JP2012147797A - βアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体 - Google Patents

Abstract

【課題】患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物を伴う疾患の治療のための改良された作用
物質および方法を提供する。
【解決手段】本発明は、少なくとも部分的に、Ａβペプチドに特異的に結合しかつアミロ
イド原性障害に関連する斑負荷の低下および／もしくは神経炎性ジストロフィーの低下で
有効である、２種のモノクローナル抗体の同定および特徴づけに基づく、予防的および／
もしくは治療的使用のための多様なヒト化抗体の設計により、これらの抗体の可変領域の
ヒト化を特徴とする。
【選択図】なし

Description

（関連出願）
本出願は、“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｔｈａｔ Ｒｅｃｏｇｎｉ
ｚｅ Ｂｅｔａ−Ａｍｙｌｏｉｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ（β−アミロイドペプチドを認識する
ヒト化抗体）”と題された、以前に出願された米国仮出願第６０／２５１，８９２号明細
書（２０００年１２月６日出願）の利益を主張する。上に引用された出願の内容全体は、
引用することにより本明細書に組み込まれる。

（発明の背景）
アルツハイマー病（ＡＤ）は老人性痴呆をもたらす進行性疾患である。全般的に、Ｓｅ
ｌｋｏｅ，ＴＩＮＳ １６：４０３（１９９３）；Ｈａｒｄｙら、第ＷＯ ９２／１３０
６９号明細書；Ｓｅｌｋｏｅ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５
３：４３８（１９９４）；Ｄｕｆｆら，Ｎａｔｕｒｅ ３７３：４７６（１９９５）；Ｇ
ａｍｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３７３：５２３（１９９５）を参照されたい。広範に言って
、該疾患は２つの範疇、すなわち老齢（６５歳以上）で発症する晩発性、および老年期よ
り十分に前、すなわち３５と６０歳との間に発症する早発性に分類される。双方の型の疾
患において、病態は同一であるが、しかし、異常は、より早い年齢で開始する場合により
重篤かつ広範である傾向がある。該疾患は、脳中の最低２種の型の傷害、すなわち神経原
線維濃縮体（neurofibrillary tangles）および老人斑を特徴とする。神経原線維濃縮体
は、対で相互の周囲で捻じられた２本の線維よりなる微小管関連τタンパク質の細胞内沈
着物である。老人斑（すなわちアミロイド斑）は、脳組織の切片の顕微鏡分析により見え
る、中央に細胞外アミロイド沈着物を伴う直径１５０μｍまでの無秩序な好中球の領域で
ある。脳内のアミロイド斑の蓄積はまた、ダウン症および他の認識障害にも関連する。

斑の主構成要素は、Ａβもしくはβ−アミロイドペプチドと命名されるペプチドである
。Ａβペプチドはアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と命名される有名なタンパク質
、より大きな膜貫通糖タンパク質の３９−４３アミノ酸の４ｋＤａの内的フラグメントで
ある。多様な分泌酵素によるＡＰＰのタンパク質分解性プロセシングの結果として、Ａβ
は主として、短い形態（長さ４０アミノ酸）および長い形態（長さ４２から４３アミノ酸
の範囲にわたる）双方で見出される。ＡＰＰの疎水性膜貫通ドメインの一部はＡβのカル
ボキシ端で見出され、そして、とりわけ長い形態の場合は、斑に凝集するＡβの能力を説
明するかもしれない。脳中でのアミロイド斑の蓄積はついには神経細胞死につながる。こ
の型の神経劣化に関連する身体症状がアルツハイマー病を特徴づける。

ＡＰＰタンパク質内のいくつかの突然変異がアルツハイマー病の存在と相互に関連付け
られている。例えば、Ｇｏａｔｅら，Ｎａｔｕｒｅ ３４９：７０４）（１９９１）（バ
リン⁷¹⁷からイソロイシン）；Ｃｈａｒｔｉｅｒ Ｈａｒｌａｎら Ｎａｔｕｒｅ ３５
３：８４４（１９９１））（バリン⁷¹⁷からグリシン）；Ｍｕｒｒｅｌｌら，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２５４：９７（１９９１）（バリン⁷¹⁷からフェニルアラニン）；Ｍｕｌｌａｎら
，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．１：３４５（１９９２）（リシン⁵⁹⁵−メチオニン⁵⁹⁶をア
スパラギン⁵⁹⁵−ロイシン⁵⁹⁶に変える二重突然変異）を参照されたい。こうした突然変異
は、ＡＰＰのＡβへの増大されたもしくは変えられたプロセシング、とりわけ増大された
量の長い形態のＡβ（すなわちＡβ１−４２およびＡβ１−４３）へのＡＰＰのプロセシ
ングにより、アルツハイマー病を引き起こすと考えられている。プレセニリン遺伝子ＰＳ
１およびＰＳ２のような他の遺伝子中の突然変異が、ＡＰＰのプロセシングに間接的に影
響を及ぼして増大された量の長い形態のＡβを生成させると考えられている（Ｈａｒｄｙ
，ＴＩＮＳ ２０：１５４（１９９７）を参照されたい）。

マウスモデルが、アルツハイマー病のアミロイド斑の意義を決定するのに成功裏に使用
されている（Ｇａｍｅｓら、上記、Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：１５５０（１９９７））。とりわけ、ＰＤＡＰＰトラ
ンスジェニックマウス（突然変異体の形態のヒトＡＰＰを発現しかつ若齢でアルツハイマ
ー病を発症する）に長い形態のＡβを注入する場合に、それらはアルツハイマー病の進行
の低下およびＡβペプチドに対する抗体力価の増大の双方を表す（Ｓｃｈｅｎｋら，Ｎａ
ｔｕｒｅ ４００、１７３（１９９９））。上で論考される観察結果は、とりわけその長
い形態のＡβがアルツハイマー病における原因要素であることを示す。

ＭｃＭｉｃｈａｅｌ，欧州特許第ＥＰ ５２６，５１１号明細書は、予め確立したＡＤ
を伴う患者へのホメオパシー投薬量（１０^-2ｍｇ／日未満もしくはそれに等しい）のＡβ
の投与を提案している。約５リットルの血漿をもつ典型的なヒトにおいて、この投薬量の
上限さえ２ｐｇ／ｍｌを越えない濃度を生成すると期待することができる。ヒト血漿中の
Ａβの正常濃度は、典型的には５０〜２００ｐｇ／ｍｌの範囲にある（Ｓｅｕｂｅｒｔら
，Ｎａｔｕｒｅ ３５９：３２５（１９９２））。欧州特許第ＥＰ ５２６，５１１号明
細書の提案された投薬量は、内因性の循環するＡβの濃度をほとんど変えないとみられる
ため、また、欧州特許第ＥＰ ５２６，５１１号明細書は免疫刺激剤としてのアジュバン
トの使用を推奨していないため、いずれかの治療上の利益が生じることができることはあ
りそうもないと思われる。

従って、アルツハイマー病の治療のための新たな療法および試薬、とりわけ、生理学的
（例えば非毒性）用量で治療上の利益を遂げることが可能な療法および試薬に対する必要
性が存在する。

（発明の要約）
本発明は、アミロイド原性疾患（例えばアルツハイマー病）の予防および治療のための
新たな免疫学的試薬、とりわけ治療的抗体試薬を特徴とする。本発明は、少なくとも部分
的に、Ａβペプチドに特異的に結合しかつアミロイド原性障害に関連する斑負荷の低下お
よび／もしくは神経炎性ジストロフィーの低下で有効である、２種のモノクローナル抗体
の同定および特徴づけに基づく。これらの抗体の構造および機能分析は、予防的および／
もしくは治療的使用のための多様なヒト化抗体の設計につながる。とりわけ、本発明は、
これらの抗体の可変領域のヒト化を特徴とし、そして、従って、ヒト化免疫グロブリンも
しくは抗体鎖、無傷のヒト化免疫グロブリンもしくは抗体、および機能的免疫グロブリン
もしくは抗体フラグメント、とりわけ特徴とされる抗体の抗原結合フラグメントを提供す
る。

特徴とされるモノクローナル抗体の相補性決定領域を含んで成るポリペプチドもまた、
前記ポリペプチドをコードするのに適するポリヌクレオチド試薬、ベクターおよび宿主が
そうであるように開示される。

アミロイド原性疾患もしくは障害（例えばアルツハイマー病）の治療方法が、こうした
応用での使用のための製薬学的組成物およびキットがそうであるように開示される。

適正な免疫学的機能に、ならびに治療試薬として使用される場合に向上された結合親和
性および／もしくは低下された免疫原性を有するヒト化抗体の設計において置換の影響を
受けやすい残基を同定するために重要である、特徴とされるモノクローナル抗体内の残基
の同定方法もまた特徴とする。

本発明は、さらに以下の項目を提供する：
（項目１） （ｉ）配列番号２として示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列か
らの可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブ
リンＬ鎖配列からの可変枠組み領域［但し、最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６ Ｌ鎖
可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで該枠組み残基は：
（ａ）抗原を直接非共有結合する残基；
（ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；
（ｃ）ＣＤＲと相互作用する残基；および
（ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基
よりなる群から選択される］を含んで成る、ヒト化免疫グロブリンＬ鎖。
（項目２） （ｉ）配列番号４として示される３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列か
らの可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブ
リンＨ鎖からの可変枠組み領域［但し、最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６ Ｈ鎖可変
領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで該枠組み残基は：
（ａ）抗原を直接非共有結合する残基；
（ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；
（ｃ）ＣＤＲと相互作用する残基；および
（ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基
よりなる群から選択される］を含んで成る、ヒト化免疫グロブリンＨ鎖。
（項目３） ＣＤＲと相互作用する残基が、１ＣＲ９の解明された構造に基づき３Ｄ６
Ｌ鎖をモデル化することにより同定される、項目１記載のＬ鎖。
（項目４） ＣＤＲと相互作用する残基が、１ＮＬＤの解明された構造に基づき３Ｄ６
Ｌ鎖をモデル化することにより同定される、項目１記載のＬ鎖。
（項目５） ＣＤＲと相互作用する残基が、１ＯＰＧの解明された構造に基づき３Ｄ６
Ｈ鎖をモデル化することにより同定される、項目２記載のＨ鎖。
（項目６） （ｉ）配列番号２として示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列か
らの可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリ
ンＬ鎖配列からの可変枠組み領域［但し、最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６ Ｌ鎖可
変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで該枠組み残基は、３Ｄ６免疫
グロブリンＬ鎖可変領域の三次元モデルの分析により同定されるところのＬ鎖可変領域の
コンホメーションもしくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基である］を含んで成る、
ヒト化免疫グロブリンＬ鎖。
（項目７） （ｉ）配列番号４として示される３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列か
らの可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリ
ンＨ鎖からの可変枠組み領域［但し、最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６Ｈ鎖可変領域
配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで該枠組み残基は、３Ｄ６免疫グロブ
リンＨ鎖可変領域の三次元モデルの分析により同定されるところのＨ鎖可変領域のコンホ
メーションもしくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基である］を含んで成る、ヒト化
免疫グロブリンＨ鎖。
（項目８） 枠組み残基が、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近位
の残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接する残基、ＣＤＲ残基の
６Å以内の残基、カノニカル残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、希少残基および構
造モデルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択される、項目６記載のＬ鎖
。
（項目９） 枠組み残基が、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近位
の残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接する残基、ＣＤＲ残基の
６Å以内の残基、カノニカル残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、異常な残基および
構造モデルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択される、項目７記載のＨ
鎖。
（項目１０） 枠組み残基が、１ＣＲ９の解明された構造に基づき３Ｄ６ Ｌ鎖をモデル
化することにより同定される、項目６もしくは８記載のＬ鎖。
（項目１１） 枠組み残基が、１ＮＬＤの解明された構造に基づき３Ｄ６ Ｌ鎖をモデル
化することにより同定される、項目６もしくは８記載のＬ鎖。
（項目１２） 枠組み残基が、１ＯＰＧの解明された構造に基づき３Ｄ６ Ｈ鎖をモデル
化することにより同定される、項目７もしくは９記載のＨ鎖。
（項目１３） （ｉ）配列番号２として示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列
からの可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロ
ブリンＬ鎖からの可変枠組み領域［但し、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４６（Ｋａｂａｔ
の番号付け協定）よりなる群から選択される最低１個の枠組み残基が、マウス３Ｄ６ Ｌ
鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換される］を含んで成る、ヒト化免疫グ
ロブリンＬ鎖。
（項目１４） （ｉ）配列番号４として示される３Ｄ６ Ｈ鎖可変領域配列からの可変領
域相補性決定領域、ならびに（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖からの可変枠
組み領域［但し、Ｈ４９、Ｈ９３およびＨ９４（Ｋａｂａｔの番号付け協定）よりなる群
から選択される最低１個の枠組み残基が、マウス３Ｄ６ Ｈ鎖可変領域配列からの対応す
るアミノ酸残基で置換される］を含んで成る、ヒト化免疫グロブリンＨ鎖。
（項目１５） ヒトアクセプターＬ鎖がサブタイプκＩＩ（Ｋａｂａｔ協定）のものであ
る、いずれか１つの項目１、３、４、６、８、１０、１１および１３記載のＬ鎖。
（項目１６） ヒトアクセプターＨ鎖がサブタイプＩＩＩ（Ｋａｂａｔ協定）のものであ
る、いずれか１つの項目２、５、７、９、１２および１４記載のＨ鎖。
（項目１７） ヒトアクセプターＬ鎖が、Ｋａｂａｔ番号０１９２３０、Ｋａｂａｔ番号
００５１３１、Ｋａｂａｔ番号００５０５８、Ｋａｂａｔ番号００５０５７、Ｋａｂａｔ
番号００５０５９、Ｋａｂａｔ番号Ｕ２１０４０およびＫａｂａｔ番号Ｕ４１６４５より
なる群から選択される、項目１５記載のＬ鎖。
（項目１８） ヒトアクセプターＬ鎖がＫａｂａｔ番号０１９２３０である、項目１５記
載のＬ鎖。
（項目１９） ヒトアクセプターＨ鎖が、Ｋａｂａｔ番号０４５９１９、Ｋａｂａｔ番号
０００４５９、Ｋａｂａｔ番号０００５５３、Ｋａｂａｔ番号０００３８６およびＫａｂ
ａｔ番号Ｍ２３６９１よりなる群から選択される、項目１６記載のＨ鎖。
（項目２０） ヒトアクセプターＨ鎖がＫａｂａｔ番号０４５９１９である、項目１６記
載のＨ鎖。
（項目２１） 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、その位置のヒト可変Ｌ鎖配列に普遍的
であるアミノ酸残基で置換される、項目１、３、４、６、８、１０、１１、１３、１５、
１７および１８のいずれか１つ記載のＬ鎖。
（項目２２） 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖細胞系可変Ｌ鎖配列からの対応す
るアミノ酸残基で置換される、項目１、３、４、６、８、１０、１１、１３、１５、１７
および１８記載のＬ鎖。
（項目２３） 生殖細胞系可変Ｌ鎖配列が、Ａ１、Ａ１７、Ａ１８、Ａ２およびＡ１９よ
りなる群から選択される、項目２２記載のＬ鎖。
（項目２４） 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、その位置のヒト可変Ｈ鎖配列に普遍的
であるアミノ酸残基で置換される、項目２、５、７、９、１２、１４、１６、１９および
２０のいずれか１つ記載のＨ鎖。
（項目２５） 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖細胞系可変Ｈ鎖配列からの対応す
るアミノ酸残基で置換される、項目２、５、７、９、１２、１４、１６、１９および２０
のいずれか１つ記載のＨ鎖。
（項目２６） 生殖細胞系可変Ｈ鎖配列が、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−７、
ＶＨ３−２１およびＶＨ３−１１よりなる群から選択される、項目２５記載のＨ鎖。
（項目２７） 生殖細胞系可変Ｈ鎖配列がＶＨ３−２３である、項目２５記載のＨ鎖。
（項目２８） 希少枠組み残基が、Ｌ鎖可変領域サブグループのヒトＬ鎖可変領域配列の
１０％未満でのその位置での存在に基づき選択され、かつ、共通残基が、Ｌ鎖可変領域サ
ブグループの配列の５０％以上でのその位置での存在に基づき選択される、項目２１−２
３のいずれか１つ記載のＬ鎖。
（項目２９） 希少枠組み残基が、Ｈ鎖可変領域サブグループのヒトＨ鎖可変領域配列の
１０％未満でのその位置での存在に基づき選択され、かつ、共通残基が、Ｈ鎖可変領域サ
ブグループの配列の５０％以上でのその位置での存在に基づき選択される、項目２４−２
６のいずれか１つ記載のＨ鎖。
（項目３０） モノクローナル抗体３Ｄ６ Ｌ鎖からの相補性決定領域（ＣＤＲ）および
可変領域枠組み残基Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４６（Ｋａｂａｔの番号付け協定）［こ
こで、該Ｌ鎖の残部がヒト免疫グロブリンからである］を含んで成るＬ鎖。
（項目３１） モノクローナル抗体３Ｄ６ Ｈ鎖からの相補性決定領域（ＣＤＲ）および
可変領域枠組み残基Ｈ４９、Ｈ９３およびＨ９４（Ｋａｂａｔの番号付け協定）［ここで
、該Ｈ鎖の残部がヒト免疫グロブリンからである］を含んで成るＨ鎖。
（項目３２） 項目１、３、４、６、８、１０、１１、１３、１５、１７および１８のい
ずれか１つ記載のＬ鎖、ならびに項目２、５、７、９、１２、１４、１６、１９および２
０のいずれか１つ記載のＨ鎖、もしくは前記免疫グロブリンの抗原結合フラグメントを含
んで成るヒト化免疫グロブリン。
（項目３３） 最低１０⁷Ｍ^-1の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に
結合する、項目３２記載の免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目３４） 最低１０⁸Ｍ^-1の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に
結合する、項目３２記載の免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目３５） 最低１０⁹Ｍ^-1の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に
結合する、項目３２記載の免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目３６） Ｈ鎖のアイソタイプがγ１である、項目３２記載の免疫グロブリンもしく
は抗原結合フラグメント。
（項目３７） 可溶性βアミロイドペプチド（Ａβ）および凝集型Ａβ双方に結合する、
項目３２記載の免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目３８） 可溶性βアミロイドペプチド（Ａβ）が分散型Ａβである、項目３７記載
の免疫グロブリン。
（項目３９） βアミロイドペプチド（Ａβ）の食作用を媒介する、項目３２記載の免疫
グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目４０） 被験体の血液脳関門を横断する、項目３２記載の免疫グロブリンもしくは
抗原結合フラグメント。
（項目４１） 被験体のβアミロイドペプチド（Ａβ）負荷および神経炎性ジストロフィ
ー双方を低下させる、項目３２記載の免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目４２） （ａ）ヒト化Ｌ鎖が、配列番号２と呼称されるマウス３Ｄ６免疫グロブリ
ンＬ鎖可変ドメインの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する３個の相補性
決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）、ならびにヒトＬ鎖可変領域枠組み配列
からの可変領域枠組みを含んで成るが、但し、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４６（Ｋａｂ
ａｔの番号付け協定）よりなる第一の群から選択される最低１個の位置が、マウス３Ｄ６
免疫グロブリンＬ鎖可変領域枠組みの同等の位置に存在する同一のアミノ酸残基により占
有され；かつ、（ｂ）ヒト化Ｈ鎖が、配列番号４と呼称されるマウス３Ｄ６免疫グロブリ
ンＨ鎖可変ドメインの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する３個の相補性
決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）、ならびにヒトＨ鎖可変領域枠組み配列
からの可変領域枠組みを含んで成るが、但し、Ｈ４９、Ｈ９３およびＨ９４（Ｋａｂａｔ
の番号付け協定）よりなる第二の群から選択される最低１個の位置が、マウス３Ｄ６免疫
グロブリンＨ鎖可変領域枠組みの同等の位置に存在する同一のアミノ酸残基により占有さ
れ；
ここで、ヒト化免疫グロブリンは最低１０⁷Ｍ^-1の結合親和性でβアミロイドペプチド（
Ａβ）に特異的に結合し、３Ｄ６免疫グロブリンは、配列番号２と呼称される可変ドメイ
ンをもつＬ鎖および配列番号４と呼称される可変ドメインをもつＨ鎖を有する、
ヒト化Ｈ鎖およびヒト化Ｌ鎖を含んで成るヒト化免疫グロブリン。
（項目４３） ヒトＬ鎖可変領域枠組みがκＬ鎖可変領域からである、項目４２記載のヒ
ト化免疫グロブリン。
（項目４４） ヒトＨ鎖可変領域枠組みが、ＩｇＧ１ Ｈ鎖可変領域からである、項目４
２記載のヒト化免疫グロブリン。
（項目４５） ヒト化Ｌ鎖可変領域枠組みが、Ｋａｂａｔ番号０１９２３０、Ｋａｂａｔ
番号００５１３１、Ｋａｂａｔ番号００５０５８、Ｋａｂａｔ番号００５０５７、Ｋａｂ
ａｔ番号００５０５９、Ｋａｂａｔ番号Ｕ２１０４０およびＫａｂａｔ番号Ｕ４１６４５
よりなる群から選択されるＬ鎖からである、項目４２記載のヒト化免疫グロブリン。
（項目４６） ヒト化Ｈ鎖可変領域枠組みが、Ｋａｂａｔ番号０４５９１９、Ｋａｂａｔ
番号０００４５９、Ｋａｂａｔ番号０００５５３、Ｋａｂａｔ番号０００３８６およびＫ
ａｂａｔ番号Ｍ２３６９１よりなる群から選択されるＨ鎖からである、項目４２記載のヒ
ト化免疫グロブリン。
（項目４７） ヒト化Ｌ鎖可変領域枠組みが、第一の群からの位置を除いてＫａｂａｔ番
号０１９２３０のＬ鎖可変領域枠組み配列に同一であり、かつ、Ｈ鎖可変領域枠組みが、
第二の群からの位置を除いてＫａｂａｔ番号０４５９１９のＨ鎖可変領域枠組み配列に同
一である、項目４２記載のヒト化免疫グロブリン。
（項目４８） ヒト化Ｌ鎖が、マウス３Ｄ６ Ｈ鎖の対応する相補性決定領域に同一であ
る相補性決定領域を含んで成り、かつ、ヒト化Ｈ鎖が、マウス３Ｄ６ Ｈ鎖の対応する相
補性決定領域に同一である相補性決定領域を含んで成る、項目４２記載のヒト化免疫グロ
ブリン。
（項目４９） 配列番号２として示される３Ｄ６可変Ｌ鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ
１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）を含んで成るヒト化抗体。
（項目５０） 配列番号４として示される３Ｄ６可変Ｈ鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ
１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）を含んで成るヒト化抗体。
（項目５１） マウス３Ｄ６抗体からのＣＤＲに対応する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含
んで成る可変領域を含んで成る、βアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合するヒト
化抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
（項目５２） （ａ）マウス３Ｄ６相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸残基およびヒト
ＶＬサブグループＩＩ可変ドメイン枠組み領域（ＦＲ）のアミノ酸残基を含んで成るＬ鎖
可変ドメイン；ならびに
（ｂ）マウス３Ｄ６相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸残基およびヒトＶＨサブグルー
プＩＩＩ可変ドメイン枠組み領域（ＦＲ）のアミノ酸残基を含んで成るＨ鎖可変ドメイン
を含んで成る、最低１０⁷Ｍ^-1の親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）を結合するヒト
化抗体。
（項目５３） 配列番号２もしくは配列番号４として示される３Ｄ６免疫グロブリン可変
領域配列からの可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびヒトアクセプター免疫グロブ
リンからの可変枠組み領域を含んで成るキメラ免疫グロブリン。
（項目５４） 配列番号８に示されるところの可変Ｈ鎖領域および配列番号５に示される
ところの可変Ｌ鎖領域を含んで成る免疫グロブリンもしくはその抗原結合フラグメント。
（項目５５） 配列番号１２に示されるところの可変Ｈ鎖領域および配列番号１１に示さ
れるところのＬ鎖領域を含んで成る免疫グロブリンもしくはその抗原結合フラグメント。
（項目５６） 配列番号８に示されるところの可変Ｈ鎖領域、配列番号５に示されるとこ
ろの可変Ｌ鎖領域、およびＩｇＧ１からの定常領域を含んで成る免疫グロブリン。
（項目５７） 配列番号１２に示されるところの可変Ｈ鎖領域、配列番号１１に示される
ところのＬ鎖領域、およびＩｇＧ１からの定常領域を含んで成る免疫グロブリン。
（項目５８） 有効投薬量の項目３２−５２のいずれか１つ記載のヒト化免疫グロブリン
を患者に投与することを含んで成る、患者におけるアミロイド原性疾患の予防もしくは治
療方法。
（項目５９） 有効投薬量の項目３２−５２のいずれか１つ記載のヒト化免疫グロブリン
を患者に投与することを含んで成る、患者におけるアルツハイマー病の予防もしくは治療
方法。
（項目６０） ヒト化免疫グロブリンの有効投薬量が１ｍｇ／ｋｇ体重である、項目５９
記載の方法。
（項目６１） ヒト化免疫グロブリンの有効投薬量が１０ｍｇ／ｋｇ体重である、項目５
９記載の方法。
（項目６２） 項目３２−５２のいずれか１つ記載の免疫グロブリンおよび製薬学的担体
を含んで成る製薬学的組成物。
（項目６３） 配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１およ
び配列番号２のアミノ酸９４−１０２よりなる群から選択される配列番号２のフラグメン
トを含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目６４） 配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１およ
び配列番号２のアミノ酸９４−１０２を含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目６５） 配列番号４のアミノ酸３１−３５、配列番号４のアミノ酸５０−６６およ
び配列番号４のアミノ酸９９−１０７よりなる群から選択される配列番号４のフラグメン
トを含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目６６） 配列番号４のアミノ酸３１−３５、配列番号４のアミノ酸５０−６６およ
び配列番号４のアミノ酸９９−１０７を含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目６７） 配列番号２のアミノ酸配列を含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目６８） 配列番号４のアミノ酸配列を含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目６９） 最低１個の保存的アミノ酸置換を含んで成り、最低１０⁷Ｍ^-1の結合親和
性でのβアミロイドペプチド（Ａβ）への特異的結合を指図する能力を保持する、配列番
号２のアミノ酸配列を含んで成るポリペプチドの変異体。
（項目７０） 最低１個の保存的アミノ酸置換を含んで成り、最低１０⁷Ｍ^-1の結合親和
性でβアミロイドペプチド（Ａβ）を特異的に結合する能力を保持する、配列番号４のア
ミノ酸配列を含んで成るポリペプチドの変異体。
（項目７１） 配列番号２のアミノ酸配列の残基１−１１２を含んで成るか、もしくは配
列番号４のアミノ酸配列の残基１−１１９を含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目７２） 項目１、３、４、６、８、１０、１１、１３、１５、１７および１８のい
ずれか１つ記載のＬ鎖をコードする単離された核酸分子。
（項目７３） 配列番号２、５、７、９、１２、１４、１６、１９および２０のいずれか
１つ記載のＨ鎖をコードする単離された核酸分子。
（項目７４） 項目６４−７１のいずれか１つ記載のポリペプチドをコードする単離され
た核酸分子。
（項目７５） 項目３２−５７のいずれか１つ記載の免疫グロブリンをコードする単離さ
れた核酸分子。
（項目７６） 項目１もしくは３記載のヌクレオチド配列を含んで成る単離された核酸分
子。
（項目７７） 項目７２−７６のいずれか記載の核酸分子を含んで成るベクター。
（項目７８） 項目７２−７６のいずれか記載の核酸分子を含んで成る宿主細胞。
（項目７９） 抗体もしくはフラグメントが産生されるような条件下で項目４５記載の宿
主細胞を培養すること、および該宿主細胞もしくは培養物から前記抗体を単離することを
含んで成る、抗体もしくはそのフラグメントの製造方法。
（項目８０） 抗体もしくはフラグメントが産生されるような条件下で前記抗体もしくは
フラグメントをコードする核酸分子を発現する宿主細胞を培養すること、および前記抗体
もしくはフラグメントを該宿主細胞もしくは培養物から単離することを含んで成り、前記
抗体もしくはフラグメントは、配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸
５５−６１および配列番号２のアミノ酸９４−１０２を含んで成る、抗体もしくはそのフ
ラグメントの製造方法。
（項目８１） 抗体もしくはフラグメントが産生されるような条件下で前記抗体もしくは
フラグメントをコードする核酸分子を発現する宿主細胞を培養すること、および前記抗体
を該宿主細胞もしくは培養物から単離することを含んで成り、前記抗体もしくはフラグメ
ントは、配列番号４のアミノ酸３１−３５、配列番号４のアミノ酸５０−６６および配列
番号４のアミノ酸９９−１１２を含んで成る、抗体もしくはそのフラグメントの製造方法
。
（項目８２） 解明された免疫グロブリン構造に基づき３Ｄ６可変領域の三次元構造をモ
デル化すること、および置換の影響を受けやすい残基が同定されるような３Ｄ６免疫グロ
ブリン可変領域のコンホメーションもしくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基につい
て前記モデルを分析することを含んで成る、ヒト化３Ｄ６免疫グロブリン可変枠組み領域
中の置換の影響を受けやすい残基の同定方法。
（項目８３） ３Ｄ６免疫グロブリン、３Ｄ６免疫グロブリン鎖もしくはそれらのドメイ
ンの三次元像の作製における、配列番号２もしくは配列番号４として示される可変領域配
列またはそれらのいずれかの部分の使用。
（項目８４） （ｉ）配列番号１４として示される１０Ｄ５免疫グロブリンＬ鎖可変領域
配列からの可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫
グロブリンＬ鎖配列からの可変枠組み領域［但し、最低１個の枠組み残基がマウス１０Ｄ
５ Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで該枠組み残基は：
（ａ）抗原を直接非共有結合する残基；
（ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；
（ｃ）ＣＤＲと相互作用する残基；および
（ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基
よりなる群から選択される］を含んで成る、ヒト化免疫グロブリンＬ鎖。
（項目８５） （ｉ）配列番号１６として示される１０Ｄ５免疫グロブリンＨ鎖可変領域
配列からの可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫
グロブリンＨ鎖からの可変枠組み領域［但し、最低１個の枠組み残基がマウス１０Ｄ５
Ｈ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで該枠組み残基は：
（ａ）抗原を直接非共有結合する残基；
（ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；
（ｃ）ＣＤＲと相互作用する残基；および
（ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基
よりなる群から選択される］を含んで成る、ヒト化免疫グロブリンＨ鎖。
（項目８６） ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低７０％の配列の同一
性を共有するマウス免疫グロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデ
ル化することにより同定される、項目８４記載のＬ鎖。
（項目８７） ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低８０％の配列の同一
性を共有するマウス免疫グロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデ
ル化することにより同定される、項目８４記載のＬ鎖。
（項目８８） ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低９０％の配列の同一
性を共有するマウス免疫グロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデ
ル化することにより同定される、項目８４記載のＬ鎖。
（項目８９） ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低７０％の配列の同一
性を共有するマウス免疫グロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデ
ル化することにより同定される、項目８５記載のＨ鎖。
（項目９０） ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低８０％の配列の同一
性を共有するマウス免疫グロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデ
ル化することにより同定される、項目８５記載のＨ鎖。
（項目９１） ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低９０％の配列の同一
性を共有するマウス免疫グロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデ
ル化することにより同定される、項目８５記載のＨ鎖。
（項目９２） （ｉ）配列番号１４として示される１０Ｄ５免疫グロブリンＬ鎖可変領域
配列からの可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グ
ロブリンＬ鎖配列からの可変枠組み領域［但し、最低１個の枠組み残基がマウス１０Ｄ５
Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで、該枠組み残基は、
１０Ｄ５免疫グロブリンＬ鎖可変領域の三次元モデルの分析により同定されるところのＬ
鎖可変領域のコンホメーションもしくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基である］を
含んで成るヒト化免疫グロブリンＬ鎖。
（項目９３） （ｉ）配列番号１６として示される１０Ｄ５免疫グロブリンＨ鎖可変領域
配列からの可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グ
ロブリンＨ鎖からの可変枠組み領域［但し、最低１個の枠組み残基がマウス１０Ｄ５ Ｈ
鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで、該枠組み残基は、１０
Ｄ５免疫グロブリンＨ鎖可変領域の三次元モデルの分析により同定されるところのＨ鎖可
変領域のコンホメーションもしくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基である］を含ん
で成るヒト化免疫グロブリンＨ鎖。
（項目９４） 枠組み残基が、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近
位の残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接する残基、ＣＤＲ残基
の６Å以内の残基、カノニカル残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、希少残基および
構造モデルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択される、項目９２記載の
Ｌ鎖。
（項目９５） 枠組み残基が、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近
位の残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接する残基、ＣＤＲ残基
の６Å以内の残基、カノニカル残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、異常な残基およ
び構造モデルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択される、項目９３記載
のＨ鎖。
（項目９６） 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低７０％の配列の同一性を共有するマ
ウス免疫グロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデル化することに
より同定される、項目９２もしくは９４記載のＬ鎖。
（項目９７） 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低８０％の配列の同一性を共有するマ
ウス免疫グロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデル化することに
より同定される、項目９２もしくは９４記載のＬ鎖。
（項目９８） 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低９０％の配列の同一性を共有するマ
ウス免疫グロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデル化することに
より同定される、項目９２もしくは９４記載のＬ鎖。
（項目９９） 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低７０％の配列の同一性を共有するマ
ウス免疫グロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデル化することに
より同定される、項目９３もしくは９５記載のＨ鎖。
（項目１００） 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低８０％の配列の同一性を共有する
マウス免疫グロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデル化すること
により同定される、項目９３もしくは９５記載のＨ鎖。
（項目１０１） 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低９０％の配列の同一性を共有する
マウス免疫グロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデル化すること
により同定される、項目９３もしくは９５記載のＨ鎖。
（項目１０２） 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、その位置でヒト可変Ｌ鎖配列に共通
であるアミノ酸残基で置換される、項目８４、８６−８８、９２、９４および９６−９８
のいずれか１つ記載のＬ鎖。
（項目１０３） 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖細胞系可変Ｌ鎖配列からの対応
するアミノ酸残基で置換される、項目８４、８６−８８、９２、９４および９６−９８の
いずれか１つ記載のＬ鎖。
（項目１０４） 生殖細胞系可変Ｌ鎖配列が、配列の同一性の可変Ｌ鎖配列と最低７０％
の同一性を共有する免疫グロブリンのものである、項目１０３記載のＬ鎖。
（項目１０５） 生殖細胞系可変Ｌ鎖配列が、配列の同一性の可変Ｌ鎖配列と最低８０％
の同一性を共有する免疫グロブリンのものである、項目１０３記載のＬ鎖。
（項目１０６） 生殖細胞系可変Ｌ鎖配列が、配列の同一性の可変Ｌ鎖配列と最低９０％
の同一性を共有する免疫グロブリンのものである、項目１０３記載のＬ鎖。
（項目１０７） 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、その位置でヒト可変Ｈ鎖配列に共通
であるアミノ酸残基で置換される、項目８５、８９−９１、９３および９９−１０１のい
ずれか１つ記載のＨ鎖。
（項目１０８） 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖細胞系可変Ｈ鎖配列からの対応
するアミノ酸残基で置換される、項目８５、８９−９１、９３および９９−１０１のいず
れか１つ記載のＨ鎖。
（項目１０９） 生殖細胞系可変Ｈ鎖配列が、配列番号１６の可変Ｈ鎖配列と最低７０％
の同一性のものであるかもしくはそれを共有している、項目１０８記載のＨ鎖。
（項目１１０） 生殖細胞系可変Ｈ鎖配列が、配列番号１６の可変Ｈ鎖配列と最低８０％
の同一性のものであるかもしくはそれを共有している、項目１０８記載のＨ鎖。
（項目１１１） 生殖細胞系可変Ｈ鎖配列が、配列番号１６の可変Ｈ鎖配列と最低９０％
の同一性のものであるかもしくはそれを共有している、項目１０８記載のＨ鎖。
（項目１１２） 希少枠組み残基が、Ｌ鎖可変領域サブグループのヒトＬ鎖可変領域配列
の１０％未満でのその位置での存在に基づき選択され、かつ、共通残基がＬ鎖可変領域サ
ブグループの配列の５０％以上でのその位置での存在に基づき選択される、項目１０２−
１０６のいずれか１つ記載のＬ鎖。
（項目１１３） 希少枠組み残基が、Ｈ鎖可変領域サブグループのヒトＨ鎖可変領域配列
の１０％未満でのその位置での存在に基づき選択され、かつ、共通残基がＨ鎖可変領域サ
ブグループの配列の５０％以上でのその位置での存在に基づき選択される、項目１０７−
１１１のいずれか１つ記載のＨ鎖。
（項目１１４） 項目８４、８６−８８、９２、９４および９６−９８のいずれか１つ記
載のＬ鎖、ならびに、項目８５、８９−９１および９３ならびに９９−１０１のいずれか
１つ記載のＨ鎖を含んで成るヒト化免疫グロブリン、もしくは前記免疫グロブリンの抗原
結合フラグメント。
（項目１１５） 最低１０^-7Ｍの結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に
結合する、項目１１４記載の免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目１１６） 最低１０^-8Ｍの結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に
結合する、項目１１４記載の免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目１１７） 最低１０^-9Ｍの結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に
結合する、項目１１４記載の免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目１１８） Ｈ鎖のアイソタイプがγ１である、項目１１４記載の免疫グロブリンも
しくは抗原結合フラグメント。
（項目１１９） 凝集型βアミロイドペプチド（Ａβ）に結合する、項目１１４記載の免
疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目１２０） βアミロイドペプチド（Ａβ）の食作用を媒介する、項目１１４記載の
免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目１２１） 被験体の血液脳関門を横断する、項目１１４記載の免疫グロブリンもし
くは抗原結合フラグメント。
（項目１２２） 被験体のβアミロイドペプチド（Ａβ）斑負荷を低下させる、項目１１
４記載の免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメント。
（項目１２３） （ａ）ヒト化Ｌ鎖が、配列番号１４と呼称されるマウス１０Ｄ５免疫グ
ロブリンＬ鎖可変ドメインの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する３個の
相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）、ならびにヒトＬ鎖可変領域枠組
み配列からの可変領域枠組みを含んで成るが、但し、カノニカル残基、バーニア残基、充
填残基および希少残基よりなる群から選択される最低１個の枠組み残基が、マウス１０Ｄ
５免疫グロブリンＬ鎖可変領域枠組みの同等の位置に存在する同一のアミノ酸残基により
占有され；かつ、
（ｂ）ヒト化Ｈ鎖が、配列番号１６と呼称されるマウス１０Ｄ５免疫グロブリンＨ鎖可
変ドメインの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する３個の相補性決定領域
（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）、ならびにヒトＨ鎖可変領域枠組み配列からの可
変領域枠組みを含んで成るが、但し、カノニカル残基、バーニア残基、充填残基および希
少残基よりなる第二の群から選択される最低１個の枠組み残基が、マウス１０Ｄ５免疫グ
ロブリンＨ鎖可変領域枠組みの同等の位置に存在する同一のアミノ酸残基により占有され
；
ここで、ヒト化免疫グロブリンは最低１０^-7Ｍの結合親和性でβアミロイドペプチド（「
Ａβ」）に特異的に結合し、１０Ｄ５免疫グロブリンは、配列番号１４と呼称される可変
ドメインをもつＬ鎖および配列番号１６で示される可変ドメインをもつＨ鎖を有する、
ヒト化Ｈ鎖およびヒト化Ｌ鎖を含んで成るヒト化免疫グロブリン。
（項目１２４） ヒトＬ鎖可変領域枠組みがκＬ鎖可変領域からである、項目１２３記載
のヒト化免疫グロブリン。
（項目１２５） ヒトＨ鎖可変領域枠組みが、ＩｇＧ１ Ｈ鎖可変領域からである、項目
１２３記載のヒト化免疫グロブリン。
（項目１２６） Ｌ鎖可変領域枠組みが、１０Ｄ５免疫グロブリンのＬ鎖配列と最低７０
％の配列の同一性を有するヒト免疫グロブリンＬ鎖からである、項目１２３記載のヒト化
免疫グロブリン。
（項目１２７） Ｈ鎖可変領域枠組みが、１０Ｄ５免疫グロブリンのＨ鎖配列と最低７０
％の配列の同一性を有するヒト免疫グロブリンＨ鎖からである、項目１２３記載のヒト化
免疫グロブリン。
（項目１２８） ヒト化Ｌ鎖がマウス１０Ｄ５ Ｈ鎖の対応する相補性決定領域に同一で
ある相補性決定領域を含んで成り、かつ、ヒト化Ｈ鎖がマウス１０Ｄ５ Ｈ鎖の対応する
相補性決定領域に同一である相補性決定領域を含んで成る、項目１２３記載のヒト化免疫
グロブリン。
（項目１２９） 配列番号１４として示される１０Ｄ５可変Ｌ鎖配列の相補性決定領域（
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）を含んで成るヒト化抗体。
（項目１３０） 配列番号１６として示される１０Ｄ５可変Ｈ鎖配列の相補性決定領域（
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）を含んで成るヒト化抗体。
（項目１３１）マウス１０Ｄ５抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応するＣＤＲを
含んで成る可変領域を含んで成る、βアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合するヒ
ト化抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
（項目１３２） 実質的に配列番号１４もしくは配列番号１６に示されるところの可変領
域配列、およびヒト免疫グロブリンからの定常領域配列を含んで成るキメラ免疫グロブリ
ン。
（項目１３３） 有効投薬量の項目１１４−１３１のいずれか１つ記載のヒト化免疫グロ
ブリンを患者に投与することを含んで成る、患者でのアミロイド原性疾患の予防もしくは
治療方法。
（項目１３４） 有効投薬量の項目１１４−１３１のいずれか１つ記載のヒト化免疫グロ
ブリンを患者に投与することを含んで成る、患者でのアルツハイマー病の予防もしくは治
療方法。
（項目１３５） ヒト化免疫グロブリンの有効投薬量が１ｍｇ／ｋｇ体重である、項目１
３４記載の方法。
（項目１３６） ヒト化免疫グロブリンの有効投薬量が１０ｍｇ／ｋｇ体重である、項目
１３４記載の方法。
（項目１３７） 項目１１４−１３１のいずれか１つ記載の免疫グロブリンおよび製薬学
的担体を含んで成る製薬学的組成物。
（項目１３８） 配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１お
よび配列番号２のアミノ酸９４−１０２よりなる群から選択される配列番号２のフラグメ
ントを含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目１３９） 配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１お
よび配列番号２のアミノ酸９４−１０２を含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目１４０） 配列番号４のアミノ酸３１−３７、配列番号４のアミノ酸５２−６７お
よび配列番号４のアミノ酸１００−１１２よりなる群から選択される配列番号４のフラグ
メントを含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目１４１） 配列番号４のアミノ酸３１−３７、配列番号４のアミノ酸５２−６７お
よび配列番号４のアミノ酸１００−１１２を含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目１４２） 配列番号１４のアミノ酸配列を含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目１４３） 配列番号１６のアミノ酸配列を含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目１４４） 最低１個の保存的アミノ酸置換を含んで成り、最低１０^-7Ｍの結合親和
性でのβアミロイドペプチド（Ａβ）を特異的に結合する能力を保持する、配列番号１４
のアミノ酸配列を含んで成るポリペプチドの変異体。
（項目１４５） 最低１個の保存的アミノ酸置換を含んで成り、最低１０^-7Ｍの結合親和
性でのβアミロイドペプチド（Ａβ）への特異的結合を指図する能力を保持する、配列番
号１６のアミノ酸配列を含んで成るポリペプチドの変異体。
（項目１４６） 配列番号１４のアミノ酸配列の残基１−１１２を含んで成るか、もしく
は配列番号１６のアミノ酸配列の残基１−１２３を含んで成る単離されたポリペプチド。
（項目１４７） 項目８４、８６−８８、９２、９４および９６−９８のいずれか１つ記
載のＬ鎖をコードする単離された核酸分子。
（項目１４８） 項目８５、８９−９１、９３および９９−１０１のいずれか１つ記載の
Ｈ鎖をコードする単離された核酸分子。
（項目１４９） 項目１３９−１４６のいずれか１つ記載のポリペプチドをコードする単
離された核酸分子。
（項目１５０） 項目１１４−１３２のいずれか１つ記載の免疫グロブリンをコードする
単離された核酸分子。
（項目１５１） 配列番号１３もしくは１５のヌクレオチド配列を含んで成る単離された
核酸分子。
（項目１５２） 項目１４７−１５１のいずれか記載の核酸分子を含んで成るベクター。
（項目１５３） 項目１４７−１５１のいずれか記載の核酸分子を含んで成る宿主細胞。
（項目１５４） 抗体もしくはフラグメントが産生されるような条件下で項目１５３記載
の宿主細胞を培養すること、および該宿主細胞もしくは培養物から前記抗体を単離するこ
とを含んで成る、抗体もしくはそのフラグメントの製造方法。
（項目１５５） 抗体もしくはフラグメントが産生されるような条件下で前記抗体もしく
はフラグメントをコードする核酸分子を発現する宿主細胞を培養すること、および前記抗
体を該宿主細胞もしくは培養物から単離することを含んで成り、前記抗体もしくはフラグ
メントは、配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１および配
列番号２のアミノ酸９４−１０２を含んで成る、抗体もしくはそのフラグメントの製造方
法。
（項目１５６） 抗体もしくはフラグメントが産生されるような条件下で前記抗体もしく
はフラグメントをコードする核酸分子を発現する宿主細胞を培養すること、および前記抗
体を該宿主細胞もしくは培養物から単離することを含んで成り、前記抗体もしくはフラグ
メントは、配列番号４のアミノ酸３１−３７、配列番号４のアミノ酸５２−６７および配
列番号４のアミノ酸１００−１１２を含んで成る、抗体もしくはそのフラグメントの製造
方法。
（項目１５７） 解明された免疫グロブリン構造に基づき１０Ｄ５可変領域の三次元構造
をモデル化すること、および置換の影響を受けやすい残基が同定されるような１０Ｄ５免
疫グロブリン可変領域のコンホメーションもしくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基
について前記モデルを分析することを含んで成る、ヒト化１０Ｄ５免疫グロブリン可変枠
組み領域中の置換の影響を受けやすい残基の同定方法。
（項目１５８） １０Ｄ５免疫グロブリン、１０Ｄ５免疫グロブリン鎖もしくはそれらの
ドメインの三次元像の作製における、配列番号１４もしくは配列番号１６として示される
可変領域配列またはそれらのいずれかの部分の使用。

