FI104390B - Menetelmä juoman ylikuohuntatekijän määrittämiseksi - Google Patents
Menetelmä juoman ylikuohuntatekijän määrittämiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI104390B FI104390B FI980863A FI980863A FI104390B FI 104390 B FI104390 B FI 104390B FI 980863 A FI980863 A FI 980863A FI 980863 A FI980863 A FI 980863A FI 104390 B FI104390 B FI 104390B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- hydrophobin
- beer
- determining
- beverage
- antibody
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 title claims abstract description 13
- 101710091977 Hydrophobin Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 claims description 20
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 9
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 9
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims description 2
- 241000209219 Hordeum Species 0.000 description 11
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 6
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000122692 Fusarium avenaceum Species 0.000 description 5
- 241001489200 Fusarium poae Species 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 241000223195 Fusarium graminearum Species 0.000 description 4
- 229940069780 barley extract Drugs 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241001557905 Nigrospora sp. Species 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 101710200413 Small hydrophobic protein Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 208000013403 hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 150000002826 nitrites Chemical class 0.000 description 1
- 235000019520 non-alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000004069 plant analysis Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000271 synthetic detergent Substances 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56961—Plant cells or fungi
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/37—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from fungi
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Tea And Coffee (AREA)
- Non-Alcoholic Beverages (AREA)
- Distillation Of Fermentation Liquor, Processing Of Alcohols, Vinegar And Beer (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Amplifiers (AREA)
- Signal Processing Not Specific To The Method Of Recording And Reproducing (AREA)
Description
104390 -
MENETELMÄ JUOMAN YLIKUOHUNTATEKIJÄN MÄÄRITTÄMISEKSI
Keksinnön kohteena on patenttivaatimuksen 1 johdanto-osassa määritelty menetelmä juoman ylikuohun-tatekijän määrittämiseksi.
5 Käytettäessä oluen valmistuksessa homeilla saastunutta ohraa saattaa tuotettava olut olla altis ylikuohunnalle. Ylikuohunta on ilmiö, jossa olut kuohuu liiallisesti, esim. olut saattaa syöksyä ulos pullosta pulloa avattaessa. Pahimpia ylikuohunnan aiheut-10 tajia ovat Fusarium-homeet. mutta esimerkiksi myös Ai-tenaria-. Aspergillus-, Nigrospora-. Penicillium- ja Stemphvlium-sukuihin kuuluvilla homeilla esiintyy yli-kuohunta-aktiivisuutta. Homeiden tuottamia ylikuohun-tatekijöitä on tutkittu vuosikymmenien ajan, mutta 15 niitä ei ole pystytty tarkasti osoittamaan ja karakterisoimaan. Ylikuohuntatekijoiden on todettu olevan peptidejä tai ainakin peptidejä sisältäviä yhdisteitä. Niiden on lisäksi todettu olevan hydrofobisia ja luonteeltaan happamia. Useimpien homeiden ylikuohuntateki-20 jät sisältävät varsin runsaasti kysteiiniä. Viimeaikaiset tutkimukset ovat antaneet viitteitä siitä, että ylikuohuntatekijät olisivat konsentroituneet ohran * · : ’.· kuorikerrokseen.
:,j,: Tällä hetkellä oluen ylikuohuntataipumus tes- :Y: 25 tataan määrittämällä ohraerän Fusarium-homeilla saas- tuneiden jyvien osuus. Ohraerä hylätään, jos saastu- ··· neiden jyvien osuus ylittää sallitun raja-arvon. Mene- • · telmä on työläs ja hidas eikä se ole kvantitatiivinen.
• · ·
Menetelmän suurin heikkous on siinä, ettei sillä pys- . . 3 0 tytä määrittämään ylikuohunnan todellista aiheuttajaa, • · ylikuohuntateki jää. Näin ollen tulokset voivat johtaa ·, · · *·’ ’ vääriin johtopäätöksiin.
· Keksinnön tarkoituksena on poistaa edellä
i » » I
mainitut epäkohdat.
35 Erityisesti keksinnön tarkoituksena on tuoda « * : esiin luotettava ja laadunvalvontaan soveltuva mene- * ’ telmä juomien, erityisesti oluen ylikuohuntataipumuk- v> 2 104390 sen määrittämiseksi juomien raaka-aineista. Erityisesti menetelmän tarkoituksena on määrittää oluen todellisen ylikuohuntatekijän määrä viljasta.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnus-5 omaista se, mitä on esitetty patenttivaatimuksessa 1.
