FR2514510A1 - Appareil pour faire tourner des recipients de reaction dans une attitude inclinee - Google Patents
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Abstract
CET APPAREIL DESTINE A FAIRE TOURNER DES RECIPIENTS DE REACTION DANS UNE POSITION INCLINEE COMPREND UN PLATEAU 2 DONT LA PARTIE MARGINALE EST PERCEE DE TROUS QUI RECOIVENT DES PORTE-RECIPIENTS DE REACTION 1, DES MOYENS 8, 15 QUI SUPPORTENT LE PLATEAU EN ROTATION; DES MOYENS 9 A 12 QUI FONT TOURNER LE PLATEAU A UNE VITESSE PREDETERMINEE ET DES MOYENS 3, 4, 4, 5, 6 QUI FONT TOURNER LES PORTE-RECIPIENTS DE REACTION AUTOUR DE LEURS AXES A UNE VITESSE PREDETERMINEE ET DES MOYENS 14 QUI SUPPORTENT LES MOYENS 8, 15 DE MANIERE QUE LES PORTE-RECIPIENTS DE REACTION SOIENT INCLINES D'UN ANGLE PREDETERMINE SUR L'HORIZONTALE.
Description
i La présente invention se rapporte à un appareil pour faire tourner des
récipients de réaction dans une attitude inclinée Elle concerne plus particulièrement un appareil adapté pour faire réagir efficacement l'une sur l'autre une substance réactive liée à une phase soli-
de et une substance réactive contenue dans une phase li-
quide. On connaît un procédé immunologique qui utilise
une réaction antigène-anticorps pour déterminer la quan-
tité d'une très petite quantité de substance contenue dans des fluides corporels et pour déterminer la concentration d'un médicament administré qui est contenue dans le sang ou l'urine d'un organisme On connaît déjà et on a déjà mis en utilisation pratique divers procédés qui sont basés sur différents principes de détermination Ces procédés comprennent l'analyse radio-immunologique (RIA), l'analyse
immunoenzymatique (Er A) et l'analyse par îimmunofluorescen-
ce (FIA), qui ont été largement appliqués en raison de leur haute sensibilité et de leur haute efficacité dans la détermination quantitative Pour l'exécution de ces
analyses, on applique généralement le procédé dit sand-
wich ou le procédé compétitif Le procédé sandwich est particulièrement largement appliqué parce qu'il assure un degré élevé de sensibilité analytique et parce qu'il est
facile & mettre en oeuvre.
Dans le procédé sandwich, on fait réagir l'anti-
gène à mesurer avec un anticorps correspondant insolubi.
lisé (première réaction), de sorte qu'il se forme un complexe antigèneanticorps On fait réagir ce complexe
avec un anticorps marqué avec un agent de marque et ca-
pable de se combiner à l'antigène à mesurer (anticorps
marqué)(deuxième réaction) Ensuite, on divise l'anti-
corps marqué en deux portions; dont l'une est combinée au complexe antigène-anticorps et l'autre non, et on mesure l'activité de l'agent de marquage dans chacune de ces portions On répète des procédures analogues pour un antigène présent dans des concentrations connues,pour établir une courbe d'étalonnage, La courbe d'étalonnage donne la quantité de l'antigène & mesurer L'agent de
marquage peut être, par exemple une enzyme ou une subs-
tance radio-active ou fluorescente.
Dans le procédé compétitif, qui a été utilisé en premier dans l'analyse radio-immunologique, la mesure
s'effectue comme suit.
Lorsqu'on fait réagir l'antigène à mesurer et une quantité prédéterminée de l'antigène marqué avec
l'anticorps insolubilisé correspondant à l'antigène à.
mesurer, les deux antigènes se combinent compétitivement
avec l'anticorps insolubilisé, ensuite, on divise l'anti-
gène marqué en deux portions-, dont l'une s'est combinée à T'anticorps insolubilisé et une autre ne s'est pas combinée, et on mesure l'activité de l'agent de marquage dans chaque portion On répète des procédures analogues
pour un antigène à des concentrations connues afin d'éta-
blir une courbe d'étalonnage, La courbe d'étalonnage déter-
mine la quantité de l'antigène.
