ma es 2 o 3 y na es 0 o 1. En algunas realizaciones de Fórmula III, Fórmula IV o Fórmula V, es preferente que A sea una fracción de la fórmula: -CH2-(CH2)ma-O-(CH2)na-, donde ma es 2 o 4 y na es 0, 1 o 2. En algunas realizaciones de Fórmula I, Fórmula IA, Fórmula II, Fórmula IIA, Fórmula III, Fórmula IV o Fórmula V, es preferente que A sea una fracción de la fórmula:

[0958]

[0961] en el que yb es de 1 a 3. En algunas realizaciones de Fórmula I, Fórmula IA, Fórmula II, Fórmula IIA, Fórmula III, Fórmula IV, o Fórmula V, es preferente que A sea una fracción de la fórmula:

[0964]

[0966] También se proporcionan en el presente documento como compuestos de Fórmula I los compuestos Ej-1, Ej-2, Ej-3, Ej-4, Ej-5, Ej-6, Ej-7, Ej-8, Ej-9, Ej-10, Ej-11, Ej-12, Ej-13, Ej-14, Ej-15, Ej-16, Ej-17, Ej-18, Ej-19, Ej-20, Ej-21, Ej-22, Ej-23, Ej-24, Ej-25, Ej-26, Ej-27, Ej-28, Ej-29, Ej-31, Ej-35, Ej-36, Ej-38, Ej-39, Ej-40, Ej-41, Ej-44, Ej-47, Ej-48, Ej-49, Ej-50, Ej-51, Ej-52, Ej-53, Ej-54, Ej-55, Ej-56, Ej-57, Ej-58, Ej-59, Ej-60 y Ej-61, o cualquier sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Estos compuestos, que se describen en la Tabla 1, también se denominan en el presente documento "compuestos de la invención".

[0967]

[0970] 

[0973] 

[0976] 

[0979] 

[0980]

[0981]

[0982]

[0983]

[0984]

[0985]

[0988] 

[0991]  en el que A- es un anión farmacéuticamente aceptable.

[0993] El término "sal(es)", y su uso en la frase "sales farmacéuticamente aceptables" empleada en el presente documento, incluye cualquiera de las siguientes: sales ácidas formadas con ácidos inorgánicos y/u orgánicos, sales básicas formadas con bases inorgánicas y/u orgánicas, complejos zwitteriónicos y de amonio cuaternario. Las sales de los compuestos de la invención pueden formarse por métodos conocidos por los expertos en la materia, por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto de la invención con una cantidad de ácido o base, como una cantidad equivalente, en un medio en el que precipite la sal o en un medio acuoso, seguido de liofilización.

[0994] Los compuestos de la invención contienen átomos de nitrógeno tricoordinados, por ejemplo, aminoácidos primarios, secundarios o terciarios, en los que, como es sabido, el par solitario de electrones que reside en el átomo de nitrógeno puede protonarse con un ácido apropiado o alquilarse con un reactivo apropiado, por ejemplo, bromuro de alquilo, en las condiciones de reacción apropiadas para proporcionar nitrógeno cargado tetracoordinado estabilizado por un anión generado en el proceso, por ejemplo, un ion halógeno o una base conjugada. Por consiguiente, los compuestos de la invención pueden prepararse en forma de base libre o aislarse en forma de complejo cuaternario o complejo salino. En algunos casos, cuando hay un protón ácido apropiado próximo a un nitrógeno básico, es posible la formación de un complejo zwitteriónico. Tal como se emplea el término en el presente documento, las sales de los compuestos inventivos, ya sean sales ácidas formadas con ácidos inorgánicos y/u orgánicos, sales básicas formadas con bases inorgánicas y/u orgánicas, sales formadas que incluyen carácter zwitteriónico, por ejemplo, cuando un compuesto contiene tanto una fracción básica, por ejemplo, pero no limitado a, un átomo de nitrógeno, por ejemplo, una amina, piridina o imidazol, y una fracción ácida, por ejemplo, pero no limitado a un ácido carboxílico, y complejos de amonio cuaternario se incluyen en el ámbito de los compuestos inventivos descritos en el presente documento.

[0996] Por consiguiente, la representación estructural de compuestos de la invención ya sea en una forma de base libre, una forma de sal, una forma zwitteriónica o una forma de amonio cuaternario, también incluye todas las demás formas de tales compuestos discutidas anteriormente. Así, un aspecto de la invención es la provisión de compuestos de la invención en forma de sal farmacéuticamente aceptable, complejo zwitteriónico o complejo de amonio cuaternario. Los expertos en la materia reconocerán aquellos casos en los que los compuestos de la invención pueden formar dichos complejos, incluyendo aquellos en los que un nitrógeno tetracoordinado puede ser cuaternizado o protonado y la forma de nitrógeno cargado estabilizada por un anión asociado. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal (incluido un complejo de amonio cuaternario y una sal interna como un complejo zwitteriónico) que posee una eficacia similar o superior a una forma de base libre del compuesto y que no es biológicamente o de otro modo indeseable (por ejemplo, no es tóxica ni de otro modo deletérea para el receptor del mismo).

[0998] La formación de sales farmacéuticamente útiles a partir de compuestos farmacéuticos básicos (o ácidos) se discute, por ejemplo, por S. Berge et al., Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, Nueva York; en The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. en su sitio web); y P Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts:. Properties, Selection, and Use, (2002) Int'l. Union of Pure and Applied Chemistry, pp. 330-331.

[1000] La presente invención contempla tanto formas de base libre de los compuestos de la invención como todas las sales disponibles, incluidas las sales que se reconocen generalmente como seguras para su utilización en la preparación de formulaciones farmacéuticas y las que pueden formarse actualmente dentro de la habilidad ordinaria en la técnica y se clasifican posteriormente como "reconocidas generalmente como seguras" para su utilización en la preparación de formulaciones farmacéuticas, denominadas en el presente documento "sales farmacéuticamente aceptables." Como se apreciará, los compuestos de base libre pueden prepararse controlando las condiciones de aislamiento del compuesto durante la síntesis o mediante neutralización e intercambio iónico a partir de formas salinas de compuestos de la invención.

[1002] Ejemplos de sales ácidas farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, acetatos, incluyendo sales de trifluoroacetato, adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, bencenosulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, canforatos, canforosulfonatos, ciclopentanopropionatos, digluconatos, dodecilsulfatos, etanosulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemisulfatos, heptanoatos, hexanoatos, hidrocloruros, hidrobromuros, hidroyoduros, 2-hidroxietanosulfonatos, lactatos, maleatos, metanosulfonatos, metilsulfatos, 2-naftalenosulfonatos, nicotinatos, nitratos, oxalatos, pamoatos, pectinatos, persulfatos, 3-fenilpropionatos, fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos, sulfonatos (como los aquí mencionados), tartaratos, tiocianatos, toluenosulfonatos (también conocidos como tosilatos), undecanoatos y similares.

[1004] Ejemplos de sales básicas farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalinotérreos tales como sales de calcio y magnesio, sales de aluminio, sales de zinc, sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas) como benzatinas, dietilamina, diciclohexilaminas, hidrabaminas (formadas con N,Nbis(dehidroabietyl)etilendiamina), N-metil-D-glucaminas, N-metil-D-glucamidas, t-butilaminas, piperazina, fenilciclohexilamina, colina, trometamina, y sales con aminoácidos como arginina, lisina y similares. Los grupos básicos que contienen nitrógeno pueden convertirse en un ion amonio o cuaternizarse con agentes tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo), haluros de cadena larga (por ejemplo., cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo), y otros.

[1006] El término "anión farmacéuticamente aceptable" se refiere a un anión adecuado para formar una sal farmacéuticamente aceptable.

[1008] Otros ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables que pueden utilizarse con la presente invención incluyen, pero no se limitan a, fluoruro, cloruro, bromuro y yoduro.

[1010] En general, se pretende que las sales de compuestos sean sales farmacéuticamente aceptables dentro del alcance de la invención.

[1012] El término "purificado", "en forma purificada" o "en forma aislada y purificada" para un compuesto se refiere al estado físico de dicho compuesto después de ser aislado de un proceso sintético o fuente natural o combinación de los mismos. Así, el término "purificado", "en forma purificada" o "en forma aislada y purificada" para un compuesto se refiere al estado físico de dicho compuesto tras ser obtenido de un proceso o procesos de purificación descritos en el presente documento o bien conocidos por el experto en la materia, y con pureza suficiente para ser caracterizado mediante técnicas analíticas estándar descritas en el presente documento o bien conocidas por el experto en la materia. Los compuestos de la invención incluyen cualquier forma del compuesto incluyendoin situen una mezcla de reacción, así como en forma aislada y purificada obtenida por técnicas rutinarias. También se incluyen formas polimórficas de los compuestos de la invención y solvatos y profármacos de los mismos.

[1014] Ciertos compuestos de la invención pueden existir en diferentes formas tautoméricas, por ejemplo, pero no se limitan a, formas tautoméricas cetona/enol, formas tautoméricas imina-enamina, y por ejemplo formas heteroaromáticas tales como las siguientes fracciones:

[1017]

[1020] Del mismo modo, a menos que se indique lo contrario, la presentación de una representación estructural de cualquier forma tautomérica de un compuesto que presente tautomerismo se entiende que incluye todas esas formas tautoméricas del compuesto. Por consiguiente, cuando los compuestos de la invención, sus sales y solvatos y profármacos de los mismos puedan existir en diferentes formas tautoméricas o en equilibrio entre dichas formas, todas estas formas del compuesto están incluidas en el alcance de la invención.

[1022] En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos de la invención. Tal como se utiliza en el presente documento, el término "composición farmacéutica" comprende al menos un compuesto farmacéuticamente activo y al menos un excipiente, y pretende abarcar tanto la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.

[1024] Como apreciará el técnico experto ordinario, los excipientes son cualquier constituyente que adapta la composición a una vía de administración particular o ayuda al procesamiento de una composición en una forma de dosificación sin ejercer por sí mismo un efecto farmacéutico activo. En general, las composiciones comprenden más de un excipiente en función de la vía de administración y de las características del activo administrado. Algunos ejemplos de excipientes que confieren a la composición propiedades que facilitan su manipulación o procesamiento incluye, entre otros, los lubricantes o coadyuvantes de prensado en medicamentos en polvo destinados a ser comprimidos, y los estabilizadores de emulsión en composiciones en las que el activo está presente en forma de emulsión. Ejemplos de excipientes que adaptan una composición a una vía de administración deseada son, por ejemplo, pero sin limitarse a ellos, para administración oral, potenciadores de la absorción que promueven la absorción desde el tracto gastrointestinal, para administración transdérmica o transmucosa, potenciadores de la penetración, por ejemplo, los empleados en "parches" cutáneos adhesivos o composiciones para administración bucal.

[1025] A pesar de la función que los excipientes desempeñan en una composición, los excipientes se denominan colectivamente en el presente documento "un portador." Típicamente, las formulaciones pueden comprender hasta aproximadamente un 95 por ciento de ingrediente activo y el resto de portador, aunque pueden prepararse formulaciones con diferentes proporciones. En general, las composiciones farmacéuticas aceptables contienen una concentración adecuada del activo para que pueda proporcionarse una cantidad eficaz del antagonista de PCSK9 en una forma de dosificación individual de volumen aceptable basada en la vía de administración, de modo que pueda proporcionar un nivel sérico terapéutico del activo durante un periodo de tiempo aceptable en un sujeto al que se administre la composición y la composición conserve la actividad biológica durante el almacenamiento dentro de un intervalo de temperatura aceptable durante un periodo de tiempo aceptable.

[1027] Composición farmacéutica, tal como se utiliza en el presente documento, se refiere tanto a una composición a granel, es decir, material formulado que aún no se ha formado en unidades de dosificación individuales para su administración, como a la composición contenida dentro de unidades de dosificación individuales.

[1029] Aunque las composiciones de la invención pueden emplearse a granel, se apreciará que para la mayoría de las aplicaciones las composiciones se incorporarán a una forma de dosificación que proporcione unidades individuales adecuadas para su administración a un paciente, comprendiendo cada forma de dosificación una cantidad de la composición seleccionada que contiene una cantidad eficaz de dicho uno o más compuestos de Fórmula I. Los ejemplos de formas de dosificación adecuadas incluyen, pero no se limitan a, formas de dosificación adaptadas para: (i) administración oral, por ejemplo una composición farmacéutica líquida, gelatinosa, en polvo, sólida o semisólida que se carga en una cápsula o se prensa en un comprimido y puede comprender además uno o más recubrimientos que modifican sus propiedades de liberación, por ejemplo, recubrimientos que imparten liberación retardada o formulaciones que tienen propiedades de liberación prolongada; ii) una forma de dosificación adaptada para la administración a través de los tejidos de la cavidad bucal, por ejemplo, un comprimido de disolución rápida, una pastilla, una solución, un gel, una bolsita o un conjunto de agujas adecuado para proporcionar administración intramucosa; (iii) una forma de dosificación adaptada para la administración a través de la mucosa de la cavidad nasal o de las vías respiratorias superiores, por ejemplo, una solución, una suspensión o una formulación en emulsión para su dispersión en la nariz o en las vías respiratorias; iv) una forma de dosificación adaptada para la administración transdérmica, por ejemplo, un parche, una crema o un gel; v) una forma de dosificación adaptada para la administración intradérmica, por ejemplo, un conjunto de microagujas; vi) una forma de dosificación adaptada para la infusión intravenosa (IV), por ejemplo, durante un período prolongado utilizando un dispositivo I.V. (vii) una forma de dosificación adaptada para administración intramuscular (IM), por ejemplo, una solución o suspensión inyectable, y que puede adaptarse para formar un depósito con propiedades de liberación prolongada; (viii) una forma de dosificación adaptada para administración intravenosa (IV) por goteo, por ejemplo, una solución o suspensión, por ejemplo, como solución IV o concentrado para inyectar en una bolsa IV de solución salina; (ix) una forma de dosificación adaptada para la administración subcutánea, incluida la administración durante un periodo de tiempo prolongado mediante la implantación de una varilla u otro dispositivo que difunda el compuesto en el tejido circundante y proporcione así un nivel terapéutico sérico continuo; o (x) una forma de dosificación adaptada para la administración a través de la mucosa rectal o vaginal, por ejemplo, un supositorio.

[1031] Las composiciones farmacéuticas pueden ser sólidas, semisólidas o líquidas. Los preparados en forma sólida, semisólida y líquida pueden adaptarse a diversos modos de administración, entre los que se incluyen, a título de ejemplo, polvos, gránulos dispersables, minitabletas, perlas, que pueden utilizarse, por ejemplo, para comprimir, encapsular o administrar directamente. Además, las preparaciones en forma líquida incluyen, pero no se limitan a, soluciones, suspensiones y emulsiones que, por ejemplo, pero no exclusivamente, pueden emplearse en la preparación de formulaciones destinadas a la ingestión, inhalación o administración intravenosa (IV), por ejemplo, pero no se limitan a, la administración por goteo IV o bomba de infusión, inyección intramuscular (IM), por ejemplo, de un bolo que se libera a lo largo de una duración prolongada, inyección IV directa o adaptada a vías de administración subcutánea.

[1033] Otras vías de administración que pueden contemplarse incluyen la administración intranasal, o para la administración a alguna otra membrana mucosa. Las formulaciones preparadas para su administración a diversas membranas mucosas también pueden incluir componentes adicionales que las adapten a dicha administración, por ejemplo, modificadores de la viscosidad.

[1035] Aunque en algunas realizaciones, las composiciones adecuadas para su utilización en una forma de dosificación oral sólida, por ejemplo, un comprimido o una formulación de disolución rápida en boca son vías de administración preferibles para un compuesto de la invención o una sal del mismo, una composición de la invención puede formularse para su administración a través de otras vías mencionadas anteriormente. Los ejemplos incluyen preparaciones en aerosol, por ejemplo, adecuadas para la administración por inhalación o a través de la mucosa nasal, pueden incluir soluciones y sólidos en forma de polvo, que pueden estar en combinación con un propulsor farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, un gas comprimido inerte, por ejemplo, nitrógeno. También se incluyen los preparados en forma sólida destinados a convertirse, poco antes de su uso, en una suspensión o solución, por ejemplo, para administración oral o parenteral. Ejemplos de tales formas sólidas incluyen, pero no se limitan a, formulaciones liofilizadas y formulaciones líquidas adsorbidas en un medio absorbente sólido.

[1036] Por ejemplo, los compuestos de la invención también pueden ser administrabas por vía transdérmica o transmucosa, por ejemplo, a partir de un líquido, supositorio, crema, espuma, gel, o forma sólida de disolución rápida. Se apreciará que las composiciones transdérmicas pueden adoptar también la forma de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones y pueden proporcionarse en una forma de dosificación unitaria que incluya un parche transdérmico de cualquier conocido en la técnica, por ejemplo, un parche que incorpore una matriz que comprenda el compuesto farmacéuticamente activo o un depósito que comprenda una forma sólida o líquida del compuesto farmacéuticamente activo.

[1038] Pueden encontrarse ejemplos de soportes farmacéuticamente aceptables y métodos de fabricación para diversas composiciones mencionadas anteriormente en A. Gennaro (ed.), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, (2000), Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD. Otros ejemplos de publicaciones que abordan cuestiones de formulación pueden encontrarse en: Las composiciones farmacéuticas pueden formularse mediante cualquier número de estrategias conocidas en la técnica, véase,por ejemplo,McGoff y Scher, 2000 Solution Formulation of Proteins/Peptides:. En - McNally, E.J., ed. Protein Formulation and Delivery. Nueva York, NY: Marcel Dekker; pp. 139-158; Akers & Defilippis, 2000, Peptides and Proteins as Parenteral Solutions. En -Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins. Filadelfia, PA: Taylor and Francis; pp. 145­ 177; Akers et al., 2002, Pharm. Biotechnol. 14:47-127.

[1040] También se divulgan métodos de emplear compuestos antagonistas específicos de PCSK9 descritos en el presente documento para antagonizar la función de PCSK9; dichos métodos se describen adicionalmente a continuación. La utilización del término "antagonizar" en la presente solicitud se refiere a proporcionar al tejido o tejidos afectados una sustancia que se opone a la acción de, inhibe, contrarresta, neutraliza o reduce una o más funciones de la PCSK9 en los tejidos afectados. La inhibición o antagonismo de una o más de las propiedades funcionales asociadas a PCSK9 puede determinarse fácilmente según metodologías conocidas en la técnica(véase, por ejemplo.,Barak & Webb, 1981 J. Cell Biol. 90:595-604; Stephan & Yurachek, 1993 J. Lipid Res. 34:325330; y McNamara et al., 2006 Clinica Chimica Acta 369:158-167) así como los descritos en el presente documento. La inhibición o el antagonismo producirán una disminución de la actividad de la PCSK9 en relación con la observada en ausencia del antagonista o, por ejemplo, en relación con la actividad observada cuando está presente un antagonista de control de especificidad irrelevante. Preferiblemente, un antagonista específico de PCSK9 de acuerdo con la presente invención antagoniza el funcionamiento de PCSK9 hasta el punto de que se produce una disminución de al menos el 10%, del parámetro medido, incluyendo, pero sin limitarse a las actividades aquí divulgadas, y más preferiblemente, una disminución de al menos el 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% y 95% del parámetro medido. Dicha inhibición/antagonismo del funcionamiento de la PCSK9 es particularmente eficaz en aquellos casos en los que el funcionamiento de la PCSK9 está contribuyendo, al menos en parte, a un fenotipo, enfermedad, trastorno o afección particular que está afectando negativamente al sujeto.

