JP2000292420A - 血清または血漿採取方法及び血清もしくは血漿分離試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 遠心分離操作を行わずとも、短時間で血液か
ら血清もしくは血漿を容易に採取することを可能とする
方法を提供する。 【解決手段】 抗赤血球抗体または正の電荷を有する不
溶性担体を用いて赤血球を凝集させ、次に上清の血清ま
たは血漿を採取する、血清または血漿採取方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、血液検査等におい
て全血試料から血清もしくは血漿を採取する方法に関
し、より詳細には、遠心分離を行わずに短時間で血清も
しくは血漿を採取することを可能とする方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】血液検査分野では、血液を用いて人や動
物の種々の疾患の診断が行われている。この場合、全血
から、血清もしくは血漿を採取し、該血清もしくは血漿
を用いて検査が行われている。

【０００３】従来、全血から血清や血漿を採取するに
は、以下のような方法が用いられていた。すなわち、血
漿を採取する場合には、血液にヘパリンやエチレンジア
ミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの抗凝固剤を加え、遠心分
離した後、上清すなわち、血漿を採取する。遠心分離に
際しては、予め遠心容器中に、比重が血漿と血球との間
に調整された酸化エラグ酸のような血漿分離剤を投入す
ることも試みられている。

【０００４】また、血清を得る場合には、血液にシリカ
などの凝固促進剤を加えて血球成分を凝集させた後、遠
心分離を行い、遠心分離後に上清、すなわち血清を採取
している。この場合においても、血漿の場合と同様に、
遠心分離に際しては、予め遠心容器中に、比重が血清と
血球との間に調整された酸化エラグ酸のような血清分離
剤を投入する方法も採用されている。

【０００５】他方、特開平６−５８９２４号公報には、
ガラス繊維で作られたガラスペーパーを投入した採血管
に血液を採取した後、遠心分離操作を行って血清を採取
する方法が開示されている。

【０００６】上記先行技術に記載の方法では、ガラスペ
ーパーを構成しているガラス繊維がガラスペーパーから
分離することなく突出し、それによって血清中のフィブ
リンが該突出繊維に絡み易くなり、フィブリンの混入が
少ない血清を得ることができるとされている。

【０００７】しかしながら、上述した各種血清もしくは
血漿採取方法では、遠心分離装置を必要とする。従っ
て、屋外や遠心分離器のない診療所などでは、血清や血
漿を採取することは非常に困難であった。このような場
合には、凝固促進剤などを用い、血液試料を３０分以上
静置し、上清と固形分とに分離し、上清を分取する方法
が採用されることもある。しかしながら、上清と固形分
とに分離するまでに長い時間がかかるため、緊急を要す
る場合にはそのような操作では血清もしくは血漿を速や
かに採取することができなかった。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上述
した欠点を解消し、遠心分離操作を行うことなく、血清
もしくは血漿を短時間で効率良く採取することを可能と
する方法及びそのような方法に用いることができる血清
もしくは血漿分離試薬を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本願の第１の発明に係る
血清または血漿採取方法は、抗赤血球抗体を用いて血液
中の赤血球を凝集させ、次に上清の血清または血漿を採
取することを特徴とする。

【００１０】第１の発明においては、好ましくは、抗赤
血球抗体として、不溶性担体に担持された抗赤血球抗体
が用いられる。また、好ましくは、上記不溶性担体とし
て、正の電荷を有するものが用いられる。

【００１１】本願の第２の発明に係る血清または血漿採
取方法は、正の電荷を有する不溶性担体を用いて赤血球
を凝集させ、次に上清の血清または血漿を採取すること
を特徴とする。

【００１２】本願の第３の発明に係る血清もしくは血漿
分離試薬は、抗赤血球抗体を主成分とすることを特徴と
する。この場合、好ましくは、抗赤血球抗体は、不溶性
担体に担持されている。

【００１３】本願の第４の発明に係る血清もしくは血漿
分離試薬は、正の電荷を有する不溶性担体を主成分とす
る。以下、本発明の詳細を説明する。

【００１４】本願発明者らは、遠心分離操作を行うこと
なく、速やかに全血試料から血清または血漿を採取する
方法について検討した結果、抗赤血球抗体あるいは正の
電荷を有する不溶性担体を血清もしくは血漿分離試薬と
して用いれば、遠心分離操作を行わずとも、血清もしく
は血漿を速やかに分離し得ることを見出し、本発明をな
すに至った。