発明にかかる、マウス３Ｄ６、ヒト化３Ｄ６、Ｋａｂａｔ番号１０９２３０および生殖細胞系Ａ１９抗体のＬ鎖のアミノ酸配列の整列を描く。ＣＤＲ領域は矢印により示す。太字斜体は希少マウス残基を示す。太字は充填（ＶＨ＋ＶＬ）残基を示す。黒地はカノニカル／ＣＤＲ相互作用残基を示す。*印はヒト化３Ｄ６、バージョン１中の戻し突然変異に選択された残基を示す。 発明にかかる、マウス３Ｄ６、ヒト化３Ｄ６、Ｋａｂａｔ番号０４５９１９および生殖細胞系ＶＨ３−２３抗体のＨ鎖のアミノ酸配列の整列を描く。注釈は図１についてと同一である。 発明にかかる、３Ｄ６、キメラ３Ｄ６および１０Ｄ５のＡβ結合特性をグラフで描く。図３Ａは、マウス３Ｄ６と比較したキメラ３Ｄ６（ＰＫ１６１４）へのＡβの結合を描くグラフである。図３Ｂは、Ａβへの結合についての未標識３Ｄ６、ＰＫ１６１４および１０Ｄ５に対するビオチニル化３Ｄ６の競争を描くグラフである。 発明にかかる、α−炭素バックボーンの見取図を示す３Ｄ６ ＶＨおよびＶＬの相同性モデルを描く。ＶＨは点線として示し、また、ＶＬは実線として示す。ＣＤＲ領域はリボンの形態で示す。 発明にかかる、キメラ３Ｄ６およびヒト化３Ｄ６のＡβ結合特性をグラフで描く。図５Ａは、凝集型Ａβへのヒト化３Ｄ６ｖ１およびキメラ３Ｄ６の結合を測定するＥＬＩＳＡの結果を描く。図５Ｂは、凝集型Ａβへのヒト化３Ｄ６ｖ１およびヒト化３Ｄ６ｖ２の結合を測定するＥＬＩＳＡの結果を描く。 発明にかかる、ＰＤＡＰＰマウスの脳切片からのＡβ斑へのヒト化３Ｄ６およびキメラ３Ｄ６の結合を定量するグラフである。 発明にかかる、Ａβへの結合についてマウス３Ｄ６と競争する、ヒト化３Ｄ６バージョン１および２、キメラ３Ｄ６、マウス３Ｄ６ならびに１０Ｄ５の能力を試験する競争結合アッセイの結果を示すグラフである。 発明にかかる、小膠細胞によるＡβの取り込みを媒介する、ヒト化３Ｄ６ｖ２、キメラ３Ｄ６およびヒトＩｇＧの能力を試験するエクスビボ食作用アッセイのグラフで描く。 発明にかかる、１０Ｄ５ ＶＬおよび３Ｄ６ ＶＬのアミノ酸配列の整列を描く。太字は１０Ｄ５に正確に合致する残基を示す。 発明にかかる、１０Ｄ５ ＶＨおよび３Ｄ６ ＶＨのアミノ酸配列の整列を描く。太字は１０Ｄ５に正確に合致する残基を示す。

（発明の詳細な記述）
本発明は、アルツハイマー病もしくは他のアミロイド原性疾患を予防もしくは治療する
ための新たな免疫学的試薬および方法を特徴とする。本発明は、少なくとも部分的に、β
アミロイドタンパク質（Ａβ）の結合（例えば可溶性および／もしくは凝集型（ａｇｇｒ
ｅｇａｔｅｄ）Ａβの結合）、（例えば凝集型Ａβの）食作用の媒介、（例えば患者にお
ける）斑負荷（ｐｌａｑｕｅ ｂｕｒｄｅｎ）の低下ならびに／または神経炎性ジストロ
フィーの低下で有効な、２種のモノクローナル免疫グロブリン、３Ｄ６および１０Ｄ５の
特徴づけに基づく。本発明はさらに、これらの免疫グロブリンの可変ＬおよびＨ鎖の一次
および二次構造の決定および構造的特徴づけ、ならびに活性および免疫原性に重要な残基
の同定に基づく。

本明細書で記述される好ましいモノクローナル免疫グロブリンの可変Ｌおよび／もしく
は可変Ｈ鎖を包含する免疫グロブリンが特徴とされる。ヒト化可変Ｌおよび／もしくはヒ
ト化可変Ｈ鎖を包含する好ましい免疫グロブリン、例えば治療的免疫グロブリンが特徴と
される。好ましい可変Ｌおよび／もしくは可変Ｈ鎖は、モノクローナル免疫グロブリン（
例えばドナー免疫グロブリン）からの相補性決定領域（ＣＤＲ）、および実質的にヒトア
クセプター免疫グロブリンからの可変枠組み領域を包含する。「実質的にヒトアクセプタ
ー免疫グロブリンから」という句は、大多数のもしくは重要な枠組み残基がヒトアクセプ
ター配列からであるが、しかしながらヒト化免疫グロブリンの活性を向上させる（例えば
それがドナー免疫グロブリンの活性をより緊密に模倣するような活性を変える）よう選択
された、もしくはヒト化免疫グロブリンの免疫原性を減少させるよう選択された残基での
、ある位置の残基の置換を見込むことを意味する。

一態様において、本発明は３Ｄ６可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含し（すなわ
ち、配列番号２として示されるＬ鎖可変領域配列からの１、２もしくは３個のＣＤＲを包
含するか、または、配列番号４として示されるＨ鎖可変領域配列からの１、２もしくは３
個のＣＤＲを包含する）、かつ、実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンＬもしくはＨ
鎖配列からの可変枠組み領域を包含する、ヒト化免疫グロブリンＬもしくはＨ鎖を特徴と
するが、但し、枠組み残基の最低１残基は対応するマウス残基に戻し突然変異され（ｂａ
ｃｋｍｕｔａｔｅｄ）、ここで前記戻し突然変異はＡβ結合を指図する該鎖の能力に実質
的に影響を及ぼさない。

別の態様において、本発明は、３Ｄ６可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含し（例
えば、配列番号２として示されるＬ鎖可変領域配列からの１、２もしくは３個のＣＤＲを
包含しかつ／または配列番号４として示されるＨ鎖可変領域配列からの１、２もしくは３
個のＣＤＲを包含する）、かつ、実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンＬもしくはＨ
鎖配列からの可変枠組み領域を包含する、ヒト化免疫グロブリンＬもしくはＨ鎖を特徴と
するが、但し、最低１個の枠組み残基はマウス３Ｄ６ ＬもしくはＨ鎖可変領域配列から
の対応するアミノ酸残基で置換され、ここで該枠組み残基は（ａ）抗原を直接非共有結合
する残基；（ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；（ｃ）ＣＤＲと相互作用する残基（例えば相同
な既知の免疫グロブリン鎖の解明された（ｓｏｌｖｅｄ）構造上でＬもしくはＨ鎖をモデ
ル化することにより同定される）；および（ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基よりなる
群から選択される。

別の態様において、本発明は３Ｄ６可変領域ＣＤＲおよびヒトアクセプター免疫グロブ
リンＬもしくはＨ鎖配列からの可変枠組み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＬもしく
はＨ鎖を特徴とするが、但し、最低１個の枠組み残基はマウス３Ｄ６ ＬもしくはＨ鎖可
変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで該枠組み残基は、可変領域の
三次元モデルの分析により同定されるところのＬ鎖可変領域のコンホメーションもしくは
機能に影響を及ぼすことが可能な残基、例えば、抗原と相互作用することが可能な残基、
抗原結合部位に近位の残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接する
残基、ＣＤＲ残基の６Å以内の残基、カノニカル(ｃａｎｏｎｉｃａｌ)残基、バーニア領
域（ｖｅｒｎｉｅｒ ｚｏｎｅ）残基、鎖間充填(ｉｎｔｅｒｃｈａｉｎ ｐａｃｋｉｎ
ｇ)残基、異常な（ｕｎｕｓｕａｌ）残基、もしくは構造モデルの表面上のグリコシル化
部位残基である。

別の態様において、本発明は、３Ｄ６可変領域ＣＤＲ（例えば配列番号２として示され
る３Ｄ６ Ｌ鎖可変領域配列から）を包含しかつヒトアクセプター免疫グロブリン可変枠
組み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＬ鎖を特徴とするが、但し、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３
６およびＬ４６（Ｋａｂａｔの番号付け協定）よりなる群から選択される最低１個の枠組
み残基は、マウス３Ｄ６ Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換される。
別の態様において、本発明は、３Ｄ６可変領域ＣＤＲ（例えば配列番号４として示される
３Ｄ６ Ｈ鎖可変領域配列から）を包含しかつヒトアクセプター免疫グロブリン可変枠組
み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＨ鎖を特徴とするが、但し、Ｈ４９、Ｈ９３およ
びＨ９４（Ｋａｂａｔの番号付け協定）よりなる群から選択される最低１個の枠組み残基
は、マウス３Ｄ６ Ｈ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換される。

好ましいＬ鎖は、サブタイプκＩＩ（Ｋａｂａｔの協定）のκＩＩ枠組み領域、例えば
、アクセプター免疫グロブリンＫａｂａｔ番号０１９２３０、Ｋａｂａｔ番号００５１３
１、Ｋａｂａｔ番号００５０５８、Ｋａｂａｔ番号００５０５７、Ｋａｂａｔ番号００５
０５９、Ｋａｂａｔ番号Ｕ２１０４０およびＫａｂａｔ番号Ｕ４１６４５からの枠組み領
域を包含する。好ましいＨ鎖は、サブタイプＩＩＩ（Ｋａｂａｔの協定）の枠組み領域、
例えば、アクセプター免疫グロブリンＫａｂａｔ番号０４５９１９、Ｋａｂａｔ番号００
０４５９、Ｋａｂａｔ番号０００５５３、Ｋａｂａｔ番号０００３８６およびＫａｂａｔ
番号Ｍ２３６９１からの枠組み領域を包含する。

一態様において、本発明は、１０Ｄ５の可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含し（
すなわち、配列番号１４として示されるＬ鎖可変領域配列からの１、２もしくは３個のＣ
ＤＲを包含するか、または配列番号１６として示されるＨ鎖可変領域配列からの１、２も
しくは３個のＣＤＲを包含する）、かつ、実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンＬも
しくはＨ鎖配列からの可変枠組み領域を包含する、ヒト化免疫グロブリンＬ鎖もしくはＨ
鎖を特徴とするが、但し、該枠組み残基の最低１残基は対応するマウス残基に戻し突然変
異され、ここで前記戻し突然変異はＡβ結合を指図する該鎖の能力に実質的に影響を及ぼ
さない。

別の態様において、本発明は、１０Ｄ５可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含し（
例えば、配列番号１４として示されるＬ鎖可変領域配列からの１、２もしくは３個のＣＤ
Ｒを包含しかつ／または配列番号１６として示されるＨ鎖可変領域配列からの１、２もし
くは３個のＣＤＲを包含する）、かつ、実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンＬもし
くはＨ鎖配列からの可変枠組み領域を包含する、ヒト化免疫グロブリンＬもしくはＨ鎖を
特徴とするが、但し、最低１個の枠組み残基は、マウス３Ｄ６ ＬもしくはＨ鎖可変領域
配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで、該枠組み残基は（ａ）抗原を直接
非共有結合する残基；（ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；（ｃ）ＣＤＲと相互作用する残基（
例えば、相同な既知の免疫グロブリン鎖の解明された構造上でＬもしくはＨ鎖をモデル化
することにより同定される）；および（ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基よりなる群か
ら選択される。

別の態様において、本発明は、１０Ｄ５可変領域ＣＤＲ、およびヒトアクセプター免疫
グロブリンＬもしくはＨ鎖配列からの可変枠組み領域を包含する、ヒト化免疫グロブリン
ＬもしくはＨ鎖を特徴とするが、但し、最低１個の枠組み残基は、マウス１０Ｄ５ Ｌも
しくはＨ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、ここで該枠組み残基は
、可変領域の三次元モデルの分析により同定されるところのＬ鎖可変領域のコンホメーシ
ョンもしくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基、例えば、抗原と相互作用することが
可能な残基、抗原結合部位に近位の残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤ
Ｒに隣接する残基、ＣＤＲ残基の６Å以内の残基、カノニカル残基、バーニア領域残基、
鎖間充填残基、異常な残基、もしくは構造モデルの表面上のグリコシル化部位残基である
。

別の態様において、本発明は上述された置換に加え、最低１個の希少ヒト枠組み残基の
置換を特徴とする。例えば、希少（ｒａｒｅ）残基は、その位置でヒトＶ鎖配列に共通で
あるアミノ酸残基で置換されることができる。あるいは、希少残基は、相同な生殖細胞系
Ｖ鎖配列からの対応するアミノ酸残基で置換されることができる（例えば、希少Ｌ鎖枠組
み残基は、Ａ１、Ａ１７、Ａ１８、Ａ２もしくはＡ１９生殖細胞系免疫グロブリン配列か
らの対応する生殖細胞系残基で置換されることができるか、または、希少Ｈ鎖枠組み残基
は、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−７、ＶＨ３−２１もしくはＶＨ３−１１生殖
細胞系免疫グロブリン配列からの対応する生殖細胞系残基で置換されることができる。

別の態様において、本発明は、上述されたところのＬ鎖およびＨ鎖を包含するヒト化免
疫グロブリン、もしくは前記免疫グロブリンの抗原結合フラグメントを特徴とする。例示
的一態様において、ヒト化免疫グロブリンは、最低１０⁷Ｍ^-1、１０⁸Ｍ^-1もしくは１０⁹
Ｍ^-1の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に結合（例えば特異的に結合）する。
別の態様において、免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメントはアイソタイプγ１を
有するＨ鎖を包含する。別の態様において、免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメン
トは可溶性βアミロイドペプチド（Ａβ）および凝集型Ａβ双方に結合（例えば特異的に
結合）する。別の態様において、免疫グロブリンもしくは抗体結合フラグメントは、βア
ミロイドペプチド（Ａβ）の食作用を媒介する（例えば食作用を誘導する）。なお別の態
様において、免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメントは、被験体の血液脳関門を横
断する。なお別の態様において、免疫グロブリンもしくは抗原結合フラグメントは、被験
体でのβアミロイドペプチド（Ａβ）負荷および神経炎性ジストロフィーの双方を低下さ
せる。

別の態様において、本発明は３Ｄ６可変領域（例えば配列番号２もしくは配列番号４と
して示される可変領域配列）を包含するキメラ免疫グロブリンを特徴とする。なお別の態
様において、本発明は、配列番号８に示されるところの可変Ｈ鎖領域および配列番号５に
示されるところの可変Ｌ鎖領域を包含する免疫グロブリンもしくはその抗原結合フラグメ
ントを特徴とする。なお別の態様において、本発明は、配列番号１２に示されるところの
可変Ｈ鎖領域および配列番号１１に示されるところの可変Ｌ鎖領域を包含する免疫グロブ
リンもしくはその抗原結合フラグメントを特徴とする。別の態様において、本発明は１０
Ｄ５可変領域（例えば配列番号１４もしくは配列番号１６として示される可変領域配列）
を包含するキメラ免疫グロブリンを特徴とする。なお別の態様において、免疫グロブリン
もしくはその抗原結合フラグメントはＩｇＧ１からの定常領域をさらに包含する。

本明細書に記述される免疫グロブリンは、アミロイド原性疾患の予防もしくは治療に照
準を定められる治療法での使用にとりわけ適する。一態様において、本発明は、有効投薬
量の本明細書に記述されるところのヒト化免疫グロブリンを患者に投与することを伴うア
ミロイド原性疾患（例えばアルツハイマー病）の予防もしくは治療方法を特徴とする。別
の態様において、本発明は、本明細書に記述されるところのヒト化免疫グロブリンおよび
製薬学的担体を包含する製薬学的組成物を特徴とする。本明細書に記述される免疫グロブ
リンまたは免疫グロブリンフラグメントもしくは鎖を産生させるための単離された核酸分
子、ベクターおよび宿主細胞、ならびに前記免疫グロブリン、免疫グロブリンフラグメン
トもしくは免疫グロブリン鎖の製造方法もまた特徴とされる。

本発明は、それぞれヒト化３Ｄ６もしくは１０Ｄ５免疫グロブリンを製造する場合に置
換の影響を受けやすい３Ｄ６もしくは１０Ｄ５の残基の同定方法をさらに特徴とする。例
えば、置換の影響を受けやすい可変枠組み領域残基の同定方法は、解明された相同な免疫
グロブリン構造上の３Ｄ６もしくは１０Ｄ５可変領域の三次元構造をモデル化すること、
および置換の影響を受けやすい残基が同定されるような、３Ｄ６もしくは１０Ｄ５免疫グ
ロブリン可変領域のコンホメーションもしくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基につ
いて前記モデルを分析することを必要とする。本発明はさらに、３Ｄ６免疫グロブリン、
３Ｄ６免疫グロブリン鎖もしくはそれらのドメインの三次現像の作製における、配列番号
２もしくは配列番号４として示される可変領域配列またはそのいずれかの部分の使用を特
徴とする。１０Ｄ５免疫グロブリン、１０Ｄ５免疫グロブリン鎖もしくはそれらのドメイ
ンの三次元像の作製における、配列番号１４もしくは配列番号１６として示される可変領
域配列またはそのいずれかの部分の使用もまた特徴とされる。

本発明を記述する前に、下で使用されることになるある種の用語の定義を示すことがそ
の理解に役立つかもしれない。

「免疫グロブリン」もしくは「抗体」（本明細書で互換性に使用される）という用語は
、２本のＨおよび２本のＬ鎖よりなる基本的な４ポリペプチド鎖構造を有する抗原結合タ
ンパク質を指し、前記鎖は例えば、抗原を特異的に結合する能力を有する鎖間ジスルフィ
ド結合により安定化される。ＨおよびＬ鎖双方はドメインにフォールディングされる。「
ドメイン」という用語は、例えばβシートおよび／もしくは鎖間ジスルフィド結合により
安定化されるペプチドループを含んで成る（例えば３ないし４個のペプチドループを含ん
で成る）ＨもしくはＬ鎖ポリペプチドの球状領域を指す。ドメインは、本明細書で、「定
常」ドメインの場合は多様な分類のメンバーのドメイン内の配列の変動の相対的欠如、も
しくは「可変」ドメインの場合には多様な分類のメンバーのドメイン内の有意の変動に基
づき、「定常」もしくは「可変」とさらに称される。Ｌ鎖上の「定常」ドメインは「Ｌ鎖
定常領域」、「Ｌ鎖定常ドメイン」、「ＣＬ」領域もしくは「ＣＬ」ドメインと互換性に
称される）。Ｈ鎖上の「定常」ドメインは「Ｈ鎖定常領域」、「Ｈ鎖定常ドメイン」、「
ＣＨ」領域もしくは「ＣＨ」ドメインと互換性に称される）。Ｌ鎖上の「可変」ドメイン
は「Ｌ鎖可変領域」、「Ｌ鎖可変ドメイン」、「ＶＬ」領域もしくは「ＶＬ」ドメインと
互換性に称される）。Ｈ鎖上の「可変」ドメインは「Ｈ鎖定常領域」、「Ｈ鎖定常ドメイ
ン」、「ＣＨ」領域もしくは「ＣＨ」ドメインと互換性に称される）。

「領域」という用語は、抗体鎖の一部もしくは部分を指し、かつ、本明細書で定義され
るところの定常もしくは可変ドメイン、ならびに前記ドメインのより分離した一部もしく
は部分を包含する。例えば、Ｌ鎖可変ドメインもしくは領域は、本明細書で定義されると
ころの「枠組み領域」もしくは「ＦＲ」の間に散在された「相補性決定領域」もしくは「
ＣＤＲ」を包含する。

免疫グロブリンもしくは抗体は単量体もしくは多量体の形態で存在することができる。
「抗原結合フラグメント」という用語は、抗原を結合する、もしくは抗原結合（すなわち
特異的結合）について損なわれていない抗体と（すなわちそれらが由来する損なわれてい
ない抗体と）競争する免疫グロブリンもしくは抗体のポリペプチドフラグメントを指す。
「コンホメーション」という用語はタンパク質もしくはポリペプチド（例えば抗体、抗体
鎖、それらのドメインもしくは領域）の三次構造を指す。例えば、「Ｌ（もしくはＨ）鎖
コンホメーション」という句はＬ（もしくはＨ）鎖可変領域の三次構造を指し、また、「
抗体のコンホメーション」もしくは「抗体フラグメントのコンホメーション」という句は
、抗体もしくはそのフラグメントの三次構造を指す。

抗体の「特異的結合」は、抗体が、抗原もしくは好ましいエピトープに対するはっきり
と感知できる親和性を表し、かつ、好ましくは有意の交差反応性を表さないことを意味す
る。「はっきりと感知できる」もしくは好ましい結合は、最低１０⁶、１０⁷、１０⁸、１
０⁹Ｍ^-1もしくは１０¹⁰Ｍ^-1の親和性を伴う結合を包含する。１０⁷Ｍ^-1より大きい、好ま
しくは１０⁸Ｍ^-1より大きい親和性がより好ましい。本明細書で示されるものの中間の値
もまた本発明の範囲内にあることを意図しており、そして、好ましい結合親和性を、親和
性の範囲、例えば１０⁶ないし１０¹⁰Ｍ^-1、好ましくは１０⁷ないし１０¹⁰Ｍ^-1、より好ま
しくは１０⁸ないし１０¹⁰Ｍ^-1として示すことができる。「有意の交差反応性を表さない
」抗体は、望ましくない実体（例えば望ましくないタンパク質性の実体）にはっきりと感
知可能に結合することができないものである。例えば、Ａβに特異的に結合する抗体は、
Ａβをはっきりと感知可能に結合することができるが、しかし、非Ａβタンパク質もしく
はペプチド（例えば斑中に包含される非Ａβタンパク質もしくはペプチド）と有意に反応
することができない。好ましいエピトープに特異的な抗体は、例えば、同一のタンパク質
もしくはペプチド上の離れたエピトープと有意に交差反応することができない。特異的結
合は、こうした結合を決定するためのいずれかの技術に認識される手段に従って決定する
ことができる。好ましくは、特異的結合はスキャッチャード分析および／もしくは競争結
合アッセイに従って決定する。

結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術、または損なわれていない免疫グロブリンの酵
素的もしくは化学的切断により生じられる。結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ
（ａｂ’）₂、Ｆａｂｃ、Ｆｖ、一本鎖および一本鎖抗体を包含する。「二特異性」もし
くは「二機能性」免疫グロブリンもしくは抗体以外は、免疫グロブリンもしくは抗体は、
同一のその結合部位のそれぞれを有すると理解される。「二特異性」もしくは「二機能性
抗体」は、２個の異なるＨ／Ｌ鎖対および２個の異なる結合部位を有する人工的ハイブリ
ッド抗体である。二特異的抗体は、ハイブリドーマの融合もしくはＦａｂ’フラグメント
の連結を包含する多様な方法により製造することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌ
ａｉとＬａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（
１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８、１５４７−１５５３（
１９９２）を参照されたい。

「ヒト化免疫グロブリン」もしくは「ヒト化抗体」という用語は、最低１個のヒト化免
疫グロブリンもしくは抗体鎖（すなわち最低１個のヒト化ＬもしくはＨ鎖）を包含する免
疫グロブリンもしくは抗体を指す。「ヒト化免疫グロブリン鎖」もしくは「ヒト化抗体鎖
」（すなわち「ヒト化免疫グロブリンＬ鎖」もしくは「ヒト化免疫グロブリンＨ鎖」）と
いう用語は、実質的にヒト免疫グロブリンもしくは抗体からの可変枠組み領域および実質
的に非ヒト免疫グロブリンもしくは抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば最低１
個のＣＤＲ、好ましくは２個のＣＤＲ、より好ましくは３個のＣＤＲ）を包含する可変領
域を有しかつ定常領域（例えば、Ｌ鎖の場合は最低１個の定常領域もしくはその部分、お
よび好ましくはＨ鎖の場合は３個の定常領域）をさらに包含する免疫グロブリンもしくは
抗体鎖（すなわちそれぞれＬもしくはＨ鎖）を指す。「ヒト化可変領域」（例えば「ヒト
化Ｌ鎖可変領域」もしくは「ヒト化Ｈ鎖可変領域」）という用語は、実質的にヒト免疫グ
ロブリンもしくは抗体からの可変枠組み領域および実質的に非ヒト免疫グロブリンもしく
は抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含する可変領域を指す。

「実質的にヒト免疫グロブリンもしくは抗体から」または「実質的にヒト」という句は
、比較の目的上ヒト免疫グロブリンもしくは抗体のアミノ配列と整列される場合に、該領
域がヒト枠組みもしくは定常領域配列と最低８０〜９０％、好ましくは９０〜９５％、よ
り好ましくは９５〜９９％の同一性（すなわち局所配列の同一性）を共有し、例えば保存
的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、戻し突然変異などを見込むことを意味
する。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、戻し突然変異などの導入は
、しばしば、ヒト化抗体もしくは鎖の「至適化」と称される。「実質的に非ヒト免疫グロ
ブリンもしくは抗体から」または「実質的に非ヒト」という句は、非ヒト生物体、例えば
非ヒト哺乳動物のものに最低８０〜９５％、好ましくは９０〜９５％、より好ましくは９
６％、９７％、９８％もしくは９９％同一の免疫グロブリンもしくは抗体配列を有するこ
とを意味する。

従って、ヒト化免疫グロブリンもしくは抗体、またはヒト化免疫グロブリンもしくは抗
体鎖の全部の領域もしくは残基は、おそらくＣＤＲを除き、１種もしくはそれ以上の本来
のヒト免疫グロブリン配列の対応する領域もしくは残基に実質的に同一である。「対応す
る領域」もしくは「対応する残基」という用語は、第一および第二の配列が比較の目的上
至適に整列される場合に、第一のアミノ酸もしくはヌクレオチド配列上の一領域もしくは
残基と同一の（すなわち同等の）位置を占有する第二のアミノ酸もしくはヌクレオチド配
列上の一領域もしくは残基を指す。

「ヒト化免疫グロブリン」もしくは「ヒト化抗体」という用語は、下に定義されるとこ
ろのキメラ免疫グロブリンもしくは抗体を包含することを意図していない。ヒト化免疫グ
ロブリンもしくは抗体は、それらの構造においてキメラである（すなわち、１種以上のタ
ンパク質からの領域を含んで成る）とは言え、それらは、本明細書で定義されるところの
キメラ免疫グロブリンもしくは抗体で見出されない付加的な特徴（すなわち、ドナーＣＤ
Ｒ残基およびアクセプター枠組み残基を含んで成る可変領域）を包含する。

「有意の同一性」という用語は、２種のポリペプチド配列が、デフォルトのギャップ重
み（ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）を使用するプログラムＧＡＰもしくはＢＥＳＴＦＩＴによる
ように至適に整列される場合に、最低５０〜６０％の配列の同一性、好ましくは６０〜７
０％の配列の同一性、より好ましくは７０〜８０％の配列の同一性、より好ましくは最低
８０〜９０％の同一性、なおより好ましくは最低９０〜９５％の同一性、そしてなおより
好ましくは最低９５％の配列の同一性もしくはそれ以上（例えば９９％の配列の同一性も
しくはそれ以上）を共有することを意味する。「実質的同一性」という用語は、２種のポ
リペプチド配列が、デフォルトのギャップ重みを使用するプログラムＧＡＰもしくはＢＥ
ＳＴＦＩＴによるように至適に整列される場合に、最低８０〜９０％の配列の同一性、好
ましくは９０〜９５％の配列の同一性、およびより好ましくは最低９５％の配列の同一性
もしくはそれ以上（例えば９９％の配列の同一性もしくはそれ以上）を共有することを意
味する。配列の比較のためには、典型的には１配列が参照配列としてはたらき、試験配列
をそれと比較する。配列比較アルゴリズムを使用する場合は、試験および参照配列をコン
ピュータに入力し、必要な場合は下位配列の座標を指定し、そして配列アルゴリズムプロ
グラムのパラメータを指定する。その後、配列比較アルゴリズムが、指定されたプログラ
ムパラメータに基づき参照配列に関して試験配列（１種もしくは複数）の配列の同一性パ
ーセントを計算する。「配列の同一性」および「配列の同一性」という用語は本明細書で
互換性に使用する。

比較のための配列の至適の整列は、例えば、ＳｍｉｔｈとＷａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．
Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅ
ｍａｎとＷｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性整列
アルゴリズム、ＰｅａｒｓｏｎとＬｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性についての検索方法、これらのアルゴ
リズムのコンピュータ化された実行（ウィスコンシン ジェネティックス ソフトウェア
パッケージ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａ
ｇｅ）、ジェネティックス コンピュータ グループ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ｇｒｏｕｐ）、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ、中のＧ
ＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）、もしくは視覚的検査（一般
に、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙを参照されたい）により実施することができる。配列の同一性および
配列の類似性のパーセントを決定するのに適するアルゴリズムの一例はＢＬＡＳＴアルゴ
リズムであり、これはＡｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１
９９０）に記述される。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、国立生物工学
情報センター（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）により公的に入手可能（国立保健研究所（ｔｈｅ
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）ＮＣＢＩインターネット
サーバにより公的にアクセス可能）である。典型的には、デフォルトのプログラムパラメ
ータを使用して配列の比較を実施することができるとは言え、カスタマイズされたパラメ
ータもまた使用することができる。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは
、３の語長（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）（Ｗ）、１０の期待値（ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ）
（Ｅ）およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスをデフォルトとして使用する（
ＨｅｎｉｋｏｆｆとＨｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８９：１０９１５（１９８９）を参照されたい）。

好ましくは、同一でない残基位置が保存的アミノ酸置換により異なる。アミノ酸置換を
保存的もしくは非保存的と分類する目的上、アミノ酸を以下のとおりグループ分けする。
すなわち、群Ｉ（疎水性側鎖）：ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；群
ＩＩ（中性親水性側鎖）；ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；群ＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇ
ｌｕ；群ＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；群Ｖ（鎖の向
きに影響する残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および群ＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、
ｐｈｅ。保存的置換は同一分類中のアミノ酸間の置換を伴う。非保存的置換はこれらの分
類の１つの１メンバーを別のメンバーと交換することを構成する。

好ましくは、ヒト化免疫グロブリンもしくは抗体は、対応する非ヒト抗体のものの３、
４もしくは５の係数内にある親和性で抗原を結合する。例えば、非ヒト抗体が１０⁹Ｍ^-1
の結合親和性を有する場合、ヒト化抗体は最低３×１０⁹Ｍ^-1、４×１０⁹Ｍ^-1もしくは１
０⁹Ｍ^-1の結合親和性を有することができる。免疫グロブリンもしくは抗体鎖の結合特性
を記述する場合、該鎖は「抗原（例えばＡβ）結合を指図する」その能力に基づき記述す
ることができる。鎖は、それが損なわれていない免疫グロブリンもしくは抗体（またはそ
れらの抗原結合フラグメント）に特異的結合特性もしくは結合親和性を賦与する場合に「
抗原結合を指図する」と言われる。突然変異（例えば戻し突然変異）は、それが前記突然
変異を欠く同等な鎖を含んで成る抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）のものに比
較して最低１桁だけ、前記鎖を含んで成る損なわれていない免疫グロブリンもしくは抗体
（またはその抗原結合フラグメント）の結合親和性に影響を及ぼす（例えば低下させる）
場合に、抗原結合を指図するＨもしくはＬ鎖の能力に実質的に影響を及ぼすと言われる。
突然変異は、それが前記突然変異を欠く同等な鎖を含んで成る抗体（もしくはその抗原結
合フラグメント）のものの２、３もしくは４の係数のみだけ、前記鎖を含んで成る損なわ
れていない免疫グロブリンもしくは抗体（またはその抗原結合フラグメント）の結合親和
性に影響を及ぼす（例えば低下させる）場合に、「抗原結合を指図する鎖の能力に実質的
に影響を及ぼさ（例えば低下させ）ない」。

「キメラ免疫グロブリン」もしくは抗体という用語は、そのＬおよびＨ鎖が異なる種由
来である免疫グロブリンもしくは抗体を指す。キメラ免疫グロブリンもしくは抗体は、例
えば異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから遺伝子工学により構築するこ
とができる。