Keksintö perustuu suoritettuun tutkimustyöhön, jossa tutkittiin oluen ylikuohunnan aiheuttajia ja jossa havaittiin, että homeiden tuottamat hydrofobiset proteiinit, hydrofobiinit, ovat oluen ylikuohun-10 tatekijöitä.
Hydrofobiinit ovat pieniä homeiden tuottamia hydrofobisia proteiineja, jotka sisältävät yleensä esim. 100 ± 25 aminohappoa. Hydrofobiineja on tähän mennessä eristetty useista homeista ja syötävistä sie-15 nistä. Tunnusomaista hydrofobiineille ovat niiden 8 kysteiinitähdettä, jotka ovat sijoittuneet proteiiniin tietyn kaavan mukaisesti. Hydrofobiineja esiintyy homeiden myseelin ja itiöiden pinnalla sekä erittyneenä kasvualustassa. Hydrofobiinit välittävät homerihmasto-20 jen kiinnittymistä kasvualustaan ja toisiinsa sekä muodostavat ilmarihmaston ja itiöiden pinnalle vetty-miseltä suojaavan kerroksen. Hydrofobiinien on todettu kerääntyvän faasien rajapintaan, esimerkiksi kasvuliu- oksessa ilmakuplien pinnalle, jolloin ne muodostavat 25 rajapinnalle amfipaattisia kalvoja. Kalvonmuodostusky-kynsä ansiosta hydrofobiinit muuttavat aineiden pinta- I · “* ominaisuuksia hydrofobisesta hydrofiiliseksi ja päin I · * vastoin. Niiden kyky alentaa vesiliuoksen pintajänni-’ tystä on samaa luokkaa kuin eräillä synteettisillä de- 30 tergenteillä. Hydrofobiineja on kuvattu mm. seuraavis-sa artikkeleissa Wessels, J.G.H., Hydrofobins: Pro- teins that Change the Nature of the Fungal Surface, *. Advances in Microbial Physiology, vol. 38, 1997 Acade- c ·;;; mic Press Limited, s. 1-45 ja Wessels, J.G.H., Fungal 35 hydrofobins: proteins that function at an interface,
Trends in Plant Science, vol. 1, s. 9-15. Hydrofobii- • .;·· nit stabiloivat kuplia aiheuttaen kasvuliuoksen kuohu- 3 104390 mistä. Nyt homeista eristetyn hydrofobiinin on todettu aiheuttavan oluen ylikuohuntaa.
Keksinnön mukaisesti hydrofobiinin määrä juoman raaka-aineesta ja/tai juomasta, erityisesti vil-5 jasta, kuten ohrasta, maltaasta ja/tai oluesta voidaan määrittää millä tahansa hydrofobiinin määritykseen soveltuvalla menetelmällä.
Eräässä edullisessa sovellutuksessa hydrofo-biini määritetään immunologisesti hydrofobiiniantigee-10 nin ja vasta-aineen välisellä immunologisella reak tiolla. Immunologinen menetelmä voi olla immunoradio-metrinen, -entsymetrinen, -fluorometrinen tai -lumino-metrinen menetelmä. Määrityksessä tarvittavat hydrofo-biiniproteiineille spesifiset vasta-aineet valmiste-15 taan tavanomaisilla vasta-aineiden valmistusmenetel millä .
Hydrofobiiniproteiineja voidaan eristää yli-kuohunta-aktiivisuutta omaavista homekannoista ja etenkin Fusarium-kannoista. Käyttökelpoisia kantoja 20 ovat esim. Gibberella avenacea (F.avenaceum), F.culmorum. F.poae, Gibberella zeae (F.araminearum), Nigrospora sp. ja T.reesei. Hydrofobiineja voidaan eristää homemyseelistä ja/tai kasvuliuoksista tavan-
I
: omaisin menetelmin esim. uuttamalla, kuplittamalla • < « 25 ja/tai kylmäkuivaamalla.
,···, Hydrofobiini voidaan eristää myseelistä koi- i · mivaiheisella uuttomenetelmällä ja/tai kasvuliuoksesta • · ·.; kuplittamalla liuosta, jolloin hydrofobiini rikastuu • · · ’·* ’ syntyvään vaahtoon, ja/tai pakastamalla kasvuliuos, 30 jolloin hydrofobiini sakkautuu ja se voidaan erottaa • · :,V fuugaamalla liuoksen sulatuksen jälkeen.
