HK53797A - CD 25 binding molecules - Google Patents

Claims (20)

1. Verfahren zur Herstellung eines CD25 bindenden Moleküls, das mindestens eine Antigenbindungsstelle enthält, die mindestens eine Domäne enthält, die wiederum in Folge die hypervariablen Regionen CDR1, CDR2 und CDR3 enthält, wobei CDR1 die Aminosäuresequenz Arg-Tyr-Trp-Met-His, CDR2 die Aminosäuresequenz Ala-Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln-Lys-Phe-Glu-Gly und CDR3 die Aminosäuresequenz Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe aufweist oder direkte Äquivalente hiervon, wobei dieses Verfahren gekennzeichnet ist durch einen Kultivierungsschritt einer Hybridomzellinie oder eines mit einem DNA Konstrukt transformierten Organismus, wobei das Konstrukt Nukleotidsequenzen enthält, die in Folge die hypervariablen Regionen CDR1, CDR2 und CDR3 enthalten, und Isolierung eines CD25 bindenden Moleküls aus der Kultur.
2. Verfahren nach Anspruch 1, worin das CD25 bindende Molekül mindestens eine Antigenbindungsstelle enthält, die folgendes umfaßt

   a) eine erste Domäne, die in Folge die hypervariablen Regionen CDR1, CDR2 und CDR3 aufweist, wobei CDR1 die Aminosäuresequenz Arg-Tyr-Trp-Met-His, CDR2 die Aminosäuresequenz Ala-Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln-Lys-Phe-Glu-Gly und CDR3 die Aminosäuresequenz Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe aufweist, und

   b) eine zweite Domäne, die in Folge die hypervariablen Regionen CDR1', CDR2' und CDR3' aufweist, wobei CDR1' die Aminosäuresequenz Ser-Ala-Ser-Ser-Ser-Ile-Ser-Tyr-Met-Gln, CDR2' die Aminosäuresequenz Asp-Thr-Ser-Lys-Leu-Ala-Ser- und CDR3' die Aminosäueresequenz His-Gln-Arg-Ser-Ser-Tyr-Thr aufweist

   oder direkte Äquivalente hiervon.
3. Verfahren nach Anspruch 1, worin das CD25 bindende Molekül mindestens eine Antigenbindungsstelle enthält, die entweder eine Domäne mit der in Sequenzzuordnung Nr. 1 gezeigten Aminosäuresequenz beginnend mit der Aminosäure an Position 1 und mit der Aminosäure an Position 117 endend enthält, oder eine wie oben beschriebene erste Domäne und eine zweite Domäne, die die in Sequenzzuordnung Nr. 2 gezeigte Aminosäuresequenz beginnend mit der Aminosäure an der Position 1 und mit der Aminosäure an der Position 104 endend enthält oder direkte Äquivalente hiervon.
4. Verfahren nach Anspruch 2 oder 3, worin das CD25 bindende Molekül zumindest enthält

   a) eine schwere Kette eines Immunglobulins oder ein Fragment hiervon, die umfaßt (i) eine variable Domäne, die in Folge die hypervariablen Regionen CDR1, CDR2 und CDR3 enthält, und (ii) den konstanten Teil einer humanen schweren Kette oder ein Fragment hiervon, wobei CDR1 die Aminosäuresequenz Arg-Tyr-Trp-Met-His, CDR2 die Aminosäuresequenz Ala-Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln-Lys-Phe-Glu-Gly und CDR3 die Aminosäuresequenz Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe aufweist, und

   b) eine leichte Kette eines Immunglobulins oder ein Fragment hiervon, die umfaßt (i) eine variable Domäne, die in Folge die drei hypervariablen Regionen CDR1', CDR2' und CDR3' enthält, und (ii) den konstanten Teil einer humanen leichten Kette oder ein Fragment hiervon, wobei CDR1' die Aminosäuresequenz Ser-Ala-Ser-Ser-Ser-Ile-Ser-Tyr-Met-Gln, CDR2' die Aminosäuresequenz Asp-Thr-Ser-Lys-Leu-Ala-Ser- und CDR3' die Aminosäueresequenz His-Gln-Arg-Ser-Ser-Tyr-Thr aufweist,

   oder direkte Äquivalente hiervon.
5. Verfahren nach Anspruch 4, worin das CD25 bindende Molekül zumindest enthält