Pour la mise en oeuvre de ces réactions, il est avantageux d'utiliser la surface de la paroi interne d'un récipient comme support pour une substance réactive telle qu'un anticorps à insolubiliser Par exemple, on utilise fréquemment un tube A essai en matière plastique parce qu'il sert à la fois de support pour l'insolubilisation
et de récipient de réaction et qu'il est facile à manipu-
ler Toutefois, la surface de la paroi interne d'un ré-
cipient de réaction est désavantageuse en ce sens que son étendue de surface, a laquelle un anticorps ou une autre substance réactive est fixée, est plus, petite que dans le cas d'autres supports tels que les perles de matière
plastique, le papier filtre ou les particules cellulosi-
ques et elle ne peut donc porter qu'une petite quantité de la substance réactive En conséquence, le temps de
réaction est plus long, dans le procédé classique dans le-
quel un tube a essai ou autre récipient de réaction por-
tant une substance réactive à insolubiliser sur sa sur-
face de paroi interne est maintenu vertical et immobile
ou bien son contenu est agité par intermittence.
Un but de l'invention est de réaliser un
appareil destiné à faire tourner des récipients de réac-
tion dans une attitude inclinée, l'appareil pouvant efficacement provoquer la réaction entre une substance réactive fixée sur une phase solide et une substance
réactive contenue dans une phase liquide.
En particulier, le but de l'invention est de
réaliser un appareil servant à faire tourner des réci-
pients de réaction dans une position inclinée, l'appa-
reil permettant de déterminer la quantité d'une substance réactive contenue dans une phase liquide par une*substance réactive fixée sur une phase solide avec une meilleure
sensibilité et dans un temps de réaction plus court.
Plus précisément, le but de l'invention est de réaliser un appareil destiné à permettre de mesurer
un antigène ou un anticorps contenu dans une phase liqui-
de au moyen d'un anticorps, d'un antigène ou d'un complexe de ces deux substances fixé sur une phase solide, avec une meilleure sensibilité et avec un temps de réaction
plus court.
L'appareil suivant l'invention comprend un plateau circulaire, des moyens pour supporter le plateau circulaire en rotation, des moyens pour faire tourner le plateau circulaire à une vitesse prédéterminée, une
série de porte-récipients de réaction prévus sur la par-
tie marginale du plateau circulaire, des moyens servant à faire tourner les' porte récipients de réaction autour de leurs axes à une vitesse prédéterminée, et des moyens servant à fixer l'ensemble de la plaque de telle manière
que les porte-récipients de réaction puissent être incli-
nés à un angle prédéterminé sur l'horizontale Pour ef-
fectuer la mesure d'un antigène ou d'un anticorps conte-
nu dans une phase liquide au moyen d'un anticorps, d'un antigène ou d'un complexe de ces deux substances fixés sur une phase solide, on règle la vitesse de rotation des porte-récipients de réaction sur 10 à 100 tr/mn, de
préférence sur 25 à 55 tr/mn; et on règle l'angle d'in-
clinaison des porte-récipients de réaction sur 450, de
préférence sur 100 à 20 par rapport à l'horizontale.
D'autres caractéristiques et avantages de l'in-
vention apparaîtront au cours de la description qui va
suivre Aux dessins annexés, donnés uniquement à titre
d'exemple,
la Fig 1 est une vue représentant un appareil suivant, l'invention; la Fig 2 est une vue en coupe de l'appareil représenté sur la Fig 1;
les Fig 2 A et 2 B sont des vues en coupe re-
présentant chacune un état en prise entre un plateau tour-
nant et un support dans encore d'autres modes de réalisa-
tion suivant l'invention; la Fig 3 est une vue en partie en coupe de l'appareil suivant la ligne I-I de la Fig 2, et la Fig 4 est un graphique sur lequel la courbe
d'étalonnage obtenue en utilisant l'appareil suivant l'in-
vention est comparée avec celle obtenue en utilisant l'ap-
pareil classique;
la Fig 5 est un graphique montrant que l'appa-
reil suivant l'invention permet de raccourcir le temps de réaction; et la ?ig,6 est un graphique montrant une courbe
d'étalonnage pour une analyse à AFP de l'exemple 1.
La demanderesse a exécuté une étude approfon-
die pour éliminer les inconvénients ci-dessus du procédé classique qui utilise un récipient de réaction p comme
support pour l'insolubilisation A la suite de cette étu-
de, elle a découvert que l'on peut obtenir un plus haut degré de sensibilité et de réduction duismps de réaction lorsque le récipient de réaction est incliné d'un certain angle et qu'on le fait tourner à une certaine vitesse pendant la réaction, au lieu de le maintenir vertical et
immobile ou avec son contenu agité par intermittence.
Cette découverte a conduit à l'invention.
L'invention a pour objet un appareil adapté pour être utilisé dans une réaction dans laquelle on fait
tourner un récipient de réaction dans une attitude in-
clinée Dans la description qui va suivre, le récipient
de réaction est un tube à essai, la substance portée sur la surface de paroi interne du récipient de réaction est un anticorps et la substance contenue dans la phase liquide est un antigène Toutefois, cette combinaison
est utilisée pour la commodité de la description
et elle ne signifie pas que l'invention est limitée à
cette combinaison.