「抗原」は抗体が特異的に結合する実体（例えばタンパク質性実体もしくはペプチド）
である。

「エピトープ」もしくは「抗原決定基」という用語は、免疫グロブリンもしくは抗体（
またはその抗原結合フラグメント）が特異的に結合する抗原の一部位を指す。エピトープ
は、連続的アミノ酸、もしくはタンパク質の三次フォールディングにより並置される非連
続的アミノ酸双方から形成される可能性がある。連続的アミノ酸から形成されるエピトー
プは、典型的には、変性溶媒への曝露に際して保持される一方、三次フォールディングに
より形成されるエピトープは、変性溶媒での処理に際して典型的に喪失される。エピトー
プは、典型的には、独特の空間的コンホメーション中に最低３、４、５、６、７、８、９
、１０、１１、１２、１３、１４もしくは１５アミノ酸を包含する。エピトープの空間的
コンホメーションの決定方法は、例えばｘ線結晶学および二次元核磁気共鳴を包含する。
例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編
（１９９６）を参照されたい。

同一のエピトープを認識する抗体は、標的抗原への別の抗体の結合を封鎖する１種の抗
体の能力を示す単純なイムノアッセイ、すなわち競争結合アッセイで同定することができ
る。競争結合は、試験中の免疫グロブリンがＡβのような共通抗原への参照抗体の特異的
結合を阻害するアッセイで決定する。多数の型の競争結合アッセイ、例えば：固相直接も
しくは間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接もしくは間接エンザイムイムノア
ッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競争アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）を参照されたい）；固相直接ビオチン
−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９
８６）を参照されたい）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（
ＨａｒｌｏｗとＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ，コールド スプリング ハーバー プレス（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｂｏｒ
Ｐｒｅｓｓ）（１９８８）を参照されたい）；Ｉ−１２５標識を使用する固相直接標識
ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照さ
れたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １
７６：５４６（１９９０））；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、Ｓｃ
ａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））が既知である。典型的には、こ
うしたアッセイはこれらすなわち未標識の試験免疫グロブリンおよび標識参照免疫グロブ
リンのいずれかを担持する固相もしくは細胞に結合される精製された抗原の使用を必要と
する。競争阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固相もしくは細胞に結合される標識の
量を測定することにより測定する。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。通常、
競争する抗体が可能に存在する場合、それは最低５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６
５％、６５〜７０％、７０〜７５％もしくはそれ以上だけ共通抗原への参照抗体の特異的
結合を阻害することができる。

エピトープはまた、免疫学的細胞、例えばＢ細胞および／もしくはＴ細胞によっても認
識される。エピトープの細胞認識は、³Ｈ−チミジンの取り込みにより測定されるような
抗原依存性の増殖、サイトカイン分泌、抗体分泌もしくは抗原依存性の殺傷（細胞傷害性
Ｔリンパ球アッセイ）を測定するインビトロアッセイにより測定することができる。

例示的エピトープもしくは抗原決定基は、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）
内に見出すことができるが、しかし、好ましくはＡＰＰのＡβペプチド内に見出される。
ＡＰＰの複数のアイソフォーム、例えばＡＰＰ⁶⁹⁵ ＡＰＰ⁷⁵¹およびＡＰＰ⁷⁷⁰が存在す
る。ＡＰＰ内のアミノ酸はＡＰＰ⁷⁷⁰アイソフォームの配列に従って番号を割り当てられ
る（例えば、配列番号３８としてもまた示されるジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）受託番
号Ｐ０５０６７を参照されたい）。Ａβ（本明細書でβアミロイドペプチドおよびＡ−β
ともまた称される）ペプチドは、ＡＰＰの３９〜４３アミノ酸の約４ｋＤａの内的フラグ
メントである（Ａβ３９、Ａβ４０、Ａβ４１、Ａβ４２およびＡβ４３）。例えば、Ａ
β４０はＡＰＰの残基６７２−７１１よりなり、また、Ａβ４２はＡＰＰの残基６７３−
７１３よりなる。インビボもしくはインシトゥでの多様な分泌酵素によるＡＰＰのタンパ
ク質分解性プロセシングの結果として、Ａβは、長さ４０アミノ酸の「短い形態」、およ
び長さ４２から４３アミノ酸の範囲にわたる「長い形態」の双方で見出される。本明細書
に記述されるところの好ましいエピトープもしくは抗原決定基はＡβペプチドのＮ末端内
に位置し、そしてＡβのアミノ酸１−１０内、好ましくはＡβ４２の残基１−３、１−４
、１−５、１−６、１−７もしくは３−７からの残基を包含する。付加的な言及されるエ
ピトープもしくは抗原決定基は、Ａβの残基２−４、５、６、７もしくは８、Ａβの残基
３−５、６、７、８もしくは９、またはＡβ４２の残基４−７、８、９もしくは１０を包
含する。

「アミロイド原性疾患（ａｍｙｌｏｉｄｏｇｅｎｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ）」という用語
は、不溶性のアミロイド原線維（ａｍｙｌｏｉｄ ｆｉｂｒｉｌ）の形成もしくは沈着を
伴う（もしくはそれにより引き起こされる）いかなる疾患も包含する。例示的アミロイド
原性疾患は、限定されるものでないが全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人
発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭型痴呆およびプリオン関連性
の伝達性海綿状脳障害（それぞれ、ヒトにおけるクールーおよびクロイツフェルト−ヤー
コブ病、ならびにヒツジおよび畜牛におけるスクラピーおよびＢＳＥ）を挙げることがで
きる。多様なアミロイド原性疾患が、沈着される原線維のポリペプチド成分の性質により
定義もしくは特徴づけられている。例えば、アルツハイマー病を有する被験体もしくは患
者においては、β−アミロイドタンパク質（例えば野性型、変異体もしくは短縮型β−ア
ミロイドタンパク質）がアミロイド沈着物の特徴づけるポリペプチド成分である。従って
、アルツハイマー病は、例えば被験体もしくは患者の脳中の「Ａβの沈着物を特徴とする
疾患」もしくは「Ａβの沈着物を伴う疾患」の一例である。「β−アミロイドタンパク質
」、「β−アミロイドペプチド」、「β−アミロイド」、「Ａβ」および「Ａβペプチド
」という用語を、本明細書で互換性に使用する。

「有効用量」もしくは「有効投薬量」という用語は、所望の効果を達成もしくは少なく
とも部分的に達成するのに十分な量と定義する。「治療上有効な用量」という用語は、疾
患に既に罹っている患者において該疾患およびその合併症を治癒させるもしくは少なくと
も部分的に停止させるのに十分な量と定義する。この使用に有効な量は、感染の重症度お
よび患者自身の免疫系の全般的状態に依存することができる。

「患者」という用語は、予防的もしくは治療的いずれかの治療を受領するヒトおよび他
の哺乳動物被験体を包含する。

「可溶性」もしくは「分散型（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」Ａβは、凝集しないもしく
は分散されたＡβポリペプチドを指す。「不溶性」Ａβは凝集するＡβポリペプチド、例
えば非共有結合により一緒に保持されたＡβを指す。Ａβ（例えばＡβ４２）は、少なく
とも部分的に、該ペプチドのＣ末端の疎水性残基（ＡＰＰの膜貫通ドメインの一部）の存
在により凝集すると考えられている。可溶性Ａβの一製造方法は、凍結乾燥されたペプチ
ドを、超音波処理を用いて正味のＤＭＳＯに溶解させることである。生じる溶液を遠心分
離していかなる不溶性微粒子も除去する。
Ｉ．免疫学的および治療的試薬
本発明の免疫学的および治療的試薬は、免疫原もしくは抗体、または本明細書で定義さ
れるところのその機能的もしくは抗原結合フラグメントを含んで成るかもしくはそれらよ
りなる。基本的な抗体構造単位はサブユニットの四量体を含んで成ることが既知である。
各四量体はポリペプチド鎖の２個の同一の対より構成され、各対は１本の「Ｌ」（約２５
ｋＤａ）および１本の「Ｈ」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分
は、抗原認識を主として司る約１００ないし１１０もしくはそれ以上のアミノ酸の可変領
域を包含する。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主として司る定常領域
を規定する。

Ｌ鎖はκもしくはλのいずれかとして分類され、そして長さ約２３０残基である。Ｈ鎖
はγ、μ、α、δもしくはεとして分類され、長さ約４５０〜６００残基であり、そして
それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定
する。ＨおよびＬ鎖双方はドメインにフォールディングされる。「ドメイン」という用語
はタンパク質、例えば免疫グロブリンもしくは抗体の球状領域を指す。免疫グロブリンも
しくは抗体のドメインは、例えば、βシートにより安定化される３もしくは４個のペプチ
ドループおよび１個の鎖間ジスルフィド結合を包含する。損なわれていないＬ鎖は、例え
ば２個のドメイン（Ｖ_LおよびＣ_L）を有し、また、損なわれていないＨ鎖は例えば４もし
くは５個のドメイン（Ｖ_H、Ｃ_H１、Ｃ_H２およびＣ_H３）を有する。

ＬおよびＨ鎖内で、可変および定常領域は、約１２もしくはそれ以上のアミノ酸の「Ｊ
」領域により結合され、Ｈ鎖はまた約１０より多いアミノ酸の「Ｄ」領域も包含する。（
全般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版
、レイヴァン プレス（Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（１９８９）、第７章
（全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれる））を参照されたい）
。

各Ｌ／Ｈ鎖対の可変領域は抗体結合部位を形成する。従って、損なわれていない抗体は
２個の結合部位を有する。二機能性もしくは二特異性抗体でを除き、２個の結合部位は同
一である。該鎖は全部、相補性決定領域もしくはＣＤＲともまた呼ばれる３個の超可変領
域により結合される相対的に保存された枠組み領域（ＦＲ）の同一の一般構造を表す。天
然に存在する鎖もしくは組換え的に産生された鎖は、成熟鎖を生じさせる細胞のプロセシ
ングの間に除去されるリーダー配列とともに発現される可能性がある。例えば目的の特定
の鎖の分泌を高めるもしくはプロセシングを変えるための天然に存在しないリーダー配列
を有する成熟鎖もまた、組換え的に製造することができる。

各対の２本の成熟鎖のＣＤＲは枠組み領域により整列されて特異的エピトープへの結合
を可能にする。Ｎ末端からＣ末端まで、ＬおよびＨ鎖双方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１
、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含んで成る。「ＦＲ４」はまた可
変Ｈ鎖のＤ／Ｊ領域および可変Ｌ鎖のＪ領域とも当該技術分野で称される。各ドメインへ
のアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（国立保健研究所（Ｎａｔｉｏｎ
ａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）、メリーランド州ベセスダ、１９８７
および１９９１）の定義に従う。代替の構造的一定義は、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ
．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）；Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８（１９８９）
；およびＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６：６５１（１９８９）（下で集合的に「Ｃｈｏｔ
ｈｉａら」と称されかつ全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれる
）により提案されている。
Ａ．Ａβ抗体
本発明の治療薬は、Ａβもしくはアミロイド斑の他の成分に特異的に結合する抗体を包
含する。こうした抗体はモノクローナルもしくはポリクローナルであることができる。い
くつかのこうした抗体は、可溶性の形態に結合することなく凝集型の形態のＡβに特異的
に結合する。いくつかは凝集型の形態に結合することなく可溶性の形態に特異的に結合す
る。いくつかは凝集型および可溶性双方の形態に結合する。いくつかのこうした抗体は、
天然に存在する長い形態のＡβ（すなわちＡβ４２およびＡβ４３）に結合することなく
、天然に存在する短い形態のＡβ（すなわちＡβ３９、４０もしくは４１）に結合する。
いくつかの抗体は短い形態に結合することなく長い形態のＡβに結合する。いくつかの抗
体は完全長のアミロイド前駆体タンパク質に結合することなくＡβに結合する。治療的方
法で使用される抗体は、好ましくは、損なわれていない定常領域、もしくはＦｃアクセプ
ターと相互作用するのに少なくとも十分な定常領域を有する。ヒトアイソタイプＩｇＧ１
が、食細胞上のＦｃＲＩアクセプターに対するヒトアイソタイプの最高の親和性を有する
それのために好ましい。二特異性のＦａｂフラグメントもまた使用することができ、そこ
では抗体の一方のアームがＡβに対する、そして他方がＦｃアクセプターに対する特異性
を有する。好ましい抗体は、約１０⁶、１０⁷、１０⁸、１０⁹もしくは１０¹⁰Ｍ^-1（これら
の値の中間の親和性を包含する）より大きい（もしくはこれらに等しい）結合親和性でＡ
βに結合する。

ポリクローナル血清は、典型的には、Ａβの長さに沿ったいくつかのエピトープに結合
する抗体の混合された集団を含有する。しかしながら、ポリクローナル血清は、Ａβ１−
１０のようなＡβの特定のセグメントに特異的であることができる。モノクローナル抗体
は、コンホメーション的もしくは非コンホメーション的エピトープである可能性のあるＡ
β内の特定の一エピトープに結合する。抗体の予防的および治療的有効性は、実施例で記
述されるトランスジェニック動物モデル手順を使用して試験することができる。好ましい
モノクローナル抗体はＡβの残基１−１０（天然のＡβの最初のＮ末端残基を１と呼称す
る）内の一エピトープに結合する。いくつかの好ましいモノクローナル抗体はアミノ酸１
−５内のエピトープに、また、いくつかは５−１０内のエピトープに結合する。いくつか
の好ましい抗体はアミノ酸１−３、１−４、１−５、１−６、１−７もしくは３−７内の
エピトープに結合する。いくつかの好ましい抗体は、Ａβの残基１−３で開始しかつ残基
７−１１で終了するエピトープに結合する。より少なく好ましい抗体は、Ａβの残基１０
−１５、１５−２０、２５−３０、１０−２０、２０、３０もしくは１０−２５を含むエ
ピトープに結合するものを包含する。こうした抗体は、使用前に、実施例に記述されるマ
ウスモデルで活性についてスクリーニングすることが推奨される。例えば、残基１０−１
８、１６−２４、１８−２１および３３−４２内のエピトープに対するある種の抗体は活
性を欠く（例えば、斑負荷を低下させかつ／もしくはアルツハイマー病に関連する神経炎
性の病態を解消する能力を欠く）ことが見出されている。いくつかの方法においては、異
なるエピトープに対する結合特異性を有する複数のモノクローナル抗体を使用する。こう
した抗体は引き続きもしくは同時に投与することができる。Ａβ以外のアミロイド成分に
対する抗体もまた使用する（例えば投与もしくは共投与する）ことができる。例えば、抗
体はアミロイド関連タンパク質シヌクレインに向けることができる。

抗体が、例えばＡβ１−５のような明記された残基内の一エピトープに結合すると言わ
れる場合、意味されるものは、該抗体が明記された残基（すなわちこの一例ではＡβ１−
５）を含有するポリペプチドに特異的に結合することである。こうした抗体はＡβ１−５
内のすべての残基に必ずしも接触しない。また、Ａβ１−５内のすべての単一アミノ酸置
換もしくは欠失は、必ずしも結合親和性に有意に影響を及ぼさない。抗体のエピトープ特
異性は、例えば、多様なメンバーがＡβの多様な下位配列をディスプレイするファージデ
ィスプレイライブラリーを形成することにより決定することができる。その後、該ファー
ジディスプレイライブラリーを、試験中の抗体に特異的に結合するメンバーについて選択
する。一ファミリーの配列を単離する。典型的には、こうしたファミリーは、共通のコア
配列、および多様なメンバーで変動する長さの隣接配列を含有する。抗体への特異的結合
を示す最短のコア配列が、該抗体により結合されるエピトープを規定する。抗体はまた、
そのエピトープ特異性が既に決定された抗体を用いる競争アッセイにおいて、エピトープ
特異性について試験することもできる。例えば、Ａβへの結合について３Ｄ６抗体と競争
する抗体は、３Ｄ６と同一のもしくは類似の、すなわち残基Ａβ１−５内のエピトープに
結合する。同様に、１０Ｄ５抗体と競争する抗体は、同一もしくは類似のエピトープすな
わち残基Ａβ３−７内に結合する。エピトープ特異性について抗体をスクリーニングする
ことは、治療的有効性の有用な予測物である。例えば、Ａβの残基１−７内のエピトープ
に結合することが決定された抗体は、本発明の方法論に従ってアルツハイマー病の予防お
よび治療において有効であることがありそうである。

Ａβの他の領域に結合することなくＡβの好ましいセグメントに特異的に結合するモノ
クローナルもしくはポリクローナル抗体は、他の領域に結合するモノクローナル抗体もし
くは損なわれていないＡβに対するポリクローナル血清に関して多数の利点を有する。第
一に、等量の投薬量について、好ましいセグメントに特異的に結合する抗体の投薬量は、
アミロイド斑の消失において有効な抗体のより高いモル投薬量を含有する。第二に、好ま
しいセグメントに特異的に結合する抗体は、損なわれていないＡＰＰポリペプチドに対す
る消失応答を誘導することなくアミロイド沈着物に対する消失応答を誘導することができ
、それにより潜在的な副作用を低減させる。
１．非ヒト抗体の製造
本発明は、非ヒト抗体、例えば本発明の好ましいＡβエピトープに対する特異性を有す
る抗体を特徴とする。こうした抗体は、本発明の多様な治療的組成物の処方において使用
することができるか、または、好ましくは、ヒト化もしくはキメラ抗体（下に詳述される
）の製造のための相補性決定領域を提供することができる。非ヒト（例えばマウス、モル
モット、霊長類、ウサギもしくはラット）のモノクローナル抗体製造は、例えばＡβで動
物を免疫化することにより達成することができる。Ａβを含んで成るより長いポリペプチ
ド、もしくはＡβの免疫原性フラグメント、またはＡβに対する抗体に対する抗イディオ
タイプ抗体もまた使用することができる。ＨａｒｌｏｗとＬａｎｅ、上記（全部の目的上
引用することにより組み込まれる）を参照されたい）。こうした免疫原は、天然の供給源
から、ペプチド合成により、もしくは組換え発現により得ることができる。場合によって
は、免疫原は下述されるとおり担体タンパク質と融合もしくは別の方法で複合体形成され
て投与することができる。場合によっては、免疫原はアジュバントとともに投与すること
ができる。「アジュバント」という用語は、抗原とともに投与される場合に該抗原に対す
る免疫応答を増強するがしかし単独で投与される場合に該抗原に対する免疫応答を生成さ
せない化合物を指す。アジュバントは、リンパ球の動員、Ｂおよび／もしくはＴ細胞の刺
激ならびにマクロファージの刺激を包含するいくつかの機構により免疫応答を増強するこ
とができる。いくつかの型のアジュバントを下述されるとおり使用することができる。フ
ロイントの完全アジュバント、次いで不完全アジュバントが、実験動物の免疫感作に好ま
しい。

ウサギもしくはモルモットが、ポリクローナル抗体を作成するために典型的に使用され
る。例えば受動的保護のためのポリクローナル抗体の例示的製造は、以下のとおり実施す
ることができる。１２５匹の非トランスジェニックマウスを１００μｇのＡβ１−４２お
よびＣＦＡ／ＩＦＡアジュバントで免疫化し、そして４〜５ヶ月で安楽死させる。免疫化
されたマウスから血液を収集する。ＩｇＧを他の血液成分から分離する。免疫原に特異的
な抗体を、アフィニティークロマトグラフィーにより部分的に精製してもよい。平均で約
０．５〜１ｍｇの免疫原特異的抗体がマウスあたりに得られ、全体で６０〜１２０ｍｇを
与える。

マウスが、モノクローナル抗体を作成するために典型的に使用される。モノクローナル
抗体は、Ａβのフラグメントもしくはより長い形態をマウスに注入すること、ハイブリド
ーマを調製すること、およびＡβに特異的に結合する抗体についてハイブリドーマをスク
リーニングすることにより、あるフラグメントに対して製造することができる。場合によ
っては、抗体は、Ａβの他の重なり合わないフラグメントに結合することなくＡβの特定
の領域もしくは所望のフラグメントへの結合についてスクリーニングする。後者のスクリ
ーニングは、Ａβペプチドの欠失突然変異体の集合物への抗体の結合を測定すること、お
よびどの欠失突然変異体が抗体に結合するかを決定することにより達成することができる
。結合は、例えばウェスタンブロットもしくはＥＬＩＳＡにより評価することができる。
抗体への特異的結合を示す最小のフラグメントが該抗体のエピトープを規定する。あるい
は、エピトープの特異性は、試験および参照抗体がＡβへの結合について競争する競争ア
ッセイにより決定することができる。試験および参照抗体が競争する場合には、それらは
同一のエピトープ、もしくは一方の抗体の結合が他方の結合を妨害するような十分に近接
したエピトープに結合する。こうした抗体に好ましいアイソタイプは、マウスアイソタイ
プＩｇＧ２ａもしくは他の種の同等なアイソタイプである。マウスアイソタイプＩｇＧ２
ａはヒトアイソタイプＩｇＧ１の同等物である。
２．キメラおよびヒト化抗体
本発明はまた、βアミロイドペプチドに特異的なキメラおよび／もしくはヒト化抗体（
すなわち、キメラおよび／もしくはヒト化免疫グロブリン）も特徴とする。キメラおよび
／もしくはヒト化抗体は、キメラもしくはヒト化抗体の構築のための出発原料を提供する
マウスもしくは他の非ヒト抗体と同一のもしくは類似の結合特異性および親和性を有する
。
Ａ．キメラ抗体の製造
「キメラ抗体」という用語は、そのＬおよびＨ鎖遺伝子が、典型的には、異なる種に属
する免疫グロブリン遺伝子セグメントから遺伝子工学により構築された抗体を指す。例え
ば、マウスモノクローナル抗体からの遺伝子の可変（Ｖ）セグメントを、ＩｇＧ１および
ＩｇＧ４のようなヒト定常（Ｃ）セグメントに結合してよい。ヒトアイソタイプＩｇＧ１
が好ましい。典型的なキメラ抗体は、従って、マウス抗体からのＶもしくは抗原結合ドメ
イン、およびヒト抗体からのＣもしくはエフェクタードメインよりなるハイブリッドタン
パク質である。
Ｂ．ヒト化抗体の製造
「ヒト化抗体」という用語は、実質的にヒト抗体鎖（アクセプター免疫グロブリンもし
くは抗体と称される）からの可変領域枠組み残基、および実質的にマウス抗体（ドナー免
疫グロブリンもしくは抗体と称される）からの最低１個の相補性決定領域を含んで成る最
低１本の鎖を含んで成る抗体を指す。Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，５３０，１
０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６
２号明細書、Ｓｅｌｉｃｋら、第ＷＯ ９０／０７８６１号明細書およびＷｉｎｔｅｒ、
米国特許第５，２２５，５３９号明細書（全部の目的上そっくりそのまま引用することに
より組み込まれる）を参照されたい。定常（１個もしくは複数）もまた、存在する場合は
、実質的にもしくは完全にヒト免疫グロブリンからである。

ヒト可変ドメイン枠組みへのマウスＣＤＲの置換は、ヒト可変ドメイン枠組みが、ＣＤ
Ｒが発したマウス可変枠組みに同一もしくは類似のコンホメーションを採用する場合は、
それらの正しい空間的位置づけ（ｓｐａｃｉａｌ ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）の保持をも
たらすことが最もありそうである。これは、その枠組み配列が、ＣＤＲが由来したマウス
可変枠組みドメインとの高程度の配列の同一性を表すヒト抗体からヒト可変ドメインを得
ることにより達成される。ＨおよびＬ鎖可変枠組み領域は同一もしくは異なるヒト抗体配
列由来であることができる。ヒト抗体配列は、天然に存在するヒト抗体の配列であること
ができるか、もしくは数種のヒト抗体のコンセンサス配列であることができる。Ｋｅｔｔ
ｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：７７３（１９９
１）；Ｋｏｌｂｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ６：９７１（
１９９３）およびＣａｒｔｅｒら、第ＷＯ ９２／２２６５３号明細書を参照されたい。

マウスドナー免疫グロブリンおよび適切なヒトアクセプター免疫グロブリンの相補性決
定領域を同定すれば、次の段階は、これらの成分からのどの残基を（あれば）、生じるヒ
ト化抗体の特性を至適化するように置換するべきであるかを決定することである。一般に
、マウス残基の導入は、ヒトにおいてヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を導き出す抗体
の危険性を増大させるため、ヒトアミノ酸残基のマウスでの置換は最小限にすべきである
。免疫応答の技術認識された決定方法を実施して、特定の患者におけるもしくは臨床試験
の間のＨＡＭＡ応答をモニターすることができる。ヒト化抗体を投与された患者には、前
記療法の開始時および投与を通じて免疫原性の評価を行うことができる。ＨＡＭＡ応答は
、例えば、表面プラスモン共鳴技術（バイアコア（ＢＩＡＣＯＲＥ））および／もしくは
固相ＥＬＩＳＡ分析を包含する当業者に既知の方法を使用して、患者からの血清サンプル
中のヒト化治療試薬に対する抗体を検出することにより測定する。

ヒト可変領域枠組み残基からのあるアミノ酸を、ＣＤＲのコンホメーションおよび／も
しくは抗原への結合に対するそれらの可能な影響に基づいて置換のため選択する。ヒト可
変枠組み領域とのマウスＣＤＲの非天然の並置は、非天然のコンホメーションの拘束をも
たらす可能性があり、これは、あるアミノ酸の置換により補正されない限り、結合親和性
の喪失につながる。

置換のためのアミノ酸残基の選択は、部分的にコンピュータモデル化により決定する。
免疫グロブリン分子の三次元像を作製するためのコンピュータのハードウェアおよびソフ
トウェアを本明細書に記述する。一般に、分子モデルは、免疫グロブリン鎖もしくはそれ
らのドメインの解明された構造から出発して作製する。モデル化されるべき鎖を、アミノ
酸配列の類似性について、解明された三次元構造の鎖もしくはドメインと比較し、そして
、最大の配列の類似性を示す鎖もしくはドメインを、分子モデルの構築のための出発点と
して選択する。最低５０％の配列の同一性を共有する鎖もしくはドメインをモデル化に選
択し、そして、好ましくは最低６０％、７０％、８０％、９０％の配列の同一性もしくは
それ以上を共有するものをモデル化に選択する。解明された出発構造を、モデル化されて
いる免疫グロブリン鎖もしくはドメイン中の実際のアミノ酸と出発構造中のものとの間の
差異を見込むよう改変する。その後、改変された構造を複合免疫グロブリンに集成する。
最後に、モデルを、エネルギーの最小化により、ならびに、全部の原子が相互から適切な
距離内にあることならびに結合の長さおよび角度が化学的に許容できる限界内にあること
を確かめることにより、精緻化する。

置換のためのアミノ酸残基の選択はまた、部分的に、特定の位置でのアミノ酸の特徴の
検査、または特定のアミノ酸の置換もしくは突然変異誘発の効果の経験的観察により決定
することもできる。例えば、アミノ酸がマウス可変領域枠組み残基と選択されたヒト可変
領域枠組み残基との間で異なる場合は、ヒト枠組みアミノ酸は、該アミノ酸が：
（１）抗原を直接非共有結合するか、
（２）ＣＤＲ領域に隣接するか、
（３）ＣＤＲ領域と別の方法で相互作用する（例えば、コンピュータモデル化により決定
されるところのＣＤＲ領域の約３〜６Å以内にある）か、もしくは
（４）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する
ことが理にかなって期待される場合には、通常、マウス抗体からの同等な枠組みアミノ酸
により置換すべきである。

「抗原を直接非共有結合する」残基は、確立した化学力に従って、例えば水素結合形成
、ファンデルワールス力、疎水性相互作用などにより、抗原上のアミノ酸と直接相互作用
する十分な確率を有する枠組み領域中の位置のアミノ酸を包含する。

ＣＤＲおよび枠組み領域はＫａｂａｔらもしくはＣｈｏｔｈｉａら、上記により定義さ
れるとおりである。Ｋａｂａｔら、上記により定義されるところの枠組み残基がＣｈｏｔ
ｈｉａら、上記により定義されるところの構造的ループ残基を構成する場合、マウス抗体
中に存在するアミノ酸を、ヒト化抗体への置換のため選択してよい。「ＣＤＲ領域に隣接
する」残基は、ヒト化免疫グロブリン鎖の一次配列中のＣＤＲの１個もしくはそれ以上に
直に隣接する位置、例えばＫａｂａｔにより定義されるところのＣＤＲもしくはＣｈｏｔ
ｈｉａにより定義されるところのＣＤＲに直に隣接する位置（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａと
Ｌｅｓｋ ＪＭＢ １９６：９０１（１９８７）を参照されたい）のアミノ酸残基を包含
する。これらのアミノ酸は、ＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用し、かつ、アクセプターから
選ばれる場合は、ドナーＣＤＲを変形させかつ親和性を低下させることがとりわけありそ
うである。さらに、隣接するアミノ酸は抗原と直接相互作用するかもしれず（Ａｍｉｔら
、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３３：７４７（１９８６）（引用することにより本明細書に組み込
まれる））、また、ドナーからこれらのアミノ酸を選択することが、元の抗体で親和性を
提供する全部の抗原接触を保つために望ましいかもしれない。

「ＣＤＲ領域と別の方法で相互作用する」残基は、ＣＤＲ領域を遂げるのに十分な空間
的位置づけにあることが二次構造分析により決定されるものを包含する。一態様において
、「ＣＤＲ領域と別の方法で相互作用する」残基は、ドナー免疫グロブリンの三次元モデ
ル（例えばコンピュータで生成されたモデル）を分析することにより同定される。典型的
には元のドナー抗体の三次元モデルは、ＣＤＲの外側のあるアミノ酸がＣＤＲに近く、か
つ、水素結合形成、ファンデルワールス力、疎水性相互作用などによりＣＤＲ中のアミノ
酸と相互作用する十分な確率を有することを示す。それらのアミノ酸位置では、アクセプ
ター免疫グロブリンのアミノ酸よりはむしろドナー免疫グロブリンのアミノ酸を選択して
よい。この基準に従ったアミノ酸は、一般的には、ＣＤＲ中のいくつかの原子の約３オン
グストローム単位（Å）内に１個の側鎖原子を有することができ、また、上に列挙された
もののような確立した化学力に従ってＣＤＲ原子と相互作用する可能性がある原子を含有
しなければならない。

水素結合を形成するかもしれない原子の場合、３Åはそれらの核の間で測定されるが、
しかし結合を形成しない原子については、３Åはそれらのファンデルワールス表面間で測
定される。これゆえに、後者の場合、核は、相互作用することが可能と考えられる原子に
ついて約６Å（３Åおよびファンデルワールス半径の総和）内でなくてはならない。多く
の場合、核は４もしくは５から６Åまで離れていることができる。あるアミノ酸がＣＤＲ
と相互作用する可能性があるかどうかの決定において、Ｈ鎖ＣＤＲ ２の最後の８アミノ
酸をＣＤＲの一部とみなさないことが好ましい。構造の観点から、これらの８アミノ酸は
枠組みの一部として、より多く挙動するからである。

ＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用することが可能であるアミノ酸は、なお別の方法で決定
してもよい。各枠組みアミノ酸の溶媒到達可能表面積を、２方法、すなわち（１）損なわ
れていない抗体で、および（２）そのＣＤＲが除去された抗体よりなる仮想分子で計算す
る。約１０平方オングストロームもしくはそれ以上のこれらの数の間の有意差は、溶媒へ
の枠組みアミノ酸の到達が少なくとも部分的にＣＤＲにより封鎖されていること、および
、従って、該アミノ酸はＣＤＲと接触していることを示す。アミノ酸の溶媒到達可能表面
積は、当該技術分野で既知のアルゴリズム（例えば、Ｃｏｎｎｏｌｌｙ，Ｊ．Ａｐｐｌ．
Ｃｒｙｓｔ．１６：５４８（１９８３）およびＬｅｅとＲｉｃｈａｒｄｓ，Ｊ．Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ．５５：３７９（１９７１）（その双方は引用することにより本明細書に組み込
まれる））を使用して、ある抗体の三次元モデルに基づいて計算してよい。枠組みアミノ
酸はまた、時折、別の枠組みアミノ酸（順にＣＤＲを接触する）のコンホメーションに影
響を及ぼすことにより、ＣＤＲと間接的に相互作用するかもしれない。

枠組み中のいくつかの位置のアミノ酸は、多くの抗体中のＣＤＲと相互作用することが
可能であることが既知である（ＣｈｏｔｈｉａとＬｅｓｋ、上記、Ｃｈｏｔｈｉａら、上
記、およびＴｒａｍｏｎｔａｎｏら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：１７５（１９９０
）（その全部は引用することにより本明細書に組み込まれる））。注目すべきことに、Ｌ
鎖の位置２、４８、６４および７１、ならびにＨ鎖の２６−３０、７１および９４のアミ
ノ酸（Ｋａｂａｔによる番号付け）は、多くの抗体中のＣＤＲと相互作用することが可能
であることが既知である。Ｌ鎖の位置３５ならびにＨ鎖の９３および１０３のアミノ酸も
またＣＤＲと相互作用することがありそうである。全部のこれらの番号付けされた位置で
、ヒト化免疫グロブリン中にあるべきアクセプターアミノ酸よりむしろドナーアミノ酸（
それらが異なる場合）の選択が好ましい。他方、Ｌ鎖の最初の５アミノ酸のようなＣＤＲ
領域と相互作用することが可能なある残基は、ときに、ヒト化免疫グロブリン中の親和性
の喪失を伴わずにアクセプター免疫グロブリンから選ばれるかもしれない。

「ＶＬ−ＶＨ界面に参画する」残基もしくは「充填残基」は、例えば、Ｎｏｖｏｔｎｙ
とＨａｂｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：４５９２−６６
（１９８５）もしくはＣｈｏｔｈｉａら、上記により定義されるところのＶＬとＶＨとの
間の界面の残基を包含する。一般に、それらがヒト枠組み中のものと異なる場合は、異常
な充填残基がヒト化抗体中に保持されているべきである。

一般に、上の基準を満たすアミノ酸の１個もしくはそれ以上を置換する。いくつかの態
様においては、上の基準を満たすアミノ酸の全部もしくは大部分を置換する。時折、特定
のアミノ酸が上の基準に合致するかどうかについての若干の不明確さが存在し、そして代
替の変異体免疫グロブリンが製造され、それの一方はその特定の置換を有し、それの他方
は有しない。そのように製造された代替の変異体免疫グロブリンは、所望の活性について
、本明細書に記述されるアッセイのいずれかで試験することができ、そして好ましい免疫
グロブリンを選択することができる。

通常、ヒト化抗体中のＣＤＲ領域は実質的に同一であり、そして、より通常は、ドナー
抗体の対応するＣＤＲ領域に同一である。通常は望ましくないとは言え、生じるヒト化免
疫グロブリンの結合親和性にはっきりと感知可能に影響を及ぼすことなくＣＤＲ残基の１
個もしくはそれ以上の保存的アミノ酸置換を行うことがときに可能である。保存的置換に
より、ｇｌｙ、ａｌａ；ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ；ａｓｐ、ｇｌｕ；ａｓｎ、ｇｌｎ；ｓ
ｅｒ、ｔｈｒ；ｌｙｓ、ａｒｇ；およびｐｈｅ、ｔｙｒのような組合せを意図している。

置換の付加的な候補は、その位置でヒト免疫グロブリンには異常もしくは「希少」であ
るアクセプターヒト枠組みアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナー抗体の同
等な位置、もしくはより典型的なヒト免疫グロブリンの同等の位置からのアミノ酸で置換
することができる。例えば、アクセプター免疫グロブリンのヒト枠組み領域中のアミノ酸
がその位置には希少でありかつドナー免疫グロブリン中の対応するアミノ酸がヒト免疫グ
ロブリン配列中のその位置に普遍的である場合；もしくは、アクセプター免疫グロブリン
中のアミノ酸がその位置には希少でありかつドナー免疫グロブリン中の対応するアミノ酸
もまた他のヒト配列に関して希少である場合には、置換が望ましいかもしれない。これら
の基準は、ヒト枠組み中の典型的でないアミノ酸が抗体構造を混乱させないことを確実に
するのに役立つ。さらに、異常なヒトアクセプターアミノ酸を、ヒト抗体にたまたま典型
的であるドナー抗体からのアミノ酸で置換することにより、ヒト化抗体はより少なく免疫
原性にされるかもしれない。

本明細書で使用されるところの「希少」という用語は、配列の代表的サンプル中の配列
の約２０％未満、しかし通常は約１０％未満でその位置に存在するアミノ酸を示し、また
、本明細書で使用されるところの「普遍的」という用語は、代表的サンプル中の配列の約
２５％以上、しかし通常は約５０％以上に存在するアミノ酸を示す。例えば、全部のヒト
ＬおよびＨ鎖可変領域配列は、それぞれ、相互ととりわけ相同でありかつある決定的に重
要な位置で同一アミノ酸を有する配列の「サブグループ」にグループ分けされる（Ｋａｂ
ａｔら、上記）。ヒトアクセプター配列中のあるアミノ酸がヒト配列のなかで「希少」で
あるかもしくは「普遍的」であるかどうかを判断する場合、アクセプター配列と同一のサ
ブグループ中のヒト配列のみを考慮することがしばしば好ましいことができる。

置換のための付加的な候補は、Ｃｈｏｔｈｉａら、上記により提案された代替の定義の
下でＣＤＲ領域の一部として同定されるとみられるアクセプターヒト枠組みアミノ酸であ
る。置換の付加的な候補はＡｂＭおよび／もしくは接触の定義の下でＣＤＲ領域の一部と
して同定されるとみられるアクセプターヒト枠組みアミノ酸である。注目すべきことに、
可変Ｈ鎖中のＣＤＲ１は残基２６−３２を包含すると定義される。

置換のための付加的な候補は、希少もしくは異常なドナー枠組み残基に対応するアクセ
プター枠組み残基である。希少もしくは異常なドナー枠組み残基は、その位置でマウス抗
体に希少もしくは異常（本明細書で定義されるところの）であるものである。マウス抗体
について、サブグループをＫａｂａｔに従って決定することができ、そしてコンセンサス
と異なる残基位置を同定することができる。これらのドナー特異的な差異は、活性を高め
るマウス配列中の体細胞突然変異に向いているかもしれない。結合に影響を及ぼすことが
予測される異常な残基が保持される一方、結合に重要でないことが予測される残基を置換
することができる。

置換のための付加的な候補は、アクセプター枠組み領域中に存在する非生殖細胞系残基
である。例えば、アクセプター抗体鎖（すなわち、ドナー抗体鎖と有意の配列の同一性を
共有するヒト抗体鎖）を生殖細胞系抗体鎖（同様にドナー鎖と有意の配列の同一性を共有
する）と整列する場合に、アクセプター鎖枠組みと生殖細胞系鎖枠組みとの間で合致しな
い残基を、生殖細胞系配列からの対応する残基で置換することができる。

上で論考された特定のアミノ酸置換以外に、ヒト化免疫グロブリンの枠組み領域は、そ
れらが由来したヒト抗体の枠組み領域に通常は実質的に同一、およびより通常は同一であ
る。もちろん、枠組み領域中のアミノ酸の多くは、抗体の特異性もしくは親和性への直接
の寄与をほとんどもしくは全くなさない。従って、枠組み残基の多くの個々の保存的置換
は、生じるヒト化免疫グロブリンの特異性もしくは親和性のはっきり感知できる変化を伴
わずに耐えられることができる。従って、一態様において、ヒト化免疫グロブリンの可変
枠組み領域は、ヒト可変枠組み領域配列もしくはこうした配列のコンセンサスに対する最
低８５％の配列の同一性を共有する。別の態様において、ヒト化免疫グロブリンの可変枠
組み領域は、ヒト可変枠組み領域配列もしくはこうした配列のコンセンサスに対する最低
９０％、好ましくは９５％、より好ましくは９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配
列の同一性を共有する。しかしながら、一般に、こうした置換は望ましくない。

