JP2000514311A

JP2000514311A - セルラーゼ変異体

Info

Publication number: JP2000514311A
Application number: JP10514200A
Authority: JP
Inventors: ビルボールアンデルセン，キム; シューレイン，マルティン; クリスチャンセン，ラルス; ダムガールト，ボー; デルオステン，クラウスフォン
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1996-09-17
Filing date: 1997-09-17
Publication date: 2000-10-31
Anticipated expiration: 2017-09-17
Also published as: CN100362100C; US20030092097A1; ATE324437T1; JP3532576B2; EP0937138B1; US20050009166A1; JP2004065255A; CN101085985B; CA2265914C; US20080206836A1; CA2265914A1; EP1726644A1; CN101085985A; BR9711479B1; US20090170747A1; DE69735767T2; US20110250674A1; US20120289450A1; AU4200797A; CN1230987A

Abstract

(57)【要約】アミノ酸置換、欠失又は挿入によりセルロース分解酵素の特性を改良するための方法であって、ａ）プロテイン・データ・バンク・エントリー4ENGから知られるヒュミコラ・インソレンスからのエンドグルカナーゼＶ(EGV)に似た３次元構造を有することが知られている少くとも２のアミノ酸配列の多重アラインメントを構築するステップと；ｂ）前記EGVの構造に基づきセルロース分解酵素の相同性で構築した３次元構造を構築するステップと；ｃ）５Å以内の基質結合クレフトからの距離内に存在するアミノ酸残基位置を同定するステップと；ｄ）前記酵素の表面が露出したアミノ酸残基を同定するステップと；ｅ）前記酵素の全ての荷電した又は潜在的に荷電したアミノ酸残基位置を同定するステップと；ｆ）アミノ酸残基を置換し、欠失させ、又は挿入を行う１又は複数の位置を選択するステップと；ｇ）慣用的なタンパク質工学技術を用いることにより、置換、欠失又は挿入を行うステップと；を含む方法；並びに該方法により得られるセルラーゼ変異体。

Description

【発明の詳細な説明】セルラーゼ変異体本発明は、置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼ、即ちエンド−β− １，４−グルカナーゼから得られたセルラーゼ変異体、即ちエンド−β−１，４ −グルカナーゼ変異体に関する。ここで、該変異体は、位置５においてアラニン残基（Ａ）、セリン残基（Ｓ）、又はトレオニン残基（Ｔ）を保持し；位置８においてフェニルアラニン残基（Ｆ）、又はチロシン残基（Ｙ）を保持し；位置９においてフェニルアラニン残基（Ｆ）、トリプトファン残基（Ｗ）、又はチロシン残基（Ｙ）を保持し；位置10においてアスパラギン酸残基（Ｄ）を保持し；並びに位置121においてアスパラギン酸残基（Ｄ）を保持する触媒コアドメインを有する。背景技術セルラーゼ又はセルロース分解酵素はセルロースの加水分解に関連する。ネイティブセルロースの加水分解において、関連する３つの主要な型のセルラーゼ酵素、即ちセロビオヒドロラーゼ(１，４−β−Ｄ−グルカンセロビオヒドロラーゼ、EC 3.2.1.91)、エンド−β−１，４−グルカナーゼ（エンド−１，４−β− Ｄ−グルカン４−グルカノヒドロラーゼ、EC 3.2.1.4）及びβ−グルコシダーゼ（EC 3.2.1.21）が存在することが知られている。特に、エンド−β−１，４−グルカナーゼ(EC No.3.2.1.4)は、言及される工業的使用のためのヒドロラーゼの関心ある群を構成する。エンドグルカナーゼは、セルロース、セルロース誘導体（例えばカルボキシメチルセルロース及びヒドロキシエチルセルロース）、リケニン、穀類のβ−Ｄ−グルカン又はキシログルカンのようなβ−１，３グルカン混合物中のβ−１，４結合、及びセルロース部分を含む他の植物材料の内部加水分解を触媒する。許可されている名前はエンド−１，４−β−Ｄ−グルカン４−グルカノヒドロラーゼであるが、略した用語でエンドグルカナーゼと本明細書に用いる。T.-M.Enveri，“Microbial Cellulases”(W.M.Fogarty，Microbi al Enzymes and Biotechnology，Applied Science Publishers，p.183-224(1983 ));Methods in Enzymology，（1988）Vol.160，p.20 “Molecular Biology of Cellulose Degradation”，Annu.Rev.Micro .，“The biological degradation of cellulose”，FEMS Microbiology Review s 13（1994）p.25-58;Henrissat，B.，“Cellulases and their interaction wi th cellulose”，Cellulose (1994)，Vol.1，pp.169-196を参照のこと。セルラーゼは、真菌、放線菌、粘液細菌及び真性細菌を含む多数の微生物により、並びに植物によっても合成される。特に、広範囲の種のエンドグルカナーゼが同定されている。セルロース分解酵素の極めて重要な工業的使用は、例えば界面活性組成物又は布帛軟化組成物中の成分としての、セルロースの編物又は布帛の処理のため、新しい布帛をバイオポリッシングする（衣類の仕上げをする）ため、及びセルロース含有布帛、特にデニムの“ストーンウォッシュ”の外観を得るための使用であり、これらの処理のためのいくつかの方法は、例えばGB-A-1 368599，EP-A-0 30 7 564及びEP-A-0 435 876，WO 91／17243，WO 91／10732，WO 91／17244，PCT／ DK951／000108及びPCT／DK95／00132において示唆される。セルロース分解酵素の他の重要な工業的使用は、例えば排水を改善するため又は再生紙のインキを抜くための、製紙用パルプの処理のための使用である。セルラーゼは、セルロース結合ドメイン(CBD)を有しても有していなくてもよいことも知られている。CBDは、酵素のセルロース含有繊維への結合を増強し、その酵素の触媒活性部分の効率を増加させる。真菌及び細菌は、配列の類似性（疎水性クラスター分析）に基づいてグリコシルヒドロラーゼの異なるファミリーに分類することができる特定範囲のセルロース分解酵素（セルラーゼ）を作り出す（Henrissat B & Bairoch A;Biochem.J．1 993，293，781-788）。現在、グリコシルヒドロラーゼのファミリー５，６，７，８，９，10，12，26，44，45，48，60、及び61に属するセルラーゼが知られている。工業的に十分に機能するエンド−β−１，４−グルカナーゼは、例えばWO 91 ／17243，WO 91／17244及びWO 91／10732に記載されており、特定のセルラーゼ変異体はWO 94／07998に記載される。本発明の目的は、セルロース分解酵素の新規変異体であって、親酵素と比べた時に改良された能力を示す変異体を供することである。発明の概要工業生産に役立つセルロース分解酵素、即ちエンド−１，４−グルカナーゼにおいて、酵素の特性に、及びそれによりこれらのプロテアーゼにおける能力に重要であるいくつかのアミノ酸残基の位置が同定された。従って、第１の態様において、本発明は、アミノ酸置換、欠失又は挿入によりセルロース分解酵素の特性を改善するための方法であって、ａ．プロテイン・データ・バンク登録4ENGから知られるヒュミコラ・インソレンス（Humicola insolens）からのエンドグルカナーゼＶ(EGV)に類似する３次元構造を有することが知られている少くとも２のアミノ酸配列の多重アラインメントを構築し；ｂ． EGVの構造に基づくセルロース分解酵素の相同性で構築した３次元構造を作製し；ｃ．５Å以下の基質結合クレフトから所定距離にあるアミノ酸残基の位置を同定し；ｄ．前記酵素の表面に露出したアミノ酸残基を同定し；ｅ．前記酵素の全ての荷電した又は潜在的に荷電したアミノ酸残基の位置を同定し；ｆ．アミノ酸残基の置換、欠失又は挿入を行う１又は複数の位置を選択し；ｇ．慣用的なタンパク質工学技術を用いることにより置換、欠失又は挿入を行うことを含む方法を提供する。本発明の方法を用いることにより、それ自体周知であるタンパク質工学法により、要求される特性を、1つのセルラーゼから他のセルラーゼに変えることが有効に可能になる。より詳しくは、本発明は、変化した（増加又は減少した）触媒活性；及び／又は陰イオン性界面活性剤に対する変化したセンシティビテー；及び／又は変化したpH至適性及びpHプロフィール活性様式及び安定性様式に関して改良されたセルラーゼ変異体を供する。従って、更なる態様において、本発明は、置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られた触媒コアドメインを有するセルラーゼ変異体であって、位置５においてアラニン残基（Ａ）、セリン残基（Ｓ）、又はトレオニン残基（Ｔ）を保持し；位置８においてフェニルアラニン残基（Ｆ）、又はチロシン残基（Ｙ）を保持し；位置９においてフェニルアラニン残基（Ｆ）、トリプトファン残基（Ｗ）、又はチロシン残基（Ｙ）を保持し；位置10においてアスパラギン酸残基（Ｄ）を保持し；及び位置121においてアスパラギン酸残基（Ｄ）を保持する（セルラーゼのナンバリング）セルラーゼ変異体を供する。発明の詳細な開示セルラーゼ変異体本発明は、置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られた新規セルラーゼ変異体を供する。本発明のセルラーゼ変異体は、天然に見い出されないアミノ酸配列を有する、セルラーゼ変異体又は突然変異させたセルラーゼである。本発明のセルラーゼ変異体は、特に増加した触媒活性；及び／又は変化した陰イオン界面活性剤に対するセンシティビティー；及び／又は変化したpH至適性；及び／又は変化した熱安定性に関して改良された能力を示す。形式的には、本発明のセルラーゼ変異体又は突然変異させたセルラーゼは、親セルラーゼ（即ちネイティブ又は野生型酵素）の機能的誘導体と考えることができ、親酵素をコードする、親遺伝子のDNAヌクレオチド配列又はその誘導体を変化させることにより得ることができる。本セルラーゼ変異体又は突然変異させたセルラーゼは、該セルラーゼ変異体をコードするDNAヌクレオチド配列を適切な宿主生物内の適切な、ベクターに挿入した時に発現させ、作り出すことができる。宿主生物は親遺伝子を得た生物と必ずしも同一である必要はない。本明細書において、酵素変異体は、変異体、突然変異体又はムテインとも呼ばれる。アミノ酸本発明の文脈において、アミノ酸及びアミノ酸残基についての以下の記号及び略語を用いる：Ａ＝Ala＝アラニンＣ＝Cys＝システインＤ＝Asp＝アスパラギン酸Ｅ＝Glu＝グルタミン酸Ｆ＝Phe＝フェニルアラニンＧ＝Gly＝グリシンＨ＝His＝ヒスチジンＩ＝Ile＝イソロイシンＫ＝Lys＝リシンＬ＝Leu＝ロイシンＭ＝Met＝メチオニンＮ＝Asn＝アスパラギンＰ＝Pro＝プロリンＱ＝Gln＝グルタミンＲ＝Arg＝アルギニンＳ＝Ser＝セリンＴ＝Thr＝トレオニンＶ＝Val＝バリンＷ＝Trp＝トリプトファンＹ＝Tyr＝チロシンＢ＝Asx＝Asp又はAsn Ｚ＝Glx＝Glu又はGln Ｘ＝Xaa＝いずれかのアミノ酸＊＝欠失又は欠損したアミノ酸セルラーゼのナンバリング本発明の文脈において、セルロース分解酵素中のアミノ酸残基の位置の特定のナンバリングを用いる。以下の表１に示すように、周知のセルラーゼのアミノ酸配列をアラインすることにより、そのアミノ酸配列が周知であるなら、アミノ酸位置番号を、いずれかのセルロース分解酵素中のいずれかのアミノ酸残基に明白に割り当てることが可能である。以下の表１において、異なる微生物源のセルラーゼの11の選択されたアミノ酸配列をアラインする。これらは、（ａ）ヒュミコラ・インソレンス（Humicola i nsolens ）；（ｂ）アクレモニウム種（Acremonium sp.）；（ｃ）ボルテルラ・コルレクトトリコイデス（Volutella collectotrichoides）；（ｄ）ソルダリア・フィミコラ（Sordaria fimicola）；（ｅ）チエラビア・テルレストリス（Thi elavia terrestris ）；（ｆ）フサリウム・オキシスポルム（Fusarium oxysporu m ）；（ｇ）マイセリオフトラ・サーモフィラ（Myceliophthora thermophila）；（ｈ）クリニペルリス・スカベルラ（Crinipellis scabella）；（ｉ）マクロホミナ・ファセオリナ（Macrophomina phaseolina）；（ｊ）シュードモナス・フルオレセンス（Pseudomonas fluorescens）；（ｋ）ウスチラゴ・マイジス（U stilago maydis ）である。セルラーゼ（ａ−ｉ）はWO 96／29397に記載され、（ｊ）はGeneBankに認証番号G45498で示され、そして（ｋ）はGeneBankに認証番号 S81598で、及びBiol.Chem.Hoppe-S eyler 1995，376（10）617-625において示される。例えばいくつかの他のセルラーゼのアミノ酸配列とアラインされた配列が表１の第１コラムに示されるWO 91／17243に開示されるヒュミコラ・インソレンスDS M 1800の株から得られたセルラーゼ（エンド−β−１，４−グルカナーゼ）のアミノ酸配列からのナンバリングシステムを用いて、セルロース分解酵素中のアミノ酸残基の位置を明確に示すことが可能である。本発明により作られ又は考慮される種々のセルラーゼ変異体を記述するに際して、参照を容易にするため以下の命名法を適用する：〔もとのアミノ酸；位置；置換したアミノ酸〕従って、位置119におけるグルタミンのヒスチジンでの置換はQ119Hと示される。ヒュミコラ・インソレンスからのセルラーゼのアミノ酸配列に関して挿入を示すアミノ酸は、先行するセルラーゼ番号に、アルファベット順で文字を付加することによりナンバリングされる。例えば、位置*21aVは、表１を比べて、ヒュミコラ・インソレンスからのセルラーゼのアミノ酸配列の位置21のリシンと位置22 のアラニンとの間の、アミノ酸残基が存在しない場所に“挿入された”バリン（Ｖ）を示す。ヒュミコラ・インソレンスからのセルラーゼのアミノ酸配列の位置49におけるプロリン（Ｐ）の欠失はP49*として示す。多重の変異はスラッシュ記号（“／”）により分ける。例えば、Q119H／Q146R は、位置119及び146における、各々グルタミンＱをヒスチジン（Ｈ）で、グルタミン（Ｑ）をアルギニン（Ｒ）で置換する変異を示す。置換を、例えばヒュミコラ・インソレンスの株から得られたセルラーゼにおける変異により行うなら、その産物は、例えば“ヒュミコラ・インソレンス／*49P”で示す。セルラーゼナンバリングにより本願において言及される全ての位置は、上述のセルラーゼ番号をいい、例えば表１（ａ）のヒュミコラ・インソレンス由来のセルラーゼのアミノ酸配列に対して決定する。表１アミノ酸配列アラインメント；異なる微生物源の選択されたセルラーゼのセルラーゼナンバリング（ａ）ヒュミコラ・インソレンス（Humicola insolens）；（ｂ）アクレモニウム種（Acremonium sp.）；（ｃ）ボルテルラ・コルレクトトリコイデス（Volu tella collectotrichoides ）；（ｄ）ソルダリア・フィミコラ（Sordaria fimic ola ）；（ｅ）チエラビア・テルレストリス（Thielavia terrestris）；（ｆ）フサリウム・オキシスポルム（Fusarium oxysporum）；（ｇ）マイセリオフトラ・サーモフィラ（Myceliophthora thermophila）；（ｈ）クリニペルリス・スカベルラ（Crillipellis scabella）；（ｉ）マクロホミナ・ファセオリナ（Macro phomina phaseolina ）；（ｊ）シュードモナス・フルオレセンス（Pseudomonas fluorescens ）；（ｋ）ウスチラゴ・マイジス（Ustilago maydis）。＊この位置においてアミノ酸残基が欠失本発明の酵素（エンド−β−１，４−グルカナーゼ）変異体本発明は、セルラーゼ変異体に関する。より詳しくは、本発明は、置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる触媒コアドメインを有するセルラーゼ変異体であって、 −位置５においてアラニン残基（Ａ）、セリン残基（Ｓ）、又はトレオニン残基（Ｔ）を保持し； −位置８においてフェニルアラニン残基（Ｆ）、又はチロシン残基（Ｙ）を保持し； −位置９においてフェニルアラニン残基（Ｆ）、トリプトファン残基（Ｗ）、又はチロシン残基（Ｙ）を保持し； −位置10においてアスパラギン酸残基（Ｄ）を保持し；そして −位置121においてアスパラギン酸残基（Ｄ）を保持する（セルラーゼナンバリング）セルラーゼ変異体を供する。本発明のエンドグルカナーゼは、その酵素の一体化した一部分として存在するセルロース結合ドメイン(CBD)を含んでいても、又は他の源からのCBDをエンドグルカナーゼに導入して、これにより酵素ハイブリッドを作ってもよい。本文脈において、用語“セルロース結合ドメイン”は、Peter Tommeら“Cellulose-Bindi ng Domains:Classification and Properties”（“Enzymatic Degradation of Insoluble Carbohydrates”，John N.Saddler and Michael H.Penner(Eds.)，AC S Symposium Series，No.618，1996）により定義されるように理解されることを意図する。この定義は、120超のセルロース結合ドメインを10のファミリー（Ｉ −Ｘ）に分類し、CBDが種々の酵素、例えばセルラーゼ類、キシラナーゼ類、マンナナーゼ類、アラビノフラノシダーゼ類、アセチルエステラーゼ類及びキチナーゼ類において見い出されることを示す。CBDは、藻類、例えば紅藻ポルフィラ・プルプレア（Porphyra purpurea）においても非加水分解性ポリサッカライド結合タンパク質として見い出されている（Tommeら、前掲を参照のこと）。しかしながら、CBDのほとんどはセルラーゼ及びキシラナーゼからのものであり、CBD はタンパク質のＮ末端及びＣ末端に、又は内部に見い出される。酵素ハイブリッドは当該技術で周知であり（例えばWO 90／00609及びWO 95／16782を参照のこと）、エンドグルカナーゼをコードするDNA配列に、リンカーと共に又はリンカーなしで、連結されたセルロース結合ドメインをコードするDNAの少くとも１のフラグメントを含むDNA構成物を宿主細胞に形質転換し、そして該宿主細胞を増殖させてその融合した遺伝子を発現させることにより調製することができる。酵素ハイブリッドは、次式： CBD−MR−Ｘ又はＸ−MR−CBD （式中、CBDは、少くともセルロース結合ドメインに対応するアミノ酸配列のＮ末端又はＣ末端領域であり；MRは、中央領域（リンカー）であり、そして結合、もしくは短いリンキング基、好ましくは約２〜約100炭素原子、より好ましくは２〜40炭素原子のものであり；又は好ましくは約２〜約100アミノ酸、より好ましくは２〜40アミノ酸のものであり；並びにＸは、本発明による酵素のＮ末端又はＣ末端領域である）により記述することができる。本発明の方法他の態様において、本発明は、アミノ酸置換、欠失又は挿入によりセルロース分解酵素の特性を改善するための方法であって、ａ．プロテイン・データ・バンク登録4ENGから知られるヒュミコラ・インソレンス（Humicola insolens）からのエンドグルカナーゼＶ(EGV)に類似する３次元構造を有することが知られている少くとも２のアミノ酸配列の多重アラインメントを構築し；ｂ． EGVの構造に基づくセルロース分解酵素の相同性で構築した３次元構造を作製し；ｃ．５Å以下の基質結合クレフトから所定距離にあるアミノ酸残基の位置を同定し；ｄ．前記酵素の表面に露出したアミノ酸残基を同定し；ｅ．前記酵素の全ての荷電した又は潜在的に荷電したアミノ酸残基の位置を同定し；ｆ．アミノ酸残基の置換、欠失又は挿入を行う1又は複数の位置を選択し；ｇ．慣用的なタンパク質工学技術を用いることにより置換、欠失又は挿入を行うことを含む方法に関する。本方法のステップｆは、好ましくは、ステップａのアラインメントの結果として、そのアラインされた配列の大部分において；より好ましくはアラインされた配列の少くとも63％において同じアミノ酸残基を有する位置；更により好ましくは、アラインされた配列において、例えば以下の異なるアミノ酸残基を有する位置を選択することにより行われる。好ましい実施形態において、セルラーゼの比活性は、好ましくは、５Å以下、より好ましくは３Å以下、更により好ましくは2.5Å以下の基質結合クレフトからの距離内に存在するアミノ酸の位置において置換、欠失又は挿入を行うことにより改良することができる。2.5Λ以下の距離内に存在する残基は基質と直接、接触することができると信じられる。他の好ましい実施形態において、セルラーゼのpH活性プロフィール、pH活性至適性、pH安定性プロフィール、又はpH安定性至適性は、好ましくは５Å以下、より好ましくは３Å以下、更により好ましくは2.5Å以下の基質結合クレフトからの距離にあるアミノ酸残基の位置において；又は局所的に又は全体的に静電環境を変えるように酵素の表面に露出したアミノ酸残基の位置において、置換、欠失又は挿入を行うことにより変えることができる。荷電した又は潜在的に荷電した残基に関する置換を行うことが好ましく、ここでこの残基はもとの残基か又は置換残基である。本文脈において、荷電した又は潜在的に荷電した残基は、Arg，L ys，His，Cys(ジスルフィド架橋の一部でないなら)，Tyr，Glu，Aspを含むことを意味する。更に他の好ましい実施形態において、陰イオン性界面活性剤又は陰イオン性界面活性成分の存在下でのセルラーゼの安定性は、好ましくは、酵素の表面に露出したアミノ酸残基の位置において置換、欠失又は挿入を行い、それにより局所的に又は全体的に静電環境を変えることにより変えることができる。荷電した又は潜在的に荷電した残基に関する置換を行うことが好ましい。ここで、この残基はもとの残基又は置換残基である。本文脈において、荷電した又は潜在的に荷電した残基は、Arg，Lys，His，Cys(ジスルフィド架橋の部分でないなら)，Tyr，Glu ，Aspを含むことを意味する。より負電荷のaa残基に対する変異は陰イオン性界面活性剤の存在下でセルラーゼの安定性を改善するが、より正電荷のaa残基に対する変異は陰イオン性界面活性剤に対するセルラーゼの安定性を減少させる。更に、本明細書に開示される２又はそれ超のアミノ酸置換、欠失又は挿入のいずれかの組合せを含むセルラーゼ変異体、例えば例示される変異体も本発明の範囲内である。セルラーゼの多重配列アラインメント多重配列アラインメントは、Wisconsin Sequence Analysis Package version 8.1-UNIX（GCG，Genetics Computer Group，Inc.）に含まれるPileupアルゴリズムを用いて行われる。用いる方法は、Higgens and Sharp(CARBIOS 1989，5，151 -153)により記載される方法に似ている。3.0のギャップクリエーションペナルティー及び0.1のギャップエンステンションペナルティーを、各々の値をその行及び列の合計で割り、そして0の平均及び1.0の標準偏差に標準化することにより再スケール化した、Nucl.Acids Res ．1986 14（16）6745-6763(Dayhoff table(Sch wartz，R.M．and Daynoff，M.O．);Atlas of Protein Sequence and Structure( Dayhoff，M.O．Ed.);National Biomedical Research Foundation，Washington D .C．1979 353-358)に記載されるような点数化マトリックスと一緒に用いる。FY( Phe-Tyr)の値はRW＝1.425である。完全な適合は1.5に設定し、完全な適合より優れたいずれの行での適合もない)。セルラーゼの対式(pair-wise)配列アラインメント Wisconsin Sequence Analysis Package（GCG）内のGAPルーチンに含まれるNee dleman & Wunsch（J.Mol.Biol ．