Les substances contenues dans les fluides
corporels existent habituellement en très petites quan-
tités et les fluides corporels eux mêmes, qui contien-
nent ces substances, ne sont fréquemment disponibles qu'en petits volumes Tout procédé qui sera utilisé
pour mesurer ces substances doit nécessairement présen-
ter un haut degré de sensibilité analytique, avec un
échantillon qui n'est disponible que dans une très peti-
te quantité C'est pourquoi il était habituel jusqu'à présent de ne fixer un anticorps sur la surface de paroi interne d'un tube à essai que dans le voisinage de son
fond, par exemple dans une région s'élevant à une hau-
teur de 1 cm au-dessus du fond du tube.
Au contraire, la présente invention permet de fixer un anticorps sur une plus grande surface, qui
comprend la partie supérieure d'un tube à essai, puis-
que l'échantillon, même s'il n'est disponible qu'en un
petit volume, peut être mis en large contact avec l'an-
ticorps lorsqu'on fait tourner le récipient de réaction dans une position inclinée comme on l'a décrit ici En outre, la rotation du tube à essai contribue à agiter son contenu et, en conséquence, permet d'effectuer la
mesure avec une haute sensibilité dans un temps court.
Le tableau 1 montre la relation ente l'angle d'inclinaison du récipient de réaction et la quantité
relative de l'échantillon qui est nécessaire pour mouil-
ler la portion du récipient de réaction portant l'antiv
corps lorsque la surface de l'anticorps dans le réci-
pient est constante.
Le tableau 2 montre la relation entre l'angle d'inclinaison du récipient de réaction et la surface de contact entre l'échantillon et la surface interne du récipient dans le cas ot la quantité d'échantillon
est constante.
TABLEAU 1
Angle d'inclinaison Volume relatif d'échantillon nécessaire (vertical) 1 450 environ 1/2
300 " 1/3
" 1/5
" 1/10
TABLEAU 2
Angle d'inclinaison Dimension relative de la surface
de contact.
(verti Cal) 1 environ 1,5
300 " 2
n 25
200 O 3
" 4
Il est généralement vrai que, plus la surface de contact entre deux réactifs est grande, plus on peut les faire réagir efficacement Ainsi qu'il ressort de façon évidente du tableau 1, le volume d'échantillon
nécessaire pour mouiller la surface de contact constan-
te décroît avec la réduction de l'angle d'inclinaison du récipient de réaction au fur et à mesure qu'on se
rapproche de la position horizontale Il est donc sou-
haitable d'incliner le récipient de réaction à une in-
clinaison aussi proche que possible de la position hori-
zontale, pourvu que le liquide à, faire réagir ne s'en
écoule pas Même si l'inclinaison du récipient de réac-
tion est très proche de l'horizontale, par exemple si elle est aussi faible que 5 sur l'horizontale, on n'a pas à craindre que l'échantillon ne manque le contact
avec le fond du récipient, sauf si le volume de l'échan-
tillon est très petit, Bien qu'il n'y ait pas de limite
supérieure particulière à l'angle d'inclinaison du réci-
pient de réaction, il est préférable de maintenir cet angle au-dessus de 45 , de façon plus préférée, à une valeur de 10 à 200, pour économiser sur le volume
d'échantillon et accroître la sensibilité analytique.
Il est également préférable de faire tourner le récipient incliné à une vitesse de 10 à 100 tr/mn d'une façon la plus préférée de 25 à 55 tr/mn Si la vitesse de réaction excède-100 tr/mn, l'échantillon ne peut pas s'écouler vers le bas sur la paroi du tube mais il tourne avec le récipient, de sorte qu'on n'obtient
plus le plein contact entre l'échantillon et l'anti-
corps Une vitesse de rotation inférieure à 10- tr/mn entraîne au contraire une réduction considérable de
l'effet d'agitation créé par la rotation du récipient.
Un but de la présente invention est donc de réaliser un appareil adapté pour être utilisé pour faire réagir des phases solides et liquides, dans lequel un
récipient de réaction est maintenu en rotation et en po-
sition inclinée pendant la réaction.