   a) eine schwere Kette, die eine variable Domäne mit der in der Sequenzzuordnung Nr. 1 gezeigten Aminosäuresequenz beginnend mit der Aminosäure an der Position 1 und mit der Aminosäure an der Position 117 endend und den konstanten Teil einer humanen schweren Kette enthält, und

   b) eine leichte Kette, die eine variable Domäne mit der in der Sequenzzuordnung Nr. 2 gezeigten Sequenz beginnend mit der Glutaminsäure an der Position 1 und mit der Glutaminsäure an der Position 104 endend und den konstanten Teil einer humanen leichten Kette enthält,

   oder direkte Äquivalente hiervon.
6. Verfahren nach Anspruch 4 oder 5, worin im CD25 bindenden Molekül der konstante Teil der humanen schweren Kette oder ein Fragment hiervon vom γ₁ Typ ist und der konstante Teil der humanen leichten Kette oder ein Fragment hiervon vom κ Typ ist.
7. Verfahren zur Herstellung eines mehrkettigen CD25 bindenden Moleküls, gekennzeichnet durch

   A) Kultivierung eines Organismus, der transformiert ist mit

   i) einem DNA Konstrukt, das die schwere Kette oder ein Fragment hiervon kodiert und folgendes enthält

   a) einen ersten Teil, der eine abwechselnd Framework und hypervariable Regionen enthaltende variable Domäne kodiert, wobei die in Folge auftretenden hypervariablen Regionen CDR1, CDR2 und CDR3 die in der Sequenzzuordnung Nr. 1 gezeigten Aminosäueresequenzen sind und dieser erste Teil mit einem Codon beginnt, das die erste Aminosäure der variablen Domäne kodiert und mit einem Codon endet, das die letzte Aminosäure der variablen Domäne kodiert, und

   b) einen zweiten Teil, der einen konstanten Teil einer schweren Kette oder ein Fragment hiervon kodiert, der mit einem die erste Aminosäure des konstanten Teils kodierenden Codon beginnt und mit einem die letzte Aminosäure des konstanten Teils oder eines Fragments hiervon kodierenden Codon endet, gefolgt von einem Stopcodon,

   und mit

   ii) einem DNA Konstrukt, das die leichte Kette oder ein Fragment hiervon kodiert und folgendes umfaßt

   a) einen ersten Teil, der eine abwechselnd Framework und hypervariable Regionen enthaltende variable Domäne kodiert, wobei die in Folge auftretenden hypervariablen Regionen CDR1', CDR2' und CDR3' die in der Sequenzzuordnung Nr. 2 gezeigten Aminosäuresequenzen sind und dieser erste Teil mit einem Codon beginnt, das die erste Aminosäure der variablen Domäne kodiert und mit einem Codon endet, das die letzte Aminosäure der variablen Domäne kodiert, und

   b) einen zweiten Teil, der einen konstanten Teil einer leichten Kette oder ein Fragment hiervon kodiert, der mit einem die erste Aminosäure des konstanten Teils kodierenden Codon beginnt und mit einem die letzte Aminosäure des konstanten Teils oder eines Fragments hiervon kodierenden Codon endet, gefolgt von einem Stopcodon, und

   B) Gewinnen eines aktiven CD25 bindenden Moleküls aus der Kultur.
8. Verfahren zur Herstellung einer immunsuppressiven Zusammensetzung, gekennzeichnet durch einen Mischungsschritt von mindestens einem CD25 bindenden Molekül nach einem der Ansprüche 1 bis 7 und mindestens einem antigenbindenden Molekül gegenüber mindestens einem anderen Antigen als CD25, das für aktivierte T-Zellen charakteristisch ist.
9. Verfahren nach Anspruch 8, das zusätzlich Cyclosporin A als Beimischung enthält.
10. Verfahren nach Anspruch 8 oder 9, worin das CD25 bindende Molekül der chimäre CD25 Antikörper von Beispiel 5 ist und das andere antigenbindende Molekül ein chimärer CD7 Antikörper ist.
11. Verwendung eines CD25 bindenden Moleküls nach einem der Ansprüche 1 bis 7 in Kombination mit einem antigenbindenden Molekül, das ein anderes Antigen als CD25 erkennt, das für aktivierte T-Zellen charakteristisch ist, zur Herstellung eines Medikaments zur Immunsuppression des Säugetiersystems.