[1042] También se divulga un método para antagonizar la actividad de PCSK9, que comprende poner en contacto una célula, población de células o muestra de tejido capaz de ser afectada por PCSK9(es decir,que expresa y/o comprende receptores de LDL) con un antagonista específico de PCSK9 divulgado en el presente documento en condiciones que permiten que dicho antagonista se una a PCSK9 cuando está presente e inhiba la inhibición de PCSK9 de la captación celular de LDL. La célula puede ser una célula humana. La célula puede ser una célula murina.

[1044] También se divulga un método para antagonizar la actividad de PCSK9 en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista específico de PCSK9 de la presente invención. Los métodos para antagonizar la función de PCSK9 pueden ser para el tratamiento, como se define en el presente documento, de una enfermedad, trastorno o afección asociada a PCSK9 o, alternativamente, para proporcionar terapia en una enfermedad, trastorno o afección que podría beneficiarse de los efectos de un antagonista de PCSK9.

[1046] La presente divulgación, por lo tanto, contempla la utilización de antagonistas específicos de PCSK9 descritos en el presente documento en diversos métodos de tratamiento en los que es deseable antagonizar la función de PCSK9. Tal como se utiliza en el presente documento, el término "método de tratamiento" se refiere a un curso de acción que produce un cambio en al menos un síntoma de un estado de enfermedad que puede ser de naturaleza profiláctica o terapéutica. En algunas realizaciones, la presente divulgación se refiere a un método de tratamiento para una afección asociada con y/o atribuida a la actividad de PCSK9, o una afección en la que el funcionamiento de PCSK9 está contraindicado para un sujeto en particular, el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto antagonista de PCSK9 de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunas realizaciones, la afección puede ser aterosclerosis, hipercolesterolemia, cardiopatía coronaria, síndrome metabólico, síndrome coronario agudo o enfermedades cardiovasculares y cardiometabólicas relacionadas, o puede ser un estado de enfermedad o afección en el que la actividad de la PCSK9 esté contraindicada. En un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de la hipercolesterolemia.

[1048] Los métodos de tratamiento descritos en el presente documento comprenden administrar a un individuo una cantidad terapéuticamente (o profilácticamente) eficaz de un antagonista específico de PCSK9 de la presente invención. La utilización de los términos "terapéuticamente eficaz" o "profilácticamente eficaz" en referencia a una cantidad se refiere a la cantidad necesaria a la dosis prevista para conseguir el efecto terapéutico y/o profiláctico deseado durante el periodo de tiempo deseado. El efecto deseado puede ser, por ejemplo, el alivio, la mejora, la reducción o el cese de al menos un síntoma asociado a la enfermedad tratada. Estas cantidades variarán, como apreciará el artesano experto, en función de diversos factores, incluidos, entre otros, el estado de la enfermedad, la edad, el sexo y el peso del individuo, y la capacidad del antagonista específico de PCSK9 para provocar el efecto deseado en el individuo. La respuesta puede documentarse mediante ensayosin v itro,in vivoen animales no humanos, y/o apoyarse además en ensayos clínicos.

[1050] En algunas realizaciones es preferente administrar un compuesto antagonista de PCSK9 de la invención en forma de una composición farmacéutica como se describe en el presente documento.

[1052] La dosificación de terapéuticos antagonistas está bien dentro del ámbito del artesano experto,véase, por ejemplo,Lederman et al., 1991 Int. J. Cancer 47:659-664; Bagshawe et al., 1991 Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4:915-922, y variará basándose en un número de factores, por ejemplo, pero no limitados a, los mencionados anteriormente, incluyendo la condición del paciente, el área que se está tratando, la vía de administración, y el tratamiento deseado, por ejemplo, profilaxis o tratamiento agudo y similares. Un médico o veterinario experto puede determinar y prescribir fácilmente la cantidad terapéutica eficaz del antagonista.

[1054] El sujeto puede necesitar o desear un tratamiento para una enfermedad o afección médica existente. Tal como se utiliza en el presente documento, el sujeto "necesitado" de tratamiento de una enfermedad existente abarca tanto la determinación de la necesidad por parte de un profesional médico como el deseo del sujeto de recibir dicho tratamiento. Cuando un compuesto o una sal del mismo se suministra en combinación con uno o más agentes activos, se entiende que "administración" y sus variantes incluyen el suministro del compuesto o su sal y los otros agentes simultánea o simultáneamente o en el curso de administraciones separadas durante un periodo de tiempo. Cuando los agentes de una combinación se administran al mismo tiempo, pueden administrarse juntos en una única composición o pueden administrarse por separado. Se entiende que una "combinación" de agentes activos puede ser una única composición que contenga todos los agentes activos o múltiples composiciones que contengan cada una uno o más de los agentes activos. En el caso de dos agentes activos, una combinación puede ser una composición única que comprenda ambos agentes o dos composiciones separadas cada una de las cuales comprenda uno de los agentes; en el caso de tres agentes activos, una combinación puede ser una composición única que comprenda los tres agentes, tres composiciones separadas cada una de las cuales comprenda uno de los agentes, o dos composiciones, una de las cuales comprenda dos de los agentes y la otra comprenda el tercer agente; y así sucesivamente.

[1056] Las composiciones y combinaciones de la presente invención se administran adecuadamente en cantidades eficaces. El término "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad de compuesto activo suficiente para antagonizar la PCSK9 y obtener así la respuesta buscada (es decir, inducir una respuesta terapéutica en el tratamiento o la gestión de afecciones asociadas a la función de la PCSK9 o afectadas por ella, incluidas, entre otras, la aterosclerosis, la hipercolesterolemia, la cardiopatía coronaria, el síndrome metabólico, el síndrome coronario agudo. y las enfermedades cardiovasculares y cardiometabólicas relacionadas en un animal o un ser humano).

[1057] La dosis real empleada puede variar en función de las necesidades del paciente y de la gravedad de la afección tratada. La determinación del régimen de dosificación adecuado para una situación particular está dentro de la habilidad en el arte, por ejemplo, como se describe en la literatura estándar, por ejemplo, como se describe en el "Physicians' Desk Reference" (PDR), por ejemplo, edición de 1996 (Medical Economics Company, Montvale, NJ 07645-1742, USA), el Physician's Desk Reference, 56th Edition, 2002 (publicado por Medical Economics company, Inc. Montvale, NJ 07645-1742), o el Physician's Desk Reference, 57th Edition, 2003 (publicado por Thompson PDR, Montvale, NJ 07645-1742). Para mayor comodidad, la dosis diaria total puede dividirse y administrarse en porciones durante el día, según sea necesario, o administrarse de forma continua.

[1059] El antagonista específico de PCSK9 puede administrarse a un individuo por cualquier vía de administración apreciada en la técnica, incluyendo, pero sin limitarse a administración oral, administración por inyección (realizaciones específicas de las cuales incluyen inyección intravenosa, subcutánea, intraperitoneal o intramuscular), o administración por inhalación, intranasal o tópica, ya sea sola o en combinación con otros agentes diseñados para ayudar en el tratamiento del individuo. El antagonista específico de la PCSK9 también puede administrarse mediante dispositivos de inyección, plumas inyectoras, dispositivos sin aguja; y sistemas de administración de parches subcutáneos. La vía de administración debe determinarse en función de una serie de consideraciones apreciadas por el experto en la materia, incluidas, entre otras, las características fisicoquímicas deseadas del tratamiento.

[1061] Pueden administrarse uno o más agentes farmacológicamente activos adicionales en combinación con un compuesto de Fórmula I. Por agente (o agentes) farmacológicamente activo(s) adicional(es) se entiende un agente (o agentes) farmacológicamente activo(s) en el organismo, incluyendo pro-fármacos que se convierten en forma farmacológicamente activa tras la administración, que son diferentes del compuesto de Fórmula I, y también incluye sales libres de ácido, libres de base y farmacéuticamente aceptables de dichos agentes farmacológicamente activos adicionales. En general, cualquier agente o agentes activos adicionales adecuados, incluidos, entre otros, agentes antihipertensivos, agentes antiateroscleróticos, como un compuesto modificador de lípidos, agentes antidiabéticos y/o agentes contra la obesidad, pueden utilizarse en cualquier combinación con el compuesto de Fórmula I en una única formulación de dosificación (una combinación de fármacos de dosis fija), o pueden administrarse al sujeto en una o más formulaciones de dosificación separadas que permitan la administración concurrente o secuencial de los agentes activos (coadministración de los agentes activos separados).

[1063] Ejemplos de agentes activos adicionales que pueden emplearse incluyen pero no se limitan a inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (por ejemplo, alacepril, benazepril, captopril, ceronapril, cilazapril, delapril, enalapril, enalaprilat, fosinopril, imidapril, lisinopril, moveltipril, perindopril, quinapril, ramipril, spirapril, temocapril, o trandolapril), antagonistas de los receptores de angiotensina II (por ejemplo, losartán, es decir, COZAAR®, valsartán, candesartán, olmesartán, telmesartán y cualquiera de estos fármacos utilizados en combinación con hidroclorotiazida como HYZAAR®); inhibidores de la endopeptidasa neutra (por ejemplo, tiorfano y fosforamidón), antagonistas de la aldosterona, inhibidores de la aldosterona sintasa, inhibidores de la renina (por ejemplo, derivados ureicos de dipéptidos y tripéptidos (véase Patente estadounidense.). No. 5,116,835), aminoácidos y derivados (Patentes Estadounidenses 5.095.119 y 5.104.869), cadenas de aminoácidos enlazadas por enlaces no peptídicos (Patente Estadounidense 5.q14.937), derivados de dipeptidos y tripéptidos, peptidil amino dioles y peptidil beta-aminoacil aminodiol carbamatos, e inhibidores de renina de molécula pequeña (incluidos diol sulfonamidas y sulfinilos), derivados de N-morfolino, alcoholes N-heterocíclicos y pirolimidazolonas; así como derivados de pepstatina y derivados fluoro y cloro de péptidos que contienen estatona, enalkrein, RO 42-5892, A 65317, CP 80794, ES 1005, ES 8891, SQ 34017, aliskiren (2(S),4(S),5(S), 7(S)-N-(2-carbamoil-2-metilpropil)-5-amino-4-hidroxi-2,7-diisopropil-8-[4-metoxi-3-(3-metoxipropoxi)-fenil]-octanamida hemifumarato) SPP600, SPP630 y SPP635), antagonistas del receptor de endotelina, inhibidores de la fosfodiesterasa-5 (por ejemplo, sildenafilo, tadalafilo y vardenafilo), vasodilatadores, bloqueadores de los canales de calcio (por ejemplo, amlodipino, nifedipino, verapamilo, diltiazem, galopamilo, niludipino, nimodipinas, nicardipina), activadores de los canales de potasio (por ejemplo, nicorandil, pinacidil, cromakalim, minoxidil, aprilkalim, loprazolam), diuréticos (por ejemplo, hidroclorotiazida), simpaticolíticos, fármacos bloqueadores beta-adrenérgicos (por ejemplo, propanolol, atenolol, bisoprolol, carvedilol, metoprolol o tartrato de metoprolol), bloqueadores alfa-adrenérgicos (por ejemplo, doxazocina, prazocina o alfa-metildopa), agonistas alfa-adrenérgicos centrales, vasodilatadores periféricos (por ejemplo, hidralazina); agentes hipolipemiantes, por ejemplo, inhibidores de la HMG-CoA reductasa, como simvastatina y lovastatina, que se comercializan como ZOCOR® y MEVACOR® en forma de profármaco lactona y actúan como inhibidores tras su administración, y sales farmacéuticamente aceptables de inhibidores de la HMG-CoA reductasa de ácido dihidroxi de anillo abierto, tales como atorvastatina (en particular, la sal de calcio comercializada en LIPITOR®), rosuvastatina (en particular, la sal de calcio comercializada en CRESTOR®), pravastatina (en particular, la sal de sodio comercializada en PRAVACHOL®), fluvastatina (en particular, la sal sódica comercializada en LESCOL®), crivastatina y pitavastatina; un inhibidor de la absorción del colesterol, como ezetimiba (ZETIA®) y ezetimiba en combinación con cualquier otro agente hipolipemiante, como los inhibidores de la HMG-CoA reductasa mencionados anteriormente y, en particular, con simvastatina (VYTORIN®) o con atorvastatina cálcica; niacina en formas de liberación inmediata o liberación controlada y/o con un inhibidor de la HMG-CoA reductasa; agonistas de los receptores de niacina, como acipimox y acifran, así como agonistas parciales de los receptores de niacina; agentes modificadores del metabolismo, incluyendo insulina y miméticos de la insulina (por ejemplo, insulina degludec, insulina glargina, insulina lispro), inhibidores de la dipeptidil peptidasa-IV (DPP-4) (por ejemplo, sitagliptina, alogliptina, omarigliptina, linagliptina, vildagliptina); sensibilizadores de la insulina, incluidos (i) agonistas del PPARy, como las glitazonas (por ejemplo, pioglitazona, AMG 131, MBX2044, mitoglitazona, lobeglitazona, IDR-105, rosiglitazona y balaglitazona), y otros ligandos del PPAR, incluidos (1) agonistas duales PPARa/Y (por ejemplo, ZYH2, ZYH1, GFT505, chiglitazar, muraglitazar, aleglitazar, sodelglitazar y naveglitazar); (2) Agonistas del PPARa, tales como derivados del ácido fenofíbrico (por ejemplo, gemfibrozilo, clofibrato, ciprofibrato, fenofibrato, bezafibrato), (3) moduladores selectivos del PPAR<y>(SPPAR<y>M), (por ejemplo, tales como los descritos en WO 02/060388, WO 02/08188, WO 2004/019869, WO 2004/020409, WO 2004/020408, y WO 2004/066963); y (4) agonistas parciales del PPAR<y>; (ii) biguanidas, como la metformina y sus sales farmacéuticamente aceptables, en particular, el clorhidrato de metformina, y sus formulaciones de liberación prolongada, como Glumetza™, Fortamet™ y GlucophageXR™; y (iii) inhibidores de la proteína tirosina fosfatasa-1B (PTP-1B) (por ejemplo, ISIS-113715 y TTP814); insulina o análogos de la insulina (por ejemplo, insulina detemir, insulina glulisina, insulina degludec, insulina glargina, insulina lispro y formulaciones inhalables de cada una de ellas); leptina y derivados y agonistas de la leptina; amilina y análogos de la amilina (por ejemplo, pramlintida); secretagogos de insulina sulfonilureas y no sulfonilureas (por ejemplo, tolbutamida, gliburida, glipizida, glimepirida, mitiglinida, meglitinidas, nateglinida y repaglinida); inhibidores de la a-glucosidasa (por ejemplo, acarbosa, voglibosa y miglitol); antagonistas del receptor de glucagón (por ejemplo, MK-3577, MK-0893, Ly-2409021 y KT6-971); miméticos de la incretina, como GLP-1, análogos de<g>LP-1, derivados y miméticos; y agonistas del receptor del GLP-1 (por ejemplo, dulaglutida, semaglutida, albiglutida, exenatida, liraglutida, lixisenatida, taspoglutida, CJC-1131 y BIM-51077, incluidas sus formulaciones intranasales, transdérmicas y de administración semanal); agentes secuestradores de ácidos biliares (por ejemplo, colestilan, colestimida, clorhidrato de colesevalam, colestipol, colestiramina y derivados dialquilaminoalquílicos de un dextrano reticulado), inhibidores de la acil CoA:colesterol aciltransferasa (por ejemplo, avasimibe); compuestos antiobesidad; agentes destinados al tratamiento de afecciones inflamatorias, tales como la aspirina, los fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), los glucocorticoides y los inhibidores selectivos de la ciclooxigenasa-2 (COX-2); activadores de la glucoquinasa (GKA) (por ejemplo, AZD6370); inhibidores de la 11p-hidroxiesteroide deshidrogenasa tipo 1 (por ejemplo, los descritos en Patente Estadounidense No. 6.730.690, y LY-2523199); inhibidores de la CETP (por ejemplo, anacetrapib, torcetrapib y evacetrapib); inhibidores de la fructosa 1,6-bisfosfatasa (por ejemplo, los descritos en Patentes Estadounidenses Nos. 6.054.587; 6.110.903; 6.284.748; 6.399.782; y 6.489.476); inhibidores de la acetil-CoA carboxilasa-1 o 2 (ACC1 o ACC2); activadores de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK); otros agonistas de los receptores acoplados a proteínas G: (i) GPR-109, (ii) GPR-119 (por ejemplo, MBX2982 y PSN821), y (iii) GPR-40 (por ejemplo, TAK875); antagonistas de SSTR3 (por ejemplo, como los descritos en WO 2009/001836); agonistas del receptor de neuromedina U (por ejemplo, como los divulgados en WO 2009/042053, incluyendo, pero sin limitarse a, neuromedina S (NMS)); moduladores de SCD; antagonistas de GPR-105 (por ejemplo, como los divulgados en WO 2009/000087); inhibidores de SGLT (por ejemplo, ASP1941, SGLT-3, empagliflozina, dapagliflozina, canagliflozina, BI-10773, ertugliflozina, remogloflozina, TS-071, tofogliflozina, ipragliflozina y LX-4211); inhibidores de la acil coenzima A:acilglicerol aciltransferasa 1 y 2 (DGAT-1 y DGAT-2); inhibidores de la sintasa de ácidos grasos; inhibidores de la acilcoenzima A:monoacilglicerol aciltransferasa 1 y 2 (MGAT-1 y MGAT-2); agonistas del receptor TGR5 (también conocido como GPBAR1, BG37, GPCR19, GPR131 y M-BAR); inhibidores del transportador ileal de ácidos biliares; agonistas de PACAP, miméticos de PACAP y del receptor 3 de PACAP; agonistas de PPAR; inhibidores de la proteína tirosina fosfatasa-1B (PTP-1B); anticuerpos de IL-1b, (p. Ej.g., XOMA052 y canakinumab); y mesilato de bromocriptina y sus formulaciones de liberación rápida; o con otros fármacos beneficiosos para el tratamiento de las afecciones o trastornos antes mencionados, incluidas las formas de ácido libre, base libre y sal farmacéuticamente aceptable de los agentes activos antes mencionados cuando sea químicamente posible.

[1064] Los compuestos de la presente invención pueden prepararse fácilmente según los siguientes esquemas y ejemplos de reacción, o modificaciones de los mismos, utilizando materiales de partida, reactivos y procedimientos de síntesis convencionales fácilmente disponibles. En estas reacciones también es posible recurrir a variantes conocidas. Para la purificación de los compuestos mediante cromatografía de fase inversa (ya sea HPLC o MPLC, como se indica más adelante), se utilizó una columna C18. Otros métodos para preparar compuestos de la invención serán fácilmente evidentes para la persona de habilidad ordinaria en el arte a la luz de los siguientes esquemas de reacción y ejemplos. Las abreviaturas que se enumeran a continuación pueden utilizarse en los esquemas ejemplares y/o en los ejemplos del presente documento.