【００１５】すなわち、本願の第１の発明に係る血清ま
たは血漿採取方法では、第３の発明に係る血清もしくは
血漿分離試薬の主成分である抗赤血球抗体を用いて、血
液中の赤血球が凝集される。この凝集は、赤血球と抗赤
血球抗体との抗原抗体反応によるものであり、従って凝
集は速やかに進み、遠心分離操作を行わずとも、５〜１
５分程度の短時間で赤血球が凝集する。従って、遠心分
離操作を行わずとも、容易に血清もしくは血漿を採取す
ることができる。

【００１６】上記抗赤血球抗体としては、ウサギ、ヤ
ギ、めん羊またはマウスなどの動物に、使用する赤血球
を免疫することにより産生させればよい。上記抗赤血球
抗体を用いて血液中の赤血球を凝集させるには、抗体の
力価や動物種により異なるが、重量濃度比で、血液：抗
赤血球抗体＝１：１〜１：５００の範囲とすることが望
ましい。抗赤血球抗体の使用割合が上記範囲よりも少な
い場合には、凝集が速やかに進まず、上記範囲より多く
とも、凝集時間はそれ以上短くならない。

【００１７】第１の発明においては、上記のように、抗
赤血球抗体を血液と接触させ、血液中の赤血球を凝集さ
せることにより、上清と固形分とに分離される。この場
合、上清として、血清を得る場合には、従来法と同様に
血液にシリカなどの凝固促進剤を加えればよい。

【００１８】また、血漿を得る場合には、血液にヘパリ
ンやＥＤＴＡなどの適宜の抗凝固剤を加えた後、血液を
混和した後、抗赤血球抗体と接触させればよい。第１の
発明に係る血清または血漿採取方法では、好ましくは、
上記抗赤血球抗体は、不溶性担体に担持されている。不
溶性担体としては、特に限定されるわけではないが、抗
赤血球抗体を容易に担持させ得る有機高分子粉末が好適
に用いられる。

【００１９】上記有機高分子粉末としては、例えば、不
溶性アガロース、セルロース、不溶性デキストランなど
の天然高分子粉末；ポリスチレン、スチレン−スチレン
スルホン酸（塩）共重合体、スチレン−メタクリル酸共
重合体、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重
合体、塩化ビニル−アクリル酸エステル共重合体、酢酸
ビニル−アクリル酸エステル共重合体などの合成高分子
からなる粉末などを挙げることができる。特に、合成高
分子を均一に懸濁させたラテックスが好適に用いられ
る。

【００２０】上記不溶性担体は、通常の化学合成により
得ることができ、あるいは市販されているものを用いる
ことができる。また、不溶性担体を血液中で分散させる
ために、表面にスルホン酸基やカルボキシル基を導入し
た不溶性担体も用いることができる。

【００２１】なお、上記不溶性担体としてラテックスを
用いる場合、そのラテックスの粒径は０．１〜１００μ
ｍの範囲とすることが好ましい。第１の発明に係る血清
または血漿採取方法では、上記不溶性担体として、好ま
しくは正の電荷を有するものが用いられる。正の電荷を
有する不溶性担体としては、ｐＨ６〜８において正に荷
電する官能基を導入した有機高分子粉末からなる不溶性
担体が好適に用いられる。

【００２２】このような有機高分子粉末としては、前述
した種々の有機高分子粉末を適宜用いることができ、こ
の場合においても、有機合成高分子粉末を均一に懸濁さ
せたラテックスが好適に用いられる。

【００２３】また、正の電荷を有する不溶性担体の場合
には、表面の官能基が正の電荷を帯びておればよく、例
えばアミノ基やジエチルアミノ基などを有する不溶性担
体が好適に用いられる。

【００２４】本願の第２の発明に係る血清または血漿採
取方法では、血液に正の電荷を有する不溶性担体が接触
し、それによって赤血球の表面荷電が低下し、赤血球が
凝集する。この場合、正の電荷を有する不溶性担体とし
ては、上述した第１の発明において好ましく用いられる
正の電荷を有する不溶性担体を用いることができる。

【００２５】第２の発明に係る不溶性担体においても、
好ましくは有機高分子からなるラテックスが用いられ、
この場合ラテックスの粒径は０．１〜１００μｍ程度で
あることが望ましい。

【００２６】上記正の電荷を有する不溶性担体の投入量
については、不溶性担体の種類や動物種によっても異な
るが、重量比で、血液：正の電荷を有する不溶性担体＝
１：０．０１〜１：０．２程度とすることが望ましい。

【００２７】第２の発明では、正の電荷を有する不溶性
担体と、赤血球とが、電気的に引き合い、赤血球が不溶
性担体表面に速やかに凝集する。従って、遠心分離操作
を行わずとも、赤血球が速やかに凝集するため、血液を
上清と固形分とに分離することができる。この凝集時間
は、通常５〜１０分程度であり、非常に短い。