L'appareil suivant l'invention comprend un pla-
teau, de préférence un plateau circulaire, des moyens servant à supporter en rotation ce plateau circulaire, des moyens servant à faire tourner le plateau circulaire
à une vitesse prédéterminée, un certain nombre de porte-
récipients de réaction rotatifs, prévus sur la partie marginale du plateau circulaire,des moyens servant à faire tourner les porte- récipients de réaction autour de leurs axes à une vitesse prédéterminée, et des moyens servant à fixer l'ensemble du plateau circulaire de
telle manière que les porte-récipients de réaction puis-
sent être inclinés d'un angle prédéterminé sur l'hori-
zontale Pour bien effectuer la mesure d'un antigène et d'un anticorps contenus dans une phase liquide au moyen d'un anticorps, d'un antigène ou d'un complexe de ces
substances fixé sur une phase solide, la vitesse de ro-
tation des porte-récipients de réaction est réglée sur à 100 tr/mn de préférence 25 à 55 tr/mn; et l'angle
d'inclinaison des-porte-récipients de réaction est ré-
glé sur moins de 45 , de préférence 10 à 200 par rapport
à l'horizontale.
L'appareil suivant l'invention sera maintenant
décrit avec plus de détails en regard des dessins annexés.
Naturellement, la forme de réalisation décrite sur les dessins est purement illustrative de la présente invention
mais elle ne doit en aucun cas être considérée comme li-
mitative du domaine de l'invention.
La référence 2 désigne un plateau circulaire qui est supporté en rotation par un arbre rotatif 8 La forme
circulaire du plateau 2 n'est pas restrictive -Tôute for-
me du plateau convient dans la mesure o il peut fonction-
ner comme le plateau circulaire Dans là partie marginale du plateau circulaire 2 sont prévus un certain nombre de trous traversants, de préférence placés dans des positions également espacées et dans lesquelles les porte-récipients de réaction 1 sont montés rotatifs L'espacement régulier des trous traversants donne à l'appareil une excellente
possibilité de travail mais l'invention n'est pas limi-
tée à cet agencement Le porte-récipient de réaction comprend deux parties: un certain nombre de saillies l-a en forme de barres qui se trouvent au-dessus du plateau circulaire de manière à tenir un récipient de réaction, et une partie cylindrique 1-b qui est insérée dans le trou traversant du plateau circulaire Sur la Fig l, le nombre des saillies en forme de barre est de quatre mais
on pourra adopter n'importe quel nombre de saillies, pour-
vu que les saillies& puissent tenir les récipients de réaction d'une façon stable, En outre, la configuration
de barre des saillies n'est pas indispensable Ces sail-
lies peuvent être présentées sous la forme d'une paroi cylindrique d'un seul tenant ou équivalent, pourvu qu' elles puissent tenir les récipients de réaction de telle manière que ces derniers tournent avec la rotation des porte-récipients Sur les Fig l et 2, le récipient de réaction est tenu par les saillies au-dessus du plateau circulaire 2 mais les porterécipients peuvent être conçus de manière que le récipient de réaction soit tenu
dans le porte-récipient tandis qu'une partie du porte-
récipient se trouve au-dessous du plateau circulaire.
La partie cylindrique lab comprend une partie de monta-
ge 1-c qui est adaptée pour ajuster le porte-récipient sur le plateau circulaire; une face glissante l-d au niveau de laquelle le porterécipient tourillonne dans le trou traversant du plateau circulaire 2; et une partie de contact et de pression l-e qui est mise en contact avec
un plateau rotatif 3.
Les Fig 2 A et 2 B illustrent les états en prise entre le support 1 et le plateau tournant 3 dans d'autres modes de réalisation suivant l'invention Sur la Fig 2 A un pignon est solidarisé avec le fond du support et est
en prise avec un pignon prévu à la circonférence du pla-
teau circulaire Sur la Fig 2 B, un pignon qui est adapté
pour venir en prise avec le pignon prévu à la circonfé-
rence du plateau circulaire 3 est formé sur le fond du
support 1.
Le plateau rotatif 3 est monté et supporté en rotation par l'arbre rotatif 8 qui supporte le plateau circulaire 2 Sur un côté du plateau rotatif 3 est fixé
solidairement un engrenage 4 qui est adapté pour engre-
ner avec un engrenage 4 ' qui est à son tour relié à un moteur 6 par l'intermédiaire d'un réducteur 5, de sorte que le mouvement de rotation du moteur 6 est transmis au
porte-récipient 1 par l'intermédiaire du plateau rota-
tif 3 Le plateau rotatif 3 est réalisé avec une forme circulaire Un engrenage est prévu sur la circonférence du plateau rotatif, dans son sens de rotation tandis qu'
un engrenage correspondant est formé sur le porte-réci-
pient pour engrener avec l'engrenage du plateau rotatif.
Deux saillies circulaires en forme de bandes peuvent être formées sur la surface latérale du plateau rota- tif 3, auquel cas ce disque rotatif 3 lui-même n'a pas à être circulaire Des gorges correspondantes qui sont adaptées pour coopérer avec les saillies peuvent
être formées sur les faces latérales des porte-récipients.