1970，48，443-453）により記載されるアルゴリズムを用いて対式配列アラインメントを行う。GAPルーチンに用いたパラメータは、先のPileupルーチンと同じである。強制対形成（Forced Pairing）でのセルラーゼの対式配列アラインメント残基の強制対形成での対式配列アラインメントを、Wisconsin Sequence Analy sis Package（GCG）内のGAPルーチンに含まれるNeedleman & Wunch(J.Mol.Biol ． 1970，48，443-453)により記載されるアルゴリズムを用いて行う。GAPルーチンに用いたプラメータは、先のPileupルーチンと同じであるが、点数化マトリックスを、対を形成する残基を記号化するＸと呼ぶ残基を組み込むように改良する。Ｘと対を形成したＸについてのダイアゴナル値を9.0に設定し、全てのＸに関するオフ・ダイアゴナル値を０に設定する。ヒュミコラ・インソレンスエンドグルカナーゼ及びセルロヘプタオースの間の複合体セルロヘプタオースとの複合体中のヒュミコラ・インソレンスEGVエンドグルカナーゼ不活性変異体（DION）のコアドメインのＸ線構造に基づいて、セルロヘプタオースとの複合体中のネイティブヒュミコラ・インソレンスEGVエンドグルカナーゼコアドメインの構造のモデルを、以下のステップを用いて構築する：１．Insight II 95.0(Insight II 95.0 User Guide，October 1995．San Dieg o:Biosym／MSI，1995)を用いて、Ｎ10をアスパラギン酸で置換する。２．全ての分子をコピーすることによりサブ部位−３を占有する糖単位のコピーを作り、余分な原子を削除する。占有されていない−１結合部位をベスト・フィットするように新しい糖単位を手動で動かす。その新しい糖単位を２つの存在するセルロトリオース単位に結合させるための結合を形成する。３．オーバラップする結晶の水分子を削除する。これらをSubset Interface B y＿Atom 2.5コマンドを用いることにより同定する。４． 8.0のpHで水素を構築し、荷電した末端を適用する。５． Residue Replace〈D121 residue name〉ASP Lコマンドを用いてD121をプロトン化する。６．コマンドPotentials FixによりCVFFフォースフィールドテンプレートを適用する。７．その新しい糖単位を除く全ての原子を固定する。８．全て分子メカニックスプログラムDiscover 95.0／3.0.1(Discover 95.0／ 3.0.0 User Guide，October 1995．San Diego:Biosym／MSI，1995)を用いて、単純エネルギー最少化300サイクル、次に１fs単純分子ダイナミクス5000ステップ、最後に単純エネルギー最少化300サイクルを用いて新しい糖単位の原子位置を弛緩させる。セルラーゼの相同性構築ヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼの周知のＸ線構造に基づく周知のアミノ酸配列のセルラーゼの構造モデルの作製は、以下のステップからなる：１．モデル化すべき構造のコア領域の適切な範囲（extend）及び多くの周知の工業的に利用できるセルラーゼ配列間の多重配列アラインメントに基づくシステインのアラインメントを規定する。２．新しい配列と周知のＸ線構造の配列との間の対式配列アラインメント３．配列アラインメントに基づく構造的に保存されている領域(SCR)を規定する。４． SCR内のモデル構造についての配置を指定する。５．ループ構造データベース内のサーチによりSCR間のループ又は可変領域（V R）についての構造を見つけ出す。６．そのデータベースサーチの結果からモデル構造中のVRについての配置を指定する。７．ジスルフィド結合を形成し、プロトン化状態を設定する。８．分子メカニクスを用いて構築した構造を精密化する。ヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼの周知のＸ線構造は、以下において、標準構造と呼ぶ。モデル化すべき構造はモデル構造と呼ぶ。 Ad１：酵素のコア部分の適切な範囲を、多くの周知のセルラーゼ配列を含む多重配列アラインメントにより決定する。標準構造は酵素のコア部分についての原子位置のみを含むので、標準構造のコア部分とアラインしたモデル化すべき配列中の残基のみがモデル構築に含まれ得る。このアラインメントは、システインのアラインメントも決定する。多重配列アラインメントは、上述のPileupアルゴリズムを用いて行われる。 Ad２：対式配列アラインメントを上述の通り行う。保存されているジスルフィド架橋及び／又は活性部位残基(D10及びD121）中のシステインをアラインしないなら、保存されているジスルフィド架橋及び／又は活性部位残基中のシステインの強制対形成を用いる対式配列アラインメントを上述の通り行う。その配列アラインメントの主要な目的は、モデル構造形成のために用いるSCR(後述)を規定することである。 Ad３：その配列アラインメントに基づき、構造的に保存された領域(SCR)を、挿入又は欠失のないオーバーラップする配列の連続領域として規定する。 Ad４：コンピュータープログラムHomology 95.0(Homology User Guide，Octob er 1995．San Diego:Biosym／MSI，1995)を用いて、モデル構造中の原子配置を、コマンドAssign Coords Sequencesを用いて標準構造の原子配置から作り出すことができる。 Ad５：コンピュータープログラムHomology 95.0を用いて、可変領域（VR）と呼ぶ残りの領域についての可能なコンホメーションを、Homology 9 5.0に含まれるループ構造データベースにおけるサーチによって見つけ出す。この手順を各々のVRについて行う。 Ad６：VRの長さが６残基より少いなら、データベースサーチの結果における最初のループ構造を配置形成のために選択する。より長いループが形成される場合、きびしい原子のオーバーラップを有さないリストの中の最初の解を選択する。原子のオーバーラップの程度を、コンピュータープログラムInsight II 95.0(In sight II 95.0 User Guide October 1995．San Diego:Biosym／MSI，1995)におけるBump Monitor Add Intraコマンドを用いて分析することができ、Bumpコマンドの0.25のパラメータは、激しいオーバーラップを示すであろう。挿入されたループ領域とタンパク質の残りの部分との間に10を超える衝突が存在するなら、次の解をテストする。これらのパラメータで解が見い出せないなら、最も少ない衝突の解を選択する。VR領域の配置を、プログラム95.0内のコマンドAssign Coords Loopsを用いて形成する。 Ad７：ジスルフィド結合を、Insight II 95.0のバイオポリマーモジュール内のBond Createコマンドを用いて作り、プロトン化状態を、Hydrogensコマンドを用いて荷電したキャップでpH 8.0に適合するよう設定する。最後に、活性プロトン供与体（標準構造内のD121に等価な残基）を、残基置換＜121残基名＞ASP Lコマンドを用いてプロトン化する。モデルのデータを仕上げるために、適切なフォースフィールドテンプレートを、コマンドPotentials FixによりCVFFフォースフィールドを用いて適用する。 Ad８：最後に、モデル化した構造を、分子メカニクスプログラムDiscover 95. 0／3.0.1(Discover 95.0／3.0.0 User Guide，Octo ber 1995．San Diego:Biosym／MSI，1995)を用いる500サイクルエネルギー最小化にかける。上述の手順からの出力は、ヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼに対する配列相同性に基づく新しいセルラーゼのコアドメインについての構造モデルを記述する原子配置である。セルラーゼ構造の重ねあわせ２つのセルラーゼ構造を重ねるため、それら構造の重ねあわせを、Homology 9 5.0(Homology User Guide，October 1995．San Diego:Biosym／MSI，1995)のStr ucture Alignmentコマンドを用いて行う。そのコマンドのための全てのパラメータをデフオルト値として選択する。基質から３Å及び５Å内の残基の決定基質から特定の距離以内のアミノ酸残基を決定するために、所定のセルラーゼ構造を、上述のヒュミコラ・インソレンスEGVエンドグルカナーゼとセルロヘプタオースとの間の複合体のモデル構造のセルラーゼ部分に重ねあわせる。次に、基質の特定距離以内の残基を、Insight II 95.0(Insight II 95.0 UserGuide，O ctober 1995．San Diego:Biosym／MSI，1995)を用いて見つけ出す。特定された距離はそのプログラムにパラメータとして供される。この決定の結果を以下の表２及び３に示す。表面アクセスビリティーの決定溶媒アクセスビリティーを決定するために、Homology 95.0(Homology User Gu ide，October 1995;San Diego:Biosym／MSI，1995)のAccess＿Surfコマンドを用いた。そのプログラムは、Lee及びRichards(Lee，B．& Richards，F.M．“The i nterpretation of prote in structures:Estimation of static accessibility ”，J.Mol.Biol ．1971，55，379-400)により提唱される定義を用いる。1.4Å の溶媒プローブ半径を用い、重原子（即ち非水素原子）のみを計算に含めた。０アクセスビリティーの残基は埋もれているとして定義し、全ての他の残基を溶媒に露出した及び酵素構造の表面上として規定した。セルラーゼ間の比活性の転移レベル２つのセルラーゼの間の触媒活性のレベルを移すために、以下のプロトコルを上述の方法を用いて適用する。この方法は、比活性の差の原因であるアミノ酸残基を正確に指摘するであろう。そして１又は複数のこれらのアミノ酸残基は、比較セルラーゼから比活性のレベルを移すために１つの配列内で置換されなければならない：１）（トリコデルマ・レエセイ（Trichoderma reesei）セルラーゼを除く）全ての周知の工業的に役立つセルラーゼの多重配列アラインメントを行う。これから、２つの関連する配列の中の保存されたジスルフィド架橋を同定し、そしてヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼの配列を同定し、活性部位残基(D10及びD 121)を配置する；２）ヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼコアドメイン(残基１−201)で、各々の配列の対式配列アラインメントを行う。保存されているジスルフィド架橋中のシステインが同じ位置にアラインされないなら及び／又は２つの活性部位残基(D10及びD121）が同じ位置にアラインされないなら、強制対形成法でのセルラーゼの対式配列アラインメントを用いる。ヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼのコアドメイン(残基１〜201)とオーバーラップする配列内の残基のみを含める；３）各々の配列の相同性で構築した構造を作り出す；４）相同性構築構造の各々内の基質から３Å以内の残基の決定。これらの位置における配列間の差は、大部分、おそらく、比活性の差の原因となる残基であろう。挿入物内の残基が上述の距離内の配列のいずれかにおいて見い出される場合、その完全な挿入物は、比活性の差の原因であり得、そして完全な挿入物は、その挿入物のない配列に移されなければならず、又はその完全な挿入物はその挿入物を有する配列内で削除されなければならない；５）基質の３Å以内の残基の置換により全ての比活性が保存されないなら、相同性構築構造の各々の中の基質から５Å以内の残基の決定は、残りの比活性の差の原因である最も可能性のある残基を示すであろう。挿入物内の残基が上述の距離以内の配列のいずれかにおいて見い出される場合、完全な挿入物は比活性の差の原因であり得、そしてその完全な挿入物は、その挿入物のない配列に移されなければならず、又はその完全な挿入物に挿入物のある配列内で削除されなければならない。セルラーゼ間の陰イオン性界面活性剤に対する安定性のレベルの転移２つのセルラーゼ間で陰イオン性界面活性剤に対する安定性のレベルを移すために、上述の方法を用いて以下のプロトコルを適用する。この方法は、陰イオン性界面活性剤に対する安定性のレベルの差の原因となるアミノ酸残基を正確に指摘するであろう。そして１又は複数のこれらのアミノ酸残基は、比較セルラーゼから比活性のレベルを移すために１つの配列内で置換されなければならない：１）（トリコデルマ・レエセイ（Trichoderma reesei）セルラーゼを除く）全ての周知の工業的に役立つセルラーゼの多重配列アラインメントを行う。これから、２つの関連する配列の中の保存されたジスルフィド架橋を同定し、そしてヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼの配列を同定し、活性部位残基(D10及び1 21)を配置する；２）ヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼコアドメイン(残基１−201)で、各々の配列の対式配列アラインメントを行う。保存されているジスルフィド架橋中のシステインが同じ位置にアラインされないなら及び／又は２つの活性部位残基(D10及びd121)が同じ位置にアラインされないなら、強制対形成法でのセルラーゼの対式配列アラインメントを用いる。ヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼのコアドメイン(残基１〜201)とオーバーラップする配列内の残基のみを含める；３）各々の配列の相同性で構築した構造を作り出す；４）酵素の表面に位置する残基の決定。これは、表面アクセスビリティーの計算により行う。0.0Å²より大きい表面アクセスビリティーの残基は表面に露出される；５）次のアミノ酸の群：Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ及びＣに属する表面に露出されたいずれの残基も、２つの配列間で差のあるジスルフィド架橋に関連しないなら、大部分、おそらく、陰イオン性界面活性剤に対する安定性のレベルの差の原因であろう。挿入物中の残基が上述のアミノ酸型の群の中の配列のいずれかにおいて見い出される場合、完全な挿入物は陰イオン性界面活性剤に対する安定性のレベルの差の原因であり得、そして完全な挿入物がその挿入物のない配列に移されなければならず、又はその完全な配列が、その挿入物のある配列内で削除されなければならない。ジスルフィド架橋ジスルフィド架橋（即ちCys-Cys架橋）は酵素の構造を安定化する。酵素の正確な安定性を維持するために特定数の安定化ジスルフィド架橋が必要であると確信される。しかしながら、ジスルフィド架橋は、タンパク質構造から除去して、なお大きな活性を有するが、より安定でない、特に熱安定性の小さい酵素変異体を作り出すことができることも考えられる。それゆえ、他の態様において、本発明は、次のジスルフィド架橋：C11-C135;C 12-C47;C16-C86;C31-C56;C87-C199;C89-C189;及びC156-167（セルラーゼナンバリング）の４又はそれ超を保持するセルラーゼ変異体を供する。より好ましい実施形態において、本発明の変異体は、次のジスルフィド架橋：C11-C135;C12-C47 ;C16-C86;C31-C56;C87-C199;C89-C189;及びC156-C167の５又はそれ超を保持する。その最も好ましい実施形態において、本発明の変異体は、次のジスルフィド架橋：C11-C135;C12-C47;C16-C86;C31-C56;C87-C199;C89-C189;及びC156-C167(セルラーゼナンバリング)の６又はそれ超を保持する。他の実施形態において、本発明は、システインが位置16，86，87，89，189、及び／又は199(セルラーゼナンバリング)の１又は複数において他の天然のアミノ酸により置換されているセルラーゼ変異体を供する。結合クレフト置換更なる態様において、本発明は、基質結合クレフト内に位置した１又は複数のアミノ酸残基における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られるセルラーゼ変異体を供する。基質に近い位置に導入された変異は、酵素−基質相互作用結合に影響を与える。構造内の潜在的な基質と相互作用する残基を決定する適切な方法は、“シェル ”内の構造を分割することである。そのシェルは次の通り規定される。即ち第１のシェルは基質と直接、相互作用する残基であり、即ち水素原子を両方とも含む、基質と残基との間の最も近接した内部原子の距離が、水素結合及び他の非結合的相互作用による全ての直接的相互作用を含むであろう2.5Å未満である。次の（第２、第３等の）シェルは、基質に対して2.5Å未満の内部原子の距離の残基又は全ての以前に決定されたシェルと同じ方法で規定される。この方法において、構造は、シェル内で分割されよう。プログラムInsight II 95.0(Insight II 9 5.0 User Guide，October 1995．San Diego:Biosym／MSI，1995)におけるルーチン“subset zone”を、シェルを決めるのに用いることができる。好ましい実施形態において、本発明により考慮されるアミノ酸残基は、基質結合クレフト内の基質から５Åまでの距離に位置する。アラインされたセルラーゼを上述のコンピューターモデリング法にかける場合、基質から５Åまでの距離内の次の位置：４，５，６，７，８，９，10，11，12 ，13，14，15，16，18，19，20，21，21ａ，42，44，45，47，48，49，49ａ，49 ｂ，74，82，95ｊ，110，111，112，113，114，115，116，119，121，123，127 ，128，129，130，131，132，132a，133，145，146，147，148，149，150b，178 、及び／又は179(セルラーゼナンバリング)が示される（表２）。従って、より好ましい実施形態において、本発明は、これらのアミノ酸残基の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られたセルラーゼ変異体を供する。特定の実施形態において、セルラーゼ変異体は、表２において同定されたセルラーゼ((ａ)ヒュミコラ・インソレンス；（ｂ）アクレモニウム種；（ｃ）ボルテルラ・コルレクトトリコイデス；（ｄ）ソルダリア・フィミコラ；（ｅ）チエラビア・テルレストリス；（ｆ）フサリウム・オキシスポルム；（ｇ）マイセリオフトラ・サーモフィラ；（ｈ）クリニペルリス・スカベルラ；（ｉ）マクロホミナ・ファセオリナ；（ｊ）シュードモナス・フルオレセンス；（ｋ）ウスチラゴ・マイジス)の１つから、これらのセルラーゼについて表２において同定された位置の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により得られる。表２基質から５Å未満のアミノ酸残基セルラーゼナンバリングにより同定された位置（ａ）ヒュミコラ・インソレンス；（ｂ）アクレモニウム種；（ｃ）ボルテルラ・コルレクトトリコイデス；（ｄ）ソルダリア・フィミコラ；（ｅ）チエラビア・テルレストリス；（ｆ）フサリウム・オキシスポルム；（ｇ）マイセリオフトラ・サーモフィラ；（ｈ）クリニペルリス・スカベルラ；（ｉ）マクロホミナ・ファセオリナ；（ｊ）シュードモナス・フルオレセンス；（ｋ）ウスチラゴ・マイジス。他の好ましい実施形態において、本発明により考慮されるアミノ酸残基は、基質から３Åまでの距離において基質結合クレフト内に位置する。アラインしたセルラーゼを上述のコンピューターモデリング法にかけた時、基質から３Åまでの距離内に次の位置：６，７，８，10，12，13，14，15，18，20 ，21，45，48，74，110，111，112，113，114，115，119，121，127，128，129 ，130，131，132，132a，146，147，148，150b，178、及び／又は179(セルラーゼナンバリング)(表３)を示す。従って、より好ましい実施形態において、本発明は、これらのアミノ酸残基の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られたセルラーゼ変異体を供する。特定の実施形態において、セルラーゼ変異体は、表３において同定されたセルラーゼ((ａ)ヒュミコラ・インソレンス；（ｂ）アクレモニウム種；（ｃ）ボルテルラ・コルレクトトリコイデス；（ｄ）ソルダリア・フィミコラ；（ｅ）チエラビア・テルレストリス；（ｆ）フサリウム・オキシスポルム；（ｇ）マイセリオフトラ・サーモフィラ；（ｈ）クリニペルリス・スカベルラ；（ｉ）マクロホミナ・ファセオリナ；（ｊ）シュードモナス・フルオレセンス；（ｋ）ウスチラゴ・マイジス)の１つから、これらのセルラーゼについて表３において同定された位置の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により得られる。表３基質から３Å未満のアミノ酸残基セルラーゼナンバリングにより同定された位置（ａ）ヒュミコラ・インソレンス；（ｂ）アクレモニウム種；（ｃ）ボルテルラ・コルレクトトリコイデス；（ｄ）ソルダリア・フィミコラ；（ｅ）チエラビア・テルレストリス；（ｆ）フサリウム・オキシスポルム；（ｇ）マイセリオフトラ・サーモフィラ；（ｈ）クリニペルリス・スカベルラ；（ｉ）マクロホミナ・ファセオリナ；（ｊ）シュードモナス・フルオレセンス；（ｋ）ウスチラゴ・マイジス。部分的に保存されたアミノ酸残基本明細書に定義される“部分的に保存されたアミノ酸残基”は、その位置について表１に示される11残基の７〜10アミノ酸残基の間の位置（即ち63％超）が同一である位置において表１に従って同定されたアミノ酸残基である。従って、本発明は、表１において同定された11残基のうちの７〜10アミノ酸残基の間の位置が同一である表１に従う１又は複数の位置においてアミノ酸残基が保存されたアミノ酸残基に変換されているセルラーゼ変異体を更に供する。好ましい実施形態において、本発明は、次の位置：13，14，15，20，21，22， 24，28，32，34，45，48，50，53，54，62，63，64，65，66，68，69，70，71， 72，73，74，75，79，85，88，90，92，93，95，96，97，98，99，104，106，11 0，111，113，115，116，118，119，131，134，138，140，146，152，153，163 ，166，169，170，171，172，173，174，174，177，178，179，180，193，196、及び／又は197(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られたセルラーゼ変異体を供する。より好ましい実施形態において、本発明は、以下の表４に同定される位置における１又は複数のアミノ酸残基を含むように、置換、挿入及び／又は欠失にかけられているセルラーゼ変異体を供する。表４中の位置は、全て表１においてアラインした配列中に実際に存在する結合クレフト中の基質の５Å以内に存在する“ 部分的に保存されたアミノ酸残基位置”及び保存されていない位置を反映する。表４選択された置換、挿入及び／又は欠失セルラーゼナンバリングにより同定された位置更により好ましい実施形態において、本発明は、以下の表５〜６に示される１又は複数のアミノ酸残基における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られるセルラーゼ変異体を供する。そのセルラーゼ変異体は、示される位置において言及されるアミノ酸残基を保持するいずれかの親セルラーゼから得ることができる。特に、親セルラーゼは、ヒュミコラ・インソレンスセルラーゼ；アクレモニウム種セルラーゼ；ボルテルラ・コルレクトトリコイデスセルラーゼ；ソルダリア・フィミコラセルラーゼ；チエラビア・テルレストリスセルラーゼ；フサリウム・オキシスポルムセルラーゼ；マイセリオフトラ・サーモフィラセルラーゼ；クリニペルリス・スカベルラセルラーゼ；マクロホミナ・ファセオリナセルラーゼ；シュードモナス・フルオレセンスセルラーゼ；又はウスチラゴ・マイジスセルラーゼであり得る。更に、そのセルラーゼ変異体は、特に、表５〜６にも示されるように、１．増加した触媒活性として定義される改良された能力；２．