ヒト化抗体は、好ましくは最低１０⁷、１０⁸、１０⁹もしくは１０¹⁰Ｍ^-1の抗原に対す
る特異的結合親和性を表す。通常、抗原に対するヒト化抗体の結合親和性の上限は、ドナ
ー免疫グロブリンのものの３、４もしくは５の係数内にある。しばしば、結合親和性の下
限もまたドナー免疫グロブリンのものの３、４もしくは５の係数内にある。あるいは、結
合親和性は置換を有しないヒト化抗体（例えばドナーＣＤＲおよびアクセプターＦＲを有
するがしかしＦＲ置換を有しない抗体）のものと比較することができる。こうした例では
、（置換で）至適化された抗体の結合は、好ましくは未置換の抗体のものより最低２ない
し３倍より大きいか、もしくは３ないし４倍より大きい。比較を行うために、例えばバイ
アコア（ＢＩＡＣＯＲＥ）（すなわち未標識試薬を使用する表面プラスモン共鳴）もしく
は競争結合アッセイにより多様な抗体の活性を測定することができる。
Ｃ．ヒト化３Ｄ６抗体の製造
本発明の好ましい一態様は、とりわけ本明細書に記述される治療的および／もしくは診
断的方法論での使用のための、ＡβのＮ末端に対するヒト化抗体を特徴とする。ヒト化抗
体の製造にとりわけ好ましい出発原料は３Ｄ６である。３Ｄ６はＡβのＮ末端に特異的で
あり、かつ、アミロイド斑の食作用を媒介する（例えば食作用を誘導する）ことが示され
ている（実施例Ｉ−Ｖを参照されたい）。３Ｄ６抗体のＨおよびＬ鎖可変領域をコードす
るｃＤＮＡのクローン化および配列決定は実施例ＶＩに記述する。

適するヒトアクセプター抗体配列は、既知のヒト抗体の配列とのマウス可変領域のアミ
ノ酸配列のコンピュータ比較により同定される。該比較はＨおよびＬ鎖について別個に実
施するが、しかし原理はそれぞれについて類似である。とりわけ、その枠組み配列がマウ
スＶＬおよびＶＨ枠組み領域と高程度の配列の同一性を表すヒト抗体からの可変ドメイン
を、それぞれのマウス枠組み配列とともにＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ（国立保健研究所（ｔｈ
ｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）ＮＣＢＩインター
ネットサーバにより公的にアクセス可能）を使用するＫａｂａｔデータベースのクエリに
より同定した。一態様において、マウスドナー配列と５０％以上の配列の同一性を共有す
るアクセプター配列を選択する。好ましくは、６０％、７０％、８０％、９０％もしくは
それ以上を共有するアクセプター抗体配列を選択する。

３Ｄ６のコンピュータ比較は、３Ｄ６ Ｌ鎖がサブタイプκＩＩのヒトＬ鎖に対する最
大の配列の同一性を示すこと、および、３Ｄ６ Ｈ鎖が、Ｋａｂａｔら、上記により定義
されるところのサブタイプＩＩＩのヒトＨ鎖に対する最大の配列の同一性を示すことを示
した。従って、ＬおよびＨヒト枠組み領域は、好ましくはこれらのサブタイプのヒト抗体
、もしくはこうしたサブタイプのコンセンサス配列由来である。３Ｄ６からの対応する領
域に対する最大の配列の同一性を示す好ましいＬ鎖ヒト可変領域は、Ｋａｂａｔ番号０１
９２３０、００５１３１、００５０５８、００５０５７、００５０５９、Ｕ２１０４０お
よびＵ４１６４５を有する抗体からであり、０１９２３０がより好ましい。３Ｄ６からの
対応する領域に対する最大の配列の同一性を示す好ましいＨ鎖ヒト可変領域は、Ｋａｂａ
ｔ番号０４５９１９、０００４５９、０００５５３、０００３８６およびＭ２３６９１を
有する抗体からであり、０４５９１９がより好ましい。

次に、残基を以下のとおり置換のため選択する。アミノ酸が、３Ｄ６可変枠組み領域と
同等のヒト可変枠組み領域との間で異なる場合は、ヒト枠組みアミノ酸は、通常、該アミ
ノ酸が：
（１）抗原を直接非共有結合する、
（２）ＣＤＲ領域に隣接する、Ｃｈｏｔｈｉａら、上記により提案された代替の定義の下
でＣＤＲ領域の一部である、もしくはＣＤＲ領域と別の方法で相互作用する（例えば、Ｃ
ＤＲ領域の約３Ａ内にある）（例えば３Ｄ６の位置Ｌ２、Ｈ４９およびＨ９４のアミノ酸
）、または
（３）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する（例えば、３Ｄ６の位置Ｌ３６、Ｌ４６およびＨ９３の
アミノ酸）
ことが理にかなって期待される場合は、同等のマウスアミノ酸により置換されるべきであ
る。

３Ｄ６抗体ＨおよびＬ鎖可変領域のコンピュータモデル化、ならびに３Ｄ６抗体のヒト
化を実施例ＶＩＩに記述する。簡潔には、三次元モデルを、ＨおよびＬ鎖について最も近
い解明されたマウス抗体構造に基づいて生成させた。この目的上、１ＣＲ９（タンパク質
データバンク（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ（ＰＤＢ））番号：１ＣＲ９、Ｋａ
ｎｙｏら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８５５（１９９９））と呼称される抗体を３
Ｄ６ Ｌ鎖のモデル化のための鋳型として選び、また、１ＯＰＧ（ＰＤＢ番号：１ＯＰＧ
、Ｋｏｄａｎｄａｐａｎｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２２６８（１９９５）
）と呼称される抗体をＨ鎖のモデル化のための鋳型として選んだ。モデルは、好ましくな
い原子接触を軽減しかつ静電およびファンデルワールス相互作用を至適化するための一連
のエネルギー最小化段階によりさらに精緻化した。３Ｄ６および１ＯＰＧは比較の目的上
整列された場合にこの領域で有意の配列の相同性を表さなかったため、１ｑｋｚ（ＰＤＢ
番号：１ＱＫＺ、Ｄｅｒｒｉｃｋら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８１（１９９９）
）の解明された構造を、Ｈ鎖のＣＤＲ３をモデル化するための鋳型として選んだ。

本明細書に記述される抗体に関する三次元構造の情報は、例えばリサーチ コラボラト
リー フォー ストラクチュラル バイオインフォーマティックス（ｔｈｅ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｉｎｆｏ
ｒｍａｔｉｃｓ）のタンパク質データバンク（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ）（
ＰＤＢ）から公的に入手可能である。ＰＤＢはワールド・ワイド・ウェブインターネット
を介して自由にアクセス可能であり、そして、Ｂｅｒｍａｎら（２０００）Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２８：２３５により記述される。コンピュータモデ
ル化はＣＤＲと相互作用する残基の同定を見込む。３Ｄ６の構造のコンピュータモデルは
、順に、ヒト枠組み中で置換された３Ｄ６の相補性決定領域を含有する抗体の三次元構造
を描くための出発点としてはたらくことができる。さらなるアミノ酸置換を導入する際に
、構造を表す付加的なモデルを構築することができる。

一般に、上の基準を満たすアミノ酸の１個、大部分もしくは全部の置換が望ましい。従
って、本発明のヒト化抗体は、通常、以下の位置、すなわちＬ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ
４６の最低１、２もしくは３、およびより通常は４個での対応する３Ｄ６残基でのヒトＬ
鎖枠組み残基の置換を含有することができる。ヒト化抗体はまた、通常、以下の位置、す
なわちＨ４９、Ｈ９３およびＨ９４の最低１、２およびときに３個での対応する３Ｄ６残
基でのヒトＨ鎖枠組み残基の置換も含有する。ヒト化抗体はまた、以下の位置、すなわち
Ｈ７４、Ｈ７７およびＨ８９の最低１、２およびときに３個での対応する生殖細胞系残基
でのＨ鎖枠組み残基の置換も含有する可能性がある。

しかしながら、時折、特定のアミノ酸が上の基準に合致するかどうかについての若干の
不明確さが存在し、そして代替の変異体免疫グロブリンが製造され、それの一方はその特
定の置換を有し、それの他方は有しない。マウス残基での置換が特定の位置でヒト免疫グ
ロブリン中で希少である残基を導入するとみられる場合は、該抗体を特定の置換を伴いも
しくは伴わずに活性について試験することが望ましいかもしれない。活性（例えば結合親
和性および／もしくは結合特異性）が置換を伴いもしくは伴わずにほぼ同一である場合は
、置換を伴わない抗体が好ましいかもしれない。本明細書に記述されるところのＨＡＨＡ
応答のより少量を導き出すことが期待されるとみられるからである。

置換のための他の候補は、その位置でヒト免疫グロブリンに異常であるアクセプターヒ
ト枠組みアミノ酸である。これらのアミノ酸は、より典型的なヒト免疫グロブリンの同等
の位置からのアミノ酸で置換することができる。あるいは、マウス３Ｄ６中の同等の位置
からのアミノ酸を、こうしたアミノ酸が該同等の位置でヒト免疫グロブリンに典型的であ
る場合に、ヒト枠組み領域に導入することができる。

付加的な態様において、ヒトＬ鎖枠組みアクセプター免疫グロブリンがＫａｂａｔ番号
０１９２３０である場合、該Ｌ鎖は以下の位置、すなわちＬ７、Ｌ１０、Ｌ１２、Ｌ１５
、Ｌ１７、Ｌ３９、Ｌ４５、Ｌ６３、Ｌ７８、Ｌ８３、Ｌ８５、Ｌ１００もしくはＬ１０
４の最低１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２もしくはより通常は１
３個で置換を含有する。付加的な態様において、ヒトＨ鎖枠組みアクセプター免疫グロブ
リンがＫａｂａｔ番号０４５９１９である場合、該Ｈ鎖は以下の位置、すなわちＨ３、Ｈ
５、Ｈ１３、Ｈ１６、Ｈ１９、Ｈ４０、Ｈ４１、Ｈ４２、Ｈ４４、Ｈ７２、Ｈ７７、Ｈ８
２Ａ、Ｈ８３、Ｈ８４もしくはＨ１０８の最低１、２、３、４、５、６、７、８、９、１
０、１１、１２、１３、１４もしくはより通常は１５個で置換を含有する。これらの位置
は、より典型的なアミノ酸残基を有するヒト免疫グロブリンの同等の位置からのアミノ酸
で置換される。置換するのに適切なアミノ酸の例を図１および２に示す。

置換のための他の候補は枠組み領域に存在する非生殖細胞系残基である。既知の生殖細
胞系配列をもつ３Ｄ６のコンピュータ比較は、最大の程度の配列の同一性を示すＨ鎖が生
殖細胞系可変領域配列ＶＨ３−４８、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−７、ＶＨ３−２１およびＶ
Ｈ３−１１を包含することを示し、ＶＨ３−２３がより好ましい。ＶＨ３−２３とのＫａ
ｂａｔ番号０４５９１９の整列は、残基Ｈ７４、Ｈ７７および／もしくはＨ８９を、対応
する生殖細胞系残基（例えばＫａｂａｔ番号０４５９１９およびＶＨ３−２３を比較する
場合にＨ７４、Ｈ７７および／もしくはＨ８９）での置換に選択してよいことを示す。同
様に、３Ｄ６ Ｌ鎖に対する最大の程度の同一性を有する生殖細胞系配列はＡ１、Ａ１７
、Ａ１８、Ａ２およびＡ１９を包含し、Ａ１９が最も好ましい。選択されたＬ鎖アクセプ
ター枠組みとこれらの生殖細胞系配列の１つとの間の合致しない残基を、対応する生殖細
胞系残基での置換に選択することができる。

表１は３Ｄ６ ＶＨおよびＶＬ領域の配列分析を要約する。３Ｄ６抗体および付加的な
ヒト抗体のコンピュータモデル化に使用することができる付加的なマウスおよびヒトの構
造、ならびにアミノ酸置換の選択において使用することができる生殖細胞系配列を示す。
希少マウス残基もまた表１中に示す。希少マウス残基は、ドナーＶＬおよび／もしくはＶ
Ｈ配列を、該ドナーＶＬおよび／もしくはＶＨ配列が（Ｋａｂａｔにより）属するサブグ
ループの他のメンバーの配列と比較すること、ならびにコンセンサスと異なる残基位置を
同定することにより同定する。これらのドナー特異的差異は、活性を高める体細胞突然変
異に向けられるかもしれない。結合部位に近い異常なもしくは希少残基は、おそらく抗原
と接触してマウス残基を保持することを望ましくしているかもしれない。しかしながら、
異常なマウス残基が結合に重要でない場合は、該マウス残基がヒト化抗体中で免疫原性の
新エピトープ（ｎｅｏｅｐｉｔｏｐｅ）を創製するかもしれないため、対応するアクセプ
ター残基の使用が好ましい。ドナー配列中の異常な残基が、実際には対応するアクセプタ
ー配列中で普遍的な残基である状況においては、好ましい残基は明らかにアクセプター残
基である。

本明細書で引用されるＫａｂａｔ番号配列は、例えばノースウェスタン大学生物医学工
学部（ｔｈｅ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａ
ｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ）の免疫学的目的のタンパク質の配
列のＫａｂａｔデータベース（Ｋａｂａｔ Ｄａｔａｂｅｓｅ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）
から公的に入手可能である。本明細書に記述される抗体についての三次元構造の情報は、
例えばリサーチ コラボラトリー フォー ストラクチュラル バイオインフォーマティ
ックス（ｔｈｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒａｌ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）のタンパク質データバンク（Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ）（ＰＤＢ）から公的に入手可能である。ＰＤＢはワールド・ワ
イド・ウェブインターネットを介して自由にアクセス可能であり、そして、Ｂｅｒｍａｎ
ら（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｐ２３５−２４２によ
り記述される。本明細書で引用される生殖細胞系の遺伝子配列は、例えば国立生物工学情
報センター（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（ＮＣＢＩ）のＩｇｈ、ＩｇκおよびＩｇλ生殖細胞
系Ｖ遺伝子の集合物中の配列のデータベースから公的に入手可能である（国立保健研究所
（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）の
国立医学ライブラリー（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃ
ｉｎｅ（ＮＬＭ）の一部門として）。ＮＣＢＩの「Ｉｇ生殖細胞系遺伝子」データベース
の相同性検索はＩｇＧ ＢＬＡＳＴ（商標）により提供される。

好ましい一態様において、本発明のヒト化抗体は、（ｉ）マウス３Ｄ６ ＶＬ ＣＤＲ
およびヒトアクセプター枠組みを含んで成る可変ドメインを含んで成るＬ鎖［該枠組みは
対応する３Ｄ６残基で置換されたＬ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４６よりなる群から選択さ
れる最低１、好ましくは２、３もしくは４残基を有する］ならびに（ｉｉ）３Ｄ６ ＶＨ
ＣＤＲおよびヒトアクセプター枠組みを含んで成るＨ鎖［該枠組みは対応する３Ｄ６残
基で置換されたＨ４９、Ｈ９３およびＨ９４よりなる群から選択される最低１、好ましく
は２もしくは３残基を有する］を含有し、かつ、場合によっては、Ｈ７４、Ｈ７７および
Ｈ８９よりなる群から選択される最低１、好ましくは２もしくは３残基が、対応するヒト
生殖細胞系残基で置換される。

より好ましい一態様において、本発明のヒト化抗体は、（ｉ）マウス３Ｄ６ ＶＬ Ｃ
ＤＲおよびヒトアクセプター枠組みを含んで成る可変ドメインを含んで成るＬ鎖［該枠組
みはｔｙｒ（Ｙ）で置換された残基１、ｖａｌ（Ｖ）で置換された残基２、ｌｅｕ（Ｌ）
で置換された残基３６および／もしくはａｒｇ（Ｒ）で置換された残基４６を有する］な
らびに（ｉｉ）３Ｄ６ ＶＨ ＣＤＲおよびヒトアクセプター枠組みを含んで成るＨ鎖［
該枠組みは、ａｌａ（Ａ）で置換された残基４９、ｖａｌ（Ｖ）で置換された残基９３お
よび／もしくはａｒｇ（Ｒ）で置換された残基９４を有し、かつ、場合によっては、ｓｅ
ｒ（Ｓ）で置換された残基７４、ｔｈｒ（Ｔ）で置換された残基７７および／もしくはｖ
ａｌ（Ｖ）で置換された残基８９を有する］を含有する。

とりわけ好ましい一態様において、本発明のヒト化抗体は本明細書に記述されるところ
の構造的特徴を有し、かつ、以下の活性、すなわち（１）凝集型Ａβ１−４２を結合する
（例えばＥＬＩＳＡにより測定されるような）；（２）斑中のＡβを結合する（例えばＡ
Ｄおよび／もしくはＰＤＡＰＰの斑の染色）；（３）キメラ３Ｄ６（例えばマウスＣＤＲ
およびヒトアクセプターＦＲを有する３Ｄ６）に比較して２ないし３倍より大きい結合親
和性でＡβを結合する；（４）Ａβの食作用を媒介する（例えば、本明細書に記述される
ところのエクスビボ食作用アッセイにおいて）；ならびに（５）血液脳関門を横断する（
例えば、例えば本明細書に記述されるところのＰＤＡＰＰ動物モデルにおいて短期の脳局
在性を立証する）、の最低１種（好ましくは２、３、４種もしくは全部）をさらに有する
。

別の態様において、本発明のヒト化抗体は、本明細書に記述されるような構造的特徴を
有し、以下のインビボ効果、すなわち（１）Ａβ斑負荷を低下させる；（２）斑形成を予
防する；（３）可溶性Ａβのレベルを低下させる；（４）アミロイド原性障害と関連する
神経炎性の病態を低下させる；（５）アミロイド原性障害と関連する最低１種の生理学的
症状を小さくするかもしくは緩和する；ならびに／または（６）認識機能を向上させる、
の最低１種を導き出すのに十分な様式でもしくは親和性でＡβを結合する。

別の態様において、本発明のヒト化抗体は、本明細書に記述されるところの構造的特徴
を有し、そしてＡβの残基１−５もしくは３−７を含んで成るエピトープに特異的に結合
する。
３．ヒト抗体
Ａβに対するヒト抗体は下述される多様な技術により提供される。いくつかのヒト抗体
は、競争的結合実験により、そうでなければ本明細書に記述されるマウスモノクローナル
抗体の１種のような特定のマウス抗体と同一のエピトープ特異性を有するように選択され
る。ヒト抗体はまた、免疫原としてＡβのフラグメントのみを使用すること、および／も
しくはＡβの欠失突然変異体の集合物に対して抗体をスクリーニングすることにより、特
定のエピトープ特異性についてスクリーニングすることもできる。ヒト抗体は好ましくは
ヒトＩｇＧ１アイソタイプ特異性を有する。
ａ．トリオーマの方法論
基本的アプローチ、およびこのアプローチでの使用のための例示的細胞融合パートナー
ＳＰＡＺ−４は、Ｏｅｓｔｂｅｒｇら，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：３６１（１９８３）；
Ｏｅｓｔｂｅｒｇ，米国特許第４，６３４，６６４号明細書；およびＥｎｇｌｅｍａｎら
、米国特許第４，６３４，６６６号明細書（そのそれぞれは全部の目的上そっくりそのま
ま引用することにより組み込まれる）により記述されている。この方法により得られる抗
体産生細胞系は、それらが３種の細胞；２種のヒトおよび１種のマウスの系統であるため
にトリオーマと呼ばれる。最初に、マウス骨髄腫系統をヒトＢリンパ球と融合させて、Ｏ
ｅｓｔｂｅｒｇ、上記により記述されるＳＰＡＺ−４細胞系のような非抗体産生異種ハイ
ブリッド細胞を得る。その後、該異種細胞を免疫化されたヒトＢリンパ球と融合させて抗
体産生トリオーマ細胞系を得る。トリオーマは、ヒト細胞から作成された通常のハイブリ
ドーマより安定に抗体を産生することが見出されている。

免疫化されたＢリンパ球は、ヒトドナーの血液、脾、リンパ節もしくは骨髄から得る。
特定の抗原もしくはエピトープに対する抗体が望ましい場合は、免疫感作にその抗原もし
くはそのエピトープを使用することが好ましい。免疫感作はインビトロもしくはインビボ
のいずれかであることができる。インビボ免疫感作のためには、Ｂ細胞は、典型的には、
Ａβ、そのフラグメント、Ａβもしくはフラグメントを含有するより大きなポリペプチド
、またはＡβに対する抗体に対する抗イディオタイプ抗体で免疫化されたヒトから単離す
る。いくつかの方法において、Ｂ細胞は、最終的に抗体療法を投与されるべきである同一
患者から単離する。インビトロ免疫感作のためには、Ｂリンパ球は、典型的には、１０％
ヒト血漿を補充されたＲＰＭＩ−１６４０（Ｅｎｇｌｅｍａｎ、上記を参照されたい）の
ような培地中で７〜１４日の期間の間、抗原に曝露する。

免疫化されたＢリンパ球を、公知の方法により、ＳＰＡＺ−４のような異種ハイブリッ
ド細胞に融合させる。例えば、細胞を約３７℃でＭＷ１０００〜４０００の４０〜５０％
ポリエチレングリコールで約５〜１０分間処理する。細胞を融合混合物から分離し、そし
て所望のハイブリッドについて選択的な培地（例えばＨＡＴもしくはＡＨ）中で繁殖させ
る。必要とされる結合特異性を有する抗体を分泌するクローンを、Ａβもしくはそのフラ
グメントに結合する能力についてトリオーマ培地をアッセイすることにより同定する。所
望の特異性を有するヒト抗体を産生するトリオーマを、限界希釈技術によりサブクローニ
ングし、そして培地中でインビトロで成長させる。その後、得られたトリオーマ細胞系を
、Ａβもしくはそのフラグメントを結合する能力について試験する。

トリオーマは遺伝子的に安定であるとは言え、それらは非常に高レベルで抗体を産生し
ない。発現レベルは、抗体遺伝子をトリオーマから１種もしくはそれ以上の発現ベクター
にクローン化すること、および該ベクターを標準的な哺乳動物、細菌もしくは酵母細胞系
に形質転換することにより増大させることができる。
ｂ．トランスジェニック非ヒト哺乳動物
Ａβに対するヒト抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の最低１セグメントをコー
ドするトランスジーン（ｔｒａｎｓｇｅｎｅ）を有する非ヒトトランスジェニック哺乳動
物からも製造することができる。通常、こうしたトランスジェニック哺乳動物の内在性免
疫グロブリン遺伝子座は機能的に不活性化される。好ましくは、ヒト免疫グロブリン遺伝
子座の該セグメントは、ＨおよびＬ鎖成分の再配列されない配列を包含する。内在性免疫
グロブリン遺伝子の不活性化および外因性免疫グロブリン遺伝子の導入の双方を、標的を
定められた相同的組換え、もしくはＹＡＣ染色体の導入により達成することができる。こ
の方法から生じるトランスジェニック哺乳動物は、免疫グロブリン成分の配列を機能的に
再配列すること、および内在性の免疫グロブリン遺伝子を発現することなくヒト免疫グロ
ブリン遺伝子によりコードされる多様なアイソタイプの抗体のレパートリーを発現するこ
とが可能である。これらの特性を有する哺乳動物の産生および特性は、例えば、Ｌｏｎｂ
ｅｒｇら、第ＷＯ９３／１２２２７号（１９９３）；米国特許第５，８７７，３９７号、
同第５，８７４，２９９号、同第５，８１４，３１８号、同第５，７８９，６５０号、同
第５，７７０，４２９号、同第５，６６１，０１６号、同第５，６３３，４２５号、同第
５，６２５，１２６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５４５，８０６号明細書、
Ｎａｔｕｒｅ １４８：１５４７（１９９４）、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙ １４：８２６（１９９６）、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ，第ＷＯ ９１／１０７４
１号明細書（１９９１）（そのそれぞれは全部の目的上そっくりそのまま引用することに
より組み込まれる）により詳細に記述される。トランスジェニックマウスがとりわけ適す
る。抗Ａβ抗体は、ＬｏｎｂｅｒｇもしくはＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ、上記により記述
されたようなトランスジェニック非ヒト哺乳動物を、Ａβもしくはそのフラグメントで免
疫化することにより得られる。モノクローナル抗体は、例えば、こうした哺乳動物からの
Ｂ細胞を、慣習的なＫｏｈｌｅｒ−Ｍｉｌｓｔｅｉｎの技術を使用して適する骨髄腫細胞
系に融合させることにより製造する。ヒトポリクローナル抗体は、免疫原作用物質で免疫
化されたヒトからの血清の形態でもまた提供することができる。場合によっては、こうし
たポリクローナル抗体は、親和性試薬としてＡβもしくは他のアミロイドペプチドを使用
する親和性精製により濃縮することができる。
ｃ．ファージディスプレイ法
ヒト抗Ａβ抗体を得るためのさらなる一アプローチは、Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４６：１２７５−１２８１（１９８９）により概説された一般的プロトコルに従ってヒ
トＢ細胞からのＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることである。トリオーマの方法
論について記述されたとおり、こうしたＢ細胞は、Ａβ、フラグメント、Ａβもしくはフ
ラグメントを含有するより長いポリペプチド、または抗イディオタイプ抗体で免疫化され
たヒトから得ることができる。場合によっては、こうしたＢ細胞は、最終的に抗体治療を
受領するはずである患者から得る。Ａβもしくはそのフラグメントに結合する抗体を選択
する。その後、こうした抗体（もしくは結合フラグメント）をコードする配列をクローン
化しかつ増幅する。Ｈｕｓｅにより記述されるプロトコルは、ファージディスプレイ技術
と組合せでより効率的にされる。例えば、Ｄｏｗｅｒら、第ＷＯ ９１／１７２７１号明
細書、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、第ＷＯ ９２／０１０４７号明細書、Ｈｅｒｚｉｇら、
米国特許第５，８７７，２１８号明細書、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，８７１，９０
７号明細書、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，８５８，６５７号明細書、Ｈｏｌｌｉｇｅ
ｒら、米国特許第５，８３７，２４２号明細書、Ｊｏｈｎｓｏｎら、米国特許第５，７３
３，７４３号明細書およびＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、米国特許第５，５６５，３３２号明
細書（そのそれぞれは全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれる）
を参照されたい。これらの方法において、メンバーがそれらの外側表面上に異なる抗体を
ディスプレイするファージのライブラリーが生じられる。抗体は通常ＦｖもしくはＦａｂ
フラグメントとしてディスプレイされる。所望の特異性をもつ抗体をディスプレイするフ
ァージを、Ａβペプチドもしくはそのフラグメントに対する親和性濃縮により選択する。

ファージディスプレイ法の一変形物において、選択されたマウス抗体の結合特異性を有
するヒト抗体を製造することができる。Ｗｉｎｔｅｒ、第ＷＯ ９２／２０７９１号明細
書を参照されたい。この方法において、選択されたマウス抗体のＨもしくはＬ鎖いずれか
の可変領域を出発原料として使用する。例えば、Ｌ鎖可変領域を出発原料として選択する
場合、メンバーが同一のＬ鎖可変領域（すなわちマウスの出発原料）および異なるＨ鎖可
変領域をディスプレイするファージライブラリーが構築される。該Ｈ鎖可変領域は、再配
列されたヒトＨ鎖可変領域のライブラリーから得る。Ａβに対する強い特異的結合（例え
ば最低１０⁸、および好ましくは最低１０⁹Ｍ^-1）を示すファージを選択する。その後、こ
のファージからのヒトＨ鎖可変領域が、さらなるファージライブラリーを構築するための
出発原料としてはたらく。このライブラリーでは、各ファージが同一のＨ鎖可変領域（す
なわち第一のディスプレイライブラリーから同定された領域）および異なるＬ鎖可変領域
をディスプレイする。該Ｌ鎖可変領域は、再配列されたヒト可変Ｌ鎖領域のライブラリー
から得る。再度、Ａβに対する強い特異的結合を示すファージを選択する。これらのファ
ージは、完全にヒトの抗Ａβ抗体の可変領域をディスプレイする。これらの抗体は通常、
マウス出発原料と同一もしくは類似のエピトープ特異性を有する。
４．可変領域の製造
ヒト化免疫グロブリンのＣＤＲおよび枠組み成分を概念的に選択すれば、こうした免疫
グロブリンを製造するために多様な方法が利用可能である。暗号の縮重のため、多様な核
酸配列が各免疫グロブリンアミノ酸配列をコードすることができる。所望の核酸配列は、
デノボ固相ＤＮＡ合成、もしくは所望のポリヌクレオチドのより早期に製造された変異体
のＰＣＲ突然変異誘発により製造することができる。オリゴヌクレオチドに媒介される突
然変異誘発は、標的ポリペプチドのＤＮＡの置換、欠失および挿入変異体の好ましい一製
造方法である。Ａｄｅｌｍａｎら、ＤＮＡ ２：１８３（１９８３）を参照されたい。簡
潔には、標的ポリペプチドのＤＮＡを、所望の突然変異をコードするオリゴヌクレオチド
を一本鎖ＤＮＡ鋳型にハイブリダイズさせることにより変える。ハイブリダイゼーション
後に、ＤＮＡポリメラーゼを使用して、オリゴヌクレオチドプライマーを組み込みかつ標
的ポリペプチドのＤＮＡの選択された変化をコードする鋳型の第二の相補鎖全体を合成す
る。
５．定常領域の選択
上述されたとおり製造された抗体の可変セグメント（例えばキメラ、ヒト化もしくはヒ
ト抗体のＨおよびＬ鎖可変領域）は、典型的には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少
なくとも１部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものに連結される。ヒト定常領域のＤ
ＮＡ配列は、公知の手順に従って多様なヒト細胞、しかし好ましくは不死化Ｂ細胞から単
離することができる（Ｋａｂａｔら、上記およびＬｉｕら、第ＷＯ８７／０２６７１号明
細書を参照されたい）（そのそれぞれは全部の目的上そっくりそのまま引用することによ
り組み込まれる）。通常、抗体はＬ鎖およびＨ鎖双方の定常領域を含有することができる
。Ｈ鎖定常領域は、通常、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を包含する
。本明細書に記述される抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを包含す
る全部の型の定常領域、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を包含す
るいかなるアイソタイプも有する抗体を包含する。定常領域の選択は、部分的に、抗体依
存性の補体および／もしくは細胞に媒介される毒性が望ましいかどうかに依存する。例え
ば、アイソトープＩｇＧ１およびＩｇＧ３は補体活性を有し、また、アイソタイプＩｇＧ
２およびＩｇＧ４は有しない。抗体（例えばヒト化抗体）が細胞傷害活性を表すことが望
ましい場合は、定常ドメインは通常、補体を固定する定常ドメインであり、そしてクラス
は典型的にはＩｇＧ１である。こうした細胞傷害活性が望ましくない場合は、定常ドメイ
ンはＩｇＧ２クラスのものであってよい。アイソタイプの選択はまた、脳への抗体の通過
にも影響を及ぼす可能性がある。ヒトアイソタイプＩｇＧ１が好ましい。Ｌ鎖定常領域は
λもしくはκであることができる。ヒト化抗体は１以上のクラスもしくはアイソタイプか
らの配列を含んでよい。抗体は、２本のＬおよび２本のＨ鎖を含有する四量体として、別
個のＨ鎖、Ｌ鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖとして、もしくはＨ
およびＬ鎖の可変ドメインがスペーサーにより連結される一本鎖抗体として発現させるこ
とができる。
６．組換え抗体の発現
キメラ、ヒト化およびヒト抗体は、典型的に組換え発現により製造する。場合によって
は定常領域に連結されたヒト化ＬおよびＨ鎖可変領域をコードする核酸を発現ベクターに
挿入する。ＬおよびＨ鎖は同一もしくは異なる発現ベクターにクローン化することができ
る。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの
発現を確実にする発現ベクター（１種もしくは複数）中の制御配列に操作可能に連結する
。発現制御配列は、限定されるものでないがプロモーター（例えば、天然に関連するもし
くは異種のプロモーター）、シグナル配列、エンハンサー要素および転写終止配列を挙げ
ることができる。好ましくは、発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換もしくはト
ランスフェクトすることが可能なベクター中の真核生物プロモーター系である。ベクター
が適切な宿主中に取り込まれれば、該宿主を該ヌクレオチド配列の高レベル発現、ならび
に交差反応抗体の収集および精製に適した条件下で維持する。

これらの発現ベクターは、典型的には、エピソーム、もしくは宿主染色体ＤＮＡの組込
み部分のいずれかとして宿主生物体中で複製可能である。普遍的には、発現ベクターは、
所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能にする選択マーカー（例えば、アン
ピシリン耐性、ヒグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性もしくはネオマイシン耐性）
を含有する（例えば、Ｉｔａｋｕｒａら、米国特許第４，７０４，３６２号明細書を参照
されたい）。

大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、本発明のポリヌクレオチド（例えばＤＮＡ配列）のクロー
ン化にとりわけ有用な一原核生物宿主である。使用に適する他の微生物宿主は、枯草菌（
Ｂａｃｉｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のようなバチルス、ならびにサルモネラ属（Ｓａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）のような他の腸内細菌科、および多
様なシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）スピーシーズを包含する。これらの原核
生物宿主中で、宿主細胞と適合性の発現制御配列（例えば複製起点）を典型的に含有する
ことができる発現ベクターもまた作成することができる。加えて、ラクトースプロモータ
ー系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、β−ラクタマーゼプロモーター系、も
しくはファージλからのプロモーター系のような、いずれかの数の多様な公知のプロモー
ターが存在することができる。プロモーターは、典型的には、場合によってはオペレータ
ー配列とともに発現を制御することができ、そして、転写および翻訳を開始かつ終了する
ためのリボソーム結合部位配列などを有することができる。

酵母のような他の微生物もまた発現に有用である。サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ）が好ましい酵母宿主であり、適するベクターは発現制御配列（例えばプロ
モーター）、複製起点、終止配列などを所望のとおり有する。典型的なプロモーターは３
−ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の解糖酵素を包含する。誘導可能な酵母プロモー
ターは、とりわけ、アルコール脱水素酵素、イソチトクロームＣ、ならびに麦芽糖および
ガラクトースの利用を司る酵素からのプロモーターを包含する。

微生物に加え、哺乳動物組織細胞培養物もまた本発明のポリペプチド（例えば免疫グロ
ブリンもしくはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド）を発現かつ産生させる
のに使用してよい。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，
ＶＣＨ パブリッシャーズ（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、ニューヨーク州ニューヨ
ーク（１９８７）を参照されたい。異種タンパク質（例えば損なわれていない免疫グロブ
リン）を分泌することが可能な多数の適する宿主細胞系が当該技術分野で開発されている
ため、真核生物細胞が実際に好ましく、そして、ＣＨＯ細胞系、多様なＣｏｓ細胞系、Ｈ
ｅＬａ細胞、好ましくは骨髄腫細胞系、もしくは形質転換されたＢ細胞またはハイブリド
ーマを包含する。好ましくは、細胞は非ヒトである。これらの細胞のための発現ベクター
は、複製起点、プロモーターおよびエンハンサー（Ｑｕｅｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅ
ｖ．８９：４９（１９８６））のような発現制御配列、ならびにリボソーム結合部位、Ｒ
ＮＡスプライス部位、ポリアデニル酸化部位および転写ターミネーター配列のような必要
なプロセシング情報部位を包含することができる。好ましい発現制御配列は、免疫グロブ
リン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス、サイトメガロウイル
スなど由来のプロモーターである。Ｃｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１
９９２）を参照されたい。

あるいは、抗体をコードする配列を、トランスジェニック動物のゲノムへの導入、およ
び該トランスフェクション動物の乳中でのその後の発現のためトランスジーンに組み込む
ことができる（例えば、Ｄｅｂｏｅｒら、米国特許第５，７４１，９５７号明細書、Ｒｏ
ｓｅｎ、米国特許第５，３０４，４８９号明細書およびＭｅａｄｅら、米国特許第５，８
４９，９９２号明細書を参照されたい）。適するトランスジーンは、カゼインもしくはβ
−ラクトグロブリンのような乳腺特異的遺伝子からのプロモーターおよびエンハンサーと
操作可能な連結にあるＬおよび／もしくはＨ鎖のコーディング配列を包含する。

目的のポリヌクレオチド配列（例えばＨおよびＬ鎖コーディング配列ならびに発現制御
配列）を含有するベクターは、細胞宿主の型に依存して変動する公知の方法により宿主細
胞に導入することができる。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションが原核生物細
胞に普遍的に利用される一方、リン酸カルシウム処理、電気穿孔法、リポフェクション、
バイオリスティクスもしくはウイルスに基づくトランスフェクションを他の細胞宿主に使
用してよい。（全般的に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（コールド スプリング ハーバー プレス（
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）、第２版、１９８９を参照された
い）（全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれる）。哺乳動物細胞
を形質転換するのに使用される他の方法は、ポリブレン、プロトプラスト融合、リポソー
ム、電気穿孔法および微小注入法の使用を包含する（全般的に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上
記を参照されたい）。トランスジェニック動物の製造のためには、トランスジーンを受精
卵に微小注入することができるか、もしくは胚性幹細胞のゲノムに組込むことができ、そ
してこうした細胞の核を除核卵細胞に導入することができる。

ＨおよびＬ鎖を別個の発現ベクター上でクローン化する場合は、損なわれていない免疫
グロブリンの発現および集成を得るためにベクターをコトランスフェクトする。発現され
れば、抗体全体、それらの二量体、個々のＬおよびＨ鎖、もしくは本発明の他の免疫グロ
ブリンの形態を、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフ
ィー、ＨＰＬＣ精製、ゲル電気泳動などを包含する当該技術の標準的手順に従って精製す
ることができる（全般的に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
（シュプリンガー−フェアラーク（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）、ニューヨーク、
（１９８２））を参照されたい）。製薬学的使用には、最低約９０ないし９５％の均一性
の実質的に純粋な免疫グロブリンが好ましく、そして９８ないし９９％もしくはそれ以上
の均一性が最も好ましい。
７．抗体フラグメント
抗体フラグメントもまた本発明の範囲内で企図している。一態様において、非ヒト、キ
メラおよび／もしくはヒト抗体のフラグメントが提供される。別の態様において、ヒト化
抗体のフラグメントが提供される。典型的には、これらのフラグメントは、最低１０⁷、
およびより典型的には１０⁸もしくは１０⁹Ｍ^-1の親和性での抗原への特異的結合を表す。
ヒト化抗体フラグメントは、別個のＨ鎖、Ｌ鎖Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ
ｃおよびＦｖを包含する。フラグメントは、組換えＤＮＡ技術、または損なわれていない
免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的分離により製造する。
８．動物モデルにおける治療的有効性についての抗体の試験
７〜９月齢のＰＤＡＰＰマウスの群それぞれに、ＰＢＳ中のポリクローナル抗Ａβもし
くは特異的抗Ａβモノクローナル抗体０．５ｍｇを注入する。全部の抗体調製物は低エン
ド濾液キシンレベルを有するように精製する。モノクローナル抗体は、Ａβのフラグメン
トもしくはより長い形態をマウスに注入すること、ハイブリドーマを製造すること、およ
びＡβの他の重なり合わないフラグメントに結合することなくＡβの所望のフラグメント
に特異的に結合する抗体について該ハイブリドーマをスクリーニングすることにより、フ
ラグメントに対して製造することができる。