Le nombre des saillies en forme de bandes du disque circulaire( et des gorges sur le porte-récipient) n'est pas restrictif bien qu'il soit de deux dans la forme représentée sur les Fig 1 et 2 Les saillies en forme de bandes peuvent être formées d'une seule pièce avec la portion en forme de plaque du plateau rotatif 3, ou encore elles peuvent être formées par la fixation de bandes sur la surface latérale de la portion en forme de plaque du plateau rotatif Au moins l'un des éléments constitués respectivement par la partie de contact 1-e
et par les saillies en forme de bandes est de préféren-
ce fait d'une matière élastique de manière à maintenir un contact étroit entre les porte-récipients et le
plateau rotatif La vitesse du porte-récipient est ré-
glée au moyen d'un organe de réglage 7 de manière que les récipients de réaction tenus par le porte-récipient
puissent tourner dans unintervalle de 10 à 100 tr/mn.
Le dispositif de réglage, qui est adapté pour régler la vitesse de rotation du moteur 6 peut être un dispositif classique Par exemple, il peut être constitué par une résistance réglable qui commande l'intensité de courant
appliqué au moteur 6.
Le plateau circulaire 2 est fixé à la partie terminale de l'arbre 8 et il est entraîné par un-moteur
12 (sépare du moteur 6) par l'intermédiaire d'un engre-
nage 9 prévu sur une partie intermédiaire de l'arbre 8, d'un engrenage 9 ' en prise avec l'engrenage 9, d'une il
vis sans fin 10 solidaire de l'engrenage 9 ' et d'un ré-
ducteur 11 qui attaque la vis sans fin 10, de sorte que
les porte-récipients de réaction sont déplacés successi-
vement suivant une trajectoire circulaire L'intervalle de temps pendant lequel un porte-récipient de réaction
situé dans une certaine position est transféré à la po-
sition que le porte-récipient adjacent occupait est ré-
glé, sur une période arbitraire au moyen d'un dispositif
de réglage 13, par exemple entre 0,5 et 5 mn.
Le dispositif de réglage 13 qui est adapté pour règler la vitesse de rotation du plateau circulaire 2 peut être un dispositif classique Par exemple, il peut être constitué par une minuterie qui commande le moteur 12 La commande réalisée au moyen des dispositifs de réglage 7 et 13 peut être assurée électriquement ou
électroniquement Naturellement, ces dispositifs de ré-
glage peuvent être omis dans l'appareil du type à fonc-
tionnement fixe, dans lequel les vitesses de rotation des porterécipients 1 et du plateau circulaire 2 sont
fixées au préalable à des valeurs constantes.
Les éléments ci-dessus sont supportés par des moyens supports appropriés tels' qu'un carter 15,
représenté sur les Fig 1 à 3.
L'appareil mentionné plus haut est supporté
par les plaques supports 14 lorsqu'il est en utilisation.
Les plaques supports 14 sont conçues de telle manière
que les récipients de réaction tenus par les porte-réci-
pients 1 puissent être inclinés vers le haut sur l'hori-
zontale entre O à 90 , Dans la forme de réalisation re-
présentée sur les dessins, les moyens d'inclinaison sont constitués par les plaques supports'14 mais ils peuvent être constitués par des moyens réglables qui permettent d'incliner le récipient de réaction sur l'horizontale à
une inclinaison choisie arbitrairement.
Par exemple, les moyens réglables peuvent être constitués de telle façon que les moyens supports
en forme de carter, soient supportés de façon régla-
ble selon un angle d'inclinaison, sur les plaques sup-
ports 14 au moyen d'une vis ou analogue Les moyens supports 14 servent à supporter les pièces 1 à 13 et les moyens supports 15 en forme de carter Les plaques 14 ne sont pas limitées à un profil particulier comme représenté aux Fig 1 et 2. Par ailleurs, dans la forme de réalisation représentée sur les dessins, les moyens supports 15 en
forme de carter sont formés séparément des plaques sup-
ports 14 et fixés aux plaques 14 par des moyens appro-
priés tels que des adhésifs ou des boulons Toutefois, les moyens supports 15 et les plaques supports 14 peuvent être venus d'une seule pièce,
Dans les modes dé réalisation décrits ci-des-
sus, deux moteurs 6 et 12 sont prévus pour faire tour-
ner le plateau circulaire 2 et le support 1 respective-
ment Mais, bien entendu un seul moteur est suffisant
pour entraîner le plateau circulaire et le plateau tour-
nant lorsqu'on utilise des moyens appropriés de trans-
mission d'énergie.