• · · -ί ' Menetelmän eräässä edullisessa sovellutukses-
sa hydrofobiinin määrittämiseksi käytetään ELISA
’!'.! (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) -menetelmää. Mene- • * 35 telmän entsyymireaktiossa syntyvä väri tai fluoresens- • • '· si osoittaa hydrofobiinin olemassaolon ja määrän. ELI - ·:·: SA-menetelmää, vasta-aineiden valmistusta ja puhdis- . 4 104390 tusta, siinä käytettäviä entsyymejä, konjugaatteja ja substraatteja on kuvattu mm. seuraavassa artikkelissa Vaag, P., Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) in the Beverage Industries: Principles and Practice, Ana-5 lysis of Non-Alcoholic Beverages (Modern Methods of
Plant Analysis, new series vol 8), Eds. Liskens, H.H. ja Jackson, J.F., Springer-Verlag, Berlin 1988, s. 1-29.
Menetelmässä voidaan käyttää myös muita vas-10 taavia immunologisia menetelmiä, kuten EBStrALISA
(Enzyme Biotin Streptavidin Linked Immunosorbent Assay) -menetelmää. EBStrALISA-menetelmää on kuvattu mm. artikkelissa Vaag, P., Immunological detection of Fusarium in barley and malt, Proc. Eur. Brew. Conv. 15 Lisbon 1991, s. 553-560.
Menetelmän eräässä toisessa edullisessa sovellutuksessa hydrofobiini määritetään immunokromato-grafisesti käyttäen immunokromatografiaan perustuvaa testiliuskaa. Menetelmän immunologisessa reaktiossa 20 syntyvä väri osoittaa hydrofobiinin olemassaolon ja määrän.
Käytettävä testiliuska voi käsittää esim.
: ’ : kromatografisen membraanin, jossa on liikkuvia leima- : partikkeleita ja kaksi paikallaan pysyvää hydrofobii- * * * 25 nin vasta-ainealuetta. Näyte absorboidaan testiliuskan
• I
.···. membraaniin, jossa reagoi leiman kanssa ja kulkeutuu • · V’.m membraanin vasta-ainealueille. Jos näyte sisältää hyd- • · · t,I rofobiinia vasta-ainealueille muodostuu immunologises- i « sa reaktiossa syntyvät värilliset testi- ja kontrolli-30 viivat. Mikäli näyte ei sisällä hydrofobiinia muodos- • · tuu ainoastaan kontrolli viiva.
• · · ·,· ' Keksinnön ansiosta teollisuuden laadunvalvon- nassa käytössä oleva puolikvantitatiivinen, Fusarium- t sienen osoittamiseen perustuva detektiomenetelmä voi-
« I
35 daan korvata uudella luotettavalla täsmämenetelmällä I f < '·· määritettäessä viljasta primäärinen ylikuohuntatekijä.
Valitsemalla käytettävä vilja, erityisesti ohra uuden 5 104390 menetelmän avulla voidaan turhien ja kalliiksi osoittautuneiden varotoimenpiteiden tarvetta vähentää erityisesti riskivuosina, jolloin viljan laatu on huonoa ja ylikuohuntaa esiintyy runsaasti viljasta tuotetussa 5 oluessa.
Edelleen uusi immunologinen detektiomenetelmä tarjoaa aiempaa nopeamman ja yksinkertaisemman ja siten halvemman menetelmän ohran ylikuohuntataipumuksen määrittämiseksi.
10 Seuraavassa keksintöä kuvataan yksityiskoh taisemmin oheisissa esimerkeissä.
Esimerkki 1. Hvdrofobiinien eristys ia osoittaminen
Hydrofobiinia eristettiin ylikuohunta-15 aktiviteettia omaavista homekannoista: Gibberella ave-nacea (F.avenaceum) (VTT-D-80141), F.culmorum (VTT-D-80148), F.poae (VTT-D-82182), Gibberella zeae (F.graminearum) (VTT-D-95470) , Nigrospora sp. (VTT-D-79122) ja T.reesei (VTT-D-74075).