マウスに、Ａβ４２もしくは他の免疫原に対し、ＥＬＩＳＡにより定義される１／１０
００以上のＥＬＩＳＡ力価により測定される循環抗体濃度を維持するように、４ヶ月の期
間にわたって必要とされるとおり腹腔内に注入する。力価をモニターし、そして６ヶ月の
注入の終了時にマウスを安楽死させる。組織化学、Ａβレベルおよび毒物学を死後に実施
する。１群あたり１０匹のマウスを使用する。
９．消失活性についての抗体のスクリーニング
本発明はまた、それに対する消失（ｃｌｅａｒｉｎｇ）活性が望ましいアミロイド沈着
物もしくはいずれかの他の抗原、または関連する生物学的実体の消失における活性につい
ての抗体のスクリーニング方法も提供する。アミロイド沈着物に対する活性についてスク
リーニングするために、アルツハイマー病を伴う患者の脳もしくは特徴的なアルツハイマ
ー病の病態を有する動物モデルからの組織サンプルを、小膠細胞のようなＦｃアクセプタ
ーを担持する食細胞および試験中の抗体と培地中インビトロで接触させる。食細胞は、Ｂ
Ｖ−２、Ｃ８−Ｂ４もしくはＴＨＰ−１のような初代培養物もしくは細胞系であることが
できる。いくつかの方法においては、成分を顕微鏡スライドガラス上で合わせて顕微鏡モ
ニタリングを助長する。いくつかの方法においては、複数の反応をマイクロタイター皿の
ウェル中で平行して実施する。こうした形式において、個別の小型の顕微鏡スライドガラ
スを別個のウェルに載せることができるか、もしくはＡβのＥＬＩＳＡ検出のような非顕
微鏡的検出形式を使用することができる。好ましくは、インビトロ反応混合物中のアミロ
イド沈着物の量（反応が進行する前の基礎値から開始し、そして反応の間の１種もしくは
それ以上の試験値）の一連の測定を行う。抗原は、例えばＡβもしくはアミロイド斑の他
の成分に対する蛍光で標識された抗体での染色により検出することができる。染色に使用
される抗体は、消失活性について試験されている抗体と同一であってももしくはなくても
よい。アミロイド沈着物の反応の間の基礎に関しての低減は、試験中の抗体が消失活性を
有することを示す。こうした抗体は、アルツハイマー病および他のアミロイド原性疾患の
予防もしくは治療において有用であることがありそうである。

類似の方法を使用して、他の型の生物学的実体の消失における活性について抗体をスク
リーニングすることができる。該アッセイを使用して、事実上いかなる種類の生物学的実
体に対する消失活性も検出することができる。典型的には、生物学的実体はヒトもしくは
動物の疾患でなんらかの役割を有する。生物学的実体は、組織サンプルとしてもしくは単
離された形態で提供することができる。組織サンプルとして提供される場合、該組織サン
プルは、好ましくは、組織サンプルの成分への容易な到達を可能にしかつ固定に付随する
成分のコンホメーションを混乱させることを回避するために固定しない。このアッセイで
試験することができる組織サンプルの例は、癌組織、前癌組織、疣贅もしくは黒子のよう
な良性の成長を含有する組織、病原性微生物に感染した組織、炎症性細胞に浸潤された組
織、細胞間に病理学的マトリックスを担持する組織（例えば線維性心膜炎）、異常な抗原
を担持する組織、および瘢痕組織を包含する。使用することができる単離された生物学的
実体の例は、Ａβ、ウイルス抗原もしくはウイルス、プロテオグリカン、他の病原性微生
物の抗原、腫瘍抗原および接着分子を包含する。こうした抗原は、他の手段のなかでも天
然の供給源、組換え発現もしくは化学合成から得ることができる。組織サンプルもしくは
単離された生物学的実体を、単球もしくは小膠細胞のようなＦｃアクセプターを担持する
食細胞、および試験されるべき抗体と媒体中で接触させる。抗体は、試験中の生物学的実
体もしくは該実体と関連する抗原に向けることができる。後者の状況において、目的は、
生物学的実体が抗原とともに代償的に食されるかどうかを試験することである。通常、と
は言え必ずしもでなく、抗体および生物学的実体（ときに関連抗原を伴う）は、食細胞を
添加する前に相互と接触させる。媒体中に残存する生物学的実体および／もしくは関連抗
原の濃度（存在する場合）をその後モニターする。媒体中の抗原もしくは関連する生物学
的実体の量もしくは濃度の低下は、該抗体が食細胞と関連して抗原および／もしくは関連
する生物学的実体に対する消失応答を有することを示す（例えば実施例ＩＶを参照された
い）。
Ｂ．免疫学的および治療的作用物質をコードする核酸
アミロイド沈着物に対する免疫応答はまた、受動免疫感作に使用される抗体およびそれ
らの成分鎖をコードする核酸の投与によっても誘導することができる。こうした核酸はＤ
ＮＡもしくはＲＮＡであることができる。免疫原をコードする核酸セグメントは、典型的
には、患者の意図される標的細胞中のＤＮＡセグメントの発現を可能にするプロモーター
およびエンハンサーのような調節要素に連結される。免疫応答の誘導に望ましいところの
、血液細胞中での発現のためには、ＬもしくはＨ鎖免疫グロブリン遺伝子からのプロモー
ターおよびエンハンサー要素、またはＣＭＶ主要中初期プロモーターおよびエンハンサー
が、発現を指図するのに適する。連結された調節要素およびコーディング配列は、しばし
ばベクター中にクローン化される。二本鎖抗体の投与のために、２本の鎖を同一もしくは
別個のベクターにクローン化することができる。

レトロウイルス系（例えばＬａｗｒｉｅとＴｕｍｉｎ，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ
．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３：１０２−１０９（１９９３）を参照されたい）；アデノウイルス
ベクター（例えばＢｅｔｔら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：５９１１（１９９３）を参照され
たい）；アデノ随伴ウイルスベクター（例えばＺｈｏｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９
：１８６７（１９９４）を参照されたい）、ワクシニアウイルスおよびトリポックスウイ
ルスを包含するポックス科からのウイルスベクター、シンドビスおよびセムリキ森林ウイ
ルス由来のもののようなアルファウイルス属からのウイルスベクター（例えばＤｕｂｅｎ
ｓｋｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：５０８（１９９６）を参照されたい）、ベネズエラウ
マ脳炎ウイルス（Ｊｏｈｎｓｔｏｎら、米国特許第５，６４３，５７６号明細書を参照さ
れたい）、ならびに水疱性口内炎ウイルス（Ｒｏｓｅ、第ＷＯ ９６／３４６２５号明細
書を参照されたい）のようなラブドウイルス、およびパピローマウイルス（Ｏｈｅら、Ｈ
ｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ６：３２５（１９９５）；Ｗｏｏら、第ＷＯ ９
４／１２６２９号明細書およびＸｉａｏとＢｒａｎｄｓｍａ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ
ｓ．Ｒｅｓ．２４、２６３０−２６２２（１９９６））を包含する多数のウイルスベクタ
ー系が利用可能である。

免疫原をコードするＤＮＡ、もしくはそれを含有するベクターをリポソーム中にパッケ
ージングすることができる。適する脂質および関連類似物は、Ｅｐｐｓｔｅｉｎら、米国
特許第５，２０８，０３６号明細書、Ｆｅｌｇｎｅｒら、米国特許第５，２６４，６１８
号明細書、Ｒｏｓｅ、米国特許第５，２７９，８３３号明細書およびＥｐａｎｄら、米国
特許第５，２８３，１８５号明細書により記述される。ベクターおよび免疫原をコードす
るＤＮＡはまた、微粒子担体に吸着もしくはそれと会合させることもでき、その例は、ポ
リメチルメタクリレートポリマーならびにポリラクチドおよびポリ（ラクチドコグリコリ
ド）を包含する。例えばＭｃＧｅｅら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏ Ｅｎｃａｐ．（１９９６）を参
照されたい。

遺伝子治療ベクターもしくは裸のポリペプチド（例えばＤＮＡ）は、典型的には全身投
与（例えば静脈内、腹腔内、鼻、胃、皮内、筋肉内、皮下もしくは頭蓋内注入）または局
所適用による個々の患者への投与によりインビボで送達することができる（例えばＡｎｄ
ｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４６号明細書を参照されたい）。「裸のポリヌ
クレオチド」という用語は、コロイド状物質と複合体形成されないポリヌクレオチドを指
す。裸のポリヌクレオチドはときにプラスミドベクターにクローン化される。こうしたベ
クターは、ブピバカインのような促進剤をさらに包含することができる（Ａｔｔａｒｄｏ
ら、米国特許第５，５９３，９７０号明細書）。ＤＮＡはまたジーンガン（ｇｅｎｅ ｇ
ｕｎ）を使用しても投与することができる。ＸｉａｏとＢｒａｎｄｓｍａ、上記を参照さ
れたい。免疫原をコードするＤＮＡを微細な金属ビーズの表面上に沈殿させる。微小発射
体を衝撃波もしくは膨張するヘリウムガスで加速し、そして数細胞層の深さまで組織に浸
透させる。例えば、アガシータス インク（Ａｇａｃｅｔｕｓ，Ｉｎｃ．）ウィスコンシ
ン州ミドルトンにより製造されるアクセル［Ａｃｃｅｌ］（商標）遺伝子送達装置が適す
る。あるいは、裸のＤＮＡは、該ＤＮＡを化学的もしくは機械的刺激を用いて皮膚上に点
を打つことにより単純に血流中に皮膚を通過させることができる（Ｈｏｗｅｌｌら、第Ｗ
Ｏ ９５／０５８５３号明細書を参照されたい）。

さらなる一変形物において、免疫原をコードするベクターを、個別の患者から外植され
た細胞（例えばリンパ球、骨髄吸引物、組織生検）、もしくは普遍的ドナーの造血幹細胞
のような細胞にエクスビボで送達させ、次いで、通常はベクターを組み込んだ細胞につい
ての選択後に、該細胞を患者に再移植することができる。
ＩＩ．予防的および治療的方法
本発明は、とりわけ、例えばアミロイド原性疾患の予防もしくは治療のために、患者で
の有益な治療応答（例えば、該患者でのＡβの食作用の誘導、斑負荷の低下、斑形成の阻
害、神経炎性ジストロフィーの低減、認識機能の向上、および／または認識低下の復帰、
治療もしくは予防）を生成させる条件下での、該患者へのＡβ内の特定のエピトープに対
する治療的免疫学的試薬（例えばヒト化免疫グロブリン）の投与による、アルツハイマー
病および他のアミロイド原性疾患の治療に向けられる。本発明はまた、アミロイド原性疾
患の治療もしくは予防のための医薬に製造における、開示された免疫学的試薬（例えばヒ
ト化免疫グロブリン）の使用にも向けられる。

本明細書で使用されるところの「治療」という用語は、疾患、疾患の症状もしくは疾患
に対する素因を治療、治癒、緩和、軽減、変化、是正、改善、改良するもしくは影響を及
ぼす目的を伴い、該疾患、疾患の該症状もしくは疾患に対する素因を有する患者への治療
薬の適用もしくは投与、または患者からの単離された組織もしくは細胞系への治療薬の適
用もしくは投与と定義する。

一局面において、本発明は、患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予
防もしくは治療方法を提供する。こうした疾患はアルツハイマー病、ダウン症および認識
障害を包含する。後者はアミロイド原性疾患の他の特徴を伴いもしくは伴わずに発生する
可能性がある。本発明のいくつかの方法は、アミロイド沈着物の一成分に特異的に結合す
る、有効投薬量の抗体を患者に投与することを必要とする。こうした方法はヒト患者での
アルツハイマー病を予防もしくは治療するためにとりわけ有用である。例示的方法は、有
効投薬量の、Ａβに結合する抗体を投与することを必要とする。好ましい方法は、有効投
薬量の、Ａβの残基１−１０内のエピトープに特異的に結合する抗体、例えばＡβの残基
１−３内のエピトープに特異的に結合する抗体、Ａβの残基１−４内のエピトープに特異
的に結合する抗体、Ａβの残基１−５内のエピトープに特異的に結合する抗体、Ａβの残
基１−６内のエピトープに特異的に結合する抗体、Ａβの残基１−７内のエピトープに特
異的に結合する抗体、もしくはＡβの残基３−７内のエピトープに特異的に結合する抗体
を投与することを必要とする。なお別の局面において、本発明は、Ａβの遊離のＮ末端残
基を含んで成るエピトープに結合する抗体を投与することを特徴とする。なお別の局面に
おいて、本発明は、Ａβの１−１０の残基内のエピトープに結合する抗体を投与すること
を特徴とし、ここでＡβの残基１および／もしくは残基７はアスパラギン酸である。なお
別の局面において、本発明は、完全長のアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）に結合す
ることなくＡβペプチドに特異的に結合する抗体を投与することを特徴とする。なお別の
局面において、該抗体のアイソタイプはヒトＩｇＧ１である。

なお別の局面において、本発明は、患者中のアミロイド沈着物に結合しかつアミロイド
沈着物に対する消失応答を誘導する抗体を投与することを特徴とする。例えば、こうした
消失応答はＦｃアクセプターに媒介される食作用により遂げることができる。

本発明の治療薬は、典型的には、望ましくない汚染物質から実質的に純粋である。これ
は、作用物質が典型的には最低約５０％ ｗ／ｗ（重量／重量）純度であり、ならびに妨
害するタンパク質および汚染物質を本質的に含まないことを意味する。ときに、該作用物
質は最低約８０％ ｗ／ｗ、およびより好ましくは最低９０もしくは約９５％ ｗ／ｗ純
度である。しかしながら、慣習的なタンパク質精製技術を使用して、最低９９％ ｗ／ｗ
の均一なペプチドを得ることができる。

該方法は、無症候性の患者および疾患の症状を現在示している者双方で使用することが
できる。こうした方法で使用される抗体は、ヒト、ヒト化、キメラもしくは非ヒト抗体、
またはそれらのフラグメント（例えば抗原結合フラグメント）であることができ、また、
本明細書で記述されるところのモノクローナルもしくはポリクローナルであることができ
る。なお別の局面において、本発明は、Ａβペプチドで免疫化されたヒトから製造された
抗体を投与することを特徴とし、そのヒトは抗体で治療されるべき患者であることができ
る。

別の局面において、本発明は、抗体を製薬学的組成物として製薬学的担体とともに投与
することを特徴とする。あるいは、該抗体は、最低１本の抗体鎖をコードするポリヌクレ
オチドを投与することにより患者に投与することができる。該ポリヌクレオチドは患者中
で発現されて抗体鎖を産生させる。場合によっては、該ポリヌクレオチドは抗体のＨおよ
びＬ鎖をコードする。該ポリヌクレオチドが患者中で発現されてＨおよびＬ鎖を産生させ
る。例示的態様においては、患者を、該患者の血液中の投与された抗体のレベルについて
モニターする。

本発明は、従って、神経病理学、および若干の患者においては、アルツハイマー病に関
連する認識障害を予防もしくは改善するための治療レジメンに対する長年の必要性を満た
す。
Ａ．治療の影響を受けやすい患者
治療の影響を受けやすい患者は、疾患の危険にさらされているがしかし症状を示してい
ない個体、ならびに症状を現在示している患者を包含する。アルツハイマー病の場合、彼
もしくは彼女が十分長く生存している場合は、事実上誰でもアルツハイマー病に罹る危険
にさらされている。従って、本方法は、被験体患者の危険のいかなる評価に対する必要性
も伴わずに、一般集団に予防的に投与することができる。本方法は、アルツハイマー病の
既知の遺伝的危険を有する個体にとりわけ有用である。こうした個体は、この疾患を経験
した親類を有する者、および遺伝子的もしくは生化学的マーカーの分析によりその危険が
決定される者を包含する。アルツハイマー病に対する危険の遺伝子的マーカーは、ＡＰＰ
遺伝子中の突然変異、とりわけ、それぞれハーディー（Ｈａｒｄｙ）およびスウェーデン
型（Ｓｗｅｄｉｓｈ）突然変異と称される位置７１７、ならびに位置６７０および６７１
の突然変異を包含する（Ｈａｒｄｙ、上記を参照されたい）。危険の他のマーカーは、プ
レセニリン遺伝子ＰＳ１およびＰＳ２中の突然変異、ならびにＡｐｏＥ４、ＡＤの家族歴
、高コレステロール血症もしくはアテローム硬化症である。現在アルツハイマー病に罹っ
ている個体は、特徴的な痴呆、ならびに上述された危険因子の存在から認識することがで
きる。加えて、多数の診断試験がＡＤを有する個体を同定するために利用可能である。こ
れらは、ＣＳＦ τおよびＡβ４２のレベルの測定を包含する。上昇されたτおよび低下
されたＡβ４２レベルはＡＤの存在を意味する。アルツハイマー病に罹っている個体はま
た、実施例の節で論考されるところのＡＤＲＤＡの基準によっても診断することができる
。

無症候性の患者においては、治療はいずれの年齢（例えば１０、２０、３０歳）でも開
始することができる。しかしながら、通常は、患者が４０、５０、６０もしくは７０歳に
達するまで治療を開始することは必要でない。治療は、典型的には、時間のある期間にわ
たって複数の投薬量を必要とする。治療は、長期にわたって抗体レベルをアッセイするこ
とによりモニターすることができる。応答が下落する場合は、追加免疫投薬量を指示する
。潜在的ダウン症患者の場合には、治療は、出産前に母親にもしくは出生直後に治療薬を
投与することにより開始することができる。
Ｂ．治療レジメンおよび投薬量
予防的応用において、製薬学的組成物もしくは医薬を、疾患の生化学的、組織学的およ
び／もしくは行動的症状、その合併症ならびに該疾患の発症の間に現れる中間の病理学的
表現型を包含する、疾患の危険を排除もしくは低下、重症度を縮小もしくは発症を遅延さ
せるのに十分な量で、アルツハイマー病に罹りやすいもしくは別の方法で危険にさらされ
ている患者に投与する。治療的応用においては、組成物もしくは医薬を、その合併症およ
び該疾患の発症での中間の病理学的表現型を包含する該疾患の症状（生化学的、組織学的
および／もしくは行動的）を、治療もしくは少なくとも部分的に停止するのに十分な量で
、こうした疾患が疑われるかもしくは既に罹っている患者に投与する。

いくつかの方法においては、作用物質の投与は、特徴的なアルツハイマー病の病態を未
だ発症していない患者における筋認識（ｍｙｏｃｏｇｎｉｔｉｖｅ）障害を低下もしくは
排除させる。治療的もしくは予防的治療を達成するのに十分な量は、治療上もしくは予防
上有効な用量と定義する。予防的および治療的双方のレジメンにおいて、作用物質は通常
、十分な免疫応答が達成されるまで数投薬量で投与する。「免疫応答」もしくは「免疫学
的応答」という用語は、レシピエント被験体中で抗原に対し向けられる体液性（抗体に媒
介される）および／または細胞性（抗原特異的Ｔ細胞もしくはそれらの分泌産物により媒
介される）応答の発生を包含する。こうした応答は、能動的応答、すなわち免疫原の投与
により誘導することができるか、あるいは、受動的応答、すなわち免疫グロブリンもしく
は抗体、またはプライミングされたＴ細胞の投与により誘導することができる。

「免疫原作用物質」もしくは「免疫原」は、場合によってはアジュバントとともにの哺
乳動物への投与に際してそれ自身に対する免疫学的応答を誘導することが可能である。典
型的には、免疫応答をモニターし、そして免疫応答が弱くなり始めた場合に反復される投
薬量を投与する。

上述された病状の治療のための有効用量の本発明の組成物は、投与の手段、標的部位、
患者の生理学的状態、患者がヒトであるかもしくは動物であるか、投与されている他の医
薬、および治療が予防的であるかもしくは治療的であるかを包含する多くの多様な因子に
依存して変動する。通常、患者はヒトであるが、しかし、トランスジェニック哺乳動物を
包含する非ヒト哺乳動物もまた治療することができる。治療投薬量は、安全性および有効
性を至適化するように適切に設定される必要がある。

抗体での受動免疫感作のためには、投薬量は、約０．０００１から１００ｍｇ／ｋｇま
で、およびより通常は０．０１ないし５ｍｇ／ｋｇの宿主体重の範囲にわたる。例えば、
投薬量は、１ｍｇ／ｋｇ体重もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの
範囲内、好ましくは最低１ｍｇ／ｋｇであることができる。被験体には、こうした用量を
毎日、一日おきに、毎週、もしくは経験的分析により決定されるいずれかの他のスケジュ
ールに従って投与することができる。例示的治療は、例えば最低６ヶ月の延長された期間
にわたる複数の投薬量での投与を必要とする。付加的な例示的治療レジメンは、２週間ご
とあたりに１回、もしくは月１回、もしくは３ないし６ヶ月ごとに１回の投与を必要とす
る。例示的投薬スケジュールは、連続する日に１〜１０ｍｇ／ｋｇ、もしくは１５ｍｇ／
ｋｇ、１日おきに３０ｍｇ／ｋｇ、または週１回の６０ｍｇ／ｋｇを包含する。いくつか
の方法においては、異なる結合特異性をもつ２種もしくはそれ以上のモノクローナル抗体
を同時に投与し、この場合、投与される各抗体の投薬量は示される範囲内にある。

抗体は通常、複数の機会に投与する。単一投薬量間の間隔は週、月もしくは年であるこ
とができる。間隔はまた、患者でのＡβに対する抗体の血中レベルを測定することにより
示されるように不規則であることもできる。いくつかの方法においては、１〜１０００μ
ｇ／ｍｌ、およびいくつかの方法においては２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達
成するように投薬量を調節する。あるいは、抗体は持続放出性製剤として投与することが
でき、この場合はより少なく頻繁な投与が必要とされる。投薬量および頻度は、患者での
抗体の半減期に依存して変動する。一般に、ヒト抗体は最長の半減期を示し、次いで、ヒ
ト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体である。

投薬量および投与の頻度は、治療が予防的であるかもしくは治療的であるかに依存して
変動する可能性がある。予防的応用においては、本抗体もしくはそれらのカクテルを含有
する組成物を、まだ疾患状態にない患者に投与して、該患者の抵抗性を高める。こうした
量は「予防上有効な用量」と定義する。この使用において、正確な量は再度、患者の健康
状態および全般的免疫に依存するが、しかし、一般には用量あたり０．１から２５ｍｇま
で、とりわけ用量あたり０．５ないし２．５ｍｇの範囲にわたる。比較的低投薬量を、長
い時間の期間にわたって比較的稀な間隔で投与する。若干の患者は彼らの生涯の残りの間
治療を受領し続ける。

治療的応用においては、疾患の進行が低下もしくは終了されるまで、および好ましくは
患者が疾患の症状の部分的もしくは完全な改善を示すまで、比較的短い間隔で比較的高投
薬量（例えば用量あたり約１から２００ｍｇまでの抗体、５から２５ｍｇまでの投薬量を
より普遍的に使用する）がときに必要とされる。その後、患者に予防的レジメンを投与す
ることができる。

抗体をコードする核酸の用量は、患者あたり約１０ｎｇから１ｇまで、１００ｎｇない
し１００ｍｇ、１μｇないし１０ｍｇ、もしくは３０〜３００μｇのＤＮＡの範囲にわた
る。感染性のウイルスベクターの用量は、用量あたり１０から１００もしくはそれ以上の
ビリオンまで変動する。

治療薬は、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、鼻内もしく
は筋肉内の手段により、予防的および／もしくは治療的治療のため投与することができる
。免疫原作用物質の最も典型的な投与経路は皮下であるが、とは言え他の経路も同等に有
効である可能性がある。次の最も普遍的な経路は筋肉内注入である。この型の注入は、最
も典型的には腕もしくは脚の筋肉で実施する。いくつかの方法においては、作用物質を、
沈着物が蓄積した特定の組織に直接注入する（例えば頭蓋内注入）。筋肉内注入もしくは
静脈内注入が抗体の投与に好ましい。いくつかの方法においては、特定の治療的抗体を頭
蓋中に直接注入する。いくつかの方法においては、抗体を持続性放出組成物もしくはメデ
ィパッド［Ｍｅｄｉｐａｄ］（商標）装置のような装置として投与する。

本発明の作用物質は、場合によっては、アミロイド原性疾患の治療に少なくとも部分的
に有効である他の作用物質と組合せで投与することができる。アミロイド沈着物が脳中に
存在するアルツハイマー病およびダウン症の場合、本発明の作用物質はまた、血液脳関門
を横切る本発明の作用物質の通過を増大させる他の作用物質とともに投与することもでき
る。Ｃ．製薬学的組成物 本発明の作用物質は、有効治療成分、すなわち、および多様な
他の製薬学的に許容できる成分を含んで成る製薬学的組成物としてしばしば投与される。
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（第１５版、
マック パブリッシング カンパニー（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎ
ｙ）、ペンシルベニア州イーストン（１９８０））を参照されたい。好ましい形態は、意
図される投与の様式および治療的応用に依存する。該組成物はまた、望ましい製剤に依存
して、製薬学的に許容できる非毒性の担体もしくは希釈剤（動物もしくはヒト投与のため
の製薬学的組成物を処方するのに普遍的に使用されるベヒクルと定義する）も包含するこ
とができる。希釈剤は組合せ剤の生物学的活性に影響を及ぼさないように選択する。こう
した希釈剤の例は、蒸留水、生理学的リン酸緩衝生理的食塩水、リンゲル液、ブドウ糖溶
液およびハンクス液である。加えて、製薬学的組成物もしくは製剤は、他の担体、補助物
質もしくは非毒性の非治療的、非免疫原性の安定剤などもまた包含してよい。

製薬学的組成物はまた、タンパク質、キトサンのような多糖、ポリ乳酸、ポリグリコー
ル酸およびコポリマー（ラテックス官能性化セファロース（商標）、アガロース、セルロ
ースなど）、ポリマー性アミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質凝集物（油滴もしく
はリポソームのような）のような、大型のゆっくりと代謝される巨大分子も包含すること
ができる。加えて、これらの担体は免疫刺激剤（すなわちアジュバント）として機能する
可能性がある。

非経口投与のためには、本発明の作用物質は、水、油、生理的食塩水、グリセロールも
しくはエタノールのような滅菌液体であることができる製薬学的担体を含む、生理学的に
許容できる希釈剤中の物質の溶液もしくは懸濁剤の注入可能な投薬量として投与すること
ができる。加えて、湿潤剤もしくは乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝物質などのような補助
物質が組成物中に存在することができる。製薬学的組成物の他の成分は、石油、動物、植
物もしくは合成起源のもの、例えばラッカセイ油、ダイズ油および鉱物油である。一般に
、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールのようなグリコールが、とりわ
け注入可能な溶液に好ましい液体担体である。抗体は、有効成分の持続性放出を可能にす
るような様式で処方することができるデポー注入もしくは埋込製剤の形態で投与すること
ができる。例示的組成物は、ＨＣｌでｐＨ６．０に調節された５０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン
、１５０ｍＭ ＮａＣｌよりなる水性緩衝液中で処方された５ｍｇ／ｍＬのモノクローナ
ル抗体を含んで成る。

典型的には、組成物は、注入可能な製剤、液体の溶液もしくは懸濁液のいずれかとして
製造し；注入前に液体ベヒクル中の溶液もしくは懸濁剤に適する固体の形態もまた製造す
ることができる。製剤はまた、乳化することができるか、あるいは、上で論考されたとお
り高められたアジュバント効果のためにリポソーム、またはポリラクチド、ポリグリコリ
ドもしくはコポリマーのような微小粒子中に被包化することもできる（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７（１９９０）およびＨａｎｅｓ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄ
ｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２８：９７（１９９７）を参照されたい）
。本発明の作用物質は、有効成分の持続性もしくは拍動性放出を可能にするような様式で
処方することができるデポー注入もしくは埋込製剤の形態で投与することができる。

他の投与様式に適する付加的な製剤は、経口、鼻内および肺製剤、坐剤ならびに経皮適
用を包含する。坐剤のためには、結合剤および担体は、例えばポリアルキレングリコール
もしくはトリグリセリドを包含し；こうした坐剤は、０．５％ないし１０％、好ましくは
１％〜２％の範囲の有効成分を含有する混合物から成形することができる。経口製剤は、
製薬学的等級のマンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン
ナトリウム、セルロースおよび炭酸マグネシウムのような賦形剤を包含する。これらの組
成物は、溶液、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、持続性放出製剤もしくは散剤の形態を
とり、そして１０％〜９５％、好ましくは２５％〜７０％の有効成分を含有する。

局所適用は経皮もしくは皮内送達をもたらすことができる。局所投与は、コレラトキシ
ンまたはその解毒化誘導体もしくはサブユニット、あるいは他の類似の細菌のトキシンと
の作用物質の共投与により助長することができる（Ｇｌｅｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３９１
、８５１（１９９８）を参照されたい）。共投与は、混合物として、または化学的架橋も
しくは融合タンパク質としての発現により得られる連結された分子として成分を使用する
ことにより達成することができる。

あるいは、経皮送達は、皮膚経路を使用して、もしくはトランスフェロソーム（ｔｒａ
ｎｓｆｅｒｏｓｏｍｅ）（Ｐａｕｌら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：３５２１（
１９９５）；Ｃｅｖｃら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １３６８：２０
１−１５（１９９８））を使用して達成することができる。ＩＩＩ．治療経過のモニタリ
ング 本発明は、アルツハイマーに罹っているもしくは罹りやすい患者での治療のモニタ
リング方法、すなわち患者に投与されている治療経過のモニタリング方法を提供する。該
方法は、症候性の患者での治療的治療および無症候性の患者での予防的治療の双方をモニ
ターするのに使用することができる。とりわけ、該方法は受動免疫感作をモニターする（
例えば投与された抗体のレベルを測定する）のに有用である。

いくつかの方法は、作用物質の投薬量を投与する前に例えば患者での抗体レベルもしく
はプロフィルの基礎値を測定すること、およびこれを治療後のプロフィルもしくはレベル
についての値と比較することを必要とする。レベルもしくはプロフィルの値の有意の増大
（すなわち、こうした測定値の平均から一標準偏差として表される同一サンプルの反復測
定における実験誤差の典型的限界より大きい）は、陽性の治療転帰（すなわち、該作用物
質の投与が所望の応答を達成したこと）を合図する。免疫応答に関する値が有意に変化し
ないもしくは減少する場合は、陰性の治療転帰を示す。

他の方法においては、レベルもしくはプロフィルの対照値（すなわち平均および標準偏
差）を対照集団について決定する。典型的には、対照集団の個体は前治療を受領していな
い。治療薬を投与した後の患者でのレベルもしくはプロフィルの測定された値を、その後
に対照値と比較する。対照値に関しての有意の増大（例えば平均から一標準偏差より大き
い）は、陽性のもしくは十分な治療転帰を合図する。有意の増大の欠如もしくは減少は、
陰性のもしくは不十分な治療転帰を合図する。作用物質の投与は、一般に、レベルが対照
値に関して増大している間継続する。前のとおり、対照値に関しての安定水準の達成は、
治療の投与を中断または投薬量および／もしくは頻度を低減することができることの指標
である。

他の方法においては、レベルもしくはプロフィルの対照値（例えば平均および標準偏差
）を、治療薬での治療を受けたことがありかつそのレベルもしくはプロフィルが治療に応
答して安定水準に達した個体の対照集団から決定する。患者でのレベルもしくはプロフィ
ルの測定された値を対照値と比較する。患者での測定されたレベルが対照値と（例えば一
標準偏差以上）有意に異ならない場合は、治療を中断することができる。患者でのレベル
が対照レベルより有意に下である場合は、作用物質の継続される投与が正当化される。患
者でのレベルが対照値より下に持続する場合には、治療の変更を指示してよい。

他の方法においては、現在治療を受領していないがしかし以前の治療クールを受けてい
た患者を、抗体のレベルもしくはプロフィルについてモニターして、治療の再開が必要と
されるかどうかを決定する。患者での測定されたレベルもしくはプロフィルを、以前の治
療クール後に該患者で以前に達成された値と比較することができる。以前の測定値に関し
て有意の減少（すなわち同一サンプルの反復測定での誤差の典型的限界より大きい）は、
治療を再開することができることの表示である。あるいは、患者で測定された値を、治療
クールを受けた後の患者の集団で測定された対照値（平均および標準偏差）と比較するこ
とができる。あるいは、患者で測定された値は、疾患の症状がないままである予防的に治
療された患者の集団、もしくは疾患の特徴の改善を示す治療的に治療された患者の集団で
の対照値と比較することができる。これらの場合の全部において、対照レベルに関して有
意の（すなわち一標準偏差を越える）減少は、治療を患者で再開すべきであることの指標
である。

分析のための組織サンプルは、典型的には、患者からの血液、血漿、血清、粘液もしく
は脳脊髄液である。サンプルは、例えばＡβペプチドに対する抗体のレベルもしくはプロ
フィル、例えばヒト化抗体のレベルもしくはプロフィルについて分析する。Ａβに特異的
な抗体のＥＬＩＳＡ検出方法を実施例の節に記述する。いくつかの方法においては、投与
された抗体のレベルもしくはプロフィルを、消失アッセイを使用して、例えば本明細書に
記述されるところのインビトロ食作用アッセイで測定する。こうした方法においては、試
験されている患者からの組織サンプルを、アミロイド沈着物（例えばＰＤＡＰＰマウスか
ら）およびＦｃアクセプターを担持する食細胞と接触させる。アミロイド沈着物のその後
の消失をそれからモニターする。消失応答の存在および程度は、試験中の患者の組織サン
プル中のＡβを消失させるのに有効な抗体の存在およびレベルの表示を提供する。

受動免疫感作後の抗体プロフィルは、典型的には、抗体濃度の即座のピーク、次いで指
数的減衰を示す。さらなる投薬量なしで、減衰は、投与される抗体の半減期に依存して数
日ないし数ヶ月の期間内に治療前レベルに近づく。例えば、数種のヒト抗体の半減期は約
２０日である。

いくつかの方法においては、患者でのＡβに対する抗体の基礎測定を投与前に行い、第
二の測定をその後すぐに行ってピーク抗体レベルを決定し、そして間隔をおいて１回もし
くはそれ以上のさらなる測定を行って、抗体レベルの減衰をモニターする。抗体のレベル
が基礎、もしくは基礎より少ないピークの予め決められたパーセンテージ（例えば５０％
、２５％もしくは１０％）に減少していた場合は、さらなる投薬量の抗体の投与を投与す
る。いくつかの方法においては、ピーク、もしくはバックグラウンドより少ないその後の
測定されたレベルを、他の患者での有益な予防的もしくは治療的治療レジメンを構成する
ために以前に測定された参照レベルと比較する。測定された抗体レベルが参照レベルより
有意により小さい（例えば、治療から利益を得る患者の集団での参照値の平均から一標準
偏差を引いたよりも少ない）場合は、付加的な投薬量の抗体の投与を指示する。

付加的な方法は、アミロイド原性疾患（例えばアルツハイマー病）を診断もしくはモニ
ターするために研究者もしくは医師により慣例に頼られる、いずれかの技術認識された生
理学的症状（例えば身体的もしくは精神的症状）を治療経過にわたってモニターすること
を包含する。例えば、認識障害をモニターすることができる。後者はアルツハイマー病お
よびダウン症の一症状であるが、しかし、これらの疾患のいずれかの他の特徴を伴わずに
存在する可能性もまたある。例えば、認識障害は、治療経過を通じて、慣例に従ってミニ
精神状態検査（Ｍｉｎｉ−Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｅ Ｅｘａｍ）で患者の得点を決定す
ることによりモニターすることができる。
Ｃ．キット
本発明は、上述されたモニタリング方法を実施するためのキットをさらに提供する。典
型的には、こうしたキットはＡβに対する抗体に特異的に結合する作用物質を含有する。
該キットは標識もまた包含することができる。Ａβに対する抗体の検出のためには、標識
は典型的には標識抗イディオタイプ抗体の形態にある。抗体の検出のためには、作用物質
はマイクロタイター皿のウェルにのような固相に予め結合されて供給することができる。
キットは、典型的にはキットの使用のための指示を提供するラベル（ｌａｂｅｌｉｎｇ）
もまた含有する。ラベルはまた、測定された標識のレベルをＡβに対する抗体のレベルと
相互に関連付けるチャートもしくは他の対応手段（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ ｒｅ
ｇｉｍｅ）も包含してよい。ラベルという用語は、その製造、輸送、販売もしくは使用の
間のいずれかの時点でキットに付属されるもしくは別の方法で付随するいずれかの記載も
しくは記録された資材を指す。例えば、ラベルという用語は、広告パンフレットおよび小
冊子、包装資材、説明書、カセットまたはビデオテープ、コンピュータ用ディスク、なら
びにキットに直接刻まれた文書を包含する。

本発明はまた、診断キット、例えば研究、検出および／もしくは診断キット（例えばイ
ンビボイメージングを実施するための）も提供する。こうしたキットは、典型的には、好
ましくは残基１−１０以内のＡβのエピトープに結合するための抗体を含有する。好まし
くは、該抗体は標識されているか、もしくは二次標識試薬がキットに包含される。好まし
くは、キットには、意図される応用を実施するための、例えばインビボイメージングアッ
セイを実施するための説明書が貼られる。例示的抗体は本明細書に記述されるものである
。
Ｄ．インビボイメージング
本発明は、患者中のアミロイド沈着物のインビボイメージング方法を提供する。こうし
た方法は、アルツハイマー病もしくはそれにへの罹りやすさを診断もしくはその診断を確
認するのに有用である。例えば、該方法を痴呆の症状を呈する患者で使用することができ
る。患者が異常なアミロイド沈着物を有する場合には、該患者はアルツハイマー病に罹っ
ていることがありそうである。該方法は無症候性の患者でもまた使用することができる。
アミロイドの異常な沈着物の存在は、将来の症候性疾患への罹りやすさを示す。該方法は
また、アルツハイマー病と以前に診断された患者での疾患の進行および／もしくは治療に
対する応答をモニターするのにも有用である。

該方法は、Ａβに結合する抗体のような試薬を患者に投与すること、およびその後、そ
れが結合した後に作用物質を検出することにより機能する。好ましい抗体は完全長のＡＰ
Ｐポリペプチドに結合することなく患者中のＡβ沈着物に結合する。アミノ酸１−１０内
のＡβのエピトープに結合する抗体がとりわけ好ましい。いくつかの方法においては、抗
体はＡβのアミノ酸７−１０内のエピトープに結合する。こうした抗体は、典型的には実
質的な消失応答を誘導することなく結合する。他の方法において、抗体はＡβのアミノ酸
１−７内のエピトープに結合する。こうした抗体は、典型的にはＡβに結合しかつそれに
対する消失応答を誘導する。しかしながら、消失応答は、Ｆａｂのような完全長の定常領
域を欠く抗体フラグメントを使用することにより回避することができる。いくつかの方法
においては、同一の抗体が治療および診断双方の試薬としてはたらくことができる。一般
に、Ａβの残基１０のＣ末端のエピトープに結合する抗体は、おそらくＣ末端エピトープ
がアミロイド沈着物中で到達不可能であるために、残基１−１０内のエピトープへの抗体
結合ほど強いシグナルを示さない。従って、こうした抗体はより少なく好ましい。

診断試薬は、患者の身体中への静脈内注入により、または頭蓋内注入もしくは頭蓋を通
してドリルで穴を開けることにより脳中に直接投与することができる。試薬の投薬量は治
療法と同一の範囲内にあるはずである。典型的には、試薬は標識されるが、とは言え、い
くつかの方法においては、Ａβに対する親和性をもつ一次試薬は未標識であり、そして二
次標識試薬を使用して一次試薬に結合させる。標識の選択は検出の手段に依存する。例え
ば、蛍光標識は視覚的検出に適する。常磁性標識の使用は外科的介入を伴わない断層撮影
検出に適する。放射活性標識はＰＥＴもしくはＳＰＥＣＴを使用してもまた検出すること
ができる。

診断は、標識された位置の数、大きさおよび／もしくは強度を、対応する基礎値と比較
することにより実施する。基礎値は、疾患に罹っていない個体の集団での平均レベルを表
すことができる。基礎値はまた、同一患者で測定された以前のレベルを表すことができる
。例えば、基礎値は、治療を開始する前の患者で測定することができ、そして測定された
値をその後、該基礎値と比較する。基礎に関しての値の減少は治療に対する陽性の応答を
合図する。