Le procédé de réaction de l'invention possède les avantages suivants:
i) la rotation continue du récipient de réac-
* tion garantit une agitation suffisante du mélange réac-
tionnel, une amélioration de l'efficacité de la réac-
tion et une haute sensibilité et une meilleure précision
de l'analyse.
ii) Dour obtenir un procédé d'analyse à haute
sensibilité, il était habituel jusqu'à présent d'uti-
liser un plus grand volume d'échantillon, Au contraire,
suivant l'invention, il est suffisant d'utiliser un vo-
lume d'échantillon qui ne représente que 1/2 à 1/10 de celui qui était nécessaire jusqu'à présent, comme on l'a représenté sur le tableau 1, Ceci a le même effet que si le procédé classique avait été mis en oeuvre avec un volume d'échantillon deux à dix fois plus grand que celui
utilisé habituellement.
tii) dans le classique, lorsque le volume de
l'échantillon est petit, le gradient de la courbe d'éta-
lonnage est plus faible, ce qui réduit la précision des mesures obtenues par ce procédé Au contraire, lorsqu'on utilise l'appareil suivant l'invention, la surface de
contact entre l'échantillon et la surface interne du ré-
cipient de réaction peut être 1,5 à 4 fois celle qu'on obtenait jusqu'à présent, même si l'on utilise le même
petit volume d'échantillon, ainsi que le montre le ta-
bleau 2 Etant donné que l'anticorps peut être fixé sur une plus grande surface, il est possible d'obtenir un
procédé d'analyse de haute sensibilité et de haute pré-
cision Le tableau 3 montre les résultats d'une analyse d'alphafoetoprotéine (AFP) exécutée en utilisant le même réactif et le même volume d'échantillon Les essais
ont été répétés cinq fois à chaque concentration en uti-
lisant l'appareil suivant l'invention et en utilisant un
appareil classique La Fig,4 montre des courbes d'étalon-
nage basées sur les résultats représentés au tableau 3.
On remarquera que la courbe d'étalonnage suivant l'inven-
tion possède un gradient supérieur à celui du procédé classique et que l'appareil suivant l'invention assure donc une plus grande précision Ces analyses d'AFP suivant
l'invention ont été exécutées dans un récipient de réac-
tion incliné d'un angle de 10 et entraîné à une rotation
à une vitesse de 30 tr/mn.
TABLEAU 3
Concentration de 1 'AFP (ng/ml) O 1 10 100 Procédé classique Densité optique (+SE) 0,193 + 0,007 0,240 + 0,007 0,346 + 0,009-,639 + 0,019
CV% 8,5 6,2 6,0 6,7
Procédé suivant l'invention it Densité (x+SE) 0,025 + 0,001 0,154 + 0,002 0,412 + 0,105 Q,970 + 0,006 optique
CV% 7,4 2,4 2,6 1,3
iv) le temps de réaction peut être considérable, ment réduit Par exemple, le tableau 4 montre à titre de comparaison des temps d'analyse nécessaires pour obtenir
sensibilités et précisions analytiques analogues, c'est-
à-dire des courbes d'étalonnage ayant des gradients ana- logues, en utilisant le même réactif dans une analyse d'AFP On a constaté que l'appareil suivant l'invention permet de réaliser la mesure en une heure, en réduisant ainsi considérablement le temps de réaction Le récipient de réaction était incliné d'un angle de 201, et mis en rotation à une vitesse de 50 tr/mn Les courbes standards
ainsi obtenues sont représentées sur la Fig 5 On remar-
que que la réduction du temps d'analyse a été suffisam-
ment grande pour que les réactions qui exigeaient un temps total de douze heures suivant le procédé classique puissent être exécutées en une heure avec l'appareil
suivant l'invention.
TABLEAU 4
Procédé classique Procédé suivant (le récipient est l'invention (le
maintenu vertical et récipient est in-
imnobile) cliné et mis en -_______________ _ -rotation) Première réaction 60 Zn 20 mn Deuxième réaction 60 mn 20 mn Réaction d'enzyme 10 heures 20 mn
L'appareil peut être utilisé pour transférer automati-
quement les récipients de réaction l'un après l'autre en même temps qu'ils sont entraînés en rotation en continu et que leurs contenus sont agités en continu En conséquence, il est possible, par exemple de monter l'un après l'autre un grand nombre de récipients de réaction dont chacun contient un échantillon liquide sur les porte-récipients de réaction dans la position de départ, de provoquer l'exécution de la réaction dans les récipients de réac-
tion pendant qu'ils sont mis en rotation et transférés vers l'avant automatiquement et d'obtenir un examen
automatique des résultats de la réaction dans une posi-
tion prédéterminée, par exemple au moyen d'un spectro-
photomètre L'appareil suivant l'invention est donc particulièrement bien approprié pour l'automatisation
du procédé d'analyse.