陰イオン性界面活性剤に対する変化したセンシティビティー；及び／又は３．変化したpH至適性に関して改良された能力を有することを特徴とし得る。表５に列記される位置は、表１においてアラインされた異なるセルラーゼ間の特性の転移を反映する。表６に列記される位置は、ヒュミコラ・インソレンスEGVからの表１においてアラインされた他のセルラーゼへの特性の転移を反映する。表５好ましいセルラーゼ変異体セルラーゼナンバリングにより同定された位置表６好ましいセルラーゼ変異体セルラーゼナンバリングにより同定された位置陰イオン界面活性剤に対する変化したセンシティビティー上述の通り、陰イオン性界面活性剤は、界面活性組成物に頻繁に組み込まれる製品である。時々、陰イオン性界面活性剤に対する安定性の増加を有するセルロース分解酵素が要求され、そして時に、センシティビティーの増加したセルロース分解酵素が好まれる。更なる態様において、本発明は、変化した陰イオン性界面活性剤センシティビティーのセルラーゼ変異体を供する。従って、変化した陰イオン性界面活性剤センシティビティーの本発明のセルラーゼ変異体は、次の位置：２，４，７，８，10，13，15，19，20，21，25，26， 29，32，33，34，35，37，40，42，42ａ，43，44，48，53，54，55，58，59，63 ，64，65，66，67，70，72，76，79，80，82，84，86，88，90，91，93，95，95 ｄ，95ｈ，95ｊ，97，100，101，102，103，113，114，117，119，121，133，13 6，137，138，139，140a，141，143a，145，146，147，150e，150j ，151，152，153，154，155，156，157，158，159，160c，160e，160k，161，16 2，164，165，168，170，171，172，173，175，176，178，181，183，184，185 ，186，188，191，192，195，196，200、及び／又は201(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られたセルラーゼ変異体である。これらの位置は、表１においてアラインされたセルラーゼ配列の少くとも１つの中に、荷電した又は潜在的に荷電したaa残基を含む。特定の実施形態において、そのセルラーゼ変異体は、以下の表７において同定されたセルラーゼ((ａ)ヒュミコラ・インソレンス；（ｂ）アクレモニウム種；（ｃ）ボルテルラ・コルレクトトリコイデス；（ｄ）ソルダリア・フィミコラ；（ｅ）チエラビア・テルレストリス；（ｆ）フサリウム・オキシスポルム；（ｇ）マイセリオフトラ・サーモフィラ；（ｈ）クリニペルリス・スカベルラ；（ｉ）マクロホミナ・ファセオリナ；（ｊ）シュードモナス・フルオレセンス；（ｋ）ウスチラゴ・マイジス)の１つから、これらのセルラーゼについて表７において同定された位置の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により得られる。表７陰イオン性界面活性剤に対する変化したセンシティビティーセルラーゼナンバリングにより同定した位置（ａ）ヒュミコラ・インソレンス；（ｂ）アクレモニウム種；（ｃ）ボルテルラ・コルレクトトリコイデス；（ｄ）ソルダリア・フィミコラ；（ｅ）チエラビア・テルレストリス；（ｆ）フサリウム・オキシスポルム；（ｇ）マイセリオフトラ・サーモフィラ；（ｈ）クリニペルリス・スカベルラ；（ｉ）マクロホミナ・ファセオリナ；（ｊ）シュードモナス・フルオレセンス；（ｋ）ウスチラゴ・マイジス。酵素組成物なお更なる態様において、本発明は、上述のようなセルロース分解活性を示す酵素を含む酵素組成物に関する。本発明の酵素組成物は、本発明のセルラーゼに加えて、１又は複数の他の酵素型、例えばヘミセルラーゼ、例えばキシラナーゼ及びマンナナーゼ、他のセルラーゼ成分、キチナーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、ペクチナーゼ、クチナーゼ、フィターゼ、オキシドレダクターゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ、オキシダーゼ、パクチンメチルエステラーゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、又はアミラーゼを含む。本酵素組成物は、当該技術で周知の方法に従って調製することができ、液体又は乾燥組成物の形態であり得る。例えば、本酵素組成物は、粒子又は微粒子の形態であり得る。その組成物内に含まれる酵素は、当該技術で周知の方法に従って安定化することができる。本発明の酵素組成物の好ましい使用の例を以下に示す。本発明の酵素組成物の投与量及びその組成物を用いる他の条件は、当該技術で周知の方法に基づいて決定することができる。本発明による酵素組成物は、以下の目的の少くとも１つのために役立つ得る。使用洗浄及び着用の間、染色した布帛又は衣類からの染料は、慣用的には、それら布帛から流れ出て、色あせてかつ使い古して見えるであろう。布帛からの表面繊維の除去は、部分的にもとの色及び布帛の外観を回復するであろう。本明細書に用いる用語“色浄化”とは、多数の洗浄サイクルによる布帛又は衣類の最初の色の部分的回復を意味する。用語“脱ピリング”とは、布帛表面からの毛玉(pills)の除去をいう。用語“浸漬液”とは、慣用的な洗浄工程にかける前に洗濯物を浸漬させ得る水性の液体をいう。浸漬液は、洗浄又は洗濯工程に慣用的に用いられる１又は複数の成分を含み得る。用語“洗浄液”とは、洗濯物が洗浄工程、即ち通常、手で又は洗濯機での化学的及び機械的作用との組み合わせにおける水性の液体をいう。慣用的には、洗浄液は、粉末又は液体界面活性組成物の水溶液である。用語“すすぎ液”とは、洗濯物をすすぐため、本質的にはその洗濯物から界面活性剤を除去するために、慣用的には洗浄工程にかけた直後に、洗濯物を浸漬し、処理する水性の液体をいう。すすぎ液は、布帛コンディショニング又は軟化組成物を含み得る。本発明の方法にかける洗濯物は、慣用的な洗浄可能な洗濯物であり得る。好ましくは、洗濯物の大部分は、綿、綿混合物又は天然のもしくは人工のセルロース物（例えばキシラン含有セルロース布帛、例えば木材パルプから得られるもの）又はそれらの混合物から作られた、ニット、編み物、デニム、織り物、ヤーン、及びタオル地のものを含む縫った又は縫っていない布帛である。混合物の例は、綿又はレーヨン／ビスコースの、１又は複数のコンパニオン材料、例えばウール、合成繊維（例えばポリアミド繊維、アクリル繊維、ポリエステル繊維、ポリビニルアルコール繊維、ポリビニルクロライド繊維、ポリビニリデンクロライド繊維、ポリウレタン繊維、ポリウレア繊維、アラミド繊維）、及びセルロース含有布帛（例えばレーヨン／ビスコース、ラミー、アマ／リネン、ジュート、セルロースアセテート繊維、リオセル(lyocell)）との混合物である。界面活性剤の開示及び例界面活性システム本発明による界面活性組成物は、その界面活性剤が非イオン性及び／又は陰イオン性及び／又は陽イオン性及び／又は両性及び／又は双性イオン性及び／又は半極性界面活性剤から選択することができる界面活性システムを含む。界面活性剤は、典型的には、0.1重量％〜60重量％のレベルで存在する。界面活性剤は、好ましくは、その組成物中に存在する酵素成分と適合するように調剤される。液体又はゲル組成物において、界面活性剤は、最も好ましくは、それがこれらの組成物中のいずれの酵素の安定性も促進し、又は少くとも分解しないように調剤される。本発明に従って用いられる好ましいシステムは、界面活性剤として、１又は複数の本明細書に記載される非イオン性及び／又は陰イオン性界面活性剤を含む。ポリエチレン、ポリプロピレン、及びアルキルフェノール類のポリブチレンオキシド縮合物が、本発明の界面活性システムの非イオン性界面活性剤として用いるのに適するが、ポリエチレンオキシド縮合物が好ましい。これらの化合物は、アルキレンオキシドとの、直鎖又は分枝鎖型の、約６〜約14炭素原子、好ましくは、約８〜約14炭素原子を有するアルキルフェノール類の縮合産物を含む。好ましい実施形態において、エチレンオキシドは、アルキルフェノール１分子当り、約２〜約25分子、より好ましくは約３〜約15分子のエチレンオキシドに等しい量で存在する。この型の商業的に利用できる非イオン性界面活性剤は、GAF Corpor ationにより市販されるIgepalTM CO-630；及び全てRohm & Haas Companyにより市販される TritonTM X-45，X-114，X-100及びX-102を含む。これらの界面活性剤は、一般に、アルキルフェノールアルコキシレート（例えばアルキルフェノールエトキシレート）と呼ばれる。約１〜約25分子のエチレンオキシドを有する第１級及び第２級脂肪族アルコールの縮合産物は、本発明の非イオン性界面活性システムの非イオン性界面活性剤として用いるのに適する。脂肪族アルコールのアルキル鎖は、直鎖又は分枝鎖の第１級又は第２級であり得、一般に、約８〜約22の炭素原子を含む。アルコール１分子当り約２〜約10分子のエチレンオキシドを伴う約８〜約20炭素原子、より好ましくは約10〜約18炭素原子を含むアルキル基を有するアルコールの縮合産物が好ましい。アルコール１分子当り約２〜約７分子のエチレンオキシド、最も好ましくは約２〜５分子のエチレンオキシドが前記縮合産物中に存在する。この型の市販の非イオン性界面活性剤の例は、両方ともUnion Carbide Corporationにより市販される、TergitolTM 15-S-9(９モルのエチレンオキシドとのＣ11−Ｃ15 直鎖アルコールの縮合産物)、TergitolTM 24-L-6 NMW（せまい分子量分布の６モルのエチレンオキシドとのＣ12−Ｃ14第１級アルコールの縮合産物)；Shell Che mical Companyにより市販される、NeodolTM 45-9(９モルのエチレンオキシドとのＣ14−Ｃ15直鎖アルコールの縮合産物)、NeodolTM 23-3（3.0モルのエチレンオキシドとのＣ12−Ｃ13直鎖アルコールの縮合産物）、NeodolTM 45-7(７モルのエチレンオキシドとのＣ14−Ｃ15直鎖アルコールの縮合産物)、NeodolTM 45-5( ５モルのエチレンオキシドとのＣ14−Ｃ15直鎖アルコールの縮合産物)、Procter & Gamble Companyにより市販されるKyroTM EOB（９モルのエチレンオキシドとのＣ13−Ｃ15アルコールの縮合産物）、及びHoechstにより市販されるGenapol L A 050（５モルのエチレンオキシドとのＣ12−Ｃ14アルコールの縮合産物）を含む。これらの製品におけるHLBの好ましい範囲は、８〜11、最も好ましくは８〜1 0である。また、本発明の界面活性システムの非イオン性界面活性剤としては、約６〜約 30炭素原子、好ましくは、約10〜約16炭素原子を含む疎水性基を有するUS 4,565 ,647に開示されるアルキルポリサッカライド並びに約1.3〜約10、好ましくは約1 .3〜約３、最も好ましくは約1.3〜約2.7のサッカライド単位を含む親水性基を有するポリサッカライド、例えばポリグリコシドも役立つ。５又は６炭素原子を含むいずれかの還元サッカライド、例えばグルコース、ガラクトース及びガラクトシル成分が、グリコシル成分のかわりに置換することができる（任意に、疎水性基は、２−，３−，４−、等位に結合させることができ、これによりグルコシド又はガラクトシドに対してグルコース又はガラクトースを供する）。サッカライド間の結合は、例えば、次のサッカライド単位の１つの位置と先のサッカライド単位上の２−，３−，４−、及び／又は６−位置との間であり得る。好ましいアルキルポリグリコシド類は、式R2O(CnH2nO)t（グリコシル)x （式中、Ｒ２は、アルキル、アルキルフェニル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルフェニル、及びそれらの混合物からなる群から選択され、ここでアルキル基は、約10〜約18、好ましくは約12〜約14の炭素原子を含み；ｎは２又は３、好ましくは２であり；ｔは０〜10、好ましくは０であり；そしてｘは約1.3 〜約10、好ましくは約1.3〜約３、最も好ましくは約1.3〜約2.7である）を有する。グリコシルは、好ましくは、グルコースから得られる。これらの化合物を調製するために、アルコール又はアルキルポリエトキシアルコールが最初に形成され、そして次にグルコース又はグルコースのソースと反応してグリコシド（１−位に結合したもの）を形成する次に、次のグルコシル単位は、それらのｌ−位と、先行するグリコシル単位２−，３−，４−、及び／又は６−位、好ましくは主に２−位と、の間に結合することができる。プロピレンオキシドのプロピレングリコールとの縮合により形成された疎水性塩基とのエチレンオキシドの縮合産物も、本発明の更なる非イオン性界面活性システムとして用いるのに適する。これらの化合物の疎水性部分は、好ましくは、約1500〜約1800の分子量を有するであろう。そして水不溶性を示すであろう。この疎水性部分へのポリオキシエチレン成分の添加は、全体としてその分子の水溶性を増加させる傾向があり、そしてその産物の液体特性は、ポリオキシエチレン成分が、約40モルまでのエチレンオキシドとの縮合に相当する縮合産物の全重量の約50％である点まで保持される。この型の化合物の例は、BASFにより市販される市販のPluronicTM界面活性剤を含む。本発明の非イオン性界面活性システムの非イオン性界面活性剤として用いるために適するのは、ポリエチレンオキシドとエチレンジアミンとの反応から生ずる産物とのエチレンオキシドの縮合産物でもある。これらの産物の疎水性成分は、エチレンジアミン及び過剰なプロピレンオキシドの反応生成物からなり、一般に、約2500〜約3000の分子量を有する。この疎水性成分は、その縮合産物が約40重量％〜約80重量％のポリオキシエチレンを含み約5,000〜約11,000の分子量を有する程度まで、エチレンオキシドと縮合される。この型の非イオン性界面活性剤の例は、BASFにより市販されるTetronicTM化合物を含む。アルキルフェノール類のポリエチレンオキシド縮合物、約１〜約25分子のエチレンオキシドを有する第１級及び第２級脂肪族アルコールの縮合産物、アルキルポリサッカライド、及びそれらの混合物を本発明の界面活性システムの非イオン性界面活性剤として用いるために好ましい。最も好ましいのは、３〜15のエトキシ基を有するＣ８−Ｃ14アルキルフェノールエトキシレート及び２〜10のエトキシ基を有するＣ８−Ｃ18アルコールエトキシレート（好ましくは平均Ｃ10）、並びにそれらの混合物である。極めて好ましい非イオン性界面活性剤は、式：（式中、Ｒ１はＨであるか、又はＲ１はヒドロカルビル、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル又はそれらの混合物であり、Ｒ２はＣ５−31ヒドロカルビルであり、Ｚは、鎖に直接、連結した少くとも３のヒドロキシルを有する直鎖ヒドロカルビル鎖、又はそのアルコキシル化誘導体である）のポリヒドロキシ脂肪酸アミド界面活性剤である。好ましくは、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２は直鎖Ｃ11−15アルキル又はＣ16−18アルキルもしくはアルケニル鎖、例えばココナッツアルキル又はそれらの混合物であり、Ｚは還元糖、例えばグルコース、フルクトース、マルトース又はラクトースから、還元的アミノ化反応において得られる。極めて好ましい陰イオン性界面活性剤は、アルキルアルコキシル硫酸界面活性剤を含む。その例は、式RO(A)mSO3M（式中、ＲはＣ10−Ｃ24アルキル成分、好ましくはＣ12−Ｃ20アルキル又はヒドロキシアルキル、より好ましくはＣ12−Ｃ18 アルキル又はヒドロキシアルキルを有する置換されていないＣ10−Ｃ24アルキル又はヒドロキシアルキル基であり、Ａはエトキシ又はプロポキシ単位であり、ｍは０より大きく、典型的には約0.5〜約６の間、より好ましくは約 0.5〜約３の間であり、ＭはＨ又はカチオン、例えば金属陽イオン（例えばナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム等）、アンモニウム又は置換化アンモニウムカチオンである）の水溶性の塩又は酸である。アルキルエトキシ化スルフェート及びアルキルプロポキシ化スルフェートが本明細書において考慮される。置換化アンモニウムカチオンの特定の例は、メチル−、ジメチル −、トリメチル−アンモニウムカチオン及び第４アンモニウムカチオン、例えばテトラメチル−アンモニウム及びジメチルピペリジニウムカチオン並びにアルキルアミン、例えばエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、それらの混合物等から得られるものを含む。典型的な界面活性剤は、Ｃ12−Ｃ18アルキルポリエトキシレート(1.0)スルフェート（C12-C18E(1.0)M）、Ｃ12−Ｃ18アルキルポリエトキシレート（2.25）スルフェート（C12-C18(2.25)M）、Ｃ12−Ｃ18アルキルポリエトキシレート(3.0)スルフェート（C12-C18E(3.0)M）、及びＣ12− Ｃ18アルキルポリエトキシレート(4.0)スルフェート（C12-C18E(4.0)M）であり、ここでＭは、慣用的には、ナトリウム及びカリウムから選択される。用いるのに適した陰イオン性界面活性剤は、“The Journal of the American Oil Chemists Society”，52(1975)，pp.323-329に従って気体のSO3でスルホン化されたＣ８−Ｃ20カルボン酸（即ち脂肪酸）の直鎖エステルを含むアルキルエステルスルホネート界面活性剤である。適切な出発材料は、獣脂、パーム油等から得られる天然の脂肪物質を含むであろう。特に、洗濯に適用するための、好ましいアルキルエステルスルホネート界面活性剤は、構造式：（式中、Ｒ３はＣ８−Ｃ20ヒドロカルビル、好ましくはアルキル、又はそれらの組合せであり、Ｒ４はＣ１−Ｃ６ヒドロカルビル、好ましくはアルキル、又はそれらの組合せであり、Ｍはアルキルエステルスルホネートと共に水溶性の塩を形成するカチオンである）のアルキルエステルスルホネート界面活性剤を含む。適切な塩形成性カチオンは、金属、例えばナトリウム、カリウム、及びリチウム等、並びに置換化又は非置換化アンモニウムカチオン、例えばモノエタノールアミン、ジエタノールアミン、及びトリエタノールアミンを含む。好ましくは、Ｒ３はＣ10−Ｃ16アルキルであり、Ｒ４は、メチル、エチル又はイソプロピルである。特に好ましいのは、Ｒ３がＣ10−Ｃ16アルキルであるメチルエステルスルホネートである。他の適切な陰イオン性界面活性剤は、式ROSO3M（式中、Ｒは、好ましくはＣ10 −Ｃ24ヒドロカルビル、好ましくはＣ10−Ｃ20アルキル成分を有するアルキル又はヒドロキシアルキル、より好ましはＣ12−C18アルキル又はヒドロキシアルキルであり、ＭはＨ又はカチオン、例えばアルカリ金属カチオン（例えばナトリウム、カリウム、リチウム）、又はアンモニウムもしくは置換化アンモニウム（例えば、メチル−、ジメチル−、及びトリメチルアンモニウムカチオン及び第４アンモニウムカチオン、例えばテトラメチル−アンモニウム及びジメチルピペルジニウムカチオン並びにアルキルアミン、例えばエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、及びそれらの混合物から得られた第４アンモニウムカチオン等）である）の水溶性塩又は酸であるアルキルスルフェート界面活性剤を含む。典型的には、Ｃ12−Ｃ16のアルキル鎖は、低い洗浄温度（例えば約50℃未満）のために好ましく、Ｃ16−Ｃ18アルキル鎖は高い洗浄温度（例えば約50℃超）のために好ましい。界面活性目的のために役立つ他の陰イオン性界面活性剤も本発明の洗濯用界面活性組成物に含めることができる。これらは、セッケンの塩（例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、及び置換化アンモニウム塩、例えばモノ−、ジ−及びトリエタノールアミン塩）、Ｃ８−Ｃ22第１級又は第２級アルカンスルホネート、Ｃ８−Ｃ24オレフィンスルホネート、例えば英国特許明細書第1,082,179号に記載されるようにアルカリ土類金属クエン酸塩の熱分解産物のスルホン化により調製されるスルホン化ポリカルボン酸、Ｃ８−Ｃ24アルキルポリグリコールエーテルスルフェート（10分子までのエチレンオキシドを含むもの）；アルキルグリセロールスルホネート、脂肪酸グリセロールスルホネート、脂肪オレイルグリセロールスルフェート、アルキルフェノールエチレンオキシドエーテルスルフェート、パラフィンスルホネート、アルキルホスフェート、イセチオネート、例えばアシルイセチオネート、Ｎ−アシルタウレート、アルキルスクシナメート及びスルホスクシネート、スルホスクシネートのモノエステル（特に飽和及び不飽和Ｃ12−Ｃ18モノエステル）及びスルホスクシネートのジエステル（特に飽和及び不飽和Ｃ６−Ｃ12ジエステル）、アシルサルコシネート、アルキルポリサッカライドのスルフェート、例えばアルキルポリグルコシドのスルフェート（非イオン性非硫酸化化合物は以下に記述される）、分枝した第１級アルキルスルフェート、及びアルキルポリエトキシカルボキシレート、例えば式RO(CH2CH2O)k−CH2COO −M+（式中、ＲはＣ８−Ｃ22アルキルであり、ｋは１〜10の整数であり、Ｍは可溶性塩形成性カチオンである）のものを含み得る。樹脂酸並びに水素化樹脂酸、例えばロジン、水素化ロジン、並びにトールオイル中に存在する又はそれから得られる樹脂酸及び水素化樹脂酸も適切である。アルキルベンゼンスルホネートが極めて好ましい。特に好ましいのは、そのアルキル基が好ましくは10〜18の炭素原子を含む直鎖アルキルベンゼンスルホネート(LAS)である。更なる例は、“Surface Active Agents and Detergents”(Vol.Ｉ及びII、Sch wartz，Perry and Berch)に記載される。種々のこのような界面活性剤は、US 3, 929,678（引用により本明細書に組み込まれる；コラム23、58行〜コラム29、23 行）にも一般に開示される。その中に含まれる場合、本発明の洗濯用界面活性組成物は、典型的には、約１重量％〜約40重量％、好ましくは約３重量％〜約20重量％のこれらの陰イオン性界面活性剤を含む。本発明の洗濯用界面活性組成物は、陽イオン性、両性、双性イオン性及び半極性界面活性剤、並びに非イオン性及び／又は既に本明細書に記載したもの以外の陽イオン性界面活性剤も含み得る。本発明の洗濯用界面活性組成物に用いるために適した陽イオン性界面活性剤は、１つの長鎖ヒドロカルビル基を有するものである。このような陽イオン性界面活性剤の例は、アンモニウム界面活性剤、例えばアルキルトリメチルアンモニウムハロゲン化物、及び、式：〔R2(OR3)y〕〔R4(OR3)y〕2R5N+X- （式中、Ｒ２はアルキル鎖中に約８〜約18の炭素原子を有するアルキル又はアルキルベンジル基であり、各々のＲ３は、−CH2CH2−，−CH2CH(CH3)−，−CH2C H(CH2OH)−，−CH2CH2CH2−、及びそれらの混合物であり；各々のＲ４は、Ｃ１ −Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ヒドロキシアルキル、２つのＲ４基を連結することにより形成されるベンジル環構造、−CH2CHOHCHOHCOR6CHOHCH2OH（式中、Ｒ６はヘキソース又は約1000未満の分子量を有するヘキソースポリマーのいずれかである）、及びｙが０でないなら水素からなる群から選択され；Ｒ５はＲ４と同じであるか、又はアルキル鎖であり、ここで炭素原子の総数又はＲ２＋Ｒ５は約18以下であり；各々のｙは０〜約10であり、ｙの値の合計は０〜約15であり；Ｘはいずれかの適合可能なアニオンである）を有する界面活性剤を含む。極めて好ましい陽イオン性界面活性剤は、式： R1R2R3R4N+X- （ｉ）（式中、Ｒ１はＣ８−Ｃ16アルキルであり、Ｒ２，Ｒ３及びＲ４の各々は独立して、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ヒドロキシアルキル、ベンジル、及び− (C2H4O)xH（ここで、ｘは２〜５の値を有する）であり、Ｘはアニオンである）を有する本組成物に役立つ水溶性第４アンモニウム化合物である。Ｒ２，Ｒ３又はＲ４の１超がベンジルであるべきではない。Ｒ１のための好ましいアルキル鎖長は、特にアルキル基がココナッツもしくはパーム仁脂肪から得られ又はオレフィン構築もしくはOXOアルコール合成により合成して得られる場合、Ｃ12−Ｃ15である。 R2R3及びＲ４のための好ましい基はメチル及びヒドロキシエチル基であり、アニオンＸは、ハライド、メトスルフェート、アセテート及びホスフェートイオンから選択することができる。