本発明は、以下の制限しない実施例により、より完全に記述することができる。

実施例Ｉ．抗Ａβ抗体：ｍＡｂ ２Ｈ３、ｍＡｂ １０Ｄ５、ｍＡｂ ２６６、ｍＡｂ
２１Ｆ１２およびｐＡｂ Ａβ１−４２の治療的有効性
本実施例は、ヘテロ接合性のトランスジェニックマウスの脳中のＡβの蓄積を阻害する
、Ａβに対する多様なモノクローナルおよびポリクローナル抗体の能力を試験する。
Ａ．試験の設計
６０匹の雄性および雌性のヘテロ接合性ＰＤＡＰＰトランスジェニックマウス（８．５
ないし１０．５月例）をチャールズ リバー ラボラトリー（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）から得た。マウスは、Ａβに向けられた多様な抗体で治療す
るための６群に分類した。動物は可能な限り緊密に群内の動物の性、齢、血統および起源
を合致させるよう分配した。表２は実験の設計を描く。

」
表２に示されるとおり、抗体は、４種のマウスＡβ特異的モノクローナル抗体、２Ｈ３
（Ａβ残基１−１２に向けられる）、１０Ｄ５（Ａβ残基３−７に向けられる）、２６６
（Ａβ残基１３−２８に向けられかつ可溶性ＡＮ１７９２に結合するがしかし凝集型には
しない）、２１Ｆ１２（Ａβ残基３３−４２に向けられる）を包含した。第五の群はＡβ
特異的ポリクローナル抗体画分（凝集型ＡＮ１７９２での免疫感作により生じられた）で
治療した。陰性対照群は、抗体を伴わず希釈剤ＰＢＳ単独を受領した。
Ｂ．治療経過のモニタリング
モノクローナル抗体は約１０ｍｇ／ｋｇ（マウス体重が５０ｇであったと想定して）の
用量で注入した。抗体力価を２８週の治療にわたってモニターした。注入は、Ａβ力価を
１０００より上に維持するように平均で７日ごとに腹腔内に投与した。それが該アッセイ
で捕捉抗原として使用された凝集型ＡＮ１７９２に十分に結合しないために、より低力価
がｍＡｂ ２６６について測定されたとは言え、同一の投与スケジュールをこの群につい
て維持した。モノクローナル抗体２Ｈ３を受領する群は、該抗体がインビボであまりにも
迅速に消失したため、最初の３週以内に中断した。

抗体力価の測定のために、各群から無作為に選ばれた３匹のマウスのサブセットを、各
腹腔内接種直前に採血した（全体で３０回の採血）。抗体力価は、全般的材料および方法
に詳細に記述されたところのＡβ１−４２で被覆されたプラスチック製多穴プレオートを
用いるサンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、Ａβ１−４２結合抗体として測定した。各採
血についての平均力価を、ポリクローナル抗体ならびにモノクローナル抗体１０Ｄ５およ
び２１Ｆ１２について表３に示す。

力価は、ポリクローナル抗体調製物について、この時間の期間にわたって平均で約１０
００であり、また、１０Ｄ５および２１Ｆ１２で治療された動物についてのこのレベルよ
りわずかに上であった。

治療は、６ヶ月の期間にわたって全体で１９６日間継続した。動物は最終投与後１週間
に安楽死させた。
Ｃ．脳中のＡβおよびＡＰＰレベル：
多様な抗Ａβ抗体調製物での約６ヶ月の治療後に、脳を生理的食塩水灌流後に動物から
取り出した。一半球を免疫組織化学的分析のため調製し、また、第二の半球をＡβおよび
ＡＰＰレベルの定量に使用した。多様な形態のβアミロイドペプチドおよびアミロイド前
駆体タンパク質（ＡＰＰ）の濃度を測定するために、半球を切開し、そして海馬、皮質お
よび小脳領域のホモジェネートを５Ｍグアニジン中で調製した。これらを連続的に希釈し
、そしてアミロイドペプチドもしくはＡＰＰのレベルを、ＥＬＩＳＡの形式で、既知濃度
のＡβペプチドもしくはＡＰＰの標準品の一連の希釈物との比較により定量した。

皮質および海馬のホモジェネート中でＥＬＩＳＡにより測定された全ＡβおよびＡβ１
−４２のレベル、ならびに小脳中の全Ａβのレベルを、それぞれ表４、５および６に示す
。ＰＢＳを接種された対照群についての全Ａβの濃度の中央値は、皮質中でよりも海馬中
で３．６倍より高かった（皮質について１７，８１８ｎｇ／ｇに比較して６３，３８９ｎ
ｇ／ｇ海馬組織の中央値）。対照群の小脳でのレベルの中央値（３０．６ｎｇ／ｇ組織）
は海馬でよりも２０００倍以上より低かった。これらのレベルは、この齢のヘテロ接合性
ＰＤＡＰＰトランスジェニックマウスについて以前に報告された（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏ
ｏｄら、上記）ものに類似である。

皮質については、一治療群が、対照群のものと有意に異なった（ｐ＜０．０５）Ａβ１
−４２として測定されたＡβレベルの中央値を有し、それらの動物は表４に示されるとお
りポリクローナル抗Ａβ抗体を受領した。Ａβ１−４２のレベルの中央値は、この治療群
に対する対照と比較して６５％だけ低下した。Ａβ１−４２のレベルの中央値はまた、一
追加治療群（それらの動物はｍＡｂ １０Ｄ５を投与された）でも対照に比較して５５％
だけ有意に低下した（ｐ＝０．０４３３）。

海馬においては、ポリクローナル抗Ａβ抗体での治療に関連した全Ａβの減少パーセン
トの中央値（５０％、ｐ＝０．００５５）は、皮質で観察されたもの（６５％）ほど大き
くなかった（表５）。しかしながら、減少の絶対的大きさは皮質でよりも海馬でほぼ３倍
より大きかった（皮質中で１１，６５８ｎｇ／ｇ組織に対して海馬中で３１，６８３ｎｇ
／ｇ組織の正味の低下）。全Ａβよりもむしろよりアミロイド原性の形態のＡβすなわち
Ａβ１−４２のレベルとして測定される場合、ポリクローナル抗体で達成された低下は有
意であった（ｐ＝０．００２５）。ｍＡｂ １０Ｄ５および２６６で治療された群でのレ
ベルの中央値はそれぞれ３３％および２１％だけ低下した。

全Ａβは小脳でもまた測定した（表６）。ポリクローナル抗Ａβおよび２６６抗体を投
与された群は全Ａβのレベルの有意の低下を示し（それぞれ４３％および４６％、ｐ＝０
．００３３およびｐ＝０．０１８４）、そして１０Ｄ５で治療されたその群は有意近い低
下を有した（２９％、ｐ＝０．０６７５）。

ＡＰＰ濃度もまた、抗体で治療されたおよび対照のＰＢＳで処理されたマウスからの皮
質および小脳でＥＬＩＳＡにより測定した。２種の異なるＡＰＰアッセイを利用した。Ａ
ＰＰ−α／ＦＬと呼称される第一のものはＡＰＰ−α（α、Ａβ配列内で切断されている
分泌型の形態のＡＰＰ）および完全長の形態（ＦＬ）のＡＰＰ双方を認識する一方、第二
のものはＡＰＰ−αのみを認識する。治療群のサブセットにおけるＡβの治療に関連した
減少と対照的に、ＡＰＰのレベルは対照動物に比較して治療された動物の全部で事実上未
変化であった。これらの結果は、Ａβ抗体での免疫感作がＡＰＰを枯渇させることなくＡ
βを枯渇させることを示す。

要約すれば、Ａβレベルは、ＡＮ１７９２に対して生じられたポリクローナル抗体で治
療された動物の皮質、海馬および小脳で有意に低下した。より小さい程度まで、Ａβ１−
４２のアミノ末端領域、とりわけアミノ酸１−１６および１３−２８に対するモノクロー
ナル抗体もまた、有意の治療効果を示した。
Ｄ．組織化学的分析：
ＰＢＳ、ポリクローナルＡβ４２、２１Ｆ１２、２６６および１０Ｄ５治療群のマウス
からの脳のサブセット中のＡβ免疫反応性斑の形態学を、Ａβ４２での標準的免疫感作手
順に従った以前の研究のものと定量的に比較した。

アミロイド斑の程度および出現双方の最大の変化は、ポリクローナルＡβ４２抗体で免
疫化された動物で起こった。アミロイド負荷の減少、侵食された斑の形態学および細胞関
連の（ｃｅｌｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）Ａβ免疫反応性は、標準的免疫感作手順により
生じられる効果に緊密に似ていた。これらの観察結果は、全ＡβおよびＡβ４２双方の有
意の低下がポリクローナルＡβ４２抗体の投与により達成されたＥＬＩＳＡの結果を支持
する。

類似の定性的評価において、１０Ｄ５群のアミロイド斑もまた、細胞関連のＡβ免疫反
応性の若干の証拠を伴い、数および出現が低下した。対照処理された動物に関して、Ａβ
に対するポリクローナルＩｇ画分およびモノクローナル抗体の１種（１０Ｄ５）は、斑負
荷をそれぞれ９３％および８１％だけ低下させた（ｐ＜０．００５）。２１Ｆ１２は斑負
荷に対する比較的穏やかな効果を有するようであった。ｐＡｂＡβ_1-42での治療後の脳の
顕微鏡写真は、対照処理された動物に関して、ｐＡｂβ_1-42治療群における散在性の沈着
物、およびより大きな密集された斑の多くの非存在を示す。
Ｅ．リンパ増殖応答
Ａβ依存性のリンパ増殖を、最終抗体注入８日後に収穫された脾細胞を使用して測定し
た。新たに収穫された細胞（ウェルあたり１０⁵個）を、刺激のための５μＭの濃度のＡ
β１−４０の存在下で５日間培養した。陽性対象として、付加的な細胞をＴ細胞マイトジ
ェンＰＨＡとともに培養し、また、陰性対象として、細胞を添加されたペプチドを伴わず
に培養した。

多様な抗Ａβ抗体で受動的に免疫化された加齢したＰＤＡＰＰマウスからの脾細胞を、
インビトロでＡＮ１７９２で刺激し、そして増殖およびサイトカイン応答を測定した。こ
れらのアッセイの目的は、受動免疫感作が抗原提示、および従ってＡＮ１７９２に特異的
なＴ細胞応答のプライミングを助長したかどうかを決定することであった。ＡＮ１７９２
特異的増殖もしくはサイトカイン応答は、抗Ａβ抗体で受動的に免疫化されたマウスで観
察されなかった。
実施例ＩＩ：抗Ａβ抗体：ｍＡｂ ２Ｈ３、ｍＡｂ １０Ｄ５、ｍＡｂ ２６６、ｍＡｂ
２１Ｆ１２、ｍＡｂ ３Ｄ６、ｍＡｂ １６Ｃ１１およびｐＡｂ Ａβ１−４２の治療
的有効性
第二の研究において、１０Ｄ５での治療を反復し、そして２種の付加的な抗Ａβ抗体、
モノクローナル抗体３Ｄ６（Ａβ１−５）および１６Ｃ１１（Ａβ３３−４２）を試験し
た。対照群はＰＢＳもしくは無関係のアイソタイプを合致させた抗体（ＴＭ２ａ）のいず
れかを受領した。マウスは以前の研究でより高齢（１１．５〜１２月齢のヘテロ接合性）
であったが、それ以外は実験の設計は同一であった。もう一度、６ヶ月の治療後に、１０
Ｄ５は、ＰＢＳもしくはアイソタイプを合致させた抗体対照のいずれかに関して８０％以
上だけ斑負荷を低下させた（ｐ＝０．００３）。Ａβに対する他の抗体の一方すなわち３
Ｄ６は同等に有効であり、８６％の低下を生じさせた（ｐ＝０．００３）。対照的に、該
ペプチドに対する第三の抗体１６Ｃ１１は、斑負荷に対するいかなる影響を有することに
も失敗した。類似の知見がＡβ４２ ＥＬＩＳＡ測定で得られた。

これらの結果は、Ａβペプチドに対する抗体応答は、Ｔ細胞免疫の非存在下で、ＰＤＡ
ＰＰマウスにおけるアミロイド沈着を減少させるのに十分であること、しかし、全部の抗
Ａβ抗体が等しく有効であるわけでないことを立証する。Ａβのアミノ酸１−５もしくは
３−７を含んで成るエピトープに向けられた抗体がとりわけ有効である。要約すれば、受
動的に投与されるＡβに対する抗体（すなわち受動免疫感作）がアルツハイマー病のマウ
スモデルでの斑沈着の程度を低下させることを立証することができる。
実施例ＩＩＩ：ＣＮＳ中の抗体結合のモニタリング
本実施例は、適度の血清濃度（２５〜７０μｇ／ｍｌ）で保持される場合に、抗体がβ
−アミロイド斑を装飾する（ｄｅｃｏｒａｔｅ）のに十分なレベルでのＣＮＳへの到達を
獲得したことを立証する。

Ａβに対する抗体がＣＮＳ内で直接作用している可能性があるかどうかを決定するため
に、実施例ＩＩの終了時に生理的食塩水で灌流されたマウスから採取された脳を、末梢で
投与された抗体の存在について検査した。未固定のクライオスタット脳切片を、マウス免
疫グロブリンに対する蛍光試薬（ヤギ抗マウスＩｇＧ−Ｃｙ３）に曝露した。１０Ｄ５お
よび３Ｄ６群の脳内の斑は抗体で強く装飾された一方、１６Ｃ１１群に染色は存在しなか
った。斑沈着の完全な程度を示すため、各脳の連続的切片を抗Ａβ抗体と最初に、そして
その後二次試薬と免疫反応させた。１０Ｄ５および３Ｄ６は、末梢投与後に、ＣＮＳ内の
大部分の斑への到達を獲得した。斑負荷は、これらの治療群で、１６Ｃ１１群に比較して
大きく低下された。ＣＮＳ中への抗体の進入は血液脳関門の異常な漏出によらなかった。
ＰＤＡＰＰマウスにおいてエバンスブルーにより測定されるところの血管透過性の増大が
存在しなかったからである。加えて、加齢したＰＤＡＰＰマウスの脳実質中の抗体の濃度
は非トランスジェニックマウスでと同一であり、血清中の抗体濃度（アイソタイプに関係
なく）の０．１％を表した。

これらのデータは、末梢で投与された抗体が、それらがアミロイド消失を直接誘発する
ことができるＣＮＳに進入することができることを示す。１６Ｃ１１もまた斑への到達手
段を有するがしかし結合することが不可能であったことがありそうである。
実施例ＩＶ：アミロイド沈着物に対する抗体の活性についてのエクスビボスクリーニング
アッセイ
斑消失に対する抗体の効果を検査するために、われわれは、初代小膠細胞をＰＤＡＰＰ
マウスもしくはヒトＡＤ脳いずれかの未固定のクライオスタット切片とともに培養したエ
クスビボアッセイを確立した。小膠細胞は新生児ＤＢＡ／２Ｎマウス（１〜３日齢）の大
脳皮質から得た。皮質を、５０μｇ／ｍｌのＤＮアーゼＩ（シグマ（Ｓｉｇｍａ））を含
むＨＢＳＳ^--（ハンクス液、シグマ（Ｓｉｇｍａ））中で機械的に解離させた。解離され
た細胞を１００μｍ細胞濾過器（ファルコン（Ｆａｌｃｏｎ））で濾過し、そして１００
０ｒｐｍで５分間遠心分離した。ペレットを成長培地（高ブドウ糖ＤＭＥＭ、１０％ＦＢ
Ｓ、２５ｎｇ／ｍｌ ｒｍＧＭ−ＣＳＦ）に再懸濁し、そして細胞をＴ−７５プラスチッ
ク製培養フラスコあたり２個の脳の密度でプレーティングした。７〜９日後に、フラスコ
を回転式振とう機上で３７℃で２００ｒｐｍで２時間回転させた。細胞懸濁物を１０００
ｒｐｍで遠心分離し、そしてアッセイ培地に再懸濁した。

ＰＤＡＰＰマウスもしくはヒトＡＤ脳の１０μｍのクライオスタット切片（死後間隔＜
３時間）を、ポリリシン被覆された円形のガラス製カバーガラス上に融解固定し、そして
２４穴組織培養プレートのウェルに入れた。カバーガラスを、１％ＦＢＳ、グルタミン、
ペニシリン／ストレプトマイシンおよび５ｎｇ／ｍｌのｒｍＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ）を含
むＨ−ＳＦＭ（ハイブリドーマ−血清を含まない培地（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ−ｓｅｒｕｍ
ｆｒｅｅ ｍｅｄｉｕｍ）、ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）ＢＲＬ）よりなるアッセイ培地で２
回洗浄した。対照もしくは抗Ａβ抗体を２×濃度（最終５μｇ／ｍｌ）で１時間添加した
。その後、小膠細胞を、細胞０．８×１０⁶個／ｍｌアッセイ培地の密度で接種した。培
養物を加湿インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ₂）中で２４時間もしくはそれ以上維持
した。インキュベーションの終了時に、培養物を４％パラホルムアルデヒドで固定し、そ
して０．１％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）−Ｘ１００で浸透化した。切片を、ビオチニル化
３Ｄ６、次いでストレプトアビジン／Ｃｙ３複合体（ジャクソン イミュノリサーチ（Ｊ
ａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ））で染色した。外因性の小膠細胞を核染
色（ＤＡＰＩ）により可視化した。培養物を倒立蛍光顕微鏡（ニコン（Ｎｉｋｏｎ）、Ｔ
Ｅ３００）で観察し、そしてＳＰＯＴソフトウェアを使用するＳＰＯＴディジタルカメラ
（ディアグノスティックス インストゥルメンツ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｓｔｒｕ
ｍｅｎｔｓ））で顕微鏡写真を撮影した。ウェスタンブロット分析のために、培養物を８
Ｍ尿素で抽出し、還元トリシンサンプル緩衝液中で１：１希釈し、そして１６％トリシン
ゲル（ノヴェックス（Ｎｏｖｅｘ））上に負荷した。イモビロン上への転写後に、ブロッ
トを５μｇ／ｍｌのｐａｂＡβ４２、次いでＨＲＰ結合抗マウス抗体に曝露し、そしてＥ
ＣＬ（アマーシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））で発色させた。

１６Ｃ１１（インビボで有効でなかったＡβに対する抗体の１つ）の存在下でＰＤＡＰ
Ｐ脳切片を用いてアッセイを実施した場合に、β−アミロイド斑は損なわれていないまま
であり、そして食作用は観察されなかった。対照的に、隣接切片を１０Ｄ５の存在下で培
養した場合に、アミロイド沈着物は大部分がなくなり、また、小膠細胞は、Ａβを含有す
る多数の食小胞を示した。同一の結果がＡＤ脳切片で得られ；１０Ｄ５はＡＤ斑の食作用
を誘導した一方、１６Ｃ１１は無効であった。加えて、該アッセイは、マウスもしくはヒ
トいずれかの小膠細胞、およびＡβに対するマウス、ウサギもしくは霊長類抗体を用いて
実施された場合に、匹敵する結果を提供した。

表７は、数種の異なる抗体結合特異性について食作用に対してＡβ結合を比較する。ａ
ａ１−７内のエピトープに抗体する結合はアミロイド沈着物を結合かつ消失の双方をした
一方、アミノ酸４−１０内のエピトープに結合する抗体はアミロイド沈着物を消失させる
ことなく結合することをみることができる。残基１０のＣ末端のエピトープに結合する抗
体は、アミロイド沈着物を結合も消失もしない。

表８は、エクスビボアッセイで食作用を誘導しかつ受動的移動研究でインビボの斑負荷
を低下させるそれらの能力を比較する、Ａβに対する数種の抗体で得られた結果を示す。
１６Ｃ１１および２１Ｆ１２は高親和力で凝集型の合成Ａβペプチドに結合したとは言え
、これらの抗体は未固定の脳切片中のβ−アミロイド斑と反応することが不可能であり、
エクスビボアッセイで食作用を誘発することができず、そしてインビボで有効でなかった
。１０Ｄ５、３Ｄ６、およびＡβに対するポリクローナル抗体は、全３種の測定により活
性であった。これらの結果は、インビボの有効性がＣＮＳ内の斑の直接の抗体に媒介され
る消失によること、および該エクスビボアッセイはインビボの有効性を予言することを示
す。

同一のアッセイを使用して、ＮＡＣと称されるシヌクレインの一フラグメントに対する
抗体の消失活性を試験した。シヌクレインはアミロイド斑関連タンパク質であることが示
されている。ＮＡＣに対する抗体を、前のとおり、アミロイド斑を含有する脳組織サンプ
ルおよび小膠細胞と接触させた。ウサギ血清を対照として使用した。その後のモニタリン
グは、抗体の消失活性を暗示する斑の数および大きさの顕著な低下を示した。

共焦点顕微鏡検査を使用して、Ａβがエクスビボアッセイの経過の間にインターナリゼ
ーションされたことを確認した。対照抗体の存在下では、外因性の小膠細胞は組織上の共
焦点面に留まり、Ａβを含有する食小胞は存在せず、そして斑は切片内に損なわれていな
いまま留まった。１０Ｄ５の存在下では、ほぼ全部の斑物質が、外因性の小膠細胞内の小
胞中に含有された。インターナリゼーションされたペプチドの運命を決定するために、１
０Ｄ５処理された培養物を多様な時間点で８Ｍ尿素で抽出し、そしてウェスタンブロット
分析により検査した。食作用が未だ起こっていなかった１時間の時間点で、Ａβに対する
ポリクローナル抗体との反応は、強い４ｋＤのバンド（Ａβペプチドに対応する）を示し
た。Ａβの免疫反応性は第１日に減少し、そして第３日までに非存在であった。従って、
Ａβの抗体に媒介される食作用はその分解につながる。

エクスビボアッセイにおける食作用がＦｃに媒介されたかどうかを決定するために、抗
Ａβ抗体３Ｄ６のＦ（ａｂ’）２フラグメントを調製した。Ｆ（ａｂ’）２フラグメント
は斑と反応するそれらの完全な能力を保持したとは言え、それらは小膠細胞による食作用
を誘発することが不可能であった。加えて、全抗体での食作用は、マウスＦｃアクセプタ
ーに対する試薬（抗ＣＤ１６／３２）により封鎖することができた。これらのデータは、
Ａβのインビボ消失がＦｃアクセプターに媒介される食作用により起こることを示す。
実施例Ｖ：血液脳関門を通る抗体の通過
本実施例は、正常もしくはＰＤＡＰＰいずれかのマウスの末梢組織中への静脈内注入後
に脳に送達される抗体の濃度を測定する。治療後、ＰＤＡＰＰもしくは対照正常マウスを
０．９％ＮａＣｌで灌流した。脳領域（海馬もしくは皮質）を切開しかつ迅速に凍結させ
た。脳を０．１％トリトン（ｔｒｉｔｏｎ）およびプロテアーゼ阻害剤中でホモジェナイ
ズした。免疫グロブリンを抽出物中でＥＬＩＳＡにより検出した。Ｆ（ａｂ）’２ヤギ抗
マウスＩｇＧを捕捉試薬としてＲＩＡプレート上に被覆した。血清もしくは脳抽出物を１
時間インキュベートした。アイソタイプを、抗マウスＩｇＧ１−ＨＲＰまたはＩｇＧ２ａ
−ＨＲＰもしくはＩｇＧ２ｂ−ＨＲＰ（カルタグ（Ｃａｌｔａｇ））で検出した。抗体は
、アイソタイプに関係なく、血液中で見出されたものの１／１０００である濃度でＣＮＳ
中に存在した。例えば、ＩｇＧ１の濃度が血液中のＩｇＧ２ａのものの３倍であった場合
は、それは脳中で同様にＩｇＧ２ａの３倍であり、双方は血液中のそれらのそれぞれのレ
ベルの０．１％で存在した。この結果はトランスジェニックおよび非トランスジェニック
双方のマウスで観察され、ＰＤＡＰＰが独特に漏出血液脳関門を有しないことを示した。
実施例ＶＩ．マウス３Ｄ６可変領域のクローン化および配列決定
３Ｄ６ ＶＨのクローン化および配列分析。３Ｄ６のＨ鎖可変ＶＨ領域を、２つの独立
した方法によりハイブリドーマ細胞から調製されたｍＲＮＡを使用するＲＴ−ＰＣＲによ
りクローン化した。第一の方法において、５’プライマーとしての翻訳開始コドンを包含
するＶＨ領域リーダーペプチド（ＤＮＡ番号３８１８−３８２９）およびｇ２ｂ（ＤＮＡ
番号３８３２）定常領域特異的３’プライマーに対するコンセンサスプライマーを使用し
た。ＰＣＲ増幅された産物、ならびに複数の独立に生じられたクローンからの配列は相互
と完全に一致した。３Ｄ６のＶＨ領域の配列でのさらなる確認として、結果を、５’ＲＡ
ＣＥ ＲＴ−ＰＣＲの方法論および３’ｇ２ｂ特異的プライマー（ＤＮＡ番号３８３２）
により得られたＶＨフラグメントを配列決定することにより確認した。再度、該配列は、
ＰＣＲ産物、ならびに複数の独立に単離されたクローン由来であった。双方の配列は相互
と完全に一致し（５’ＲＡＣＥ産物からのリーダー領域中のＶ８Ｉ置換を除き）、該配列
が３Ｄ６のＶＨ領域をコードするｍＲＮＡ由来であることを示す。３Ｄ６のＶＨ領域のヌ
クレオチド（配列番号３）およびアミノ酸配列（配列番号４）をそれぞれ表９Ａおよび図
２に示す。

３Ｄ６ ＶＬのクローン化および配列分析。３Ｄ６のＬ鎖可変ＶＬ領域をＶＨ領域と類
似の様式でクローン化した。第一の試みにおいて、コンセンサスプライマーの組は、以下
のとおりマウスＶＬ領域の増幅のため設計した。すなわち、５’プライマー（ＤＮＡ番号
３８０６−３８１６）は翻訳開始コドンを包含するＶＬ領域にハイブリダイズするよう設
計し、また、３’プライマー（ＤＮＡ番号３８１７）はＶ−Ｊ結合部領域の下流のマウス
Ｃｋ領域に特異的であった。ＰＣＲフラグメント、ならびにこのコンセンサスＬ鎖プライ
マーの組を使用して単離された独立に得られたクローンのＤＮＡ配列分析は、得られたｃ
ＤＮＡが非機能的に再配列されたメッセージ由来であったことを示した。該配列が、Ｖ−
Ｊ領域結合部の間に１個のフレームシフト突然変異を含有したからである。

第二の試みにおいて、５’ＲＡＣＥを使用して、第二のＶＬをコードするｃＤＮＡをク
ローン化した。この産物（コンセンサス１１）のＤＮＡ配列分析は、それが機能的ｍＲＮ
Ａをコードしたことを示した。従って、該配列が正しい３Ｄ６Ｌ鎖ｍＲＮＡをコードする
と結論することができる。３Ｄ６のＶＬ領域のヌクレオチド（配列番号１）およびアミノ
酸配列（配列番号２）をそれぞれ表９Ｂおよび図１に示す。

３Ｄ６ ＶＬのｃＤＮＡのクローニングに使用されたプライマーを表１０に示す。

Ｎ末端からＣ末端まで、ＬおよびＨ双方の鎖は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、
ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含んで成る。各ドメインへのアミノ酸の割り
当てはＫａｂａｔら、上記の番号付け協定に従う。

キメラ３Ｄ６抗体の発現：可変ＨおよびＬ鎖領域を、それぞれのＶＤＪもしくはＶＪ結
合部の下流のスプライス供与配列をコードするように再工作し、そしてＨ鎖について哺乳
動物発現ベクターｐＣＭＶ−ｈγ１およびＬ鎖についてｐＣＭＶ−ｈκ１にクローン化し
た。これらのベクターは、挿入された可変領域カセットの下流にエキソンのフラグメント
としてヒトγ１およびＣｋ定常領域をコードする。配列の確認後に、Ｈ鎖およびＬ鎖発現
ベクターをＣＯＳ細胞にコトランスフェクトした。２種の異なるＨ鎖クローン（Ｈ２．２
およびＨ３．２）を、３種の異なるキメラＬ鎖クローン（Ｌ３、Ｌ４およびＬ１０）とと
もに独立にコトランスフェクトして、結果の再現性を確認した。キメラ２１．６抗体のト
ランスフェクションを、ベクターについての陽性対照として実施した。馴化培地をトラン
スフェクション４８時間後に収集し、そして抗体産生についてウェスタンブロット分析、
もしくはＡβ結合についてＥＬＩＳＡによりアッセイした。

複数のトランスフェクション体は全部、ウェスタンブロット上でヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ
＋Ｌ）抗体により認識されるＨ鎖およびＬ鎖の組合せを発現した。

Ａβに対する３Ｄ６およびキメラ３Ｄ６（ＰＫ１６１４）抗体の直接結合をＥＬＩＳＡ
分析により試験した。キメラ３Ｄ６は、３Ｄ６により立証されたものに類似の高親和力で
Ａβに結合することが見出された（図３Ａ）。さらに、ＥＬＩＳＡに基づく競争阻害アッ
セイは、キメラ３Ｄ６およびマウス３Ｄ６抗体が、Ａβに対するビオチニル化３Ｄ６の結
合と等しく競争したことを示した（図３Ｂ）。該キメラ抗体は、３Ｄ６参照サンプルと識
別不可能な結合特性を表した。

さらに、３Ｄ６およびＰＫ１６１４双方はＡβ斑の消失において有効であった。エクス
ビボアッセイは、抗体の濃度が増大する際に、Ａβの量がマウスおよびキメラ双方の３Ｄ
６抗体について類似の様式で減少することを立証する。これゆえに、該配列がそれぞれ機
能的な３Ｄ６のＨ鎖およびＬ鎖をコードすると結論することができる。
実施例ＶＩＩ．３Ｄ６のヒト化
相同性／分子モデル化。マウス３Ｄ６抗体中の重要な構造的枠組み残基を同定するため
に、ＨおよびＬ鎖について、最も近いマウス抗体に基づき三次元モデルを生成させた。こ
の目的上、１ＣＲ９と呼称される抗体を、３Ｄ６ Ｌ鎖をモデル化するための鋳型として
選び（ＰＤＢ番号：１ＣＲ９、Ｋａｎｙｏら、上記）、また、１ＯＰＧと呼称される抗体
を、Ｈ鎖をモデル化するための鋳型として選んだ（ＰＤＢ番号：１ＯＰＧ Ｋｏｄａｎｄ
ａｐａｎｉら、上記）。（表１もまた参照されたい。）これらの抗体のＬ鎖およびＨ鎖と
の３Ｄ６のアミノ酸配列の整列は、Ｈ鎖のＣＤＲ３を除き、１ＣＲ９および１ＯＰＧ抗体
が３Ｄ６と有意の配列の相同性を共有することを示した。加えて、選択された抗体のＣＤ
Ｒループは、再度Ｈ鎖のＣＤＲ３を除き、３Ｄ６のＣＤＲループがそうであるように、同
一のカノニカルＣｈｏｔｈｉａ構造分類にある。従って、１ＣＲ９および１ＯＰＧを、３
Ｄ６の相同性モデル化のための解明された構造の抗体として最初に選択した。

上に示された抗体に基づく３Ｄ６可変領域の第一工程（ｆｉｒｓｔ ｐａｓｓ）相同性
モデルを、ロック アンド セグモド モジュールズ（Ｌｏｏｋ ＆ ＳｅｇＭｏｄ Ｍ
ｏｄｕｌｅｓ）ＧｅｎｅＭｉｎｅ（ｖ３．５）ソフトウェアパッケージを使用して構築し
た。このソフトウェアは、モレキュラー アプリケーションズ グループ（Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｇｒｏｕｐ）（カリフォルニア州パロアルト）から
無期ライセンス下に購入した。Ｍｉｃｈａｅｌ ＬｅｖｉｔｔおよびＣｈｒｉｓ Ｌｅｅ
博士により著されたこのソフトウェアパッケージは、配列相同性に基づき既知構造の鋳型
上での一次配列の構造モデル化に関与する段階を自動化することにより、分子モデル化の
過程を助長する。ＵＮＩＸ(登録商標)下でシリコン グラフィックス（Ｓｉｌｉｃｏｎ
Ｇｒａｐｈｉｃｓ）ＩＲＩＳワークステーションで作業して、モデル化された構造を、好
ましくない原子接触を軽減しかつ静電およびファンデルワールス相互作用を至適化するた
めに一連のエネルギー最小化段階により自動的に精緻化する。

さらなる精緻化されたモデルを、クアンタ［Ｑｕａｎｔａ］（商標）のモデル化能力を
使用して構築した。３Ｄ６のＨ鎖のＣＤＲでのＰＤＢデータベースのクエリが、１ｑｋｚ
を３Ｄ６と最も相同かつ同一の数の残基を有すると同定した。これゆえに、３Ｄ６のＨ鎖
のＣＤＲ３を、鋳型として１ｑｋｚの結晶構造を使用してモデル化した。３Ｄ６モデルの
α−炭素バックボーンの見取図を図４に示す。ＶＨドメインを点線として示し、またＶＬ
ドメインを実線として示し、そしてＣＤＲループはリボンの形態で示す。

ヒトアクセプター抗体配列の選択。適するヒトアクセプター抗体配列を、既知のヒト抗
体の配列とのマウス可変領域のアミノ酸配列のコンピュータ比較により同定した。比較は
３Ｄ６のＨおよびＬ鎖について別個に実施した。とりわけ、その枠組み配列がマウスＶＬ
およびＶＨ枠組み領域と高程度の配列の同一性を表したヒト抗体からの可変ドメインを、
それぞれのマウスの枠組み配列でのＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ（国立保健研究所（ｔｈｅ Ｎ
ａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）ＮＣＢＩインターネット
サーバにより公的にアクセス可能）を使用するＫａｂａｔデータベースのクエリにより同
定した。

２個の候補配列を、以下の基準、すなわち（１）対象配列との相同性；（２）ドナー配
列とカノニカルＣＤＲ構造を共有すること；および（３）枠組み領域中にいかなる希少ア
ミノ酸残基も含有しないこと、に基づきアクセプター配列として選んだ。ＶＬについての
選択されたアクセプター配列は、Ｋａｂａｔ番号（ＫＡＢＩＤ）０１９２３０（ジェンバ
ンク（Ｇｅｎｂａｎｋ）受託番号Ｓ４０３４２）であり、また、ＶＨについてはＫＡＢＩ
Ｄ ０４５９１９（ジェンバンク（Ｇｅｎｂａｎｋ）受託番号ＡＦ１１５１１０）である
。ヒト化３Ｄ６抗体の第一のバージョンはこれらの選択されたアクセプター抗体配列を利
用する。

アミノ酸残基の置換。上に示されたとおり、本発明のヒト化抗体は、実質的にヒト免疫
グロブリン（アクセプター免疫グロブリン）からの可変枠組み領域、および実質的に３Ｄ
６と命名されるマウス免疫グロブリン（ドナー免疫グロブリン）からの相補性決定領域を
含んで成る。３Ｄ６の相補性決定領域および適切なヒトアクセプター免疫グロブリンを同
定すれば、次の段階は、これらの成分からのどの残基を（あれば）、生じるヒト化抗体の
特性を至適化するように置換するかを決定することであった。上述された基準を使用して
、置換のための残基を選択した。

図１および２は、ヒト化配列、対応するヒト枠組みアクセプター配列、および最後にヒ
ト枠組みアクセプター配列に対する最高の相同性を示すヒト生殖細胞系Ｖ領域のそれぞれ
のバージョン１との、それぞれ元のマウス３Ｄ６ ＶＬおよびＶＨの整列を描く。影を付
けられた残基は、カノニカル（黒地）、バーニア（点線の輪郭）、充填（太字）および希
少アミノ酸（太字斜体）を示し、そして図上に示す。*印はヒトアクセプター枠組み配列
中でマウス残基に戻し突然変異された残基を示し、また、ＣＤＲ領域は上線を付けられて
示す。ヒト化３Ｄ６ ＶＨおよびＶＬのバージョン１に組み込まれた変化の要約を表１２
に提示する。

図１３および１４はそれぞれ多様なＬおよびＨ鎖についてのＫａｂａｔの番号付けの記
号表を示す。

ヒト化抗体は、好ましくは、最低１０⁷、１０⁸、１０⁹もしくは１０¹⁰Ｍ^-1のＡβに対
する特異的結合親和性を表す。通常、Ａβに対するヒト化抗体の結合親和性の上限は、３
Ｄ６のものの３、４もしくは５の係数内にある（すなわち〜１０⁹Ｍ^-1）。しばしば、結
合親和性の下限もまた、３Ｄ６のものの３、４もしくは５の係数内にある。

ヒト化３Ｄ６ ＶＨおよびＶＬ、バージョン１の集成および発現 簡潔には、各Ｖ領域
について、４種の大型の一本鎖の重なり合うオリゴヌクレオチドを合成した。加えて、４
種の短いＰＣＲプライマーを各Ｖ領域について合成して、特定のＶ領域の集成をさらに助
長した。この目的上使用されたオリゴヌクレオチドのＤＮＡ配列を表１５に示す。

ヒト化Ｌ鎖はＰＣＲを使用して集成した。２ダース以上のクローンのＤＮＡ配列分析は
、期待された配列に関して、ＶＬ領域全体での散在された点突然変異および欠失を示した
。配列の分析は、クローン２．３が、アミノ末端領域中の２個の緊密に空間を開けられた
単一ヌクレオチド欠失の修復の影響を受けやすかったことを示した。これゆえに、部位特
異的突然変異誘発を、２個の欠失されたヌクレオチドを導入するためのオリゴヌクレオチ
ドを使用してクローンｐＣＲＳｈｕｍ３Ｄ６ｖ１２．３で実施し、かつ、点突然変異の修
復をＤＮＡ配列分析により確認し、そして、ＶＬ挿入物をＬ鎖発現ベクターｐＣＭＶ−ｃ
Ｋにクローン化した。

ＰＣＲに基づく方法を使用するヒト化ＶＨの集成は、配列の５’半分に大きな欠失を伴
うクローンをもたらした。ＰＣＲ条件を至適化するためのさらなる努力が部分的成功に遭
遇した。至適化されたＰＣＲ条件を介して集成されたクローンは、なお、Ａ＋Ｂフラグメ
ントのオーバーラップにマッピングされる領域中に１０〜２０ｎｔの欠失を有した。結果
として、代替の一戦略を、ＤＮＡポリメラーゼ（Ｔ４、クレノウおよびシークェナーゼ）
に媒介されるオーバーラップ伸長、次いで重なり合う端を共有結合するためのＴ４ ＤＮ
Ａリガーゼを利用するＶＨ集成に使用した。後者のアプローチを使用するＶＨ集成由来の
クローンのサブセットのＤＮＡ配列分析は、クローン間の散在された点突然変異および欠
失を示した。２ダースを越えるクローンの分析は、該クローンについて具体的に説明され
たと本質的に同一のパターンを示した。ＶＨおよびＶＬクローンの第一工程集成後に観察
された類似の結果は、観察されたＤＮＡ配列の誤りが、集成に使用された長いＤＮＡの合
成の間の自動化合成機の誤りから生じたことを示唆する。