[1065] ACN es acetonitrilo

[1066] AcOH es ácido acético

[1067] AcO 'NH es acetato de amonio

[1068] Boc2O es dicarbonato de di-terc-butilo

[1069] Bn es bencilo

[1070] BnBr es bromuro de bencilo

[1071] BzCl es cloruro de benzoilo

[1072] CBr4 es perbromometano

[1073] Cbz-Cl es cloroformato de bencilo

[1074] DBU es 1,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno

[1075] DCC es diciclohexilcarbodiimida

[1076] DCE es 1,2-dicloroetano

[1077] DCM es diclorometano

[1078] DEA es N,N-dietilamina

[1079] DIAD es (E)-diisopropil diazeno-1,2-dicarboxilato

[1080] DIEA o DIPEA es N,N-diisopropiletilamina

[1081] DMAP es 4-dimetilaminopiridina

[1082] DMF is W,A/-dimetilformamida

[1083] DMSO es dimetilsulfóxido

[1084] EA o EtOAc es acetato de etilo

[1085] EtOH es etanol

[1086] Et2O es éter dietílico

[1087] Fmoc es grupo protector fluorenilmetiloxicarbonilo

[1088] Fmoc-Cl es (9H-fluoren-9-il)metilcarbocloridato

[1089] Fmoc-D-Dap(Boc)-OH es el ácido N-alfa-(9-fluorenilmetiloxicarbonil)-N-beta-t-butiloxicarbonil-D-2,3-diaminopropiónico

[1090] Fmoc-Osu es el éster Fmoc N-hidroxisuccinimida

[1091] HATU es 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio 3-oxid hexafluorofosfato

[1092] HPLC es cromatografía líquida de alta resolución

[1093] IPAes alcohol isopropílico

[1094] LiOH es hidróxido de litio

[1095] LC/MS es cromatografía líquida-espectrometría de masas

[1096] Me3N es trimetil amina

[1097] MeOH es metanol

[1098] MPLC es cromatografía líquida a media presión

[1099] MsCl es cloruro de metanosulfonilo

[1100] NaBH(OAc)3 es triacetoxiborohidruro sódico

[1101] NMR es Resonancia Magnética Nuclear

[1102] NsCl es cloruro de 4-nitrobenceno-1-sulfonilo

[1103] PE es éter de petróleo

[1104] Pd2(dba)3(HCCh) es un aducto de tris(dibencilideneacetona)dipaladio(0 )-cloroformo

[1105] PPh3 es trifenilfosfina

[1106] PdCh(dppf) o Pd(ii)(dppf)Cl2 es dicloro[1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio(II)

[1107] Pd(dppf)ChCH2Cl2 es el aducto dicloro[1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]diclorometano de paladio(II) Pd(PPh3)4 es tetraquis(trifenilfosfina)paladio

[1108] PPTs es p-toluenosulfonato de piridinio

[1109] [Rh(OAc)2]2 es el dímero de acetato de rodio(II)

[1110] RT o r.t. o rt es temperatura ambiente

[1111] tBuOAc es acetato de terc-butilo

[1112] TEA es trietilamina

[1113] TFA es ácido trifluoroacético

[1114] TFE es tetrafluoroetileno

[1115] THF es tetrahidrofurano

[1116] Tf2O es anhídrido trifluorometanosulfónico

[1117] Teoc-OSu es carbonato de 2,5-dioxopirrolidin-1-il (2-(trimetilsilil)etil)

[1118] TBAF es fluoruro de tetrabutilamonio

[1119] TMS es tetrametilsilano

[1120] El catalizador 1B de Zhan es el didoro(1,3-bis(2,4,6-triiTietilfenil)-2-iiTiidazolidinilidenoX(5-((diiTietilaiTiino)sulfonil)-2-(1-metiletoxi-O)fenil)metileno-C)rutenio(N) [también descrito como 1.(1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-2-imidazolidinilideno)],3-Bis(2,4,6-trimetilfenil)-4,5-dihidroimidazol-2-ilideno[2-(i-propoxi)-5-(N,N-dimetilaminosulfonil)fenil[dicloruro de metilenerutenio (II)

[1121] EJEMPLO 1 Preparación de Ej-01 y Ej-51

[1123]

[1125] Ej-51, (base libre ilustrada)

[1126] Se prepararon formas salinas de los compuestos Ej-01 y Ej-51 a partir de los intermediarios 76 y 86 (preparación siguiente) de acuerdo con el siguiente esquema:

[1127]

[1130] 

[1131]

[1132]

[1134] en fase inversa

[1136] Paso A: Preparación del intermediario 89

[1137] A una solución de 76 (1,56 g, 1,917 mmol, preparación siguiente) y 86 (1,506 g, 1,936 mmol, preparación siguiente) en DMF (40 ml) se añadió HATU (0,802 g, 2,108 mmol) y DI<e>A (0,670 ml, 3,83 mmol). La solución resultante se agitó a rt durante 50 min y después se repartió entre EtOAc (300 mL) y salmuera (100 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera (2x100 mL), se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó en columna de gel de sílice utilizando MeOH/DCM como disolventes de elución para dar 89. LC/MS: (M+1)+: 1.573,8.

[1138] Paso B: Preparación del intermediario 90

[1139] Una disolución de 89 (0,68 g, 0,432 mmol) en DCM (500 ml) y ácido acético (40 mL) se burbujeó con N2 durante 20 min seguida de la adición del catalizador-1b de Zhan (0,222 g, 0,302 mmol). La mezcla resultante se volvió a burbujear con N2 durante 20 min, y después se calentó a 55 °C durante 5 h. Tras enfriar a rt, la mezcla se filtró a través de celita, el filtrado se concentró, y el residuo se purificó en columna de gel de sílice utilizando MeOH/DCM como disolventes de elución para dar 90 (mezcla cis/trans). LC/MS: (M+1)+: 1.545,7.

[1140] Paso C: Preparación del intermediario 91

[1141] A una solución de 90 (mezcla cis/trans) (65 mg, 0,042 mmol) en acetonitrilo (2 ml) se añadió piperidina (0,042 ml, 0,420 mmol). La solución resultante se agitó a rt durante 1 h, después se concentró y el residuo se disolvió en acetonitrilo (4 mL) y se concentró de nuevo. El residuo se secó de nuevo a alto vacío durante 30 min para dar 91 (mezcla cis y trans). LC/MS: (M+1)+: 1.324,0.

[1142] Paso D: Preparación del intermediario 92

[1143] A una solución de 91 (mezcla cis/trans) (548 mg, 0,414 mmol) y 88 (227 mg, 0.455 mmol, preparación siguiente) en DMF (10 ml) a 0 °C se añadió HATU (181 mg, 0,476 mmol) y DIEA (0,166 ml, 0,952 mmol). La solución resultante se agitó a 0 °C durante 1 h, y la solución se purificó por MPLC de fase inversa sobre columna C18 utilizando acetonitrilo (0,05%TFA)/agua (0,05%TFA) como disolventes de elución para dar 92 (mezcla cis/trans). LC/MS: (M+1)+: 1.803,5.

[1144] Paso E: Preparación del intermediario 93

[1145] A una solución de 92 (700 mg, 0,388 mmol) en THF (20 ml), MeOH (6 ml) y agua (6 ml) a 0 °C se añadió LiOH acuoso 1N (3,11 ml, 3,11 mmol) gota a gota, y la solución resultante se agitó a 0 °C durante 23 h. La solución se neutralizó mediante adición de HCl 1N a pH 7-8, el volátil se evaporó, la fase acuosa se acidificó a pH 5, y la mezcla se purificó por MPLC de fase inversa sobre columna C18 utilizando acetonitrilo (0,05%TFA)/agua (0,05%TFA) como disolventes de elución para dar 93 como Sal de TFA. A una solución de 93 sal de TFA (427 mg, 0,257 mmol)) en agua (70 mL) y acetonitrilo (70 ml) a 0 °C se añadió HCl 0,1 N (13,5 ml, 1,350 mmol) gota a gota, la solución resultante se agitó a 0 °C durante 5 min, después se liofilizó para dar 93 como sal de HCl. LC/MS: (M+1)+: 1.567,1.

[1146] Paso F: Preparación del intermediario94

[1147] A una solución de 93 como sal de HCl (200 mg, 0,125 mmol) en DMF (30 mL) se añadió HATU (56,9 mg, 0,150 mmol). La solución resultante se agitó a rt durante 30 min, después se diluyó con DCM (400 mL) seguido de la adición de DIEA (0,065 mL, 0,374 mmol). La solución resultante se agitó a rt durante 1h, el volátil se evaporó en el rotavapor, y la solución de DMF resultante se purificó por MPLC de fase inversa utilizando acetonitrilo (0,05%TFA)/agua (0,05%TFA) como disolventes de elución para dar 94. LC/MS: (M+1)+: 1.549,2.

[1148] Paso G: Preparación del intermediario 95

[1149] A una solución de 94 (14 mg, 9,04 pmol) en MeOH (20 ml) se añadió Pd/C al 10% (1,924 mg, 1,808 pmol) y la mezcla resultante se sometió a hidrogenación a rt mediante globo de H2 durante 1h. La mezcla se filtró a través de celita y el filtrado se concentró para dar el compuesto intermediario 95. LC/MS: (M+1)+: 1.550,9.

[1150] Paso H: Preparación de Ej-01

[1151] El compuesto intermediario 95 preparado en el paso anterior (26 mg, 0,017 mmol) se disolvió en DCM (2 ml). A esta disolución se añadió TFA (6 mL, 78 mmol) y la disolución resultante se agitó a rt durante 30 min, después se concentró y el residuo se disolvió en DCM (3 mL) y se trató con HCl 4N en dioxano (0,042 mL, 0,168 mmol), y se concentró de nuevo para dar Ej-01 como producto crudo. El Ej-01 crudo se purificó mediante HPLC de fase inversa utilizando acetonitrilo (0 ,1 % de ácido fórmico)/agua (0 ,1 % de ácido fórmico) como disolventes de elución para proporcionar la forma de sal de formiato de Ej-01. LC/MS: (M+1)+: 1.394,4.

[1152] Paso I: Preparación de Ej-51

[1153] A una disolución del compuesto intermediario 94 (30 mg, 0,019 mmol) en DCM (2 ml) se añadió TFA (4 ml, 51,9 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, después se concentró. El residuo se disolvió en DCM (2 mL), se trató con HCl (4N en dioxano) (0,048 ml, 0,194 mmol) y se concentró para obtener Ej-51 como sal de HCl. El compuesto se purificó por HPLC de fase inversa utilizando acetonitrilo (ácido fórmico al 0,1%)/agua (ácido fórmico al 0,1%) como fase móvil para proporcionar la forma de sal de formiato de Ej-51. LC/MS: (M+1)+: 1.392,0.

[1154] Se utilizaron los siguientes esquemas y procedimientos para preparar los intermediarios 76, 86 y 88 utilizados en los procedimientos descritos anteriormente.

[1155] Preparación del intermediario 68 utilizado en la preparación del intermediario 76

[1158]

[1160] Paso A: Preparación del compuesto intermediario 65

[1161] A una suspensión de ácido (2S,3S)-3-hidroxipirrolidin-2-carboxílico (5,32 g, 40,6 mmol) en dioxano (100 ml) a 0°C se añadió hidróxido sódico (122 ml, 122 mmol), seguido de la adición de cloroformato de bencilo (6,50 ml, 44,6 mmol) gota a gota. La suspensión resultante se agitó a 0 °C durante 5 h. Después de eliminar los volátiles, la fase acuosa se acidificó a pH 3, después se particionó entre 30%IPA/DCM(200 mL) y salmuera (50 mL), la fase acuosa se volvió a extraer con 30%IPA/DCM(2x100mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para dar ácido (2S,3S)-1-((benzoiloxi)carbonil)-3-hidroxipirrolidin-2-carboxílico (65). LC/MS: (M+1)+: 266,1.

[1162] Paso B: Preparación del compuesto intermediario66

[1163] A una solución de 65 (7,48 g, 28,2 mmol) en MeOH (80 ml) se añadió gota a gota TMS-Diazometano (70,5 ml, 141 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante 10 min y después se apagó mediante adición de ácido acético (aprox. 400 uL) gota a gota. La solución se concentró y el residuo se purificó en columna de gel de sílice utilizando EtOAc/hexano como disolventes de elución para dar 66. LC/MS: (M+1)+: 280,1.

[1164] Paso C: Preparación del compuesto intermediario 67

[1165] Una disolución de 66 (4,81 g, 17,22 mmol) en DCM (200 mL) se burbujeó con N2 durante 30 min, seguido de la adición de dímero de acetato de rodio(ii) (0,761 g, 1,722 mmol). La mezcla se enfrió en un baño de agua helada y se añadió diazoacetato de terc-butilo (3,58 mL, 25,8 mmol) a 0 °C gota a gota. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 1,5 h. La reacción se apagó añadiendo agua (100 mL), la mezcla se extrajo con DCM (3x100 mL), la fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó por MPLC de fase inversa utilizando acetonitrilo (0,05%TFA)/agua (0,05%TFA) como disolventes de elución. La fracción que contenía el producto se concentró y la fase acuosa se extrajo con DCM (2x100mL). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar 67. LC/MS: (M+1)+: 394,2.

[1166] Paso D: Preparación del compuesto intermediario 68

[1167] A una disolución de 67 (3,72 g, 9,46 mmol) en MeOH (80 ml) se añadió Pd/C al 10% (0,805 g, 0,756 mmol) y la mezcla resultante se sometió a hidrogenación mediante globo de H2 a temperatura ambiente durante 2 horas, después se filtró a través de celita. El filtrado se concentró para dar 68. LC/MS: (M+1)+: 259,9.

[1168] Preparación del compuesto intermediario 76

[1171]

[1172]

[1175] Paso A: Preparación del intermediario 69

[1177] A una solución de ácido (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-(5-fluoro-1H-indol-3-il)propanoico (3 g, 6,75 mmol) en THF (20 ml), MeOH (10 mL) , y agua (20.00 ml) a 0 °C se añadió NaOH (20,25 ml, 20,25 mmol) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas, después se evaporó el volátil. A la mezcla acuosa se añadió dioxano (50 ml) y agua (20 mL), la solución resultante se enfrió a 0 °C y se añadió Boc2O (1,881 ml, 8,10 mmol) a la solución anterior. La solución resultante se agitó a 0 °C durante 3 horas, se eliminó el volátil y la fase acuosa se extrajo con Et2O (3x40 mL), se acidificó a pH 3 y se extrajo con DCM (3x100mL), seguido de 30%IPA/DCM (2x80 mL). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar 69. LC/MS: (M+1)+: 322,9.

[1179] Paso B: Preparación del intermediario 70

[1181] A una disolución de 69 (2,079 g, 6,45 mmol) en DMF (40 ml) a 0 °C se añadió NaH al 60% en hexano (0,568 g, 14,19 mmol), y la disolución resultante se agitó a 0 °C durante 50 min seguida de la adición de bromuro de alilo (1,172 mL, 13,54 mmol) gota a gota. La solución resultante se agitó a 0 °C durante 1,5 h y se apagó añadiendo HCl 1N (unos 3,68 mL). A continuación, la solución se particionó entre EtOAc (200 mL) y agua (100 mL), la fase orgánica se lavó con salmuera (2x100 mL), se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó en columna de gel de sílice utilizando MeOH/DCM como disolventes de elución para dar 70. LC/MS: (M+1)+: 363,0.

[1183] Paso C: Preparación del intermediario71

[1184] A una solución de 70 (2,239 g, 6,18 mmol) y 68 (1,842 g, 7.11 mmol) en DMF (30 ml) se añadió HATU (2,82 g, 7,41 mmol) y DIEA (2,59 ml, 14,83 mmol), y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se particionó entre EtOAc (200 mL) y salmuera (100 mL), la fase orgánica se lavó con salmuera (3x100 mL), se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó en columna de gel de sílice utilizando EtOAc/hexano como disolventes de elución para dar 71,. LC/MS: (M+1)+: 604,2.

[1185] Paso D: Preparación del intermediario 72

[1186] A una solución de 71 (2,83 g, 4,69 mmol) en CH2Ch (20 ml) y tBuOAc (30 ml) a 0 °C se añadió ácido metanosulfónico (1.218 ml, 18,75 mmol), y la solución resultante se agitó a 0 °C durante 16,5 h, y después a temperatura ambiente durante 2,5 h. La solución (72) se utilizó directamente en el paso siguiente. LC/MS: (M+1)+: 504,2.

[1187] Paso E: Preparación del intermediario 73

[1188] A una solución de ácido (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-(3-((tertbutoxicarbonil)amino)metil)fenil)propanoico (2,66 g, 5,16 mmol) en DMF (10 ml) se añadió<h>A<t>U (1.961 g, 5,16 mmol) y DIEA (5,32 ml, 30,5 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante 30 min y después se añadió a un baño helado de la solución 72 preparada anteriormente. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Los volátiles se evaporaron en el rotavapor y el residuo se purificó por MPLC de fase inversa utilizando acetonitrilo (0,05%TFA)/agua (0,05%TFA) como disolventes de elución. Las fracciones recogidas se concentraron en el evaporador rotatorio para dar 73. LC/MS: (M+1)+: 1.002,1.

[1189] Paso F: Preparación del intermediario 74

[1190] A una solución de 73 (3,235 g, 3,23 mmol) en DCM (4 ml) se añadió TFA (7,46 ml, 97 mmol), y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, después se concentró. El residuo se disolvió en DCM (10 mL), se trató con HCl 4N en dioxano (3,23 ml, 12,91 mmol), a continuación, se concentró y el residuo se disolvió en acetonitrilo (100 mL)/agua (50 mL) y se liofilizó para proporcionar 74. LC/MS: (M+1)+: 846,1.

[1191] Paso G: Preparación del intermediario 75

[1192] A una solución de 74 (2,85 g, 3,23 mmol) en DMF (45 ml) se añadió HATU (1,474 g, 3,88 mmol), y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min, después se diluyó con DCM (600 ml) seguido de la adición de DIEA (1,692 ml, 9,69 mmol) gota a gota. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La solución se concentró y el residuo se purificó por MPLC de fase inversa sobre columna C18 utilizando acetonitrilo (0,05%TFA) / agua (0,05%TFA) como disolventes de elución. Las fracciones que contenían el producto se concentraron y la capa acuosa se particionó entre DCM (200 mL) y sat. NaHCO3 (200 mL). La fase acuosa se extrajo con DCM (2x100 ml) y la fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar 75. LC/MS: (M+1)+: 828,1.

[1193] Paso H: Preparación del compuesto intermediario 76

[1194] A una solución de 75 (1,93 g, 2,331 mmol) en THF (60 ml), MeOH (30 ml) y agua (20 ml) a 0 °C se añadió LiOH acuoso 1N (9,9 ml, 9,90 mmol) gota a gota, y la solución resultante se agitó a 0 °C durante 16 h y se apagó añadiendo HCl (1N, 9,9 mL). El volátil se evaporó en rotavapor y a la solución anterior a 0 °C se añadió acetona (60 ml), carbonato sódico (0,371 g, 3,50 mmol) y Fmoc-Osu (0,802 g, 2,378 mmol). La solución resultante se agitó a 0 °C durante 6 h, el volátil se evaporó en el rotavapor, la fase acuosa se acidificó a pH 4 y después se extrajo con IPA/DCM al 30% (3x100 mL). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó en columna de gel de sílice utilizando MeOH/DCM como disolventes de elución para dar 76. LC/MS: (M+1)+: 814,2.

[1195] Preparación alternativa del compuesto intermediario 75b y del compuesto intermediario 76B a partir del mismo:

[1196]

[1199] Paso H Paso lbromurodeaillo (3.55 eq.), CSoCOg (3.4 6CL LiO H/THF/ 75aMeOH/aguaDMF, rt, 16 h

[1201] En general, se siguió el procedimiento general descrito anteriormente para la preparación del compuesto intermediario 75 , excepto que se eliminó la Paso B y la Paso final G también incluyó la sustitución del grupo protector Fmoc por un grupo protector Boc, proporcionando así el compuesto intermediario 75a. A continuación, se describen los procedimientos para 75a y 76B .

[1202] Paso C: Preparación del compuesto intermediario 71a

[1203] A una solución de 69 (5,00 g, 15,5 mmol) en DMF (40,0 mL) a -50 °C se añadieron 68 , HATU (5,90 g, 15,5 mmol) y DIEA (4,01 g, 31,0 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a -50 °C durante 3 h. La solución final se apagó con agua (5 mL), se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de fase inversa sobre C18 (eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua bicarbonato amónico al 0,01%) para proporcionar 71a. LCMS (ESI) calculado para C28H38FN3O8 [M H]+: 564,3, encontrado 564,2.