ここで用いるための式（ｉ）の適切な第４アンモニウム化合物の例は：ココナツトリメチルアンモニウムクロライド又はブロミド；ココナツメチルジヒドロキシエチルアンモニウムクロライド又はブロミド；デシルトリエチルアンモニウムクロライド；デシルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロライド又はブロミド；Ｃ12−15ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロライド又はブロミド；ココナツジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロライド又はブロミド；ミリスチルトリメチルアンモニウムメチルスルフェート；ラウリルジメチルベンジルアンモニウムクロライド又はブロミド：ラウリルジメチル（エトキシ）４アンモニウムクロライド又はブロミド；でありR2R3R4がメチルである式（ｉ）の化合物）；ジ−アルキルイミダゾリン（式（ｉ）の化合物）である。ここで役立つ他の陽イオン性界面活性剤は、US 4,228,044及びEP 000 224にも記載される。中に含まれるなら、本発明の洗濯用界面活性組成物は、典型的には、0.2重量％〜約25重量％、好ましくは約１重量％〜約８重量％のこれらの陽イオン性界面活性剤を含む。両性界面活性剤も本発明の洗濯用界面活性組成物に用いるのに適している。これらの界面活性剤は、第２級又は第３級アミンの脂肪族誘導体、又はヘテロ環式第２級及び第３級アミンの脂肪族誘導体として広く開示されており、ここでその脂肪族基は、直鎖又は分枝鎖であり得る。脂肪族置換基の１つは少くとも約８の炭素原子、典型的には約８〜約18の炭素原子を含み、そして少くとも１つは陰イオン性水可溶化基、例えばカルボキシ、スルホネート、スルフェートを含む。両性界面活性剤の例についてはUS 3,929,678（コラム19、18−35行）を参照のこと。中に含まれるなら、本発明の洗濯用界面活性組成物は、典型的には、0.2重量％〜約15重量％、好ましくは約１重量％〜約10重量％のこれらの両性界面活性剤を含む。双性イオン性界面活性剤も、洗濯用界面活性組成物に用いるのに適切である。これらの界面活性剤は、第２級及び第３級アミンの誘導体、ヘテロ環式第２級及び第３級アミンの誘導体、又は第４級アンモニウム、第４級ホスホニウムもしくは第３級スルホニウム化合物の誘導体として広く開示されている。双性イオン性界面活性剤の例についてはUS 3,929,678（コラム19、38行〜コラム22、48行）を参照のこと。中に含まれるなら、本発明の洗濯用界面活性組成物は、典型的には、0.2重量％〜約15重量、好ましくは約１重量％〜約10重量％のこのような双性イオン性界面活性剤を含む。半極性非イオン性界面活性剤は、約10〜約18炭素原子の１つのアルキル成分、並びに約１〜約３炭素原子を含むアルキル基及びヒドロキシアルキル基からなる群から選択される２つの成分を含む水溶性アミンオキシド；約10〜約18炭素原子の１つのアルキル成分並びに約１〜約３炭素原子を含むアルキル基及びヒドロキシアルキル基からなる群から選択される２つの成分を含む水溶性ホスフィンオキシド；並びに約10〜約18炭素原子の１つのアルキル成分並びに約１〜約３炭素原子のアルキル及びヒドロキシアルキル成分からなる群から選択される１つの成分を含む水溶性スルホキシドを含む非イオン性界面活性剤の特別のカテゴリーである。半極性非イオン性界面活性剤は、式：（式中、Ｒ３は、約８〜約22炭素原子を含むアルキル、ヒドロキシアルキル、もしくはアルキルフェニル基又はそれらの混合物であり；Ｒ４は、約２〜約３炭素原子を含むアルキレンもしくはヒドロキシアルキレン基、又はそれらの混合物であり；ｘは０〜約３であり；各々のＲ５は約１〜約３炭素原子を含むアルキルもしくはヒドロキシアルキル基又は約１〜約３のエチレンオキシド基を含むポリエチレンオキシド基である）を有するアミンオキシド界面活性剤を含む。Ｒ５基は、例えば酸素又は窒素原子により互いに結合させて還構造を形成することができる。これらのアミンオキシド界面活性剤は、特に、Ｃ10−Ｃ18アルキルジメチルアミンオキシド及びＣ８−Ｃ12アルコキシエチルジヒドロキシエチルアミンオキシドを含む。中に含まれるなら、本発明の洗濯用界面活性組成物は、典型的には、0.2重量％〜約15重量％、好ましくは約１重量％〜約10重量％のこのような半極性非イオン性界面活性剤を含む。ビルダーシステム本発明による組成物は、ビルダーシステムを更に含み得る。アルミノシリケート材料、シリケート、ポリカルボキシレート及び脂肪酸、エチレンジアミンテトラアセテートのような材料、金属イオン封鎖剤、例えばアミノポリホスホネート、特にエチレンジアミンテトラメチレンホスホン酸及びジエチレントリアミンペンタメチレンホスホン酸を含むいずれかの慣用的なビルダーシステムが本明細書に用いるのに適切である。明らかな環境的理由のためあまり好ましくはないが、ホスフェートビルダーも本明細書に用いることができる。適切なビルダーは、無機イオン交換材料、一般に無機水和アルミノシリケート材料、より好ましくは水和合成ゼオライト、例えば水和ゼオライトＡ，Ｘ，Ｂ， HS又はMAPであり得る。他の適切な無機ビルダー材料は、層状シリケート、例えばSKS-6（Hoechst）である。SKS-6はケイ酸ナトリウム（Na₂Si₂O₅）からなる結晶性層状シリケートである。１つのカルボキシ基を含む適切なポリカルボキシレートは、ベルギー特許第83 1,368号、821,369号及び821,370号に開示されるような乳酸、グリコール酸及びそれらのエーテル誘導体を含む。２つのカルボキシ基を含むポリカルボキシレートは、コハク酸、マロン酸、（エチレンジオキシ）ジ酢酸、マレイン酸、及びドイツOffenle-enschrift 2,446,686及び2,446,487、US 3,935,257に記載されるエーテルカルボキシレート並びにベルギー特許第840,623号に記載されるスルフィニルカルボキシレートを含む。３つのカルボキシ基を含むポリカルボキシレートは、特に、水溶性シトレート、アコニトレート及びシトラコネート並びにコハク酸誘導体、例えば英国特許第1,379,241号に記載されるカルボキシメチルオキシスクシネート、オランダ出願7205873に記載されるラクトキシスクシネート、及びオキシポリカルボキシレート材料、例えば英国特許第1,387,447に記載される２−オキサ−１，１，３−プロパントリカルボキシレートを含む。４つのカルボキシ基を含むポリカルボキシレートは、英国特許第1,261,829号に開示されるオキシジスクシネートを含み、スルホ置換基を含む１，１，３，３ −プロパンテトラカルボキシレートは、英国特許第1,398,421号及び1,398,422号並びにUS 3,936,448号に開示されるスルホスクシネート誘導体、及び英国特許第1,082,179号に開示されるスルホン化熱分解シトレートを含み、ホスホン置換基を含むポリカルボキシレートは、英国特許第1,439,000号に開示される。脂環式及びヘテロ環式ポリカルボキシレートは、シクロペンタン−シス、シス −シス−テトラカルボキシレート、シクロペンタジエニドペンタカルボキシレート、２，３，４，５−テトラヒドロ−フラン−シス，シス，シス−テトラカルボキシレート、２，５−テトラヒドロ−フラン−シス−ジスカルボキシレート、２，２，５，５−テトラヒドロフラン−テトラカルボキシレート、１，２，３，４，５，６−ヘキサン−ヘキサカルボキシレート及び多水酸基アルコール、例えばソルビトール、マンニトール及びキシリトールのカルボキシメチル誘導体を含む。芳香族ポリカルボキシレートは、メリト酸、ピロメリト酸及び英国特許第1,42 5,343に開示されるフタル酸誘導体を含む。上述のもののうち、好ましいポリカルボキシレートは、１分子当り３までのカルボキシ基を含む、ヒドロキシ−カルボキシレート、より好ましくはシトレートである。本組成物に用いるための好ましいビルダーシステムは、水不溶性アルミノシリケートビルダー、例えばゼオライトＡ又は層状シリケート(SKS-6)、及び水溶性カルボキシレートキレート化剤、例えばクエン酸の混合物を含む。本発明による界面活性組成物中の封入のための適切なキレート化剤は、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸（EDDS）もしくはアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、もしくはその置換化アンモニウム塩、又はそれらの混合物である。好ましいEDDS化合物は、遊離酸形態及びそのナトリウム又はマグネシウム塩である。このような EDDSのナトリウム塩の例は、Na2EDDS及びNa4EDDSを含む。このような好ましいED DSのマグネシウム塩はMgEDDS及びMg2EDDSを含む。本発明による組成物における封入のためにはマグネシウム塩が最も好ましい。好ましいビルダーシステムは、水不溶性アルミノシリケートビルダー、例えばゼオライトＡ、及び水溶性カルボキシレートキレート化剤、例えばクエン酸の混合物を含む。粒状組成物に用いるためのビルダーシステムの一部を形成することができる他のビルダー材料は、無機材料、例えばアルカリ金属カーボネート、重炭酸塩、シリケート、及び有機材料、例えば有機ホスホネート、アミノポリアルキレンホスホネート及びアミノポリカルボキシレートを含む。他の適切な水溶性有機塩は、ホモ又は共重合酸又はそれらの塩であり、ここでポリカルボン酸は、２以下の炭素原子により互いから分離された少くとも２のカルボキシル基を含む。この型のポリマーは、GB-A-1,596,756に開示される。このような塩の例は、MW 2000−5000のポリアクリレート及びそれらのマレイン酸無水物とのコポリマーであり、ここでこのようなコポリマーは、20,000〜70,000、特に約40,000の分子量を有する。界面活性剤ビルダー塩は、通常、その組成物の５重量％〜80重量％の量で含まれる。液体界面活性剤のためのビルダーの好ましいレベルは５％〜30％である。酵素好ましい界面活性組成物は、本発明の酵素調製物に加えて、洗浄能力及び／又は布帛ケアーの利益を供する他の酵素を含む。このような酵素は、プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、アシラーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、オキシダーゼ（例えばラッカーゼ）を含む。プロテアーゼ：アルカリ溶液に用いるために適したいずれのプロテアーゼも用いることができる。適切なプロテアーゼは、動物、植物又は微生物源のものを含む。微生物源のものが好ましい。化学的又は遺伝子的に改変した変異が含まれる。そのプロテアーゼは、セリンプロテアーゼ、好ましくはアルカリ微生物プロテアーゼ又はトリプシン様プロテアーゼであり得る。アルカリプロテアーゼの例はズブチリシン、特にバチルス（Bacillus）由来のもの、例えばズブチリシンNovo 、ズブチリシンCarlsberg、ズブチリシン309、ズブチリシン147及びズブチリシン168(WO 89／06279)である。トリプシン様プロテアーゼの例はトリプシン（例えばブタ又はウシ源のもの）及びWO 89／06270に記載されるフサリウム（Fusari um ）プロテアーゼである。好ましい市販のプロテアーゼ酵素は、Novo Nordisk A/S(Denmark)により商標名Alcalase，Savinase，Primase，Durazym)及びEsperaseで売られているもの、G enencor Internationalにより商標名Maxatase，Maxacal，Maxapem，Properase， Purafect及びPurafect OXPで売られているもの、並びにSolvay Enzymesにより商標名Opticlean及びOptimaseで売られているものを含む。プロテアーゼ酵素は、本発明による組成物に、組成物の重量で0.00001％〜２％の酵素タンパク質のレベル、好ましくは組成物の重量で0.0001％〜１％の酵素タンパク質のレベル、より好ましくは組成物の重量で0.001％〜0.5％の酵素タンパク質のレベル、更により好ましくは組成物の重量で0.01％〜0.2％の酵素タンパク質のレベルで組み込むことができる。リパーゼ：アルカリ溶液に用いるのに適したいずれのリパーゼも用いることができる。適切なリパーゼは、細菌又は真菌原のものを含む。化学的又は遺伝子的に改変された変異体が含まれる。有用なリパーゼの例は、例えばEP 258 068及びEP 305 216に記載されるようなヒュミコラ・ラヌギノサ（Humicola lanuginosa）リパーゼ、例えばEP 238 023 に記載されるようなリゾムコル・ミエヘイ（Rhizomucor miehei）リパーゼ、カンジダ（Candida）リパーゼ、例えばＣ．アンタルクチカ（C ．antarctica）リパーゼ、例えばEP 214 761に記載されるＣ．アンタルクチカリパーゼＡもしくはＢ、例えばEP 218 272に記載されるようなシュードモナス（Pseudomonas）リパーゼ、例えばＰ．アルカリゲネス（P ．alcaligenes）及びＰ．シュードアルカリゲネス（P ．pseudoalcaligenes）リパーゼ、例えばEP 331 376に記載されるようなＰ．セパシア（P ．cepacia）リパーゼ、例えばGB 1,372,034に開示されるような、Ｐ．スツトゼリ（P ．stutzeri）リパーゼ、Ｐ．フルオレセンス（P ．fluoresc ens ）リパーゼ、バチルスリパーゼ、例えばＢ．サブチリス（B.subtilis）リパーゼ(Dartoisら(1993)，Biochemica et Biophysica acta 1131，253-260）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（B.stearothermophilus）リパーゼ(JP 64／744992) 及びＢ．プミルス（B.pumilus）リパーゼ(WO 91／16422)を含む。更に、いくつかのクローン化されたリパーゼが役立つ。例えば、Yamaguchiら( 1991)(Gene 103，61-67)により記載されるペニシリウム・カメンベルチイ（Peni cillium camembertii ）リパーゼ、ゲオトリクム・カンジドウム（Geotricum can didum ）リパーゼ(Schimada，Ｙら(1989)，J.Biochem.，106，383-388)、及び種々のリゾプス（Rhizopus）リパーゼ、例えばＲ．デレマル（R ．delemar）リパーゼ（Hass，M.J.ら(1991)，Gene 109，117-113）、Ｒ．ニベウス（R．niveus）リパーゼ（Kugimiyaら、(1992)，Biosci.Biotech.Bio chem．56，716-719)及びＲ．オリザエ（R ．oryzae）リパーゼがある。脂肪分解酵素の他の型、例えばクチナーゼも役立つ。例えば、W0 88／09367に記載されるシュードモナス・メンドシナ（Pseudomonas mendocina）由来のクチナーゼ、又は（例えばWO 90／09446に記載されるフサリウム・ソラニ・ピシ（Fu sarium solani pisi ）由来のクチナーゼがある。特に適切なリパーゼは、M1 LipaseTM，Luma fastTM及びLipomaxTM(Genencor) ，LipolaseTM及びLipolase UltraTM（Novo Nordisk A/S）、及びLipase P“Amin o”(Amano Pharmaceutical Co．Ltd.)のようなリパーゼである。リパーゼは、通常、組成物の重量で0.00001％〜２％の酵素タンパク質のレベル、好ましくは組成物の重量で0.0001％〜１％の酵素タンパク質のレベル、より好ましくは組成物の重量で0.001％〜0.5％の酵素タンパク質のレベル、更により好ましくは組成物の重量で0.01％〜0.2％の酵素タンパク質のレベルで界面活性組成物中に組み込まれる。アミラーゼ：アルカリ溶液中に用いるのに適したいずれのアミラーゼ（ａ及び／又はｂ）も用いることができる。適切なアミラーゼは、バクテリア又は真菌源のものを含む。化学的又は遺伝子的に改変された変異体が含まれる。アミラーゼは、例えば、GB 1,296,839により詳細に記載されるＢ．リケニホルミス（B ．lic heniformis ）の特定の株から得られるアミラーゼを含む。市販のアミラーゼは、 DuramylTM，TermaylTM，FungamylTM及びBANTM(Novo Nordisk A/Sから市販)並びにRapidaseTM及びMaxamyl PTM(Genencorから市販)を含む。アミラーゼは、通常、組成物の重量で0.00001％〜２％の酵素タンパク質のレベル、好ましくは組成物の重量で0.0001％〜１％の酵素タンパク質のレベル、より好ましくは組成物の重量で0.001％〜0.5％の酵素タンパク質のレベル、更により好ましくは組成物の重量で0.01％〜0.2％の酵素タンパク質のレベルで界面活性組成物中に組み込まれる。セルラーゼ：アルカリ溶液中に用いるのに適したいずれのセルラーゼも用いることができる。適切なセルラーゼは、細菌又は真菌源のものを含む。化学的又は遺伝子的に改変された変異体が含まれる。適切なセルラーゼは、US 4,435,307に開示され、それは、ヒュミコラ・インソレンス(Humicola insolens)から生産される真菌のセルラーゼを開示する。特に適したセルラーゼは色ケアーの利益を有するセルラーゼである。このようなセルラーゼの例は、欧州特許出願第0 495 25 7号に記載されるセルラーゼ、及び本発明のエンドグルカナーゼである。市販のセルラーゼは、ヒュミコラ・インソレンスの株により生産されるCelluz ymeTM(Novo Nordisk A/S)、及びKAC-500(B)TM（Kao Corporation）を含む。セルラーゼは、通常、組成物の重量で0.00001％〜２％の酵素タンパク質のレベル、好ましくは組成物の重量で0.0001％〜１％の酵素タンパク質のレベル、より好ましくは組成物の重量で0.001％〜0.5％の酵素タンパク質のレベル、更により好ましくは組成物の重量で0.01％〜0.2％の酵素タンパク質のレベルで界面活性組成物中に組み込まれる。ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ：ペルオキシダーゼ酵素は、過酸化水素又はそのソース（例えばペルカーボネート、ペルボレート、又はペルスルフェート）と組み合わせて用いられる。オキシダーゼ酵素は、酸素と組み合わせて用いられる。両方の型の酵素は、“ 溶液漂白”のため、即ち布帛を洗浄液と一緒に、好ましくは例えばWO 94／12621 及びWO 95／01426に記載される増強剤と一緒に洗った時に染色された布帛から他の布帛に織物染料が移るのを防ぐために用いられる。適切なペルオキシダーゼ／オキシダーゼは、植物、細菌又は真菌源のものを含む。化学的又は遺伝子的に改変された変異体が含まれる。ペルオキシダーゼ及び／又はオキシダーゼは、通常、組成物の重量で0.00001 ％〜２％の酵素タンパク質のレベル、好ましくは組成物の重量で0.0001％〜１％の酵素タンパク質のレベル、より好ましくは組成物の重量で0.001％〜0.5％の酵素タンパク質のレベル、更により好ましくは組成物の重量で0.01％〜0.2％の酵素タンパク質のレベルで界面活性組成物中に組み込まれる。上述の酵素の混合物、特にプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ及び／又はセルラーゼの混合物が包含される。本発明の酵素、又は界面活性組成物に組み込まれるいずれかの他の酵素は、通常、組成物の重量で0.00001％〜２％の酵素タンパク質のレベル、好ましくは組成物の重量で0.0001％〜１％の酵素タンパク質のレベル、より好ましくは組成物の重量で0.001％〜0.5％の酵素タンパク質のレベル、更により好ましくは組成物の重量で0.01％〜0.2％の酵素タンパク質のレベルで界面活性組成物中に組み込まれる。漂白剤本発明の界面活性組成物中に含まれ得る更なる任意的界面活性成分は、漂白剤、例えばPB1，PB4及び粒径400〜800ミクロンのペルカーボネートを含む。これらの漂白剤成分は、１又は複数の酸素漂白剤、及び選択した漂白剤により、１又は複数のアクティベーターを含み得る。その酸素漂白化合物は、典型的には約１％〜約25％のレベルで存在するであろう。一般に、漂白化合物は、非液体製剤、例えば粒状界面活性剤において任意的に加えられる成分である。本明細書に用いるための漂白剤成分は、酸素漂白剤及び当該技術で周知の他のものを含む界面活性組成物のために役立つ漂白剤のいずれかであり得る。本発明に適した漂白剤は、活性化された又は活性化されていない漂白剤であり得る。用いることができる酸素漂白剤の１つのカテゴリーは、ペルカルボン酸漂白剤及びその塩を含む。このクラスの剤の適切な例は、マグネシウムモノペルオキシフタレート６水和物、メタ−クロロペル安息香酸のマグネシウム塩、４−ノニルアミノ−４−オキソペルオキシブチル酸及びジペルオキシドデカンジオール酸を含む。このような漂白剤は、US 4,483,781，US 740,441，EP 0 133 354及びUS 4 ,412,934に開示される。極めて好ましい漂白剤は、US 4,634,551に記載される６ −ノニルアミノ−６−オキソペルオキシカプロン酸も含む。用いることができる他のカテゴリーの漂白剤は、ハロゲン漂白剤を含む。ハイポハライト漂白剤の例は、例えば、トリクロロイソシアヌール酸並びにナトリウム及びカリウムジクロロイソシアヌレート並びにＮ−クロロ及びＮ−ブロモアルカンスルホンアミドを含む。このような材料は、通常、最終製品の重量で0.5〜1 0重量％、好ましくは１〜５重量％で加えられる。過酸化水素放出剤は、漂白アクティベーター、例えばテトラアセチルエチレンジアミン（TAED）、ノナノイロキシベンゼンスルホネート（NOBS，US 4,412,934 ）、３，５−トリメチル−ヘキサノロキシベンゼンスルホネート(ISONOBS，EP 1 20 591)又はペンタアセチルグルコース(PAG)と組み合わせて用いることができ、過加水分解されて活性漂白種として過酸を形成し、漂白効果を改善する。更に、極めて適しているのは、漂白アクティベータ−Ｃ８（６−オクタンアミド−カプロイル）オキシベンゼン−スルホネート、Ｃ９（６−ノナノアミドカプロイル）オキシベンゼンスルホネート及びＣ10（６−デカンアミドカプロイル）オキシベンゼンスルホネート又はそれらの混合物である。また、適切なアクティベーターは、欧州特許出願第91870207.7に開示されるようなアシル化クエン酸エステルである。本発明による洗浄組成物に用いるための、ペルオキシ酸並びに漂白アクティベーター及び過酸素漂白化合物を含む漂白システムを含む、有用な漂白剤は、出願 USSN 08／136,628に記載される。過酸化水素は、洗浄及び／又はそそぎ工程の前又は後に、過酸化水素を発生させることができる酵素システム（即ち酵素及びそのための基質）を加えることによっても存在し得る。このように酵素系は、欧州特許出願EP 0 537 381に開示される。酸素漂白剤以外の漂白剤も当該技術において周知であり、本明細書に利用することができる。特に関心のある非酸素漂白剤の１つの型は、光活性化漂白剤、例えばスルホン化亜鉛及び／又はアルミニウムフタロシアニンを含む。これらの材料は、洗浄工程の間に基質上に析出し得る。酸素の存在下で、例えば日昼に乾燥するまで衣類をつるすことにより、光での刺激に基づき、スルホン化亜鉛フタロシアニンは活性化され、そして結果として、その基質は漂白される。好ましい亜鉛フタロシアニン及び光活性化漂白工程はUS 4,033,718に記載される。典型的には、界面活性組成物は、スルホン化亜鉛フタロシアニンの重量で約0.025％〜約1 .25％を含むであろう。漂白剤は、マンガン触媒も含み得る。マンガン触媒は、例えば、“Efficient manganese catalysts for low-temperature bleachin g”，Nature 369，1994，pp.637-639に記載される化合物の１つであり得る。泡サプレッサー他の任意成分は、シリコーン、及びシリカ−シリコーン混合物に代表される泡サプレッサーである。シリコーンは、一般に、アルキル化ポリシロキサン材料により代表され、シリカは通常、シリカエアロゲル及びキセロゲル並びに種々の型の疎水性シリカに例示される細かく分割された形態で用いられる。これらの材料は、粒子として組み込むことができ、ここでその泡サプレッサーは、有利には、水溶性又は水分散性の実質的に非表面活性剤不透過性の担体中に放出可能に組み込まれる。あるいは、泡サプレッサーは、液体担体に溶かし、又は分散させることができ、１又は複数の他の成分に、スプレーすることにより適用することができる。好ましいシリコーン泡抑制剤は、US 3,933,672に開示される。他の特に有用な泡サプレッサーは、ドイツ特許出願DTOS 2,646,126に記載される自己乳化性シリコーン泡サプレッサーである。