【００２８】第２の発明においても、血清を得る場合に
は、血液にシリカなどの凝固促進剤を加え、しかる後血
液を混和し、正の電荷を有する不溶性担体と接触させ
て、赤血球を凝集させるとよい。また、血漿を採取する
場合には、血液に予めヘパリンやＥＤＴＡなどの抗凝固
剤を加え、混和し、しかる後正の電荷を有する不溶性担
体に接触させて赤血球を凝集させればよい。

【００２９】なお、第１，第２の発明に係る血清または
血漿採取方法は、併用されてもよい。すなわち、抗赤血
球抗体と、正の電荷を有する不溶性担体の双方を血液中
に投入し、赤血球を凝集させてもよく、それによってよ
り一層速やかに血清または血漿と固形分とに分離するこ
とができる。

【００３０】第３の発明に係る血清もしくは血漿分離試
薬は、上記抗赤血球抗体を主成分とすることを特徴と
し、このような抗赤血球抗体としては、上述したものを
用いることができる。また、第３の発明に係る分離試薬
では、好ましくは、上述したように、抗赤血球抗体は不
溶性担体に担持された状態とされる。

【００３１】第３の発明に係る血清もしくは血漿分離試
薬を用いることにより、第１の発明に従って、遠心分離
操作を行うことなく、赤血球を速やかに凝集させること
ができ、血清または血漿を速やかに採取することができ
る。

【００３２】また、第４の発明に係る血清もしくは血漿
分離試薬は、正の電荷を有する不溶性担体を主成分と
し、このような正の電荷を有する不溶性担体としては、
第２の発明に係る血清または血漿採取方法において説明
したものを用いることができる。

【００３３】第４の発明に係る血清もしくは血漿分離試
薬は、上記正の電荷を有する不溶性担体を主成分とする
ので、第２の発明の場合と同様に、正の電荷を有する不
溶性担体により赤血球が速やかに凝集し、遠心分離操作
を行うことなく短時間で上清の血清または血漿を採取す
ることができる。

【００３４】第３，第４の発明に係る分離試薬は、それ
ぞれ、上記抗赤血球抗体や正の電荷を有する不溶性担体
を主成分として含むが、本発明の目的を阻害しない範囲
で、ポリエチレングリコール、プルラン、ポリビニルピ
ロリドンなどを含有していてもよい。

【００３５】

【実施例】以下、本発明の具体的な実施例を挙げること
により、本発明をより詳細に説明する。

【００３６】（実施例１）ＥＤＴＡ２Ｎａが１ｍｇ入れ
られているポリスチレン製の口径１２ｍｍ、長さ１１ｃ
ｍの採血管にヒトの血液１ｃｃを入れ、これに抗ヒト赤
血球ヤギ抗体５００μｇを入れ、１０分間放置した後、
上清と固形分とに完全に分離していることが確認された
ので、上清を分取することにより２００μＬの血漿を採
取することができた。

【００３７】（実施例２）ポリスチレン製の口径１２ｍ
ｍ、長さ１１ｃｍの採血管にヒトの血液１ｃｃを入れ、
これに正に荷電している官能基としてジエチルアミノエ
チル基を有する不溶性アガロース（ファルマシア社製、
商品名：ＤＥＡＥ−ｓｅｐｈａｃｅｌ）５００μｇを入
れ、１０分間放置した後、上清と固形分とに完全に分離
していることが確認されたので、上清を分取することに
より２００μＬの血漿を採取することができた。

【００３８】（実施例３）アミノ基を官能基にもつポリ
スチレン製ラテックスビーズ（粒径０．４μｍ、商品
名：アミノラテックスＮ−４００、積水化学工業社製）
を０．０５重量％濃度となるように、１００ｍＭリン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０）１ｍＬに試験管内で
分散させた。しかる後、抗ヒト赤血球ヤキ抗体１ｍｇを
添加し、３７℃で２時間攪拌し、ラテックスビーズと抗
ヒト赤血球ヤギ抗体を物理吸着させ、その後１００００
ｒｐｍで試験管を１５分間旋回させた後上清を取り除い
た。

【００３９】しかる後、１５０ｍＭリン酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ＝７．４）にポリエチレングリコール（平均
分子量１００００）を１．０重量％添加してなる溶液１
ｍＬに、上記上清を取り除いたポリスチレンラテックス
と抗ヒト赤血球ヤギ抗体が投入された抗赤血球抗体が担
持されたラテックス含有溶液を分散させ、凝集試薬とし
た。