[1204] Paso D: Preparación del compuesto intermediario 72a

[1205] A una solución de HCl 2 N en dioxano (100 mL) y THF (100 mL) a rt se añadió 71a (8,40 g, 14,9 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 5 h. La solución final se concentró a presión reducida para obtener 72a. LCMS (ESI) calculado para C23H31CFN3O6 [M - HCl H]+: 464,2, encontrado 464,3.

[1206] Paso E: Preparación del compuesto intermediario 73a

[1207] A una solución de 72a (800 mg, 1,60 mmol) en DMF (10,0 mL) a -50 °C se añadió ácido (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-(3-(((tert-butoxicarbonil)amino)metil)fenil)propanoico (827 mg, 1,60 mmol) HATU (608 mg, 1,60 mmol) y DIEA (620 mg, 4,80 mmol) y la mezcla se agitó a -50 °C durante 3 h. La solución resultante se diluyó con agua (50 mL) y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con un gradiente 1%-60% de EtOAc en PE) para dar 73a. LCMS (ESI) calculado para C53H60FN5O11 [M H]+: 962,4, encontrado 962,6.

[1209] Paso F: Preparación del compuesto intermediario 74a

[1211] A una solución de 73a (3,00 g, 3,12 mmol) en DCM (15,0 mL) a rt se añadió TFA (15,0 mL) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La solución resultante se concentró a presión reducida, se coevaporó con tolueno y DCM para dar 74a. LCMS (ESI) calculado para C46H45F4N5O11 [M - TFA H]+: 806,3, encontrado 806,7.

[1213] Paso G: Preparación del compuesto intermediario 75a

[1215] A una solución de 74a (4,00 g, 4,35 mmol) en DMF (150 mL) a rt se añadió HATU (1,65 g, 4,35 mmol) y la solución de reacción se agitó durante 0,5 h. La solución se diluyó con DCM (450 mL) y DIEA (1,69 g, 13,1 mmol) y después se agitó a rt durante 3 h. La solución resultante se apagó con agua (5 mL), se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de fase inversa sobre C18 (eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua 0,05%TFA) para proporcionar un intermediario protegido con Fmoc. LCMS (ESI) calculado para C44H42FN5O8 [M H]+: 788,3, encontrado 788,9.

[1217] A una solución del intermediario protegido con Fmoc que se acaba de describir (200 mg, 0,250 mmol) en DCM (5,00 mL) a rt se añadió piperidina (1,25 mL) y la solución de reacción se agitó durante 1 h. La solución final se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con un gradiente 0%-5% de MeOH en DCM) para obtener un intermediario amínico. LCMS (ESI) calculado para C29H32FN5O6 [M H]+: 566,2, encontrado 566,3.

[1219] A una disolución del intermediario de amina justo anterior (2,86 g, 5,06 mmol) en THF (30,0 mL) y agua (30,0 mL) a rt se añadieron Boc2O (2.21 g, 10,1 mmol) y bicarbonato sódico (1,70 g, 20,2 mmol) y la reacción se agitó durante 3 h. La solución final se diluyó con agua (50 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (3 x 100 mL), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con un gradiente 0%-5% de MeOH en d Cm ) para proporcionar 75a. LCMS (ESI) calculado para C34H40FN5O8 [M H]+: 666,3, hallado 666,5; 1H RMN (300 MHz, CD3OD) 8 7,35-7,08 (m, 6 H), 6,95-6,79 (m, 2H), 5,01-4.91 (m, 1H), 4,72-4,56 (m, 2H), 4,45-4,38 (m, 1H), 4,45-4,38 (m, 5H), 3,69 (s, 3H), 3,32-2,92 (m, 5H), 2,14-1,82 (m, 2H), 1,47 (s, 9H).Paso H: Preparación del compuesto intermediario 75b.

[1221] A una solución de 75a (0,665 g, 0,99 mmol) en DMF (0.5 mL) se añadió Cs2CO3 (1,11 g, 3,40 mmol) y 3-bromoprop-1-eno (0,43 g, 3,55 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y se vertió en 5 mL de solución de salmuera sat. al 50%/10% de ácido cítrico, extrayéndose a continuación con acetato de etilo (2 x 20 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (3 x 20 mL), se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 1%-5% de MeOH en DCM. Las fracciones que contenían el compuesto intermediario 75b se combinaron y concentraron para obtener el compuesto del título. LCMS (ESI) calculado para C37H44FN5O8 [M H]+: 706,3, encontrado 706,3.

[1223] Paso I: Preparación del compuesto intermediario 76B

[1225] La hidrólisis de 75b con LiOH siguió condiciones similares a las descritas en la preparación del intermediario 93 para proporcionar 76B.

[1227] Preparación del intermediario 77B

[1228]

[1231] Paso A: Preparación del intermediario 77A

[1232] A una solución de ácido (S)-1-(((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-2-metilpirrolidin-2-carboxílico (6,16 g, 17,54 mmol) y clorhidrato de 4-(2-aminoetil)bencilcarbamato de terc-butilo (5,03 g, 17,54 mmol) en DMF (140 ml) a 0°C se añadieron HATU (8.00 g, 21,05 mmol) y DIPEA (9,16 ml, 52,6 mmol), la reacción se dejó calentar a r.t. y se agitó durante 2 h. La mezcla final se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4y se filtró. El filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 0-60% de EtOAc en hexano) para dar 77A. MS (ESI): m/z (M+H)+ 584,5.

[1233] Paso B: Preparación del intermediario 77B

[1234] A una solución de 77A (8,92 g, 15,28 mmol) en DCM (40 ml) se añadió HCl 4N en dioxano (15,28 ml, 61,1 mmol), y la solución resultante se agitó a r.t. durante la noche. La mezcla se concentró para dar 77B. MS (ESI): m/z (M+H)+ 484,3.

[1235] Preparación del intermediario 86

[1236]

[1239] A una solución de clorhidrato de (S)-(9H-fluoren-9-il)metil 2-((4-(aminometil)fenetil)carbamoil)-2-metilpirrolidin-1-carboxilato (77B) (5,87 g, 11,29 mmol) en DCM (140 ml) a 0 °C se añadió DlEA (5,91 ml, 33,9 mmol) y CBZ-Cl (1,726 ml, 11,85 mmol) gota a gota, y la solución resultante se agitó a 0 °C durante 4h. La solución de reacción se particionó entre agua (200 mL) y d Cm (200 mL), la fase acuosa se extrajo con DCM (100 mL), la fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, y el residuo se purificó en columna de gel de sílice utilizando EtOAc/hexano como disolventes de elución para dar 77. LC/MS: (M+1)+: 618,3.

[1240] Paso B: Preparación del intermediario 78

[1241] A una solución de 77 (5,56 g, 9,00 mmol) en THF (100 ml), agua (50 ml), y MeOH (30 ml) se añadió NaOH acuoso 1N (45,0 ml, 45,0 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante 2h. El volátil se evaporó, y a la disolución acuosa se añadió dioxano (200 ml), y Boc2O (2,508 ml, 10,80 mmol) en dioxano (20 mL). La mezcla resultante se agitó de 0 °C a rt durante toda la noche. El volátil se evaporó en el rotavapor y la fase acuosa se extrajo con DCM (3x150 mL). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó en columna de gel de sílice utilizando EtOAc/hexano como disolventes de elución para dar 78. LC/MS: (M+1)+: 496,2.

[1242] Paso C: Preparación del intermediario 79

[1243] A una disolución de 78 (4,04 g, 8,15 mmol) en MeOH (100 ml) se añadió Pd/C al 10% (0,867 g, 0,815 mmol), y la mezcla resultante se sometió a hidrogenación mediante globo de H2 a rt durante 1,5h. La mezcla se filtró a través de Celita, y el filtrado se concentró para dar 79. LC/MS: (M+1)+: 362,2.

[1244] Paso D: Preparación del intermediario 80

[1245] A una solución de 79 (2,58 g, 7,14 mmol) en DMF (15 ml) se añadió pent-4-en-1-il 4-metilbencenosulfonato (0.858 g, 3,57 mmol) y K2CO3 (1,973 g, 14,27 mmol), y la mezcla resultante se calentó a 80 °C durante 6 h. Tras enfriar hasta rt, la mezcla se filtró y el filtrado se purificó por MPLC de fase inversa utilizando acetonitrilo (0,05% TFA)/agua (0,05% TFA) como disolventes de elución para dar el producto como Sal de TFA, que se particionó entre DCM (100 mL) y NaOH acuoso 1N (50 mL). La fase acuosa se extrajo de nuevo con DCM (2x50mL), la fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, y se concentró para dar 80. LC/MS: (M+1)+: 430,3.

[1246] Paso E: Preparación del intermediario 81

[1247] A una solución de 80 (0,95 g, 2,211 mmol) en DMF (15 ml) se añadió ácido 4-metoxi-4-oxobutanoico (0.321 g, 2,433 mmol), HATU (1,009 g, 2,65 mmol), y DIEA (0,927 ml, 5,31 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante 1h. La solución se particionó entre EtOAc (200 mL) y salmuera (100 mL), la fase orgánica se lavó con salmuera (2x100mL), se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó en columna de gel de sílice utilizando EtOAc/hexano como disolventes de elución para dar 81. LC/MS: (M+1)+: 544,2.

[1248] Paso F: Preparación del intermediario 82

[1249] A una solución de 81 (1,165 g, 2,143 mmol) en DCM (12 ml) se añadió HCl (4N en dioxano) (5,36 ml, 21,43 mmol). La solución resultante se agitó a rt durante 3 h, y la mezcla se concentró para dar 82. LC/MS: (M+1)+: 444,2. Paso G: Preparación del intermediario 83

[1250] A una solución de 82 (1,003 g, 2,089 mmol) en DMF (20 ml) se le añadió Fmoc-L-Tyr(Me)-OH (0,959 g, 2,298 mmol), HATU (0,914 g, 2,403 mmol) y DIEA (1,095 ml, 6,27 mmol), y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 50 minutos. La solución se separó entre EtOAc (200 ml) y salmuera (100 ml), la fase orgánica se lavó con salmuera (2 x 100 ml), la fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice utilizando EtOAc/hexano como disolventes de elución, lo que dio 83. LC/MS: (M+1)+: 843,4.

[1251] Paso H: Preparación del intermediario 84

[1252] A una solución de 83 (1,63 g, 1,934 mmol) en acetonitrilo (10 ml) se añadió piperidina (0,574 ml, 5,80 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante 1h, después se concentró. El residuo se resuspendió en acetonitrilo (20 mL) y se concentró de nuevo, el ciclo se repitió una vez y el residuo se secó de nuevo a alto vacío para dar 84. LC/MS: (M+1)+: 621,3.

[1253] Paso I: Preparación del intermediario 85

[1254] A una solución de 84 (1,2 g, 1,933 mmol) en DMF (15 ml) se añadió Fmoc-L-Thr(tBu)-OH (0.922 g, 2,320 mmol), HATU (0,919 g, 2,416 mmol), y DIEA (0,844 ml, 4,83 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante 1h. La solución se particionó entre EtOAc (200 mL) y salmuera (100 mL), la fase orgánica se lavó con salmuera (2x100 mL), se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó en columna de gel de sílice utilizando EtOAc/hexano como disolventes de elución para dar 85. LC/MS: (M+1)+: 1.000,2.

[1255] Paso J: Preparación del intermediario 86

[1256] A una solución de 85 preparada en el paso anterior (1,94 g, 1,940 mmol) en acetonitrilo (20 ml) se añadió piperidina (0,960 ml, 9,70 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante 30min, y después se concentró. El residuo se volvió a disolver en DCM/acetonitrilo (1:1, 20 mL), se concentró de nuevo, se repitió el ciclo una vez y el residuo se secó a alto vacío para dar 86. LC/Ms : (M+1 )+: 778,3.

[1257] Preparación del intermediario 88

[1258]

[1261] Paso A - Síntesis del intermediario 87

[1262] A la resina de 2-cloro-2-clorotritilo 1-1,5 mmol/g (7,0 g, 1-1,5 mmol/g) se añadió DCM seco (45 ml). La resina se agitó 20 min y a continuación se añadió la mitad de DIPEA 0,17 N en DCM (3,67 ml, 21,00 mmol), Fmoc-D-Dap(Boc)-OH (3,28 g, 7,70 mmol) y después el resto de DIPEA 0,17 N en DCM (3,67 ml, 21,00 mmol). La resina se agitó a temperatura ambiente durante una noche, se enjuagó con DCM y se secó. A continuación, la resina se templó con DIPEA al 5% y MeOH al 10% en DCM (80 mL), se agitó durante 2 h y después se filtró, se enjuagó con DCM (3x), DMF (3x) y<d>C<m>(3x) y después se secó al vacío para dar la resina 87 que se utilizó tal cual en el paso siguiente.

[1263] Paso B - Síntesis del intermediario 88

[1264] La resina 87 (4,5 g, 2,475 mmol) se desprotegió manualmente con piperidina al 5% en DMF (30 ml) durante 30 min, se filtró, se volvió a tratar con piperidina al 5% en DMF (30 ml) durante otros 30 min, se filtró, después se aclaró con DMF y DCM y se secó. A continuación, la resina se acopló manualmente con Fmoc-Ala-OH (1,541 g, 4,95 mmol), HATU (1,694 g, 4,46 mmol) y DIPEA (1,729 ml, 9,90 mmol) en DMF (30 ml) durante 2 h, después se filtró, se enjuagó con DMF y DCM, y luego se secó. A continuación, la resina se trató con AcOH al 10% y TFE en DCM (60 ml) durante 90 min, se filtró y el filtrado se concentró para proporcionar 88 ,. LC/MS: [2M+H]+ = 995,01. Ejemplo 1A - Síntesis alternativa de Ej-01 y preparación de Ej-25 a partir del mismo:

[1265] El compuesto Ej-01, presentado anteriormente, puede prepararse alternativamente, y el compuesto Ej-25 puede prepararse a partir de Ej-01, de acuerdo con el siguiente Esquema:

[1266]

[1267]

[1268]

[1269]

[1270]

[1271] Int-cd9

[1272]

[1275] Paso A - Síntesis del intermediario Int-cd1

[1277] A una solución de Int-3c (síntesis a partir del intermediario 107 descrita a continuación) (7,09 g, 10,33 mmol) en DMF (45 ml) a 0 °C se añadió Int-2d (3,63 g, 9,84 mmol, preparación descrita a continuación) y HATU (3,74 g, 9,84 mmol)) seguido de DIPEA en DMF (6,87 ml, 39,4 mmol) y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 1h. La mezcla se apagó a 0 °C con salmuera y se extrajo con EtOAc. Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1 % a 80% de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar Int-cd1. LC/MS: [M+1]+ = 1.000,5.

[1279] Paso B - Síntesis del intermediario Int-cd2

[1281] A una solución de Int-cd1 (3,48 g, 3,48 mmol) en acetonitrilo (50 ml) se añadió piperidina (1,72 ml, 17,40 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante 3h. La mezcla se concentró, el residuo se volvió a disolver en DCM/acetonitrilo (1:1,20 mL), se concentró de nuevo y el residuo se secó al vacío para dar Int-cd2 como producto crudo. LC/MS: (M+1)+=778,5.

[1283] Paso C - Síntesis del intermediario Int-cd3

[1285] A una solución de 76 (preparación mostrada en el Ejemplo 1, anterior) (2,45 g, 3.01 mmol) y Int-cd2 (2,69 g, 3,46 mmol) en DMF (70 ml) a 0 °C se añadió HATU (1,37 g, 3,61 mmol) seguido de DIEA (1,05 ml, 6,02 mmol). La solución resultante se agitó a rt durante 50 min y después se repartió entre EtOAc (500 mL) y salmuera (200 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera (2x200 mL), se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1% - 5% de MeOH en DCM) para dar Int-cd3. LC/MS: (M+1)+=1.574,7.

[1287] Paso D - Síntesis del intermediario Int-cd4

[1288] Una solución a temperatura ambiente de Int-cd3 (1,91 g, 1.21 mmol) en DCM (1500 ml) y ácido acético (30 mL) se burbujeó con N2 durante 30 min seguido de la adición del catalizador de Zhan-1B (0,445 g, 0,607 mmol). La mezcla resultante se sometió además a burbujeo a temperatura ambiente con N2 durante 30 min y, a continuación, se calentó a 55 °C durante 5 h. Tras enfriar a rt, la mezcla se filtró sobre Celita, el filtrado se concentró, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1 % - 5% de MeOH en DCM) para dar Int-cd4 (como mezcla de olefinas cis y trans). LC/MS: (M+1)+=1.546,8.

[1289] Paso E - Síntesis del intermediario Int-cd5

[1290] A una solución de Int-cd4 (mezcla de olefinas cis y trans) (5,49 g, 3,55 mmol) en DCM (20 ml) y acetonitrilo (50 ml) se añadió piperidina (1,76 ml, 17,8 mmol). La solución resultante se agitó a rt durante 2 h, después se concentró y el residuo se suspendió en acetonitrilo (20 ml) y se concentró de nuevo. A continuación, el residuo se secó al vacío para dar Int-cd5 (como mezcla de olefinas cis y trans) como mezcla cruda. LC/MS: (M+1)+=1.323,8.

[1291] Paso F - Síntesis del intermediario Int-cd6

[1292] A una solución de Int-cd5 (mezcla de olefinas cis y trans) (4,70 g, 3,55 mmol) y Int-1d (2.21 g, 4,44 mmol, preparación descrita a continuación) en DMF (70 ml) a 0 °C se añadió HATU (1,76 g, 4,62 mmol) y DIEA (1,55 ml, 8,88 mmol). La solución resultante se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h, después se repartió entre EtOAc (300 mL) y salmuera (200 mL). La fase acuosa se extrajo con EtOAc (200 mL), la fase EtOAc se combinó y se lavó con salmuera (3x200 mL), se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1% - 5% de MeOH en DCM) para dar Int-cd6 (como mezcla de olefinas cis y trans). Lc /MS: (M+1 )+= 1.802,8

[1293] Paso G - Síntesis del intermediario Int-cd7

[1294] A una solución de Int-cd6 (como mezcla de olefinas cis y trans) (5,41 g, 3,00 mmol) en THF (100 ml), MeOH (30 ml) y agua (30 ml) a 0 °C se añadió LiOH acuoso 1N (24,0 ml, 24,0 mmol) gota a gota, y la solución resultante se agitó a 0 °C durante 3h. La mezcla se neutralizó a 0 °C añadiendo HCl 1N, se evaporó el volátil, y la capa acuosa se neutralizó a pH 5 con HCl 1N. A continuación, la mezcla se congeló y liofilizó, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre C18 (eluyendo con un gradiente de acetonitrilo (0,05%TFA)/agua (0,05%TFA)) para dar Int-cd7 (como mezcla de olefinas cis y trans) como Sal de TFA. A la sal de Int-cd7 TFA así obtenida, (como mezcla de olefinas cis y trans) en acetonitrilo (750 mL) y agua (450 mL) se añadió a 0 °C HCl acuoso 0,1N (150 ml, 15,00 mmol) gota a gota, después la solución resultante se agitó a 0 °C durante 5 min, se congeló y se liofilizó para dar Int-cd7 como sal de HCl (como mezcla de olefinas cis y trans). LC/MS: (M+1)+=1.566,6.

[1295] Paso H - Síntesis del intermediario Int-cd8

[1296] A una solución de sal de HCl de Int-cd7 obtenida en el paso anterior (1,01 g, 0,630 mmol) en DMF (50 ml) y DCM (1.300 ml) se añadió DIEA (0,330 ml, 1,890 mmol) y<h>A<t>U (0,287 g, 0,756 mmol). La solución resultante se agitó a rt durante 2 h, se evaporó el volátil y el residuo se repartió entre EtOAc (400 mL) y salmuera (200 mL). La fase acuosa se extrajo con EtOAc (300 mL), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (3x100 mL), se secaron sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1% - 10% de MeOH en DCM) para dar Int-cd8 (como mezcla de olefinas cis y trans). LC/MS: (M+1)+=1.548,8.