このような化合物の例は、シリコーン−グリコールコポリマーであるDow Corningから市販されるDC-544である。特に好ましい泡抑制剤は、シリコーン油及び２−アルキル−アルカノールの混合物を含む泡サプレッサーである。適切な２−アルキル−アルカノールは、商標Isofol 12Rとして市販される２−ブチル−オクタノールである。このような泡サプレッサーシステムは、欧州特許出願EP 0 593 8 41に記載されている。特に好ましいシリコーン泡抑制剤は、欧州特許出願第92201649.8に記載される。前記組成物は、フュームト非多孔性シリカ、例えばAerosilRとの組み合わせにおけるシリコーン／シリカ混合物を含み得る。上述の泡サプレッサーは、通常、組成物の重量で0.001〜２重量％、好ましくは0.01〜１重量％のレベルで用いられる。他の成分本界面活性組成物中に用いられる他の成分、例えば土懸濁剤、土遊離剤、光増白剤、研磨剤、殺菌剤、変色抑制剤、着色剤、及び／又は被包化又は非被包化香料を用いることができる。特に適した被包化材料は、GB 1,464,616に記載されるようなポリサッカライド及びポリヒドロキシ化合物のマトリックスからなる水溶性カプセルである。他の適切な水溶性被包材料は、US 3,455,838に記載されるような置換化ジカルボン酸の非ゼラチン化デンプン酸エステル由来のデキストリンを含む。これらの酸−エステルデキストリンは、好ましくは、ろう質メイズ、ろう質モロコシ、サゴ、タピオカ及びポテトのようなデンプンから調製される。前記被包材料の適切な例は、National Starchにより製造されたN-Lokを含む。N-Lok被包材料は、改質化トウモロコシデンプン及びグルコースからなる。デンプンは、一種官能性置換化基、例えばオクテニルコハク酸無水物を加えることにより改質される。適した抗再析出剤及び土懸濁剤は、セルロース誘導体、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース及びヒドロキシエチルセルロース、並びにホモ −又はコポリマーのポリカルボン酸又はそれらの塩を含む。この型のポリマーは、ビルダーとして先に言及されるポリアクリレート及び無水マレイン酸−アクリル酸コポリマー、並びにエチレンとの無水マレイン酸のコポリマー、メチルビニルエーテル又はメタクリル酸、を含み、ここでその無水マレイン酸はそのコポリマーの少くとも20モル％を構成する。これらの材料は、通常、組成物の重量で、 0.5〜10重量％、より好ましくは0.75〜８重量％、最も好ましくは１〜６重量％のレベルで用いられる。好ましい光増白剤は、陰イオン性の特徴であり、その例は、二ナトリウム４，４’−ビス−（２−ジエタノールアミノ−４−アニリノ−ｓ−トリアジン−６− イルアミノ）スチルベン−２：２’ジスルホネート、二ナトリウム４，−４’− ビス−（２−モルホリノ−４−アニリノ−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ−スチルベン−２：２’−ジスルホネート、二ナトリウム４，４’−ビス−（２，４ −ジアニリノ−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２：２’−ジスルホネート、−ナトリウム４’，４”−ビス−（２，４−ジアニリノ−ｓ−トリ −アジン−６イルアミノ）スチルベン−２−スルホネート、二ナトリウム４，４ ’−ビス−（２−アニリノ−４−（Ｎ−メチル−Ｎ−２−ヒドロキシエチルアミノ）−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２，２’−ジスルホネート、二ナトリウム４，４’−ビス−（４−フェニル−２，１，３−トリアゾール −２−イル）−スチルベン−２，２′ジスルホネート、二ナトリウム４，４’ビス（２−アニリノ−４−（１−メチル−２−ヒドロキシエチルアミノ）−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２，２’ジスルホネート、ナトリウム２（スチルビル−４”−（ナフト−１’，２’：４，５）−１，２，３，−トリアゾール−２”−スルホネート及び４，４’−ビス（２−スルホスチリル）ビフェニルである。他の有用なポリマー材料は、ポリエチレングリコール、特に分子量1000〜1000 0、より好ましくは2000〜8000、最も好ましくは約4000のものである。これらは、0.20〜５重量％、より好ましくは0.25〜2.5重量％のレベルで用いられる。これらのポリマー及び上述のホモ−又はコポリマーのポリカルボン酸塩は、白さの保守、布帛灰の析出、及び遷移金属不純物の存在下での粘土、タンパク質含有及び酸化性の土の洗浄能力を改善するために価値がある。本発明の組成物に役立つ土遊離剤は、慣用的には、種々の配置のエチレングリコール及び／又はプロピレングリコール単位のテレフタル酸のコポリマー又はターポリマーである。このようなポリマーの例は、US 4,116,885及び4,711,730及びEP 0 272 033に開示される。EP 0 272 033による特に好ましいポリマーは、式： (CH3(PEG)43)0.75(POH)0.25〔T-PO)2.8(T-PEG)0.4〕T(POH)0.25((PEG)43CH3 )0.75 （式中、PEGは、-(OC2H4)O−であり、POは(OC3H6O)であり、そしてＴは(pOOC6 H4CO)である。）を有する。また、ジメチルテレフタレート、ジメチルスルホイソフタレート、エチレングリコール及び１，２−プロパンジオールのランダムコポリマーのような改変させたポリエステルも極めて有用である。それら末端の基は、第１にスルホベンゾエート及び第２にエチレングリコール及び／又は１，２−プロパンジオールのモノエステルからなる。その目的は、スルホベンゾエート基により両端がキャップされたポリマーを得ることであり、“第１に”、本文脈において本明細書における前記コポリマーのほとんどはスルホベンゾエート基により端がキャップされるであろう。しかしながら、いくつかのコポリマーは、完全にキャップされるわけではないであろう。それゆえ、それらの端の基は、エチレングリコール及び／又は１，２−プロパンジオールのモノエステルからなり得、それゆえ“第２に”、このような種からなる。本明細書で選択されるポリエステルは、約46重量％のジメチルテレフタル酸、約16重量％の１，２−プロパンジオール、約10重量％のエチレングリコール、約 13重量％のジメチルスルホ安息香酸、及び約15重量％のスルホイソフタル酸を含み、約3000の分子量を有する。ポリエステル及びそれらの調製方法は、EP 311 342に詳細に記載される。軟化剤布帛軟化剤も、本発明による洗濯用界面活性組成物に組み込むことができる。これらの剤は、無機又は有機の型でもよい。無機軟化剤は、GB-A-1 400 898及び US 5,019,292に開示されるスメクタイト粘土により例示される。有機布帛軟化剤は、GB-A １ 514 276及びEP 0 011 340に開示される水不溶性第３級アミンを含み、それらのモノＣ12−Ｃ14第４級アンモニウム塩との組合せはEP-B-0 026 528 に開示され、ジ長鎖アミドはEP 0 242 919に開示される。布帛軟化システムの他の有用な有機成分は、EP 0 299 575及び0 313 146に開示される高分子量ポリエチレンオキシド材料を含む。スメクタイト粘土のレベルは、通常、５〜15重量％、より好ましくは８〜12重量％であり、ここでその材料は、その製剤の残りに、乾燥混合成分として添加される。有機布帛軟化剤、例えば水不溶性第３級アミン又はジ長鎖アミド材料は、 0.5〜５重量％、通常１〜３重量％のレベルで組み込まれ、高分子量ポリエチレンオキシド材料及び水溶性陽イオン材料は、0.1〜２重量％、通常、0.15〜1.5重量％のレベルで加えられる。これらの材料は、通常、組成物の噴霧乾燥された部分に加えられるが、いくつかの場合は、それらを乾燥混合粒子としてより便利に加えることができ、又はそれらをその組成物の他の固体成分に、溶解した液体としてスプレーすることができる。ポリマー染料転移抑制剤本発明による界面活性組成物は、0.001〜10重量％、好ましくは0.01〜２重量％、より好ましくは0.05〜１重量％のポリマー染料転移抑制剤も含み得る。前記ポリマー染料転移抑制剤は、通常、色のついた布帛からそれと共に洗浄される布帛に染料が移るのを防ぐために、界面活性組成物に加えられる。これらのポリマーは、その染料がその洗浄において他の物に付着する機会を有する前に染色された布帛から洗い落とされる逃げた染料を複合体化し又は吸着する能力を有する。特に適したポリマー染料転移抑制剤は、ポリアミンＮ−オキシドポリマー、Ｎ −ビニルピロリドン及びＮ−ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリビニルオキサゾリドン及びポリビニルイミダゾール又はそれらの混合物である。このようなポリマーの添加も本発明による酵素の能力を増強させる。本発明による界面活性組成物は、液体、ペースト、ゲル、バー又は粒子形態であり得る。非ダスト性粒子は、例えばUS 4,106,991及び4,661,452(両方ともNovo Industr i A/S)に開示されるように作ることができ、任意に、当該技術で周知の方法によりコートすることができる。ろう質コーティング材料の例は、平均分子量1000〜 20000のポリ（エチレンオキシド）製品；16〜50のエチレンオキシド単位を有するエトキシ化ノニルフェノール；そのアルコールが12〜20の炭素原子を含み、15 〜80のエチレンオキシド単位があるエトキシ化脂肪アルコール；脂肪アルコール；脂肪酸；並びに脂肪酸のモノ−及びジ−及びトリグリセリドである。流動床技術による適用に適したフィルム形成性コーティング材料の例はGB 1483591に供される。本発明による粒状組成物は、“コンパクト形態”でもあり得、即ちそれらは慣用的な粒状界面活性剤より比較的高密度、即ち550〜950ｇ／ｌを有し得；このような場合、本発明による粒状界面活性組成物は、慣用的な粒状界面活性剤と比べて、少い量の“無機フィラー塩”を含むであろう；典型的なフィラー塩は、スルフェート及びクロライドのアルカリ土類金属塩、典型的には、硫酸ナトリウムであり；“コンパクト”界面活性剤は、典型的には、10％以下のフィラー塩を含む。本発明による液体組成物は、“濃縮形態”でもあり得；このような場合、本発明による液体界面活性組成物は、慣用的な液体界面活性剤と比べて少い量の水を含むであろう。典型的には、濃縮液体界面活性剤の水分は、界面活性剤の重量で30％未満、より好ましくは20％未満、最も好ましくは10％未満である。本発明の組成物は、例えば、手及び機械的洗濯界面活性組成物、例えば洗濯添加組成物及び染色された布帛のプレ処理に用いるのに適した組成物、リンス添加布帛転化組成物、及び一般的な家庭用硬質表面洗浄及び皿洗いに用いるための組成物として調剤することができる。以下の例は、本発明についての組成物を例示するが、必ずしも、本発明の範囲を限定し又は規定することを意味しない。本界面活性組成物において、略称される成分は、以下の意味を有する： LAS ：ナトリウム直鎖Ｃ12アルキルベンゼンスルホネート TAS ：ナトリウムタローアルキルスルフェート XYAS：ナトリウムC1X-C1Yアルキルスルフェート SS ：式２−ブチルオクタン酸の第２セッケン界面活性剤 25EY：平均Ｙモルのエチレンオキシドと縮合したＣ12−Ｃ15の主に直鎖の第１級アルコール 45EY：平均Ｙモルのエチレンオキシドと縮合したＣ14−Ｃ15の主に直鎖の第１級アルコール XYEZS：１分子当り平均Ｚモルのエチレンオキシドと縮合したC1X -C1Yナトリウムアルキルスルフェート非イオン性：BASF Gmbhにより商標名Plurafax LF404で売られる平均3.8のエトキシ化の程度及び平均4.5のプロポキシ化の程度を有するＣ13−Ｃ15混合エトキシ化／プロポキシ化脂肪アルコール CFAA：Ｃ12−Ｃ14アルキルＮ−メチルグルカミド TFAA：Ｃ16−Ｃ18アルキルＮ−メチルグルカミドシリケート：アモルファスナトリウムシリケート（SiO2：Na2O比＝2.0） NaSKS-6：式d-Na2Si2O5の結晶性層状シリケートカーボネート：無水炭酸ナトリウムホスフェート：ナトリウムトリポリホスフェート MA／AA：１：４マレイン酸／アクリル酸のコポリマー、平均分子量約80,000 ポリアクリレート：BASF Gmbhにより商標名PA30で売られている平均分子量8,000 のポリアクリレートホモポリマーゼオライトＡ：１〜10マイクロメーターの範囲の主な粒径を有する式Na12(AlO2S iO2)12・27H2Oの水和したナトリウムアミノシリケートシトレート：クエン酸三ナトリウム二水和物クエン酸：クエン酸ペルボレート：無水ナトリウムペルボレート一水和物漂白剤、経験上の式NaBO2 ・H2O2 PB４：無水ナトリウムペルボレート四水和物ペルカーボネート：経験式2Na2CO3・3H2O2の無水ナトリウムペルカーボネート漂白剤 TAED：テトラアセチルエチレンジアミン CMC ：ナトリウムカルボキシメチルセルロース DETPMP：商標名Dequest 2060でMonsantoにより市販されるジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸） PVP：ポリビニルピロリドンポリマー EDDS：エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸、ナトリウム塩の形態の〔Ｓ，Ｓ〕異性体泡サプレッサー：25％パラフィンワックスMpt 50℃、17％疎水性シリカ、58％パラフィン油粒状泡サプレッサー：粒状形態の12％シリコーン／シリカ、18％ステアリルアルコール、70％デンプンスルフェート：無水硫酸ナトリウム HMWPEO：高分子量ポリエチレンオキシド TAE 25：タローアルコールエトキシレート（25）界面活性剤例Ｉ本発明による粒状布帛洗浄組成物は、次の通り調製することができる：ナトリウム直鎖Ｃｌ2アルキル 6.5 ベンゼンスルホネート硫酸ナトリウム 15.0 ゼオライトＡ 26.0 ナトリウムニトリロトリアセテート 5.0 本発明の酵素 0.1 PVP 0.5 TAED 3.0 ホウ酸 4.0 ペルボレート 18.0 フェノールスルホネート 0.1 少量成分 100まで界面活性剤例II 本発明によるコンパクト粒状布帛洗浄組成物（密度８００ｇ／ｌ）は、次の通り調製することができる： 45AS 8.0 25E3S 2.0 25E5 3.0 25E3 3.0 TFAA 2.5 ゼオライトＡ 17.0 NaSKS-6 12.0 クエン酸 3.0 カーボネート 7.0 MA／AA 5.0 CMC 0.4 本発明の酵素 0.1 TAED 6.0 ペルカーボネート 22.0 EDDS 0.3 粒状泡サプレッサ− 3.5 水／少量成分 100％まで界面活性剤例III 有色布帛の洗濯に特に役立つ本発明による粒状布帛洗浄組成物は次の通り調製した： LAS 10.7 − TAS 2.4 − TFAA − 4.0 45AS 3.1 10.0 45E7 4.0 − 25E3S − 3.0 68E11 1.8 − 25E5 − 8.0 シトレート 15.0 7.0 カーボネート − 10 クエン酸 2.5 3.0 ゼオライトＡ 32.1 25.0 Na-SKS-6 − 9.0 MA／AA 5.0 5.0 DETPMP 0.2 0.8 本発明の酵素 0.10 0.05 シリケート 2.5 − スルフェート 5.2 3.0 PVP 0.5 − ビニル−イミダゾール及びビニル− − 0.2 ピロリドンのポリ（４−ビニルピリジン）−Ｎ−オキシド／コポリマーペルボレート 1.0 − フェノールスルホネート 0.2 − 水／少量成分 100％まで界面活性剤例IV “洗浄を通して軟化する”能力を供する本発明による粒状布帛洗浄組成物は、次の通り調製することができる： 45AS − 10.0 LAS 7.6 − 68AS 1.3 − 45E7 4.0 − 25E3 − 5.0 ココ−アルキル−ジメチルヒドロキ 1.4 1.0 シ−エチルアンモニウムクロライドシトレート 5.0 3.0 Na-SKS-6 − 11.0 ゼオライトＡ 15.0 15.0 MA／AA 4.0 4.0 DETPMP 0.4 0.4 ペルボレート 15.0 − ペルカルボネート − 15.0 TAED 5.0 5.0 スメクタイト粘土 10.0 10.0 HMWPEO − 0.1 本発明の酵素 0.10 0.05 シリケート 3.0 5.0 カーボネート 10.0 10.0 粒状泡サプレッサー 1.0 4.0 CMC 0.2 0.1 水／少量成分 100％まで界面活性剤例Ｖ本発明による重務液体布帛洗浄組成物は次のように調製することができる： I II LAS酸形態 − 25.0 クエン酸 5.0 2.0 25AS酸形態 8.0 − 25AE2S酸形態 3.0 − 25AE7 8.0 − CFAA 5 − DETPMP 1.0 1.0 脂肪酸 8 − オレイン酸 − 1.0 エタノール 4.0 6.0 プロパンジオール 2.0 6.0 本発明の酵素 0.10 0.05 ココ−アルキルジメチルヒドロキシ − 3.0 エチルアンモニウムクロライドスメクタイト粘土 − 5.0 PVP 2.0 − 水／少量成分 100％まで織物への適用他の実施形態において、本発明は、バイオ・ポリッシング工程における本発明のエンドグルカナーゼの使用に関する。バイオ・ポリッシングは、布帛の湿潤能を失うことなく取り扱い及び外観に関して布帛の質を改善するヤーン表面の特定の処理である。バイオ・ポリッシングの最も重要な効果は、けば及び毛玉形成の減少、光沢／つやの増加、布帛の取り扱いの改善、柔らかさの持ちの増加及び水吸収性の変化を特徴とし得る。バイオ・ポリッシングは、通常、編まれた及び織られた布帛の製造の湿潤工程においておこる。湿潤プロセッシングは、例えば糊抜き、すりみがき、漂白、洗浄、乾燥／型付け及び仕上げのようなステップを含む。これらのステップの各々の間、布帛は、多少、機械的作用にかけられる。一般に、織物を編み又は織った後、その布帛は糊抜き段階にかけられ、次にすりみがき段階等が行われる。糊抜きは、織物から糊を除去する作用である。機械織機で織る前に、ワープヤーンは、しばしば、それらの引張り強さを増加させるために糊デンプン又はデンプン誘導体でコートされる。織った後、糊コーティングは、均一かつ洗浄耐性の結果を確実にするために、布帛を更に処理する前に除去されなければならない。バイオ・ポリッシングの効果を達成するために、セルロース分解及び機械的作用の組合せが要求されることが知られている。セルラーゼでの処理を軟化剤での慣用的な処理と組み合わせる場合に“超−柔かさ”が達成され得ることも知られている。セルロース布帛のバイオ・ポリッシングのための本発明のエンドグルカナーゼの使用は有利であると考えられ、例えばより完全なポリッシングを達成することができる。バイオ−ポリッシングは、例えばWO 93／20278に記載される方法を適用することにより得ることができる。石洗浄軽石の存在下で布帛から作られたデニムもしくはジーンズを洗浄してその布帛の色の要求される局所的な明るさを供することにより、又は布帛を酵素により、特にセルロース分解酵素で処理することにより、染色された布帛、特にデニム又はジーンズにおいて゛“ストーン・ウォッシュ”の外観（色の局所的すりへり）を供することが知られている。本発明のエンドグルカナーゼでの処理は、US 4,8 32,864に開示されるように単独で、伝統的な工程において要求されるより少い量の軽石と一緒に、又はWO 95／09225に開示されるようにパーライトと一緒に行うことができる。パルプ及び紙への適用製紙工業において、本発明のエンドグルカナーゼは、例えば次のように有利に適用することができる： −木の皮をはぐため：機械ドラムで木の皮をはぐ前にエンドグルカナーゼでの前処理は形成層を分解することができ、エネルギーの節約に有利である。 −デフィブレーションのため：精製及びビーティングの前のエンドグルカナーゼでのセルロース繊維含有材料の処理は、繊維間表面上のセルラーゼの加水分解効果によりエネルギー消費を減少させることができる。エンドグルカナーゼの使用は、本発明の酵素組成物は繊維壁を浸透する高い能力を有し得ると信じられるので、周知の酵素の使用と比べてエネルギー節約を改良し得る。 −繊維改質のため、即ち繊維壁を横切る部分的加水分解が必要とされ、（例えばきめの細かい繊維をよりフレキシブルにするために）より深く浸透する酵素を要求する繊維特性の改善のため：高収量のパルプ又はリサイクルしたパルプの混合物のために繊維の深い処理が今まで可能でなかった。これは、繊維壁の孔マトリックスの物理的制限による酵素分子の通過を防ぐ繊維壁構造の性質に帰する。本エンドグルカナーゼは繊維壁に浸透することができると考えられる。 −排水性の改良のため、製紙用パルプの排水性は、加水分解酵素、例えばセルラーゼでのパルプの処理により改良することができる。本エンドグルカナーゼの使用はより有効であり得、例えば繊維間及び製紙機械のワイヤーメッシュ内の中空空間をふさぐことにより排水の比率を制限する（繊維デブリスからなる）微粉画分中の強力に水和された微繊維の束を遊離させる高い程度を生ずる。パルプをセルラーゼ処理にかけた場合、カナダ標準フリーネス(Canadian standard freen ess)(CSF)は増加し、Schorper-Riegler排水インデックス（drainage index）は減少する。例えば米国特許4,923,565;TAPPI T227，SCAN C19:65．enceを参照のこと。 −繊維間結合のために：加水分解酵素は、繊維間結合を改善するための製紙用パルプの製造に適用される。酵素は不純物、例えばセルロース分解性デブリスのための繊維表面をそそぎ、これにより繊維壁への結合と共に露出したセルロースの領域を増強し、これにより繊維間水素結合能を改善する。この工程は、デホーニフィケーションとも呼ばれる。セルラーゼ含有酵素調製物で作られた紙及びボードは、改良された強度又は減少したグラメージ（gr ammage）、より平滑な表面及び改良された印刷性を有し得る。 −酵素によりインキを抜くため：セルラーゼのような加水分解酵素の使用によるパルピングの間又はそれに基づく再生紙の部分的な加水分解はインク粒子の除去及び塊形成を容易にすることが知られている。本エンドグルカナーゼの使用は、繊維壁のフィブリル様マトリックスへの酵素分子のより優れた浸透により表面構造からインクをより有効にゆるめることができ、これによりその表面を可欠化し、それによりインク粒子は有効に遊離し得る。遊離したインク粒子の凝集も、繊維を源とするインク粒子に結合して見い出されるセルロース分解フラグメントのより有効な加水分解のため、改善れる。リグノセルロースパルプの処理は、例えばWO 91／14819，WO 91／14822，WO 9 2／17573及びWO 92／18688に記載される。植物材料の分解更に他の実施形態において、本発明は、植物材料、例えば細胞壁のデグラデーションのための本発明によるエンドグルカナーゼ及び／又は酵素調製物の使用に関する。本発明の新規エンドグルカナーゼ及び／又は酵素調製物は、収率を増加させるために、ワイン、果実又は野菜ジュースの調製に役立つ。本発明によるエンドグルカナーゼは、種々の植物細胞壁由来の材料又は廃棄材料、例えば農業残留物、例えば麦わら、トウモロコシの穂軸、完全な穀物の植物、ナッツのから、草、植物外皮、マメの外皮、消費穀物、シュガービートパルプ等の酵素的加水分解のためにも適用できる。異なる種類のプロセッシングを改善するため、穀類からのβ−グルカン又はβ−グルカンオリゴマーの精製のような他の成分の精製又は抽出を容易にするため、飼料価値を改善するため、水結合能を減少させるため、消費した水生植物の分解性を改善するため、例えば草及びコーンのエンシレージ等への転化を改善するために、分解することができる。実施例本発明は、以下の例に更に詳述される。これらは、クレームされる本発明の範囲を限定するつもりはない。材料及び方法セルロース分解活性本発明のセルラーゼ変異体は、改良された能力を示す。変異体のいくつかは触媒活性の増加に関して改良された能力を示し得る。本発明の文脈において、セルラーゼ活性は、S-CEVUにおいて発現させることができる。セルロース分解酵素はCMCを加水分解し、それによりインキュベーション混合物の粘度を増加させる。生じた粘度の減少は、バイブレーション粘度計( 例えば、Sofraser，FranceからのMIVI 3000)により決定することができる。 S-CEVUに関して測定したセルロース分解活性の決定は、以下の分析法（アッセイ）に従って行うことができる：S-CEVUアッセイは、サンプルがカルボキシメチルセルロース(CMC)の溶液の粘度を減少させる能力を測定することによりサンプル中に存在する触媒活性の量を定量する。そのアッセイは、CMC(カルボキシメチルセルロースHercules７LFD)基質；酵素濃度約0.15 S-CEVU/mlの粘度を減少させるための比較酵素標準を用いて、40℃、pH 7.5、0.1Ｍリン酸緩衝液；時間30分で行われる。