20 Homeita kasvatettiin kolmella erilaisella alustalla, agarilla, kasvuliuoksessa ja ohrassa. Hyd-rofobiini eristettiin kolmivaiheisella uuttomenetel-mällä sekä kasvuliuosta kuplittamalla. Näytteen sisäl-; tämien proteiinien molekyylijakauma selvitettiin gee- , \ 25 lielektroforeesilla. T.reesei-kannan tuottama hydrofo- ^ biini on kooltaan noin 7,5 kDa. Nigrospora sp.-kannan i · !*It (myseeliuutto) ja F.poae-kannan (kasvuliuoksen kupli- < · · tus) tuottamat hydrofobiinit olivat kooltaan- samaa i · · ’·’ suuruusluokkaa. Gibberella zeae-kannan myseelistä uu- 30 tettu hydrofobiini oli kooltaan noin 20 kDa.
• · ·.·.· Hydrofobiinien osoittamiseen näytteestä käy-
IM
*t* · tettiin immunologista ELISA-testiä. Testissä käytettä- I:. vä vasta-aine valmistettiin käyttämällä seuraavaa im- munisointiprotokollaa. Kani immunisoitiin puhdistetul- '1' 35 la T. reesei-homeen tuottamalla hydrofobiinilla, jota « · • '* sekoitettiin Freund'n adjuvanttiin. Pistoksia annet- tiin 4 kertaa kolmen kuukauden aikana. Tiitterin ke- 6 104390 hittymistä seurattiin määrittämällä kaksi kertaa veren vasta-ainepitoisuus ELISA-menetelmällä. Immunisointi-jakson loputtua kanin veri kerättiin talteen ja verestä erotettiin seerumi. Seerumin reaktiivisuus testattiin määrittämällä se seerumilaimennos, joka vielä antaa vasteen ELISA-menetelmässä. Laimennos oli yli 1/100 000.
Testissä hydrofobiininäytettä pipetoitiin mikrotiitterilevyn kuoppiin, jolloin näytteen proteiinit kiinnittyivät kuoppien seinämiin. Seuraavaksi lisätty hydofobiinivasta-aine tunnisti seinämistä hydro-fobiiniproteiinin ja kiinnittyi siihen. Tämän jälkeen lisätty konjugaatti kiinnittyi vuorostaan vasta-aineeseen. Konjugaatti sisälsi entsyymin, joka muutti kuoppiin pipetoidun substraatin värilliseksi. Substraatin värin voimakkuus oli suoraan verrannollinen näytteen hydrofobiinipitoisuuteen.
Korkeimmat vasteet saatiin F.poaen. Niarospo-ra sp.:n ja T.reesein hydrofobiininäytteistä.
Esimerkki 2. Hvdrofobiinin määritys ohranävt- teestä
Ohraa kontaminoitiin esimerkin 1 Fusarium-: kannoilla ja T.reesei-kannalla kaksi viikkoa. Ohrauute : valmistettiin sekoittamalla 50 g ohraa/100 ml vettä 1 «Il min ajan. Ohra-vesiseosta fuugattiin 15 min nopeudella • .··. 4000 g. Supernatanttiuute otettiin talteen ja uutteen • · sisältämä hydrofobiini määritettiin suoralla ELISA- • · · I,! menetelmällä käyttäen T. reesein hydrofobiinia vastaan • · · valmistettua vasta-ainetta.
Mikrotiitterilevyille pipetoitiin 150 • · # V * μΐ/kuoppa ohrauutelaimennosta 1/10 ja 1/100. Laimen- • · · V * nokset tehtiin natriumfosfaattipuskuriin (10 mM natri- umfosfaattia pH 7,3, 150 mM natriumkloridia = PBS- t w . liuos). Levyn annettiin olla yön yli jääkaapissa. Seu- a · raavana päivänä levylle pipetoitiin 100 μΐ/kuoppa PBS- a · liuosta, jossa oli 0,1 % naudan seerumin albumiinia ja : 0,05 % Tween 20 -liuosta (=BSA/PBS-liuos) . Levyn an- 104390 nettiin olla yli yön kylmässä, minkä jälkeen se pestiin PBS-liuoksella, johon oli lisätty 0,01 % Tween 20 -liuosta (PBST-liuos). Hydrofobiinivasta-aineesta tehtiin laimennos 1/100 BSA/PBS-liuokseen. Vasta-5 ainelaimennosta pipetoitiin levylle 100 μΐ/kuoppa ja levyä inkuboitiin 2 h +37 °C:ssa. Levy pestiin PBST-liuoksella. Seuraavaksi levylle pipetoitiin 100 μΐ/kuoppa konjugaattia: vuohen anti-kani IgG alkaali-nen fosfataasi, laimennos 1/1000 BSA/PBS-liuokseen. 10 Levyä inkubointiin 2 h +37 °C:ssa ja pestiin PBST-liuoksella. Viimeiseksi levylle pipetoitiin 100 μΐ/kuoppa substraattia: 1 tabletti p-nitrofenyyli- fosfaattia/5 ml dietyleeniamiini+MgCl2 -puskuria. Levyä inkuboitiin ravistelijassa 30 min huoneeniämpöti-15 lassa. Absorbanssi mitattiin 405 nm aallonpituudella Multiscan-fotometrillä. Värin intensiteetti on suoraan verrannollinen näytteen sisältämän hydrofobiinin määrään. Ohrauutenäytteiden absorbanssit on esitetty taulukossa 1.