[1297] Paso I - Síntesis del intermediario Int-cd9

[1298] A una disolución de Int-cd8 obtenida en el paso anterior (1,22 g, 0,788 mmol) en MeOH (100 ml) se añadió Pd/C al 10% (0,645 g, 0,607 mmol), y la mezcla resultante se hidrogenó a temperatura ambiente mediante H2 en globo durante 7 horas. Después de 7 horas, la reacción se filtró sobre Celita, el filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1% -10% de MeOH en DCM) para dar Int-cd9. LC/MS: (M+1)+=1.550,9.

[1299] Paso J - Síntesis del compuesto Ej-01 como la sal -HCl

[1300] A una disolución de Int-cd9 (1,14 g, 0,735 mmol) en DCM (6 ml) se añadió TFA (12 ml, 156 mmol), y la disolución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Después se concentró la mezcla, y el residuo se disolvió en DCM (20 mL) y tolueno (20 mL). La mezcla resultante se concentró y el residuo se volvió a disolver en DCM (20 mL) y se trató con HCl (4N en dioxano) (0,919 ml, 3,68 mmol). La mezcla resultante se concentró para dar el producto como sólido. Este producto sólido se redisolvió en acetonitrilo (200 mL) y agua (100 mL), y a la solución anterior a 0 °C se añadió HCl acuoso 1N (3,68 ml, 3,68 mmol) gota a gota. La solución resultante se agitó a 0 °C durante 2 min, después se congeló y se liofilizó para dar Ej-01 como sal -HCl. LC/MS: (M+1)*=1.394,7.

[1301] Paso K - Síntesis del ejemplo Ej-25 como la Sal de TFA

[1302] A una solución de sal HCl de Ej-01 (870 mg, 0,608 mmol) y Int-4b (170 mg, 0,669 mmol, preparación descrita a continuación) en DMF (1 ,2 ml) y agua (0,6 ml) se añadió hATu (254 mg, 0,669 mmol) y DIeA (425 pl, 2,433 mmol).

[1303] La solución resultante se agitó a rt durante 1 h y se apagó añadiendo 1,2 mL de agua. La mezcla se filtró, y el filtrado se purificó mediante cromatografía en columna sobre C18 (eluyendo con un gradiente de acetonitrilo (0,05%TFA)/agua (0,05%TFA)) para dar Ej-25 como sal de TFA. LC/MS: M+= 1.550,6.

[1304] Paso L - Preparación del ejemplo Ej-25 como la sal de Cl. ¡

[1305] En dos columnas se empaquetaron 73,6 g de resina de intercambio iónico AG MP-1 en forma de cloruro (cat# 141­ 1841 BIO-RAD) para un total de 36,8 g de resina en cada columna. Cada columna se lavó con agua (2x80 ml), seguida de acetonitrilo al 20% en agua (2x100 ml). Una solución de Ej-25 sal de TFA preparada en el paso anterior (737 mg, 0,443 mmol) en acetonitrilo al 20% en agua (100 mL) se cargó uniformemente en las dos columnas de resina, después cada columna se eluyó con acetonitrilo al 20% en agua (130 ml). Los eluyentes se combinaron, congelaron y liofilizaron para dar Ej-25 como la sal de cloruro. LC/MS: M+ = 1.550,6.

[1306] Sigue la descripción de una serie de intermediarios que se emplean útilmente en la síntesis de Ej-01 y Ej-25 descritos inmediatamente antes.

[1307] Preparación del intermediario Int-1d

[1308] El compuesto intermediario Int-1d se preparó a partir de materiales de partida de acuerdo con el siguiente esquema:

[1311]

[1313] Paso A - Síntesis de Int-1da

[1314] A una solución de sal D-Dap(Boc)-OMe HCl (4,10 g, 16,10 mmol), Fmoc-Ala-OH (5,01 g, 16,10 mmol) y HATU (6,43 g, 16,90 mmol) en DMF (40 ml) a 0 °C se añadió DIPEA (7,03 ml, 40,2 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h y después se mantuvo en el refrigerador durante la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente con agua y se extrajo con EtOAc. Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con media salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de Hexanos/EtOAc) para dar Int-1da. LC/MS: [M+H]+= 512,3. Paso B - Síntesis de Int-1d

[1315] A una solución de Int-1da (8,03 g, 15,70 mmol) y cloruro de calcio 0,8 N (19,62 ml, 15,70 mmol) en agua (40 ml) y 2-propanol (120 ml) a temperatura ambiente se añadió hidróxido de sodio sólido (0,691 g, 17,27 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla se concentró, se acidificó con 0,5 N hasta un pH ~2 (~40 ml), se extrajo tres veces con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre C18 (eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua 0,1% de TFA) para dar Int-1d. LC/MS: [M+H]+ = 498,25.

[1316] La preparación del intermediario Int-1d se describe anteriormente para su uso en la preparación de Ej-01 y Ej-25. Esta porción de la molécula puede describirse como un "enlazador" que cicla el anillo peptídico inferior al anillo peptídico superior. Pueden utilizarse otros "enlazadores" similares en lugar de Int-1d variando el espaciador utilizado en la síntesis, incluyendo, pero sin limitarse a ello, la utilización de Dap y D-Ala.

[1317] Preparación del intermediario Int-2d

[1318] El intermediario Int-2d, útil como "enlazador" en la preparación de compuestos de la invención, se preparó de acuerdo con el siguiente esquema:

[1319]

[1321] Una disolución de 4-bromobenzaldehído (15,00 g, 81 mmol), N-[2-(trifluoroboranuidil)etil]carbamato de terc-butilo y potasio (20,97 g, 84 mmol), carbonato de cesio (52.8 g, 162 mmol) y el complejo 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodiclorometano de dicloruro de paladio(ii) (Pd(II)(dppf)Cl2, 1,99 g, 2,43 mmol) en tolueno desgasificado (250 ml) y agua (85 ml) se calentó a 76 °C y se agitó durante la noche. La mezcla se apagó a temperatura ambiente con cloruro de amonio acuoso semisaturado y se extrajo con EtOAc. Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de DCM/EtOAc) para dar Int-2da. LC/MS: (M-56+1)+= 193,0.

[1322] Paso B - Síntesis de Int-2db

[1323] A una solución de Int-2da (12,9 g, 51,7 mmol) y pent-4-en-1-amina (6,61 g, 78 mmol) en DCM (120 ml) y AcOH (3 ml) a temperatura ambiente en un baño de agua se añadió triacetoxihidroborato sódico (32,9 g, 155 mmol) por porciones y la mezcla se agitó durante 30 min. La reacción se apagó lentamente a 0 °C con 3 ml de agua, se vertió en NaOH 1 N (500 ml), se agitó durante 15 min y después se extrajo con DCM, se secó sobre Na2SO4, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de DCM/MeOH) para dar Int-2db. LC/MS: (M+1)+= 319,2.

[1324] Paso C - Síntesis de Int-2dc

[1325] A una solución de Int-2db (8,48 g, 20,77 mmol) y ácido 4-metoxi-4-oxobutanoico (3,02 g, 22,85 mmol) en DMF (40 ml) se añadió HATU (9,48 g, 24,92 mmol) y DIPEA (8,71 ml, 49,8 mmol). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y después se apagó con NaHCO3 acuoso saturado (10 mL). La mezcla se particionó entre EtOAc (500 mL) y NaHCO3 acuoso saturado (200 mL), la fase orgánica se lavó con salmuera (3x200 mL), se secó sobre Na2SO4, se concentró y el residuo se purificó en columna de gel de sílice (eluyendo con un gradiente de Hexanos/EtOAc) para dar Int-2dc. LC/MS: (M+1)+= 433,4.

[1326] Paso D - Síntesis de Int-2d

[1327] A una disolución de Int-2dc (2,9 g, 6,70 mmol) en DCM (15 mL) se añadió HCl 4 M en Dioxano (10 mL) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se concentró a presión reducida para proporcionar clorhidrato de 4-((4-(2-aminoetil)bencilo)(pent-4-en-1-il)amino)-4-oxobutanoato de metilo (Int-2d). LC/MS [M-HCl H]+ = 333,3.

[1328] Preparación de Int-3c a partir de 107 utilizados en la síntesis de Ej-01 y Ej-25 descrita anteriormente El intermediario Int-3c se preparó de acuerdo con el siguiente esquema:

[1330]

[1332] En una disolución de 107 (cuya preparación se presenta en la síntesis de 109 y posteriormente se utilizó para 116, cuyo compuesto intermediario se usa en la síntesis de Ej-53, Ej-54 y Ej-55 en el Ejemplo 3 a continuación) (10,34 g, 21,65 mmol) en THF (100 ml) a temperatura ambiente, se añadió hidróxido de litio 2 N monohidratado (43,3 ml, 87 mmol) y la mezcla se calentó a 45 °C y se agitó durante la noche para dar Int-3ca como solución cruda. LC/MS: (M+1)+=464,3. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se trató con HCl 1 M (40 mL). La mezcla se utilizó directamente para el siguiente paso.

[1333] Paso B - Síntesis de Int-3c

[1334] Al Int-3ca crudo preparado en el paso anterior se añadió NaHCO3 (1,725 g, 20,54 mmol) y Fmoc-OSu (3,81 g, 11,30 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 h, se trató con HCl 1 M (20,5 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 100 mL) y se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 2% a 5% de MeOH en DCM, para obtener Int-3c. LC/MS: (M+1)+ = 686,4.

[1335] Preparación del intermediario Int-4b

[1337] El intermediario Int-4b se preparó de acuerdo con el siguiente esquema:

[1339]

[1342] Paso A- Síntesis de Int-4ba a partir de terc-butil-3-(2-h¡drox¡etox¡)proponato

[1343] A una solución de 3-(2-hidroxietoxi)propanoato de terc-butilo (500,0 mg, 2,63 mmol) en DCM (2 mL) se añadieron CBr4 (1395 mg, 4,21 mmol) y PPh3 (965 mg, 3,68 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla resultante se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente 1% -15% de acetato de etilo en éter de petróleo. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y concentraron para obtener 6-bromohexanoato de terc-butilo. Así preparada, una solución de 6-bromohexanoato de terc-butilo (5 g, 19,91 mmol) en acetonitrilo (10 ml) se trató con trimetilamina (13,56 ml, 59,7 mmol) y la solución resultante se calentó a 50 °C durante la noche. La solución se concentró para dar Int-4ba. LC/MS: M+= 230,3.

[1344] Paso B - Síntesis de Int-4b

[1345] A una solución de Int-4ba (6,8 g, 21,92 mmol) en DCM (6 ml) se añadió HCl 4N en dioxano (27,4 ml, 110 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante 3h. A continuación, la mezcla se concentró para dar Int-4b. LC/MS: M+= 174,3.

[1346] La preparación del intermediario Int-2d se describe anteriormente para su uso en la preparación de Ej-01 y Ej-25. Esta porción de la molécula puede describirse como un "enlazador" que cicla el anillo peptídico inferior que lleva los sustituyentes R1, R2y R8. Pueden utilizarse otros "enlazadores" similares en lugar de Int-2d. A continuación, se describen otros "enlazadores" que pueden utilizarse para preparar ejemplos de la invención descrita en el presente documento.

[1347] Preparación del intermediario Int-2e

[1348] El intermediario Int-2e, útil como "enlazador" en la preparación de compuestos de la invención, se preparó de acuerdo con el siguiente esquema:

[1351]

[1354] Paso A - Síntesis del intermediario Int-2ea

[1355] A una solución de (2-(3-oxoisoindolin-5-il)etil)carbamato de terc-butilo (1,60 g, 5,79 mmol) en DCE (20 mL) se añadieron NsCl (1,93 g, 8,69 mmol), trietilamina (1,76 g, 17,4 mmol) y DMAP (0,141 g, 1,16 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 14 h a 40 °C. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1%-40% de EtOAc en PE) para dar Int-2ea. LC/MS: (M+Na)+:= 484,4.

[1356] Paso B - Síntesis del intermediario Int-2eb

[1357] A una solución de Int-2ea (11,3 g, 24,5 mmol) en THF (100 mL) y agua (100 mL) se añadió LiOH (1,76 g, 73,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 5 h a 25 °C y, a continuación, la solución resultante se ajustó a pH 4~5 con HCl (1M). La solución se extrajo con EtOAc y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1%-6% de MeOH en DCM) para proporcionar Int-2eb. LC/MS: (M+Na)+:= 502,2.

[1358] Paso C - Síntesis del intermediario Int-2ec

[1359] A una disolución de Int-2eb (1,70 g, 3,55 mmol) en THF (8 mL) se añadió borano (0,147 g, 10,6 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 14 h a 25 °C y la solución resultante se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente del 1%-50% de EtOAc en PE) para dar Int-2ec. LC/MS: (M+NH4]+= 483,2.

[1360] Paso D - Síntesis del intermediario Int-2ed

[1361] A una disolución de Int-2ec (4,50 g, 9,67 mmol) en DMF (150 mL) se añadió K2CO3 (2,01 g, 14,5 mmol) y 3-bromoprop-1-eno (1,41 g, 11,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 5 h a temperatura ambiente, después se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente del 1%-50% de EtOAc en PE) para obtener Int-2ed. LC/MS: (M+H)+:= 506,2.

[1362] Paso E - Síntesis del intermediario Int-2e

[1363] A una disolución de Int-2ed (4,50 g, 8,90 mmol) en DMF (35 mL) se añadió DBU (1,35 g, 8,90 mmol) y 2-mercaptoetanol (2,08 g, 26,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 14 h a temperatura ambiente y luego se purificó mediante cromatografía en columna sobre C18 (Columna: 330 g; Fase móvil A: agua/0,05% TFA, Fase móvil B: ACN; Caudal: 85 mL/min; Gradiente: 10% B a 20% B en 15 min, 20% B a 45% B en 15 min Detector: UV 210 nm; Rt=20 min) para obtener Int-2e. LC/MS: (M+H)+:= 321,2. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 87,21-7,13 (m, 2H), 7,10-7,01 (m, 1H), 5,96-5,79 (m, 1H), 5,30-5,09 (m, 2H), 4,58 (s, 2H), 3,84 (s, 2H), 3,43-3,19 (m, 4H), 2,76 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 1,41 (s, 9H).

[1364] Preparación del intermediario Int-2f-1

[1365] El intermediario Int-2f-1, útil como "enlazador" en la preparación de compuestos de la invención, se preparó de acuerdo con el siguiente esquema:

[1368]

[1371] Paso A - Síntesis del intermediario Int-2fa

[1372] A una disolución de 4-bromobenzaldehído (20,0 g, 108 mmol), (S)-2-metilpropano-2-sulfinamida (12,5 g, 103 mmol), MgSO4 (130 g, 1081 mmol) en DCM (225 mL) se añadió 4-metilbencenosulfonato de piridina (1,35 g, 5,40 mmol) bajo protección de nitrógeno. Esta mezcla se agitó a 25 °C durante 72 h, después se filtró la solución resultante y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1%-15% de EtOAc en PE) para dar Int-2fa. LC/MS: (M+H)+:= 287,9, 289,9.

[1373] Paso B - Síntesis del intermediario Int-2fb (racemato) y separación en enantiómeros Int-2fb-1 e Int-2fb-2 A una solución de Int-2fa (20,0 g, 65,9 mmol) en DCM seco (200 mL) se añadió bromuro de but-3-en-1-ilmagnesio (15,7 g, 99 mmol) lentamente a -48 °C bajo protección de nitrógeno. La mezcla se agitó a -48 °C durante 2 h y después se apagó con solución acuosa saturada de NH4Cl (400 mL) y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante (que contenía Int-2fb mezcla racémica) se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente del 1%-35% de EtOAc en PE) para dar Int-2fb-1 e Int-2fb-2. LC/MS: (M+H)+:= 344,0, 346,0.

[1374] Paso C - Síntesis del intermediario Int-2fc-1

[1375] A una disolución de HCl (100 mL, 4 N en 1,4-dioxano) a temperatura ambiente se añadió Int-2fb-1 (17,0 g, 46,9 mmol). La solución de reacción se agitó durante 1 h y después se concentró a presión reducida para obtener Int-2fc-1. LC/MS: (M+H-HCl)+:= 240,0, 242,0.

[1376] Paso D - Síntesis del intermediario Int-2fd-1

[1377] A una disolución de Int-2fc-1 (8,20 g, 28,2 mmol) y Teoc-OSu (8,03 g, 31,0 mmol) en 1,4-dioxano (200 mL) se añadió TEA (8,55 g, 84 mmol) a 25 °C. Esta mezcla se agitó durante 2 horas, después se apagó con agua y se extrajo con éter de petróleo (PE). Las capas orgánicas combinadas se concentraron a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1 %-10 % de EtOAc en PE) para dar Int-2fd-1. LC/MS: (M+Na+CHaCN)+:= 447,3, 449,3.

[1378] Paso E - Síntesis del intermediario Int-2fe-1

[1379] A una solución de Int-2fd-1 (15,1 g, 37,3 mmol), (2-((tert-butoxicarbonil)amino)etil) trifluoroborato de potasio (18,7 g, 74.6 mmol), Cs2CO3 (36,5 g, 112 mmol) en tolueno (285 mL) y agua (95 mL) se añadió PdCh(dppf) (1,37 g, 1,87 mmol) bajo protección de nitrógeno. La mezcla se agitó a 80 °C durante 40 h. La solución resultante se lavó con agua y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1%-40% de EtOAc en PE) para obtener Int-2fe-1. LC/MS: (M+Na)+:= 471,4. Paso F - Síntesis del intermediario Int-2f-1

[1380] A una disolución de Int-2fe1 (10,6 g, 22,4 mmol) en THF (100 mL) se añadió TBAF 1N en THF (44,9 mL, 44,9 mmol). Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h, se apagó con agua y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con un gradiente de 1%-70% de EtOAc en PE) y, a continuación, mediante cromatografía en columna sobre C18 (Columna: 330 g; Fase móvil A: agua (10 mm NH4HCO3), Fase móvil B: ACN; Caudal: 80 mL/min; Gradiente: 10% B a 10% B en 10 min, 20% B a 45% B en 10 min, 45% B a 70% B en 20 min Detector: UV 210 nm; Rt= 25 min) para proporcionar Int-2f-1. LC/MS: (M+H)+:= 305,1. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) 87,27-7,16 (m, 4H), 5,85-5,75 (m, 1H), 5,00-4,85 (m, 2H), 3.79 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 3,32-3,21 (m, 2H), 2,75 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,98-1,72 (m, 4H), 1,42 (s, 9H).

[1381] EJEMPLO 2 Preparación de Ej-50 y Ej-52

[1382]

[1385] El compuesto Ej-50 se prepara de acuerdo con el esquema siguiente a partir del compuesto Ej-01, cuya preparación se describe en el presente documento en el Ejemplo 1, haciéndolo reaccionar en condiciones adecuadas con el intermediario Int 32, preparado de acuerdo con el esquema siguiente:

[1388]

[1391] Paso A: Preparación del producto intermediario Int-32A

[1393] A una solución de 3-(2-(2-bromoetoxi)etoxi)propanoato de terc-butilo (5 g, 16,82 mmol) en acetonitrilo (10 ml) se añadió trimetilamina (33% en etanol, 11,46 ml, 50,5 mmol), y la solución resultante se calentó a 50 °C durante la noche. La solución se concentró para dar 2-(2-(3-(terc-butoxi)-3-oxopropoxi)etoxi)-bromuro de N,N,N-trimetiletanamonio (Int 32A). LC/MS: (M)+: 276,5.