実施例１セルラーゼ変異体の調製開示される配列アラインメント（表１）及びコンピューターモデリング法に基づき、位置119はセルラーゼ変異体を作るための関心の特定の点として同定された。位置119(セルラーゼナンバリング)は基質から３Å以内に位置する。位置119 において、野生型ヒュミコラ・インソレンスセルラーゼはヒスチジン残基（Ｈ）を保持するが、野生型チエラビア・テルレストリスセルラーゼはグルタミン残基（Ｑ）を保持する。この実験において、ヒスチジンは、チエラビア・テルレストリスセルラーゼ中のグルタミンにかわって置換した（それにより、セルラーゼ変異体チエラビア・テルレストリス／Q119Hを得た）。得られた変異体を比活性についてテストした。全てのヒュミコラ・インソレンス変異体は、他に示されなければStratageneからのChameleon^TM二本鎖部位特異的変異誘発キットの適用により作製される。次の合成オリゴヌクレオチド：を選択プライマーとして用いた。Ｓ／Ｍはプラスミドのβ−ラクタマーゼ遺伝子中のScaＩ部位をMluＩ部位で置きかえ、Ｍ／Ｓは逆である。後者は、最初の選択プライマーにより作られた変異体において２次変異を導入するのに用いられる。チエラビア・テルレスチスセルラーゼ変異体の作製のため、DSM10811として寄託されたプラスミドから得ることができるチエラビア・テルレスチスEGVセルラーゼcDNAを用いた。DSM 10811は、ブダペスト条約に従って、1995年６月30日にDeutsche Sammlung von Mikroorganis men und Zellkulturenに寄託した。そのプラスミドを制限エンドヌクレアーゼBa mHＩ及びNotＩで消化した。4153bpベクター部分及び1211bp BamHＩ−NotＩフラグメントを単離した。1211bpフラグメントの等しい部分を各々HgiAＩ及びEcoRＶで消化し、487bp BamHＩ−HgiAＩ及び690bp EcoRＶ−NotＩフラグメントを単離した。これらのフラグメント及びベクター部分を２つの一本鎖DNAオリゴマー：のアニーリングから生ずる５倍モル過剰の合成DNAフラグメントの存在下で連結した。その連結混合物を大腸菌株XL１に移し、生じた形質転換体からチエラビア・テルレストリス／Q119Hを単離し、DNA配列決定により確認した。全てのセルラーゼ変異体は、その遺伝子をクローニングし、そして真菌のアミラーゼプロモーターとＡ．ニゲルからのAMGターミネーターとの間に挿入した遺伝子を有するプラスミドを用いてアスペルギルス・オリザエに遺伝子をクローニングすることにより作った〔Christensen，T.W6ldike，H.Boel，E.，Mortensen，S.B.，Hjortshffj，K.，T him，L．and Hansen，M.T．(1988)Biotechnology６:1419-1422〕。セルロース結合ドメインCBDを有するセルラーゼを、それらのAvicelへの結合を利用することにより精製した。その生産生物からの細胞外流体の分離による発酵の後に、そのクローン化した産物を回収した。次に、そのセルラーゼを、20mM リン酸ナトリウムpH 7.5でのスラリー中のAvicel 150ｇを用いるアフィニティークロマトグラフィーにより高度に精製した。Avicelスラリーを、全部で約１ｇのタンパク質を含む粗発酵ブイヨンと混合した。４℃で20分、混合した後、Avicel結合酵素を50×200mmの寸法のカラム(全体で約400ml)にパッキングする。そのカラムを200mlの緩衝液で洗い、次にタンパク質がもはや溶出しなくなるまで同じ緩衝液中0.5ＭのNaClで洗い、500mlの緩衝液（20mM Tris pH 8.5）で洗う。最後に、純粋な十分の長さの酵素を１％トリエチルアミンpH11.8で溶出する。その溶出した酵素溶液をpH８に調節し、膜DOW GR61PP（20kDカットオフのポリプロピレン）でのAmiconセルユニットを用いて１ml当り５mgタンパク質まで濃縮する。その酵素を全て精製し、SDS-PAGEで単一バンドを作った。自然にCBDを欠如するかもしくはリンカーがタンパク質分解により開裂されているセルラーゼ、又は、触媒ドメインの後に停止コドンを挿入することによりCB Sが除去されているセルラーゼはAvicelを用いて精製することができない。細胞外タンパク質を生産生物のない状態で回収する。そのコアセルラーゼを、カチオン交換クロマトグラフィーによりアスペルギルス（Aspergillus）タンパク質のないように精製した。その発酵ブイヨンをpH 3.5に調節し、ろ過して沈殿したタンパク質を除く。次にそのタンパク質を、その溶出液の伝導度が1000mS／cm未満になるまで６kDカットオフのDOW GR81PP膜で限外ろ過した（濃縮し水で洗う）。そのサンプルを、最後に、20mMクエン酸緩衝液pH 3.5で平衡化したＳ−セファロースカラムに適用した。その酵素は、この低いpHでS-Sepharoseに結合するであろう。そしてそれは０〜500mMのNaCl勾配を用いて単一ピークとして溶出される。その溶出された純粋な酵素をDOW GR81PP膜のAmiconセルで濃縮した。全ての精製したセルラーゼがSDS-PAGEで単一バンドを供した。比活性データを以下の表に要約する：この実験から、変異Q119Hをチエラビア・テルレストリスセルラーゼに導入することにより、生じたセルラーゼ変異体の比活性が相同なヒュミコラ・インソレンスセルラーゼのそれのレベルまで増加したことを見ることができる。実施例２アルカリ能力プロフィールが改良されたチエラビア・テルレストリス変異体本実験において、チエラビア・テルレストリス／Q119Dを、以下の作製手順を用いた他は、実施例１に記載される通り作製した：容易なカセット交換及び標準的なプライマー利用性のため、CT1コーディングDNAにＣ末端Xba1部位を供し、以下に記載されるようにpCaHj418ベクターにサグクローン化した。PCT1を、２つのプライマーを適用するa PwoポリメラーゼPCR，94 C2’-3x(94 C，30”-72C，1’)-25x(94 C ，30”-55 C，30”-72，C1’)-72 C，５’におけるテンプレートとして用いた。生じた718bp PCR産物をSall及びXba1で消化し、その165bpフラグメントを単離した。このフラグメントをpCT1-2からの833bp BamH1-Sal1フラグメントと一緒に、pCaHj418の4.1kb Xba1-BamHlベクターフラグメントに連結した。この連結から、pCT1418を大腸菌形質転換体から単離した。 PCT2を、テンプレートとしてpCT1418、選択プライマーとしてＳ／Ｍプライマー及び以下の変異誘発プライマー：で、上述のようなChameleon^TM二本鎖部位特異的変異誘発キットにより作製した。上手く変異されたプラスミドpCT2を単離し、DNA配列決定により確認し、アスペルギルス・オリザエ株JaL228に形質転換した。チエラビア・テルレストリスセルラーゼ及びチエラビア・テルレストリス／Q1 19D変異体をpH 7.0及びpH10.0において実施例９に記載されるようにPASCに対する活性についてテストした。結果を以下の表に示す。それは、pH７における活性と比べたpH10における活性を示す。これは、チエラビア・テルレストリス／Q119D変異体が親チエラビア・テルレストリスと比べて相対的によりアルカリ活性を有することを示す。実施例３セルラーゼハイブリッド変異体の作製プラスミドpCT3は、チエラビア・テルレストリスエンドグルカナーゼコア酵素をコードするDNA及び次のヒュミコラ・グリセア（Humicola grisea ）のリンカーCBDを含む。 pCT3を、PWOポリメラーゼを適用する配列オーバーラップエクステンションPCR により作製した。ヒュミコラ・グリセアのcDNAクローンから、415bpフラグメントを、以下のプライマー：により作った。（実施例２に開示される）pCT1418から、876bp PCRフラグメントを、以下のプライマー：により作った。両反応のために、次の設定：96＿C，1’-3x(94＿C，30”-50C，1’-72＿C，1 ’)-25x(94＿C，30”-61＿C，30”-72＿C，1’)-72＿C，7’を用いた。その単離されたPCRフラグメントを、プライマー101621及び107819とのアセンブリーPCR反応においてテンプレートとして適用した：94＿C，1’-3x(94＿C，30 ”-70＿C，1’-72＿C，2’)-20x(94＿C，30”-61＿C，30”-72＿C，1，5”)-72 ＿C，7’。生じた1261bp PCR産物を制限酵素BamH1及びXba1により単離・切断し、生じた1172bp DNAフラグメントを単離してBamH1-Xba1消化pCaHj418の4.1kbベクターフラグメントに連結した。正確なクローンを単離し、上述の連結反応により生じた大腸菌XL1形質転換体から単離したプラスミドのDNA配列決定により確認した。ヒュミコラ・グリセアのcDNA配列：実施例４ハイブリッドセルラーゼの変異体の作製プラスミドpPsF45はＨ．インソレンスEGVエンドグルカナーゼシグナルペプチドが先にあるシュードモナス・セルロリチカエンドグルカナーゼコア酵素をコードするDNA及び次の同酵素のリンカーCBDを含む。このハイブリッド酵素の２つの変異体を、以下の変異誘発プライマー：：PsF45／H15S及びPsF45／Q119H（セルラーゼナンバリング）。テンプレート配列からの誘導はボールドで示される。選択プライマーは、プラスミドのラクタマーゼ遺伝子内のユニークSca1部位を Mlu1部位に変換した：２つの変異体をDNA配列決定により確認し、各々の変異体の１つの正確な型を同定した。変異配列pPsF45H15S及びpPsF45Q119Hを有する２つのプラスミドを用いて、AMD S選択プラスミドpToC202と一緒にＡ．オリザエ株JaL142を形質転換した。生じた形質転換体から、LaC2829及びLaC2830を、胞子による３回の再単離ステップの後に単離した。実施例５ジスルフィド架橋の除去ジスルフィド架橋はタンパク質構造を安定化することが知られている。セルラーゼにおけるジスルフィド架橋の除去は、重大な活性を保持しつつ、酵素を不安定（熱安定性）にするであろう。これは、酵素の迅速な不活性化が好まれる適用、例えば、デニム又は織物への適用又は低温工程における適用に役立ち得る。この例において、ヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼ及びヒュミコラ・インソレンスセルラーゼの５つの変異体を、ジスルフィド架橋に関連する１つ又は両方の残基を変異することにより作製した。材料及び方法下に開示されるように比活性を測定した。その酵素の融点を、Differential Scanning Calometry，D SCを用いて測定した。DSCは、一定のスキャン比率でMicroCalc Inc．MC熱量計を用いて、１時間当り90℃の比率で20℃から90℃に温度を上げて、中性pH(7.0)で行った。結果を以下の表に示す。これは、ジスルフィド架橋の除去はかなり低い融点の変異体を導くが、重大な活性は保持していることを示す。実施例６基質から５Å未満の結合クレフト中の保存された残基の変異基質から５Åの距離以内にある位置を、表１の配列アラインメントと比較した時、これらの位置のアミノ酸の型は、次の位置：６，７，８，９，10，11，12， 18，45，112，114，121，127，128，130，132，147，148，149についてアラインされたセルラーゼにおいて保存されている。保存されている残基は、通常、活性に極めて重要であると考えられるが、本発明者らは、重大な活性を維持しながら特定の可変性が許容されることを見い出した。２つの残基Ｄ10及びD121（セルラーゼナンバリング）のみが合理的な活性を維持するのに必要である。ヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼの変異体を調製し、材料及び方法に開示されるように比活性を測定した。変異の型及び変異体比活性を以下の表に要約する：この実験から、結合クレフト内の保存された残基の変異は、セルラーゼ変異体の大きな活性を保持しつつ行うことができることがわかる。実施例７基質から５Å未満の結合クレフト内の非保存性残基の変異表１の配列アラインメント及び開示されたコンピューターモデリング法に基づき、基質から５Åの距離以内に位置し、そのうちのアラインされた配列の中で保存されていない以下の残基をセルラーゼ変異体を作るための関心の点として同定した。この実験において、基質から５Å以下に位置する非保存性残基をヒュミコラ・インソレンスEGVセルラーゼにおいて改変し、その比活性を材料及び方法下に記載されるように測定した。変異の型及び変異体比活性を以下の表に要約する：この実験から、結合クレフト内の非保存性残基のほとんどがセルラーゼの活性の全て又はほとんどを保持しつつ変異させることができることがわかる。実施例８界面活性剤における陰イオン性界面活性剤に対する耐性Ａ．本発明の変異体は、陰イオン性界面活性剤に対して変化したセンシティビティーに関して改良された能力を示し得る。陰イオン性界面活性剤は、界面活性組成物に頻繁に組み込まれる産物である。今までテストされたセルラーゼの非ホールディング化は、タンパク質の固有の蛍光における減衰によって達成される。固有の蛍光はTrp側鎖（及びより少い程度、Tyr側鎖）由来であり、側鎖環境の疎水性にセンシティブである。非ホールディング化は、側鎖が溶媒に露出されるにつれてより親水性環境を導き、これは蛍光を消光する。蛍光は、Perkin／Elmer ^TM LS50蛍光スペクトロメーターでとらえられる。実際、非ホールディング化への蛍光の大きな変化は、280nmにおける励起及び345nm における放射により得られる。（シグナルの大きさを制御する）スリット幅は、通常、５μｇ／mlのタンパク質濃度における放射及び励起の両方について５nmである。蛍光は、循還水浴でサーモスタット調温する２mlクオーツキュベット内で測定され、小さな磁石で撹拌される。マグネットスターラーはスペクトロメーター内におく。非ホールド化は、利用できるソフトウェアーを用いて実際の時間において行うことができる。（５〜10分未満内に完了する）迅速な非ホールド化は、Time Dri veオプションにおいてモニターされる。ここでは、蛍光は、数（２〜５）秒毎に測定される。より非ホールド化を遅くするために、各々のキュベットの蛍光を30 秒毎に測定するWavelength Programオプションを用いてキュベットホルダー内で４つのキュベットを一度に測定することができる。全ての場合において、非ホールド化は、少量（典型的に50μｌ）の濃酵素、溶液をサーモスタット調温したキュベット溶液に加えることにより開始され、ここでは迅速な磁石の回転により数秒以内に混合が完了する。ソフトウェアープログラムGraphPad Prismにおいてデータを測定する。非ホールド化は、非ホールド化の単一半減期（又は非ホールド化速度定数）を得ることができる一階指数関数に全ての場合、適合する。典型的な非ホールド化条件は：ａ．10mM CAPS pH 10，1000ppm LAS，40℃ ｂ．10mM HEPES pH 10，200ppm LAS，25℃ である。両方の場合、タンパク質濃度は５〜10μｇ／mlである（タンパク質濃度は、LA Sが過剰であるので、重大でない）。これらの条件下において、ヒュミコラ・インソレンスセルラーゼの非ホールド化は他の酵素と比べることができる。（表１）。これにより我々は、陰イオン性界面活性剤に対する安定性について次のランク順を作り出すことができる。 19Q ａ非ホールド化は二階指数的である。より遅いフェーズのt¹/₂は約120秒である。Ｂ．酵素の表面静電荷の変化はLAS（直鎖アルキルベンゼンスルホネート）のような陰イオン性界面活性剤に対するセンシティビティーに影響を与えるであろう。特に、正電荷の残基を除去した変異体及び／又は負電荷を導入した変異体は、LASに対する耐性を増加させるであろうが、反対、即ち正電荷の残基の導入及び／又は負電荷の残基の除去はLASに対する耐性を低下させるであろう。残基Arg (R)，Lys(K)及びHis（H）は陽性又は潜在的に陽性電荷の残基として見られ、残基Asp(D)，Glu(E)及びCys（C）は、ジスルフィド架橋に含まれないなら、負又は潜在的に負電荷の残基として見られる。これらの残基のうちの１つを既に含む位置は、変異誘発のための第１の標的であり、第２の標的は、他のセルラーゼ中の等価の位置上のこれらの残基のうちの１つを有する位置であり、そして第３の標的は表面が露出した残基のいずれかである。本実験において、野生型ヒュミコラ・インソレンスセルラーゼは、全部で３つの上述のグループに属するヒュミコラ・インソレンスセルラーゼ変異体と比べられ、界面活性剤におけるLASに対する安定性を比べる。陰イオン性界面活性剤に対するセルラーゼ耐性を、陰イオン性界面活性剤の存在下でのPASC（リン酸膨潤セルロース）での活性対陰イオン性界面活性剤の存在下でのPASCでの活性として測定した。反応媒体は、界面活性剤製造元NOPA Denmarkから市販の通常の粉末界面活性剤 5.0ｇ／ｌを含む。界面活性剤は、本実験のための界面活性剤なしで調剤し、pH をpH 7.0に調節した。更に、反応媒体は、0.5ｇ／ｌのPASCを含み、陰イオン性界面活性剤であるLAS(直鎖アルキルベンゼンスルホネート）あり又はなしであり、その反応は30分、30℃の温度で行った。セルラーゼは0.20 S-CEVU／ｌで投与した。30分のインキュベーションの後、その反応を、２ＮのNaOHで停止し、還元糖端の量を、ｐ−ヒドロキシ安息香酸ヒドラジドの還元により決定した。還元ｐ −ヒドロキシ安息香酸ヒドラジドの吸収の減少はセルラーゼ活性に関する。変異の型及びLAS耐性の増加した変異体についてのLASに対する耐性を以下の表に要約する。この表から、正電荷の残基の除去及び／又は負電荷の残基の導入を生ずる残基の変異はLASに対する耐性を増加させることがわかる。上述の通り、変異の型及びLAS耐性の減少した変異体についてのLASに対する耐性を以下の表に要約する：この表から、正電荷の残基の導入及び／又は負電荷の残基の除去を生ずる残基の変異は、LASに対する耐性を減少させることがわかる。実施例９ pH活性プロフィールの変化セルラーゼのpH活性プロフィールは、特定の滴定可能な基、典型的には活性部位中の酸性基のpH依存性の挙動により左右される。pHプロフィールは、ジスルフィド架橋に関連しないなら、荷電した又は潜在的に荷電した基、例えばArg(R)， Lys(K)，Tyr(Y)，His(H)，Glu(E)，Asp(D)又はCys（C）に関連する残基の置換により又は基質から５Å以内の結合クレフト内の変異によるこれらの特定の滴定可能な基の表面アクセスビリティーの変化により、これらの残基の静電環境を変えることにより変化させることができる。この例において、ヒュミコラ・インソレンスセルラーゼ及び荷電した又は潜在的に荷電した残基の置換に関連するヒュミコラ・インソレンスの変異体を、各々 pH７及びpH10におけるPASCに対する活性についてテストした。セルラーゼについてのpH至適性を決定するために、我々は、有機緩衝液を選択した。なぜなら、例えばホウ酸塩は、モノー及びオリゴ−サッカライドと共有結合複合体を形成し、リン酸塩はCaイオンと共に沈殿し得るからである。DATA FOR BIOCHEMICAL RESEARCH第３版OXFORD SCIENCE PUBLICATIONS ページ223〜241において、適切な有機緩衝液が見い出されている。それらのpKa値に関して、我々は、４〜5.5の範囲でNa−アセテートを、6.0においてMESを、6.5〜7.5の範囲においてMOPSを、8.0〜8.5の範囲においてNa−バルビツレートを、そして9.0〜10. 5の範囲においてグリシンを用いることを決めた。方法：その方法は、異なるpHにおけるカルボキシメチルセルロースの酵素分解である。緩衝液は、0.5pH単位の間隔で4.0〜10.5の範囲で調製される。その分析は、カルボキシメチルセルロース中の新しい還元端の形成に基づき、これらは強アルカリ環境においてPHBAHとの反応により視覚化され、それらは410nmにおいて最大吸光度の黄色い化合物を形成する。実験プロトコル：緩衝液調製： 0.2molの各々の緩衝液物質を計りとり、Milli Q水１ｌ中に溶かす。250mlの0.2Ｍ緩衝液及び200mlのMilli Q水を混合する。pHを、ラジオメーターから標準緩衝液を用いて較正したラジオメーターPHM92 labmeterを用いて測定する。緩衝液のpHを４Ｍ NaOH又は４Ｍ HClを用いて実際のpHに調製し、水で全部で500mlに調節する。Na−バービツレートをpH 8.0に調節した時、いくらかの沈殿が生じ得るが、これは50℃に加熱することにより再び溶かすことができる。酢酸100％0.2mol＝12.01ｇ． MES 0.2mol＝39.04ｇ． MOPS 0.2mol＝41.86ｇ． Na−バービツレート0.2mol＝41.24ｇ．グリシン0.2mol＝ 15.01ｇ．緩衝液： pH：4.0，4.5，5.0 & 5.5Na−アセテート0.1Ｍ pH：6.0Na-MES 0.1Ｍ pH：6.5，7.0 & 7.5Na-MOPS 0.1Ｍ pH：8.0 & 8.5Na−バービツレート0.1Ｍ pH：9.0，9.5，10.0 & 10.5Na．グリシン0.1Ｍ実際のpHは、主要な値として処理したひと続きのものにおいて測定されるが、停止試薬なしでは、pHは40℃での20分のインキュベーション後に測定される。基質沈殿：磁石ロッドを有する250ml円錐のガラスフラスコ中で、2.0ｇのCMCを2.5mlの96 ％エタノールで湿らせ、100mlのMilli Q水を加え、次に加熱マグネチックスターラーで透明になるまで煮沸する。約２分、煮沸し、マグネチックスターラー上で室温まで冷やす。停止試薬：２％NaOHに溶かした1.5ｇのPHBAH及び５ｇのK-Na−タートレート手順：５mlのガラステストチューブを用いて３の主要値及び２のブランク値を作った（pH決定のための１の主要値）。 Heidolph REAX 2000ミキサー上で不変の混合及び最大速度で混合する（９）。温度制御と共に、水浴上でインキュベーションの間、撹拌は行わない。試薬を加え、混合した直後に、サンプルを10分、煮沸する。５分間、冷やした水道水で冷やす。410nmの吸光度を読む。活性の測定２つの主要値からの410nmにおける吸光度を加え、２で割り、２つのブランク値を加え、そして２で割り、２つの平均値を引いた。割合（％）を、最も高い値を100％として用いることにより計算する。測定されたpHを比活性に対してプロットする。緩衝液試薬：酢酸100％(MERCK cat.no.1.00063，batchno．K20928263 422，pKa 4.76，MW 60. 05); MES(２〔Ｎ−モルホリノ〕エタンスルホン酸)(SIGMA cat.no.M-8250，batchno.6 8F-5625，pKa 6.09，MW 195.2); MOPS(３−〔Ｎ−モルホリノ〕プロパンスルホン酸)(SIGMA cat.no.M-1254，batc hno.115F-5629，pKa 7.15，MW 209.3); Na−バルビツレート(５，５−ジエチルバルビツール酸ナトリウム塩)(MERCK cat .no.6318，batchno.K20238018 404，pKa7.98，MW 206.2); グリシン(MERCK cat.no.4201，batchno.K205535601 405，pKa 9.78，MW 75.07); PHBAH(ｐ−ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド)(SIGMA cat.no.H-9882,batchno.53H7 704); K-Na−タートレート(酒石酸カリウムナトリウム四水和物)(MERCKcat.no.8087，b atchno.A653387 304); NaOH(水酸化ナトリウム)(MERCK cat.no.1.06498，batchno.C294798 404); CMC(カルボキシメチルセルロース)(Hercules（FMC）7LF(1989年11月))。陰イオン界面活性剤に対するセルラーゼ耐性を、中性pH（pH 7.0）におけるPA SC（リン酸膨潤セルロース）での活性対アルカリ性pH（pH10.0）におけるPASCでの活性として測定した。その反応媒体は、界面活性剤製造元NOPA Denmarkからの市販の通常の粉末界面活性剤5.0ｇ／ｌを含んでいる。そのpHを、各々pH7.0及びpH10.0に調節した。更に、その反応媒体は0.5ｇ／ｌのPASCを含み、その反応を、30分、温度30℃で行った。セルラーゼを0.20 S-CEVU／ｌで投与した。30分のインキュベーションの後、その反応を２ＮのNaOHで停止させ、還元糖末端の量をｐ−ヒドロキシ安息香酸ヒドラジドの還元により決定した。還元されたｐ−ヒドロキシ安息香酸ヒドラジドの吸光度の減少はセルラーゼ活性に関する。結果：結果を以下の表に示す。pH7に対するpH10の活性を、野生型ヒュミコラ・インソレンスセルラーゼのそれと比較する。上の表から、潜在的に荷電した残基に関する変異体を作ることにより及び／又は基質から５Å未満の結合クレフト内の残基を変えることにより相対的なアルカリ性活性が増加し得ることがわかる。同様に、以下の表は、潜在的に荷電した残基に関連する他の変異により及び／又は基質から５Å未満の結合クレフト内の残基を変えることにより相対的な酸性活性を増加させることができることを示す。従って、この例は、比活性pHプロフィールは、潜在的に荷電した残基に関連する変異体の形成により及び／又は基質から５Å未満の結合クレフト内の残基を変えることにより酸性又はアルカリ性pHに対して変えることができることを証明する。実施例10 陰イオン性界面活性剤に対して耐性であるように作られたセルラーゼの洗浄能力陰イオン性界面活性剤に対して耐性に作られたセルラーゼの適用効果対ネイティブセルラーゼの適用効果を、0.1リッターミニ−Terg-o-Meter中のセルラーゼで洗濯したすりへった黒色の綿の布きれの‘色の明白化’ として測定した。その反応媒体はリン酸緩衝液pH 7.0及び0.2〜1.0ｇ／ｌの範囲の種々の濃度の LASを含んでいる。２つの布きれを30分、40℃で洗濯し、すすいで、次に乾燥させた。この洗濯サイクルを４回、くり返した。全ての酵素を各々のLAS濃度でテストした。最後に、黒色綿布きれを、ヒュミコラ・インソレンス、DSM 1800 市販）で洗った同様の布きれの標準に対して等級付けした。効果は PSU(パネルスコアーユニット)で表される。