20 Taulukko 1.
Näyte Näytelaimennos _1/10 1/100
Kontrolli 0,551 0,388 i ' l·"" “ VTT-D-80141 1,823 1,360 VTT-D-80148 0,452 0,374 lii VTT - D- 82182 1,088 0,898 • · ........* — " " VTT-D-95470 0,664 0,634 « m · ™' 1 " ' l''J ' VTT - D- 74075 0,863 1,914 «»· · r - - - • · · ’·* ' Korkeimmat hydrofobiinipitoisuudet määritet tiin homekannoilla Gibberella avenacea. F.poae ja • · . :.V T.reesei kontaminoiduista ohranäytteistä.
:§: : Menetelmä soveltuu hyvin myös mallasnäytteil- 25 le.
• II I
'l Esimerkki 3. Oluen vlikuohuntakokeet • · '•,·' Oluen ylikuohuntakoe suoritettiin lisäämällä • « ] '·· olutpulloon 0,5 - 1 ml hydrofobiininäytettä. Pulloa • · 104390 ravisteltiin 3 vuorokautta huoneenlämmössä, jonka jälkeen se avattiin ja ylikuohuvan oluen määrä määritettiin pullon painonmuutoksesta.
T.reesein (myseeliuutto) ja F.ooaen (kasvu-5 liuoksen kuplitus) hydrofobiininäytteet aiheuttivat erityisen voimakasta ylikuohuntaa. Edellinen näyte aiheutti jopa yli 50 % ja jälkimmäinen 30 - 45 % ylikuohuntaa. Niarospora sp.:n (myseeliuutto) hydrofobiini-näyte aiheutti toistuvaa 1 - 10 % ylikuohuntaa. Myös 10 muiden tutkittujen homeiden hydrofobiininäytteet aiheuttivat oluen ylikuohuntaa vaihtelevasti.
Tehtyjen kokeiden perusteella hydrofobiini-proteiinit aiheuttavat oluen ylikuohuntaa.
Keksintöä ei rajata pelkästään edellä esitet-15 tyjä sovellutusesimerkkejä koskevaksi, vaan monet muunnokset ovat mahdollisia pysyttäessä patenttivaatimusten määrittelemän keksinnöllisen ajatuksen puitteissa .
• · • · · • · • · • · · • Il • · · • · • t · • · · • · · « • · • · · « · · • · • Il II» • · ·
I I f I
111«
III I I
I
• I · • I « • · • I · « ·
Claims (4)
1. Menetelmä juoman ylikuohuntatekijän määrittämiseksi, tunnettu siitä, että hydrofobiinin määrä määritetään juoman raaka-aineesta ja/tai juomas- 5 ta.
2, Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että määritetään ylikuohuntatekijä oluessa siten, että hydrofobiinin määrä määritetään viljasta, maltaasta ja/tai oluesta.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen mene telmä, tunnettu siitä, että hydrofobiini määritetään immunologisesti hydrofobiiniantigeenin ja vasta-aineen välisellä immunologisella reaktiolla.