[1395] Paso B: Preparación del producto intermediario Int-32

[1397] A una solución de 2-(2-(3-(terc-butoxi)-3-oxopropoxi)etoxi)-bromuro de N,N,N-trimetiletanaminio (Int-32A) (5.99 g, 16,81 mmol) en DCM (20 ml) se añadió HCl (4N en dioxano) (21,01 ml, 84 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante la noche. La solución se concentró para dar bromuro de 2-(2-(2-carboxietoxi)etoxi)-N,N,N-trimetiletanaminio (Int-32). LC/MS: (M)+: 220,1.

[1399] Preparación del compuesto de ejemplo Ej-50

[1400]

[1403] trimetiletanaminio (Int-32) (4,49 mg, 0,015 mmol) en DMF (2 ml) se añadió HATU (5,69 mg, 0,015 mmol) y DIEA (6,54 |jl, 0,037 mmol), y la solución resultante se agitó a rt durante 50 min, después se purificó por HPLC de fase inversa utilizando acetonitrilo(ácido fórmico al 0,1%)/agua(ácido fórmico al 0,1%) como fase móvil para dar Ej-50. LC/MS: M+ = 1.596,3.

[1404] Preparación del compuesto de ejemplo Ej-52

[1405] El compuesto Ej-52 se preparó de manera análoga a la preparación del compuesto Ej-50 pero utilizando Ej-51 en lugar de Ej-01. Ej-52 se purificó utilizando HPLC de fase inversa, de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento. LC/MS: M+ = 1.593,8.

[1406] EJEMPLO 3 Preparación de Ej-53, Ej-54 y Ej-55

[1407]

[1410] Los compuestos Ej-53, Ej-54 y Ej-55 se prepararon de manera análoga a los compuestos descritos anteriormente a partir del intermediario 115 (preparación descrita a continuación), según los esquemas y la descripción de síntesis siguientes:

[1411]

[1414] Paso A - Síntesis del intermediario 116

[1415] A una solución de 115 (66,3 mg, 0,044 mmol) en DMF (1,5 ml), DCM (10 ml) y agua (0,5 ml) a 0 °C se añadió DIPEA (0,030 ml, 0,173 mmol) seguido de HATU (18,50 mg, 0,049 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 min. La mezcla se concentró in vacuo y se purificó directamente mediante cromatografía en columna sobre C18 (30 g, eluyendo con acetonitrilo+0,05% TFA/agua+0,05% TFA 90:10 a 40:60) para proporcionar 116 como mezcla de isómeros E y Z, así como 116 como fracciones puras de isómero E o Z. LC/ MS (isómero mayoritario) LC/MS: M+ = 1.481,19; LC/MS (isómero menor): LC/MS: M+ = 1.480.

[1416] Paso B - Síntesis del compuesto Ej-54

[1417] Una solución de 116 (25,1 mg, 0,017 mmol) y Pd-C 10% (3,61 mg, 3,39 pmol) en MeOH (10 ml) se hidrogenó a 1 atm durante 1 h. La reacción se filtró sobre Celita y se concentró. El residuo se trató con DCM/TFA 1:1 durante 30 min y después se concentró, se trató con HCl 4N en dioxano (100 uL) y después se concentró para proporcionar Ej-54 en forma de la sal HCl. LC/MS: M+ = 1.383,44.

[1418] Paso C - Síntesis del compuesto Ej-55

[1419] El compuesto de ejemplo Ej-55 se preparó en forma de sal de formiato a partir de Ej-54 de manera idéntica a la descrita en el Ejemplo 2 para la síntesis del compuesto Ej-50. LC/MS: M+ = 1.583,69.

[1420] Paso D - Síntesis del compuesto Ej-53

[1421] El compuesto del ejemplo Ej-53 se preparó en forma de sal HCl a partir del compuesto intermediario 116 de manera idéntica a la descrita en el ejemplo 1 para la síntesis del compuesto Ej-51. LC/MS: M+ = 1.381,33.

[1422] La preparación de los intermediarios necesarios para proporcionar el compuesto intermediario 115 a partir del cual se preparan en última instancia los compuestos Ej-53, Ej-54 y Ej-55 se describe en los esquemas y síntesis siguientes comenzando con la preparación del compuesto intermediario 103.

[1425]

[1428] Paso A - Síntesis del intermediario 100

[1429] Una solución de 4-bromo-2-hidroxibenzaldehído (3,00 g, 14,92 mmol), N-[2-trifluoroboraniudil)etil] carbamato de potasio (3,82 g, 15,22 mmol), carbonato de cesio (17,02 g, 52,2 mmol) y el complejo 1,1' bis(difenilfosfino)ferroceno-dicloruro de paladio(ii)didorometano (0,611 g, 0,746 mmol) en tolueno desgasificado (45 ml) y agua (15 ml) se calentó a 75 °C y se agitó durante la noche. La mezcla se apagó a temperatura ambiente con bicarbonato sódico acuoso semisaturado y se extrajo con EtOAc. Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con Hexanos/EtOAc 99:1 a 60:40) para dar 100. LC/MS: (M-55)+ = 210,25.

[1431] Paso B - Síntesis del intermediario 101

[1433] A una solución de 100 (1,70 g, 6,41 mmol) y bromuro de alilo (0,832 ml, 9,61 mmol) en DMF (10 ml) a temperatura ambiente se añadió carbonato de potasio (1,328 g, 9,61 mmol) y la mezcla se calentó a 50 °C y se agitó durante 1 h. La mezcla se apagó a temperatura ambiente con bicarbonato sódico acuoso semisaturado y se extrajo con EtOAc. Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con Hexanos/EtOAc 99:1 a 70:30) para dar 101. LC/MS: (M-55)+ = 250,29.

[1435] Paso C - Síntesis del intermediario 102

[1437] A una solución de 101 preparada en el paso anterior (1,76 g, 5,76 mmol), tamices moleculares 4 A (2 g) y acetato de amonio (4,44 g, 57,6 mmol) en MeOH (100 ml) a temperatura ambiente se añadió cianoborohidruro de sodio (0,380 g, 6,05 mmol) y la mezcla se agitó durante la noche. La mezcla se concentró, se enfrió a temperatura ambiente con agua y se extrajo con DCM. Las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con DCM/MeOH 99:1 a 30:70) para proporcionar 102. LC/MS: (2M+H)+ = 613,56.

[1439] Paso D - Síntesis del intermediario 103

[1441] A una solución de 102 (220 mg, 0,718 mmol) y éster monometílico de ácido succínico (114 mg, 0,862 mmol) en DMF (4 ml) a temperatura ambiente se añadió HATU (300 mg, 0,790 mmol) y DIPEA (0,314 ml, 1,795 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 min. La mezcla se apagó a temperatura ambiente con bicarbonato sódico acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con Hexanos/EtOAc 99:1 a 30:70) para dar un intermediario que se trató con TFA al 20% en DCM durante 1h. La reacción se concentró y después se trató con HCl 4N (1,5 mL) y se concentró para proporcionar 103. LC/MS: (M+H)+ = 321,29.

[1443] Preparación del intermediario 109

[1444]

[1447] A una solución agitada de clorhidrato de (S)-2-metilpirrolidina-2-carboxilato de metilo (7,00 g, 39 mmol) y ácido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(4-metoxifenil)propanoico (12.08 g, 40,9 mmol) en DMF (100 ml) a 0 °C se añadió DIPEA (17,01 ml, 97,0 mmol) seguido de HaTu (19,26 g, 50,7 mmol). La mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. La reacción se apagó con una solución acuosa de LiCl al 10% y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con LiCl acuoso al 10% y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con Hexanos/EtOAc 80:20 a 40:60) para proporcionar 104.

[1449] Paso B - Síntesis del intermediario 105

[1451] A una solución de 104 (16,4 g, 39,0 mmol) en EtOAc (100 ml) se añadió HCl 4 N en dioxano (48,8 ml, 195 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y se concentró a presión reducida para dar 105 que se utilizó en el paso siguiente sin purificación adicional.

[1453] Paso C - Síntesis del intermediario 106

[1455] A una solución de 105 (13,2 g, 37,0 mmol) y N-((benciloxi)carbonil)-O-(terc-butil)-L-treonina (18,15 g, 37,0 mmol) en DMF a 0 °C se añadió DIPEA (16,15 ml, 92 mmol) seguido de hAt U (18,28 g, 48,1 mmol). La mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. La reacción se apagó con solución acuosa de LiCl al 10% y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con LiCl acuoso al 10% y se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con Hexanos/EtOAc 80:20 a 40:60) para proporcionar 106.

[1457] Paso D - Síntesis del intermediario 107

[1459] A una disolución de 106 (16,5 g, 27,0 mmol) en MeOH se añadió una suspensión de Pd/C al 10% y la mezcla se hidrogenó a 20 psi durante 4 h. La mezcla de reacción se filtró sobre Celita y se concentró a presión reducida. A continuación, el producto crudo se redisolvió en DCM y la solución se filtró a través de un filtro de 2 pm y se concentró para dar 107.

[1461] Paso E - Síntesis del intermediario108

[1462] A una solución de 107 (3,2 g, 6,70 mmol) en DCM se añadió DIPEA (1,52 ml, 8,71 mmol) seguido de dicarbonato de di-terc-butilo (1,90 g, 8,71 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con Hexanos/EtOAc 100:0 a 40:60) para proporcionar 108.

[1464] Paso F - Síntesis del intermediario 109

[1466] Una solución de 108 (1,43 g, 2,475 mmol) y LiOH acuoso 1 N (9,90 ml, 9,90 mmol) en THF (15 ml) y MeOH (15 ml) se calentó a 45 °C y se agitó durante 4 h y después a 32 °C durante 48 h. La reacción se concentró, se apagó a 0 °C con ácido clorhídrico acuoso 0,5 M hasta pH ~2-3 y se extrajo con EtOAc. Las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con Hexanos/EtOAc-EtOH 99:1 a EtOAc-EtOH 3:1) para dar 109. LC/MS: (M+H)+ = 564,49.

[1468] Preparación de los compuestos intermediarios 110 a 115

[1470] Paso A - Síntesis del intermediario 110

[1472]

[1475] Una solución de 109 (217 mg, 0,385 mmol), HATU (133 mg, 0,350 mmol) y DIPEA (0,245 ml, 1,400 mmol) en DMF (2,5 ml) se trató con 103 (217 mg, 0,385 mmol) a 0 °C y la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante 30 min. La mezcla se apagó a 0 °C con bicarbonato sódico acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con Hexanos/EtOAc-EtOH 3:1 99:1 a EtOAc-EtOH 3:1) para dar 110,. LC/MS: (M+H)+ = 866,21.

[1477] Pasos B y C - Síntesis de los compuestos intermediarios 111 y 112

[1480]

[1483] A una solución de 110 (249 mg, 0,288 mmol) en DCM (1 ml) a temperatura ambiente se añadió HCl 4 N en dioxano (0,359 ml, 1,438 mmol) y la mezcla se agitó durante 6 h y después se concentró para proporcionar 111. LC/MS: (M+H)+ = 710,19.

[1484] A una solución de 111 (219 mg, 0,293 mmol) y 76 (232 mg, 0.285 mmol) en DMF (3 ml) y agua (0,15 ml) a 0 °C se añadió DIPEA (0,128 ml, 0,734 mmol) y hATu (123 mg, 0,323 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 min. La mezcla se apagó a 0 °C con salmuera y se extrajo con EtOAc. Las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con Hexanos/EtOAc-EtOH 3-1 99:1 a 30:70 y después DCM/MeOH 99:1 a 70:30) para obtener 112. LC/MS: (M+H)+ = 1506,11.

[1485] Paso D - Síntesis del intermediario 113

[1488]

[1490] A una solución de 112 (173 mg, 0,115 mmol) en DCM (180 ml) y AcOH (15 ml) desgasificada con nitrógeno durante 30 min se añadió catalizador de Zhan (59,0 mg, 0,080 mmol) y la mezcla se calentó a 50 °C y se agitó durante 3 h. La mezcla se filtró sobre Celita, se lavó con DCM y después se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con DCM/MeOH 99:1 a 80:20) para proporcionar 113 como una mezcla de isómeros E y Z. LC/MS (isómero mayor): (M)+ = 1.477,80; LC/MS (isómero menor): (M)+ = 1.478,28.

[1491] Paso E - Síntesis del intermediario 114

[1494]

[1496] A una solución de 113 (141 mg, 0,095 mmol)) en acetonitrilo (2 ml) se añadió piperidina (0,066 ml, 0,668 mmol) y la mezcla se agitó durante 45 min. La mezcla se concentró in vacuo, se coevaporó con acetonitrilo tres veces para dar un crudo. A una suspensión de este crudo (119 mg, 0,095 mmol) y el compuesto intermediario 88 (52,0 mg, 0,105 mmol) en DMF (2 ml) y agua (0,1 ml) a 0 °C se añadió HATU (39,7 mg, 0,105 mmol) y DIPEA (0,037 ml, 0,209 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 min. La mezcla se purificó mediante cromatografía en columna sobre C18 (eluyendo con acetonitrilo+0,05% de TFA/agua+0,05% de TfA 90:10 a 30:70) para dar 114 como una mezcla de isómeros E y Z. LC/MS isómero mayor: (M)+ = 1.735,28; LC/MS (isómero menor): (M)+ = 1.735,25.

[1497] Paso F - Síntesis del compuesto intermediario115

[1498]

[1501] A una disolución de 114 (134 mg, 0,077 mmol) en THF (1,5 ml) y MeOH (1,5 ml) a 0 °C se añadió LiOH acuoso 1 N (0,386 ml, 0,386 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó durante 2 h. La reacción se trató a 0 °C gota a gota con 0.5 N de HCl hasta pH~7, se concentró a partir de disolventes orgánicos, después la suspensión se disolvió con ~1 mL de DMF y se purificó directamente mediante cromatografía en columna sobre C18 (eluyendo con acetonitrilo+0,05% de TFA/agua+0,05% de TFA 90:10 a 50:50) para dar 115 como una mezcla de isómeros E y Z. LC/MS isómero mayor: (M)+ = 1.498,71; LC/MS (isómero menor): (M)+ = 1.499,48.

[1503] Como se ha descrito anteriormente en la preparación de Ex-50 a partir de Ex-01 y de Ex-55 a partir de Ex-54 mediante la reacción de la amida R2 de los respectivos compuestos de partida con un precursor de sustituyente ácido, los siguientes compuestos intermedios pueden emplearse en reacciones análogas para proporcionar compuestos útiles de la invención.

[1505] Síntesis de precursores sustituyentes R1/R2 :

[1507] Preparación de cloruro de 5-carboxi-N-(3-metoxipropM)-MN-dimetMpentan-1-aminio (Intermediario Z-1a)

[1508] Paso A: preparación del intermediario Z-1

[1511]

[1514] A una solución agitada de rerf-butil 6-(dimetilamino)hexanoato (300 mg, 1,393 mmol) en acetonitrilo (1 mL) se añadió 1-bromo-3-metoxipropano (853 mg, 5,57 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 16 h. La mezcla resultante se concentró a presión reducida para obtener Z-1. LC/MS: (M-Br)+ = 288,4. 1H RMN (300 MHz, CDCla): 8 3,76-3,47 (m, 6 H), 3,38 (d,J= 28,9 Hz, 9H), 2,25 (t,J= 7,2 Hz, 2H), 2,12-1,95 (m, 2H), 1,87-1,55 (m, 4H), 1,45 (s, 11H).

[1516] Paso B: Síntesis del compuesto intermediario Z-1a

[1519]

Z-1 a

[1521] A una solución agitada de Z-1 (460 mg, 1,249 mmol) en DCM (0,5 mL) se añadió HCl 4 M en dioxano (2 mL) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se concentró a presión reducida. El residuo se redisolvió en DCM (5 mL) y se concentró a presión reducida para obtener el compuesto intermediario Z-1a. LC/MS: (M-Cl)+ = 232,3.

[1522] Preparación del intermediario Z-2b

[1523] Paso A: preparación del intermediario Z-2

[1526]

[1529] A una disolución agitada de ferc-bromohexanoato de butilo (1,0 g, 3,98 mmol) en THF (10 mL) se añadió dimetilamina (2 M en THF) (7,96 mL, 15,93 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla resultante se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 1% -15% de MeOH en DCM. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y concentraron para obtener Z-2. LC/MS: (M+H)+ = 216,2. 1H r Mn (300 MHz, CDCla): 82,35-2,17 (m,J= 8,5, 6,5 Hz, 10H), 1,67-1,47 (m, 4H), 1,45 (s, 9H), 1,42 -1,23 (m, 2H).

[1530] Paso B: preparación del intermediario Z-2a

[1533]

[1535] A una solución agitada de Z-2 (250 mg, 1,161 mmol) en ACN (1 mL) se añadió 1-bromo-2-metoxietano (645 mg, 4,64 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 16 h.

[1536] La mezcla resultante se concentró a presión reducida para obtener Z-2a. LC/MS: (M-Br)+ = 274,3. 1H RMN (300 MHz, CDCla): 84,02-3,80 (m, 4H), 3,70-3,54 (m, 2H), 3,42 (d,J= 13,0 Hz, 9H), 2,24 (t,J= 7,2 Hz, 2H), 1,85-1,75 (m, 2H), 1,72-1,55 (m, 2H), 1,44 (s, 11H).

[1537] Paso C: preparación del intermediario Z-2b

[1540]

[1543] A una solución agitada de Z-2a (450 mg, 1,270 mmol) en DCM (0,5 mL) se añadió HCl 4 M en dioxano (2 mL) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se concentró a presión reducida. El residuo se redisolvió en DCM (5 mL) y se concentró a presión reducida para obtener Z-2b. Lc /MS: (M-Cl)+ = 218,3.

[1544] Preparación del intermediario Z-3b

[1545] Paso A: preparación del intermediario Z-3

[1548]

[1551] A una solución de 3-(2-hidroxietoxi)propanoato de terc-butilo (500,0 mg, 2,63 mmol) en DCM (2 mL) se añadieron CBr4 (1395 mg, 4,21 mmol) y PPh3 (965 mg, 3,68 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla resultante se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con gradiente 1% -15% de EA en PE. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y concentraron para obtener Z-3. 1H RMN (400 MHz, CDCh): 83,78 (dt,J =11,1,6,3 Hz, 4H), 3,47 (t,J= 6,3 Hz, 2H), 2,53 (t,J= 6,4 Hz, 2H), 1,48 (s, 9H).

[1552] Paso B: síntesis del intermediarioZ-3a

[1553]

[1555] A una solución agitada de 3-(2-bromoetoxi)propanoato de terc-butilo Z-3 (450 mg, 1,778 mmol) en ACN (2 mL) se añadió trimetilamina (955 mg, 5,33 mmol) (33% en peso, en EtOH). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 16 h. La mezcla resultante se concentró a presión reducida para obtener Z-3a. LC/MS: (M-Br)+ = 232,3. 1H RMN (400 MHz, CDCh): 85,32 (s, 1H), 4,04-3,94 (m, 4H), 3,73 (t,J= 5,7 Hz, 2H), 3,50 (s, 10H), 2,50 (t,J =5,7 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H).

[1556] Paso C: síntesis del intermediario Z-3b

[1559]

[1562] A una disolución de Z-3a (550 mg, 1,761 mmol) en DCM (0,6 mL) se añadió HCl 4 M en dioxano (2,5 mL) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla resultante se concentró a presión reducida y el residuo se volvió a disolver en DCM (3 mL) y tolueno (3 mL). A continuación, la mezcla se concentró a presión reducida para obtener Z-3b. LC/MS: (M-Cl)+ = 176,2.