【手続補正書】【提出日】平成１２年１月２６日（２０００．１．２６）【補正内容】請求の範囲１．セルロース分解活性を示す触媒コアドメインを含む酵素変異体であって、該変異体は、天然の親セルラーゼから、アミノ酸残基置換、挿入もしくは欠失又はそれらの組合せにより得られ、そして −位置５（セルラーゼナンバリング）において、アラニン残基（Ａ）、セリン残基（Ｓ）、又はトレオニン残基（Ｔ）を保持し； −位置８（セルラーゼナンバリング）において、フェニルアラニン残基（Ｆ）、又はチロシン残基（Ｙ）を保持し； −位置９（セルラーゼナンバリング）において、フェニルアラニン残基（Ｆ）、トリプトファン残基（Ｗ）、又はチロシン残基（Ｙ）を保持し； −位置10（セルラーゼナンバリング）において、アスパラギン酸残基（Ｄ）を保持し； −位置121(セルラーゼナンバリング)において、アスパラギン酸残基（Ｄ）を保持することを特徴とする酵素変異体。２．位置119(セルラーゼナンバリング)において、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、及びフェニルアラニン（Ｆ）からなる群からなる群から選択されるアミノ酸残基を保持することを特徴とする請求項１に記載の変異体。３．位置119(セルラーゼナンバリング)において、ヒスチジン（Ｈ）及びアスパラギン酸（Ｄ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を保持することを特徴とする請求項１に記載の変異体。４．位置６（セルラーゼナンバリング）において、トレオニン（Ｔ）及びセリン（Ｓ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を保持することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の変異体。５．位置７（セルラーゼナンバリング）において、アルギニン（Ｒ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、トリプトファン（Ｗ）、及びリシン（Ｋ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を保持することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の変異体。６．位置７（セルラーゼナンバリング）において、アルギニン（Ｒ）、ロイシン（Ｌ）及びイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を保持することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の変異体。７．変異体が、次のジスルフィド架橋：C11-C135;C12-C47;C16-C86;C31-C56;C 87-C199;C89-C189;及びC156-C167(セルラーゼナンバリング)のうちの４又はそれ超を保持することを特徴とするセルラーゼ変異体。８．変異体が、次のジスルフィド架橋：C11-C135;C12-C47;C16-C86;C31-C56;C 87-C199;C89-C189;及びC156-C167(セルラーゼナンバリング)のうちの５又はそれ超を保持することを特徴とする請求項７に記載のセルラーゼ変異体。９．変異体が、次のジスルフィド架橋：C11-C135;C12-C47;C16-C86;C31-C56;C 87-C199;C89-C189;及びC156-C167(セルラーゼナンバリング)のうちの６又はそれ超を保持することを特徴とする請求項８に記載のセルラーゼ変異体。 10．システイン残基が、位置16，86，87，89，189、及び／又は199(セルラーゼナンバリング)のうちの１又は複数において、異なる天然のアミノ酸残基により置換されていることを特徴とする請求項７〜９のいずれかに記載のセルラーゼ変異体。 11．ヒュミコラ・インソレンスエンドグルカナーゼＶ(EGV)から得られる次の変異体：C12G／C47M，C47G，C87M／C199G及びC16M／C86Gからなる群から選択される請求項７〜９のいずれかに記載のセルラーゼ変異体。 12．セルラーゼの熱安定性を減少させる方法であって、C11-C135;C12-C47;C16 -C86;C31-C56;C87-C199;C89-C189;及びC156-C167(セルラーゼナンバリング)からなる群から選択される１又は複数のジスルフィド架橋のアミノ酸置換、欠失又は挿入による除去を含む方法。 13．基質から酵素−基質相互作用する距離内の位置において基質結合クレフト内に位置した１又は複数のアミノ酸残基における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られるセルラーゼ変異体。 14．基質から５Å以内の距離において基質結合クレフト内に位置した１又は複数のアミノ酸残基における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られることを特徴とする請求項13に記載のセルラーゼ変異体。 15．次の位置：４，５，６，７，８，９，10，11，12，13，14，15，16，18， 19，20，21，21ａ，42，44，45，47，48，49，49ａ，49ｂ，74，82，95ｊ，110 ，111，112，113，114，115，116，119，121，123，127，128，129，130，131， 132，132a，133，145，146，147，148，149，150b，178、及び／又は179(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる請求項14に記載のセルラーゼ変異体。 16．次の位置：４，５，13，14，15，16，19，20，21，21ａ，42，44，47，48 ，49，49ａ，49ｂ，74，82，95ｊ，110，111，113，115，116，119，123，129， 131，132a，133，145，146，150b，178、及び／又は179(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる請求項14に記載のセルラーゼ変異体。 17．ヒュミコラ・インソレンスエンドグルカナーゼＶ(EGV)から得られる次の変異体：T6S，R7I，R7W，Y8F，W9F，C12M／C47G，W18Y，W18F，S45T，S45N，D11 4N，F132D，Y147D，Y147C，Y147W，Y147V，Y147R，Y147G，Y147Q，Y147N，Y147K ，Y147H，Y147F及びY147Sからなる群から選択される請求項15に記載のセルラーゼ変異体。 18．ヒュミコラ・インソレンスエンドグルカナーゼＶ(EGV)から得られる次の変異体：R4H，R4Q，K13L，K13R，K13Q，P14A，P14T，S15T，S15H，C16M／C86G， A19P，A19T，A19G，A19S，K20G，D42Y，D42W，C47G，E48D，E48Q，E48D／P49^*， E48N／P49^*，S110N，L115I，G116D，H119R，H119Q，H119F，N123A，N123M，N123 Q，N123Y，N123D，V129L，D133N及びD178Nからなる群から選択される請求項15に記載のセルラーゼ変異体。 19．基質から３Å以内の距離において基質結合クレフト内に位置した１又は複数のアミノ酸残基における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られることを特徴とする請求項13に記載のセルラーゼ変異体。 20．次の位置：６，７，８，10，12，13，14，15，18，20，21，45，48，74， 110，111，112，113，114，115，119，121，127，128，129，130，131，132，13 2a，146，147，148，150b，178、及び／又は179(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる請求項19に記載のセルラーゼ変異体。 21．次の位置：13，14，15，20，21，48，74，110，111，113，115，119，129 ，131，146，150b，178、及び／又は179(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる請求項19に記載のセルラーゼ変異体。 22．表１に示される11残基のうちの７〜10アミノ酸残基の位置が同一である表１に記載の１又は複数の位置においてアミノ酸残基が、保存されたアミノ酸残基に変換されているセルラーゼ変異体。 23．次の位置：13，14，15，20，21，22，24，28，32，34，45，48，50，53， 54，62，63，64，65，66，68，69，70，71，72，73，74，75，79，85，88，90， 92，93，95，96，97，98，99，104，106，110，111，113，115，116，118，119 ，131，134，138，140，146，152，153，163，166，169，170，171，172，173， 174，174，177，178，179，180，193，196、及び／又は197(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる請求項22に記載のセルラーゼ変異体。 24．次の変異（セルラーゼナンバリング）： K13LもしくはL13K； P14AもしくはA14P； S15HもしくはH15S； K20E，K20G，K20A，E20K，G20K，A20K，E20G，E20A，G20E，A20E，G20A、もしくはA20G； K21NもしくはN21K； A22G，A22P，G22A，P22A，G22P、もしくはP22G； V24^*，V24L，^*24V，L24V，^*24L、もしくはL24^*； V28A，V28L，A28V，L28V，A28L、もしくはL28A； N32D，N32S，N32K，D32N，S32N，K32N，D32S，D32K，S32D，K32D，S32K、もしくはK32S； N34DもしくはD34N； I38L，I38F，I38Q，L38I，F38I，Q38I，L38F，L38Q，F38L，Q38L，F38Q、もしくはQ38F； S45NもしくはN45S； G46SもしくはS46G； E48D，E48N，D48E，N48E，D48N、もしくはN48D； G50NもしくはN50G； A53S，A53G，A53K，S53A，G53A，K53A，S53G，S53K，G53S，K53S，G53K、もしくはK53G； Y54FもしくはF54Y； W62FもしくはF62W； A63DもしくはD63A； V64l，V64D，I64V，D64V，I64D、もしくはD64I； N65S，N65D，N65E，S65N，D65N，E65N，S65D，S65E，D65S，E65S，D65E、もしくはE65D； D66N，D66P，D66T，N66D，P66D，T66D，N66P，N66T，P66N，T66N，P66T、もしくはT66P； F68V，F68L，F68T，F68P，V68F，L68F，T68F，P68F，V68L，V68T，V68P，L68V ，T68V，P68V，L68T，L68P，T68L，P68L，T68P、もしくはP68T； A69S，A69T，S69A，T69A，S69T、もしくはT69S； L70YもしくはY70L； G71AもしくはA71G； F72W，F72Y，W72F，Y72F，W72Y、もしくはY72W； A73GもしくはG73A； A74FもしくはF74A； T75V，T75A，T75G，V75T，A75T，G75T，V75A，V75G，A75V，G75V，A75G、もしくはG75A； G79TもしくはT79G； W85TもしくはT85W； A88Q，A88G，A88R，Q88A，G88A，R88A，Q88G，Q88R，G88Q，R88Q，G88R、もしくはR88G； Y90FもしくはF90Y； L92AもしくはA92L； T93Q，T93E，Q93T，E93T，Q93E、もしくはE93Q； T95EもしくはE95T； S96TもしくはT96S； G97T，G97A，T97G，A97G，T97A、もしくはA97T； P98AもしくはA98P； V99LもしくはL99V； M104LもしくはL104M； V106FもしくはF106V； S110NもしくはN110S； T1111，T111V，I111T，V111T，I111V、もしくはV111I； G113YもしくはY113G； L115VもしくはV115L； G116S，G116Q，S116G，Q116G，S116Q、もしくはQ116S； N118T，N118G，N118Q，T118N，G118N，Q1l8N，T118G，T118Q，G118T，Q118T， G118Q、もしくはQ118G； H119Q，H119N，Q119H、もしくはN119H； V129LもしくはL129V； I131L，I131A，L131I，A131I，L131A、もしくはA131L； G134AもしくはA134G； Ql38EもしくはE138Q； G140NもしくはN140G； R146QもしくはQ146R； S152DもしくはD152S； R153K，R153L，R153A，K153R，L153R，A153R，K153L，K153A，L153K，A153K， L153A、もしくはA153L； L163V，L163W，V163L，W163L，V163W、もしくはW163V； G166SもしくはS166G； W169FもしくはF169W； R170FもしくはF170R； F171Y，F171A，YI71F，A171F，Y171A、もしくはA171Y； D172E，D172S，E172D，S172D，E172S、もしくはS172E； W173EもしくはE173W； F174M，F174W，M174F，W174F，M174W、もしくはW174M； A177NもしくはN177A； D178PもしくはP178D； N179VもしくはV179N； P180LもしくはL180P； L193IもしくはI193L； R196I，R196K，I196R，K196R，I196K、もしくはK196I；及び／又は T197SもしくはS197T の１又は複数を含む請求項23に記載のセルラーゼ変異体。 25．次の位置（セルラーゼナンバリング）の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られるセルラーゼ変異体であって、位置４においてＲ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｖ，Ｙ、もしくはＭを保持し；位置５においてＳ，Ｔ、もしくはＡを保持し；位置13においてＫ、もしくはＬを保持し；位置14においてＰ、もしくはＡを保持し；位置15においてＨ、もしくはＳを保持し；位置16においてＣ、もしくはＡを保持し；位置19においてＡ，Ｄ，Ｓ，Ｐ，Ｔ、もしくはＥを保持し；位置20においてＡ，Ｅ，Ｇ、もしくはＫを保持し；位置21においてＫ、もしくはＮを保持し；位置21ａにおいてＶもしくは＊を保持し；位置22においてＡ，Ｇ、もしくはＰを保持し；位置24においてＬ，Ｖ、もしくは＊を保持し；位置28においてＡ，Ｌ、もしくはＶを保持し；位置32においてＤ，Ｋ，Ｎ、もしくはＳを保持し；位置34においてＤもしくはＮを保持し；位置38においてＦ，Ｉ，Ｌ、もしくはＱを保持し；位置42においてＤ，Ｇ，Ｔ，Ｎ，Ｓ，Ｋ、もしくは＊を保持し；位置44においてＫ，Ｖ，Ｒ，Ｑ，Ｇ、もしくはＰを保持し；位置45においてＮ、もしくはＳを保持し；位置46においてＧ、もしくはＳを保持し；位置47においてＣ、もしくはＱを保持し；位置48においてＤ，Ｅ，Ｎ、もしくはＳを保持し；位置49においてＰ，Ｓ，Ａ，Ｇ、もしくは＊を保持し；位置49ａにおいてＣ、もしくは＊を保持し；位置49ｂにおいてＮ、もしくは＊を保持し；位置50においてＧ、もしくはＮを保持し；位置53においてＡ，Ｇ，Ｋ、もしくはＳを保持し；位置54においてＦ、もしくはＹを保持し；位置62においてＦ、もしくはＷを保持し；位置63においてＡ、もしくはＤを保持し；位置64においてＤ，Ｉ、もしくはＶを保持し；位置65においてＤ，Ｅ，Ｎ、もしくはＳを保持し；位置68においてＤ，Ｎ，Ｐ、もしくはＴを保持し；位置69においてＡ，Ｓ、もしくはＴを保持し；位置70においてＬ、もしくはＹを保持し；位置71においてＡ、もしくはＧを保持し；位置72においてＦ，Ｗ、もしくはＹを保持し；位置73においてＡ、もしくはＧを保持し；位置74においてＡ、もしくはＦを保持し；位置75においてＡ，Ｇ，Ｔ、もしくはＶを保持し；位置79においてＧ、もしくはＴを保持し；位置82においてＥ、もしくは＊を保持し；位置88においてＡ，Ｇ，Ｑ、もしくはＲを保持し；位置90においてＦ、もしくはＹを保持し；位置92においてＡ、もしくはＬを保持し；位置93においてＥ，Ｑ、もしくはＴを保持し；位置95においてＥ、もしくはＴを保持し；位置95ｊにおいてＰ、もしくは＊を保持し；位置96においてＳ、もしくはＴを保持し；位置97においてＡ，Ｇ、もしくはＴを保持し；位置98においてＡ、もしくはＰを保持し；位置99においてＬ、もしくはＶを保持し；位置104においてＬ、もしくはＭを保持し；位置106においてＦ、もしくはＶを保持し；位置110においてＮ、もしくはＳを保持し；位置111においてＩ，Ｔ、もしくはＶを保持し；位置113においてＧ、もしくはＹを保持し；位置115においてＬ、もしくはＶを保持し；位置116においてＧ，Ｑ、もしくはＳを保持し；位置118においてＧ，Ｎ，Ｑ、もしくはＴを保持し；位置119においてＨ，Ｎ、もしくはＱを保持し；位置129においてＬ、もしくはＶを保持し；位置131においてＡ，Ｉ、もしくはＬを保持し；位置132においてＡ，Ｐ、もしくはＴを保持し；位置133においてＤ，Ｋ，Ｎ、もしくはＱを保持し；位置134においてＡ、もしくはＧを保持し；位置138においてＥ、もしくはＱを保持し；位置145においてＡ，Ｄ，Ｎ、もしくはＱを保持し；位置146においてＱ、もしくはＲを保持し；位置150bにおいてＡ、もしくは＊を保持し；位置152においてＤ、もしくはＳを保持し；位置153においてＡ，Ｋ，Ｌ、もしくはＲを保持し；位置163においてＬ，Ｖ、もしくはＷを保持し；位置166においてＧ、もしくはＳを保持し；位置169においてＦ、もしくはＷを保持し；位置170においてＦ、もしくはＲを保持し；位置171においてＡ，Ｆ、もしくはＹを保持し；位置172においてＤ，Ｅ、もしくはＳを保持し；位置173においてＥ、もしくはＷを保持し；位置174においてＦ，Ｍ、もしくはＷを保持し；位置177においてＡ、もしくはＮを保持し；位置178においてＤ、もしくはＰを保持し；位置179においてＮ、もしくはＶを保持し；位置180においてＬ、もしくはＰを保持し；位置193においてＩ、もしくはＬを保持し；位置196においてＩ，Ｋ、もしくはＲを保持し；及び／又は位置197においてＳ、もしくはＴを保持することを特徴とするセルラーゼ変異体。 26．変化した陰イオン性界面活性剤センシティビティーを有するセルラーゼ変異体であって、次の位置：２，４，７，８，10，13，15，19，20，21，25，26， 29，32，33，34，35，37，40，42，42ａ，43，44，48，53，54，55，58，59，63 ，64，65，66，67，70，72，76，79，80，82，84，86，88，90，91，93，95，95 ｄ，95ｈ，95ｊ，97，100，101，102，103，113，114，117，119，121，133，13 6，137，138，139，140a，141，143a，145，146，147，150e，150j，151，152， 153，154，155，156，157，158，159，160c，160e，160k，161，162，164，165 ，168，170，171，172，173，175，176，178，181，183，184，185，186，188， 191，192，195，196，200、及び／又は201(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られるセルラーゼ変異体。 27．次の位置：17，85，86，87，88、及び／又は89（セルラーゼナンバリング）の１又は複数においてアミノ酸残基が置換されているセルラーゼ変異体。 28．次の変異：D42W，D42Y、又はL70Yの１又は複数が導入されているヒュミコラ・インソレンスEGV変異体。 29．次の変異：P19A，G20K，Q44K，N48E，Q119H又はQ146Rの１又は複数が導入されているチエラビア・テルレストリスセルラーゼ変異体。 30．チエラビア・テルレストリス／Q119H変異体。 31．次の変異：Y4R，H15S，N119Q又はQ146Rの１又は複数が導入されているシュードモナス・フルオレセンスセルラーゼ変異体。 32．次の変異：V4R，T132a^*，Q133D又はQ146Rの１又は複数が導入されているクリニペルリス・スカベルラセルラーゼ変異体。 33．アミノ酸置換、欠失又は挿入によりセルロース分解酵素の特性を改良するための方法であって、ａ．プロテイン・データ・バンク・エントリー4ENGから知られるヒュミコラ・インソレンスからのエンドグルカナーゼＶ(EGV、に似た３次元構造を有することが知られている少くとも２のアミノ酸配列の多重アラインメントを構築するステップと；ｂ．前記EGVの構造に基づきセルロース分解酵素の相同性で構築した３次元構造を構築するステップと；ｃ．５Å以内の基質結合クレフトからの距離内に存在するアミノ酸残基位置を同定するステップと；ｄ．前記酵素の表面が露出したアミノ酸残基を同定するステップと；ｅ．前記酵素の全ての荷電した又は潜在的に荷電したアミノ酸残基位置を同定するステップと；ｆ．アミノ酸残基を置換し、欠失させ、又は挿入を行う１又は複数の位置を選択するステップと；ｇ．慣用的なタンパク質工学技術を用いることにより、置換、欠失又は挿入を行うステップと；を含む方法。 34．ステップｆが、ステップａのアラインメントの結果として、アラインされた配列の大部分において同じアミノ酸残基を有する位置を選択することにより行われることを特徴とする請求項33に記載の方法。 35．ステップｆが、ステップａのアラインメントの結果として、アラインされた配列の少くとも63％において同じアミノ酸残基を有する位置を選択することにより行われることを特徴とする請求項33に記載の方法。 36．ステップｆが、アラインされた配列において、異なるアミノ酸残基を有する位置を選択することにより行われることを特徴とする請求項34又は35に記載の方法。 37．５Å以内の基質結合クレフトからの距離に存在するアミノ酸残基位置において置換、欠失又は挿入を行うことにより天然の親セルラーゼの比活性を改良する方法。 38．３Å以内の基質結合クレフトからの距離に存在するアミノ酸残基位置において置換、欠失又は挿入を行うことにより天然の親セルラーゼの比活性を改良する方法。 39．2.5Å以内の基質結合クレフトからの距離に存在するアミノ酸残基位置において置換、欠失又は挿入を行うことにより天然の親セルラーゼの比活性を改良する方法。 40．５Å以内の基質結合クレフトからの距離に存在するアミノ酸残基位置において、又は酵素の表面に露出したアミノ酸残基位置において、置換、欠失又は挿入を行うことにより、局所的に又は全体的に静電環境を変えることにより天然の親セルラーゼのpH活性プロフィール、pH活性至適性、pH安定性プロフィール、又はpH安定性至適性を変える方法。 41．３Å以内の基質結合クレフトからの距離に存在するアミノ酸残基位置において、又は酵素の表面に露出したアミノ酸残基位置において、置換、欠失又は挿入を行うことにより、局所的に又は全体的に静電環境を変えることにより天然の親セルラーゼのpH活性プロフィール、pH活性至適性、pH安定性プロフィール、又はpH安定性至適性を変える方法。 42．2.5Å以内の基質結合クレフトからの距離に存在するアミノ酸残基位置において、又は酵素の表面に露出したアミノ酸残基位置において、置換、欠失又は挿入を行うことにより、局所的に又は全体的に静電環境を変えることにより天然の親セルラーゼのpH活性プロフィール、pH活性至適性、pH安定性プロフィール、又はpH安定性至適性を変える方法。 43．もとの残基又は置換した残基が荷電した又は潜在的に荷電した残基である置換が行われることを特徴とする請求項40〜42のいずれかに記載の方法。 44．酵素の１又は複数の表面に露出したアミノ酸残基位置において置換、欠失又は挿入を行うことにより局所的に又は全体的に静電環境を変えることにより陰イオン性界面活性剤又は陰イオン性界面活性剤成分の存在下での天然の親セルラーゼの安定性を変える方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者クリスチャンセン，ラルスデンマーク国，デーコー―2880 バグスバエルト，ノボアレ (72)発明者ダムガールト，ボーデンマーク国，デーコー―2880 バグスバエルト，ノボアレ (72)発明者フォンデルオステン，クラウスデンマーク国，デーコー―2880 バグスバエルト，ノボアレ，ノボノルディスクアクティーゼルスカブ