ヒト化ＶＨクローン２．７を、それが含有することが観察された３ヌクレオチド欠失の
部位特異的突然変異に媒介される修復のため選択した。
実施例ＸＩＩＩ：ヒト化３Ｄ６ｖ２抗体の特徴づけ
第二のバージョンのヒト化３Ｄ６は、残基１でのＤ→Ｙ置換を除きバージョン１につい
て示された置換のそれぞれを有して創製した。この残基での置換は、該残基がＣＤＲ相互
作用残基と同定されたため、バージョン１で実施した。しかしながら、置換はその位置で
ヒト免疫グロブリンについて希少であった１残基を欠失した。これゆえに、置換を伴わな
い１バージョンを創製した。さらに、Ｈ鎖枠組み領域中の非生殖細胞系残基を生殖細胞系
残基で置換した（すなわちＨ７４＝Ｓ、Ｈ７７＝ＴおよびＨ８９＝Ｖ）。バージョン２の
ＬおよびＨ鎖についてのＫａｂａｔの番号付けは、バージョン２のＬ鎖の残基１がａｓｐ
（Ｄ）であり、Ｈ鎖の残基７４がｓｅｒ（Ｓ）であり、Ｈ鎖の残基７７がｔｈｒ（Ｔ）で
あり、そしてＨ鎖の残基８９がｖａｌ（Ｖ）であることを除きそれぞれ表１３および１４
に描かれたものと同一である。ヒト化３Ｄ６バージョン１のＬおよびＨ鎖のヌクレオチド
配列をそれぞれ配列番号３４および３６として示す。ヒト化３Ｄ６バージョン２のＬおよ
びＨ鎖のヌクレオチド配列をそれぞれ配列番号３５および３７として示す。
実施例ＩＸ：ヒト化３Ｄ６抗体の機能試験
凝集型Ａβへのヒト化３Ｄ６ｖ１の結合。ヒト化３Ｄ６ｖ１の機能試験を、一過性にト
ランスフェクトされたＣＯＳ細胞からの馴化培地を使用して実施した。細胞を、完全にキ
メラの抗体、キメラＨ鎖＋ヒト化Ｌ鎖もしくはキメラＬ鎖＋ヒト化Ｈ鎖のいずれかの混合
物、および最後に完全にヒト化された抗体でトランスフェクトした。馴化培地をＥＬＩＳ
Ａアッセイにより凝集型Ａβ１−４２への結合について試験した。ヒト化抗体は実験誤差
内の良好な活性を示し、かつ、キメラ３Ｄ６参照サンプルと識別不可能な結合特性を表し
た。結果を表１６に示す。

ヒト化３Ｄ６ｖ１および３Ｄ６ｖ２抗体の結合親和性を比較するために、抗原として凝
集型Ａβを使用してＥＬＩＳＡ分析を実施した。結果は、３Ｄ６ｖ１（Ｈ１Ｌ１）および
３Ｄ６ｖ２（Ｈ２Ｌ２）双方がほぼ同一のＡβ結合特性を有することを示す（図５）。

ｈ３Ｄ６ｖ２の置換ＮＥＴ（ｒＮＥＴ）分析。ｒＮＥＴエピトープマップアッセイは、
抗体の全体的結合活性へのエピトープ内の個々の残基の寄与についての情報を提供する。
ｒＮＥＴ分析は、合成された系統的な一置換ペプチド類似物を使用する。試験されている
抗体の結合を、天然のペプチド（本来の抗原）および１９種の代替の「一置換」ペプチド
（各ペプチドはその位置について１９種の非本来のアミノ酸の１種で第一の位置で置換さ
れる）に対して決定する。多様な非本来の残基でのその位置での置換の影響を反映するプ
ロフィルが生成される。抗原ペプチドに沿った連続する位置でプロフィルが同様に生成さ
れる。その後、組合せられたプロフィルもしくはエピトープマップ（全１９種の非本来の
残基での各位置での置換を反映する）を、第二の抗体について同様に生成されたマップと
比較することができる。実質的に類似のもしくは同一のマップは、比較されている抗体が
同一もしくは類似のエピトープ特異性を有することを示す。

この分析を、３Ｄ６およびヒト化３Ｄ６バージョン２について実施した。抗体を天然の
ＡβペプチドＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹ（配列番号３３）に対する結合について試験した。残
基１−８を、その位置について１９種の非本来の残基のそれぞれで系統的に置換した。従
って３Ｄ６およびｈ３Ｄ６ｖ２についてマップが生成された。結果を表１７に表の形態で
提示する。

注目すべきことに、該プロフィルは、各位置での置換を見る場合に３Ｄ６およびｈ３Ｄ
６ｖ２について事実上同一である（すなわち、値は行１（３Ｄ６）対行２（ｈ３Ｄ６ｖ２
）中のデータを比較する場合に同一の様式で変動する。これらのデータは、ｈ３Ｄ６ｖ２
のｒＮＥＴエピトープマップが、Ａβの残基１−４および５−８双方を使用してｍ３Ｄ６
に事実上同一であるため、ｈ３Ｄ６ｖ２の特異性が保存されていることを立証する。

ＰＤＡＰＰの脳切片での免疫組織化学はｈ３Ｄ６ｖ１抗体の特異性を立証する。ヒト化
３Ｄ６ｖ１抗体は、ＰＤＡＰＰマウスからのクライオスタット調製された脳切片中のＡβ
を認識した。ヒト化３Ｄ６ｖ１およびＰＫ１６１４双方は、組織を染色するのに使用され
た抗体の量に対するスライドガラスあたりの蛍光の量（画素で定量される）により測定さ
れるとおり、同一の用量応答様式でＰＤＡＰＰ斑に結合した（図６）。同一の抗ヒト二次
抗体を本実験で使用した。切片化、染色および画像手順は前述した。同一の実験において
、ＰＤＡＰＰおよびＡＤ脳切片でのｈ３Ｄ６ｖ２染色の画像分析は、ｈ３Ｄ６ｖ２が３Ｄ
６ｖ１に類似の様式でＡβ斑を認識することを示した（例えば高度に装飾された斑）。

ｈ３Ｄ６の競争結合分析。マウス３Ｄ６と競争するｈ３Ｄ６抗体ｖ１およびｖ２の能力
を、ビオチニル化３Ｄ６抗体を使用するＥＬＩＳＡにより測定した。競争結合分析は、ｈ
３Ｄ６ｖ１、ｈ３Ｄ６ｖ２およびキメラＰＫ１６１４が全部、Ａβを結合するためにｍ３
Ｄ６と競争することができることを示した（図７）。ｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２は
、Ａβに対し３Ｄ６と競争するそれらの能力において同一であった。１０Ｄ５抗体を、そ
れが３Ｄ６と異なる結合エピトープを有するために陰性対照として使用した。バイアコア
（ＢＩＡｃｏｒｅ）分析もまた、Ａβに対するｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２の高親和
性を示した（表１８）。

０．８８ｎＭのＫｄを有する３Ｄ６に比較して、ｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ１双方
は、それぞれｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２について２．０６ｎＭおよび２．２４ｎＭ
で測定される約２ないし３倍より小さい結合親和性を有した。ＥＬＩＳＡ競争結合アッセ
イは、ｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２についておよそ６倍より小さい結合親和性を示し
た。典型的には、ヒト化抗体は、それらのマウス対照物に比較して結合親和性を約３〜４
倍喪失する。従って、ｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２についての約３倍（ＥＬＩＳＡお
よびバイアコア（ＢＩＡｃｏｒｅ）の結果の平均）の喪失は許容される範囲内にある。

ｈ３Ｄ６ｖ２抗体を使用するエクスビボアッセイ。小膠細胞を刺激するｈ３Ｄ６ｖ２の
能力を、エクスビボ食作用アッセイにより試験した（図８）。ｈ３Ｄ６ｖ２は、ＰＤＡＰ
Ｐマウス脳組織からのＡβ凝集物の食作用の誘導において、キメラ３Ｄ６と同じくらい有
効であった。ＩｇＧを、それがＡβを結合することが不可能でありかつ従って食作用を誘
導することができないため、本実験で陰性対照として使用した。

ｈ３Ｄ６のインビボでの脳局在性。¹²⁵Ｉ標識ｈ３Ｄ６ｖ２、ｍ３Ｄ６および抗体ＤＡ
Ｅ１３を、別個の実験で１４匹の個々のＰＤＡＰＰマウスにそれぞれＩＶ注入した。マウ
スを第７日後に殺し、そしてさらなる分析のため灌流した。それらの脳領域を切開し、そ
して特定の脳領域での¹²⁵Ｉ活性について測定した。脳中の放射標識活性を血清サンプル
中の活性と比較した。結果を、それぞれ血清および脳領域について表１９および２０に示
す。

該データは、ｈ３Ｄ６ｖ２が脳に局在し、そしてＡβが凝集することが既知である海馬
領域でとりわけ濃縮されたことを示す。ｍ３Ｄ６およびＤＡＥ１３についての脳のカウン
トはｈ３Ｄ６ｖ２に匹敵した。全３種の抗体は、インビボでのＡβ斑結合により立証され
るとおり、脳関門を横断することが可能であった。
実施例Ｘ．マウス１０Ｄ５可変領域のクローン化および配列決定
１０Ｄ５ ＶＨのクローン化および配列分析。ハイブリドーマ細胞からの１０Ｄ５のＶ
ＨおよびＶＬ領域を、５’ＲＡＣＥ手順を使用するＲＴ−ＰＣＲによりクローン化した。
推定される１０Ｄ５ ＶＬドメインをコードする２個の独立したｃＤＮＡクローン由来の
ヌクレオチド配列（配列番号１３）および推定されるアミノ酸配列（配列番号１４）を表
２１および図９に示す。推定される１０Ｄ５ ＶＨドメインをコードする２個の独立した
ｃＤＮＡクローン由来のヌクレオチド配列（配列番号１５）および推定されるアミノ酸配
列（配列番号１６）を表２２および図１０に示す。１０Ｄ５ ＶＬおよびＶＨ配列は、そ
れらがＣ領域へのイニシエーターメチオニンからの隣接するＯＲＦを含有する限りは機能
的Ｖ領域の基準に合致し、そして免疫グロブリンＶ領域遺伝子の保存される残基の特徴を
共有する。

実施例ＸＩ．ヒト被験体の予防および治療
単一用量の第Ｉ相試験を、ヒトでの安全性を決定するために実施する。治療薬は、約０
．０１の推定される有効性のレベルから開始して異なる患者に増大する投薬量で、かつ、
有効マウス投薬量の約１０倍のレベルに達するまで３の係数だけ増大させて投与する。

第ＩＩ相試験は治療的有効性を決定するために実施する。推定ＡＤ（ｐｒｏｂａｂｌｅ
ＡＤ）についてのアルツハイマー病および関連障害協会（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄ
ｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ
）（ＡＤＲＤＡ）基準を使用して定義される早期ないし中期のアルツハイマー病を伴う患
者を選択する。適する患者はミニ精神状態検査（Ｍｉｎｉ−Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｅ
Ｅｘａｍ）（ＭＭＳＥ）で１２〜２６の範囲の得点を得る。他の選択基準は、患者が試験
の持続期間を生き延びかつ妨害するかもしれない併用薬の使用のような複雑にする問題を
欠くことがありそうであることである。患者機能の基礎評価は、ＭＭＳＥ、ならびにアル
ツハイマー病の状態および機能を伴う患者を評価するための包括的尺度であるＡＤＡＳの
ような古典的精神測定的方法を使用して行う。これらの精神測定的尺度は、アルツハイマ
ー病の病状の進行の尺度を提供する。適する質的生活尺度もまた治療をモニターするため
に使用することができる。疾患の進行はまたＭＲＩによってもモニターすることができる
。免疫原特異的抗体およびＴ細胞応答のアッセイを包含する患者の血液プロフィルもまた
モニターすることができる。

基礎測定後に、患者は治療を受領することを開始する。彼らは無作為化され、そして盲
検化された様式で治療薬もしくはプラセボのいずれかで治療される。患者は最低６ヶ月ご
とにモニターする。有効性は、プラセボ群に関しての治療群の進行の有意の低下により決
定する。

第二の第ＩＩ相試験は、ときに年齢関連記憶障害（ａｇｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍ
ｅｍｏｒｙ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）（ＡＡＭＩ）もしくは軽度認識障害（ＭＣＩ）と称
される非アルツハイマー病の早期記憶喪失から、ＡＤＲＤＡ基準によるとおり定義される
ところの推定アルツハイマー病までの患者の転換を評価するために実施する。アルツハイ
マー病への転換の高い危険度を伴う患者を、記憶喪失もしくは前アルツハイマーの総体的
症状を伴う他の困難の早期の兆候、アルツハイマー病の家族歴、遺伝的危険因子、年齢、
性別およびアルツハイマー病に対する高い危険度を予測することが見出される他の特徴に
ついて、参照集団をスクリーニングすることにより、非臨床集団から選択する。より正常
な集団を評価するように設計された他の測定基準と一緒になった、ＭＭＳＥおよびＡＤＡ
Ｓを包含する適する測定基準に対する基礎の得点を収集する。これらの患者集団を、作用
物質での投与の代替に対するプラセボ比較を伴う適する群に分割する。これらの患者集団
を約６ヶ月の間隔で追跡し、そして各患者の終点は、彼もしくは彼女が観察の終了時にＡ
ＤＲＤＡ基準により定義されるような推定アルツハイマー病に転換するかどうかである。
全般的材料および方法
Ａ．ポリクローナルおよびモノクローナルＡβ抗体の製造
抗Ａβポリクローナル抗体は２群の動物から収集された血液から製造した。第一の群は
６ないし８週齢の１００匹の雌性スイス ウェブスター（Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒ）
マウスよりなった。それらを、ＣＦＡ／ＩＦＡと組合せられた１００μｇのＡＮ１７９２
で第０、１５および２９日に免疫化した。第四の注入は、１／２用量のＡＮ１７９２で第
３６日に投与した。動物を第４２日の犠牲に際して放血させ、血清を調製しかつ血清を合
わせて合計６４ｍｌを創製した。第二の群は、６ないし９週齢の、ＰＤＡＰＰマウスと同
系遺伝子しかしヒトＡＰＰ遺伝子に関して非トランスジェニックの２４匹の雌性マウスよ
りなった。それらを、ＣＦＡ／ＩＦＡと組合せられた１００μｇのＡＮ１７９２で第０、
１４、２８および５６日に免疫化した。これらの動物もまた第６３日の犠牲に際して放血
させ、血清を調製しかつ合計１４ｍｌについて合わせた。２ロットの血清をプールした。
抗体画分は、５０％飽和硫酸アンモニウムを用いる２回の連続的沈殿を使用して精製した
。最終沈殿物をＰＢＳに対して透析しかつエンドトキシンについて試験した。エンドトキ
シンのレベルは１ＥＵ／ｍｇ未満であった。

抗Ａβモノクローナル抗体は腹水から製造した。腹水を最初に、０．２３８％の最終濃
度に達するまで氷上で攪拌することによる氷冷腹水への濃デキストラン硫酸ナトリウムの
添加により脱脂した。その後濃ＣａＣｌ₂を攪拌しながら添加して６４ｍＭの最終濃度に
達せさせた。この溶液を１０，０００×ｇで遠心分離し、そしてペレットを廃棄した。上
清を、等容量の飽和硫酸アンモニウムを一滴ずつ添加しながら氷上で攪拌した。溶液を再
度１０，０００×ｇで遠心分離しそして上清を廃棄した。ペレットを再懸濁しかつ２０ｍ
Ｍトリス−ＨＣｌ、０．４Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．５に対して透析した。この画分をファ
ルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）ＦＰＬＣ セファロース Ｑカラムに適用し、そして２
０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５中の０．４Ｍから０．２７５Ｍ ＮａＣｌまでの逆勾
配で溶出した。

抗体のピークを２８０ｎｍでの吸光度により同定し、そして適切な画分を合わせた。精
製された抗体調製物を、ＢＣＡ法を使用してタンパク質濃度、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥを
使用して純度を測定することにより特徴づけした。プールはエンドトキシンについてもま
た試験した。エンドトキシンのレベルは１ＥＵ／ｍｇ未満であった。力価、１００未満の
力価は２５の力価値を任意に割り当てた。
Ｂ．抗体力価の測定
マウスを尾静脈中に小さな切り傷を作成すること、および約２００μｌの血液を微小遠
心管に収集することにより採血した。モルモットは、最初に後膝節領域の毛を剃ること、
ならびにその後１８ゲージ針を使用して蹠骨静脈に軽い傷を作ることおよび血液を微小遠
心管に収集することにより採血した。血液を室温（ＲＴ）で１時間凝固させ、ボルテック
ス攪拌し、その後１４，０００×ｇで１０分間遠心分離して血清から凝血塊を分離した。
その後、血清を清浄な微小遠心管に移し、そして力価測定されるまで４℃で保存した。

抗体力価はＥＬＩＳＡにより測定した。９６穴マイクロタイタープレート（コスター（
Ｃｏｓｔａｒ）ＥＩＡプレート）を、ウェル被覆緩衝液（０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐ
Ｈ８．５、０．１％アジ化ナトリウム）中の１０μｇ／ｍｌのＡβ４２もしくはＳＡＰＰ
のいずれか、または個々の報告のそれぞれで示されるところの他の抗原のいずれかを含有
する１００μｌの溶液で被覆し、そしてＲＴで一夜保持した。ウェルを吸引し、そして、
血清を、試料希釈剤（０．０１４Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣ
ｌ、０．６％ウシ血清アルブミン、０．０５％チメロサール）中の１００倍希釈で開始し
てウェルに添加した。サンプルの７種の連続希釈物を、１／２１８，７００の最終希釈に
達するまで３倍の段階でプレート中で直接作成した。希釈物を、被覆されたプレートのウ
ェル中、ＲＴで１時間インキュベートした。その後、プレートを、０．０５％トゥイーン
（Ｔｗｅｅｎ）２０を含有するＰＢＳで４回洗浄した。第二の抗体すなわちワサビペルオ
キシダーゼに結合されたヤギ抗マウスＩｇ（ベーリンガー マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）から得られた）を、試料希釈剤中３０００倍希釈物の１００
μｌとしてウェルに添加し、そしてＲＴで１時間インキュベートした。プレートを再度Ｐ
ＢＳ、トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０中で４回洗浄した。色原団を発色させるため、１０
０μｌのスロー ＴＭＢ（Ｓｌｏｗ ＴＭＢ）（ピアース ケミカルズ（Ｐｉｅｒｃｅ
Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から得られた３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）を各
ウェルに添加し、そしてＲＴで１５分間インキュベートした。反応は２５μｌの２Ｍ Ｈ
₂ＳＯ₄の添加により停止した。その後、色強度をモレキュラー デバイシーズ（Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）Ｖｍａｘで（４５０ｎｍ〜６５０ｎｍ）で読取った。

力価は、最大ＯＤの半分を生じる血清の希釈の逆数と定義した。最大ＯＤは、一般に、
非常に高力価を伴う場合（この場合は最大ＯＤを確立するためにより高い初期希釈が必要
であった）を除き、最初の１００倍希釈から採取した。５０％点が２希釈物の間にあった
場合は、直線的外挿を行って最終力価を計算した。幾何平均抗体力価を計算するために、
１００未満の力価は２５の力価値を任意に割り当てた。
Ｃ．脳組織の調製
安楽死後に、脳を取り出し、そして一方の半球を免疫組織化学的分析のため調製した一
方、３種の脳領域（海馬、皮質および小脳）を他方の半球から切開し、そして、特異的Ｅ
ＬＩＳＡを使用して多様なＡβタンパク質およびＡＰＰの形態の濃度を測定するのに使用
した（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）。

ＥＬＩＳＡに予定された組織は、１０容量の氷冷グアニジン緩衝液（５．０Ｍグアニジ
ン−ＨＣｌ、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０）中でホモジェナイズした。ホモジェ
ネートを、アダムス ニューテーター（Ａｄａｍｓ Ｎｕｔａｔｏｒ）（フィッシャー（
Ｆｉｓｈｅｒ））を使用する穏やかな攪拌によりＲＴで３ないし４時間混合し、その後、
ＡβおよびＡＰＰの定量前に−２０℃で保存した。以前の実験は、被検体がこの貯蔵条件
下で安定であったこと、および、合成Ａβタンパク質（ベイケム（Ｂａｃｈｅｍ））が、
マウス同腹子からの対照脳組織のホモジェネート中に添加された場合に定量的に回収する
ことができたことを示していた（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）。
Ｄ．Ａβレベルの測定
脳ホモジェネートを氷冷カゼイン希釈剤（０．２５％カゼイン、ＰＢＳ、０．０５％ア
ジ化ナトリウム、２０μｇ／ｍｌアプロチニン、５ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ８．０、１０μ
ｇ／ｍｌロイペプチン）で１０倍希釈し、そしてその後１６，０００×ｇで４℃で２０分
間遠心分離した。合成Ａβタンパク質標準品（１−４２アミノ酸）およびＡＰＰ標準品を
、最終組成物中に０．５Ｍグアニジンおよび０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を包
含するよう調製した。「全」ＡβサンドイッチＥＬＩＳＡは、捕捉抗体としてＡβのアミ
ノ酸１３−２８に特異的なモノクローナル抗体、モノクローナル抗体２６６（Ｓｅｕｂｅ
ｒｔら、上記）、およびレポーター抗体としてＡβのアミノ酸１−５に特異的なビオチニ
ル化モノクローナル抗体３Ｄ６（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）を利用する。３Ｄ
６モノクローナル抗体は分泌型ＡＰＰもしくは完全長のＡＰＰを認識しないが、しかしア
ミノ末端のアスパラギン酸をもつＡβ種のみを検出する。このアッセイは約５０ｎｇ／ｍ
ｌ（１１ｎＭ）の感受性の下限を有し、そして１ｎｇ／ｍｌまでの濃度の内在性のマウス
Ａβタンパク質に対する交差反応性を示さない（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）。

Ａβ１−４２特異的サンドイッチＥＬＩＳＡは、捕捉抗体としてＡβのアミノ酸３３−
４２に特異的なｍＡβ ２１Ｆ１２を使用する（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）。
ビオチニル化ｍＡβ ３Ｄ６がこのアッセイ（約１２５μｇ／ｍｌ（２８μＭ、Ｊｏｈｎ
ｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）の感受性の下限を有する）でもまたレポーター抗体である。
ＡβのＥＬＩＳＡのために、１００μｌのｍＡβ ２６６（１０μ／ｍｌで）もしくは（
５μｇ／ｍｌ）のｍＡβ ２１Ｆ１２のいずれかを、ＲＴでの一夜インキュベーションに
より９６穴イムノアッセイプレート（コスター（Ｃｏｓｔａｒ））のウェル中に被覆した
。溶液を吸引により除去し、そしてウェルを２００μｌのＰＢＳ緩衝液中０．２５％のヒ
ト血清アルブミンの添加によりＲＴで最低１時間ブロッキングした。ブロッキング溶液を
除去し、そしてプレートは使用されるまで４℃で乾燥されて保存した。プレートを使用前
に洗浄緩衝液［トリス緩衝生理的食塩水（０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍトリス−Ｈ
Ｃｌ、ｐＨ７．５）および０．０５％トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０］で再水和した。サ
ンプルおよび標準品をウェルあたり１００μｌの三重のアリコートで添加し、そしてその
後４℃で一夜インキュベートした。プレートを、アッセイの各段階の間に最低３回、洗浄
緩衝液で洗浄した。カゼインアッセイ緩衝液（０．２５％カゼイン、ＰＢＳ、０．０５％
トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０、ｐＨ７．４）中０．５μｇ／ｍｌに希釈されたビオチニ
ル化ｍＡβ ３Ｄ６を添加し、そしてウェル中でＲＴで１時間インキュベートした。カゼ
インアッセイ緩衝液で４０００倍希釈されたアビジン−ワサビペルオキシダーゼ複合物（
ベクター（Ｖｅｃｔｏｒ）、カリフォルニア州バーリンゲームから得られたアビジン−Ｈ
ＲＰ）をウェルにＲＴで１時間添加した。比色基質、スロー（Ｓｌｏｗ）ＴＭＢ−ＥＬＩ
ＳＡ（ピアース（Ｐｉｅｒｃｅ））を添加し、そしてＲＴで１５分間反応させ、その後酵
素反応を２５μｌの２Ｎ Ｈ２ＳＯ４の添加により停止した。反応生成物は、４５０ｎｍ
および６５０ｎｍでの吸光度の差異を測定するモレキュラー デバイシーズ（Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）Ｖｍａｘを使用して定量した。
Ｅ．ＡＰＰ濃度の測定
２種の異なるＡＰＰアッセイを利用した。ＡＰＰ−α／ＦＬと呼称される第一のものは
、ＡＰＰ−アルファ（α）および完全長（ＦＬ）の形態のＡＰＰの双方を認識する。第二
のアッセイはＡＰＰ−αに特異的である。ＡＰＰ−α／ＦＬアッセイは、Ａβの最初の１
２アミノ酸を包含する分泌型ＡＰＰを認識する。レポーター抗体（２Ｈ３）は、ＡＰＰ^69
5のアミノ酸６１２−６１３の間に存在するα−クリップ部位（α−ｃｌｉｐ−ｓｉｔｅ
）に特異的でないため（Ｅｓｃｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４８：１１２２−１１２４（１
９９０））；このアッセイは完全長のＡＰＰ（ＡＰＰ−ＦＬ）もまた認識する。ＡＰＰ−
ＦＬの脳ホモジェネートを枯渇させるためにＡＰＰ−ＦＬの細胞質尾部に対する固定され
たＡＰＰ抗体を使用する予備実験は、ＡＰＰ−α／ＦＬ ＡＰＰのおよそ３０〜４０％が
ＦＬであることを示唆する（データは示されない）。ＡＰＰ−α／ＦＬおよびＡＰＰ−α
双方のアッセイの捕捉抗体は、（Ｇａｍｅｓら、上記）からＡＰＰ⁶⁹⁵の形態のアミノ酸
４４４ないし５９２に対し生じられたｍＡｂ ８Ｅ５である。ＡＰＰ−α／ＦＬアッセイ
のレポーターｍＡｂは、ＡＰＰ⁶⁹⁵のアミノ酸５９７−６０８に特異的なｍＡｂ ２Ｈ３
であり（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）、また、ＡＰＰ−αアッセイのレポーター
抗体は、ＡＰＰのアミノ酸６０５ないし６１１に対し生じられたｍＡｂ １６Ｈ９のビオ
チニル化誘導体である。ＡＰＰ−αＦＬアッセイの感受性の下限は約１１ｎｇ／ｍｌ（１
５０ｐＭ）であり（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら）、また、ＡＰＰ−α特異的アッセイの
ものは２２ｎｇ／ｍｌ（０．３ｎＭ）である。双方のＡＰＰアッセイについて、ｍＡｂ
８Ｅ５を、ｍＡｂ ２６６について上述されたとおり９６穴ＥＩＡプレートのウェル上に
被覆した。精製された組換えの分泌型ＡＰＰ−αを、ＡＰＰ−αアッセイおよびＡＰＰ−
α／ＦＬアッセイの参照標準として使用した（Ｅｓｃｈら、上記）。５Ｍグアニジン中の
脳ホモジェネートサンプルを、ＥＬＩＳＡ試料希釈剤（０．０１４Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ
７．４、０．６％ウシ血清アルブミン、０．０５％チメロサール、０．５Ｍ ＮａＣｌ、
０．１％ＮＰ４０）で１０倍希釈した。それらをその後、０．５Ｍグアニジンを含有する
試料希釈剤で４倍希釈した。その後、希釈されたホモジェネートを１６，０００×ｇでＲ
Ｔで１５秒間遠心分離した。ＡＰＰ標準およびサンプルを二重のアリコートでプレートに
添加し、そしてＲＴで１．５時間インキュベートした。ビオチニル化レポーター抗体２Ｈ
３もしくは１６Ｈ９をサンプルと共にＲＴで１時間インキュベートした。試料希釈剤で１
０００倍希釈されたストレプトアビジン−アルカリホスファターゼ（ベーリンガー マン
ハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ））を、ウェル中でＲＴで１時間イン
キュベートした。蛍光基質４−メチル−ウンベリフェリル−ホスフェートを３０分のＲＴ
インキュベーションのため添加し、そして、プレートを、３６５ｎｍの励起および４５０
ｎｍの発光でサイトフルオル（Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ）ｔｍ ２３５０蛍光計（ミリポア（
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ））上で読取った。
Ｆ．免疫組織化学
脳をＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド中４０Ｃで３日間固定し、そしてその後切片に
されるまで１％パラホルムアルデヒド、ＰＢＳ中４℃で１から７日間まで保存した。４０
ミクロン厚の冠状切片をビブラトーム（ｖｉｂｒａｔｏｍｅ）上でＲＴで切断し、そして
免疫組織化学的加工前に−２０℃で低温保護剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）（リン
酸緩衝液中３０％グリセロール、３０％エチレングリコール）中で保存した。各脳につい
て、それぞれ連続する２４０μｍの間隔により分離された、背側海馬の水準での６切片を
、以下の抗体、すなわち（１）ＰＢＳおよび１％ウマ血清中２μｇ／ｍｌの濃度に希釈さ
れたビオチニル化抗Ａβ（ｍＡｂ、３Ｄ６、ヒトＡβに特異的）；もしくは（２）ＰＢＳ
および１．０％ウマ血清中３μｇ／ｍｌの濃度に希釈されたヒトＡＰＰに特異的なビオチ
ニル化ｍＡｂ、８Ｅ５；もしくは（３）トリス緩衝生理的食塩水、ｐＨ７．４（ＴＢＳ）
中０．２５％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００および１％ウマ血清で５００倍希釈さ
れたグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ；シグマ ケミカル カンパニー（Ｓｉｇｍ
ａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．））に特異的なｍＡｂ；もしくは（４）ＴＢＳ中０．２５
％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００および１％ウサギ血清で１００倍希釈されたＣＤ
１１ｂ（ＭＡＣ−１抗原）に特異的なｍＡｂ（ケミコン インターナショナル（Ｃｈｅｍ
ｉｃｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ））；もしくは（５）ＴＢＳ中０．２５％トリト
ン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００および１％ウサギ血清で１００倍希釈されたＭＨＣ ＩＩ
抗原に特異的なｍＡｂ（ファーミンゲン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））；もしくは（６）Ｐ
ＢＳ中１％ウサギ血清で１００倍希釈されたＣＤ ４３に特異的なラットｍＡｂ（ファー
ミンゲン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））、もしくは（７）ＰＢＳ中１％ウサギ血清で１００
倍希釈されたＣＤ ４５ＲＡに特異的なラットｍＡｂ（ファーミンゲン（Ｐｈａｒｍｉｎ
ｇｅｎ））；もしくは（８）ＰＢＳ中１％ウサギ血清で１００倍希釈されたＣＤ ４５Ｒ
Ｂに特異的なラットモノクローナルＡβ（ファーミンゲン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））；
もしくは（９）ＰＢＳ中１％ウサギ血清で１００倍希釈されたＣＤ ４５に特異的なラッ
トモノクローナルＡβ（ファーミンゲン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））；もしくは（１０）
ＰＢＳ中１％ウサギ血清で１００倍希釈されたＣＤ３ｅに特異的なビオチニル化ポリクロ
ーナルハムスターＡβ（ファーミンゲン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））、もしくは（１１）
ＰＢＳ中１％ウサギ血清で２００倍希釈されたＣＤ３に特異的なラットｍＡｂ（セロテッ
ク（Ｓｅｒｏｔｅｃ））；もしくは（１２）１％正常ウマ血清を含有する一次抗体を欠く
ＰＢＳの溶液、の１種とともに一夜インキュベートした。

上の１、２および６〜１２に列挙された抗体溶液と反応される切片は、ＰＢＳ中１．０
％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００、０．４％過酸化水素でＲＴで２０分間前処理し
て、内在性の過酸化酵素を封鎖した。それらを次に一次抗体とともに４℃で一夜インキュ
ベートした。３Ｄ６もしくは８Ｅ５もしくはＣＤ３ｅ ｍＡｂと反応された切片はその後
、ＰＢＳ中７５倍希釈されたキット成分「Ａ」および「Ｂ」（ベクター エリート スタ
ンダード キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｅｌｉｔｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｋｉｔ）、ベクター
ラブス（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）、カリフォルニア州バーリンゲーム）とともに、ワ
サビペルオキシダーゼ−アビジン−ビオチン複合物とＲＴで１時間反応させた。ＣＤ ４
５ＲＡ、ＣＤ ４５ＲＢ、ＣＤ ４５、ＣＤ３に特異的な抗体、および一次抗体を欠くＰ
ＢＳ溶液と反応された切片は、それぞれ、ＰＢＳ中７５倍希釈されたビオチニル化抗ラッ
トＩｇＧ（ベクター（Ｖｅｃｔｏｒ））もしくはＰＢＳ中７５倍希釈されたビオチニル化
抗マウスＩｇＧ（ベクター（Ｖｅｃｔｏｒ））とともにＲＴで１時間インキュベートした
。切片をその後、ＰＢＳ中７５倍希釈されたキット成分「Ａ」および「Ｂ」（ベクター
エリート スタンダード キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｅｌｉｔｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｋｉ
ｔ）、ベクター ラブス（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）、カリフォルニア州バーリンゲーム
）とともに、ワサビペルオキシダーゼ−アビジン−ビオチン複合物とＲＴで１時間反応さ
せた。

切片を、０．０１％過酸化水素、０．０５％３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）
中でＲＴで発色させた。ＧＦＡＰ、ＭＡＣ−１およびＭＨＣ ＩＩ特異的抗体とのインキ
ュベーションに予定される切片は、ＲＴで０．６％過酸化水素で前処理して、内在性の過
酸化酵素を封鎖し、その後一次抗体とともに４℃で一夜インキュベートした。ＧＦＡＰ抗
体と反応された切片は、ＴＢＳ中２００倍希釈された、ウマで作成されたビオチニル化抗
マウスＩｇＧ（ベクター ラボラトリーズ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）
；ベクタステイン エリート ＡＢＣ キット（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ Ｅｌｉｔｅ Ａ
ＢＣ Ｋｉｔ））とともにＲＴで１時間インキュベートした。該切片を次に、ＴＢＳ中１
０００倍希釈されたアビジン−ビオチン−過酸化酵素複合物（ベクター ラボラトリーズ
（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）；ベクタステイン エリート ＡＢＣ キ
ット（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ Ｋｉｔ））と１時間反応させた。一
次抗体としてＭＡＣ−１もしくはＭＨＣ ＩＩ特異的モノクローナル抗体とともにインキ
ュベートされた切片はその後、ＴＢＳで２００倍希釈された、ウサギで作成されたビオチ
ニル化抗ラットＩｇＧとＲＴで１時間反応させ、次いでＴＢＳで１０００倍希釈されたア
ビジン−ビオチン−過酸化酵素複合物とともに１時間インキュベートした。ＧＦＡＰ、Ｍ
ＡＣ−１およびＭＨＣ ＩＩ特異的抗体とともにインキュベートされた切片をその後、そ
れぞれ、０．０５％ＤＡＢ、０．０１％過酸化水素、０．０４％塩化ニッケル、ＴＢＳで
のＲＴで４および１１分間の処理により可視化した。

免疫標識された切片をスライドガラス（ＶＷＲ、スーパーフロスト（Ｓｕｐｅｒｆｒｏ
ｓｔ）スライドガラス）上に載せ、一夜風乾し、プロパー（Ｐｒｏｐａｒ）（アナテック
（Ａｎａｔｅｃｈ））中に浸積し、そして固定媒体としてパーマウント（Ｐｅｒｍｏｕｎ
ｔ）（フィッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ））を使用してカバーガラスで覆った。

Ａβ斑を対染色するために、ＧＦＡＰ陽性切片のサブセットをスーパーフロスト（Ｓｕ
ｐｅｒｆｒｏｓｔ）スライドガラス上に載せ、そして免疫組織化学的加工後に７分間、水
性１％チオフラビンＳ（シグマ（Ｓｉｇｍａ））中でインキュベートした。その後、切片
を脱水しかつプロパー（Ｐｒｏｐａｒ）中で清浄にし、その後パーマウント（Ｐｅｒｍｏ
ｕｎｔ）で固定されたカバーガラスで覆った。
Ｇ．画像分析
ＣＣＤビデオカメラおよびソニー（Ｓｏｎｙ）トリニトロン（Ｔｒｉｎｉｔｒｏｎ）モ
ニターによりニコン（Ｎｉｋｏｎ）マイクロフォト（Ｍｉｃｒｏｐｈｏｔ）−ＦＸ顕微鏡
に連結されたビデオ測定１５０画像分析系（オンコール インク（Ｏｎｃｏｒ，Ｉｎｃ．
）、メリーランド州ゲイタースバーグ）を、免疫反応性のスライドガラスの定量に使用し
た。切片の画像をビデオバッファに記憶し、そして色および飽和に基づく閾値を決定して
、免疫標識された構造により占有される総画素面積を選択かつ計算した。各切片について
、海馬は人的に輪郭を描き、そして海馬により占有される総画素面積を計算した。アミロ
イド負荷のパーセントは：（ｍＡｂ ３Ｄ６と免疫反応性のＡβ沈着物を含有する海馬領
域の画分）×１００として測定した。同様に、神経炎性負荷のパーセントは：（モノクロ
ーナル抗体８Ｅ５と反応性のジストロフィン性神経突起を含有する海馬領域の画分）×１
００として測定した。Ｓｉｍｐｌｅ ３２ソフトウェアアプリケーションプログラムを作
動させるＣ−イメージングシステム（Ｃ−Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ）（コンピック
ス インク（Ｃｏｍｐｉｘ，Ｉｎｃ．）、フィラデルフィア州クランベリータウンシップ
）を、オプトロニックス（Ｏｐｔｒｏｎｉｃｓ）のカメラによりニコン（Ｎｉｋｏｎ）マ
イクロフォト（Ｍｉｃｒｏｐｈｏｔ）−ＦＸ顕微鏡に連結し、そして、ＧＦＡＰ陽性星状
細胞、ならびにＭＡＣ−１およびＭＨＣ ＩＩ陽性小膠細胞により占有される後膨大部皮
質のパーセンテージを定量するのに使用した。免疫反応された切片の像をビデオバッファ
に記憶し、そして単色に基づく閾値を決定して、免疫標識された細胞により占有される総
画素面積を選択かつ計算した。各切片について、後膨大部皮質（ＲＳＣ）を人的に輪郭を
描き、そしてＲＳＣにより占有される総画素面積を計算した。星状細胞増加症のパーセン
トは：（ＧＦＡＰ反応性星状細胞により占有されるＲＳＣの画分）×１００と定義した。
同様に、小膠細胞症のパーセントは：（ＭＡＣ−１もしくはＭＨＣ ＩＩ反応性小膠細胞
により占有されるＲＳＣの画分）×１００と定義した。全部の画像分析について、それぞ
れ連続する２４０μｍの間隔により分離された背側海馬の水準の６切片を、各動物につい
て定量した。全部の場合で、動物の治療状態は観察者に未知であった。

前述の発明は理解の明確性の目的上、詳細に記述したとは言え、ある種の改変を、付属
として付けられる請求の範囲の範囲内で実施してよいことが明らかであろう。本明細書で
引用される全部の刊行物および特許文書、ならびに図面および配列表に出現する本文は、
これにより、それぞれがそのように個々に示された場合と同一の程度まで、全部の目的上
そっくりそのまま引用することにより組み込まれる。

前述から、本発明が多数の用途を提供することが明らかであろう。例えば、本発明は、
アミロイド原性疾患の治療、予防もしくは診断における、またはそれにおける使用のため
の医薬もしくは診断組成物の製造における、上述されたＡβに対する抗体のいずれかの使
用を提供する。

Claims (132)