On décrira maintenant le procédé de réaction
suivant l'invention au moyen d'un exemple.
EXEMPLE 1
ANALYSE DE L'AFP
a) préparation des tubes à essais pour la réac-
tion.
On a placé 2 ml d'un anticorps anti-AFP mono-
clonal (A) (l mg/ml) dans chaque tube à essai en poly-
styrène, lequel avait ét^ lavé avec une solution -tapon saline physiologique contenant 0,05 M d'acide phosphorique (p H 6,4) (appelée ciaprès PBS) On a laissé incuber à 560 C pendant 20 minutes pour obtenir un tube à essai sensibilisé par l'anticorps (A) On a marqué un deuxième anticorps monoclonal (B) d'un clone différent de celui (A) avec un peroxydage de raifort (Boehringer Manheim Grade 1, qu'on appelera plus simplement ci-après HRPO)
par le procédé de Nakane et autres, décrit dans J Histo-
chem Cytochem, 22, 1084 ( 1974) On a dilué le deuxième anticorps au cinquantième à l'aide de PBS puis placé 1 ml de l'anticorps dilué dans chaque tube à essai en polystyrène sensibilisé par l'anticorps (A> Après avoir lyophilisé les tubes à essais, on les a fermés à joint
étanche pour former des récipients de réaction pour ana-
lyse d'AFP.
b) Analyse de l'AFP On a chargé de 0,9 ml de PBS des tubes à essais
pour l'analyse de AFP qui avait été préparé comme dé-
crit en (a) ci-dessus, Dans chaque tube à essai, on a placé O,1 ml d'une solution standard de AFP préparée en
diluant l'AFP au moyen de sérum humain normal, de ma-
nière qu'il contienne 1, 10, 100 ou 1000 ng de AFP par millilitre Les tubes à essais ont été montés sur les porte-récipients de l'appareil suivant l'invention dans une attitude inclinée vers le haut d'un angle de 20 sur
l'horizontale La réaction a été exécutée pendant 20 minu-
tes, cependant que les tubes à essais ont été mis en ro-
tation à une vitesse de 50 tr/mn, Apres la réaction, les
tubes à essais ont été lavés à l'aide d'une solution sa-
line physiologique contenant 0,05 % de Tween 20 (appelé ci-après l'agent de lavage) Ensuite, on a chargé chaque tube à essai de 2 ml d'une solution de substrat d'enzyme contenant 50 ng/ml d'acide 5-amino- salicylique et 0,01 % de peroxyde d'hydrogène On a monté à nouveau les tubes à essai sur les porte-récipients en position inclinée vers le haut d'un angle de 20 sur l'horizontale puis on a exécuté la réaction pendant 30 minutes pendant que les tubes à essais étaient mis en rotation à une vitesse de
50 tr/mn.
Ensuite, on a ajouté 50 p 1 d'azide de sodium à 2 % pour arrêter la réaction On a examiné l'absorbance du mélange réactionnel à une longueur d'onde de 500 nm au moyen d'un spectrophotomètre La courbe d'étalonnage
obtenue à partir de cet examen est représentée à la Fig 6.
Claims (12)
1 Appareil servant à faire tourner des récipients de réaction dans une attitude inclinée, caractérisé en ce qu'il comprend: un premier plateau ( 2); des moyens servant à supporter le premier plateau ( 2) en rotation; des moyens servant à faire tourner le premier plateau ( 2) à une vitesse prédéterminée, plusieurs porte-récipients de réaction ( 1) montés sur la partie marginale du premier plateau et adaptée pour le montage des récipients de réaction (A); des moyens servant à faire tourner les 1 O porte-récipients de réaction autour de leurs axes à une vitesse prédéterminée, et des moyens ( 14) servant à fixer les moyens ( 15) supports du premier plateau ( 2) de telle manière que les porterécipients de réaction ( 1) puissent
être inclinés d'un angle prédéterminé sur l'horizontale.
2 Appareil suivant la revendication 1, caractéri-
sé en ce que la vitesse de rotation des porte-récipients
de réaction ( 1) est réglée sur 10 à 100 tr/mn.
3 Appareil suivant la revendication 2, caractéri-
sé en ce que la vitesse de rotation des porte-récipients
de réaction ( 1) est réglée sur 25 à 55 tr/mn.
4 Appareil suivant l'une quelconque des reven-
dications 1, 2 et 3, caractérisé en ce que l'angle d'incli-
naison des porte-récipients de réaction ( 1) est réglé
sur moins de 450.
5 Appareil suivant la revendication 4, caracté-
risé en ce que l'angle d'inclinaison des porte-récipients
de réaction ( 1) est réglé sur 10 à 200.