4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen 15 menetelmä, tunnettu siitä, että hydrofobiini määritetään ELISA-menetelmällä, EBStrALISA-menetelmällä j a/tai immunokromatografisesti. f • · • * « i * · m « • · m • « • » • · · * * • · * • · · • · « · · • · · • · · • · • · · • * · v t · • · · • · · • · · I · < • IM • · • · « I « • I · « « 104390
Priority Applications (12)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI980863A FI104390B (fi) | 1998-04-17 | 1998-04-17 | Menetelmä juoman ylikuohuntatekijän määrittämiseksi |
| CA002329223A CA2329223A1 (en) | 1998-04-17 | 1999-04-09 | Method for determining a gushing factor for a beverage |
| CNB998060399A CN1189747C (zh) | 1998-04-17 | 1999-04-09 | 测定饮料的喷涌因子的方法 |
| EP99915778A EP1071949B1 (en) | 1998-04-17 | 1999-04-09 | Method for determining a gushing factor for a beverage |
| PCT/FI1999/000305 WO1999054725A1 (fi) | 1998-04-17 | 1999-04-09 | Method for determining a gushing factor for a beverage |
| EA200000955A EA003633B1 (ru) | 1998-04-17 | 1999-04-09 | Способ установления предрасположенности к фонтанированию у напитка |
| HK01105352.0A HK1036654B (en) | 1998-04-17 | 1999-04-09 | Method for determining a gushing factor for a beverage |
| AT99915778T ATE275265T1 (de) | 1998-04-17 | 1999-04-09 | Verfahren zum bestimmen eines überschäumfaktors für ein getränk |
| AU34230/99A AU750483B2 (en) | 1998-04-17 | 1999-04-09 | Method for determining a gushing factor for a beverage |
| DE69919859T DE69919859T2 (de) | 1998-04-17 | 1999-04-09 | Verfahren zum bestimmen eines überschäumfaktors für ein getränk |
| US10/309,911 US20030148400A1 (en) | 1998-04-17 | 2002-12-04 | Method for determining a gushing factor for a beverage |
| US10/920,832 US7041464B2 (en) | 1998-04-17 | 2004-08-18 | Method for determining a gushing factor for a beverage |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI980863A FI104390B (fi) | 1998-04-17 | 1998-04-17 | Menetelmä juoman ylikuohuntatekijän määrittämiseksi |
| FI980863 | 1998-04-17 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI980863A0 FI980863A0 (fi) | 1998-04-17 |
| FI980863L FI980863L (fi) | 1999-10-18 |
| FI104390B true FI104390B (fi) | 2000-01-14 |
Family
ID=8551540
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI980863A FI104390B (fi) | 1998-04-17 | 1998-04-17 | Menetelmä juoman ylikuohuntatekijän määrittämiseksi |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1071949B1 (fi) |
| CN (1) | CN1189747C (fi) |
| AT (1) | ATE275265T1 (fi) |
| AU (1) | AU750483B2 (fi) |
| CA (1) | CA2329223A1 (fi) |
| DE (1) | DE69919859T2 (fi) |
| EA (1) | EA003633B1 (fi) |
| FI (1) | FI104390B (fi) |
| WO (1) | WO1999054725A1 (fi) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE358996T1 (de) | 2004-07-27 | 2007-05-15 | Unilever Nv | Belüftete, hydrophobin enthaltende nahrungsmittel |
| CN101267747B (zh) | 2005-09-23 | 2012-11-28 | 荷兰联合利华有限公司 | 乳油化减少的充气产品 |
| CA2617544C (en) | 2005-09-23 | 2014-03-18 | Unilever Plc | Low ph aerated products |
| ATE394935T1 (de) | 2005-12-21 | 2008-05-15 | Unilever Nv | Gefrorene belüftete süssspeisen |
| AU2009328324B2 (en) | 2008-12-16 | 2013-03-21 | Unilever Plc | Method for extracting hydrophobin from a solution |
| CZ302041B6 (cs) * | 2009-02-25 | 2010-09-15 | Výzkumný ústav pivovarský a sladarský, a. s. | Zpusob stanovení konecného prepenování baleného piva vlivem jecmene |
| CN101581716B (zh) * | 2009-06-03 | 2012-08-22 | 中粮麦芽（大连）有限公司 | 一种大麦或麦芽喷涌潜力的检测方法 |
| WO2014076108A1 (de) * | 2012-11-13 | 2014-05-22 | Technische Universität Berlin | Verfahren zur herstellung von kohlenstoffdioxid-haltigen getränken mit einem verminderten gushing-potenzial |