【００４０】ポリスチレン製の口径１２ｍｍ、長さ１１
ｃｍの採血管にヒト血液を１ｃｃ入れ、次に上記凝集試
薬５００μＬを入れ、１０分間放置した。放置後、上清
と固形分とに分離していることが確認されたので、上清
を分取し、血漿のリン酸緩衝液稀釈液４００μＬを採取
することができた。

【００４１】（比較例１）ガラス製の口径１２ｍｍ及び
長さ１１ｃｍの採血管に、ヒト血液１ｃｃを入れ、凝固
させた。１時間放置した後、上清として２００μＬの血
清を採取することができた。

【００４２】（比較例２）ポリスチレン製の口径１２ｍ
ｍ及び長さ１１ｃｍの採血管にＥＤＴＡ２Ｎａを１ｍｇ
添加し、しかる後ヒト血液１ｃｃを入れ、放置した。１
時間後に、上清として２００μＬの血漿を採取すること
ができた。

【００４３】上記のように、比較例１，２では、血清あ
るいは血漿を採取するのに、採血管を１時間放置するこ
とが必要であった。これに対して、上述した実施例１〜
３によれば、本発明に従って抗赤血球抗体あるいは正の
電荷を有する不溶性担体が用いられているので、血清あ
るいは血漿の採取に必要な時間を大幅に短縮し得ること
がわかる。

【００４４】

【発明の効果】本願の第１の発明に係る血清または血漿
採取方法では、抗赤血球抗体を用いて血液中の赤血球が
凝集されるが、抗赤血球抗体と赤血球との反応が抗原抗
体反応であり、速やかに進むため、赤血球が短時間で凝
集する。従って、上清の血清または血漿を遠心分離操作
を行うことなく短時間で採取することができる。

【００４５】第１の発明において、抗赤血球抗体とし
て、不溶性担体に担持された抗赤血球抗体を用いた場合
には、不溶性担体を介することにより、凝集の生成速度
を上げることができ、より迅速化することができ、凝集
時間を３〜５割短くすることが可能であり、４〜６分で
反応を終了することができる。

【００４６】また、上記不溶性担体として、正の電荷を
有するものを用いた場合には、不溶性担体の正の電荷に
よっても赤血球の凝集速度が高められるので、より一層
短時間で血清または血漿を採取することができる。

【００４７】第２の発明に係る血清または血漿採取方法
では、正の電荷を有する不溶性担体を用いて赤血球が凝
集されるが、この不溶性担体の正の電荷により赤血球が
速やかに凝集する。従って、遠心分離操作を行わずと
も、短時間で上清と固形分とに分離することができ、上
清の血清または血漿を容易にかつ速やかに採取すること
ができる。

【００４８】第３の発明に係る抗赤血球抗体を主成分と
することを特徴とする血清もしくは血漿分離試薬を用い
れば、第１の発明に従って血液中の赤血球を速やかに凝
集させることができ、従って遠心分離操作を必要とする
ことなく血清もしくは血漿を得ることができる。

【００４９】第３の発明において、抗赤血球抗体が不溶
性担体に担持されている場合には、凝集をより速やかに
行うことができる。第４の発明に係る血清もしくは血漿
分離試薬を用いれば、正の電荷を有する不溶性担体を主
成分とするので、正の電荷により赤血球が速やかに凝集
され、従って第２の発明と同様に、遠心分離操作を行わ
ずとも、血清もしくは血漿を速やかに採取することがで
きる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 2G045 AA01 BA10 BB09 BB34 BB51 BB60 CA02 CA26 FB03 FB15 HB05 HB06 4C038 UA06 UB10

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 抗赤血球抗体を用いて血液中の赤血球を
   凝集させ、次に上清の血清または血漿を採取することを
   特徴とする血清または血漿採取方法。
2. 【請求項２】 前記抗赤血球抗体として、不溶性担体に
   担持された抗赤血球抗体を用いることを特徴とする請求
   項１に記載の血清または血漿採取方法。
3. 【請求項３】 前記不溶性担体として、正の電荷を有す
   るものを用いることを特徴とする請求項１または２に記
   載の血清または血漿採取方法。
4. 【請求項４】 正の電荷を有する不溶性担体を用いて赤
   血球を凝集させ、次に上清の血清または血漿を採取する
   ことを特徴とする血清または血漿採取方法。
5. 【請求項５】 抗赤血球抗体を主成分とすることを特徴
   とする血清もしくは血漿分離試薬。
6. 【請求項６】 前記抗赤血球抗体が不溶性担体に担持さ
   れている請求項５に記載の血清もしくは血漿分離試薬。
7. 【請求項７】 正の電荷を有する不溶性担体を主成分と
   することを特徴とする血清もしくは血漿分離試薬。