[1563] Preparación del intermediario Z-4b

[1564] Paso A: preparación del intermediario Z-4

[1567]

[1569] A una disolución de DIAD (1,755 mL, 9,03 mmol) en THF (30 mL) se añadió Ph3P (2,368 g, 9,03 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 min, después se añadieron a la solución 2-(3-hidroxifenil)acetato de metilo (1,0 g, 6,02 mmol) y 3-(dimetilamino)propan-1-ol (0,931 g, 9,03 mmol). La mezcla se agitó a 50 °C durante 1 h. La solución resultante se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 1% -10% de MeOH en DCM. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y concentraron para obtener Z-4. LC/MS: (M+H)+ = 252,2. 1H<r>M<n>(300 MHz, CDCla): 87,23-7,18 (m, 1H), 6,82 (td,J= 8,7, 4,1 Hz, 3H), 4,01 (t,J= 6,4 Hz, 2H), 3.69 (s, 3H), 3,59 (s, 2H), 2,46 (t,J= 7,3 Hz, 2H), 2,27 (s, 6 H), 1,97 (dt,J= 7,9, 6,5 Hz, 2H).

[1570] Paso B: Preparación del intermediario Z-4a

[1573]

[1575] A una disolución de Z-4 (600 mg, 2,268 mmol) en ACN (12 mL) se añadió Mel (1,288 g, 9,07 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La solución resultante se concentró a presión reducida para obtener -Z-4a. LC/MS: (M-I)+ = 266,2.

[1576] Paso C: Preparación del intermediario Z-4b

[1577]

[1580] A una disolución de Z-4a (800 mg, 1,729 mmol) en THF (12 mL) se anadio LiOH 2 M (1,729 mL, 3,46 mmol). Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El pH de la solución se ajustó a 4 con HCl (1 M) y la solución se concentró a presión reducida. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en fase inversa sobre C18 (Fase móvil A: agua, Fase móvil B: A<c>N; Caudal: 60 mL/min; Gradiente: 1% B a 25% B en 25 min; 25% B a 95% B en 15 min; 95% B a 95% B en 10 min) para obtener Z-4b. LC/MS: (M-Cl)+ = 252,2. 1H RMN (300 MHz, CD3OD): 8 7,21 (t,J= 7,9 Hz, 1H), 6.95-6,75 (m, 3H), 4,12 (t,J= 5,7 Hz, 2H), 3,63-3,50 (m, 4H), 3,18 (s, 9H), 2,35-2,20 (m, 2H).

[1582] EJEMPLO 4 Preparación de Ej-23

[1585]

[1588] Paso A: Preparación del intermediario S-1b

[1590] Se anadió (2S,3R,4S,5S,6R)-6-(acetoximetil)tetrahidro-2H-pirano-2,3,4,5-tetrailtetraacetato S-1a (5 g, 12,81 mmol) se anadió a un disolvente de 48% HBr (7,25 mL, 64,0 mmol) en AcOH y DCM (40 mL) a 0°C y la mezcla se agitó a 0°C durante 1 hora. La mezcla de reacción se vertió en hidrogenocarbonato sódico saturado acuoso enfriado en hielo y la mezcla se extrajo con DCM (3 x 60mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró, después el producto crudo se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice (eluyendo con 0-30% EtOAc/PE) a S-1b.

[1591] Paso B: Preparación del intermediario S-1c

[1592] A una disolución de S-1b (4,5 g, 10,94 mmol) en DMF seco (45 mL) se añadió azida sódica (0,854 g, 13,13 mmol) y la reacción se agitó a 18 °C durante 30 min. La mezcla de reacción se diluyó con agua (30 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 80 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó hasta sequedad. El producto crudo se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice (eluyendo con 0-30% EtOAc/PE) para dar S-1c.

[1593] Paso C: Preparación del intermediario S-1d

[1594] A una disolución de S-1c (3,15 g, 8,44 mmol) en EtOH (60 mL) se añadió Pd-C al 10% (0,898 g, 0,844 mmol). Se purgó el aire del recipiente de reacción y se llenó con H2 a 50 psi. La reacción se agitó a 18 °C durante 5 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se filtró a través de Celita y se concentró, para dar S-1d que se utilizó para el paso siguiente.

[1595] Paso D: Preparación del intermediario S-1e

[1596] A una disolución de S-1d (2,34 g, 6,74 mmol) en THF anhidro (20 mL) se añadió dihidrofurano-2,5-diona (0,742 g, 7,41 mmol) y Et3N (0,939 mL, 6,74 mmol). La reacción se agitó durante 3 h hasta el consumo completo del material de partida y luego se evaporó. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice (eluyendo con DCM/MeOH al 0~10%) para dar S-1e. MS (ESI): m/z (M+H)+ 448,1. 1HNMR (400 MHz, CDCI3) 5: 6,48 (d, J = 9,04 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,24 (t, J = 8,93 Hz, 1H), 5,07-5,17 (m, 2H), 4,08-4,18 (m, 2H), 4.04 (q, J = 6,69 Hz, 1H), 2,72-2,84 (m, 1H), 2,58-2,69 (m, 2H), 2,43-2,53 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,04 (s, 4H), 2,00 (s, 3H).

[1597] Paso E: Preparación de Ej-23

[1598] A una solución de Ej-01 (300 mg, 0,215 mmol) y S-1e (115 mg, 0.258 mmol) en DMF (8 ml) y agua (0,4 ml) se añadió DIEA (0,150 ml, 0,860 mmol) y HATU (98 mg, 0,258 mmol) y la solución resultante se agitó a rt durante 1h. La reacción se apagó con LiOH 1N (2,58 ml, 2,58 mmol) gota a gota, la solución resultante se agitó a rt durante 2 h, después se filtró y el filtrado se purificó en columna HPLC C18 de fase inversa utilizando un gradiente 29-34% de acetonitrilo (0,05%TFA) en agua (0,05%TFA) para dar Ej-23. LC/MS: [M+1]+ = 1.657,1.

[1599] EJEMPLO 5 Preparación de Ej-14

[1602]

[1605] El compuesto Ej-14 se preparó de manera análoga a los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 pero utilizando diferentes "enlazadores" y Pasos sintéticas alternativas. A continuación, se describe la síntesis de estos "enlazadores", los pasos alternativos y el montaje principal.

[1606] Preparación del producto intermediario Int-2g

[1607] El intermediario Int-2g, útil como "enlazador" en la preparación de compuestos de la invención, se preparó de acuerdo con el siguiente esquema:

[1608]

[1610] Paso A - Síntesis de Int-2gb

[1611] A una solución de Int-2da (0,5 g, 2 mmol) y 2-azidoetanamina, HCl (0,246 g, 2 mmol) en THF (16 ml) a temperatura ambiente en un baño de agua se añadió triacetoxihidroborato sódico (1,06 g, 5 mmol) por porciones y la mezcla se agitó durante 2 h. La reacción se apagó lentamente con solución acuosa saturada de NaHCO3 , después se extrajo con DCM y se lavó con salmuera. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron para dar Int-2gb. LC/MS: (M+1)+= 320,3.

[1612] Paso B - Síntesis de Int-2gc

[1613] A una solución de Int-2gb (0,64 g, 2 mmol) y succinato de monometilo (0,3 g, 2,3 mmol) en DMF (4 ml) y DCM (8 ml) se añadió HATU (0,914 g, 2,4 mmol) y DIPEA (0,7 ml, 4,01 mmol) a -15 °C. La solución resultante se agitó a -15 °C durante 2 horas, se apagó con agua y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en fase inversa sobre C18 (eluyendo con acetonitrilo/agua 0,1% de TFA) para dar Int-2gc. LC/MS: (M+1)+= 434,3. Paso C - Síntesis de Int-2g

[1614] A una disolución de Int-2gc (0,52 g, 1,2 mmol) en DCM (9 mL) se añadió TFA (3 mL, 38,9 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se concentró a presión reducida para obtener Int-2g. LC/MS: (M+1)+= 334,3.

[1615] Preparación de los compuestos intermediarios 70B y 76C

[1616]

[1618] Paso A - Síntesis del intermediario 70B

[1619] A una solución de 69B (1,5 g, 4,46 mmol) en DMF (17,8 ml) a 0 °C se añadió NaH al 95% (0,141 g, 5,56 mmol), y la solución resultante se agitó a 0 °C durante 20 min seguida de la adición de 3-bromoprop-1-ino (80% en tolueno) (0,596 ml, 5,35 mmol) gota a gota. A la solución resultante se añadió hidróxido de litio acuoso (2M) (3345 pl, 6,69 mmol) gota a gota. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, se filtró y se purificó por HPLC de fase inversa (eluyendo con acetonitrilo/agua 0,1% de TFA) para dar 70B. LC/MS: (M+1)+: 361 ,0 , (M+Na)+: 383,0. Paso B - Síntesis del intermediario 76C

[1620] La conversión de 70B en el intermediario 76C procedió según procedimientos análogos a los descritos en la preparación del intermediario 76 Pasos C a H. LC/MS: [M+1]+ = 812,16.

[1621] Montaje en el Ejemplo Ej-14:

[1622]

[1624] Paso A - Síntesis del intermediario 117

[1625] El intermediario 117 se preparó a partir de los intermediarios Int-2g y 76C según procedimientos análogos a los descritos en el Ejemplo 1 y 1a . Más concretamente, Int-2g se funcionalizó siguiendo los reactivos y procedimientos para la preparación del intermediario 77B Pasos A a B, se elaboró adicionalmente siguiendo los procedimientos para la preparación del intermediario 86 Pasos G a J, luego finalmente acoplado con el intermediario 76c siguiendo procedimientos para la preparación del Ejemplo 1A Pasos B a C, para proporcionar 117. LC/MS: (M+1)+: 1.573,36.

[1626] Paso B - Síntesis del intermediario 118

[1627] Hexafluorofosfato de tetraquis(acetonitrilo)cobre(I) (51,6 mg, 0,138 mmol), tris[(1-bencil-1h-1,2,3-triazol-4-il)metil]amina (73.4 mg, 0,138 mmol) y ascorbato sódico (137 mg, 0,692 mmol) en BuOH (185,00 mL)/agua (93 mL) se burbujeó con nitrógeno y después se calentó a 50 °C. El intermediario 117 (435,3 mg, 0,277 mmol) se añadió a la reacción como sólido. Tras 1 h, la reacción se trató con tampón acuoso de pH 4 y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se evaporaron, y el residuo se purificó mediante cromatografía de fase inversa (eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua 0 ,1 % de ácido fórmico) para proporcionar el intermediario 118. LC/MS: (M+1)+: 1.573,2.

[1628] Paso C - Síntesis de Ej-14

[1629] La síntesis del Ejemplo Ej-14 procedió a partir del intermediario 118 según procedimientos análogos a los descritos en el Ejemplo 1, incluyendo la utilización de espaciadores alternativos para el ensamblaje. LC/MS: [M+1]+ = 1.621,01.

[1630] Utilizando los esquemas sintéticos descritos anteriormente, y como se apreciará, en algunos casos con sustitución apropiada de ciertos intermediarios incluyendo la utilización de espaciadores alternativos aparentes para los expertos en la materia, cuya preparación puede describirse anteriormente, se prepararon los siguientes compuestos de la invención, enumerados en la Tabla 2 a continuación. Además, en la presente solicitud también pueden describirse formas salinas alternativas de los compuestos de la presente invención:

[1631] Tabla 2

[1633]

[1634] Tabla 2 (continuación)

[1635]

[1636] Tabla 2 (continuación)

[1637]

[1638] Tabla 2 (continuación)

[1639]

[1640] Tabla 2 (continuación)

[1641]

[1642] Tabla 2 (continuación)

[1643]

[1644] Tabla 2 (continuación)

[1645]

[1646] Tabla 2 (continuación)

[1647]

[1648] Tabla 2 (continuación)

[1649]

[1650] Tabla 2 (continuación)

[1651]

[1652] Tabla 2 (continuación)

[1653]

[1654] Tabla 2 (continuación)

[1655]

[1656] Tabla 2 (continuación)

[1657]

[1658] Tabla 2 (continuación)

[1659]

[1660] Tabla 2 (continuación)

[1661]

[1662] Tabla 2 (continuación)

[1663]

[1664] Tabla 2 (continuación)

[1665]

[1666] Tabla 2 (continuación)

[1667]

[1668] Tabla 2 (continuación)

[1670]

[1673] Determinación de la actividad

[1675] Los compuestos seleccionados de la invención se sometieron a uno o más de los siguientes procedimientos para ensayar su actividad para el antagonismo de la actividad de PCSK9.

[1677] A continuación, se describen los ensayos utilizados para determinar la actividad de los compuestos de la invención, y cualquier compuesto comparador notificado, hacia el antagonismo de PCSK9. La PCSK9 biotinilada se obtuvo comercialmente.

[1679] LDLR TR-FRET

[1681] El ensayo PCSK9 TR-FRET mide la interacción entre PCSK9 y LDLR. Se prepara una solución que contiene 40 nM de PCSK9 biotinilada 10 nM de estreptavidina Lance ULight en 50 mM de HEPES pH 7,4, 0,15 M de NaCl, 5 mM de CaCl2, 0,01% de BSA y 0,01% de surfactante P20. En el mismo sistema tampón se prepara una solución separada que contiene 40 nM rhLDLR-6xHis 10 nM Eu-W1024 anti-6xHis. Se utiliza una Eco para transferir 0,750ul de compuesto a una placa de ensayo seguida de la adición de 15ul de PCSK9+Ulight y 15ul de LDLR+Eu. El volumen final del ensayo es de 30,750ul conteniendo 20nM PCSK9, 5nM Ulight, 20nM LDLR, y 5nM Eu. La reacción se incuba a temperatura ambiente durante al menos dos horas antes de las mediciones de fluorescencia utilizando un Envision Multilabel Reader. Los valores IC50 se determinan ajustando los datos a una curva sigmoidal dosis-respuesta mediante regresión no lineal. Se siguen los recuentos (recuentos B) del LDLR marcado con europio para observar si los compuestos afectan negativamente al LDLR. Una caída de los recuentos B indica probablemente un falso positivo de inhibición.

[1683] Alexa FRET Estándar TR-FRET

[1685] El ensayo PCSK9 Alexa FRET Standard mide la interacción entre PCSK9 y un péptido cíclico marcado con AlexaFluor647 (AF), reactivo A (Kd = 83nM). Se prepara una solución que contenga 1 nM de PCSK9 biotinilada 2,5 nM de estreptavidina europio lanceolada (Strep-Eu) en 50 mM de HEPES pH 7,4, 0,15 M de NaCl, 5 mM de CaCl2, 0,01% de BSA y 0,01% de tensioactivo P20. En el mismo sistema tampón se prepara una solución separada que contiene 40 nM del péptido cíclico marcado con AlexaFluor. Se utiliza una Eco para transferir 0,750ul de compuesto a una placa de ensayo, seguido de la adición de 15ul de PCSK9+Stept-Eu y 15ul de péptido AF. El volumen final del ensayo es de 30,750ul que contienen 0,5nM de PCSK9, 1,25nM de Strep-Eu y 20nM de péptido cíclico AF. La reacción se incuba a temperatura ambiente durante al menos dos horas antes de las mediciones de fluorescencia utilizando un Envision Multilabel Reader. Los valores IC50 se determinan ajustando los datos a una curva sigmoidal dosis-respuesta mediante regresión no lineal. El Ki se calcula entonces a partir del IC50 y del Kd del péptido cíclico AF. Se siguen los recuentos (recuentos B) de la PCSK9 marcada con europio para observar si los compuestos afectan negativamente a la PCSK9. Una caída de los recuentos B probablemente indica un falso positivo de inhibición. Los datos de este procedimiento se notifican como "A = <valor numérico> (nanomolar)".

[1687] El reactivo A se preparó de acuerdo con el método siguiente:

[1688]

[1690] El péptido se sintetizó a escala de 0,250 mmol en CEM Liberty Blue, sintetizador de microondas utilizando química Fmoc/tBu en resina PS Rink-Amide MBHA, 0,32 mmol g-1. El ensamblaje se realizó mediante acoplamientos simples utilizando 4eq de aminoácido protegido con Fmoc 0,2M en DMF, 4eq de HATU 0,5M en<d>M<f>, 4eq de DIPEA 2M (doble acoplamiento para Tyr). Los ciclos de desprotección Fmoc se realizaron utilizando piperidina al 20% (V/V) en DMF.

[1691] La secuencia de aminoácidos protegidos con Fmoc y bloques de construcción utilizados son:

[1692] 1. N-(((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-S-tritil-L-cisteína

[1693] 2. (S)-1((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)ácido -2-metilpirrolidin-2-carboxílico

[1694] 3. (((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-L-tirosina

[1695] 4. N-(((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-N-tritil-L-histidina

[1696] 5. (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-4-(terc-butoxi)-4-oxobutanoico

[1697] 6. (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-(5-fluoro-1H-indol-3-il)ácido propanoico

[1698] 7. (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-(5-fluoro-1H-indol-3-il)ácido propanoico

[1699] 8. (((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)glicina

[1700] 9. N2-(((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-N6-(terc-butoxicarbonil)-L-lisina

[1701] 10. ácido 3-(tritiltio)propanoico

[1702] Al final del montaje, la resina se lavó con DMF, MeOH, DCM, Et2O. El péptido se escindió del soporte sólido utilizando 50 ml de solución de TFA (v/v) (91% TFA, 5% H2O, 4% TIPS) durante aproximadamente 1,5 horas, a temperatura ambiente. La resina se filtró, se lavó con TFA y la solución se concentró hasta sequedad y se liofilizó. La liofilización proporcionó elcompuesto intermediarioInt. A (399 mg), que se utilizó como crudo en el paso siguiente. LCMS anal. calculado. C61H75F2N15O13S2: 1.328,48, encontrado: 1.328,2 (M+1)+

[1703] Paso B - Síntesis del compuesto intermediario Int-B: como se describe para el reactivo B

[1704] Purificado por RP-HPLC (Waters Deltapak C4, cartucho doble, 40x100 mm, 15 □ m, 300A; 15% a 35% ACN/agua modificador TFA al 0,1% durante 20 min). Las fracciones recogidas se liofilizaron para obtener 35 mg decompuesto intermediario Int-B.LCMS anal. calculado para C69H81F2N15O13S2: 1.430,62; encontrado: 1.430,9 (M+1)+

[1705] Paso C - Síntesis del compuesto Reactivo A: como se describe para el reactivo B

[1706] LCMS anal. calculado para C105H122F2N17O26S63-: 2.268,58; 1.135,8 (M+2)2+

[1707] Alexa FRET Plus TR-FRET

[1708] El ensayo PCSK9 Alexa FRET Plus mide la interacción entre PCSK9 y un péptido cíclico marcado con AlexaFluor647 (AF), reactivo B (Kd = 35nM). Se prepara una solución que contenga 1 nM de PCSK9 biotinilada 2,5 nM de estreptavidina europio lanceolada (Strep-Eu) en 50 mM de HEPES pH 7,4, 0,15 M de NaCl, 5 mM de CaCl2, 0,01% de BSA y 0,01% de tensioactivo P20. En el mismo sistema tampón se prepara una solución separada que contiene 1920 nM del péptido cíclico marcado con AlexaFluor. Se utiliza una Eco para transferir 0,075ul de compuesto más 0,675ul de DMSO a cada pocillo de una placa de ensayo, seguido de la adición de 15ul de PCSK9+Stept-Eu y 15ul de péptido AF. El volumen final del ensayo es de 30,750ul que contienen 0,5nM de PCSK9, 1,25nM de Strep-Eu y 960nM de péptido cíclico AF. La reacción se incuba a temperatura ambiente durante al menos dos horas antes de las mediciones de fluorescencia utilizando un Envision Multilabel Reader. Los valores IC50 se determinan ajustando los datos a una curva sigmoidal dosis-respuesta mediante regresión no lineal. El Ki se calcula entonces a partir del IC50 y del K<d>del péptido cíclico AF. Se siguen los recuentos (recuentos B) de la PCSK9 marcada con europio para observar si los compuestos afectan negativamente a la PCSK9. Una caída de los recuentos B indica probablemente un falso positivo de inhibición. Los datos de este procedimiento se notifican como "P= 'valor numérico' (nanomolar)".