1. ヒト化免疫グロブリンＬ鎖であって、以下：
   （ｉ）配列番号２として示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの少なく
   とも１個の可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに
   （ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＬ鎖配列からの可変枠組み領域であって、該
   Ｌ鎖が、以下：
   （ａ）カノニカル枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換；および
   （ｂ）鎖間充填枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換；および必要に応じて
   （ｃ）バーニア領域枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換または希少枠組み残基
   のうちの少なくとも１個の置換
   を含み、そして該置換がマウス３Ｄ６ Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基
   によるものである、可変枠組み領域
   を含む、ヒト化免疫グロブリンＬ鎖。
2. バーニア領域枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換または希少枠組み残基のうちの少
   なくとも１個の置換を含む、請求項１に記載のＬ鎖。
3. バーニア領域枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換を含む、請求項１または請求項２
   に記載のＬ鎖。
4. 希少枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換を含む、請求項１または請求項２に記載の
   Ｌ鎖。
5. カノニカル枠組み残基がＬ２、Ｌ４８、Ｌ６４およびＬ７１（Ｋａｂａｔの番号付け協定
   ）からなる群より選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＬ鎖。
6. 鎖間充填枠組み残基がＬ３６、Ｌ３８、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ８７およびＬ９８（Ｋａｂａ
   ｔの番号付け協定）からなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＬ
   鎖。
7. バーニア領域枠組み残基がＬ４、Ｌ３５、Ｌ４７、Ｌ４９、Ｌ６６、Ｌ６８およびＬ６９
   （Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、請求項１〜６のいずれか１項
   に記載のＬ鎖。
8. 希少枠組み残基がＬ１、Ｌ１５、Ｌ８３およびＬ８５（Ｋａｂａｔの番号付け協定）から
   なる群より選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＬ鎖。
9. ３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１〜３）を
   含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＬ鎖。
10. 請求項１〜９のいずれか１項に記載のＬ鎖であって、以下：
    （ａ）Ｌ２カノニカル枠組み残基（Ｋａｂａｔの番号付け協定）の置換；
    （ｂ）Ｌ３６およびＬ４７の鎖間充填枠組み残基（Ｋａｂａｔの番号付け協定）のうち
    の１つの置換；ならびに
    （ｃ）Ｌ１希少枠組み残基（Ｋａｂａｔの番号付け協定）の置換
    を含み、該置換がマウス３Ｄ６ Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基による置
    換であり、そして該Ｌ鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、Ｌ鎖。
11. 請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＬ鎖であって、以下：
    （ａ）Ｌ２カノニカル枠組み残基（Ｋａｂａｔの番号付け協定）の置換；ならびに
    （ｂ）Ｌ３６およびＬ４７の鎖間充填枠組み残基（Ｋａｂａｔの番号付け協定）のうち
    の１つの置換；
    を含み、該置換がマウス３Ｄ６ Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基による置
    換であり、そして該Ｌ鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、Ｌ鎖。
12. 前記ヒト免疫グロブリンアクセプターＬ鎖配列がサブタイプκＩＩ（Ｋａｂａｔ協定）の
    ものである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＬ鎖。
13. 前記ヒトアクセプター免疫グロブリンＬ鎖配列が、Ｋａｂａｔ番号０１９２３０、Ｋａｂ
    ａｔ番号００５１３１、Ｋａｂａｔ番号００５０５８、Ｋａｂａｔ番号００５０５７、Ｋ
    ａｂａｔ番号００５０５９、Ｋａｂａｔ番号Ｕ２１０４０およびＫａｂａｔ番号Ｕ４１６
    ４５からなる群より選択される、請求項１２に記載のＬ鎖。
14. 前記Ｌ鎖の最低１個の希少ヒト枠組み残基が、その位置のヒト可変Ｌ鎖配列に普遍的であ
    るアミノ酸残基で置換される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のＬ鎖。
15. 前記Ｌ鎖の最低１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖細胞系可変Ｌ鎖配列からの対応するア
    ミノ酸残基で置換される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のＬ鎖。
16. 前記生殖細胞系可変Ｌ鎖配列が、Ａ１、Ａ１７、Ａ１８、Ａ２およびＡ１９よりなる群か
    ら選択される、請求項１５に記載のＬ鎖。
17. 請求項１４〜１６のいずれか１項に記載のＬ鎖であって、ここで、前記Ｌ鎖の希少枠組み
    残基が、ヒトＬ鎖可変領域サブグループ中のＬ鎖可変領域配列のうち１０％未満の該位置
    における存在に基づき選択され、かつ前記普遍的な残基が、該ヒトＬ鎖可変領域サブグル
    ープ中の配列のうち５０％を超える該位置での存在に基づき選択される、Ｌ鎖。
18. ヒト化免疫グロブリンＨ鎖であって、以下：
    （ｉ）配列番号４として示される３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列からの少なく
    とも１個の可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに
    （ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖配列からの可変枠組み領域であって、該
    Ｈ鎖が、以下：
    （ａ）カノニカル枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換、
    （ｂ）鎖間充填枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換、および
    （ｃ）バーニア領域枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換または希少枠組み残基
    のうちの少なくとも１個の置換
    を含み、そして該置換がマウス３Ｄ６ Ｈ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基
    である、可変枠組み領域、
    を含む、Ｈ鎖。
19. バーニア領域枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換を含む、請求項１８に記載のＨ鎖
    。
20. 希少枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換を含む、請求項１８に記載のＨ鎖。
21. 前記カノニカル枠組み残基がＨ２４、Ｈ２６、Ｈ２７、Ｈ２９、Ｈ７１およびＨ９４（Ｋ
    ａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、請求項１８に記載のＨ鎖。
22. 前記鎖間充填枠組み残基がＨ３７、Ｈ３９、Ｈ４５、Ｈ４７、Ｈ９１、Ｈ９３およびＨ１
    ０３（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、請求項１８または請求項
    １９に記載のＨ鎖。
23. 前記バーニア領域枠組み残基がＨ２、Ｈ２８、Ｈ３０、Ｈ４８、Ｈ４９、Ｈ６７、Ｈ６９
    およびＨ８０（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、請求項１８〜２
    ０のいずれか１項に記載のＨ鎖。
24. 前記希少枠組み残基がＨ４０およびＨ４２（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より
    選択される、請求項１８〜２３のいずれか１項に記載のＬ鎖。
25. ３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列からの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１〜３）を
    含む、請求項１８〜２４のいずれか１項に記載のＨ鎖。
26. 請求項１８〜２５のいずれか１項に記載のＨ鎖であって、以下：
    （ａ）Ｈ９４カノニカル枠組み残基（Ｋａｂａｔの番号付け協定）の置換；
    （ｂ）Ｈ９３鎖間充填枠組み残基（Ｋａｂａｔの番号付け協定）の置換；ならびに
    （ｃ）Ｈ４９バーニア領域枠組み残基（Ｋａｂａｔの番号付け協定）の置換
    を含み、該置換がマウス３Ｄ６ Ｈ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基であり、
    そして該Ｈ鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、Ｈ鎖。
27. 前記ヒト免疫グロブリンアクセプターＨ鎖配列がサブタイプＩＩＩ（Ｋａｂａｔ協定）の
    ものである、請求項１８〜２６のいずれか１項に記載のＨ鎖。
28. 前記ヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖配列が、Ｋａｂａｔ番号０４５９１９、Ｋａｂ
    ａｔ番号０００４５９、Ｋａｂａｔ番号０００５５３、Ｋａｂａｔ番号０００３８６およ
    びＫａｂａｔ番号Ｍ２３６９１からなる群より選択される、請求項２７記載のＨ鎖。
29. 前記Ｈ鎖の少なくとも１個の希少ヒト枠組み残基が、その位置のヒト可変Ｈ鎖配列に普遍
    的であるアミノ酸残基で置換される、請求項１８〜２８のいずれか１項に記載のＨ鎖。
30. 前記Ｈ鎖の少なくとも１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖細胞系可変Ｈ鎖配列からの対応
    するアミノ酸残基で置換される、請求項１８〜２９のいずれか１項に記載のＨ鎖。
31. 前記生殖細胞系可変Ｈ鎖配列が、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−７、ＶＨ３−２
    １およびＶＨ３−１１からなる群より選択される、請求項３０に記載のＨ鎖。
32. 請求項２９〜３１のいずれか１項に記載のＨ鎖であって、ここで、前記Ｈ鎖の希少枠組み
    残基が、ヒトＨ鎖可変領域サブグループ中のＨ鎖可変領域配列のうち１０％未満の該位置
    における存在に基づき選択され、かつ前記普遍的な残基が、該ヒトＨ鎖可変領域サブグル
    ープ中の配列のうち５０％を超える該位置での存在に基づき選択される、Ｈ鎖。
33. 請求項１〜１７のいずれか１項に記載のＬ鎖、および請求項１８〜３２のいずれか１項に
    記載のＨ鎖を含む、βアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する、ヒト化免疫グロ
    ブリンまたはその免疫グロブリンの抗原結合エレメント。
34. ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントであって、以下：
    （ｉ）配列番号２として示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの少なくと
    も１個の可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびヒトアクセプター免疫グロブリンＬ
    鎖配列からの可変枠組み領域を含む、Ｌ鎖、ならびに
    （ｉｉ）配列番号４として示される３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列からの少なく
    とも１個の可変領域ＣＤＲ、およびヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖からの可変枠組
    み領域を含む、Ｈ鎖、
    を含み、但し、該ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントは、以下：
    （ａ）Ｌ２、Ｌ４８、Ｌ６４、Ｌ７１、Ｈ２４、Ｈ２６、Ｈ２７、Ｈ２９、Ｈ７１およ
    びＨ９４（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択されるカノニカル枠組み残基
    のうちの少なくとも１個の置換；
    （ｂ）Ｌ３６、Ｌ３８、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ８７、Ｌ９８、Ｈ３７、Ｈ３９、Ｈ４５、
    Ｈ４７、Ｈ９１、Ｈ９３およびＨ１０３（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選
    択される鎖間充填残基のうちの少なくとも１個の置換；
    （ｃ）Ｌ４、Ｌ３５、Ｌ４７、Ｌ４９、Ｌ６６、Ｌ６８、Ｌ６９、Ｈ２、Ｈ２８、Ｈ３
    ０、Ｈ４８、Ｈ４９、Ｈ６７、Ｈ６９およびＨ８０（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からな
    る群より選択されるバーニア領域枠組み残基のうちの少なくとも１つの置換、またはＬ１
    、Ｌ１５、Ｌ８３、Ｌ８５、Ｈ４０およびＨ４２（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる
    群より選択される希少枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換、
    を含み、ここで該置換が、マウス３Ｄ６ Ｌ鎖可変領域配列またはマウス３Ｄ６ Ｈ鎖可
    変領域からの対応するアミノ酸残基によるものである、ヒト化免疫グロブリン。
35. Ｌ４、Ｌ３５、Ｌ４７、Ｌ４９、Ｌ６６、Ｌ６８、Ｌ６９、Ｈ２、Ｈ２８、Ｈ３０、Ｈ４
    ８、Ｈ４９、Ｈ６７、Ｈ６９およびＨ８０からなる群より選択されるバーニア領域枠組み
    残基のうちの少なくとも１つの置換を含む、請求項３４に記載のヒト化免疫グロブリンま
    たは抗原結合フラグメント。
36. Ｌ１、Ｌ１５、Ｌ８３、Ｌ８５、Ｈ４０およびＨ４２からなる群より選択される希少枠組
    み残基のうちの少なくとも１個の置換を含む、請求項３４に記載のヒト化免疫グロブリン
    または抗原結合フラグメント
37. 前記Ｌ鎖が３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ
    １〜３）を含む、請求項３４に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント
    。
38. 前記Ｈ鎖が３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列からの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ
    １〜３）を含む、請求項２８または請求項３５に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原
    結合フラグメント。
39. 前記Ｌ鎖が３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ
    １〜３）を含み、かつ前記Ｈ鎖が３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域からの３つの相補性
    決定領域（ＣＤＲ１〜３）を含む、請求項３６〜３８のうちのいずれか１項に記載のヒト
    化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
40. 請求項３６〜３９のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメ
    ントであって、以下：
    （ｉ）Ｌ４、Ｌ３５、Ｌ４７、Ｌ４９、Ｌ６６、Ｌ６８、Ｌ６９、Ｈ２、Ｈ２８、Ｈ３
    ０、Ｈ４８、Ｈ４９、Ｈ６７、Ｈ６９およびＨ８０（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からな
    る群より選択されるバーニア領域枠組み残基のうちの少なくとも１つの置換、および
    （ｉｉ）Ｌ１、Ｌ１５、Ｌ８３、Ｌ８５、Ｈ４０およびＨ４２（Ｋａｂａｔの番号付け
    協定）からなる群より選択される希少枠組み残基のうちの少なくとも１個の置換
    を含む、ヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント
41. ヒトアクセプター免疫グロブリンＬ鎖配列がサブタイプκＩＩ（Ｋａｂａｔ協定）のもの
    である、請求項３６〜４０のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合
    フラグメント。
42. ヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖配列がサブタイプＩＩＩ（Ｋａｂａｔ協定）のもの
    である、請求項３６〜４１のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合
    フラグメント。
43. 前記ヒトアクセプター免疫グロブリンＬ鎖配列が、Ｋａｂａｔ番号０１９２３０、Ｋａｂ
    ａｔ番号００５１３１、Ｋａｂａｔ番号００５０５８、Ｋａｂａｔ番号００５０５７、Ｋ
    ａｂａｔ番号００５０５９、Ｋａｂａｔ番号Ｕ２１０４０およびＫａｂａｔ番号Ｕ４１６
    ４５からなる群より選択される、請求項４１記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合
    フラグメント。
44. 前記Ｌ鎖の少なくとも１つの希少枠組み残基が、ヒト可変Ｌ鎖配列からのその位置に普遍
    的なアミノ酸残基で置換される、請求項３６〜４３のいずれか１項に記載のヒト化免疫グ
    ロブリンまたは抗原結合フラグメント。
45. 前記Ｌ鎖の少なくとも１つの希少ヒト枠組み残基が、生殖細胞系可変Ｌ鎖配列からの対応
    するアミノ酸残基で置換される、請求項３６〜４４のいずれか１項に記載のヒト化免疫グ
    ロブリンまたは抗原結合フラグメント
46. 前記生殖細胞系可変Ｌ鎖配列が、Ａ１、Ａ１７、Ａ１８、Ａ２およびＡ１９からなる群よ
    り選択される、請求項４５に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
47. 請求項４４〜４６のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメ
    ントであって、ここで、前記Ｌ鎖の希少枠組み残基が、ヒトＬ鎖可変領域サブグループ中
    のＬ鎖可変領域配列のうち１０％未満の該位置における存在に基づき選択され、かつ前記
    普遍的な残基が、該Ｌ鎖可変領域サブグループ中の配列のうち５０％を超える該位置での
    存在に基づき選択される、ヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
48. 前記ヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖配列が、Ｋａｂａｔ番号０４５９１９、Ｋａｂ
    ａｔ番号０００４５９、Ｋａｂａｔ番号０００５５３、Ｋａｂａｔ番号０００３８６およ
    びＫａｂａｔ番号Ｍ２３６９１からなる群より選択される、請求項３６〜４７のいずれか
    １項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
49. 前記Ｈ鎖の少なくとも１個の希少枠組み残基が、その位置のヒト可変Ｈ鎖配列に普遍的で
    あるアミノ酸残基で置換される、請求項３６〜４８のいずれか１項に記載のヒト化免疫グ
    ロブリンまたは抗原結合フラグメント。
50. 前記Ｈ鎖の少なくとも１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖細胞系可変Ｈ鎖配列からの対応
    するアミノ酸残基で置換される、請求項３６〜４９のいずれか１項に記載のヒト化免疫グ
    ロブリンまたは抗原結合フラグメント。
51. 前記生殖細胞系可変Ｈ鎖配列が、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−７、ＶＨ３−２
    １およびＶＨ３−１１からなる群より選択される、請求項４２に記載のヒト化免疫グロブ
    リンまたは抗原結合フラグメント。
52. 請求項４９〜５１のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメ
    ントであって、ここで、前記Ｈ鎖の希少枠組み残基が、ヒトＨ鎖可変領域サブグループ中
    のＨ鎖可変領域配列のうち１０％未満の該位置における存在に基づき選択され、かつ前記
    普遍的な残基が、該Ｈ鎖可変領域サブグループ中の配列のうち５０％を超える該位置での
    存在に基づき選択される、ヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
53. 少なくとも１０⁸Ｍ^-1の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する
    、請求項３３〜５２のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンもしくは抗原結合フラ
    グメント。
54. 少なくとも１０⁹Ｍ^-1の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する
    、請求項３３〜５２記載のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンもしくは抗原結合
    フラグメント。
55. 可溶性βアミロイドペプチド（Ａβ）および凝集型Ａβ双方に結合する、請求項３３〜５
    ４のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
56. 前記可溶性βアミロイドペプチド（Ａβ）が分散型Ａβである、請求項５５に記載のヒト
    化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
57. βアミロイドペプチド（Ａβ）の食作用を媒介する、請求項３３〜５６のいずれか１項に
    記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
58. 被験体の血液脳関門を横断する、請求項３３〜５７のいずれか１項に記載のヒト化免疫グ
    ロブリンまたは抗原結合フラグメント。
59. 被験体のβアミロイドペプチド（Ａβ）負荷および神経炎性ジストロフィー双方を低下さ
    せる、請求項３３〜５８のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フ
    ラグメント。
60. Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂｃ、ＦｖおよびＦａｂ’２フラグメントからなる群より選択さ
    れる、請求項３３〜５９のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フ
    ラグメント。
61. 請求項３３〜６０のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメ
    ントおよび製薬学的担体を含む、製薬学的組成物。
62. 請求項３３〜６１のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメ
    ントを、使用のための指示書と一緒に備える、キット。
63. 医薬としての使用のための請求項３４〜６１のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリ
    ンまたは抗原結合フラグメント。
64. 請求項３４〜６１のいずれか１つ記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメン
    トの有効投薬量の投与による、患者におけるアミロイド原性疾患の予防または処置におけ
    る使用のための、ヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
65. 請求項３４〜６１のいずれか１つ記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメン
    トの有効投薬量の投与による、患者におけるアルツハイマー病の予防または処置における
    使用のための、ヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
66. 前記有効投薬量が１ｍｇ／ｋｇ体重である、請求項６４または請求項６５に記載のヒト化
    免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
67. 前記有効投薬量が１０ｍｇ／ｋｇ体重である、請求項６４または請求項６５に記載のヒト
    化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
68. 患者におけるアミロイド原性疾患の予防または治療のための医薬の製造における、請求項
    ３４〜６１のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメントの
    使用。
69. 患者におけるアルツハイマー病の予防または治療のための医薬の製造における、請求項３
    ４〜６１のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメントの使
    用。
70. 請求項１〜１７のいずれか１項に記載のＬ鎖をコードする、単離された核酸分子。
71. 請求項１８〜３２のいずれか１項に記載のＨ鎖をコードする、単離された核酸分子。
72. 請求項７０または請求項７１の核酸分子を含むベクター。
73. 請求項７０または請求項７１の核酸分子を含む宿主細胞。
74. 請求項７２に記載のベクターを含む、宿主細胞。
75. 請求項７３または請求項７４に記載の宿主細胞を前記抗体またはそのフラグメントが産生
    されるような条件下で培養する工程、および該宿主細胞または培養物から該抗体を単離す
    る工程を包含する、抗体またはそのフラグメントを作製する方法。
76. ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントであって、少なくとも１０^７Ｍ^{−
    １}の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合し、ここで該ヒト化抗体
    は、以下:
    （ａ）配列番号２に示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの、相補性決
    定領域（ＣＤＲ）、ならびにＬ１、Ｌ２、Ｌ４、Ｌ１５、Ｌ３５、Ｌ３６、Ｌ３８、Ｌ４
    ４、Ｌ４６、Ｌ４７、Ｌ４８、Ｌ４９、Ｌ６４、Ｌ６６、Ｌ６８、Ｌ６９、Ｌ７１、Ｌ８
    ３、Ｌ８５、Ｌ８７およびＬ９８（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択され
    る少なくとも１個の可変Ｌ鎖枠組み残基を含む可変Ｌ鎖領域であって、ここで該可変Ｌ鎖
    領域の残分がヒトアクセプター免疫グロブリンＬ鎖由来である可変Ｌ鎖領域、を含むＬ鎖
    、ならびに
    （ｂ）配列番号８または配列番号１２の残基１〜１１９に示される配列を有する可変Ｈ
    鎖領域を含む、Ｈ鎖
    を含む、ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント。
77. ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントであって、少なくとも１０^７Ｍ^{−
    １}の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合し、ここで該ヒト化抗体
    は、以下:
    （ａ）配列番号４に示される３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列からの、相補性決
    定領域（ＣＤＲ）、ならびにＨ２、Ｈ２４、Ｈ２６、Ｈ２７、Ｈ２８、Ｈ２９、Ｈ３０、
    Ｈ３７、Ｈ３９、Ｈ４０、Ｈ４２、Ｈ４５、Ｈ４７、Ｈ４８、Ｈ４９、Ｈ６７、Ｈ６９、
    Ｈ７１、Ｈ８０、Ｈ９１、Ｈ９３、Ｈ９４およびＨ１０３（Ｋａｂａｔの番号付け協定）
    からなる群より選択される少なくとも１個の可変Ｈ鎖枠組み残基を含む可変Ｈ鎖領域であ
    って、ここで該可変Ｈ鎖領域の残分がヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖由来である可
    変Ｈ鎖領域、を含むＨ鎖、ならびに
    （ｂ）配列番号５または配列番号１１の残基１〜１１２に示される配列を有する可変Ｌ
    鎖領域を含む、Ｌ鎖
    を含む、ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント。
78. 少なくとも３個の可変Ｌ鎖枠組み残基が、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ４、Ｌ１５、Ｌ３５、Ｌ３６、
    Ｌ３８、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ４７、Ｌ４８、Ｌ４９、Ｌ６４、Ｌ６６、Ｌ６８、Ｌ６９、
    Ｌ７１、Ｌ８３、Ｌ８５、Ｌ８７およびＬ９８（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群
    より選択される、請求項７６に記載のヒト化免疫グロブリン。
79. 少なくとも３個の可変Ｈ鎖枠組み残基が、Ｈ２、Ｈ２４、Ｈ２６、Ｈ２７、Ｈ２８、Ｈ２
    ９、Ｈ３０、Ｈ３７、Ｈ３９、Ｈ４０、Ｈ４２、Ｈ４５、Ｈ４７、Ｈ４８、Ｈ４９、Ｈ６
    ７、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ８０、Ｈ９１、Ｈ９３、Ｈ９４およびＨ１０３（Ｋａｂａｔの番
    号付け協定）からなる群より選択される、請求項７７に記載のヒト化免疫グロブリン。
80. ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントであって、少なくとも１０^７Ｍ^{−
    １}の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合し、ここで該ヒト化抗体
    は、以下：
    （ｉ）以下を含む可変Ｌ鎖領域を含むＬ鎖：
    （ａ）配列番号２に示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの相補性決
    定領域（ＣＤＲ）；
    （ｂ）配列番号２由来のＬ２、Ｌ４８、Ｌ６４およびＬ７１（Ｋａｂａｔの番号付け
    協定）からなる群より選択される、少なくとも１個の可変Ｌ鎖カノニカル枠組み残基；な
    らびに
    （ｃ）配列番号２由来のＬ３６、Ｌ３８、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ８７およびＬ９８（Ｋ
    ａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、少なくとも１個の可変Ｌ鎖鎖間充
    填枠組み残基；ならびに、必要に応じて
    （ｄ）配列番号２由来のＬ４、Ｌ３５、Ｌ４７、Ｌ４９、Ｌ６６、Ｌ６８およびＬ６
    ９（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、少なくとも１つの可変Ｌ鎖
    バーニア領域枠組み残基、または配列番号２由来のＬ１、Ｌ１５、Ｌ８３およびＬ８５（
    Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、少なくとも１つの可変Ｌ鎖希少
    枠組み残基；
    ここで、該可変Ｌ鎖領域の残部はヒトアクセプター免疫グロブリンＬ鎖由来である、
    Ｌ鎖；ならびに
    （ｉｉ）配列番号８または配列番号１２の残基１〜１１９に示される配列を有する可変
    Ｈ鎖領域を含む、Ｈ鎖
    を含む、ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント。
81. ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントであって、少なくとも１０^７Ｍ^{−
    １}の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合し、ここで該ヒト化抗体
    は、以下：
    （ｉ）以下を含む可変Ｈ鎖領域を含むＨ鎖：
    （ａ）配列番号４に示される３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列からの相補性決
    定領域（ＣＤＲ）；
    （ｂ）配列番号４由来のＨ２４、Ｈ２６、Ｈ２７、Ｈ２９、Ｈ７１およびＨ９４（Ｋ
    ａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、少なくとも１個の可変Ｈ鎖カノニ
    カル枠組み残基；
    （ｃ）配列番号４由来のＨ３７、Ｈ３９、Ｈ４５、Ｈ４７、Ｈ９１、Ｈ９３およびＨ
    １０３（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、少なくとも１個の可変
    Ｈ鎖鎖間充填枠組み残基；ならびに
    （ｄ）配列番号４由来のＨ２、Ｈ２８、Ｈ３０、Ｈ４８、Ｈ４９、Ｈ６７、Ｈ６９お
    よびＨ８０（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、少なくとも１つの
    可変Ｈ鎖バーニア領域枠組み残基、または配列番号４由来のＨ４０およびＨ４２（Ｋａｂ
    ａｔの番号付け協定）からなる群より選択される、少なくとも１つの可変Ｈ鎖希少枠組み
    残基；
    ここで、該可変Ｈ鎖領域の残部はヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖由来である、
    Ｈ鎖；ならびに
    （ｉｉ）配列番号５または配列番号１１の残基１〜１１２に示される配列を有する可変
    Ｌ鎖領域を含む、Ｌ鎖
    を含む、ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント。
82. 前記Ｌ鎖が、Ｌ４、Ｌ３５、Ｌ４７、Ｌ４９、Ｌ６６、Ｌ６８およびＬ６９（Ｋａｂａｔ
    の番号付け協定）からなる群より選択されるバーニア領域枠組み残基の少なくとも１つの
    置換を含む、請求項８０に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
83. 前記Ｌ鎖が、Ｌ１、Ｌ１５、Ｌ８３およびＬ８５（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる
    群より選択される希少枠組み残基の少なくとも１つの置換を含む、請求項８０に記載のヒ
    ト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
84. 前記Ｈ鎖が、Ｈ２、Ｈ２８、Ｈ３０、Ｈ４８、Ｈ４９、Ｈ６７、Ｈ６９およびＨ１８０（
    Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択されるバーニア領域枠組み残基の少なく
    とも１つの置換を含む、請求項８１に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグ
    メント。
85. 前記Ｈ鎖が、Ｈ４０およびＨ４２（Ｋａｂａｔの番号付け協定）からなる群より選択され
    る希少枠組み残基の少なくとも１つの置換を含む、請求項８１に記載されるヒト化免疫グ
    ロブリンまたは抗原結合フラグメント。
86. ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントであって、少なくとも１０^７Ｍ^{−
    １}の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合し、ここで該ヒト化抗体
    は、以下:
    （ａ）配列番号２に示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列由来の、相補性決
    定領域（ＣＤＲ）、ならびにＬ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４６（Ｋａｂａｔの番号付け協
    定）からなる群より選択される少なくとも１個の可変Ｌ鎖枠組み残基を含む可変Ｌ鎖領域
    を含み、ここで該可変枠組み領域の残分がヒトアクセプター免疫グロブリンＬ鎖由来であ
    る、Ｌ鎖、ならびに
    （ｂ）配列番号８または配列番号１２の残基１〜１１９に示される配列を有する可変Ｈ
    鎖領域を含む、Ｈ鎖
    を含む、ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント。
87. ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントであって、少なくとも１０^７Ｍ^{−
    １}の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合し、ここで該ヒト化抗体
    は、以下:
    （ａ）配列番号４に示される３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列由来の、相補性決
    定領域（ＣＤＲ）、ならびにＨ４９、Ｈ９３およびＨ９４（Ｋａｂａｔの番号付け協定）
    からなる群より選択される少なくとも１個の可変Ｈ鎖枠組み残基を含む可変Ｈ鎖領域を含
    み、ここで該可変枠組み領域の残分がヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖由来である、
    Ｈ鎖、ならびに
    （ｂ）配列番号５または配列番号１１の残基１〜１１２に示される配列を有する可変Ｌ
    鎖領域を含む、Ｌ鎖
    を含む、ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント。
88. ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントであって、少なくとも１０^７Ｍ^{−
    １}の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合し、ここで該ヒト化抗体
    は、以下:
    （ａ）配列番号２に示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列由来の、相補性決
    定領域（ＣＤＲ）、ならびに可変枠組み残基Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４６（Ｋａｂａｔの番
    号付け協定）を含む可変Ｌ鎖領域を含み、ここで該可変Ｌ鎖領域の残分がヒトアクセプタ
    ー免疫グロブリンＬ鎖由来である、Ｌ鎖、ならびに
    （ｂ）配列番号８または配列番号１２の残基１〜１１９に示される配列を有する可変Ｈ
    鎖領域を含む、Ｈ鎖
    を含む、ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント。
89. ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントであって、少なくとも１０^７Ｍ^{−
    １}の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合し、ここで該ヒト化抗体
    は、以下:
    （ａ）配列番号４に示される３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列由来の、相補性決
    定領域（ＣＤＲ）、ならびに可変枠組み残基Ｈ４９、Ｈ９３およびＨ９４（Ｋａｂａｔの
    番号付け協定）を含む可変Ｈ鎖領域を含み、ここで該可変Ｈ鎖領域の残部がヒトアクセプ
    ター免疫グロブリンＨ鎖由来である、Ｈ鎖、ならびに
    （ｂ）配列番号５または配列番号１１の残基１〜１１２に示される配列を有する可変Ｌ
    鎖領域を含む、Ｌ鎖
    を含む、ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント。
90. ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントであって、少なくとも１０^７Ｍ^{−
    １}の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合し、ここで該ヒト化抗体
    は、以下:
    （ａ）配列番号２に示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列由来の、相補性決
    定領域（ＣＤＲ）、ならびに可変枠組み残基Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４６（Ｋａｂａ
    ｔの番号付け協定）を含む可変Ｌ鎖領域を含み、ここで該可変枠組み領域の残分がヒトア
    クセプター免疫グロブリンＬ鎖由来である、Ｌ鎖、ならびに
    （ｂ）配列番号８または配列番号１２の残基１〜１１９に示される配列を有する可変Ｈ
    鎖領域を含む、Ｈ鎖
    を含む、ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント。
91. 前記ヒトアクセプターＬ鎖がサブタイプκＩＩ（Ｋａｂａｔ協定）のものである、請求項
    ７６、７８、８０、８２、８３、８６、８８および９０のいずれか１項に記載の免疫グロ
    ブリン。
92. 前記ヒトアクセプターＨ鎖がサブタイプＩＩＩ（Ｋａｂａｔ協定）のものである、請求項
    ７７、７９、８１、８４、８５、８７および８９のいずれか１項に記載の免疫グロブリン
    。
93. 前記ヒトアクセプターＬ鎖が、Ｋａｂａｔ番号０１９２３０、Ｋａｂａｔ番号００５１３
    １、Ｋａｂａｔ番号００５０５８、Ｋａｂａｔ番号００５０５７、Ｋａｂａｔ番号００５
    ０５９、Ｋａｂａｔ番号Ｕ２１０４０およびＫａｂａｔ番号Ｕ４１６４５からなる群より
    選択される、請求項８９記載の免疫グロブリン。
94. 前記ヒトアクセプターＬ鎖がＫａｂａｔ０１９２３０である、請求項８９に記載の免疫グ
    ロブリン。
95. 前記ヒトアクセプターＨ鎖が、Ｋａｂａｔ番号０４５９１９、Ｋａｂａｔ番号０００４５
    ９、Ｋａｂａｔ番号０００５５３、Ｋａｂａｔ番号０００３８６およびＫａｂａｔ番号Ｍ
    ２３６９１からなる群より選択される、請求項９０記載の免疫グロブリン。
96. 前記ヒトアクセプターＨ鎖がＫａｂａｔ番号０４５９１９である、請求項９０に記載の免
    疫グロブリン。
97. 少なくとも１個の希少ヒトＬ鎖枠組み残基が、該残基の位置においてヒト可変Ｌ鎖配列に
    普遍的なアミノ酸残基で置換される、請求項７６、７８、８２、８３、８６、８８、９０
    、９１、９３および９４のいずれか１項に記載の免疫グロブリン。
98. 少なくとも１個の希少ヒトＬ鎖枠組み残基が、生殖細胞系可変Ｌ鎖配列由来の対応するア
    ミノ酸残基で置換される、請求項７６、７８、８２、８３、８６、８８、９０、９１、９
    ３および９４のいずれか１項に記載の免疫グロブリン。
99. 前記生殖細胞系可変Ｌ鎖配列が、Ａ１、Ａ１７、Ａ１８、Ａ２およびＡ１９からなる群よ
    り選択される、請求項９８に記載の免疫グロブリン。
100. 少なくとも１個の希少ヒトＨ鎖枠組み残基が、該残基の位置においてヒト可変Ｈ鎖配列に
     普遍的であるアミノ酸残基で置換される、請求項７７、７９、８１、８４、８５、８７、
     ８９、９２、９５および９６のいずれか１項に記載の免疫グロブリン。
101. 少なくとも１個の希少ヒトＨ鎖枠組み残基が、生殖細胞系可変Ｈ鎖配列由来の対応するア
     ミノ酸残基で置換される、請求項７７、７９、８１、８４、８５、８７、８９、９２、９
     ５および９６のいずれか１項に記載の免疫グロブリン。
102. 前記生殖細胞系可変Ｈ鎖配列が、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−７、ＶＨ３−２
     １および、ＶＨ３−１１からなる群より選択される、請求項１０１に記載の免疫グロブリ
     ン。
103. 前記生殖細胞系可変Ｈ鎖配列がＶＨ３−２３である、請求項１０１に記載の免疫グロブリ
     ン。
104. 請求項９７に記載の免疫グロブリンであって、ここで、前記希少枠組み残基が、ヒトＬ鎖
     可変領域サブグループ中のＬ鎖可変領域配列のうち１０％未満の該残基の位置における存
     在に基づき選択され、かつ前記普遍的な残基が、該Ｌ鎖可変領域サブグループ中の配列の
     うち５０％を超える該残基の位置での存在に基づき選択される、免疫グロブリン。
105. 請求項１００に記載の免疫グロブリンであって、ここで、前記希少枠組み残基が、ヒトＨ
     鎖可変領域サブグループ中のＨ鎖可変領域配列のうち１０％未満の該残基の位置における
     存在に基づき選択され、かつ前記普遍的な残基が、該Ｈ鎖可変領域サブグループ中の配列
     のうち５０％を超える該残基の位置での存在に基づき選択される、免疫グロブリン。
106. 前記ヒトＬ鎖可変枠組み領域がヒトκＬ鎖可変領域である、請求項７６、７８、８２、８
     ３、８６、８８、９０、９１、９３および９４のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブ
     リン。
107. 前記ヒトＨ鎖可変枠組み領域がヒト免疫グロブリンＩｇＧ１Ｈ鎖可変領域である、請求項
     ７７、７９、８１、８４、８５、８７、８９、９２、９５および９６のいずれか１項に記
     載の免疫グロブリン。
108. 定常領域がヒトＩｇＧ１由来である、請求項７６〜９０のいずれか１項に記載のヒト化免
     疫グロブリン。
109. 定常領域がヒトＩｇＧ４由来である、請求項７６〜９０のいずれか１項に記載の免疫グロ
     ブリン。
110. 少なくとも１０^８Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合す
     る、請求項７６〜９０のいずれか１項に記載の免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメン
     ト。
111. 少なくとも１０^９Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合す
     る、請求項１１０に記載の免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
112. 前記Ｈ鎖のアイソタイプがγ１である、請求項７６〜９０のいずれか１項に記載の免疫グ
     ロブリンまたは抗原結合フラグメント。
113. 可溶性βアミロイドペプチド（Ａβ）および凝集型Ａβの両方に結合する、請求項７６〜
     ９０のいずれか１項に記載の免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
114. 前記可溶性βアミロイドペプチド（Ａβ）が分散型Ａβである、請求項１１３に記載の免
     疫グロブリン。
115. βアミロイドペプチド（Ａβ）の食作用を媒介する、請求項７６〜９０のいずれか１項に
     記載の免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント。
116. 被験体において血液脳関門を横断する、請求項７６〜９０のいずれか１項に記載の免疫グ
     ロブリンまたは抗原結合フラグメント。
117. 被験体においてβアミロイドペプチド（Ａβ）負荷および神経性ジストロフィーの両方を
     低減する、請求項７６〜９０のいずれか１項に記載の免疫グロブリンまたは抗原結合フラ
     グメント。
118. 少なくとも１０^７Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合す
     る、配列番号８の残基１〜１１９に示される可変Ｈ鎖領域および配列番号１１の残基１〜
     １１２に示される可変Ｌ鎖領域を含む、免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント
     。
119. 少なくとも１０^７Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合す
     る、配列番号１２の残基１〜１１９に示される可変Ｈ鎖領域および配列番号５の残基１〜
     １１２に示される可変Ｌ鎖領域を含む、免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント
     。
120. 少なくとも１０^７Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合す
     る、配列番号８の残基１〜１１９に示される可変Ｈ鎖領域、配列番号１１の残基１〜１１
     ２に示される可変Ｌ鎖領域およびヒトＩｇＧ１由来の定常領域を含む、免疫グロブリン。
121. 少なくとも１０^７Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合す
     る、配列番号１２の残基１〜１１９に示される可変Ｈ鎖領域、配列番号５の残基１〜１１
     ２に示される可変Ｌ鎖領域およびヒトＩｇＧ１由来の定常領域を含む、免疫グロブリン。
122. 配列番号５に示されるアミノ酸配列の残基１〜１１２と少なくとも９５％の配列同一性を
     有するアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
123. 配列番号８に示されるアミノ酸配列の残基１〜１１９と少なくとも９９％の配列同一性を
     有するアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
124. 配列番号１１に示されるアミノ酸配列の残基１〜１１２と少なくとも９５％の配列同一性
     を有するアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
125. 配列番号１２に示されるアミノ酸配列の残基１〜１１９と少なくとも９９％の配列同一性
     を有するアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
126. 配列番号１１に示されるアミノ酸配列の残基１〜１１２を含む、単離されたポリペプチド
     。
127. 配列番号１２に示されるアミノ酸配列の残基１〜１１９と少なくとも９５％の配列同一性
     を有するアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
128. 配列番号５または配列番号１１のアミノ酸配列の残基１〜１１２を含み、少なくとも１つ
     の保存的アミノ酸置換を含むポリペプチド変異体であって、少なくとも１０^７Ｍ^−１の結
     合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する能力を保持する、ポリペプ
     チド変異体。
129. 配列番号８または配列番号１２のアミノ酸配列の残基１〜１１９を含むポリペプチド変異
     体であって、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含み、少なくとも１０^７Ｍ^−１の結
     合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する能力を保持する、ポリペプ
     チド変異体。
130. 配列番号８のアミノ酸配列の残基１〜１１２を含むか、配列番号５のアミノ酸配列の残基
     １〜１１９を含む、単離されたポリペプチド。
131. 請求項７６〜１２５のいずれか１項に記載のヒト化免疫グロブリンまたは抗原結合フラグ
     メント、および製薬学的担体を含む、製薬学的組成物。
132. 請求項７６〜１２５のいずれか１項に記載の免疫グロブリンまたは抗原結合フラグメント
     を、使用のための指示書と一緒に備える、キット。