-
1998
- 1998-04-17 FI FI980863A patent/FI104390B/fi active
-
1999
- 1999-04-09 CN CNB998060399A patent/CN1189747C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-04-09 EA EA200000955A patent/EA003633B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-04-09 AU AU34230/99A patent/AU750483B2/en not_active Ceased
- 1999-04-09 AT AT99915778T patent/ATE275265T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-04-09 CA CA002329223A patent/CA2329223A1/en not_active Abandoned
- 1999-04-09 EP EP99915778A patent/EP1071949B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-09 DE DE69919859T patent/DE69919859T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1999-04-09 WO PCT/FI1999/000305 patent/WO1999054725A1/fi not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU750483B2 (en) | 2002-07-18 |
| EP1071949B1 (en) | 2004-09-01 |
| CN1300364A (zh) | 2001-06-20 |
| WO1999054725A1 (fi) | 1999-10-28 |
| DE69919859D1 (de) | 2004-10-07 |
| EA200000955A1 (ru) | 2001-04-23 |
| FI980863A0 (fi) | 1998-04-17 |
| FI980863L (fi) | 1999-10-18 |
| EP1071949A1 (en) | 2001-01-31 |
| CA2329223A1 (en) | 1999-10-28 |
| DE69919859T2 (de) | 2005-01-27 |
| ATE275265T1 (de) | 2004-09-15 |
| AU3423099A (en) | 1999-11-08 |
| EA003633B1 (ru) | 2003-08-28 |
| CN1189747C (zh) | 2005-02-16 |
| HK1036654A1 (en) | 2002-01-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7041464B2 (en) | Method for determining a gushing factor for a beverage | |
| FI104390B (fi) | Menetelmä juoman ylikuohuntatekijän määrittämiseksi | |
| March et al. | Rapid detection and counting of viable beer-spoilage lactic acid bacteria using a monoclonal chemiluminescence enzyme immunoassay and a CCD camera | |
| CN113621676B (zh) | 一步式高效筛选黄曲霉毒素防控菌的方法 | |
| US20130130274A1 (en) | Detection method | |
| KR20010034916A (ko) | 생물학적 유체에서 β-락탐 코어를 갖는 항생제를측정하는 방법 | |
| Anderson et al. | Direct immunoassay for detection of salmonellae in foods and feeds | |
| CN110564816B (zh) | 基于免疫双标记胶体金探针与杂交链式扩增检测单增李斯特菌的试剂盒和应用及检测方法 | |
| CN113480624A (zh) | 含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质、制备方法及其应用 | |
| Bühler | Double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for quantitation of endoglucanase I of Trichoderma reesei | |
| AU636964B2 (en) | Immunological detection of metolachlor | |
| Nieves et al. | Quantitation of Acidothermus cellulolyticus E1 endoglucanase and Thermomonospora fusca E3 exoglucanase using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) | |
| CN115290882A (zh) | 一种检测大田软海绵酸的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其制备和检测方法 | |
| KR100504132B1 (ko) | 리스테리아 모노사이토게네스를 선별적으로 인지하는 단클론 항체, 이를 생산하는 하이브리도마, 이를 포함하는 시험 키트 및 이를 사용한 검출 방법 | |
| CN113866421A (zh) | 一种黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒及其用途 | |
| KR100737186B1 (ko) | 항-에스트리올 항혈청을 포함하는 에스트리올 검출용바이오센서 및 에스트리올 검출방법 | |
| JP2006104154A (ja) | リステリアモノサイトゲネスを選別的に認知するモノクローナル抗体、これを生産するハイブリドーマ、これを含む試験キット及びこれを使用した検出方法 | |
| Nedellec et al. | Optimization of an amplified system for the detection of Clostridium tyrobutyricum on nitrocellulose filters by use of monoclonal antibody in a gelified medium | |
| HK1036654B (en) | Method for determining a gushing factor for a beverage | |
| CN117686714A (zh) | 猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒及其应用 | |
| CN113834938A (zh) | 黄曲霉预警分子参考物质、制备方法及其应用 | |
| KR100737230B1 (ko) | 항-베타에스트라디올 항혈청을 포함하는 베타에스트라디올검출용 바이오센서 및 베타에스트라디올 검출방법 | |
| CN107561263A (zh) | 一种快速检测乳制品中青霉素/β‑内酰胺酶的试剂盒的制备方法 | |
| AU7943091A (en) | Immunological detection methods |