Claims

【特許請求の範囲】１．セルロース分解活性を示す触媒コアドメインを含む酵素変異体であって、該変異体は、天然の親セルラーゼから、アミノ酸残基置換、挿入もしくは欠失又はそれらの組合せにより得られ、そして −位置５（セルラーゼナンバリング）において、アラニン残基（Ａ）、セリン残基（Ｓ）、又はトレオニン残基（Ｔ）を保持し； −位置８（セルラーゼナンバリング）において、フェニルアラニン残基（Ｆ）、又はチロシン残基（Ｙ）を保持し； −位置９（セルラーゼナンバリング）において、フェニルアラニン残基（Ｆ）、トリプトファン残基（Ｗ）、又はチロシン残基（Ｙ）を保持し； −位置10（セルラーゼナンバリング）において、アスパラギン酸残基（Ｄ）を保持し； −位置121(セルラーゼナンバリング)において、アスパラギン酸残基（Ｄ）を保持することを特徴とする酵素変異体。２．位置119(セルラーゼナンバリング)において、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、及びフェニルアラニン（Ｆ）からなる群から；好ましくはヒスチジン（Ｈ）及びアスパラギン酸（Ｄ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を保持することを特徴とする請求項１に記載の変異体。３．位置６（セルラーゼナンバリング）において、トレオニン（Ｔ）及びセリン（Ｓ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を保持することを特徴とする請求項１又は２に記載の変異体。４．位置７（セルラーゼナンバリング）において、アルギニン（Ｒ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、トリプトファン（Ｗ）、及びリシン（Ｋ）からなる群から、好ましくはアルギニン（Ｒ）、ロイシン（Ｌ）及びイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択されるアミノ酸残基を保持することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の変異体。５．変異体が、次のジスルフィド架橋：C11-C135;C12-C47;C16-C86;C31-C56;C 87-C199;C89-C189;及びC156-C167(セルラーゼナンバリング)のうちの４又はそれ超を保持することを特徴とするセルラーゼ変異体。６．変異体が、次のジスルフィド架橋：C11-C135;C12-C47;C16-C86;C31-C56;C 87-C199;C89-C189;及びC156-C167(セルラーゼナンバリング)のうちの５又はそれ超を保持することを特徴とする請求項５に記載のセルラーゼ変異体。７．変異体が、次のジスルフィド架橋：C11-C135;C12-C47;C16-C86;C31-C56;C 87-C199;C89-C189;及びC156-C167(セルラーゼナンバリング)のうちの６又はそれ超を保持することを特徴とする請求項６に記載のセルラーゼ変異体。８．システイン残基が、位置16，86，87，89，189、及び／又は199(セルラーゼナンバリング)のうちの１又は複数において、異なる天然のアミノ酸残基により置換されていることを特徴とする請求項５〜７のいずれかに記載のセルラーゼ変異体。９．ヒュミコラ・インソレンスエンドグルカナーゼＶ(EGV)から得られる次の変異体：C12G／C47M，C47G，C87M／C199G及びC16M／C86Gからなる群から選択される請求項５〜７のいずれかに記載のセルラーゼ変異体。 10．セルラーゼの熱安定性を減少させる方法であって、C11-C135;C12-C47;C16 -C86;C31-C56;C87-C199;C89-C189;及びC156-C 167(セルラーゼナンバリング)からなる群から選択される１又は複数のジスルフィド架橋のアミノ酸置換、欠失又は挿入による除去を含む方法。 11．基質から酵素−基質相互作用する距離内の位置において基質結合クレフト内に位置した１又は複数のアミノ酸残基における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られるセルラーゼ変異体。 12．基質から５Å以内の距離において基質結合クレフト内に位置した1又は複数のアミノ酸残基における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られることを特徴とする請求項11に記載のセルラーゼ変異体。 13．次の位置：４，５，６，７，８，９，10，11，12，13，14，15，16，18， 19，20，21，21ａ，42，44，45，47，48，49，49ａ，49ｂ，74，82，95ｊ，110 ，111，112，113，114，115，116，119，121，123，127，128，129，130，131， 132，132a，133，145，146，147，148，149，150b，178、及び／又は179(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる請求項12に記載のセルラーゼ変異体。 14．次の位置：４，５，13，14，15，16，19，20，21，21ａ，42，44，47，48 ，49，49ａ，49ｂ，74，82，95ｊ，110，111，113，115，116，119，123，129， 131，132a，133，145，146，150b，178、及び／又は179(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる請求項12に記載のセルラーゼ変異体。 15．ヒュミコラ・インソレンスエンドグルカナーゼＶ(EGV)から得られる次の変異体：T6S，R7I，R7W，Y8F，W9F，C12M／C47G，W18Y，W18F，S45T，S45N，D11 4N，F132D，Y147D，Y147C，Y147W，Y14 7V，Y147R，Y147G，Y147Q，Y147N，Y147K，Y147H，Y147F及びY147Sからなる群から選択される請求項13に記載のセルラーゼ変異体。 16．ヒュミコラ・インソレンスエンドグルカナーゼＶ(EGV)から得られる次の変異体：R4H，R4Q，K13L，K13R，K13Q，P14A，P14T，S15T，S15H，C16M／C86G， A19P，A19T，A19G，A19S，K20G，D42Y，D42W，C47G，E48D，E48Q，E48D／P49^*， E48N／P49^*，S110N，L115I，G116D，H119R，H119Q，H119F，N123A，N123M，N123 Q，N123Y，N123D，V129L，D133N及びD178Nからなる群から選択される請求項13に記載のセルラーゼ変異体。 17．基質から３Å以内の距離において基質結合クレフト内に位置した1又は複数のアミノ酸残基における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られることを特徴とする請求項11に記載のセルラーゼ変異体。 18．次の位置：６，７，８，10，12，13，14，15，18，20，21，45，48，74， 110，111，112，113，114，115，119，121，127，128，129，130，131，132，13 2a，146，147，148，150b，178、及び／又は179(セルラーゼナンバリング)の1又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる請求項17に記載のセルラーゼ変異体。 19．次の位置：13，14，15，20，21，48，74，110，111，113，115，119，129 ，131，146，150b，178、及び／又は179(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる請求項17に記載のセルラーゼ変異体。 20．表１に示される11残基のうちの７〜10アミノ酸残基の位置が同一である表１に記載の１又は複数の位置においてアミノ酸残基が、保存されたアミノ酸残基に変換されているセルラーゼ変異体。 21．次の位置：13，14，15，20，21，22，24，28，32，34，45，48，50，53， 54，62，63，64，65，66，68，69，70，71，72，73，74，75，79，85，88，90， 92，93，95，96，97，98，99，104，106，110，111，113，115，116，118，119 ，131，134，138，140，146，152，153，163，166，169，170，171，172，173， 174，174，177，178，179，180，193，196、及び／又は197(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られる請求項20に記載のセルラーゼ変異体。 22．次の変異（セルラーゼナンバリング）： K13LもしくはL13K； P14AもしくはA14P； S15HもしくはH15S； K20E，K20G，K20A，E20K，G20K，A20K，E20G，E20A，G20E，A20E，G20A、もしくはA20G； K21NもしくはN21K； A22G，A22P，G22A，P22A，G22P、もしくはP22G； V24^*，V24L，^*24V，L24V，^*24L、もしくはL24^*； V28A，V28L，A28V，L28V，A28L、もしくはL28A； N32D，N32S，N32K，D32N，S32N，K32N，D32S，D32K，S32D，K32D，S32K、もしくはK32S； N34DもしくはD34N； I38L，I38F，I38Q，L38I，F38I，Q38I，L38F，L38Q，F38L，Q38L，F38Q、もしくはQ38F； S45NもしくはN45S； G46SもしくはS46G； E48D，E48N，D48E，N48E，D48N、もしくはN48D； G50NもしくはN50G； A53S，A53G，A53K，S53A，G53A，K53A，S53G，S53K，G53S，K53S，G53K、もしくはK53G； Y54FもしくはF54Y； W62FもしくはF62W； A63DもしくはD63A； V64I，V64D，I64V，D64V，I64D、もしくはD64I； N65S，N65D，N65E，S65N，D65N，E65N，S65D，S65E，D65S，E65S，D65E、もしくはE65D； D66N，D66P，D66T，N66D，P66D，T66D，N66P，N66T，P66N，T66N，P66T、もしくはT66P； F68V，F68L，F68T，F68P，V68F，L68F，T68F，P68F，V68L，V68T，V68P，L68V ，T68V，P68V，L68T，L68P，T68L，P68L，T68P、もしくはP68T； A69S，A69T，S69A，T69A，S69T、もしくはT69S； L70YもしくはY70L； G71AもしくはA71G； F72W，F72Y，W72F，Y72F，W72Y、もしくはY72W； A73GもしくはG73A； A74FもしくはF74A； T75V，T75A，T75G，V75T，A75T，G75T，V75A，V75G，A75V，G75V，A75GNもしくはG75A； G79TもしくはT79G； W85TもしくはT85W； A88Q，A88G，A88R，Q88A，G88A，R88A，Q88G，Q88R，G88Q，R88Q，G88RNもしくはR88G； Y90FもしくはF90Y； L92AもしくはA92L； T93Q，T93E，Q93T，E93T，Q93E、もしくはE93Q； T95EもしくはE95T； S96TもしくはT96S； G97T，G97A，T97G，A97G，T97A、もしくはA97T； P98AもしくはA98P； V99LもしくはL99V； M104LもしくはL104M； V106FもしくはF106V； S110NもしくはN110S； T111I，T111V，I111T，V111T，I111V、もしくはV111I； G113YもしくはY113G； L115VもしくはV115L； G116S，G116Q，S116G，Q116G，S116Q、もしくはQ116S； N118T，N118G，N118Q，T118N，G118N，Q118N，T118G，T118Q，G118T，Q118T， G118QNもしくはQ118G； H119Q，H119N，Q119H、もしくはN119H； V129LもしくはL129V； I131L，I131A，L131I，A131I，Ll31A、もしくはA131L； G134AもしくはA134G； Q138EもしくはE138Q； G140NもしくはN140G； R146QもしくはQ146R； S152DもしくはD152S； R153K，R153L，R153A，K153R，L153R，A153R，K153L，K153A，L153K，A153K， L153A、もしくはA153L； L163V，L163W，V163L，W163L，V163WNもしくはW163V； G166SもしくはS166G； W169FもしくはF169W； R170FもしくはF170R； F171Y，F171A，Y171F，A171F，Y171A、もしくはA171Y； D172E，D172S，E172D，S172D，E172S、もしくはS172E； W173EもしくはE173W； F174M，F174W，M174F，W174F，Ml74W、もしくはW174M； A177NもしくはN177A； D178PもしくはP178D； N179VもしくはV179N； P180LもしくはL180P； L193IもしくはI193L； R196I，R196K，I196R，K196R，I196K、もしくはK196I；及び／又は T197SもしくはS197T の１又は複数を含む請求項21に記載のセルラーゼ変異体。 23．次の位置（セルラーゼナンバリング）の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られるセルラーゼ変異体であって、位置４においてＲ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｖ，Ｙ、もしくはＭを保持し；位置５においてＳ，Ｔ、もしくはＡを保持し；位置13においてＫ、もしくはＬを保持し；位置14においてＰ、もしくはＡを保持し；位置15においてＨ、もしくはＳを保持し；位置16においてＣ、もしくはＡを保持し；位置19においてＡ，Ｄ，Ｓ，Ｐ，Ｔ、もしくはＥを保持し；位置20においてＡ，Ｅ，Ｇ、もしくはＫを保持し；位置21においてＫ、もしくはＮを保持し；位置21ａにおいてＶもしくは＊を保持し；位置22においてＡ，Ｇ、もしくはＰを保持し；位置24においてＬ，Ｖ、もしくは＊を保持し；位置28においてＡ，Ｌ、もしくはＶを保持し；位置32においてＤ，Ｋ，Ｎ、もしくはＳを保持し；位置34においてＤもしくはＮを保持し；位置38においてＦ，Ｉ，Ｌ、もしくはＱを保持し；位置42においてＤ，Ｇ，Ｔ，Ｎ，Ｓ，Ｋ、もしくは＊を保持し；位置44においてＫ，Ｖ，Ｒ，Ｑ，Ｇ、もしくはＰを保持し；位置45においてＮ、もしくはＳを保持し；位置46においてＧ、もしくはＳを保持し；位置47においてＣ、もしくはＱを保持し；位置48においてＤ，Ｅ，Ｎ、もしくはＳを保持し；位置49においてＰ，Ｓ，Ａ，Ｇ、もしくは＊を保持し；位置49ａにおいてＣ、もしくは＊を保持し；位置49ｂにおいてＮ、もしくは＊を保持し；位置50においてＧ、もしくはＮを保持し；位置53においてＡ，Ｇ，Ｋ、もしくはＳを保持し；位置54においてＦ、もしくはＹを保持し；位置62においてＦ、もしくはＷを保持し；位置63においてＡ、もしくはＤを保持し；位置64においてＤ，Ｉ、もしくはＶを保持し；位置65においてＤ，Ｅ，Ｎ、もしくはＳを保持し；位置68においてＤ，Ｎ，Ｐ、もしくはＴを保持し；位置69においてＡ，Ｓ、もしくはＴを保持し；位置70においてＬ、もしくはＹを保持し；位置71においてＡ、もしくはＧを保持し；位置72においてＦ，Ｗ、もしくはＹを保持し；位置73においてＡ、もしくはＧを保持し；位置74においてＡ、もしくはＦを保持し；位置75においてＡ，Ｇ，Ｔ、もしくはＶを保持し；位置79においてＧ、もしくはＴを保持し；位置82においてＥ、もしくは＊を保持し；位置88においてＡ，Ｇ，Ｑ、もしくはＲを保持し；位置90においてＦ、もしくはＹを保持し；位置92においてＡ、もしくはＬを保持し；位置93においてＥ，Ｑ、もしくはＴを保持し；位置95においてＥ、もしくはＴを保持し；位置95ｊにおいてＰ、もしくは＊を保持し；位置96においてＳ、もしくはＴを保持し；位置97においてＡ，Ｇ、もしくはＴを保持し；位置98においてＡ、もしくはＰを保持し；位置99においてＬ、もしくはＶを保持し；位置104においてＬ、もしくはＭを保持し；位置106においてＦ、もしくはＶを保持し；位置110においてＮ、もしくはＳを保持し；位置111においてＩ，Ｔ、もしくはＶを保持し；位置113においてＧ、もしくはＹを保持し；位置115においてＬ、もしくはＶを保持し；位置116においてＧ，Ｑ、もしくはＳを保持し；位置118においてＧ，Ｎ，Ｑ、もしくはＴを保持し；位置119においてＨ，Ｎ、もしくはＱを保持し；位置129においてＬ、もしくはＶを保持し；位置131においてＡ，Ｉ、もしくはＬを保持し；位置132においてＡ，Ｐ、もしくはＴを保持し；位置133においてＤ，Ｋ，Ｎ、もしくはＱを保持し；位置134においてＡ、もしくはＧを保持し；位置138においてＥ、もしくはＱを保持し；位置145においてＡ，Ｄ，Ｎ、もしくはＱを保持し；位置146においてＱ、もしくはＲを保持し；位置150bにおいてＡ、もしくは＊を保持し；位置152においてＤ、もしくはＳを保持し；位置153においてＡ，Ｋ，Ｌ、もしくはＲを保持し；位置163においてＬ，Ｖ、もしくはＷを保持し；位置166においてＧ、もしくはＳを保持し；位置169においてＦ、もしくはＷを保持し；位置170においてＦ、もしくはＲを保持し；位置171においてＡ，Ｆ、もしくはＹを保持し；位置172においてＤ，Ｅ、もしくはＳを保持し；位置173においてＥ、もしくはＷを保持し；位置174においてＦ，Ｍ、もしくはＷを保持し；位置177においてＡ、もしくはＮを保持し；位置178においてＤ、もしくはＰを保持し；位置179においてＮ、もしくはＶを保持し；位置180においてＬ、もしくはＰを保持し；位置193においてＩ、もしくはＬを保持し；位置196においてＩ，Ｋ、もしくはＲを保持し；及び／又は位置197においてＳ、もしくはＴを保持することを特徴とするセルラーゼ変異体。 24．変化した陰イオン性界面活性剤センシティビティーを有するセルラーゼ変異体であって、次の位置：２，４，７，８，10，13， 15，19，20，21，25，26，29，32，33，34，35，37，40，42，42ａ，43，44，48 ，53，54，55，58，59，63，64，65，66，67，70，72，76，79，80，82，84，86 ，88，90，91，93，95，95ｄ，95ｈ，95ｊ，97，100，101，102，103，113，114 ，117，119，121，133，136，137，138，139，140a，141，143a，145，146，147 ，150e，150j，151，152，153，154，155，156，157，158，159，10c，160e，16 0k，161，162，164，165，168，170，171，172，173，175，176，178，181，183 ，184，185，186，188，191，192，195，196，200、及び／又は201(セルラーゼナンバリング)の１又は複数における置換、挿入及び／又は欠失により親セルラーゼから得られるセルラーゼ変異体。 25．次の位置：17，85，86，87，88、及び／又は89（セルラーゼナンバリング）の１又は複数においてアミノ酸残基が置換されているセルラーゼ変異体。 26．次の変異：D42W，D42Y、又はL70Yの１又は複数が導入されているヒュミコラ・インソレンスEGV変異体。 27．次の変異：P19A，G20K，Q44K，N48E，Q119H又はQ146Rの１又は複数が導入されているチエラビア・テルレストリスセルラーゼ変異体。 28．チエラビア・テルレストリス／Q119H変異体。 29．次の変異：Y4R，H15S，N119Q又はQ146Rの１又は複数が導入されているシュードモナス・フルオレセンスセルラーゼ変異体。 30．次の変異：V4R，T132a^*，Q133D又はQ146Rの１又は複数が導入されているクリニペルリス・スカベルラセルラーゼ変異体。 31．アミノ酸置換、欠失又は挿入によりセルロース分解酵素の特性を改良するための方法であって、ａ．プロテイン・データ・バンク・エントリー4ENGから知られるヒュミコラ・インソレンスからのエンドグルカナーゼＶ(EGV)に似た３次元構造を有することが知られている少くとも２のアミノ酸配列の多重アラインメントを構築するステップと；ｂ．前記EGVの構造に基づきセルロース分解酵素の相同性で構築した３次元構造を構築するステップと；ｃ．５Å以内の基質結合クレフトからの距離内に存在するアミノ酸残基位置を同定するステップと；ｄ．前記酵素の表面が露出したアミノ酸残基を同定するステップと；ｅ．前記酵素の全ての荷電した又は潜在的に荷電したアミノ酸残基位置を同定するステップと；ｆ．アミノ酸残基を置換し、欠失させ、又は挿入を行う１又は複数の位置を選択するステップと；ｇ．慣用的なタンパク質工学技術を用いることにより、置換、欠失又は挿入を行うステップと；を含む方法。 32．ステップｆが、ステップａのアラインメントの結果として、アラインされた配列の大部分、好ましくはアラインされた配列の少くとも63％において同じアミノ酸残基を有する位置を選択することにより行われることを特徴とする請求項 31に記載の方法。 33．ステップｆが、アラインされた配列において、異なるアミノ酸残基を有する位置を選択することにより行われることを特徴とする請求項32に記載の方法。 34．５Å以内、より好ましくは３Å以内、更により好ましくは2.5Å以内の基質結合クレフトからの距離に存在するアミノ酸残基位置において置換、欠失又は挿入を行うことにより天然の親セルラーゼの比活性を改良する方法。 35．５Å以内、より好ましくは３Å以内、更により好ましくは2.5Å以内の基質結合クレフトからの距離に存在するアミノ酸残基位置において、又は酵素の表面に露出したアミノ酸残基位置において、置換、欠失又は挿入を行うことにより、好ましくはもとの残基又は置換残基のいずれかが荷電した又は潜在的に荷電した残基であることに関連する置換により、局所的に又は全体的に静電環境を変えることにより天然の親セルラーゼのpH活性プロフィール、pH活性至適性、pH安定性プロフィール、又はpH安定性至適性を変える方法。 36．酵素の1又は複数の表面に露出したアミノ酸残基位置において置換、欠失又は挿入を行うことにより局所的に又は全体的に静電環境を変えることにより陰イオン性界面活性剤又は陰イオン性界面活性剤成分の存在下での天然の親セルラーゼの安定性を変える方法。