6 Appareil suivant la revendication 1, caracté-
risé en ce que le porte-récipient de réaction ( 1) comprend une première partie ( 1-a) destinée à tenir un récipient de réaction, une deuxième partie ( 1-d) servant au montage du porte-récipient de réaction ( 1) à glissement dans le premier plateau ( 2) et une troisième partie ( 1-e) qui est
mise en contact avec les moyens de rotation des porte-
récipients de réaction, ladite première et ladite troisième partie étant situées respectivement de part et d'autre
du premier plateau ( 2), les moyens de rotation des porte-
récipients de réaction comprenant des moyens ( 6,12) servant à développer une puissance-et un deuxième plateau ( 3) qui est entraîné en rotation sous l'action desdits moyens ( 6,12)et qui entre en contact avèc ladite troisième partie ( 1-e) de chaque porte-récipient pour faire tourner
ce dernier.
7 Appareil suivant la revendication 6, carac-
térisé en ce que les moyens de rotation des porte-
récipients de réaction comprennent en outre un réducteur ( 11) interposé entre les moyens ( 12) développant la
puissance et le deuxième plateau ( 3).
8 Appareil suivant l'une quelconque des reven-
dications 1, 6 et 7, caractérisé en ce que les moyens supportant le premier plateau ( 2) comprennent des moyens ( 12) servant à produire une puissance, un engrenage ( 4 ') et un arbre ( 8) auquel la puissance est transmise pour faire tourner le premier plateau ( 2) par l'intermédiaire de l'engrenage ( 4 ') et dont la partie terminale constitue
le support du premier plateau ( 2).
9 Appareil suivant la revendication 8, carac-
térisé en ce que les moyens supportant le premier
plateau ( 2) comprennent en outre un réducteur ( 5).
Appareil suivant l'une quelconque des
revendications 1, 6, 7, 8 et 9, caractérisé en ce qu'il
comprend en outre un dispositif de réglage servant à régler la vitesse de rotation des porte-récipients de réaction
( 1) incorporé dans les moyens de rotation des porte-
récipients de réaction.
11 Appareil suivant l'une quelconque des
revendications 1 et 6 à 10, caractérisé en ce qu'il comprend
en outre un dispositif de réglage servant à régler la vitesse de rotation du premier plateau ( 2) incorporé dans
les moyens de rotation du premier plateau ( 2).
12 Appareil suivant l'une quelconque des reven-
dications 1 et 6 à 11, caractérisé en ce que les moyens servant à fixer des moyens supports du premier plateau sont constitués par un jeu de plaques de base ( 14) servant à incliner le premier plateau d'un certain angle sur l'horizontale de manière que les porte-récipients de réaction puissent être inclinés d'un angle prédéterminé
sur l'horizontale.
13 Appareil servant à faire tourner des récipients de réaction dans une attitude inclinée, caractérisé en ce qu'il comprend: un premier plateau ( 2); un arbre ( 8) servant à supporter ledit premier plateau ( 2) en rotation, cet arbre ( 8) étant entraîné
en rotation par un moteur électrique ( 12) par l'inter-
médiaire d'un réducteur ( 11) et à une vitesse prédéter-
minée; une série de trous prévus dans la partie marginale du premier plateau ( 2) dans des positions régulièrement espacées; une série de porte-récipients de réaction ( 1) montés dans lesdits trous, ces porterécipients de
réaction comportant une première partie ( 1-a) située au-
dessus du premier plateau pour tenir un récipient de réaction (A), une partie de montage ( 1-b, 1-c, 1-d) adaptée pour le montage du porterécipient de réaction à travers le trou et une partie de contact ( 1-e) qui est située au-dessous dudit premier plateau; un deuxième plateau ( 3) qui est monté à rotation sur l'arbre ( 8), dont une surface latérale est munie d'un premier élément
d'engrenage qui est adapté pour attaquer un deuxième élé-
ment d'engrenage prévu sur la face latérale de ladite partie de contact ( 1-e) de chaque porte-récipient de réaction, un troisième engrenage fixé à la face arrière du deuxième plateau ( 3), ce deuxième plateau étant entraîné en rotation au moyen d'un moteur ( 6) par l'intermédiaire d'un réducteur ( 5), d'un quatrième engrenage ( 4 ') qui engrène avec le troisième engrenage ( 4) et le réducteur et le troisième engrenage servant à faire tourner les porte-récipients de réaction par l'intermédiaire du deuxième plateau à une vitesse prédéterminée, et un socle ( 14, 15) qui fixe ledit arbre de telle manière que les porte- récipients de réaction puissent être inclinés
d'un angle prédéterminé sur l'horizontale.
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