[1709] El reactivo B se preparó mediante el procedimiento siguiente.

[1710]

[1712] Paso A - Síntesis del compuesto intermediario Int-A

[1713] El péptido se sintetizó a escala de 0,250 mmol en CEM Liberty Blue, sintetizador de microondas utilizando química Fmoc/tBu en resina PS Rink-Amide MBHA, 0,32 mmol g-1. El ensamblaje se realizó mediante acoplamientos simples utilizando 4eq de aminoácido protegido con Fmoc 0,2M en DMF, 4eq de Oxyme 1M en DMF, 4eq deN,N-diisopropilcarbodiimida (DIC) 0,5M (doble acoplamiento para Y01). Los ciclos de desprotección Fmoc se realizaron utilizando piperidina al 20% (v /V) en DMF.

[1714] La secuencia de aminoácidos protegidos con Fmoc y bloques de construcción utilizados son:

[1715] 1. N-(((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-S-tritil-L-cisteína

[1716] 2. (S)-1((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)ácido -2-metilpirrolidin-2-carboxílico

[1717] 3. (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-(4-metoxifenil)ácido propanoico

[1718] 4. N-(((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-N-tritil-L-histidina

[1719] 5. (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-4-(terc-butoxi)-4-oxobutanoico

[1720] 6. (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-(5-fluoro-1H-indol-3-il)ácido propanoico

[1721] 7. (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-(5-fluoro-1H-indol-3-il)ácido propanoico

[1722] 8. (((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-D-alanina

[1723] 9. N2-(((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-N6-(terc-butoxicarbonil)-L-lisina

[1725] 10. ácido 3-(tritiltio)propanoico

[1727] Al final del montaje, la resina se lavó con DMF, MeOH, DCM, Et2O. El péptido se escindió del soporte sólido utilizando 50 ml de solución de TFA (v/v) (91% TFA, 5% H2O, 4% TIPS) durante aproximadamente 1,5 horas, a temperatura ambiente. La resina se filtró, se lavó con TFA y la solución se concentró hasta sequedad y se liofilizó. La liofilización proporcionó elcompuesto intermediarioInt. A (300 mg), que se utilizó como crudo en el paso siguiente. LC<m>S anal. calculado C63H79F2N15O13S2: 1.356,53, encontrado: 1.356,9 (M+1)+

[1729] Paso B - Síntesis del compuesto intermediario Int-B

[1731] Se redisolvióInt-Acrudo (0,22 mmol) en 24 ml de DMF. Se añadieron 6 ml de solución acuosa 1M de bicarbonato sódico para elevar el pH a 7. A continuación, se añadieron gota a gota 0,26 mmol de 1,3-bis(bromometil)benceno (0,1M en DMF). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 20 min, se apagó con TFA(pH a 3-4) y después se concentró al vacío para proporcionarInt-Bcrudo, que se purificó por RP-HPLC (Waters XBridge, C18, 50x150 mm, 5pm, 130A; 25% a 40% ACN/agua modificador TfA al 0,1% durante 20 min). Las fracciones recogidas se liofilizaron para obtener 35 mg decompuesto intermediario Int-B.LCMS anal. calculado para C71H85F2N15O13S2: 1.458,67; encontrado: 1.458,8 (M+1)+

[1733] Paso C - Síntesis del compuesto del reactivo B

[1735] El compuesto intermediario Int-B(15 mg) se disolvió en 0,2 ml de DMSO seco. A continuación, se añadieron 15 mg de ALEXAFLUOR 647NHS Ester (A37566, Life technology) disueltos en 1,5 ml de DMSO seco. Se añadieron 20uL de DIPEA seca. La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 12 h bajo atmósfera de nitrógeno en la oscuridad. Se apagó con TFA (pH a 3-4) y se purificó por RP-HPLC (Dr Maish, Reprosil Gold C18, 250x20 mm, 120 A, 10pm; 20% a 35% de TFA al 0,1% en ACN/0,1% de TFA en H2O, durante 20min, luego 35% a 40% durante 5min a un caudal de 20 mL/min). Las fracciones recogidas se liofilizaron para obtener 16,1 mg deCompuesto Reactivo B.LCMS anal. para C107H126F2N17O26S63v2.296,64; encontrado: 1.150,6 (M+2)2+

[1736] Los datos de actividad obtenidos mediante uno o ambos de los procedimientos descritos anteriormente se notifican para compuestos de ejemplo seleccionados de la invención en el siguiente formato: Ejemplo No: A (TR Fret estándar) = «valor numérico»; P (Alexa Fret más TR Fret estándar) = «valor numérico» /; tenga en cuenta que todos los valores indicados son nanomolares.

[1738] Alexa FRET Ultra TR-FRET

[1740] El ensayo PCSK9 Alexa FRET Ultra mide la interacción entre PCSK9 y un péptido cíclico marcado con AlexaFluor647 (AF), reactivo B (Kd = 0,99nM). Se prepara una solución que contenga 1 nM de PCSK9 biotinilada 2,5 nM de estreptavidina europio lanceolada (Strep-Eu) en 50 mM de HEPES pH 7,4, 0,15 M de NaCl, 5 mM de CaCl2, 0,01% de BSA y 0,01% de tensioactivo P20. En el mismo sistema tampón se prepara una solución separada que contiene 1920 nM del péptido cíclico marcado con AlexaFluor. Se utiliza una Eco para transferir 0,015 ul de compuesto más 0,735 ul de DMSO a cada pocillo de una placa de ensayo, seguido de la adición de 15 ul de PCSK9+Stept-Eu y 15 ul de péptido AF. El volumen final del ensayo es de 30,750 ul conteniendo 0,5 nM PCSK9, 1,25 nM Strep-Eu, y 960 nM a F péptido cíclico. La reacción se incuba a temperatura ambiente durante al menos dos horas antes de las mediciones de fluorescencia utilizando un Envision Multilabel Reader. Los valores IC50 se determinan ajustando los datos a una curva sigmoidal dosis-respuesta mediante regresión no lineal. El Ki se calcula entonces a partir del IC50 y del Kd del péptido cíclico AF. Se siguen los recuentos (recuentos B) de la PCSK9 marcada con europio para observar si los compuestos afectan negativamente a la PCSK9. Una caída de los recuentos B indica probablemente un falso positivo de inhibición. Los datos de este procedimiento se notifican como "Ki Ultra =valor numérico' (los datos notificados son nanomolares)".

[1742] Se evaluaron los siguientes compuestos, como se muestra en la Tabla 2, utilizando el protocolo descrito anteriormente con los resultados mostrados:

[1744] Ej-01 Ki Plus = < 0,00558, Ki Ultra = 0,0046 / Ej-02 Ki Plus = 0,00558, Ki Ultra = 0.005933/ Ej-03 Ki Plus = 0,02535, Ki Ultra = 0,06803/ Ej-04 Ki Plus < 0.00558, Ki Ultra = 0,004711/ Ej-05 Ki Plus = 0,009621, Ki Ultra = 0,03296/ Ej-06 Ki Plus = 0,00568, Ki Ultra = 0,003424/ Ej-07 Ki Plus = 0.05914, Ki Ultra = 0,06753/ Ej-08 Ki Plus = 0,01574, Ki Ultra = 0,06832/ Ej-09 Ki Plus = 0,09189, Ki Ultra = 0,247/ Ej-10 Ki Plus = 0,005743, Ki Ultra = 0.02489/ Ej-11 Ki Plus = 0,04334, Ki Ultra = 0,2067/ Ej-12 Ki Plus = 0,01448, Ki Ultra = 0,02247/ Ej-13 Ki Plus = 0,1454, Ki Ultra = 0,4772/ Ej-14 Ki Plus = 0.01605, Ki Ultra = 0,02099/ Ej-15 Ki Plus = 0,1027, Ki Ultra = 0,2601/ Ej-16 Ki Plus = 0,01423, Ki Ultra = 0,05141/Ej-17 Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra = 0.0028/ Ej-18 Ki Plus = 0,03356, Ki Ultra = 0,1183/ Ej-19 Ki Plus = 0,01662, Ki Ultra = 0,01204/ Ej-20 Ki Plus = 0,01303, Ki Ultra = 0,01711/ Ej-21 Ki Plus = 0.005692, Ki Ultra = 0,001264/ Ej-22 Ki Plus = 0,00926, Ki Ultra = 0,01519/ Ej-23 Ki Plus = 0,00938, Ki Ultra = 0,00239/ Ej-24 Ki Plus = 0,00812, Ki Ultra = 0.00767/ Ej-25 Ki Plus = 0,01127, Ki Ultra = 0,00463/ Ej-26 Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra = 0,002754/ Ej-27 Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra = 0.00301/ Ej-28 Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra = 0,00078/ Ej-29 Ki Plus = 0,00981, Ki Ultra = 0,00614/ Ej-31 Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra = 0.00074/ Ej-35 Ki Plus = 0,04652, Ki Ultra = 0,08434/ Ej-36 Ki Plus = 0,00762, Ki Ultra = 0,00507/ Ej-38 Ki Plus = 0,00904, Ki Ultra = 0,01416/ Ej-39 Ki Plus = 0.00716, Ki Ultra = 0,00414/ Ej-40 Ki Plus = 0,30800, Ki Ultra = 0,86010/ Ej-41 Ki Plus = 0,00697, Ki Ultra = 0,00628/ Ej-44 Ki Plus = 0,01445, Ki Ultra = 0.02194/ Ej-47 Ki Plus = 0,01474, Ki Ultra = 0,01193/ Ej-48 Ki Plus = 0,01169, Ki Ultra = 0,01545/ Ej-49 Ki Plus = 0,00716, Ki Ultra = 0,00414/ Ej-50 Ki Standard <1.26, Ki Plus = 0,01052, Ki Ultra = 0,00443/ Ej-51 Ki Estándar <1,26, Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra = 0,00597/ Ej-52 Ki Estándar <1,26, Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra = 0.00359/ Ej-53 Ki Estándar <1,26, Ki Más = 0,09629, Ki Ultra = 0,21500/ Ej-54 Ki Estándar <1,26, Ki Más = 0,36720, Ki Ultra = 0,48390/ Ej-55 Ki Estándar <1,26, Ki Más = 0,07240, Ki Ultra = 0.23800/ Ej-56 Ki Estándar <1,257, Ki Plus = 0,02237, Ki Ultra = 0,00481/ Ej-57 Ki Estándar <1,257, Ki Plus < 0,00558, Ki Ultra = 0,00162/ Ej-58 Ki Estándar <1,257, Ki Plus = 0.00773, Ki Ultra = 0.00196/ Ej-59 Ki Plus = 0.00788, Ki Ultra = 0.004959/ Ej-60 Ki Plus = 0.006515, Ki Ultra = 0.005312 / Ej-61 Ki Plus = 0.00747, Ki Ultra = 0.006543.

Claims (12)

1. REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula I:

en el que:

X es H, F, Cl o Br;

R1 se selecciona entre:

(a) -H; o

(b) -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

(i) -H;

(ii) -NH2;

(iii) -N+H3;

(iv) -N+(H3C)3;

(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B en el que R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B en el que:

y12 e y13 no son a la vez 2 y son independientemente de 2 a 4; y

R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

(vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que, y= 1 a 6 y R14C es -O-(CH2)3-4-N+(CH3)3; o (viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

(ai) -O-(CH2)2N+(CH3)3;

(aii) -N+(CH3)3; o

(aiii) una fracción de la fórmula:

R2 se selecciona entre:

(a) -H; y

(b) -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A se selecciona de:

(i) -H;

(ii) -NH2;

(iii) -N+H3;

(iv) -N+(H3C)3;

(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B en el que R14B

es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B en el que:

y12 e y13 no son a la vez 2 y son independientemente de 2 a 4; y R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

(vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que, y= 1 a 6 y R14C

es -<o>-(CH2)3-4-<n>+(CH3)3; y

(viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

(ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;

(aii) -N+(CH3)2R14ca, en el que R14ca es -CH3 o -(CH2)i -4-OCH3; (aiii) una fracción de fórmula:

(aiv) una fracción de fórmula:

donde y14Cb e y14Cc son 1 a 4; o

R1 y R2 pueden unirse entre sí para formar una fracción de la fórmula:

en el que:

G1, RG1a y RG1b se definen como sigue:

(a) G1 es una fracción de enlace de la fórmula:

en el que nq1 es de 1 a 6, mq1 es 0, 1 o 2 y juntos el valor de nq1 y mq1 se seleccionan de tal manera que la longitud de la fracción de enlace que definen no supera un total de 8 átomos de carbono y/o de oxígeno que comprenden la cadena, incluido el átomo de carbono de la cadena que forma la fracción de carbonilo;

RG1a se selecciona entre: (i) -H; y (ii) alquilo de hasta 4 átomos de carbono; y RG1b se selecciona entre:

(i) una fracción de la fórmula:

y

(ii) una fracción de fórmula:

o

(b) G1 es una fracción de enlace de la fórmula:

en el que nq2 es 0, 1 o 2, mq2 es 1 a 6, y conjuntamente el valor de nq2 y mq2 se seleccionan de tal manera que la longitud de la fracción de enlace que definen no excede de un total de 8 átomos de carbono y/o de oxígeno que comprenden la cadena, incluido el átomo de carbono de la cadena que forma la fracción de carbonilo;

RG1a se selecciona entre:

(i) una fracción de la fórmula:

y

(ii) una fracción de fórmula:

y

RG1b se selecciona entre: (i) -H; y (ii) alquilo de hasta 4 átomos de carbono; R8 es -CH3 o una fracción de la fórmula:

en el que R8a es -H, o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono; A se selecciona entre:

(a) una fracción de la fórmula:

(c) una fracción de fórmula:

en el que Ab1 es:

(i) una fracción de la fórmula:

en el que x es de 1 a 6; o

(ii) una fracción de fórmula:

en el que y es de 1 a 5;

(d) una fracción de fórmula: -CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-, en el que m = 1 a 5, y n= 0 o 1 a 4; B es:

(a) un enlace;

(b) -(CH2K 2- ; o

(c) una fracción de la fórmula:

D es:

(a) una fracción de la Fórmula:

en el que E es -CH2- o -(CH2)2-4-O-, y A y B son como se han definido anteriormente; (b) una fracción de fórmula:

en el que A y B son como se han definido anteriormente;

(c) una fracción de fórmula:

en el que na es 1, 2 o 3, ma es 2, 3 o 4, y na ma es > 3, y en el que A y B son como se han definido anteriormente;

(d) una fracción de la fórmula:

en el que, R34b es -H o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono, y A y B son como se han definido anteriormente,

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que X es F.

3. El compuesto de la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que D es:

i) una fracción de fórmula:

en el que E es -CH2- o -(CH2)2-O-; o bien

ii) una fracción de fórmula:

en el que E es -CH2- o -(CH2)2-O-; o bien

iii) una fracción de la fórmula:

o

iv) una fracción de la fórmula:

o

v) una fracción de fórmula:

o

vi) una fracción de la fórmula:

vii) una fracción de la fórmula:

o

viii) una fracción de la fórmula:

4. El compuesto de la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 y R2 se unen para formar una fracción de la fórmula:

tal que junto con el ciclopéptido al que están unidos R1 y R2 forman una estructura cíclica.

5. El compuesto de la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene la estructura de:

i) Fórmula IIB:

B1 es -((CH2)0-2)-; y

D1 es:

(a) una fracción de la fórmula:

(b) una fracción de fórmula:

o

(c) una fracción de fórmula:

o

ii) Fórmula IIC:

en el que

D2 es:

(a) una fracción de la fórmula:

(b) una fracción de la fórmula:

(c) una fracción de fórmula:

o

(d) una fracción de la fórmula:

iii) Fórmula IID:

en el que

D2 es:

(a) una fracción de fórmula:

; o

(b) una fracción de fórmula:

o

iv) Fórmula IIE:

v) Fórmula IIF:

6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:

i) A es:

(a) -(CH2K

(b) una fracción de fórmula:

en el que x es de 1 a 3; o

(c) una fracción de fórmula:

ii) R2 es -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

(a) -H;

(b) -NH2;

(c) -N+H3;

(d) -N+(HaC)a;

(e) -NH-C(O)-[(CH2)2-4-O-]2-(CH2)2-4R14B en el que R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3; o (f) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

(ai) -O-(CH2)2-4-N+(CH3)3;

(aii) -N+(CH3)3; o

(aiii) una fracción de fórmula:

y/o

iii) R1 se selecciona entre:

(a) -H;

(b) -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

(i) -H;

(ii) -N+H3; o

(iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N+(CH3)3; y/o

iv) R8 es una fracción de la fórmula:

en el que R8b es -H, -CH3, o -C(CH3)3.

7. El compuesto de la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:

R1 es -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A es:

(i) -H;

(ii) -NH2;

(iii) -N+H3; o

(iv) -N+(H3C)3;

R2 es -(CH2)z-R14A, en el que: z es 1-6, y R14A se selecciona entre:

(i) -H;

(ii) -NH2;

(iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B en el que R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3; (iv) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B en el que:

y12 e y13 no son a la vez 2 y son independientemente de 2 a 4; y

R14B es: -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; o -N+(CH3)3;

(v) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C

es -O-(CH2)zb-N+(CH3)3, en el que zb 3 o 4; y

(vi) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en el que y= 1 a 6 y R14C es:

(ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;

(aii) -N+(CH3)2R14ca, en el que R14ca es -CH3 o -(CH2)1-4-OCH3;

(aiii) una fracción de fórmula:

o

(aiv) una fracción de fórmula:

donde y14Cb e y14Cc son de 1 a 4;

R8 es -CH3 o una fracción de la fórmula:

en el que R8a es -H, o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono; A se selecciona entre:

(a) una fracción de la fórmula:

(b) -CH2-(CH2)y-CH2-, en el que y de 1 a 6;

(c) una fracción de fórmula:

en el que Ab1 es:

(i) una fracción de la fórmula:

en el que x es de 1 a 6; o

(ii) una fracción de fórmula:

en el que y es de 1 a 5; y

(d) una fracción de fórmula: -CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-, en el que m = 1 a 5, y n= 0 o 1 a 4;

B es:

(a) -(CH2)1-2-; o

(b) una fracción de la fórmula:

D es:

(a) una fracción de la Fórmula:

en el que E es -CH2- o -(CH2)2-4-O-, y A y B son como se han definido anteriormente;

(b) una fracción de fórmula:

en el que A y B son como se definen anteriormente; o

(c) una fracción de fórmula:

en el que, R34b es -H o un alquilo lineal, ramificado o cíclico de hasta cuatro átomos de carbono, y A y B son como se han definido anteriormente.

8. El compuesto de la reivindicación 2 o de la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que A es -CH2-(CH2)y-CH2-, en el que y es 3-5, opcionalmente en el que A es - (CH2)a-.

9. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 2, 7 u 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que B es una fracción de la fórmula:

10. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 2 o 7 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 es -(CH2)z-R14A, en el que z es 1-6 y R14A es -H, opcionalmente en el que z es 1.

11. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 2 o 7 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R2 es -(CH2)z-R14A, en el que z es 1-6 y R14A es -NH-C(O)-(CH2)yR14C, en la que y= 1 a 6 y R14C es -N+(CH3)2R14ca, en la que R14ca es -CH3.

12. El compuesto de la reivindicación 1, que se selecciona del grupo que consiste en: