JP2019108341A - 腫瘍を標的としたｉｌ−２バリアント免疫サイトカインとヒトｐｄ−ｌ１に対する抗体との併用療法 - Google Patents

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Abstract

【課題】容認できない毒性を引き起こさずに生存を増加させるために、既存の治療法に加えることができる新しいがんの治療法の提供。【解決手段】がんの、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた治療における使用のための医薬であって、ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含み、ここで、ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインが、特定の配列のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体が、特定の配列の重鎖可変ドメインＶＨに含まれる重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）及び特定の配列の軽鎖可変ドメインＶＬに含まれる軽鎖ＣＤＲを含むことを特徴とする、医薬。【選択図】なし

Description

本発明は、特定の腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する特異的抗体との併用療法に関する。
がんは、経済的に先進国における主要な死因であり、発展途上国における死亡原因の第２位である。化学療法の近年の進歩及び癌細胞における増殖シグナルの形質導入及び調節を妨げる分子レベルを標的とする薬剤の開発にもかかわらず、進行がん患者の予後は一般的に劣っているままである。結果として、容認できない毒性を引き起こさずに生存を増加させるために既存の治療法に加えることができる新しい治療法を開発するための、持続的かつ緊急の医学的必要性が存在する。
ＩＬ−２及び腫瘍標的化ＩＬ−２ベースの免疫サイトカイン
インターロイキン２（ＩＬ−２）は、リンパ球及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するサイトカインである。ＩＬ−２は、抗腫瘍活性を有することが示されている；しかし、高レベルのＩＬ−２は肺毒性をもたらし、ＩＬ−２の抗腫瘍活性は、多数の抑制性フィードバックループによって制限される。
その抗腫瘍効果に基づいて、高用量のＩＬ−２（アルデスロイキン、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）として市販されている）治療が、米国においては転移性腎細胞癌（ＲＣＣ）及び悪性黒色腫患者での使用のために、及び欧州連合においては転移性ＲＣＣ患者のために承認されている。しかしながら、ＩＬ−２の作用機序の結果として、ＩＬ−２の全身性及び非標的適用は、Ｔｒｅｇ細胞及びＡＩＣＤの誘導を介して抗腫瘍免疫をかなり損なう可能性がある。全身性ＩＬ−２治療の更なる懸念は、重篤な心血管疾患、肺浮腫、肝臓、胃腸（ＧＩ）、神経学的及び血液学的事象に関連する（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）製品特性の概要［ＳｍＰＣ］：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ．ｏｒｇ．ｕｋ／ｅｍｃ／ｍｅｄｉｃｉｎｅ／１９３２２／ＳＰＣ／（２０１３年５月２７日にアクセス））。低用量のＩＬ−２レジメンは、患者において試験されているが、最適以下の治療結果を犠牲にしている。まとめると、ＩＬ−２を利用する治療的なアプローチは、その適用に関連する不利益を克服することができる場合、がん治療に有用であり得る。腫瘍標的抗原結合部分及びＩＬ−２ベースのエフェクター部分を含む免疫複合体は、例えば、国際公開第２０１２／１４６６２８号及び国際公開第２０１２／１０７４１７号に記載されている。
ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ１抗体
Ｔ細胞に対する二つの異なるシグナルの共刺激又は提供は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による静止Ｔリンパ球のリンパ球活性化の広く受け入れられたモデルである。Lafferty et al., Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 53: 27-42 (1975)。
このモデルは更に、非自己からの自己の区別と免疫寛容とを提供する。Bretscher et al., Science 169: 1042-1049 (1970); Bretscher, P.A., P.N.A.S. USA 96: 185-190 (1999); Jenkins et al., J. Exp. Med. 165: 302-319 (1987)。一次シグナル又は抗原特異的シグナルは、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）に関して提示される外来抗原ペプチドの認識に続いてＴ細胞受容体（ＴＣＲ）により変換される。二次シグナル又は共刺激シグナルは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に発現される共刺激分子によりＴ細胞に送達され、クローン増殖、サイトカイン分泌及びエフェクター機能を促進するようにＴ細胞を誘導する。Lenschow et al., Ann. Rev. Immunol. 14:233 (1996)。共刺激の非存在下では、Ｔ細胞は、抗原刺激に不応となることがあり、有効な免疫応答を有さず、更には外来抗原に対する枯渇又は耐性を招きうる。
ＴＣＲシグナルの強度は実際にＴ細胞の活性化及び分化に対して定量的な影響を有するため、単純な２シグナルモデルは過度の単純化となりうる。Viola et al., Science 273: 104-106 (1996); Sloan-Lancaster, Nature 363: 156-159 (1993)。更に、Ｔ細胞の活性化は、ＴＣＲシグナル強度が高い場合、共刺激シグナルの非存在下においても起こりうる。更に重要なことには、Ｔ細胞はポジティブ及びネガティブ両方の二次的な共刺激シグナルを受け取る。このようなポジティブ及びネガティブなシグナルの調節は、免疫寛容を維持し、自己免疫を防ぎながら、宿主の防御免疫応答を最大化するために極めて重要である。
ネガティブな二次シグナルは、Ｔ細胞トレランスの誘導に必要と考えられ、ポジティブなシグナルはＴ細胞活性化を促進する。単純な２シグナルモデルは依然としてナイーブリンパ球の妥当な説明となるが、宿主の免疫応答は動的な過程であり、やはり共刺激シグナルが抗原曝露Ｔ細胞に提供されうる。
共刺激シグナルの操作が、細胞に基づく免疫応答を亢進又は終了させる手段となることが示されているため、共刺激の機序は治療的関心事である。最近、Ｔ細胞の機能障害又はアネルギーが、抑制受容体、すなわちプログラム死１ポリペプチド（ＰＤ−１）発現の誘導及び維持と同時に起こることが発見された。結果として、治療標的のＰＤ−１と、ＰＤ−１との相互作用によりシグナル伝達する他の分子、例えばプログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）及びプログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）は、非常に興味深い領域である。ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達の阻害は、がんの治療のためのＴ細胞免疫（例えば、腫瘍免疫）、並びに急性及び慢性（例えば、持続性）感染を含む感染を亢進する手段として提示された。しかしながら、この経路において標的に向けられた最適な治療は未だ商業化されておらず、未だ満たされていない極めて大きな医学的需要が存在している。ＰＤ−Ｌ１に対する抗体は、例えば国際公開第２０１０／０７７６３４号に記載されている。
本発明は、がん又は腫瘍の治療における使用のための、転移の予防又は治療における使用のための、炎症性疾患の治療における使用のための、免疫関連疾患（例えば、腫瘍免疫）を治療する若しくは進行を遅延させることにおける使用のための、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することにおける使用のための、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体との併用療法を含む。
本発明は、がん又は腫瘍の治療における使用のための、転移の予防又は治療における使用のための、炎症性疾患の治療における使用のための、免疫関連疾患（例えば、腫瘍免疫）を治療する若しくは進行を遅延させることにおける使用のための、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することにおける使用のための医薬の製造のための腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの使用を含み、ここで、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与される。
本発明は、がん又は腫瘍の治療における使用のための、転移の予防又は治療における使用のための、炎症性疾患の治療における使用のための、免疫関連疾患（例えば、腫瘍免疫）を治療する若しくは進行を遅延させることにおける使用のための、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することにおける使用のための医薬の製造のためのヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の使用を含み、ここで、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせて投与される。
本発明は、がん又は腫瘍の治療方法、転移の予防又は治療の方法、炎症性疾患の治療の方法、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させる方法、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激する方法を含み、該方法は、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインとヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体との併用療法を投与することを含む。
併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に結合する抗体、又はその抗原結合断片、及び
（野生型ＩＬ−２、例えば配列番号２として示されるヒトＩＬ−２と比較して）ＩＬ−２受容体のα−サブユニットへの結合親和性が低下したＩＬ−２変異体、特にヒトＩＬ−２の変異体、例えば、
ｉ）配列番号２で示されるヒトＩＬ−２の残基４２，４５及び７２に対応する位置から選択される１つ、２つ又は３つの位置で１つ、２つ又は３つのアミノ酸置換、例えば、３つの位置で３つの置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇ；
又は
ｉｉ）ｉ）に示された特徴に加えて、配列番号２として示されるヒトＩＬ−２の残基３に対応する位置でのアミノ酸置換、例えば特異的アミノ酸置換Ｔ３Ａ；又は
ｉｉｉ）配列番号２として示されるヒトＩＬ−２の残基３，４２，４５及び７２に対応する位置に４つのアミノ酸置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｔ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇ
を含むＩＬ−２など
を含むことを特徴とする。
併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に結合する抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメイン並びに、２つのサブユニットからなり、２つの非同一ポリペプチド鎖のヘテロ二量化を促進する修飾を含むＦｃドメイン、及び
（野生型ＩＬ−２、例えば配列番号２として示されるヒトＩＬ−２と比較して）ＩＬ−２受容体のα−サブユニットへの結合親和性が低下したＩＬ−２変異体、特にヒトＩＬ−２の変異体、例えば、
ｉ）配列番号２で示されるヒトＩＬ−２の残基４２，４５及び７２に対応する位置から選択される１つ、２つ又は３つの位置で１つ、２つ又は３つのアミノ酸置換、例えば、３つの位置で３つの置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇ；又は
ｉｉ）ｉ）に示された特徴に加えて、配列番号２として示されるヒトＩＬ−２の残基３に対応する位置でのアミノ酸置換、例えば特異的アミノ酸置換Ｔ３Ａ；又は
ｉｉｉ）配列番号２として示されるヒトＩＬ−２の残基３、４２、４５及び７２に対応する位置に４つのアミノ酸置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｔ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇ
を含むＩＬ−２など
を含むことを特徴とする。
抗体は、腫瘍標的化ＩＬ−２変異型免疫グロブリンがＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又はＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであるように、抗体の標的として癌胎児性抗原（ＣＥＡ）又は線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合することができ、従って、免疫サイトカインの抗ＣＥＡ抗体又は抗ＦＡＰ抗体成分を有する。
Ｆｃドメイン修飾促進ヘテロ二量体化は、Ｆｃドメインのサブユニットの１つにノブ修飾を含み、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのうちの他方にホール修飾を含むノブ・イントゥー・ホール修飾、２つのポリペプチド鎖の界面における１つ以上のアミノ酸残基の荷電アミノ酸残基による置換を含む静電気ステアリング効果を媒介する修飾、例えば１つのサブユニット上のＤＤ変異（例えば、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ４０９Ｄ；ＥＵ番号付け）、及び他のサブユニット上のＫＫ変異（例えば、Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３９９Ｋ；ＥＵ番号付け）であり得る。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の例示的な配列を配列番号１として示す。
併用療法で使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであってもよく、これは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列を含み得、
又はＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであってもよく、これは
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列を含み得る。
本併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
実施態様において、併用療法で使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであり、これは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、
又はＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであり、これは
ａ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列、
を含むことを特徴とし、
かつ併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体が、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
実施態様において、併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号８４、配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列を含むことを特徴とし；
かつ併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬを含むことを特徴とする。
実施態様において、併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列を含むことを特徴とし；
かつ併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ｂ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬを含むことを特徴とする。
実施態様において、上述のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインとの併用療法は、がん又は腫瘍の治療に使用するためのものである。がん又は腫瘍は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に抗原を提示し得る。併用療法の標的は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示され得る。がん又は腫瘍は、ＣＥＡ又はＦＡＰを発現又は過剰発現し得る。治療は固形腫瘍のためのものであり得る。固形腫瘍は、ＣＥＡ又はＦＡＰを発現又は過剰発現し得る。治療は癌のためのものであり得る。癌は、ＣＥＡ又はＦＡＰを発現又は過剰発現し得る。がんは、結腸直腸がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、乳がん、膵臓がん、肝臓がん及び胃がんからなる群から選択され得る。がんは、肺がん、結腸がん、胃がん、乳がん、頭頸部がん、皮膚がん、肝臓がん、腎臓がん、前立腺がん、膵臓がん、脳がん及び骨格筋のがんからなる群から選択され得る。
実施態様において、上述のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインとの併用療法は、転移の予防又は治療に使用するためのものである。
実施態様において、上述のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインとの併用療法は、炎症性疾患の治療に使用するためのものである。
実施態様において、上述のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインとの併用療法は、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する又は進行を遅延させるためのものである。
実施態様において、上述のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインとの併用療法は、Ｔ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することに使用するためのものである。
本発明は、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含み、ここで、免疫サイトカインは、
ｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍における腫瘍増殖の阻害；
ｉｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させること
に使用のために、上述のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され、
ここで、標的は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示され得る。
本発明は、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含み、ここで、免疫サイトカインは、
ｉ）ＣＥＡ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；
ｉｉ）ＣＥＡ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させること
に使用のために、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され、
ここで、併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
かつ併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
本発明は、ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含み、ここで、免疫サイトカインは、
ｉ）ＦＡＰ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；
ｉｉ）ＦＡＰ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させること
に使用のために、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され、
ここで、併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
かつ併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
本発明は、ＣＥＡ発現腫瘍又はＣＥＡの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、ＦＡＰ発現腫瘍又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、あるいはＣＥＡ又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現に関連する腫瘍を有する患者の治療における使用のための、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含み、ここで、免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され、
ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
かつ併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様では、免疫サイトカインの抗体成分又は抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラス又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。
本発明は、
Ａ）ｉ）ＣＥＡ発現腫瘍又はＦＡＰ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；
ｉｉ）ＣＥＡ発現腫瘍又はＦＡＰ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上するための方法であって、
ここで、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又はＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与される方法、
又は
Ｂ）ＣＥＡ発現腫瘍又はＣＥＡの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、又はＦＡＰ発現腫瘍又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有する患者の治療の方法であって、ここで、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又はＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインはヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与される方法であって、
ここで、併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
ここで、併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
かつ併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする、
方法を含む。
本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗体の併用療法は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原を標的とする治療を必要とする患者のための利益を示す。本明細書に記載されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗体の併用療法は、ＣＥＡ標的療法を必要とする患者のための利益を示す。本明細書に記載されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗体の併用療法は、ＦＡＰ標的療法を必要とする患者のための利益を示す。本発明による腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、標的発現腫瘍に対する腫瘍増殖阻害活性において有効性を示し、とりわけ本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせたがん及び転移の治療において特に有用である。本発明による腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、標的発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることにおいて有効性を示し、とりわけ本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせたがん及び転移の治療において特に有用である。本発明による特異的ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＣＥＡ発現腫瘍に対する腫瘍増殖阻害活性において有効性を示し、とりわけ本明細書に記載される特異的抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせたがん及び転移の治療において特に有用である。本発明による特異的ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＣＥＡ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることにおいて有効性を示し、とりわけ本明細書に記載される特異的抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせたがん及び転移の治療において特に有用である。本発明による特異的ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＦＡＰ発現腫瘍に対する腫瘍増殖阻害活性において有効性を示し、とりわけ本明細書に記載される特異的抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせたがん及び転移の治療において特に有用である。本発明による特異的ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＦＡＰ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることにおいて有効性を示し、とりわけ本明細書に記載される特異的抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせたがん及び転移の治療において特に有用である。本発明によるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する特異的抗体は、ＣＥＡ発現腫瘍又はＦＡＰ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上する有効性を示し、とりわけ本明細書に記載される特異的ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又はＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせたがん及び転移の治療において特に有用である。
ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂを単独の薬剤として、及び組み合わせの設定で用いた有効性実験の結果を示す。ＭＣ３８−ＣＥＡトランスフェクタント結腸直腸癌細胞株を、肝転移モデルにおける生存を研究するためにＢｌａｃｋ ６−ｈｕＣＥＡ−ｈｕ Ｆｃγ ＲＩＩＩ ｔｇマウスの門脈に注射した。マウス１匹につきｍｇ／ｋｇ単位で注射される抗体の量が、図の説明文に示されている。 ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂを単独の薬剤として、及び組み合わせの設定で用いた有効性実験の結果を示す。ＭＣ３８−ＣＥＡトランスフェクタント結腸直腸癌細胞株を、皮下モデルにおいて腫瘍増殖阻害を研究するために、Ｂｌａｃｋ ６−ｈｕＣＥＡ−ｈｕＦｃγＲＩＩＩ ｔｇマウスに皮下注射し、腫瘍サイズをキャリパーを用いて測定した。マウス１匹につきｍｇ／ｋｇ単位で注射される抗体の量が、図の説明文に示されている。 ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂを単独の薬剤として、及び組み合わせの設定で用いた有効性実験の結果を示す。Ｐａｎｃ０２−Ｈ７−ＣＥＡトランスフェクタント膵臓癌細胞株を、膵臓の同所性同系モデルにおける生存を研究するために、Ｂｌａｃｋ ６−ｈｕＣＥＡ−ｈｕＦｃγＲＩＩＩ ｔｇマウスの膵臓に注射した。マウス１匹につきｍｇ／ｋｇ単位で注射される抗体の量が、図の説明文に示されている。 ＣＥＡ標的化ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ又は非標的化ＤＰ４７−ＩＬ２ｖ及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂを、単独の薬剤として、及び組み合わせの設定で用いた有効性実験の結果（Ａ）を示す。Ｐａｎｃ０２−Ｈ７−ＣＥＡトランスフェクタント膵臓癌細胞株を、膵臓の同所性同系モデルにおける生存を研究するために、Ｂｌａｃｋ ６−ｈｕＣＥＡ−ｈｕＦｃγＲＩＩＩ ｔｇマウスの膵臓に注射した。マウス１匹につきｍｇ／ｋｇ単位で注射される抗体の量が、図の説明文に示されている。（Ｂ）最初の投与後のＩＬ２ｖの血清レベルが、異なる処置群について示されている。 ヒトＰＭＢＣとヒトＡ５４９肺がん細胞株との共培養において、ＣＥＡ−ＩＬ２ｖによる処置が濃度依存的にＡ５４９細胞上のＰＤ−Ｌ１のアップレギュレーションを誘導することを示すインビトロ研究の結果を示す。Ａ５４９腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１発現を、１０ｎＭ又は１００ｎＭのＣＥＡ−ＩＬ２ｖ単独で（Ａ）、又はＥ：Ｔ比が１：１（Ｂ）若しくは１０：１（Ｃ）のＰＢＭＣの存在下で処置した後、フローサイトメトリーによって分析した。 ＦＡＰ−ＩＬ２ｖ及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂを単独の薬剤として、及び組み合わせの設定で用いた有効性実験の結果を示す。ＭＣ３８−ＦＡＰトランスフェクタント結腸直腸癌細胞株を、皮下モデルにおいて腫瘍増殖阻害を研究するために、Ｂｌａｃｋ ６マウスに皮下注射した。（Ａ）腫瘍のサイズ（キャリパーを用いて測定）；（Ｂ）生存。ｎ＝１４。
発明の詳細な説明
ＩＬ−２経路
インビトロ及びインビボの両方でリンパ球及びＮＫ細胞集団を増やして活性化するＩＬ−２の能力は、ＩＬ−２の抗腫瘍効果を説明する。しかし、過剰な免疫応答及び潜在的な自己免疫を防ぐための調節機構として、ＩＬ−２は活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）をもたらし、活性化Ｔ細胞をＦａｓ媒介アポトーシスに感受性にする。
更に、ＩＬ−２は、末梢ＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ Ｔｒｅｇ細胞の維持及び増殖に関与している（Fontenot JD, Rasmussen JP, Gavin MA, et al. A function for interleukin 2 in Foxp3 expressing regulatory T cells. Nat Immunol. 2005; 6:1142-1151; D'Cruz LM, Klein L. Development and function of agonist-induced CD25+Foxp3+ regulatory T cells in the absence of interleukin 2 signaling. Nat Immunol. 2005; 6:1152 1159; Maloy KJ, Powrie F. Fueling regulation: IL-2 keeps CD4+ Treg cells fit. Nat Immunol. 2005; 6:1071-1072）。これらの細胞は、細胞−細胞接触又はＩＬ−１０若しくはトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）−βなどの免疫抑制性サイトカインの放出を介して、エフェクターＴ細胞が自己又は標的を破壊するのを抑制する。Ｔｒｅｇ細胞の枯渇は、ＩＬ−２誘導性抗腫瘍免疫を増強することが示された（Imai H, Saio M, Nonaka K, et al. Depletion of CD4+CD25+ regulatory T cells enhances interleukin-2-induced antitumor immunity in a mouse model of colon adenocarcinoma. Cancer Sci. 2007; 98:416-423）。
ＩＬ−２はまた、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の一次及び二次増殖の間の記憶ＣＤ８＋ Ｔ細胞分化において重要な役割を果たす。ＩＬ−２は、一次抗原チャレンジ後のエフェクター機能の最適な拡大及び生成を担うようである。ＩＬ−２シグナルは、ほとんどの抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞がアポトーシスによって消失する免疫応答の収縮期に、細胞死からＣＤ８＋ Ｔ細胞を救うことができ、記憶ＣＤ８＋ Ｔ細胞の持続的な増加を与える。記憶段階では、外因性ＩＬ−２の投与によってＣＤ８＋ Ｔ細胞頻度を高めることができる。更に、初期プライミングの間にＩＬ−２シグナルを受け取ったＣＤ８＋ Ｔ細胞のみが、新たな抗原チャレンジ後の効率的な二次的増殖を媒介することができる。従って、免疫応答の異なる段階の間のＩＬ−２シグナルは、ＣＤ８＋ Ｔ細胞機能の最適化において重要であり、それによってこれらのＴ細胞の一次応答及び二次応答の両方に影響を及ぼす（Adv Exp Med Biol. 2010;684:28-41. The role of interleukin-2 in memory CD8 cell differentiation. Boyman O1, Cho JH, Sprent J）。
その抗腫瘍効果に基づいて、高用量のＩＬ−２（アルデスロイキン、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）として市販されている）治療が、米国においては転移性腎細胞癌（ＲＣＣ）及び悪性黒色腫患者での使用のために、及び欧州連合においては転移性ＲＣＣ患者のために承認されている。しかしながら、ＩＬ−２の作用機序の結果として、ＩＬ−２の全身性及び非標的適用は、Ｔｒｅｇ細胞及びＡＩＣＤの誘導を介して抗腫瘍免疫をかなり損なう可能性がある。全身性ＩＬ−２治療の更なる懸念は、重篤な心血管疾患、肺浮腫、肝臓、胃腸（ＧＩ）、神経学的及び血液学的事象に関連する（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）製品特性の概要［ＳｍＰＣ］：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ．ｏｒｇ．ｕｋ／ｅｍｃ／ｍｅｄｉｃｉｎｅ／１９３２２／ＳＰＣ／（２０１３年５月２７日にアクセス））。低用量のＩＬ−２レジメンは、患者において試験されているが、最適以下の治療結果を犠牲にしている。まとめると、ＩＬ−２を利用する治療的なアプローチは、その適用に関連する不利益を克服することができる場合、がん治療に有用であり得る。
癌胎児性抗原（ＣＥＡ）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を含む、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に対する腫瘍標的抗原結合部分、及び例えば変異体ＩＬ−２を含むＩＬ−２ベースのエフェクター部分を含んでなるイムノコンジュゲーは、例えば、国際公開第２０１２／１４６６２８号及び国際公開第２０１２／１０７４１７号に記載されている。
特に、変異体ＩＬ−２（例えば、ＩＬ−２ｑｍとして知られている４重変異体）は、ＩＬ−２Ｒαサブユニット（ＣＤ２５）への結合を排除することによって野生型ＩＬ−２（例えば、アルデスロイキン）又は第１世代のＩＬ−２ベースの免疫サイトカインの限界を克服するように設計されている。この変異体ＩＬ−２ ｑｍは、ＣＥＡに対するヒト化抗体及びＦＡＰに対する抗体などの様々な腫瘍標的化抗体に結合されている。更に、抗体のＦｃ領域は、Ｆｃγ受容体及びＣ１ｑ複合体への結合を防止するように改変されている。得られた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン（例えば、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及びＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン）は、インビトロ及びインビボの非臨床実験において、腫瘍細胞を排除することができることが示されている。
従って、得られた免疫サイトカインは、ＩＬ−２Ｒαサブユニット（ＣＤ２５）への結合を排除することによってＩＬ−２の責務に対処する一種の腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインである。
Figure 2019108341
用語「ＩＬ−２」又は「ヒトＩＬ−２」は、野生型及び野生型ＩＬ−２のアミノ酸配列において１つ又は複数の変異を含むバリアント、例えば、ジスルフィド架橋されたＩＬ−２二量体の形成を避けるためにＣ１２５Ａ置換を有する配列番号２に示されるようなバリアントを含むヒトＩＬ−２タンパク質を指す。ＩＬ−２は、Ｎ及び／又はＯ−グリコシル化部位を除去するように変異されてもよい。
用語「ＣＥＡ」は、様々な腫瘍型の細胞表面上で高度に発現されるタンパク質であるその免疫原性エピトープＣＡＰ−１及びＣＡＰ−２を含む癌胎児性抗原を指す。
用語「ＦＡＰ」は、細胞表面上に発現され、種々な腫瘍型の腫瘍細胞上又は様々な腫瘍型の腫瘍細胞環境中に提示されるタンパク質である、線維芽細胞活性化タンパク質を指す。
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２経路
Ｔ細胞活性化を調節する重要なネガティブ共刺激シグナルは、プログラム死−１受容体（ＰＤ−１）（ＣＤ２７９）、そのリガンド結合パートナーＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１、ＣＤ２７４；配列番号８８）及びＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ、ＣＤ２７３）によって提供される。ＰＤ−１のネガティブな調節の役割は、自己免疫を生じさせる傾向のあるＰＤ−１のノックアウト（Ｐｄｃｄ１−／−）によって明らかになった。Nishimura et al., Immunity 11: 141-51 (1999); Nishimura et al., Science 291: 319-22 (2001)。ＰＤ−１は、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４に関連しているが、ホモ二量体化を可能にする、膜近位システインを欠いている。ＰＤ−１の細胞質ドメインは、免疫受容体チロシン−ベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ、Ｖ／ＩｘＹｘｘＬ／Ｖ）を含む。ＰＤ−１はＰＤ−Ｌ１とＰＤ−Ｌ２にのみ結合する。Freeman et al., J. Exp. Med. 192: 1-9 (2000); Dong et al., Nature Med. 5: 1365-1369 (1999); Latchman et al., Nature Immunol. 2: 261-268 (2001); Tseng et al., J. Exp. Med. 193: 839-846 (2001)。
ＰＤ−１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、活性化された単球及び樹状細胞（ＤＣ）上に発現しうる。ＰＤ−１は、活性化されているが刺激されてはいないヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｂ細胞及び骨髄によって発現される。これは、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４のより限定された発現とは対照的である。Nishimura et al., Int. Immunol. 8: 773-80 (1996); Boettler et al., J. Virol. 80: 3532-40 (2006)。活性化されたヒトＴ細胞からクローニングされた、少なくとも４つのＰＤ−１のバリアントが存在し、それには（ｉ）エクソン２，（ｉｉ）エクソン３，（ｉｉｉ）エクソン２及び３又は（ｉｖ）エクソン２〜４を欠く転写物が含まれる。Nielsen et al., Cell. Immunol. 235: 109-16 (2005)。ＰＤ−１Δｅｘ３を例外として、全ての変異体は、静止末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中において完全長ＰＤ−１と同様のレベルで発現される。全ての変異体の発現は、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８によるヒトＴ細胞の活性化により有意に誘導される。ＰＤ−１Δｅｘ３変異体は、膜貫通ドメインを欠き、自己免疫において重要な役割を果たす可溶型ＣＴＬＡ−４に類似している。Ueda et al., Nature 423: 506-11 (2003)。この変異体は、関節リウマチ患者の骨液及び血清中において濃縮される。Wan et al., J. Immunol. 177: 8844-50 (2006)。
２つのＰＤ−１リガンドは、その発現パターンが異なる。ＰＤ−Ｌ１は、マウスＴ細胞及びＢ細胞、ＣＤ、マクロファージ、間葉系幹細胞及び骨髄由来肥満細胞で恒常的に発現される。Yamazaki et al., J. Immunol. 169: 5538-45 (2002)。ＰＤ−Ｌ１は、広い範囲の非造血細胞（例えば、角膜細胞、肺細胞、血管上皮細胞、肝臓非実質細胞、間葉系幹細胞、膵島、胎盤のシンシチウム栄養芽層、ケラチノサイトなど）に発現され [Keir et al., Annu. Rev. Immunol. 26: 677-704 (2008)]、活性化後複数の細胞型において上方制御される。Ｉ型及びＩＩ型両方のインターフェロンＩＦＮがＰＤ−Ｌ１を上方制御する。Eppihimer et al., Microcirculation 9: 133-45 (2002); Schreiner et al., J. Neuroimmunol. 155: 172-82 (2004)。細胞株におけるＰＤ−Ｌ１の発現は、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＦ６及びＭＥＫが抑制されると低下する。Liu et al., Blood 110: 296-304 (2007)。ＪＡＫ２は、ＰＤ−Ｌ１誘発にも関係するとされている。Lee et al., FEBS Lett. 580: 755-62 (2006); Liu et al., Blood 110: 296-304 (2007)。ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及びＡｋｔシグナル伝達を修飾する細胞ホスファターゼであるホスホターゼテンシンホモログ（ＰＴＥＮ）の欠失又は抑制は、がんにおける転写後のＰＤ−Ｌ１発現を増加させた。Parsa et al., Nat. Med. 13: 84-88 (2007)。
ＰＤ−Ｌ２の発現は、ＰＤ−Ｌ１より制限されている。ＰＤ−Ｌ２は、ＤＣ、マクロファージ、及び骨髄由来のマスト細胞に誘導的に発現される。ＰＤ−Ｌ２は、休止腹膜Ｂ１細胞の約半分から三分の二にも発現されるが、一般的なＢ２ Ｂ細胞には発現されない。Zhong et al., Eur. J. Immunol. 37: 2405-10 (2007)。ＰＤ−Ｌ２＋Ｂ１細胞は、ホスファチジルコリンに結合し、細菌抗原に対する自然免疫応答にとって重要であると思われる。ＩＦＮ−ガンマによるＰＤ−Ｌ２の誘発は、部分的にＮＦ−κＢに依存する。Liang et al., Eur. J. Immunol. 33: 2706-16 (2003)。ＰＤ−Ｌ２は、ＧＭ−ＣＦ、ＩＬ−４及びＩＦＮ−ガンマにより単球及びマクロファージにも誘導されうる。Yamazaki et al., J. Immunol. 169: 5538-45 (2002); Loke et al., PNAS 100:5336-41 (2003)。
ＰＤ−１シグナル伝達は、典型的には、細胞増殖よりサイトカイン生成に大きな影響を有し、ＩＦＮ−ガンマ、ＴＮＦ−アルファ及びＩＬ−２生成に大きな影響を有する。ＰＤ−１が媒介する抑制性シグナル伝達も、ＴＣＲシグナル伝達の強度に依存しており、低レベルのＴＣＲ刺激においてより大きな阻害が送達される。このような低減は、ＣＤ２８による共刺激により[Freeman et al., J. Exp. Med. 192: 1027-34 (2000)]又はＩＬ−２の存在により [Carter et al., Eur. J. Immunol. 32: 634-43 (2002)]克服されうる。
ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２によるシグナル伝達が二方向性であるという証拠が蓄積されている。すなわち、ＴＣＲ又はＢＣＲシグナル伝達を修飾することに加えて、シグナル伝達は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２を発現する細胞に戻るようにも送達される。ワルデンシュトレーム型ガンマグロブリン血症患者から単離された、天然にヒトの抗ＰＤ−Ｌ２抗体による樹状細胞の処置は、ＭＨＣ ＩＩ又はＢ７共刺激分子を上方制御することを見出されなかったが、このような細胞は、より多量の炎症誘発性サイトカイン、特にＴＮＦ−アルファ及びＩＬ−６を生成し、Ｔ細胞の増殖を刺激した。Nguyen et al., J. Exp. Med. 196: 1393-98 (2002)。また、この抗体によるマウスの治療は、（１）移植されたｂ１６メラノーマに対する耐性を亢進させ、腫瘍特異的ＣＴＬを急速に誘導し（Radhakrishnan et al., J. Immunol. 170: 1830-38 (2003); Radhakrishnan et al., Cancer Res. 64: 4965-72 (2004); Heckman et al., Eur. J. Immunol. 37: 1827-35 (2007)）；（２）アレルギー性喘息のマウスモデルにおける気道炎症性疾患の発生をブロックした（Radhakrishnan et al., J. Immunol. 173: 1360-65 (2004); Radhakrishnan et al., J. Allergy Clin. Immunol. 116: 668-74 (2005)）。
樹状細胞（「ＤＣ」）への逆シグナル伝達の更なる証拠は、可溶性ＰＤ−１と共に培養された骨髄由来のＤＣの研究により得られたものである（Ｉｇ定常領域に融合したＰＤ−１ ＥＣドメイン−「ｓ−ＰＤ−１」）。Kuipers et al., Eur. J. Immunol. 36: 2472-82 (2006)。このｓＰＤ−１は、抗ＰＤ−１の投与により可逆的に、ＤＣ活性化を阻害し、ＩＬ−１０の生成を増大させた。
更に、幾つかの研究では、ＰＤ−１とは独立したＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２に対する受容体が示されている。Ｂ７．１は、既にＰＤ−Ｌ１の結合パートナーとして同定されている。Butte et al., Immunity 27: 111-22 (2007)。化学的架橋の研究は、ＰＤ−Ｌ１及びＢ７．１がそれらのＩｇＶ様ドメインを介して相互作用しうることを示唆している。Ｂ７．１：ＰＤ−Ｌ１相互作用は、阻害シグナルをＴ細胞中に誘導することができる。Ｂ７．１によるＣＤ４＋ Ｔ細胞上でのＰＤ−Ｌ１のライゲーション又はＰＤ−Ｌ１によるＣＤ４＋ Ｔ細胞上でのＢ７．１のライゲーションは、阻害シグナルを送達する。ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４を欠くＴ細胞は、抗ＣＤ３＋Ｂ７．１でコーティングされたビーズにより刺激したとき、増殖及びサイトカイン生成の低減を示す。Ｂ７．１の受容体の全て（すなわち、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−Ｌ１）を欠くＴ細胞では、Ｔ細胞の増殖とサイトカインの生成はもはや抗ＣＤ３＋Ｂ７．１コーティングビーズによって阻害されない。これは、Ｂ７．１が、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４の非存在下においてＴ細胞上のＰＤ−Ｌ１により特異的に作用することを示唆している。同様に、ＰＤ−１を欠くＴ細胞は、抗ＣＤ３＋ＰＤ−Ｌ１コーティングビーズの存在下において刺激したとき、増殖とサイトカイン生成の低減を示した。これは、Ｔ細胞上でのＢ７．１に対するＰＤ−Ｌ１ライゲーションの抑制効果を実証するものである。Ｔ細胞がＰＤ−Ｌ１のすべての既知の受容体を欠いている場合（すなわち、ＰＤ−１及びＢ７．１なし）、Ｔ細胞増殖は、抗ＣＤ３＋ ＰＤ−Ｌ１コーディングビーズによってもはや損なわれなかった。従って、ＰＤ−Ｌ１は、Ｂ７．１又はＰＤ−１により、Ｔ細胞に対し抑制効果を発揮することができる。
Ｂ７．１とＰＤ−Ｌ１の直接的相互作用は、共刺激に対する現行の理解は不十分であり、Ｔ細胞上におけるこれら分子の発現に対する重要性を過小評価していることを示唆する。ＰＤ−Ｌ１−／− Ｔ細胞の研究は、Ｔ細胞上のＰＤ−Ｌ１が、Ｔ細胞のサイトカイン生成を下方制御できることを示す。Latchman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101: 10691-96 (2004)。ＰＤ−Ｌ１とＢ７．１の両方がＴ細胞、Ｂ細胞、ＤＣ及びマクロファージに発現されることから、これら細胞型においてＢ７．１とＰＤ−Ｌ１とが方向性相互作用を有している可能性がある。加えて、非造血細胞上のＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞上のＢ７．１並びにＰＤ−１と相互作用することができ、それらの調節にＰＤ−Ｌ１が関与しているかという疑問を投げかけている。Ｂ７．１：ＰＤ−Ｌ１相互作用の阻害効果の一つの可能な説明は、Ｔ細胞ＰＤ−Ｌ１が、ＣＤ２８との相互作用に基づいてＡＰＣ Ｂ７．１を捕獲又は分離させうるということである。
結果として、ＰＤ−Ｌ１がＰＤ−１、Ｂ７．１又はこれらの両方と相互作用することをブロックすることにより、ＰＤ−Ｌ１がネガティブな共刺激シグナルをＴ細胞及び他の抗原提示細胞に送ることを防ぐことを含むＰＤ−Ｌ１によるシグナル伝達の拮抗作用は、感染症（例えば、急性及び慢性）に対する免疫性及び腫瘍免疫を亢進させると思われる。加えて、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１は、ＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達の他の成分のアンタゴニスト、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体と組み合わせることができる。
用語「ヒトＰＤ−Ｌ１」は、ヒトタンパク質ＰＤ−Ｌ１（配列番号４、典型的にはＰＤ−１シグナル伝達）を指す。本明細書で使用される「ヒトＰＤ−Ｌ１への結合」又は「ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合」又は「ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する」又は「抗ＰＤ−Ｌ１抗体」は、ＫＤ値１．０ｘ１０−８モル／ｌ以下、一実施態様では、ＫＤ値１．０ｘ１０−９モル／ｌ以下の結合親和性でヒトＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体に言及している。結合親和性は、表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）などの標準的な結合アッセイを用いて決定される。従って、本明細書で使用される「ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体」は、ＫＤ値１．０ｘ１０−８モル／ｌ以下（一実施態様では、１．０ｘ１０−８モル／ｌ〜１．０ｘ１０−１３モル／ｌ）、一実施態様ではＫＤ値１．０ｘ１０−９モル／ｌ以下（一実施態様では、１．０ｘ１０−９モル／ｌ〜１．０ｘ１０−１３モル／ｌ）の結合親和性でヒトＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体を指す。
本明細書に詳細に記載するように、本発明者らは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路アンタゴニストと組み合わせて使用すると、腫瘍標的化変異体ＩＬ−２がインビボで優れた治療効果を提供することを発見した。特に、本発明者らは、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン（ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ又はＣＥＡ標的化ＩｇＧ−ＩＬ−２ｑｍと呼ばれる）又はＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン（ＦＡＰ−ＩＬ２ｖ又はＦＡＰ−標的化ＩｇＧ−ＩＬ−２ｑｍと呼ばれる）は、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて使用すると、インビボで優れた治療効果を提供することを発見した。
リンパ球及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を増殖及び活性化するＩＬ−２の能力は、ＩＬ−２の抗腫瘍活性の根底にある。ＩＬ−２αサブユニット（ＣＤ２５）へのＩＬ−２の結合を排除するように設計されたＩＬ−２変異体は、ＩＬ−２の限界を克服し、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又はＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインのような腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの一部として、腫瘍細胞を排除することができることが示されている。
本発明者らは、本明細書に記載するように、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを用いたインビトロの処置が、腫瘍細胞に対するＰＤ−Ｌ１上方制御を誘導することを見出した。例えば、ヒトＰＢＭＣとヒトＡ５４９肺がん細胞株との共培養は、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインが、濃度依存的に、ＩＦＮγの放出によって媒介される可能性が最も高い、Ａ５４９細胞上のＰＤ−Ｌ１の上方制御を誘導することを示した。「ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ」（国際公開第２０１２／１４６６２８号、実施例１及び２に記載の配列番号８４，８６及び８８として示される配列を有する、抗ＣＥＡ抗体ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１及びＩＬ−２四重変異体（ＩＬ−２ｑｍ、配列番号３）に基づくＣＥＡ標的化ＩｇＧ−ＩＬ−２ｑｍ融合タンパク質に対応する）と呼ばれるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを使用すると、ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ単独では、Ａ５４９腫瘍細胞においてＰＤ−Ｌ１を誘導することができなかった（図４）。しかし、ＰＢＭＣの存在下では、ＰＤ−Ｌ１はＡ５４９細胞で上方制御され、この効果はＩＦＮγの放出によって媒介される可能性が最も高い免疫細胞を介して媒介されることが示された。ＰＤ−Ｌ１の発現レベルは、ＣＥＡ−ＩＬ２ｖの濃度の増加と共に、より高いＥ：Ｔ比で増加した。ＰＤ−Ｌ１上方制御はＰＤ−１との相互作用を介してＮＫ及びＴ細胞の活性にネガティブに影響を及ぼすことが知られている。従って、このネガティブフィードバックループは、ＰＤ−Ｌ１ブロッキング抗体の添加によって抑制され得る。
本発明者らは更に、本明細書に記載されるように、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインによるインビボ処置及びＰＤ−Ｌ１阻害が、特に同時に適用された場合に、ｉ）マウス腫瘍細胞株の同系モデルにおいて、それぞれの単剤療法と比較して優れた腫瘍増殖阻害及びｉｉ）マウス腫瘍細胞株の同系モデルにおいて、生存期間中央値及び／又は全生存期間の優れた組み合わせをもたらすことを見いだした。腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫グロブリンのマウス化代用分子と抗マウスＰＤ−Ｌ１代用抗体との組み合わせのインビボ抗腫瘍効果を評価するために、多数の前臨床試験が開始された。例えば、前臨床試験が開始され、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインＣＥＡ−ＩＬ２ｖ（ｍｕＣＥＡ−ｍｕＩＬ２ｖと称される）のマウス化代用分子、ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインＦＡＰ−ＩＬ２ｖ（ｍｕＦＡＰ−ｍｕＩＬ２ｖと称される）のマウス化代用分子の、抗マウスＰＤ−Ｌ１代用抗体（例えば、ＦｃγＲ相互作用を消失させるＤＡＰＧ変異を含む図１１に示される配列を有する国際公開第２０１０／０７７６３４号に記載のＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ−Ｌ１ ｍｕＩｇＧ１、又はヒト／マウス交差反応性抗ＰＤ−Ｌ１抗体）との組み合わせのインビボ抗腫瘍効果を評価した。
免疫サイトカイン及び抗体
本明細書に記載される併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に結合する抗体、又はその抗原結合断片、及び
（野生型ＩＬ−２、例えば配列番号２として示されるヒトＩＬ−２と比較して）ＩＬ−２受容体のα−サブユニットへの結合親和性が低下したＩＬ−２変異体、特にヒトＩＬ−２の変異体、例えば、
ｉｖ）配列番号２で示されるヒトＩＬ−２の残基４２，４５及び７２に対応する位置から選択される１つ、２つ又は３つの位置で１つ、２つ又は３つのアミノ酸置換、例えば、３つの位置で３つの置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇ；又は
ｖ）ｉ）に示された特徴に加えて、配列番号２として示されるヒトＩＬ−２の残基３に対応する位置でのアミノ酸置換、例えば特異的アミノ酸置換Ｔ３Ａ；又は
ｖｉ）配列番号２として示されるヒトＩＬ−２の残基３，４２，４５及び７２に対応する位置に４つのアミノ酸置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｔ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇ
を含むＩＬ−２など
を含む。
本明細書に記載される併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に結合する抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメイン並びに、２つのサブユニットからなり、２つの非同一ポリペプチド鎖のヘテロ二量化を促進する修飾を含むＦｃドメイン、
（野生型ＩＬ−２、例えば配列番号２として示されるヒトＩＬ−２と比較して）ＩＬ−２受容体のα−サブユニットへの結合親和性が低下したＩＬ−２変異体、特にヒトＩＬ−２の変異体、例えば、
ｉｖ）配列番号２で示されるヒトＩＬ−２の残基４２，４５及び７２に対応する位置から選択される１つ、２つ又は３つの位置で１つ、２つ又は３つのアミノ酸置換、例えば、３つの位置で３つの置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇ；又は
ｖ）ｉ）に示された特徴に加えて、配列番号２として示されるヒトＩＬ−２の残基３に対応する位置でのアミノ酸置換、例えば特異的アミノ酸置換Ｔ３Ａ；又は
ｖｉ）配列番号２として示されるヒトＩＬ−２の残基３，４２，４５及び７２に対応する位置に４つのアミノ酸置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｔ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇ
を含むＩＬ−２など
を含み得る。
併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、
を含み得る。
幾つかの実施態様において、併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号８４、配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列を含む。
併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列、
を含み得る。
幾つかの実施態様において、併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列を含む。
これらの腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、抗原結合部分、Ｆｃドメイン及びエフェクター部分のそれらの構成部分と共に、国際公開第２０１２／１４６６２８号及び国際公開第２０１２／１０７４１７号に記載されたイムノコンジュゲートの例として記載される。例えば、配列番号８４及び８６及び８８として示される配列を有する、抗ＣＥＡ抗体ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１及びＩＬ−２四重変異体（ｑｍ）（配列番号３）に基づく特定の免疫サイトカイン「ＣＥＡ標的化ＩｇＧ−ＩＬ−２ｑｍ融合タンパク質」は、例えば国際公開第２０１２／１４６６２８号の実施例１及び２に記載されている。例えば、配列番号７９及び８０及び８１として示される配列を有する、抗ＦＡＰ抗体４Ｂ９とＩＬ−２四重変異体（ｑｍ）（ＩＬ−２ ｑｍ、配列番号３）とに基づく特定の免疫サイトカイン「ＦＡＰ標的化ＩｇＧ−ＩＬ−２ｑｍ融合タンパク質」は、例えば国際公開第２０１２／１４６６２８号の実施例１及び２並びに国際公開第２０１２／１０７４１７号の実施例１に記載されている。
国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されている特定のＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、本明細書に記載される以下のポリペプチド配列を含むことを特徴とする：
Figure 2019108341
Figure 2019108341
Figure 2019108341
国際公開第２０１２／１４６６２８号及び国際公開第２０１２／１０７４１７号に記載されている特定のＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、本明細書に記載される以下のポリペプチド配列を含むことを特徴とする：
Figure 2019108341
Figure 2019108341
Figure 2019108341
国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されているように、ＩＬ−２変異体はＩＬ−２受容体のα−サブユニットへの結合親和性が低下している。β−及びγ−サブユニット（それぞれＣＤ１２２及びＣＤ１３２としても知られている）と一緒に、α−サブユニット（ＣＤ２５としても知られている）は、ヘテロ三量体高親和性ＩＬ−２受容体を形成し、一方β−及びγ−サブユニットのみからなる二量体受容体は、中等度親和性ＩＬ−２受容体と呼ばれている。国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように、ＩＬ−２受容体のαサブユニットへの結合が減少したＩＬ−２変異体ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチドと比較して、調節性Ｔ細胞におけるＩＬ−２シグナル伝達を誘導する能力の低下を有し、Ｔ細胞においてより少ない活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）を誘導し、そしてインビボで減少した毒性プロファイルを有する。毒性が低下したそのようなＩＬ−２変異体の使用は、Ｆｃドメインの存在に起因して長い血清半減期を有する、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインにおいて特に有利である。ＩＬ−２変異体は、野生型ＩＬ−２と比較して、ＩＬ−２受容体のα−サブユニット（ＣＤ２５）に対するＩＬ−２変異体の親和性を減少又は消滅させるが、ＩＬ−２変異体の中等度親和性ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２受容体のβサブユニット及びγサブユニットからなる）への親和性を保存する少なくとも１つのアミノ酸変異を含み得る。１つ又は複数のアミノ酸変異は、アミノ酸置換であり得る。ＩＬ−２変異体は、ヒトＩＬ−２（配列番号２）の残基４２、４５及び７２に対応する位置から選択されるる１つ、２つ又は３つの位置で、１つ、２つ又は３つのアミノ酸置換を含み得る。ＩＬ−２変異体は、ヒトＩＬ−２の残基４２、４５及び７２に対応する位置で、３つのアミノ酸置換を含み得る。ＩＬ−２変異体は、ヒトＩＬ−２の変異体であり得る。ＩＬ−２変異体は、アミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇを含むヒトＩＬ−２であり得る。ＩＬ−２変異体は、ＩＬ−２のＯ−グリコシル化部位を除去するヒトＩＬ−２の３位に対応する位置にアミノ酸変異を付加的に含み得る。特に、前記の付加的アミノ酸変異は、アラニン残基によってトレオニン残基を置換するアミノ酸置換である。本発明において有用な特定のＩＬ−２変異体は、ヒトＩＬ−２（配列番号２として示される）の残基３，４２，４５及び７２に対応する位置に４つのアミノ酸置換を含む。具体的なアミノ酸置換はＴ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇである。国際公開第２０１２／１４６６２８号の実施例に示されるように、前記四重変異体ＩＬ−２ポリペプチド（ＩＬ−２ｑｍ）は、ＣＤ２５に対する検出可能な結合を示さず、Ｔ細胞におけるアポトーシスを誘導する能力が低下し、Ｔｒｅｇ細胞においてＩＬ−２シグナル伝達を誘導する能力が低下し、インビボでの毒性プロファイルの低下を示す。しかし、それはエフェクター細胞においてＩＬ−２シグナル伝達を活性化する能力を保持しており、エフェクター細胞の増殖を誘導し、ＮＫ細胞による二次的サイトカインとしてＩＦＮ−γを生成する。上記の記載の何れかによるＩＬ−２変異体は、発現の増加又は安定性などの更なる利点を提供する更なる変異を含み得る。例えば、１２５位のシステインは、ジスルフィド架橋ＩＬ−２二量体の形成を回避するためにアラニンなどの中性アミノ酸で置換されてもよい。従って、ＩＬ−２変異体は、ヒトＩＬ−２の残基１２５に対応する位置に更なるアミノ酸変異を含む。前記付加的アミノ酸変異はアミノ酸置換Ｃ１２５Ａであり得る。ＩＬ−２変異体は、配列番号３のポリペプチド配列を含み得る。
国際公開第２０１２／１４６６２８号及び国際公開第２０１２／１０７４１７号に記載されているように、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの腫瘍標的化は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原を標的化することによって達成され得る。従って、免疫サイトカインは抗原結合部分を有する。抗原結合部分は、一般に、特定の抗原決定基に結合するポリペプチド分子であり、それが付着している実体（例えばエフェクター部分及びＦｃドメイン）を標的部位、例えば抗原決定基を有する特定のタイプの腫瘍細胞又は腫瘍間質に導くことができる。免疫サイトカインは、例えば、腫瘍細胞の表面上、他の異常細胞の表面上、血清中に遊離して、及び／又は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）中に見いだされる抗原決定基に結合することができる。抗原結合部分は、病理学的状態に関連する抗原、例えば腫瘍細胞上に提示される抗原、又は腫瘍細胞環境中又は炎症部位に向けられ得る。
腫瘍抗原の非限定的例には、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチターゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ−結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）及びその免疫原性エピトープＣＡＰ−１及びＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）及びその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２、及びＰＳＡ−３、前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、腫瘍抗原のＭＡＧＥファミリー（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、ＧＡＧＥ−腫瘍抗原ファミリー（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニン及びγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２及びＧＤ２ガングリオシド、ウイルス生成物、例えばヒト乳頭腫ウイルスタンパク質、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、Ｐ１Ａ、ＥＢＶ−コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１及びＣＴ−７、及びｃ−ｅｒｂＢ−２が含まれる。ＥＣＭ抗原の非限定例は、シンデカン、ヘパラナーゼ、インテグリン、オステオポンチン、リンク、カドヘリン、ラミニン、ラミニンタイプＥＧＦ、レクチン、フィブロネクチン、ノッチ、テネイシン、及びマトリキシン（ｍａｔｒｉｘｉｎ）を含む。細胞表面抗原の非限定的な例には、ＦＡＰ、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＣＤ２２（Ｂ−細胞受容体）、ＣＤ２３（低親和性ＩｇＥ受容体）、ＣＤ３０（サイトカイン受容体）、ＣＤ３３（骨髄系細胞表面抗原）、ＣＤ４０（腫瘍壊死因子受容体）、ＩＬ−６Ｒ（ＩＬ６受容体）、ＣＤ２０、ＭＣＳＰ、及びＰＤＧＦβＲ（β血小板由来増殖因子受容体）が含まれる。特定の実施態様では、抗原はヒト抗原である。
特定の実施態様において、抗原結合部分は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境において提示される抗原に向けられる。特定の実施態様において、抗原結合部分は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）及び癌胎児性抗原（ＣＥＡ）の群から選択される抗原に向けられる。免疫サイトカインは、２つ以上の抗原結合部分を含むことができ、これらの抗原結合部分のそれぞれは、同じ抗原決定基に特異的に結合する。
抗原結合部分は、抗原決定基に特異的に結合することを保持する抗体又はその断片の任意のタイプとすることができる。抗体断片は、限定するものではないが、ＶＨ断片、ＶＬ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断片、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ（例えばHudson and Souriau, Nature Med 9, 129-134 (2003)を参照）を含む。特定の実施態様において、抗原結合部分は、Ｆａｂ分子である。一実施態様において、前記Ｆａｂ分子はヒトである。別の実施態様において、前記Ｆａｂ分子はヒト化されている。また別の実施態様では、Ｆａｂ分子は、ヒト重鎖及び軽鎖定常領域を含む。
好ましい実施態様において、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの腫瘍標的化は、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）を標的化することによって達成され得る。ＣＥＡ標的化は、抗ＣＥＡ抗体又はその抗原結合断片により達成され得る。抗ＣＥＡ抗体は、配列番号６６又は配列番号６８の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である重鎖可変領域配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。抗ＣＥＡ抗体は、配列番号６５又は配列番号６７の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である軽鎖可変領域配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。抗ＣＥＡ抗体は、配列番号６６の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である重鎖可変領域配列、又は機能性を保持しているそのバリアント、及び配列番号６５の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である軽鎖可変領域配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。抗ＣＥＡ抗体は、配列番号６８の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である重鎖可変領域配列、又は機能性を保持しているそのバリアント、及び配列番号６７の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である軽鎖可変領域配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。抗ＣＥＡ抗体は、配列番号６６の重鎖可変領域配列、及び配列番号６５の軽鎖可変領域配列を含み得る。抗ＣＥＡ抗体は、配列番号６８の重鎖可変領域配列、及び配列番号６７の軽鎖可変領域配列を含み得る。
国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されているように、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＣＥＡに特異的なＦａｂ重鎖が、ノブ修飾を含むＦｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次にＩＬ−２ポリペプチドとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド配列を含み得る。ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号８２、配列番号８３及び配列番号８４からなる群から選択されるポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＣＥＡに特異的なＦａｂ重鎖が、ホール修飾を含むＦｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド配列を含み得る。ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号８５又は配列番号８６のポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＣＥＡに特異的なＦａｂ軽鎖を含み得る。ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号８７又は配列番号８８のポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号８５、配列番号８２及び配列番号８７のポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号８４、配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合によって共有結合していてもよい。Ｆｃドメインポリペプチド鎖は、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇと呼ぶことができる）を含み得る。
国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されているように、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、（例えば、国際公開第２０１２／１４６６２８号の実施例１及び２に記載の配列番号８４，８６及び８８として示される配列を有する、抗ＣＥＡ抗体ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１及びＩＬ−２四重変異体（ＩＬ−２ｑｍ、配列番号３）に基づくＣＥＡ標的化ＩｇＧ−ＩＬ−２ｑｍ融合タンパク質であり得る。配列番号８４，８６及び８８として示される配列を有するＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、本明細書では「ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ」と呼ばれる。
好ましい実施態様において、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの腫瘍標的化は、国際公開第２０１２／１４６６２８号及び国際公開第２０１２／１０７４１７号に記載されるように、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を標的化することによって達成され得る。ＦＡＰ標的化は、抗ＦＡＰ抗体又はその抗原結合断片により達成され得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２及び配列番号６４からなる群から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号８、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１及び配列番号６３からなる群から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２及び配列番号６４からなる群から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列、又は機能性を保持しているそのバリアント、及び配列番号５、配列番号６、配列番号８、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１及び配列番号６３からなる群から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号４２の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である重鎖可変領域配列、及び配列番号４１の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である軽鎖可変領域配列を含み得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号５８の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である重鎖可変領域配列、及び配列番号５７の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である軽鎖可変領域配列を含み得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号１２の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である重鎖可変領域配列、及び配列番号１１の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である軽鎖可変領域配列を含み得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号７の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である重鎖可変領域配列、及び配列番号６の配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である軽鎖可変領域配列を含み得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号４２の重鎖可変領域配列、及び配列番号４１の軽鎖可変領域配列を含み得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号５８の重鎖可変領域配列、及び配列番号５７の軽鎖可変領域配列を含み得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号１２の重鎖可変領域配列、及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含み得る。抗ＦＡＰ抗体は、配列番号７の重鎖可変領域配列、及び配列番号６の軽鎖可変領域配列を含み得る。
国際公開第２０１２／１４６６２８号及び国際公開第２０１２／１０７４１７号に記載されているように、ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＦＡＰに特異的なＦａｂ重鎖が、ノブ修飾を含むＦｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次にＩＬ−２ポリペプチドとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド配列を含み得る。ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３からなる群から選択されるポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＦＡＰに特異的なＦａｂ重鎖が、ホール修飾を含むＦｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド配列を含み得る。ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号７４、配列番号７５及び配列番号７６からなる群から選択されるポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＦＡＰに特異的なＦａｂ軽鎖を含み得る。ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号７７又は配列番号７８のポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号７７のポリペプチド配列、配列番号７４のポリペプチド配列、及び配列番号６９及び配列番号７２からなる群から選択されるポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号７５、配列番号７０及び配列番号７７のポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号７６、配列番号７１及び配列番号７８のポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号７７、配列番号７４及び配列番号７２のポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号７８、配列番号７６及び配列番号７３のポリペプチド配列、又は機能性を保持しているそのバリアントを含み得る。ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合によって共有結合される。Ｆｃドメインサブユニットは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇと呼ぶことができる）をそれぞれ含み得る。
国際公開第２０１２／１４６６２８号及び国際公開第２０１２／１０７４１７号に記載されているように、ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、（例えば、国際公開第２０１２／１４６６２８号の実施例１及び２並びに国際公開第２０１２／１０７４１７号の実施例１に記載される配列番号７９、８０及び８１として示される配列を有する、抗ＦＡＰ抗体４Ｂ９及びＩＬ−２四重変異体（ＩＬ−２ｑｍ、配列番号３）に基づくＦＡＰ標的化ＩｇＧ−ＩＬ−２ｑｍ融合タンパク質であり得る。配列番号７９、８０及び８１として示される配列を有するＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、本明細書では「ＦＡＰ−ＩＬ２ｖ」と呼ばれる。
本明細書に記載される併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に結合する抗体、及びＩＬ−２受容体のサブユニットに対する結合親和性が低下したＩＬ−２変異体を含み得る。腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に結合する抗体、及びＩＬ−２受容体のサブユニットに対する結合親和性が低下したＩＬ−２変異体から本質的になり得る。抗体は、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体であってもよい。腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ＩＬ−２受容体のサブユニットへの結合親和性が低下した単一のＩＬ−２変異体を含み得る（すなわち、せいぜい１つのＩＬ−２変異体部分が存在する）。
本明細書に記載されるように、本明細書に記載される併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に結合する抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメイン並びに、２つのサブユニットからなり、２つの非同一ポリペプチド鎖のヘテロ二量化を促進する修飾を含むＦｃドメインを含み得る。本明細書に記載される併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に結合する抗体の重鎖可変ドメイン及びノブ変異を含むＦｃドメインサブユニット、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に結合する抗体の重鎖可変ドメイン及びホール変異を含むＦｃドメインサブユニット、及び腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される抗原に結合する抗体の軽鎖可変ドメイン、及びＩＬ−２受容体のサブユニットに対する結合親和性が低減されたＩＬ−２変異体を含む。免疫サイトカインは、２つの非同一ポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を促進する修飾を含むＦｃドメインを含み得る。「ヘテロ二量体化促進修飾」は、ホモ二量体を形成する同一なポリペプチドとのポリペプチドの会合を低減するか防止する、ペプチド骨格の操作又はポリペプチドの翻訳後修飾である。本明細書中で使用されるヘテロ二量化を促進する修飾は、特に、２つのポリペプチドの会合を促進するように相互に相補的である、二量体を形成することが望まれる２つのポリペプチドのそれぞれになされる別々の修飾を含む。例えば、ヘテロ二量体化促進修飾は、その会合をそれぞれ立体的又は静電気的に好ましくするために、二量体を形成することが所望されるポリペプチドの一方又は双方の構造又は電荷を改変しうる。ヘテロ二量体化は、例えばＦｃドメインの２つのサブユニットなどの２つの同一ではないポリペプチド間で起こり、ここで各サブユニットに融合した更なるイムノコンジュゲート成分（例えば、抗原結合部分、エフェクター部分）は同じではない。本発明によるイムノコンジュゲートでは、ヘテロ二量体化促進修飾はＦｃドメインにある。幾つかの実施態様では、ヘテロ二量体化促進修飾は、アミノ酸変異、特にアミノ酸置換を含む。特定の実施態様では、ヘテロ二量体化促進修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの各々における別々のアミノ酸変異、特にアミノ酸置換を含む。ヒトＩｇＧのＦｃドメインの２つのポリペプチド鎖間の最も広範なタンパク質−タンパク質相互作用の部位は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインにある。従って、一実施態様では、前記修飾はＦｃドメインのＣＨ３ドメイン内で行われる。特定の実施態様において、前記修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一つにおけるノブ修飾及びＦｃドメインの２つのサブユニットの他方におけるホール修飾を含む、ノブ・イントゥ・ホール（knob into hole）修飾である。
ノブ・イントゥ・ホール技術は、例えば、米国特許第５７３１１６８号；同第７６９５９３６号；Ridgway et al., Prot Eng 9, 617-621 (1996)及びCarter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)に記載されている。一般に、本方法は、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨げるように、隆起が空洞内に配置することができるように、第一のポリペプチドの界面での突起（「ノブ」）及び第二ポリペプチドの界面における対応する空洞（「ホール」）を導入することを含む。隆起は、第１のポリペプチドの接触面由来の小さなアミノ酸側鎖を大きな側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）で置き換えることにより構築される。隆起と同じか又は同様のサイズの相補的空洞は、大きなアミノ酸側鎖を小さいもの（例えばアラニン又はスレオニン）で置き換えることにより、第２のポリペプチドの接触面に作り出される。隆起と空洞は、ポリペプチドをコードする核酸を、例えば部位特異的突然変異誘発により、又はペプチド合成により、変えることにより作り出すことができる。特定の実施態様において、ノブ修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの片方でアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、そしてホール修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの他方でアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む。更なる特定の実施態様において、ノブ修飾を含むＦｃドメインのサブユニットは、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃを更に含み、ホール修飾を含むＦｃドメインのサブユニットは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃを更に含む。これらの２つのシステイン残基の導入は、Ｆｃ領域の２つのサブユニット間のジスルフィド架橋の形成をもたらし、更に二量体を安定化させる（Carter, J Immunol Methods 248, 7-15 (2001)）。Ｆｃ領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。本明細書において使用されるＦｃドメインの「サブユニット」は、二量体Ｆｃドメインを形成する二つのポリペプチドの一方、すなわち、免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含み、安定な自己会合能を有するポリペプチドを指す。例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメインを含む。
別の実施態様において、２つの非同一ポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を促進する修飾は、国際公開第２００９／０８９００４号に記載されるように、静電的ステアリング効果を媒介する修飾を含む。一般に、この方法は、ホモ二量体形成は静電的に不利になるが、ヘテロ二量体は静電的に有利になるように、２つのポリペプチド鎖の界面で、荷電したアミノ酸残基による一又は複数のアミノ酸残基の置換を含む。
ＩＬ−２受容体のサブユニットへの結合親和性が低下したＩＬ−２変異体は、ノブ修飾を含むＦｃドメインのサブユニットのカルボキシ末端アミノ酸に融合され得る。理論に束縛されることを望まないが、Ｆｃドメインのノブ含有サブユニットへのＩＬ−２変異体の融合は、２つのＩＬ−２変異体ポリペプチドを含むホモ二量体免疫サイトカインの生成を更に最小限に抑えるであろう（２つのノブ含有ポリペプチドの立体的衝突）。
国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように、免疫サイトカインのＦｃドメインは、Ｆｃ受容体に対する結合親和性が改変されるように、具体的には非操作型Ｆｃドメインに比べて、Ｆｃγ受容体に対する結合親和性を改変されるように操作され得る。補体成分、具体的にはＣ１ｑに対するＦｃドメインの結合は、国際公開第２００２／１４６６２８号に記載されているように改変され得る。Ｆｃドメインは、その標的組織における良好な蓄積及び好ましい組織−血液分配比率に寄与する長い血清半減期を含む好ましい薬物動態学的特性をイムノコンジュゲートに付与する。しかし、同時期に、好適な抗原保有細胞に対するよりもむしろＦｃ受容体を発現する細胞に対するイムノコンジュゲートの所望されない標的化を導く。更に、Ｆｃ受容体シグナル伝達経路の同時活性化はサイトカイン放出につながる可能性があり、イムノコンジュゲートのエフェクター部分と長い半減期とが組み合わさって、サイトカイン受容体の過剰な活性化及び全身投与の際に重篤な副作用をもたらす。これに伴い、従来のＩｇＧ−ＩＬ−２イムノコンジュゲートは注入反応と関連していると記載されている（例えばKing et al., J Clin Oncol 22, 4463-4473 (2004)を参照）。
従って、免疫サイトカインのＦｃドメインは、Ｆｃ受容体に対する結合親和性が低下するように操作され得る。一つのそうした実施態様において、Ｆｃドメインは、ＦｃドメインのＦｃ受容体への結合親和性を低下させる１つ又は複数のアミノ酸突然変異を含む。典型的には、同一の一以上のアミノ酸変異がＦｃドメインの２つのサブユニットの各々に存在する。一実施態様において、前記アミノ酸変異は、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を少なくとも２倍、少なくとも５倍、又は少なくとも１０倍低下させる。Ｆｃ受容体に対するＦｃドメインの結合親和性を低下させる複数のアミノ酸変異が存在する実施態様において、これらのアミノ酸変異は、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、又は更に少なくとも５０倍低下させ得る。一実施態様において、操作されたＦｃドメインを含むイムノコンジュゲートは、非操作型Ｆｃドメインを含んでなるイムノコンジュゲートと比較した場合、Ｆｃ受容体に対する結合親和性の２０％未満、具体的には１０％未満、より具体的には５％未満を示す。一実施態様では、Ｆｃ受容体は活性化Ｆｃ受容体である。特定の実施態様において、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体であり、より具体的にはＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ又はＦｃγＲＩＩａ受容体である。好ましくは、これら受容体の各々への結合は低減する。幾つかの実施態様では、補体成分への結合親和性、特にＣ１ｑへの結合親和性も低下する。一実施態様では、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合親和性は低下しない。ＦｃＲｎへの実質的に類似な結合、すなわち、前記受容体への免疫グロブリンの結合親和性の保存は、Ｆｃドメイン（又は前記Ｆｃドメインを含んでなるイムノコンジュゲート）が、ＦｃＲｎに対し、非操作型形態のＦｃドメイン（又は前記非操作型形態のＦｃドメインを含んでなるイムノコンジュゲート）の約７０％より大きな結合親和性を呈する場合に達成される。Ｆｃドメイン又は前記Ｆｃドメインを含む本発明のイムノコンジュゲートは、その親和性の約８０％を越える、又は更に約９０％を越える親和性を示す場合がある。一実施態様では、アミノ酸変異はアミノ酸置換である。一実施態様では、ＦｃドメインはＰ３２９の位置にアミノ酸置換を含む。より特異的な実施態様では、アミノ酸置換は、Ｐ３２９Ａ又はＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである。一実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７及びＰ３３１から選択される位置に更なるアミノ酸置換を含む。より特定の実施態様では、更なるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ又はＰ３３１Ｓである。特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、位置Ｐ３２９、Ｌ２３４及びＬ２３５にアミノ酸置換を含む。更に特定の実施態様では、Ｆｃドメインはアミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）を含む。国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載され、その全体が参照により本明細書に援用されるように、アミノ酸置換のこの組み合わせは、ＩｇＧのＦｃドメインのＦｃγ受容体結合をほとんど完全に消滅させる。国際公開第２０１２／１３０８３１号には、このような変異Ｆｃドメインを調製する方法、及びＦｃ受容体結合又はエフェクター機能などのその特性を決定する方法も記載されている。Ｆｃ領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
変異体Ｆｃドメインは、当技術分野で良く知られており、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように、遺伝子的又は化学的方法を用いて、アミノ酸の欠失、置換、挿入又は修飾によって調製することができる。遺伝学的方法は、コード化ＤＮＡ配列の部位特異的突然変異、ＰＣＲ、遺伝子合成などを含みうる。正確なヌクレオチドの変化は、例えば配列決定により検証することができる。
一つの実施態様において、Ｆｃドメインは、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように、非操作型Ｆｃドメインと比較して、減少したエフェクター機能を有するように操作される。
エフェクター機能の減少は、限定されないが、以下の一つ又は複数を含み得る：抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の減少、サイトカイン分泌の減少、抗原提示細胞による免疫複合体媒介性の抗原取り込みの減少、ＮＫ細胞への結合の減少、マクロファージへの結合の減少、単球への結合の減少、多形核細胞への結合の減少、直接的シグナル伝達誘導性アポトーシスの減少、標的結合抗体の架橋の減少、樹状細胞成熟の減少、又はＴ細胞プライミングの減少。
ＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１抗体と比較して、Ｆｃ受容体への結合親和性の低下及びエフェクター機能の減少を呈示する。従って、幾つかの実施態様において、本発明のＴ細胞活性化二重特異性抗原結合分子のＦｃドメインは、ＩｇＧ４のＦｃドメイン、特にヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。一実施態様では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、Ｓ２２８の位置におけるアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含む。Ｆｃ受容体に対する結合親和性及び／又はそのエフェクター機能を更に低下させるために、一実施態様において、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、位置Ｌ２３５でアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｌ２３５Ｅを含む。別の実施態様では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、Ｐ３２９の位置におけるアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｐ３２９Ｇを含む。特定の実施態様において、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、位置Ｓ２２８、Ｌ２３５及びＰ３２９でのアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ及びＰ３２９Ｇを含む。このようなＩｇＧ４ Ｆｃドメイン変異体とそれらのＦｃγ受容体結合特性は国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載される併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
２４３．５５．Ｓ７０、２４３．５５．Ｈ１、２４３．５５．Ｈ１２、２４３．５５．Ｈ３７、２４３．５５．Ｈ７０、２４３．５５．Ｈ８９、２４３．５５．Ｓ１、２４３．５５．５、２４３．５５．８、２４３．５５．３０、２４３．５５．３４、２４３．５５．Ｓ３７、２４３．５５．４９、２４３．５５．５１、２４３．５５．６２、及び２４３．５５．８４からなる群より選択される。
これら抗体は、国際公開第２０１０／７７６３４号（配列は国際公開第２０１０／７７６３４号の図１１に示されている）に記載されており、本明細書に記載されるように以下のＶＨ及びＶＬ配列を含むことを特徴とする。
Figure 2019108341
本発明の実施態様において、本明細書に記載される併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
及び
本併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
本発明の実施態様において、本明細書に記載される併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
及び
本併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
実施態様において、本明細書に記載される併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列
含むことを特徴とする。
実施態様において、本明細書に記載される併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列
を含むことを特徴とする。
実施態様において、本明細書に記載される併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列
を含むことを特徴とする。
実施態様において、本明細書に記載される併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列
を含むことを特徴とする。
実施態様において、本明細書に記載される併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
一実施態様において、併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
本発明の好ましい実施態様において、本明細書に記載される併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、かつ
本併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
本発明の好ましい実施態様において、本明細書に記載される併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、かつ
本併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び所望の抗原結合活性を示す限りにおいて抗体断片を含む。
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、及び単一ドメイン抗体が含まれる。所定の抗体断片の総説については、Hudson et al., Nat Med 9, 129-134 (2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)のPluckthuenを参照；また、国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。ダイアボディは、二価又は二重特異性でありうる二つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号； Hudson et al., Nat Med 9, 129-134 (2003)；及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照。トリアボディ及びテトラボディもHudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。ある実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ、Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６（Ｂ１）号を参照）。抗体断片は様々な技術で作製することができ、このような技術には、限定されないが、本明細書に記載するように、インタクトな抗体のタンパク質消化、並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による生産が含まれる。
用語「抗原結合ドメイン」又は「抗体の抗原結合部分」は、本明細書中で使用される場合、抗原の一部又は全体に結合し、かつ抗原の一部又は全体に相補的な領域を含む抗体の部分を指す。従って、この用語は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。抗原結合ドメインは、例えば、一又は複数の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも呼ばれる）により提供される。特に、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。抗体の抗原結合部分は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」又は「ＦＲ」領域は、ここで定義する超可変領域の残基以外の可変ドメイン残基である。従って、抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインは、ＮからＣ末端に、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与する領域であり、抗体の特性を定める。ＣＤＲ及びＦＲは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991) の標準的定義に従って決定され、及び／又は「超可変ループ」からの残基である。
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。通常、天然型抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、各々が四つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と三つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む類似構造を有する。例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co. 91頁、 (2007)を参照。抗原結合特異性を付与するには、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分である。
「エピトープ」なる用語は、抗体に特異的に結合することが可能なＣＥＡ又はヒトＰＤ−Ｌ１などの抗原のタンパク質決定基を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の、化学的に活性な表面のグルーピングからなり、通常エピトープは特異的な三次元構造の特徴並びに特異的な電荷特性を有する。立体構造及び非立体構造のエピトープは、変性溶媒の存在下で、後者ではなく前者への結合が失われることにおいて区別される。
本明細書の用語「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域を含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界ははわずかに変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６から又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端へ伸展するように定義されている。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在しているか、又は存在していない場合がある。本明細書に明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991。抗体の「Ｆｃドメイン」は、抗体の抗原への結合に直接的にかかわらないが、様々なエフェクター機能を示す。「抗体のＦｃ部分」は、当業者に周知であり、抗体のパパイン切断に基づいて定義される用語である。抗体又は免疫グロブリンは、その重鎖定常領域のアミノ酸配列に応じて、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭのクラスに分類され、これらのうち幾つかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に更に分類され得る。重鎖定常領域に応じて、免疫グロブリンの異なるクラスは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。抗体のＦｃドメインは、補体活性化、Ｃ１ｑ結合及びＦｃ受容体結合に基づいて、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害）並びにＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）に直接関与する。補体活性化（ＣＤＣ）は、ほとんどのＩｇＧ抗体サブクラスのＦｃドメインへの補体因子Ｃ１ｑの結合により開始される。補体系に対する抗体の影響は特定の条件に依存し、Ｃ１ｑへの結合は、Ｆｃドメインに画定された結合部位により引き起こされる。そのような結合部位は、当該技術分野において知られており、例えば、Boackle, R.J., et al., Nature 282 (1979) 742-743; Lukas, T.J., et al., J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560; Brunhouse, R., and Cebra, J.J., Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917; Burton, D.R., et al., Nature 288 (1980) 338-344; Thommesen, J.E., et al., Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004; Idusogie, E.E., et al., J. Immunol.164 (2000) 4178-4184; Hezareh, M., et al., J. Virology 75 (2001) 12161-12168; Morgan, A., et al., Immunology 86 (1995) 319-324; EP 0 307 434により記載される。このような結合部位は、例えば、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１，及びＰ３２９である（Ｋａｂａｔ、Ｅ．ＡのＥＵインデックスに従った番号付け、上記参照）。通常、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３の抗体は、補体活性化及びＣ１ｑ及びＣ３結合を示すが、ＩｇＧ４は補体系を活性化させず、Ｃ１ｑ及びＣ３に結合しない。
一実施態様では、本明細書に記載される免疫サイトカインの抗体成分又は抗体は、ヒト起源に由来するＦｃドメイン及び好ましくはヒト定常領域の他の全ての部分を含む。本明細書で使用される場合、用語「ヒト起源由来のＦｃドメイン」とは、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のヒト抗体のＦｃドメインの何れか、好ましくはヒトＩｇＧ１サブクラスからのＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ１サブクラスからの変異Ｆｃドメイン（一実施態様において、Ｌ２３４Ａ＋Ｌ２３５Ａにおける変異を含む）、ヒトＩｇＧ４サブクラスからのＦｃドメイン又はヒトＩｇＧ４サブクラスからの変異Ｆｃドメイン（一実施態様において、Ｓ２２８Ｐにおける変異を含む）であるＦｃドメインを意味する。好ましい一実施態様では、ヒト重鎖定常領域は配列番号５８（ヒトＩｇＧ１サブクラス）であり、別の好ましい実施態様ではヒト重鎖定常領域は配列番号５９（変異Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを有するヒトＩｇＧ１サブクラス）であり、別の好ましい実施態様ではヒト重鎖定常領域は配列番号６０（ヒトＩｇＧ４サブクラス）であり、別の好ましい実施態様ではヒト重鎖定常領域は配列番号６１（変異Ｓ２２８Ｐを有するヒトＩｇＧ４サブクラス）である。一実施態様では、前記抗体は、低下した又は最少のエフェクター機能を有する。一実施態様では、最少のエフェクター機能は、エフェクターを有さない（ｅｆｆｅｃｔｏｒｌｅｓｓ）Ｆｃ変異に起因する。一実施態様では、エフェクターを有さないＦｃ変異は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ又はＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ又はＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである。一実施態様では、エフェクターを有さないＦｃ変異は、抗体の各々について、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ及びＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ（ＥＵ番号付け）を含む（からなる）群から互いに独立して選択される。
一実施態様において、本明細書に記載される免疫サイトカインの抗体成分又は抗体は、ヒトＩｇＧクラスのもの（すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４サブクラスのもの）である。
好ましい実施態様において、本明細書に記載される免疫サイトカインの抗体成分又は抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのもの又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。
一実施態様において、本明細書に記載される免疫サイトカインの抗体成分又は抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。一実施態様において、本明細書に記載される免疫サイトカインの抗体成分又は抗体は、ヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。
一実施態様において、本明細書に記載される免疫サイトカインの抗体成分又は抗体は、定常鎖がヒト起源のものであることを特徴とする。このような定常鎖は、先端技術において知られており、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｅ．Ａ．により記載される（例えば、Johnson, G. and Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218を参照）。例えば、有用なヒト重鎖定常領域は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。例えば、有用なヒト軽鎖定常領域は、配列番号１１３のカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。
本発明で使用される「核酸」又は「核酸分子」なる用語は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことを意図している。核酸分子は一本鎖又は二本鎖であってよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
この出願中において使用される「アミノ酸」なる用語は、アラニン（３文字コード：ａｌａ、１文字コード：Ａ）、アルギニン（ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（ａｓｐ、Ｄ）、システイン（ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（ｓｅｒ、Ｓ）、スレオニン（ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（ｔｙｒ、Ｙ）、及びバリン（ｖａｌ、Ｖ）を含む天然に生じるカルボキシα−アミノ酸の群を示す。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントを得るように配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部とみなさない、参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含めた、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書において、アミノ酸配列同一性％の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、ジェネンテック社によって著作され、ソースコードは米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。また、ＡＬＩＧＮ−２は、ジェネンテック社（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）のＶ４．０Ｄを含めたＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されて変動しない。アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ｂとの又はそれに対する、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂと若しくはそれに対して、ある程度のアミノ酸配列同一性％を有するか又は含む所与のアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により、そのプログラムのＡ及びＢのアラインメントにおいて完全に一致するとされたアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限り、本明細書で使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落で説明したように得られる。少なくとも、例えば、本発明の参照ヌクレオチド配列と少なくとも例えば９５％「同一」であるヌクレオチド配列を有する核酸又はポリヌクレオチドにより、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列と、ポリヌクレオチド配列が参照ヌクレオチド配列のそれぞれ１００のヌクレオチドにつき最大５ポイントの変異を含んでよいという点以外は同一であることが意図される。換言すれば、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列中最大５％のヌクレオチドが削除又は別のヌクレオチドで置換されてよいか、又は参照配列に含まれる全てのヌクレオチドの最大５％まで複数のヌクレオチドが参照配列に挿入されてよい。参照配列のこのような改変は、参照ヌクレオチド配列の５’又は３’末端の位置で、又はこれら末端の間の何れかで、参照配列に含まれる残基中において個々に散在して、又は参照配列内部の一又は複数の連続する群において生じ得る。実際に、何れか特定のポリヌクレオチド配列が、本発明のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるかどうかは、ポリペプチドについて上述したもの（例えばＡＬＩＧＮ−２）などの既知のコンピュータープログラムを用いて常套的に決定することができる。
「発現カセット」という用語は、標的細胞中の特定の核酸の転写を可能にする一連の特定の核酸エレメントを用いて、組換え又は合成により生成されたポリヌクレオチドを指す。組換え発現カセットは、プラスミド、染色体、ミトコンドリアＤＮＡ、色素体ＤＮＡ、ウイルス又は核酸断片に組み込むことができる。典型的には、発現ベクターの組換え発現カセット部分は、とりわけ、転写されるべき核酸配列及びプロモーターを含む。ある実施態様では、本発明の発現カセットは、本明細書に記載されるポリペプチド又はその断片をコードするポリヌクレオチド配列を含む。
用語「ベクター」又は「発現ベクター」は、「発現構築物」と同義であり、標的細胞内においてそれが作動可能に結合する特定の遺伝子を導入しその発現を誘導するために使用されるＤＮＡ分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。発現ベクターは、発現カセットを含む。発現ベクターは、大量の安定なｍＲＮＡの転写を可能にする。発現ベクターが標的細胞内部に入ると、遺伝子によってコードされるリボ核酸分子又はタンパク質が、細胞転写及び／又は翻訳機構によって産生される。一実施態様では、発現ベクターは、本明細書に記載されるポリペプチド又はその断片をコードするポリヌクレオチド配列を含む発現カセットを含む。
「人工的」なる用語は、合成の又は非宿主細胞由来の組成物、例えば化学的に合成されたオリゴヌクレオチドを指す。
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」は、互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、それには、継代の数に関係なく、それに由来する初代形質転換細胞及び子孫が含まれる。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一ではないかもしれないが、突然変異が含まれる場合がある。本明細書には、最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異型子孫が含まれる。宿主細胞は、本明細書に記載されるポリペプチドを生成するために使用され得る任意のタイプの細胞系である。一実施態様において、宿主細胞は、そのＦｃ領域に修飾されたオリゴ糖を有するポリペプチドの産生を可能にするように操作される。特定の実施態様において、宿主細胞は、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）活性を有する一以上のポリペプチドの増加したレベルを発現するように操作されている。特定の実施態様において、宿主細胞は、α−マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）活性を有する一以上のポリペプチドの増加したレベルを発現するように更に操作されている。宿主細胞は、培養細胞、例えば幾つか例を挙げると、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＹＯ骨髄腫細胞、Ｐ３Ｘ６３マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、又はハイブリドーマ細胞といった哺乳動物の培養細胞、酵母細胞、昆虫細胞、及び植物細胞を含み、更には、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、又は培養された植物若しくは動物組織内部に含まれる細胞も含む。
本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、例えば、固相ペプチド合成（例えばメリフィールド固相合成）又は組換え生成によって得ることができる。組換え産生のために、例えば上述したように、免疫サイトカイン（断片）をコードする一又は複数のポリヌクレオチドが単離され、宿主細胞内での更なるクローニング及び／又は発現のために一又は複数のベクターに挿入される。このようなポリヌクレオチドは、一般的な手順を使用して容易に単離され配列決定されうる。一実施態様において、ポリヌクレオチドの一又は複数を含むベクタ−、好ましくは発現ベクターが提供される。当業者によく知られている方法は、適切な転写／翻訳制御シグナルとともに、イムノコンジュゲート（断片）のコード配列を含む発現ベクターを構築するために使用することができる。これらの方法は、インビトロでの組換えＤＮＡ技術、合成技術及びインビボでの組換え／遺伝子組換えを含む。例えば、Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1989)；及びAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y (1989)に記載される技術を参照。発現ベクターはプラスミド、ウイルスの一部とすることができるか、又は核酸断片であり得る。発現ベクターは、免疫サイトカイン（断片）をコードするポリヌクレオチド（すなわちコーディング領域）がプロモーター及び／又は他の転写又は翻訳調節要素と作動可能に結合してクローン化される発現カセットを含む。本明細書で使用する「コード領域」は、アミノ酸に翻訳されるコドンからなる核酸の一部分である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、又はＴＡＡ）はアミノ酸に翻訳されないが、存在する場合にはコード領域の一部であると考えられるが、任意の隣接配列、例えばプロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロン、５’及び３’非翻訳領域などは、コード領域の一部ではない。２つ以上のコード領域が、単一のポリヌクレオチド構築物中に、例えば単一のベクター上に、又は別々のポリヌクレオチド構築物中に、例えば別の（異なる）ベクター上に存在することができる。更に、任意のベクターは、単一のコード領域を含んでいてもよいし、２つ以上のコード領域を含んでいてもよく、例えばベクターは、タンパク質切断を介して、翻訳後又は翻訳と同時に最終タンパク質中に分離された一又は複数のポリペプチドをコードしてもよい。加えて、ベクター、ポリヌクレオチド、又は核酸は、免疫サイトカイン（断片）、又はバリアント又はその誘導体をコードするポリヌクレオチドに融合又は非融合された異種性コーディング領域をコードしうる。異種コード領域は、限定しないが、特殊化要素又はモチーフ、例えば分泌シグナルペプチド又は異種機能ドメインを含む。作動可能に結合とは、ポリペプチドなどの遺伝子産物のコード領域が、制御配列の影響下又は制御下において遺伝子産物の発現を配置するように、一又は複数の制御配列と結合するときである。（ポリペプチドコーディング領域及びそれに結合するプロモーターのような）二つのＤＮＡ断片は、プロモーター機能の誘導が所望の遺伝子産物をコードするｍＲＮＡの転写をもたらす場合、及び二つのＤＮＡ断片間の連結の性質が、遺伝子産物の発現を導く発現制御配列の能力を妨げないか又は転写されるべきＤＮＡ鋳型の能力を妨げない場合、「作動可能に結合している」。従って、プロモーター領域は、そのプロモータがその核酸の転写を行うことができるならば、ポリペプチドをコードする核酸と作動可能に会合するであろう。プロモーターは所定の細胞においてのみＤＮＡの実質的な転写を導く細胞特異的プロモーターであってもよい。プロモーター以外の他の転写制御エレメント、例えばエンハンサー、オペレーター、リプレッサー、及び転写終止シグナルは、ポリヌクレオチドと作動可能に会合して細胞特異的転写を導くことができる。好適なプロモーター及び他の転写制御領域は本明細書に開示されている。様々な転写制御領域が当業者に知られている。これらには、限定されないが、脊椎動物細胞において機能する転写制御領域、例えば、限定されないが、サイトメガロウイルス由来のプロモーター及びエンハンサーセグメント（例えばイントロン−Ａと連結した最初期プロモーター）、サルウイルス４０（例えば初期プロモーター）、及び（例えばラウス肉腫ウイルスなど）レトロウイルスを含む。他の転写制御領域は、脊椎動物の遺伝子、例えばアクチン、熱ショックタンパク質、ウシ成長ホルモン及びウサギα−グロビン、並びに、真核細胞における遺伝子発現を調節することができる他の配列に由来するものを含む。更なる好適な転写調節領域は、組織特異的プロモーター及びエンハンサー並びに誘導性プロモーター（例えばプロモーター誘導性テトラサイクリン）を含む。同様に、様々な転写制御エレメントが当業者に知られている。これらには、限定するものではないが、リボソーム結合部位、翻訳開始及び終結コドン、及びウイルス系由来の要素（特に、配列内リボソーム進入部位、又はＣＩＴＥ配列とも呼ばれるＩＲＥＳ）を含む。発現カセットはまた、例えば、複製起点、及び／又はレトロウイルスの長い末端反復配列（ＬＴＲ）又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）の末端逆位配列（ＩＴＲ）など染色体組み込み要素など他の特徴を含んでいてもよい。
本明細書に記載されるポリヌクレオチド及び核酸コード領域は、ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの分泌を指示する分泌ペプチド又はシグナルペプチドをコードする付加的コード領域と結合させることができる。例えば、免疫サイトカインの分泌が望まれる場合、シグナル配列をコードするＤＮＡが免疫サイトカイン又はその断片をコードする核酸の上流に配置されうる。シグナル仮説によると、哺乳類細胞によって分泌されるタンパク質はシグナルペプチド又は分泌リーダー配列を有し、これは粗面小胞体上で成長するタンパク質鎖の排出が開始されると成熟タンパク質から切断される。当業者は、脊椎動物細胞によって分泌されるポリペプチドが通常、ポリペプチドの分泌型又は「成熟」型を生成するために翻訳されたポリペプチドから切断されるポリペプチドのＮ末端に融合されたシグナルペプチドを有することを認識している。特定の実施態様では、天然のシグナルペプチド、例えば免疫グロブリン重鎖又は軽鎖シグナルペプチド又は作動可能に結合しているポリペプチドの分泌を指示する能力を保持するその配列の機能的誘導体が使用される。或いは、異種哺乳動物シグナルペプチド、又はその機能的誘導体を使用することができる。例えば、野生型リーダー配列は、ヒト組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）又はマウスβ−グルクロニダーゼのリーダー配列で置換されてもよい。分泌シグナルペプチドの例示的なアミノ酸及び対応するポリヌクレオチド配列を、配列番号１１５〜１２３に示す。
後の精製を容易にし（例えば、ヒスチジンタグ）又は免疫サイトカインの標識化における補助のために使用されうる短タンパク質配列をコードするＤＮＡは、ポリヌクレオチドをコードする免疫サイトカイン（断片）の中又は末端に含まれうる。
更なる実施態様では、本明細書に記載される一又は複数のポリヌクレオチドを含む宿主細胞が提供される。ある実施態様では、本明細書に記載される一又は複数のベクターを含む宿主細胞が提供される。ポリヌクレオチド及びベクターは、ポリヌクレオチド及びベクターそれぞれに関連して本明細書に記載される特徴の何れかを単独で又は組み合わせて組み込むことができる。一つのそのような実施態様において、宿主細胞は、本明細書に記載される免疫サイトカイン（の一部）をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む（例えば該ベクターで形質転換又はトランスフェクトされる）。本明細書で使用される場合、「宿主細胞」なる用語は、免疫サイトカイン又はその断片を生成するように操作することができる任意の種類の細胞系を指す。免疫サイトカインの複製及び発現の補助に好適な宿主細胞は当技術分野で周知である。このような細胞は特定の発現ベクターで適切にトランスフェクト又は形質導入され得、大量のベクター含有細胞が、臨床利用のための十分な量の免疫サイトカインを得るために、大規模発酵槽での播種のために増殖されうる。適切な宿主細胞は、原核生物微生物、例えば大腸菌、又は様々な真核生物細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、昆虫細胞などを含む。例えば、特に、グリコシル化が必要でない場合には、ポリペプチドは細菌中で生成することができる。発現の後、ポリペプチドは可溶性画分において細菌の細胞ペーストから単離され得、更に精製することができる。原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、菌類や酵母菌株を含むポリペプチドをコードするベクターのための適切なクローニング宿主又は発現宿主であり、そのグリコシル化経路は「ヒト化」されており、部分的又は完全なヒトのグリコシル化パターンを有するポリペプチドの生成をもたらす。Gerngross, Nat Biotech 22, 1409-1414 (2004)、及びLi et al., Nat Biotech 24, 210-215 (2006)を参照。（グリコシル化）ポリペプチドの発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物と脊椎動物）から派生している。無脊椎動物細胞の例は、植物細胞及び昆虫細胞を含む。多数のバキュロウイルス株が同定され、これらは特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用することができる。植物細胞培養もまた宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物における抗体産生に関するＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記載）を参照。脊椎動物細胞もまた宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合した哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載された２９３細胞又は２９３Ｔ細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスのセルトリ細胞（例えば、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）、マウス乳腺腫瘍細胞（ＭＭＴ０６０５６２）、（例えば、Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載される）ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞（Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；及びＹＯ、ＮＳ０、Ｐ３Ｘ６３及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。タンパク質生成に適した特定の哺乳動物宿主細胞系の総説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照。宿主細胞は、培養細胞、例えば幾つか挙げると、哺乳動物の培養細胞、酵母細胞、昆虫細胞、細菌細胞及び植物細胞、並びにトランスジェニック動物、トランスジェニック植物又は培養植物又は動物組織内部に含まれる細胞を含む。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物細胞、好ましくは哺乳動物細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞、又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。
これらの系において外来遺伝子を発現する標準的な技術が当技術分野で知られている。抗体の重鎖又は軽鎖のどちらかを含むポリペプチドを発現する細胞は、発現された産物が重鎖及び軽鎖の両方を有する抗体であるように、抗体鎖の他方を発現するように操作されうる。
一実施態様において、本明細書に記載される免疫サイトカインを生成する方法が提供され、その方法は、本明細書に与えられるように、免疫サイトカインの発現に適した条件下で、免疫サイトカインをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を培養すること、及び宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から免疫サイトカインを回収することを含む。
免疫サイトカインの構成要素は、遺伝的に互いに融合されている。免疫サイトカインは、その成分が、お互いに直接的に又はリンカー配列を介して間接的に融合されるように設計することができる。リンカーの組成及び長さは、当該技術分野で周知の方法に従って決定することができ、有効性について試験することができる。エフェクター部分とＦｃドメインとの間のリンカー配列の例は、配列番号６９、７０、７１、７２、７３、７９、８２、８３及び８４に示される配列に見出される。望ましい場合、融合の個々の成分を分離するための切断部位を組み込むために、付加的配列、例えばエンドペプチダーゼ認識配列を含めることもできる。
免疫サイトカインは、抗原決定基に結合することができる少なくとも抗体可変領域を含む。可変領域は、天然に又は非天然に存在する抗体及びその断片の一部を形成することができ、且つそのような抗体及び断片から誘導することができる。ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体を生成する方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Harlow and Lane, 「Antibodies, a laboratory manual」, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988）。天然に存在しない抗体は、固相−ペプチド合成を使用して構築されるか、組換えにより生成されるか（例えば、米国特許第４，１８６，５６７号に記載されているように）又は、例えば、可変重鎖及び可変軽鎖を含むコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって得ることができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙの米国特許第５，９６９，１０８号を参照）。抗原結合部分及びその生産方法がまたＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１１／０２０７８３に詳細に記載されており、その全体を出典明記によって本明細書に援用する。
何れかの動物種の抗体、抗体断片、抗原結合ドメイン又は可変領域が、本明細書に記載される免疫サイトカインにおいて用いることができる。本発明において有用な非限定的抗体、抗体断片、抗原結合ドメイン又は可変領域は、マウス、霊長類、又はヒト起源のものでありうる。免疫サイトカインがヒトでの使用を意図する場合、抗体の定常領域がヒトに由来するキメラ形態の抗体が使用され得る。抗体のヒト化形態又は完全ヒト形態もまた、当該分野で周知の方法に従って調製することができる（例えばＷｉｎｔｅｒの米国特許第５５６５３３２号を参照）。ヒト化は、様々な方法によって達成することができ、それらの方法には、限定されないが、（ａ）非ヒト（例えば、ドナー抗体）のＣＤＲを、重要なフレームワーク残基（例えば、良好な抗原結合親和性又は抗体機能を維持するために重要であるもの）の保持を伴う又は伴わないヒト（例えば、レシピエント抗体）のフレームワーク領域及び定常領域の上に移植すること、（ｂ）非ヒト特異性決定領域（ＳＤＲ又はａ−ＣＤＲ；抗体−抗原相互作用に重要な残基）のみをヒトフレームワーク領域及び定常領域上に移植すること、又は（ｃ）非ヒト可変ドメイン全体を移植するが、表面残基の置換によってヒト様切片で「覆い隠す」ことが含まれる。ヒト化抗体及びそれらの製造方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)に総説され、更に、例えば、Riechmann et al., Nature 332, 323-329 (1988); Queen et al., Proc Natl Acad Sci USA 86, 10029-10033 (1989)；米国特許第５８２１３３７号、同第７５２７７９１号、同第６９８２３２１号、及び同第７０８７４０９号；Jones et al., Nature 321, 522-525 (1986); Morrison et al., Proc Natl Acad Sci 81, 6851-6855 (1984); Morrison and Oi, Adv Immunol 44, 65-92 (1988); Verhoeyen et al., Science 239, 1534-1536 (1988); Padlan, Molec Immun 31(3), 169-217 (1994); Kashmiri et al., Methods 36, 25-34 (2005) （ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）移植を記述する）；Padlan, Mol Immunol 28, 489-498 (1991) （「リサーフェシング」を記述する）； Dall'Acqua et al., Methods 36, 43-60 (2005) （「ＦＲシャッフリング」を記述する）；及びOsbourn et al., Methods 36, 61-68 (2005)及びKlimka et al., Br J Cancer 83, 252-260 (2000)（ＦＲシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記述する）に記載されている。ヒト抗体及びヒト可変領域は、当技術分野で周知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は一般的に、van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に記載されている。ヒト可変領域は、ハイブリドーマ法によって作製されたヒトモノクローナル抗体の一部を形成することができ、且つそのような抗体から誘導することができる（例えば、Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)を参照）。ヒト抗体及びヒト可変領域は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を持つインタクトな抗体を生成するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製することもできる（例えば、Lonberg, Nat Biotech 23, 1117-1125 (2005)を参照）。ヒト抗体及びヒト可変領域はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変領域配列を単離することによっても生成され得る（例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178, 1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)；及びMcCafferty et al., Nature 348, 552-554; Clackson et al., Nature 352, 624-628 (1991)）。ファージは、典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片の何れかとして抗体断片を提示する。ファージディスプレイによるイムノコンジュゲートの抗原結合部分の調製の詳細な説明は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１１／０２０７８３に添付される実施例に見出される。
ある実施態様では、抗体は、例えばＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１１／０２０７８３（親和性成熟に関する実施例を参照）又は米国特許出願公開番号２００４／０１３２０６６（この全内容を出典明記によってここに援用する）に開示される方法に従い、増強された結合親和性を有するように操作される。特定の抗原決定基に結合する免疫サイトカインの能力は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）又は当業者によく知られている他の技術、例えば表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡｃｏｒｅＴ１００システムで解析される）（Liljeblad, et al., Glyco J 17, 323-329 (2000)）及び伝統的な結合アッセイ（Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002)）の何れかによって測定することができる。競合アッセイを、特定の抗原への結合について参照抗体と競合する抗体、抗体断片、抗原結合ドメイン又は可変ドメインを同定するため、例えばＣＥＡへの結合についてＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１抗体と競合する抗体を同定するために使用することができる。特定の実施態様では、このような競合する抗体は、参照抗体によって結合される同じエピトープ（例えば直鎖状又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための典型的な方法の詳細が、Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)に提供されている。典型的な競合アッセイにおいて、固定化抗原（例えばＣＥＡ）は、抗原（例えばＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１抗体）に結合する第一の標識抗体と抗原へ結合について第一の抗体と競合するその能力について試験されている第二の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートされる。第二の抗体はハイブリドーマ上清に存在してもよい。対照として、固定化抗原が、第一の標識抗体を含むが第二の非標識抗体は含まない溶液中でインキュベートされる。第一の抗体の抗原への結合を許容する条件下でインキュベートした後、過剰な非結合抗体が除去され、固定化された抗原に結合した標識の量が測定される。固定化抗原に結合した標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に減少している場合、それは、第二抗体が、抗原への結合において第一の抗体と競合していることを示している。Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照。
本明細書中に記載されるように調製された免疫サイトカインは、高速液体クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーなどの当該技術分野の技術によって精製することができる。特定のタンパク質を精製するために使用される実際の条件は、一部には、正味荷電、疎水性、親水性などの要因に依存し、当業者には明瞭であろう。アフィニティークロマトグラフィー精製のために、免疫サイトカインが結合する抗体、リガンド、受容体又は抗原を使用することができる。例えば、免疫サイトカインのアフィニティークロマトグラフィー精製のために、プロテインＡ又はプロテインＧを有するマトリックスを使用することができる。逐次的なプロテインＡ又はＧアフィニティークロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィーを、国際公開第２０１２／１４６６２８号の実施例に本質的に記載されるように、免疫サイトカインを単離するために使用することができる。免疫サイトカインの純度は、ゲル電気泳動、高圧液体クロマトグラフィーなどを含む様々な周知の分析方法の何れかによって決定することができる。例えば、免疫サイトカインは、還元性ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって示されるようにインタクトであり、適切に組み立てられていることが示され得る。
本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン、例えば、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及びＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、国際公開第２０１２／１４６６２８号及び国際公開第２０１２／１０７４１７号の実施例に記載されるように調製することができる。
本明細書に記載される抗体は、好ましくは、組換え手段によって産生される。そのような方法は先端技術において広く知られており、原核細胞及び真核細胞におけるタンパク質の発現を含み、その後の抗体ポリペプチドの単離、及び通常は薬学的に許容可能な純度までの精製を伴う。タンパク質発現のために、軽鎖及び重鎖又はその断片をコードする核酸は標準的な方法によって発現ベクターに挿入される。発現は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、酵母、又は大腸菌細胞などの適当な原核生物又は真核生物宿主細胞中で行われ、抗体は細胞（上清から又は細胞溶解後）回収される。
組換えによる抗体の産生は先端技術において広く知られており、例えば、Makrides, S.C., Protein Expr. Purif. 17 (1999) 183-202; Geisse,S., et al., Protein Expr. Purif. 8 (1996) 271-282; Kaufman, R.J., Mol.Biotechnol. 16 (2000) 151-161; Werner, R.G., Drug Res. 48 (1998) 870-880の総説に記載されている。
抗体は、細胞全体に、細胞溶解物中に、又は部分精製形態あるいは実質的に純粋な形態で存在してもよい。細胞成分又は他の汚染物、例えば他の細胞核酸又はタンパク質を除去するために、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、及び当技術分野で周知の他のものを含む標準的な技術によって精製が行われる。Ausubel, F., et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)を参照。
ＮＳ０細胞における発現は、例えば、Barnes, L.M., et al., Cytotechnology 32 (2000) 109-123; Barnes, L.M., et al., Biotech. Bioeng. 73 (2001) 261-270に記載されている。一過性発現は、例えば、Durocher, Y., et al., Nucl. Acids. Res. 30 (2002) E9に記載されている。可変ドメインのクローニングは、Orlandi, R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 3833-3837; Carter, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992) 4285-4289; Norderhaug, L., et al., J. Immunol. Methods 204 (1997) 77-87に記載されている。好ましい一過性発現系（ＨＥＫ２９３）は、Schlaeger, E.-J.及びChristensen, K., Cytotechnology 30 (1999) 71-83、及びSchlaeger, E.-J., in J. Immunol. Methods 194 (1996) 191-199に記載されている。
本発明による重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、プロモーター、翻訳開始、定常領域、３’非翻訳領域、ポリアデニル化、及び転写終結の配列と組み合わされて、発現ベクター構築物を形成する。重鎖及び軽鎖発現構築物は、単一のベクターに組み合わされ、宿主細胞に同時トランスフェクトされ、連続的にトランスフェクトされ、又は別々にトランスフェクトされ、次いでそれらは融合されて両方の鎖を発現する単一の宿主細胞を形成し得る。
原核生物に適切な制御配列は、例えば、プロモーター、任意選択的にオペレーター配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、エンハンサー及びポリアデニル化シグナルを利用することが知られている。
核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれた場合、「作動可能に連結される」。例えば、プレ配列又は分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されている場合、そのポリペプチドのＤＮＡに作動可能に結合している；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に結合している；又はリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易にするような位置にある場合、コード配列と作動可能に結合している。一般に、「作動可能に連結される」とは、連結されているＤＮＡ配列が連続しており、分泌リーダーの場合には隣接しており、リーディングフレームにあることを意味する。しかし、エンハンサーは連続している必要はない。連結は、好都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーが従来の方法に従って使用される。
モノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィーのような従来の免疫グロブリン精製手順によって培養培地から適切に分離される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡ及びＲＮＡは、一般的な手順を使用して容易に単離及び配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡ及びＲＮＡの供給源として働くことができる。一度単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに挿入することができ、これらは次いで、本来ならば免疫グロブリンタンパク質を生成しないＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、又はミエローマ細胞などの宿主細胞中にトランスフェクトされ、宿主細胞中で組換えモノクローナル抗体の合成を得る。
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」及び「細胞培養物」という表現は互換的に用いられ、全てのこのような名称には子孫が含まれる。従って、「形質転換体」及び「形質転換細胞」という語は、初代の対象細胞と、導入回数に関係なく、これに由来する培養物とを含む。また、意図的又は偶発性突然変異のために、全ての子孫がＤＮＡ含量において正確に同一ではないことも理解される。元々の形質転換細胞についてスクリーニングしたものと同じ機能又は生物活性を有する変異体子孫が含まれる。
治療方法及び組成物
本発明は、治療を必要とする患者の治療のための方法であって、患者に、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと、本発明によるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体との併用療法の治療的有効量を投与することを特徴とする方法を含む。
本発明は、記載された併用療法のために、本発明によるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体を用いた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの使用を含む。
本発明の１つの好ましい実施態様は、がん又は腫瘍の治療における使用のための、本発明のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインとの併用療法である。
従って、本発明の一実施態様は、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせてがん又は腫瘍の治療における使用のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインである。
本発明の別の実施態様は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせてがん又は腫瘍の治療における使用のための、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、本明細書に記載されるように本発明によるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又はＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであってもよい。
がん又は腫瘍は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に抗原を提示し得る。併用療法の標的は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示され得る。がん又は腫瘍は、ＣＥＡ又はＦＡＰを発現又は過剰発現し得る。治療は固形腫瘍のためのものであり得る。固形腫瘍は、ＣＥＡ又はＦＡＰを発現又は過剰発現し得る。治療は癌のためのものであり得る。癌は、ＣＥＡ又はＦＡＰを発現又は過剰発現し得る。がんは、結腸直腸がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、乳がん、膵臓がん、肝臓がん及び胃がんからなる群から選択され得る。がんは、肺がん、結腸がん、胃がん、乳がん、頭頸部がん、皮膚がん、肝臓がん、腎臓がん、前立腺がん、膵臓がん、脳がん及び骨格筋のがんからなる群から選択され得る。
本明細書で使用する用語「がん」は、例えば、肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞性細胞肺がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭部又は頸部のがん、皮膚又は眼内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、乳がん、子宮がん、卵管のがん、子宮内膜がん、子宮頸部がん、膣のがん、外陰部のがん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓又は尿管のがん、腎細胞がん、腎盂がん、中皮腫、肝細胞がん、胆管がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、多形性膠芽腫、星状細胞腫、シュワン腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮がん、下垂体腺腫、リンパ腫、リンパ性白血病であって良く、上記がんの何れかの難治性形態、又は上記がんのうちの一又は複数の組み合わせを含む。好ましい一実施態様では、このようながんは、乳がん、結腸直腸がん、メラノーマ、頭頚部がん、肺がん又は前立腺がんである。好ましい一実施態様では、このようながんは、乳がん、卵巣がん，子宮頚がん、頭頚部がん、肺がん又は前立腺がんである。別の好ましい実施態様では、このようながんは、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頚部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫である。好ましい一実施態様では、このようながんは、更にＣＥＡ又はＦＡＰ発現又は過剰発現によって特徴付けられる。
本発明の実施態様は、上記のがん又は腫瘍の何れかの治療における使用のための、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインである。
本発明の別の実施態様は、上記のがん又は腫瘍の何れかの治療における使用のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせた、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
本発明は、がんの治療のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用療法を含む。
本発明は、転移の予防又は治療のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用療法を含む。
本発明は、炎症性疾患の治療のための本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用療法を含む。
本発明は、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する又は進行を遅延させることに使用のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用療法を含む。
本発明は、Ｔ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することに使用のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用療法を含む。
本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を患者に投与することを特徴とする、必要とする患者における癌の治療方法を含む。
本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を患者に投与することを特徴とする、必要とする患者における転移の予防又は治療のためのを含む。
本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を患者に投与することを特徴とする、必要とする患者における炎症性疾患の治療方法を含む。
本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を患者に投与することを特徴とする、必要とする患者において腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する又は進行を遅延させるための方法を含む。
本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を患者に投与することを特徴とする、必要とする患者においてＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激するための方法を含む。
本発明は、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた、癌の治療における使用のための、又はあるいは本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた、癌の治療のための医薬の製造のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含む。
本発明は、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた、転移の予防又は治療における使用のための、又はあるいは本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた、転移の予防又は治療のための医薬の製造のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含む。
本発明は、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた、炎症性疾患の治療における使用のための、又はあるいは本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた、炎症性疾患の治療のための医薬の製造のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含む。
本発明は、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させることに使用のための、又はあるいは本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させることに使用のための医薬の製造のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含む。
本発明は、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて、Ｔ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することに使用するための、又はあるいは本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて、Ｔ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することに使用するための医薬の製造のための、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含む。
本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせた、癌の治療における使用のための、又はあるいは本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせた、癌の治療のための医薬の製造のための本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。
本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせた、転移の予防又は治療における使用のための、又はあるいは本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせた、転移の予防又は治療のための医薬の製造のための本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。
本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせた、炎症性疾患の治療における使用のための、又はあるいは本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせた、炎症性疾患の治療のための医薬の製造のための本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。
本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせた、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させることに使用のための、又はあるいは本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせた、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させることに使用のための医薬の製造のための、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。
本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせて、Ｔ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することに使用するための、又はあるいは本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと組み合わせて、Ｔ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することに使用するための医薬の製造のための、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。
本発明の好ましい実施態様において、上記の併用療法及び異なる疾患の医学的使用において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
配列番号８４、配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列
を含むことを特徴とするＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであり；かつ
そのような併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
本発明の好ましい実施態様において、上記の併用療法及び異なる疾患の医学的使用において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列
を含むことを特徴とするＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであり；かつ
そのような併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
別の態様では、本発明は、組成物、例えば、薬学的に許容可能な担体と一緒に処方される、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び本明細書に記載されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体、又はその抗原結合部分を含有する薬学的組成物を提供する。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」には、生理学的に適合する、任意及び全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤並びに吸収／再吸収遅延剤などが含まれる。好ましくは、担体は注射又は注入に適している。
本発明の組成物は、当該分野で公知の様々な方法によって投与することができる。当業者により認識されているように、投与経路及び／又は投与様式は、所望の結果に応じて変化するものである。
薬学的に許容可能な担体には、滅菌水溶液又は分散液、及び滅菌注射溶液若しくは分散液の調製用の滅菌粉末が含まれる。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体及び薬剤の使用は、当技術分野で公知である。水に加えて、担体は、例えば、等張緩衝生理食塩水であっても良い。
選択された投与経路に関わらず、適切な水和形態で使用されうる本発明の化合物、及び／又は本発明の薬学的組成物は、当業者に知られている一般的な方法により薬学的に許容可能な剤形に製剤化される。
本発明の薬学的組成物中の有効成分の実際の用量レベルは、患者（の有効量）に対して毒性でなく、特定の患者、組成物、及び投与様式に関して所望の治療的応答を達成するために効果的な有効成分の量を得るために、多様であってよい。選択された用量レベルは、使用される本発明の特定の組成物、又はそのエステル、塩若しくはアミド、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排泄速度、使用される特定の組成物と併用して用いられる他の薬物、化合物及び／又は物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全身健康状態、及び既往歴、並びに医学の技術分野において周知である同様の要因を含む多様な薬物動態因子に依存するであろう。
一態様において、本発明は、（ａ）本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン、及び（ｂ）本明細書に記載されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体を、同じ又は別々の容器に含み、及び任意で、（ｃ）疾患を治療するための方法として、併用治療の使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書を更に含む、疾患を治療することを意図したキットを提供する。更に、キットは、（ａ）本明細書に記載されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体を含有する組成物を収容する第１の容器；（ｂ）本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含有する組成物を収容する第２の容器；及び任意で（ｃ）更なる細胞傷害剤又は他の治療剤を含有する組成物を収容する第３の容器を含んでいてよい。本発明のこの実施態様のキットは、組成物が、特定の病状を治療するのに使用可能であることを示した添付文書を更に含んでいてよい。代替的に、又は付加的に、キットは、薬学的に許容可能な緩衝液、例えば注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー液及びデキストロース溶液を収容する第３（又は第４）の容器を更に含んでいてもよい。これは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的に及びユーザーの立場から望まれる他の物質を更に含んでもよい。
一態様において、本発明は、（ａ）本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含む容器、及び（ｂ）疾患を治療するための方法として、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用療法における腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの使用を指示する説明書を含む添付文書を含む疾患の治療を意図したキットを提供する。
別の態様において、本発明は、疾患を治療するための方法として、（ａ）本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む容器、及び（ｂ）本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインとの併用療法において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の使用を指示する説明書を含む添付文書を含む疾患の治療を意図したキットを提供する。
更なる態様において、本発明は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含む、疾患の治療を意図した医薬を提供し、ここで前記医薬は本明細書に記載されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体との併用療法における使用のためのものであり、任意で、疾患を治療するための方法として、併用治療の使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書を含む。
更に別の態様において、本発明は、本明細書に記載されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体を含む、疾患の治療を意図した医薬を提供し、ここで前記医薬は本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインとの併用療法における使用のためのものであり、任意で、疾患を治療するための方法として、併用治療の使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書を含む。
用語「治療方法」又はこの同義語は、例えばがんに適用される場合、患者におけるがん細胞の数を減少又は消滅させるように、又はがんの症状を緩和するように設計された手順又は行動方針を指す。がん又は他の増殖性疾患の「治療方法」は、がん細胞若しくは他の疾患が実際に消滅し、細胞の数若しくは障害が実際に低減し、又はがん若しくは他の疾患の症状が実際に緩和することを必ずしも意味しない。しばしば、成功の確率が低くても患者の既往歴や推定生存期間を前提として総合的に有益な行動方針を誘導するとみなされるがんの治療方法が実施される。
用語「と組み合わせて投与」又は「共投与」、「共投与する」、「併用療法」又は「併用治療」は、例えば別個の製剤／用法としての（又は単一の製剤／用法としての）、本明細書に記載される腫瘍標的ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び本明細書に記載されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の投与を指す。共投与は、同時もしくは何れかの順序で連続的であることができ、好ましくは両方（又は全て）の活性薬剤がその生物学的活性を同時に発揮する期間がある。前記活性薬剤は、連続的注入を介して（例えば、静脈内に（ｉｖ））同時に又は連続的に共投与される。両方の治療剤が連続的に共投与される場合、投与量は同日に別々の投与で投与され、又は薬剤の一つが第１日に、２番目のが第２日から第７日に、好ましくは第２日から第４日に共投与される。従って、一実施態様において、用語「連続的に（逐次的に）」は、第一成分の投与後７日以内に、好ましくは第一成分の投与後４日以内を意味し；用語「同時に」は同時刻でを意味する。腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び／又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の維持用量に関する用語「共投与」は、治療周期（例えば毎週）が両方の薬物にとって適切である場合は、維持用量が同時に共投与されうることを意味する。又は、維持用量は連続的に投与される、例えば、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体の用量を交互の週に与える。
それぞれの化合物の量又は併用量が、研究者、獣医、医師若しくは他の臨床家が求める組織、系、動物若しくはヒトの生物学的又は医学的奏功を引き出す量である、「治療的有効量」（又は単に「有効量」）で抗体が患者に投与されることは自明である。
共投与の量及び共投与のタイミングは、タイプ（種、性別、年齢、体重など）、及び治療される患者の状態、及び治療される疾患又は状態の重症度に依存するであろう。前記腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び／又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、患者に対して、単回又は一連の治療にわたって、例えば同じ日に又は翌日に又は週間間隔で適切に共投与される。
例えば、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び／又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、第１週に同時に共投与されて良く、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体の維持用量は、隔週交互に、例えば腫瘍標的化ＩＬ２バリアント免疫サイトカインで開始して、例えば３週間、共投与されて良い。例えば、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び／又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、第１週に同時に共投与されて良く、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体の維持用量は、例えば毎週、例えば２週間の総治療期間、同時に共投与されて良い。例えば、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び／又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、第１週に同時に共投与されて良く、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体の維持用量は、例えば毎週、例えば５週間の総治療期間、同時に共投与されて良い（これはまた、腫瘍標的ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体の治療スケジュールとして、毎週１回、５週間、同時に共投与されると記載され得る）。一実施態様において、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、２週間に１回、３週間に１回又は４週間に１回投与される。一実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、２週間に１回、又は３週間に１回投与される。一実施態様において、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の最初の投与は、治療サイクルの最初の日に連続的になされる。
疾患のタイプ及び重症度に依存して、前記腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体の約０．１ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１−２０ｍｇ／ｋｇ）が、患者への両方の薬剤の共投与のための初期候補投与量である。前記腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び／又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与量は、患者の体重にかかわらず、フラット固定用量であってもよい。例えば、１ｍｇ／ｋｇの最大用量又は４０ｍｇフラット；１０ｍｇフラットの開始用量、週１回又は隔週又は０．０５−０．５ｍｇ／ｋｇを週１回又は隔週が腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫について選択され得る。一実施態様において、５−５０ｍｇのフラット固定用量、例えば、５ｍｇ、６ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ又は５０ｍｇの腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインが、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に投与される。例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体について、最大投与量２０ｍｇ／ｋｇ、ｑ３ｗ；減らした場合には１０ｍｇ／ｋｇが選択され得る。一実施態様において、８００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体のフラット固定用量が２週間毎に投与される。別の実施態様において、１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体のフラット固定用量が３週間毎に投与される。本発明は、がん、例えば結腸直腸癌、肝臓癌又は膵臓癌に罹患している患者の治療のための、本発明の腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体の使用を含む。
抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインに加えて、化学療法剤も投与可能である。
一実施態様では、このような追加の化学療法剤は、本明細書に記載される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と共に投与することができ、限定しないが、アルキル化剤を含む抗腫瘍性薬剤を含み、これには、ナイトロジェンマスタード、例えばメクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン及びクロラムブシル；ニトロソウレア類、例えばカルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、及びセムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）；テモダール（ＴＭ）（テモゾロマイド）、エチレンイミン／メチルメラミン、例えばトリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、トリエチレン、チオリンアミド（チオテパ）、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ、アルトレタミン）；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン；トリアジン、例えばダカルバジン（ＤＴＩＣ）；葉酸アナログ、例えばメトトレキサート及びトリメトレキサート、ピリミジンアナログ、例えば５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ、シタラビン）、５−アザシチジン、２，２’−ジフルオロデオキシシチジン、プリンアナログ、例えば；６−メルカプトプリン、６−チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｍｎｅ）、アザチオプリン、Ｔ−デオキシコホルマイシン（ペントスタチン）、エリトロヒドロキシノニルアデニン（ＥＨＮＡ）、リン酸フルダラビン、及び２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、２−ＣｄＡ）を含む代謝拮抗薬；抗有糸分裂薬、例えばパクリタキセル、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン、及びビノレルビンを含むビンカアルカロイド、タキソテール、エストラムスチン、及びリン酸エストラムスチンを含む天然物；ピポドフィロトキシン、例えばエトポシド及びテニポシド；抗生物質、例えばアクチノマイシンＤ、ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンＣ、及びアクチノマイシン；酵素、例えばＬ−アスパラギナーゼ；生物学的応答修飾剤、例えばインターフェロン−アルファ、ＩＬ−２、Ｇ−ＣＳＦ及びＧＭ−ＣＳＦ；白金配位錯体、例えばオキサリプラチン、シスプラチン及びカルボプラチン、アントラセンジオン、例えばミトキサントロン、置換尿素、例えばヒドロキシウレア、Ｎ−メチルヒドラジン（ＭＩＨ）及びプロカルバジンを含むメチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、例えばミトタン（ｏ、ｐ−ＤＤＤ）及びアミノグルテチミドを含む様々な薬剤；副腎皮質ステロイドアンタゴニスト、例えばプレドニゾンとその等価物、デキサメタゾン及びアミノグルテチミドを含むホルモン及びアンタゴニスト；ジェムザール（ＴＭ）（ゲムシタビン）、プロゲスチン、例えばカプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、メドロキシプロテステロンアセテート及び酢酸メゲストロール；エストロゲン、例えばジエチルスチルベストロール及びエチニルエストラジオール等価物；抗エストロゲン、例えばタモキシフェン；テストステロンプロピオナート及びフルオキシメステロン／等価物を含むアンドロゲン；抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモンアナログ及びロイプロリド；及び非ステロイド性抗アンドロゲン、例えばフルタミドが含まれる。ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、脱メチル化剤（例えばＶｉｄａｚａ）及び転写抑制解放（ＡＴＲＡ）療法を含むがこれらに限定されない後成的機序を標的とする療法も、抗原結合タンパク質と組み合わせることができる。一実施態様では、化学療法剤は、タキサン（例えばパクリタキセル（タキソール）のような）、ドセタキセル（タキソテール）、修飾されたパクリタキセル（例えば、アブラキサン及びオパキシオ）、ドキソルビシン、スニチニブ（スーテント）、ソラフェニブ（ネクサバール）、及び他の多種キナーゼ阻害剤、オキサリプラチン、シスプラチン及びカルボプラチン、エトポシド、ゲムシタビン、並びにビンブラスチンからなる群より選択される。一実施態様では、化学療法剤は、タキサン（例えばタキソール（パクリタキセル）のような）、ドセタキセル（タキソテール）、修飾されたパクリタキセル（例えアブラキサン及びオパキシオ）からなる群より選択される。一実施態様では、追加的化学療法剤は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、又はオキサリプラチンから選択される。一実施態様では、化学療法剤は、５−フルオロウラシル、ロイコボリン及びイリノテカン（ＦＯＬＦＩＲＩ）である。一実施態様では、化学療法剤は、５−フルオロウラシル、及びオキサリプラチン（ＦＯＬＦＯＸ）である。
追加的化学療法剤との併用療法の特定の例には、例えば、乳がんの治療のためのタキサン（例えば、ドセタキセル若しくはパクリタキセル）又は修飾されたパクリタキセル（例えば、アブラキサン又はオパキシオ）、ドキソルビシン、カペシタビン及び／又はベバシズマブ（アバスチン）を用いる療法；卵巣がんのためのカルボプラチン、オキサリプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ドキソルビシン（又は修飾されたドキソルビシン（Ｃａｅｌｙｘ又はドキシル））、又はトポテカン（ハイカムチン）を用いる療法；腎臓がんの治療のための多種キナーゼ阻害剤、ＭＫＩ，（スーテント、ネクサバール、又は７０６）及び／又はドキソルビシンを用いる療法；扁平上皮癌の治療のためのオキサリプラチン、シスプラチン及び／又は放射線を用いる療法；肺がんの治療のためのタキソール及び／又はカルボプラチンを用いる治療が含まれる。
従って、一実施態様では、追加的化学療法剤は、乳がんの治療のためのタキサン（ドセタキセル又はパクリタキセル又は修飾されたパクリタキセル（アブラキサン又はオパキシオ）、ドキソルビシン、カペシタビン及び／又はベバシズマブからなる群より選択される。
一実施態様において、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン／ＰＤ−Ｌ１抗体併用療法は、化学療法剤が投与されないものである。
本発明は、本明細書に記載されるこのような疾患に罹患した患者の治療のための方法も含む。
本発明は更に、本明細書に記載される本発明による腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び本明細書に記載される本発明による抗ＰＤ−Ｌ１抗体の有効量を薬学的に許容可能な担体と一緒に含む薬学的組成物の製造方法、並びにそのような方法について本明細書に記載される本発明による腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体の使用を提供する。
本発明は更に、がんに罹患した患者の治療のための、好ましくは薬学的に許容可能な担体と併せた、医薬品の製造のための有効量での本明細書に記載される本発明による腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び本明細書に記載される本発明による抗ＰＤ−Ｌ１抗体の使用を提供する。
以下の実施例、配列表及び図面は、本発明の理解を助けるために提供されるが、本発明の真の範囲は特許請求の範囲に記載されている。本発明の精神から逸脱することなく、記載された手順で改変がなされうることが理解される。
配列の説明
配列番号１ 例示的なヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域
配列番号２ ヒトＩＬ−２（Ｃ１２５Ａ）
配列番号３ 四重変異体ヒトＩＬ−２（ＩＬ−２ ｑｍ）
配列番号４ ヒトＰＤ−Ｌ１（シグナル配列を含む）
配列番号５ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ３Ｆ２
配列番号６ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ３Ｆ２（ＹＳ）
配列番号７ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ３Ｆ２
配列番号８ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ３Ｄ９
配列番号９ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ３Ｄ９
配列番号１０ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ３Ｄ９（ＴＡ）
配列番号１１ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ４Ｇ８
配列番号１２ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ４Ｇ８
配列番号１３ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ４Ｂ３
配列番号１４ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ４Ｂ３
配列番号１５ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ４Ｄ６
配列番号１６ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ４Ｄ６
配列番号１７ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｃ６
配列番号１８ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｃ６
配列番号１９ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ５Ｈ５
配列番号２０ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ５Ｈ５
配列番号２１ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｃ４
配列番号２２ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｃ４
配列番号２３ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｄ９
配列番号２４ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２Ｄ９
配列番号２５ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ４Ｂ８
配列番号２６ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ４Ｂ８
配列番号２７ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ７Ａ１
配列番号２８ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ７Ａ１
配列番号２９ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １３Ｃ２
配列番号３０ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １３Ｃ２
配列番号３１ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １３Ｅ８
配列番号３２ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １３Ｅ８
配列番号３３ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １４Ｃ１０
配列番号３４ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １４Ｃ１０
配列番号３５ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １７Ａ１１
配列番号３６ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １７Ａ１１
配列番号３７ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １９Ｇ１
配列番号３８ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １９Ｇ１
配列番号３９ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２０Ｇ８
配列番号４０ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２０Ｇ８
配列番号４１ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ４Ｂ９
配列番号４２ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ４Ｂ９
配列番号４３ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ５Ｂ８
配列番号４４ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ５Ｂ８
配列番号４５ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ５Ｆ１
配列番号４６ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ５Ｆ１
配列番号４７ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １４Ｂ３
配列番号４８ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １４Ｂ３
配列番号４９ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １６Ｆ１
配列番号５０ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １６Ｆ１
配列番号５１ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １６Ｆ８
配列番号５２ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ １６Ｆ８
配列番号５３ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ Ｏ３Ｃ９
配列番号５４ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ Ｏ３Ｃ９
配列番号５５ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ Ｏ２Ｄ７
配列番号５６ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ Ｏ２Ｄ７
配列番号５７ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２８Ｈ１
配列番号５８ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２８Ｈ１
配列番号５９ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２２Ａ３
配列番号６０ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２２Ａ３
配列番号６１ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２９Ｂ１１
配列番号６２ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２９Ｂ１１
配列番号６３ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２３Ｃ１０
配列番号６４ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ２３Ｃ１０
配列番号６５ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１
配列番号６６ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１
配列番号６７ 軽鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１
配列番号６８ 重鎖可変ドメイン、Ｍａｂ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１
配列番号６９ ２８Ｈ１ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ノブ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）−ＩＬ−２ ｑｍ
配列番号７０ ４Ｇ８ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ノブ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）−ＩＬ−２ ｑｍ
配列番号７１ ４Ｂ９ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ノブ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）−ＩＬ−２ ｑｍ
配列番号７２ ２８Ｈ１ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ノブ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）−ＩＬ−２ ｑｍ（２）
配列番号７３ ４Ｂ９ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ノブ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）−ＩＬ−２ ｑｍ（２）
配列番号７４ ２８Ｈ１ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ホール（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）
配列番号７５ ４Ｇ８ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ホール（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）
配列番号７６ ４Ｂ９ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ホール（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）
配列番号７７ ４Ｇ８ Ｆａｂ ＬＣ
配列番号７８ ３Ｆ２ Ｆａｂ ＬＣ
配列番号７９ ４Ｂ９ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ノブ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）−ＩＬ−２ ｑｍ（２）
配列番号８０ ４Ｂ９ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ホール（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）
配列番号８１ ３Ｆ２ Ｆａｂ ＬＣ
配列番号８２ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ノブ（ｗｔ）−ＩＬ−２ ｑｍ
配列番号８３ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ノブ（ｗｔ）−ＩＬ−２ ｑｍ
配列番号８４ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ノブ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）−ＩＬ−２ ｑｍ
配列番号８５ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ホール（ｗｔ）
配列番号８６ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１ Ｆａｂ ＨＣ−Ｆｃ ホール（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）
配列番号８７ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１ Ｆａｂ ＬＣ
配列番号８８ ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１ Ｆａｂ ＬＣ
配列番号８９ 重鎖可変ドメインＶＨバリアント１、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号９０ 重鎖可変ドメインＶＨバリアント２、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号９１ 重鎖可変ドメインＶＨバリアント３、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号９２ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント１、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号９３ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント２、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号９４ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント３、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号９５ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント４、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号９６ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント５、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号９７ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント６、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号９８ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント７、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号９９ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント８、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号１００ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント９、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号１０１ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント１０、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号１０２ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント１１、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号１０３ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント１２、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号１０４ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント１３、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号１０５ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント１４、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号１０６ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント１５、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号１０７ 軽鎖可変ドメインＶＬ バリアント１６、抗ＰＤ−Ｌ１ ２４３．５５
配列番号１０８ ｍｕＣＥＡ ＨＣ−Ｆｃ（ＤＤ）−ｍｕＩＬ２ｖ
配列番号１０９ ｍｕＣＥＡ ＨＣ−Ｆｃ（ＫＫ）
配列番号１１０ ｍｕＣＥＡ ＬＣ
配列番号１１１ ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ−Ｌ１ ｍｕＩｇＧ１ ＤＡＰＧ ＨＣ
配列番号１１２ ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ−Ｌ１ ｍｕＩｇＧ１ ＤＡＰＧ ＬＣ
配列番号１１３ ヒトカッパ軽鎖定常領域
配列番号１１４ ＩｇＧ１由来のヒト重鎖定常領域
配列番号１１５ リーダー配列
配列番号１１６ リーダー配列
配列番号１１７ リーダー配列
配列番号１１８ リーダー配列
配列番号１１９ リーダー配列
配列番号１２０ リーダー配列
配列番号１２１ リーダー配列
配列番号１２２ リーダー配列
配列番号１２３ リーダー配列
配列番号１２４ ｍｕＦＡＰ ＨＣ−Ｆｃ（ＤＤ）−ｍｕＩＬ２ｖ
配列番号１２５ ｍｕＦＡＰ ＨＣ−Ｆｃ（ＫＫ）
配列番号１２６ ｍｕＦＡＰ ＬＣ
以下の記述において、本発明の実施態様を説明する。
１． Ａ）がんの治療における併用療法としての使用のための、転移の予防又は治療における併用療法としての使用のための、炎症性疾患の治療における併用療法としての使用のための、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させることにおける併用療法としての使用のための、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することにおける併用療法としての使用のための、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン；又は
Ｂ）がんの治療における使用のための、転移の予防又は治療における使用のための、炎症性疾患の治療における使用のための、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させることにおける使用のための、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することにおける使用のための医薬の製造のための腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの使用であって、ここで腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され；又は
Ｃ）がんの治療における使用のための、転移の予防又は治療における使用のための、炎症性疾患の治療における使用のための、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させることにおける使用のための、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することにおける使用のための腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって、ここで腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインはヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され；
ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
２． がんの治療における使用のための、実施態様１に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
３． 乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、メラノーマ、膵臓がん、胃がん、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の治療における使用のための、実施態様２に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
４． 転移の予防又は治療における使用のための、実施態様１に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
５． 炎症性疾患の治療における使用のための、実施態様１に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
６． 腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する又は進行を遅延させることに使用のための、実施態様１に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
７． Ｔ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することに使用のための、実施態様１に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
８． Ａ）
ｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
ｉｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることに使用のための、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって、
ここで、標的は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示される；
又は
Ｂ）
ｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
ｉｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることに使用のための医薬の製造のための腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの使用であって、
ここで、標的は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示され、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与される；
又は
Ｃ）
ｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
ｉｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることに使用のための腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって、
ここで、標的は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示され、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され；
ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし；
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
９． Ａ）
ｉ）ＣＥＡ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
ｉｉ）ＣＥＡ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることに使用のための、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせたＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン；
又は
Ｂ）
ｉ）ＣＥＡ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
ｉｉ）ＣＥＡ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることに使用のための医薬の製造のためのＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの使用；
又は
Ｃ）
ｉ）ＣＥＡ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
ｉｉ）ＣＥＡ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることに使用のためのＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって；
ここでＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され；
ここで、併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし；
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
１０． Ａ）
ｉ）ＦＡＰ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
ｉｉ）ＦＡＰ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることに使用のための、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせたＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン；
又は
Ｂ）
ｉ）ＦＡＰ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
ｉｉ）ＦＡＰ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることに使用のための医薬の製造のためのＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの使用；
又は
Ｃ）
ｉ）ＦＡＰ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
ｉｉ）ＦＡＰ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることに使用のためのＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって；
ここでＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され；
ここで、併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし；
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
１１． Ａ）ＣＥＡ発現腫瘍又はＣＥＡの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、ＦＡＰ発現腫瘍又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、あるいはＣＥＡ又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現に関連する腫瘍を有する患者の治療における使用のための、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって、ここで、免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され、
又は
Ｂ）ＣＥＡ発現腫瘍又はＣＥＡの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、ＦＡＰ発現腫瘍又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、あるいはＣＥＡ又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現に関連する腫瘍を有する患者の治療における使用のための医薬の製造のための腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの使用であって、ここで、免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され、
ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし；
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
１２． 併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインが、
配列番号８４、配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列；又は
配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし；
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体が、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする、実施態様１から１１の何れか一に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
１３． 免疫サイトカインの抗体成分及び抗体が、ヒトＩｇＧ１サブクラスのもの又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする、実施態様１から１２の何れか一に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
１４． 前記抗体が、低下した又は最少のエフェクター機能を有することを特徴とする、実施態様１から１３の何れか一に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
１５． 最少のエフェクター機能が、エフェクターを有さない（ｅｆｆｅｃｔｏｒｌｅｓｓ）Ｆｃ変異に起因することを特徴とする、実施態様１から１４の何れか一に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
１６． エフェクターを有さない（ｅｆｆｅｃｔｏｒｌｅｓｓ）Ｆｃ変異が、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ又はＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ又はＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ（ＥＵ番号付け）である、実施態様１から１５の何れか一に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン又は使用。
１７． Ａ）
ｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
ｉｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上するための方法であって；
ここで、標的は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示され；
ここで腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され；
又は
Ｂ）ＣＥＡ発現腫瘍又はＣＥＡの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、
ＦＡＰ発現腫瘍又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、あるいはＣＥＡ又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現に関連する腫瘍を有する患者の治療の方法であって、ここで、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインはヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され、
ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし；
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする。
１８． 必要とする患者におけるがんの治療のための、必要とする患者における転移の予防又は治療のための、必要とする患者における炎症性疾患の治療のための、又は必要とする患者における腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させるための、又は必要とする患者においてＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激するための方法であって、
患者に腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与することを含み、
ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし；
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする、方法。
１９． がんの治療のための、実施態様１８に記載の方法。
２０． 乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、メラノーマ、膵臓がん、胃がん、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の治療のための、実施態様１９に記載の方法。
２１． 併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインが、
配列番号８４、配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列；又は
配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列を含むことを特徴とし；
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体が、
配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬを含むことを特徴とする、実施態様１７から２０の何れか一に記載の方法。
２２． 免疫サイトカインの抗体成分及び抗体が、ヒトＩｇＧ１サブクラスのもの又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする、実施態様１７から２１の何れか一に記載の方法。
２３． 前記抗体が、低下したエフェクター機能又は最少のエフェクター機能を有することを特徴とする、実施態様１７から２２の何れか一に記載の方法。
２４． 最少のエフェクター機能が、エフェクターを有さない（ｅｆｆｅｃｔｏｒｌｅｓｓ）Ｆｃ変異に起因する、請求項１７から２３の何れか一に記載の方法。
２５． エフェクターを有さないＦｃ変異がＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ又はＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ又はＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ（ＥＵ番号付け）である、実施態様１７から２４の何れか一に記載の方法。
２６． 前記腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及びヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体が同時に又は連続的に投与される、実施態様１７から２５の何れか一に記載の方法。
２７． 患者に化学療法剤を投与することを更に含む、実施態様１７から２６の何れか一に記載の方法。
２８． 必要とする患者におけるがんの治療、必要とする患者における転移の予防又は治療、必要とする患者における炎症性疾患の治療、又は必要とする患者における腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させること、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することを意図したキットであって、
（ａ）腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン、（ｂ）ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体を、同じ又は別々の容器に含み、及び（ｃ）任意で、
腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及びヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の併用療法における使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書を含み、
ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする、キット。
２９． 必要とする患者におけるがんの治療、必要とする患者における転移の予防又は治療、必要とする患者における炎症性疾患の治療、又は必要とする患者における腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させること、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することを意図したキットであって、
（ａ）腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含む容器、及び（ｂ）疾患を治療するための方法として、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体との併用療法における腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインの使用を指示する説明書を含む添付文書を含み、
ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする、キット。
３０． 必要とする患者におけるがんの治療、必要とする患者における転移の予防又は治療、必要とする患者における炎症性疾患の治療、又は必要とする患者における腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させること、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することを意図したキットであって、
（ａ）ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体を含む容器、及び（ｂ）疾患を治療するための方法として、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインとの併用療法におけるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の使用を指示する説明書を含む添付文書を含み
ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする、キット。
３１． がんの治療のための、実施態様２８から３０に記載のキット。
３２． 乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、メラノーマ、膵臓がん、胃がん、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の治療のための、実施態様３１に記載のキット。
３３．併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインが、
配列番号８４、配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列；又は
配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし；
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする、実施態様２８から３２の何れか一に記載のキット。
３４． 免疫サイトカインの抗体成分及び抗体が、ヒトＩｇＧ１サブクラスのもの又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする、実施態様２８から３３の何れか一に記載のキット。
３５． 前記抗体が、低下したエフェクター機能又は最少のエフェクター機能を有することを特徴とする、実施態様２８から３４の何れか一に記載のキット。
３６． 最少のエフェクター機能が、エフェクターを有さない（ｅｆｆｅｃｔｏｒｌｅｓｓ）Ｆｃ変異に起因する、請求項２８から３５の何れか一に記載のキット。
３７． エフェクターを有さないＦｃ変異がＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ又はＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ又はＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ（ＥＵ番号付け）である、実施態様２８から３６の何れか一に記載のキット。
３８． 必要とする患者におけるがんの治療、必要とする患者における転移の予防又は治療、必要とする患者における炎症性疾患の治療、又は必要とする患者における腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させること、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することを意図した医薬であって、
腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインを含み、
ここで、前記医薬はヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体との併用療法における使用のためのものであり、及び任意で、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン及びヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の併用療法における使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書を含み、
ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし、
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする、医薬。
３９． がんの治療のための、実施態様３８に記載の医薬。
４０． 乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、メラノーマ、膵臓がん、胃がん、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の治療のための、実施態様３９に記載の医薬。
４１．
併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
配列番号８４、配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列；又は
配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列
を含むことを特徴とし；
併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ
を含むことを特徴とする、実施態様３８から４０の何れか一に記載の医薬。
４２． 免疫サイトカインの抗体成分及び抗体が、ヒトＩｇＧ１サブクラスのもの又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする、実施態様３８から４１の何れか一に記載の医薬。
４３． 前記抗体が、低下したエフェクター機能又は最少のエフェクター機能を有することを特徴とする、実施態様３８から４２の何れか一に記載の医薬。
４４． 最少のエフェクター機能が、エフェクターを有さない（ｅｆｆｅｃｔｏｒｌｅｓｓ）Ｆｃ変異に起因する、請求項３８から４３の何れか一に記載の医薬。
４５． エフェクターを有さないＦｃ変異がＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ又はＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ又はＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ（ＥＵ番号付け）である、実施態様３８から４４の何れか一に記載の医薬。
マウス腫瘍細胞株の同系モデル単独及び抗ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂとの組み合わせにおけるＣＥＡに対する標的化ＩＬ２ｖイムノコンジュゲートのインビボ有効性。
ＣＥＡに対する標的化ＩＬ２ｖイムノコンジュゲートを、幾つかの同系モデルにおけるそれらの抗腫瘍効果に関して、単独で及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂと組み合わせて試験した。
材料
研究に用いた分子は以下の通りである。抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成を減少させるために、完全免疫担当マウスにおけるインビボ腫瘍モデルにおいて使用のために、ｍｕＣＥＡ−ｍｕＩＬ２ｖと呼ばれるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインＣＥＡ−ＩＬ２ｖのマウス化代替分子が作製された。加えて、抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成を減少させるために、完全免疫担当マウスにおけるインビボ腫瘍モデルにおいて使用のために、ｍｕＦＡＰ−ｍｕＩＬ２ｖと呼ばれるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインＦＡＰ−ＩＬ２ｖのマウス化キメラバージョンが作製された。マウス化代替分子では、Ｆｃドメインのノブ・イントゥー・ホール変異はｍｕＩｇＧ１におけるＤＤＫＫ変異によって置換され、ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ変異はｍｕＩｇＧ１におけるＤＡＰＧ変異によって置換された。
例えば、ｍｕＣＥＡ−ｍｕＩＬ２ｖは以下の特徴により特徴づけられる。親抗体として、ヒト−マウスキメラＩｇＧ１抗体は、マウス定常領域でなく、ヒト（化）可変領域により適用される。潜在的な免疫原性を回避するために、対応するＢｌａｃｋ ６アロタイプを使用した（Ｍｏｕｓｅ Ｇｅｎｏｍｅｓ Ｐｒｏｊｅｃｔにより公開された配列）。ｍｕＩＬ２Ｒαへの結合は、ヒトＩＬ−２ｖで同定されたものに相同な３つの変異によって消失され、それぞれのＯ−グリコシル化部位は除去された：Ｔ２３Ａ（Ｏ−グリコ）、Ｆ７６Ａ、Ｙ７９Ａ、Ｌ１０６Ｇ。加えて、アルデスロイキンのように、Ｃ１６０Ａ変異（シグナルペプチドを含むＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０４３５１に基づく番号付け）による凝集を回避するために、システイン残基を変異させた。ｍｕＩｇＧ１は既にＦｃγＲ結合が減少しているが、マウスＦｃγＲへの結合は、ＤＡＰＧ変異（Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ）の導入によって完全に消失し、一方ｍｕＦｃＲｎ結合は保持されている。ｍｕＩＬ−２ｖを、ｍｕＩｇＧ１抗体の１つの重鎖のＣ末端にのみ非免疫原性（Ｇ４Ｓ）２コネクタを介して融合させた。これを達成するために、免疫サイトカインをＦｃドメインのＤＤＫＫ変異による静電ステアリングを用いて操作し、マウスのバックグラウンドでのヘテロ二量体化を可能にした。
ｍｕＣＥＡ−ｍｕＩＬ２ｖのポリペプチド配列は以下の通りである：
ＤＤ変異を有する重鎖及び融合したｍｕＩＬ２ｖ（配列番号１０８）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＥＦＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＫＴＧＥＡＴＹＶＥＥＦＫＧＲＶＴＦＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤＦＡＹＹＶＥＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＱＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＡＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＫＰＲＥＥＱＩＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＮＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＤＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＤＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＰＡＳＳＳＴＳＳＳＴＡＥＡＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＨＬＥＱＬＬＭＤＬＱＥＬＬＳＲＭＥＮＹＲＮＬＫＬＰＲＭＬＴＡＫＦＡＬＰＫＱＡＴＥＬＫＤＬＱＣＬＥＤＥＬＧＰＬＲＨＶＬＤＧＴＱＳＫＳＦＱＬＥＤＡＥＮＦＩＳＮＩＲＶＴＶＶＫＬＫＧＳＤＮＴＦＥＣＱＦＤＤＥＳＡＴＶＶＤＦＬＲＲＷＩＡＦＡＱＳＩＩＳＴＳＰＱ
ＫＫ変異を有する重鎖（配列番号１０９）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＥＦＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＫＴＧＥＡＴＹＶＥＥＦＫＧＲＶＴＦＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤＦＡＹＹＶＥＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＱＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＡＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＫＰＲＥＥＱＩＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＫＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＮＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＫＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
軽鎖（配列番号：１１０）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＡＡＶＧＴＹＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＫＲＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＨＱＹＹＴＹＰＬＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
ｍｕＦＡＰ−ｍｕＩＬ２ｖのポリペプチド配列は以下の通りである：
ＤＤ変異を有する重鎖及び融合したｍｕＩＬ２ｖ（配列番号１２４）：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＩＧＳＧＡＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＷＦＧＧＦＮＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＱＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＡＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＫＰＲＥＥＱＩＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＮＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＤＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＤＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＰＡＳＳＳＴＳＳＳＴＡＥＡＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＨＬＥＱＬＬＭＤＬＱＥＬＬＳＲＭＥＮＹＲＮＬＫＬＰＲＭＬＴＡＫＦＡＬＰＫＱＡＴＥＬＫＤＬＱＣＬＥＤＥＬＧＰＬＲＨＶＬＤＧＴＱＳＫＳＦＱＬＥＤＡＥＮＦＩＳＮＩＲＶＴＶＶＫＬＫＧＳＤＮＴＦＥＣＱＦＤＤＥＳＡＴＶＶＤＦＬＲＲＷＩＡＦＡＱＳＩＩＳＴＳＰＱ
ＫＫ変異を有する重鎖（配列番号１２５）：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＩＧＳＧＡＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＷＦＧＧＦＮＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＱＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＡＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＫＰＲＥＥＱＩＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＫＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＮＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＫＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
軽鎖（配列番号：１２６）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＴＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＮＶＧＳＲＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＧＩＭＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
ヒト／マウス交差反応性抗ＰＤ−Ｌ１抗体を研究に使用した。例えば、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ−Ｌ１ ｍｕＩｇＧ１と呼ばれる国際公開第２０１０／０７７６３４号（図１１に示される配列）に記載のＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ−Ｌ１抗体に基づく抗マウスＰＤ−Ｌ１代替抗体が、インビボ腫瘍モデルにおいて使用のために作製された。この抗体は、ＦｃγＲ相互作用を消失させるＤＡＰＧ変異を含んでいた。ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０の可変領域を、ＤＡＰＧ Ｆｃ変異を有するマウスＩｇＧ１定常ドメインに結合させた。
ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ−Ｌ１ ｍｕＩｇＧ１のポリペプチド配列は以下の通りである：
ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ−Ｌ１ ｍｕＩｇＧ１ ＤＡＰＧ ＨＣ（配列番号１１１）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＡＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ−Ｌ１ ｍｕＩｇＧ１ ＬＣ（配列番号１１２）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
実施例１
ＭＣ３８−ＣＥＡ肝転移性同系モデル
ＣＥＡ標的化ＩＬ２ｖイムノコンジュゲートのマウス代替物を、マウストランスフェクタント結腸直腸細胞株ＭＣ３８−ＣＥＡにおいて試験し、Ｂｌａｃｋ ６−ｈｕＣＥＡ−ｈｕＦｃγＲＩＩＩ二重トランスジェニックマウスに門脈内に注射した。この研究では、ヒト／マウス交差反応性抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ−Ｌ１ ｍｕＩｇＧ１を使用した。
ＭＣ３８−ＣＥＡ結腸直腸癌細胞は、もともとＣｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ（カリフォルニア州、米国）から得られたものであり、増殖後、Ｒｏｃｈｅ−Ｇｌｙｃａｒｔ内部細胞バンクに寄託された。該腫瘍細胞株は、５％ＣＯ２の水飽和雰囲気下３７℃で、１０％のＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏ）及びＧ４１８（Ｇｅｎｉｔｉｃｉｎ；Ｇｉｂｃｏ）を含有するＤＭＥＭ中で常套的に培養された。生存率９６．３％において、継代９を移植に使用した。０．３ｍｌツベルクリン注射器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、マウス１匹当たり５×１０５個の細胞をマウスの門静脈に注射した。このために、麻酔したＢｌａｃｋ ６−ＣＥＡ−ＦｃγＲＩＩＩトランスジェニックマウスの腹部の中膜で小さな切開を行った。腹膜壁開けて、腸を慎重に圧迫した。１００マイクロリットル（ＲＰＭＩ培地中５×１０５個のＭＣ３８−ＣＥＡ細胞）の細胞懸濁液を門脈に注射した。腹膜壁及び皮膚創傷は、５／０の溶解可能な縫合糸を用いて閉じた。
実験開始時に８−９週齢の雌のＢｌａｃｋ ６−ＣＥＡ−ＦｃγＲＩＩＩマウス（Ｒｏｃｈｅ−Ｇｌｙｃａｒｔ；Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓ、Ｌｙｏｎ、Ｆｒａｎｃｅで飼育）が、認定ガイドライン（ＧＶ−Ｓｏｌａｓ；Ｆｅｌａｓａ；ＴｉｅｒｓｃｈＧ）に従い、特定の病原体がない条件下にて、１２時間明／１２時間暗の日周期にて維持された。実験的研究プロトコールは、地方政府によってレビューされ承認された（Ｐ２０１１／１２８）。動物は到着後１週間、新しい環境への馴致及び観察のために保持された。継続的な健康モニタリングが定期的に実施された。
研究０日目にマウスに５×１０５個のＭＣ３８−ｈｕＣＥＡ細胞を門静脈に注射し、無作為化して秤量した。腫瘍細胞注入の１週間後、マウスにＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ、ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ又はＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせを１回静脈注射した。組み合わせ群ＰＤ−Ｌ１＋ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ（第１週）の最初の投与の１日後に、１匹の動物が死亡したことが判明した。残りのマウスは、立毛、丸まった背中、移動運動の低下（２日以内に回復した）の臨床的兆候を示した。最初の治療投与から２４時間後に死亡が判明したマウスを最終生存評価のために実験から取り出した。第２〜４週目に、ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ及びＰＤ−Ｌ１を交互の週に投与し、マウスはこの新たな投与スケジュールで臨床徴候を示さなかった。全てのマウスに２００μｌの適切な溶液を静脈注射した。ビヒクル群のマウスにヒスチジン緩衝液を注射し、治療群にはＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ構築物若しくはＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ又はＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせを注射した。２００μｌあたりのイムノコンジュゲートの適切な量を得るために、ストック溶液を必要に応じてヒスチジン緩衝液で希釈した。
図１及び表１Ａは、ＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせが、ＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ単独と比較して生存期間中央値及び全生存期間の向上の観点から優れた有効性を媒介したことを示している。
Figure 2019108341
Figure 2019108341
実施例２
ＭＣ３８−ＣＥＡ皮下同系モデル
ＣＥＡ標的化ＩＬ２ｖイムノコンジュゲートのマウス代替物を、マウストランスフェクタント結腸直腸細胞株ＭＣ３８−ＣＥＡにおいて試験し、Ｂｌａｃｋ ６−ＣＥＡ−ＦｃγＲＩＩＩトランスジェニックマウスに皮下注射した。ヒト／マウス交差反応性抗ＰＤ−Ｌ１抗体をこの研究に使用した。
ＭＣ３８−ＣＥＡ結腸直腸癌細胞は、もともとＣｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ（カリフォルニア州、米国）から得られたものであり、増殖後、Ｒｏｃｈｅ−Ｇｌｙｃａｒｔ内部細胞バンクに寄託された。該腫瘍細胞株は、５％ＣＯ２の水飽和雰囲気下３７℃で、１０％のＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏ）及びＧ４１８（Ｇｅｎｉｔｉｃｉｎ；Ｇｉｂｃｏ）を含有するＤＭＥＭ中で常套的に培養された。生存率９７．９％において、継代６を移植に使用した。動物１匹につき５×１０５個の細胞を、１ｍｌのツベルクリン注射器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて１００μｌのＲＰＭＩ細胞培養培地（Ｇｉｂｃｏ）に皮下注射した。
実験開始時に８−９週齢の雌のＢｌａｃｋ ６−ＣＥＡ−ＦｃγＲＩＩＩマウス（Ｒｏｃｈｅ−Ｇｌｙｃａｒｔ；Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓ、Ｌｙｏｎ、Ｆｒａｎｃｅで飼育）が、認定ガイドライン（ＧＶ−Ｓｏｌａｓ；Ｆｅｌａｓａ；ＴｉｅｒｓｃｈＧ）に従い、特定の病原体がない条件下にて、１２時間明／１２時間暗の日周期にて維持された。実験的研究プロトコールは、地方政府によってレビューされ承認された（Ｐ２０１１／１２８）。動物は到着後１週間、新しい環境への馴致及び観察のために保持された。継続的な健康モニタリングが定期的に実施された。
研究０日目にマウスに５×１０５個のＭＣ３８−ＣＥＡ−ｈｕＣＥＡ細胞を皮下注射し、無作為化して秤量した。腫瘍細胞注入の２週間後（腫瘍体積＞２００ｍｍ３）、マウスにＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ、ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ又はＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせを２週間毎週１回静脈注射した。全てのマウスに２００μｌの適切な溶液を静脈注射した。ビヒクル群のマウスにヒスチジン緩衝液を注射し、治療群にはＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ構築物若しくはＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ又はＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせを注射した。２００μｌあたりのイムノコンジュゲートの適切な量を得るために、ストック溶液を必要に応じてヒスチジン緩衝液で希釈した。
図２及び表２Ａは、ＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ ０．５ｍｇ／ｋｇ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせが、ＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ単独並びにより低用量のＣＥＡ−ＩＬ２ｖとの組み合わせと比較して腫瘍増殖阻害の観点から優れた有効性を媒介したことを示している。
Figure 2019108341
Figure 2019108341
実施例３
Ｐａｎｃ０２−ＣＥＡ膵臓同系モデル
ＣＥＡ標的化ＣＥＡ−ＩＬ２ｖイムノコンジュゲートのマウス代替物を、Ｂｌａｃｋ ６−ＣＥＡ−ＦｃγＲＩＩＩトランスジェニックマウスに膵臓内注射されたマウス膵臓Ｐａｎｃ０２−ＣＥＡトランスフェクタント細胞株において試験した。ヒト／マウス交差反応性抗ＰＤ−Ｌ１抗体をこの研究に使用した。
Ｐａｎｃ０２−Ｈ７細胞（マウス膵臓癌）は、もともとＭＤアンダーソンがんセンター（テキサス、米国）から得られたものであり、増殖後、Ｒｏｃｈｅ−Ｇｌｙｃａｒｔ内部細胞バンクに寄託された。Ｐａｎｃ０２−Ｈ７−ｈｕＣＥＡ細胞は、カルシウムトランスフェクション及びサブクローニング技術によって社内で生成された。Ｐａｎｃ０２−Ｈ７−ｈｕＣＥＡを、１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ）、４μｇ／ｍｌのピューロマイシン及び１％Ｇｌｕｔａｍａｘを含むＲＰＭＩ培地で培養した。細胞を３７℃、水飽和雰囲気中、５％ＣＯ２で培養した。継代２１を移植のために使用した。細胞生存率は９３．１％であった。０．３ｍｌツベルクリン注射器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、マウス１匹当たり１×１０５個の細胞をマウスの膵臓に注射した。このために、麻酔したＢｌａｃｋ ６−ＣＥＡ−ＦｃγＲＩＩＩトランスジェニックマウスの左腹部に小さな切開を行った。腹膜壁開けて、膵臓を鉗子で慎重に分離した。１０マイクロリットル（ＲＰＭＩ培地中に１ｘ１０５個のＰａｎｃ０２−Ｈ７−ｈｕＣＥＡ細胞）の細胞懸濁液を膵臓の尾部に注射した。腹膜壁及び皮膚創傷は、５／０の溶解可能な縫合糸を用いて閉じた。
実験開始時に８−９週齢の雌のＢｌａｃｋ ６−ＣＥＡ−ＦｃγＲＩＩＩマウス（Ｒｏｃｈｅ−Ｇｌｙｃａｒｔ；Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓ、Ｌｙｏｎ、Ｆｒａｎｃｅで飼育）が、認定ガイドライン（ＧＶ−Ｓｏｌａｓ；Ｆｅｌａｓａ；ＴｉｅｒｓｃｈＧ）に従い、特定の病原体がない条件下にて、１２時間明／１２時間暗の日周期にて維持された。実験的研究プロトコールは、地方政府によってレビューされ承認された（Ｐ２０１１／１２８）。動物は到着後１週間、新しい環境への馴致及び観察のために保持された。継続的な健康モニタリングが定期的に実施された。
研究０日目にマウスに１×１０５個のＰａｎｃ０２−ＣＥＡ細胞を膵臓内に注射し、無作為化して秤量した。腫瘍細胞注入の１週間後、マウスにＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ、ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ又はＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせを５週間毎週１回静脈注射した。
全てのマウスに２００μｌの適切な溶液を静脈注射した。ビヒクル群のマウスにヒスチジン緩衝液を注射し、治療群にはＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ構築物若しくはＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ又はＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせを注射した。２００μｌあたりのイムノコンジュゲートの適切な量を得るために、ストック溶液を必要に応じてヒスチジン緩衝液で希釈した。
図３及び表３Ａは、ＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせが、ＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ単独と比較して生存期間中央値及び全生存期間の向上の観点から優れた有効性を媒介したことを示している。
Figure 2019108341
Figure 2019108341
実施例４
Ｐａｎｃ０２−ＣＥＡ膵臓同系モデル
ＣＥＡ標的化ＣＥＡ−ＩＬ２ｖイムノコンジュゲートのマウス代替物を、Ｂｌａｃｋ ６−ＣＥＡ−ＦｃγＲＩＩＩトランスジェニックマウスに膵臓内注射されたマウス膵臓Ｐａｎｃ０２−ＣＥＡトランスフェクタント細胞株において非標的ＤＰ４７−ＩＬ２ｖイムノコンジュゲートに対して試験した。ヒト／マウス交差反応性抗ＰＤ−Ｌ１抗体をこの研究に使用した。
Ｐａｎｃ０２−Ｈ７細胞（マウス膵臓癌）は、もともとＭＤアンダーソンがんセンター（テキサス、米国）から得られたものであり、増殖後、Ｒｏｃｈｅ−Ｇｌｙｃａｒｔ内部細胞バンクに寄託された。Ｐａｎｃ０２−Ｈ７−ｈｕＣＥＡ細胞は、カルシウムトランスフェクション及びサブクローニング技術によって社内で生成された。Ｐａｎｃ０２−Ｈ７−ｈｕＣＥＡを、１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ）、４μｇ／ｍｌのピューロマイシン及び１％Ｇｌｕｔａｍａｘを含むＲＰＭＩ培地で培養した。細胞を３７℃、水飽和雰囲気中、５％ＣＯ２で培養した。継代１２を移植のために使用した。細胞生存率は９４％であった。０．３ｍｌツベルクリン注射器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、マウス１匹当たり１×１０５個の細胞をマウスの膵臓に注射した。このために、麻酔したＢｌａｃｋ ６−ＣＥＡ−ＦｃγＲＩＩＩトランスジェニックマウスの左腹部に小さな切開を行った。腹膜壁開けて、膵臓を鉗子で慎重に分離した。１０マイクロリットル（ＲＰＭＩ培地中に１ｘ１０５個のＰａｎｃ０２−Ｈ７−ｈｕＣＥＡ細胞）の細胞懸濁液を膵臓の尾部に注射した。腹膜壁及び皮膚創傷は、５／０の溶解可能な縫合糸を用いて閉じた。
実験開始時に８−９週齢の雌のＢｌａｃｋ ６−ＣＥＡ−ＦｃγＲＩＩＩマウス（Ｒｏｃｈｅ−Ｇｌｙｃａｒｔ；Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓ、Ｌｙｏｎ、Ｆｒａｎｃｅで飼育）が、認定ガイドライン（ＧＶ−Ｓｏｌａｓ；Ｆｅｌａｓａ；ＴｉｅｒｓｃｈＧ）に従い、特定の病原体がない条件下にて、１２時間明／１２時間暗の日周期にて維持された。実験的研究プロトコールは、地方政府によってレビューされ承認された（Ｐ ＺＨ１９３／２０１４）。動物は到着後１週間、新しい環境への馴致及び観察のために保持された。継続的な健康モニタリングが定期的に実施された。
研究０日目にマウスに１×１０５個のＰａｎｃ０２−ＣＥＡ細胞を膵臓内に注射し、無作為化して秤量した。腫瘍細胞注入の１週間後、マウスにＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ、ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ又はＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせを４週間毎週１回静脈注射した。
全てのマウスに２００μｌの適切な溶液を静脈注射した。ビヒクル群のマウスにヒスチジン緩衝液を注射し、治療群にはＣＥＡ−ＩＬ２ｖ構築物若しくはＤＰ４７−ＩＬ２ｖ若しくはＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ又はＣＥＡ−ＩＬ２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ及びＤＰ４７−ＩＬ２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせを注射した。２００μｌあたりのイムノコンジュゲートの適切な量を得るために、ストック溶液を必要に応じてヒスチジン緩衝液で希釈した。ＣＥＡ−ＩＬ２ｖ及びＤＰ４７−ＩＬ２ｖに使用される用量は、ＩＬ２受容体ＥＬＩＳＡアッセイ（図４Ｂに示される）によって測定されるように、それらの投与の２４時間後の同様のレベルの曝露と一致するように選択された。
図１及び表４Ａは、ＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせが、ＣＥＡ−ＩＬ−２ｖ、ＤＰ４７−ＩＬ２ｖ、ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ単独、及びＤＰ４７−ＩＬ２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせと比較して生存期間中央値及び全生存期間の向上の観点から優れた有効性を媒介したことを示している。
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実施例５
ＣＥＡ−ＩＬ２ｖによる処置時のＰＤ−Ｌ１上方制御
新鮮な血液からＰＢＭＣを単離した。簡潔には、血液をＰＢＳで３：１に希釈した。約３０ｍｌの血液／ＰＢＳ混合物をＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ）１５ｍｌに積み重ね、ブレーキなしで４５０ｘｇで３０分間遠心分離した。５ｍｌのピペットを用いて、ＰＢＳを含む５０ｍｌチューブにリンパ球を集めた。チューブをＰＢＳで５０ｍｌまで満たし、３５０ｘｇで１０分間遠心分離した。上清を捨て、ペレットを５０ｍｌのＰＢＳに再懸濁し、３００ｘｇで１０分間遠心分離した。洗浄工程を１回繰り返した。細胞を１０％ＦＣＳ及び１％グルタミンを含むＲＰＭＩに再懸濁した。
Ａ５４９（ＥＣＡＣＣ ８６０１２８０４）は、ヒト白人肺癌（腺癌；原発腫瘍）細胞株である。細胞を１０％ＦＣＳ及び１％グルタミンを含むＤＭＥＭ中で培養した。細胞をコンフルエントに達する前に２〜４日ごとに分けた。
アッセイ開始前日にＡ５４９細胞を採取し、１ｍｌの培地中にウェル当たり１ｍｉｏの密度で６ウェルプレートに播種した。翌日、培地を除去し、ＰＢＭＣを添加して、最終的なＥ：Ｔ比が１０：１若しくは１：１又は培地のみをもたらすようにした。細胞をインキュベーター内で４８時間、１００ｎＭのＣＥＡ−ＩＬ２ｖ、１０ｎＭのＣＥＡ−ＩＬ２ｖ又は培地のみで処置した。処置後、Ａ５４９をＣｅｌｌＤｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ緩衝液により回収し、ＰＤ−Ｌ１発現をフローサイトメトリーにより分析した。
Ａ５４９を、細胞解離緩衝液で４８時間後に回収し、ＦＡＣＳ分析に使用した。細胞を４００ｇで４分間遠心分離し、０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）で１回洗浄した。次いで、４０μｌ／ウェルの希釈抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、４０μｌのＦＡＣＳ緩衝液中５μｌ）又はそれぞれのアイソタイプ対照を細胞に添加した。細胞を冷蔵庫で３０分間インキュベートした。その後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ウェル当たり２％ＰＦＡを含有する２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。分析は、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｆｏｒｔｅｓｓａを用いて行った。
図５は、Ａ５４９腫瘍細胞をＣＥＡ−ＩＬ２ｖ単独で処置してもＡ５４９細胞ではＰＤ−Ｌ１発現が誘導されないことを示している。しかし、Ａ５４９細胞をＰＢＭＣの存在下でＣＥＡ−ＩＬ２ｖで処置すると、Ａ５４９細胞上のＰＤ−Ｌ１の濃度依存性上方制御が検出された。ＰＤ−Ｌ１の上方制御は、共培養物中に存在するＰＢＭＣの量にも依存していた。
実施例６
ＭＣ３８−ＦＡＰ同系皮下腫瘍モデル
ＦＡＰ標的化ＦＡＰ−ＩＬ２ｖイムノコンジュゲートのマウス代替物を、Ｂｌａｃｋ ６マウスに皮下注射されたマウス結腸腺癌ＭＣ３８−ＦＡＰトランスフェクタント細胞株において試験した。この研究では、ヒト／マウス交差反応性抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ−Ｌ１ ｍｕＩｇＧ１を使用した。
Ｒｏｃｈｅ−ＧｌｙｃａｒｔでＭＣ３８−ＦＡＰ ｉｎｖｉｐａ（インビボで継代）細胞を生成し、増殖後、Ｇｌｙｃａｒｔ内部細胞バンクに寄託した。これらの細胞を、１０％ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、スイス）、１ｍＭピルビン酸及び１％のＮＥＡＡ＋６μｇ／ｍｌのピューロマイシンを補充したＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）中で、５％ＣＯ２での水飽和雰囲気下、３７℃で規定通りに培養した。培養継代は、トリプシン／ＥＤＴＡ １ｘ（ＧＩＢＣＯ、スイス）を用いて１日おきに分裂させて行った。注射の日に、培養フラスコ（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−Ｏｎｅ）からトリプシン−ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ、スイス）を用いて腫瘍細胞を回収し、５０ｍｌの培地に移し、洗浄し、ＲＰＭＩ無血清培地（Ｇｉｂｃｏ、スイス）に再懸濁した。ＲＰＭＩを用いて更に洗浄した後、細胞計数器を用いて細胞濃度を測定した。注射のために、１００μｌのＲＰＭＩ細胞培養培地中の２ｘ１０６個の細胞を用いて最終力価を２０ｘ１０６細胞／ｍＬに調整した。
雌のＢｌａｃｋ ６マウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓから購入し、関連するガイドライン（ＧＶ−Ｓｏｌａｓ；Ｆｅｌａｓａ；ＴｉｅｒｓｃｈＧ）に従い、毎日、１２時間明所／１２時間暗所のサイクルで、特定の病原体のいない条件下で保持した。実験的研究プロトコールは、地方政府によってレビューされ承認された（Ｐ ＺＨ１９３／２０１４）。動物は到着後１週間、新しい環境への馴致及び観察のために保持された。継続的な健康モニタリングが定期的に実施された。
研究０日目に、マウスにＭＣ３８−ｍｕＦＡＰ細胞（２×１０６細胞／１００μｌ／マウス）；生存率９４．４％の継代７を皮下注射した。ビヒクル及び抗体療法（ｍｕＦＡＰ−ＩＬ２ｖ；２ｍｇ／ｋｇの用量で、及びｍｕＰＤ−Ｌ１を１０ｍｇ／ｋｇの用量で、並びにその組み合わせ）をｘ日（腫瘍が１００ｍｍ３を超える）、ｘ＋７日、＋１４日、＋２１日等にて静脈内注射した。マウスの最大の処置回数は５であった。
全てのマウスに２００μｌの適切な溶液を静脈注射した。ビヒクル群のマウスに、ヒスチジン緩衝液を注射し、処置群には抗体を注射した。２００μｌあたりの抗体の適切な量を得るために、抗体溶液を必要に応じてヒスチジン緩衝液で希釈した。
図６Ａ、６Ｂ及び表５Ａは、ＦＡＰ−ＩＬ−２ｖ＋ＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂの組み合わせが、ＦＡＰ−ＩＬ−２ｖ及びＰＤ−Ｌ１ Ｍａｂ単独と比較して、腫瘍増殖阻害並びに生存期間中央値及び全生存期間の向上の観点から優れた有効性を媒介したことを示している。
Figure 2019108341
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Claims (16)

  1. がんの治療における併用療法としての使用のための、転移の予防又は治療における併用療法としての使用のための、炎症性疾患の治療における併用療法としての使用のための、腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する若しくは進行を遅延させることにおける併用療法としての使用のための、又はＴ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することにおける併用療法としての使用のための、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって、
    ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
    ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列、又は
    ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
    ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
    ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
    ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列、又は
    ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
    ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
    ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
    を含むことを特徴とし、
    併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
    ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
    を含むことを特徴とする、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  2. がんの治療における使用のための、請求項１に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  3. 乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、メラノーマ、膵臓がん、胃がん、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の治療における使用のための、請求項２に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  4. 転移の予防又は治療における使用のための、請求項１に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  5. 炎症性疾患の治療における使用のための、請求項１に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  6. 腫瘍免疫などの免疫関連疾患を治療する又は進行を遅延させることにおける使用のための、請求項１に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  7. Ｔ細胞活性などの免疫応答又は機能を刺激することにおける使用のための、請求項１に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  8. ｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
    ｉｉ）免疫サイトカインの標的を発現する腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることにおける使用のための、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって、
    ここで、標的は、腫瘍細胞上又は腫瘍細胞環境中に提示され、
    ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
    ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
    ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
    ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
    ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
    ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
    ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
    ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
    ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
    を含むことを特徴とし；
    併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
    ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
    を含むことを特徴とする、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  9. ｉ）ＣＥＡ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
    ｉｉ）ＣＥＡ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることにおける使用のための、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせたＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって、
    ここで、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され；
    ここで、併用療法において使用されるＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
    ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列、又は
    ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
    ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
    ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列
    を含むことを特徴とし；
    併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
    ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
    を含むことを特徴とする、ＣＥＡ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  10. ｉ）ＦＡＰ発現腫瘍における腫瘍増殖の阻害；及び／又は
    ｉｉ）ＦＡＰ発現腫瘍を有する被験体の生存期間中央値及び／又は全生存期間を向上させることにおける使用のための、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせたＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって、
    ここで、併用療法において使用されるＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
    ａ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列；又は
    ｂ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
    ｃ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
    ｄ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
    を含むことを特徴とし；
    併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
    ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
    を含むことを特徴とする、ＦＡＰ標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  11. ＣＥＡ発現腫瘍又はＣＥＡの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、ＦＡＰ発現腫瘍又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現を特徴とする腫瘍を有するか、あるいはＣＥＡ又はＦＡＰの発現若しくは過剰発現に関連する腫瘍を有する患者の治療における使用のための、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインであって、ここで免疫サイトカインは、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせて投与され、
    ここで、併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインは、
    ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号６７の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列、又は
    ｂ）配列番号８４若しくは配列番号８６若しくは配列番号８８のポリペプチド配列、又は
    ｃ）配列番号８４及び配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列、又は
    ｄ）配列番号１０８及び配列番号１０９及び配列番号１１０のポリペプチド配列、又は
    ｅ）配列番号４２の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号４１の軽鎖可変ドメインＶＬ、並びに配列番号３のポリペプチド配列、又は
    ｆ）配列番号７９若しくは配列番号８０若しくは配列番号８１のポリペプチド配列、又は
    ｇ）配列番号７９及び配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列、又は
    ｈ）配列番号１２４及び配列番号１２５及び配列番号１２６のポリペプチド配列
    を含むことを特徴とし；
    併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、
    ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｂ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｃ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｄ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｅ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｆ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９７の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｇ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９８の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｈ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９９の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｉ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１００の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｊ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０１の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｋ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０２の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｌ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０３の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｍ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０４の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｎ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０５の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｏ）配列番号９０の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０６の軽鎖可変ドメインＶＬ、又は
    ｐ）配列番号９１の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号１０７の軽鎖可変ドメインＶＬ
    を含むことを特徴とする、腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  12. 併用療法において使用される腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカインが、
    配列番号８４、配列番号８６及び配列番号８８のポリペプチド配列；又は
    配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１のポリペプチド配列を含むことを特徴とし；
    併用療法において使用されるヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体が、
    ａ）配列番号８９の重鎖可変ドメインＶＨ及び配列番号９２の軽鎖可変ドメインＶＬ
    を含むことを特徴とする、請求項１から１１の何れか一項に記載の、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  13. 免疫サイトカインの抗体成分及び抗体が、ヒトＩｇＧ１サブクラスのもの又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする、請求項１から１２の何れか一項に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  14. 前記抗体が、低下した又は最少のエフェクター機能を有することを特徴とする、請求項１から１３の何れか一項に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  15. 最少のエフェクター機能が、エフェクターを有さない（ｅｆｆｅｃｔｏｒｌｅｓｓ）Ｆｃ変異に起因することを特徴とする、請求項１から１４の何れか一項に記載のヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
  16. エフェクターを有さない（ｅｆｆｅｃｔｏｒｌｅｓｓ）Ｆｃ変異が、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ又はＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ又はＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである、請求項１から１５の何れか一項に記載の、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する抗体と組み合わせた腫瘍標的化ＩＬ−２バリアント免疫サイトカイン。
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