JP3083005B2 - モノクローナル抗体、該抗体を生産するハイブリドーマ及びミリストイル化タンパク質を検出する方法 - Google Patents
モノクローナル抗体、該抗体を生産するハイブリドーマ及びミリストイル化タンパク質を検出する方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はミリストイル化されたタ
ンパク質を認識することができるモノクローナル抗体に
関する。さらに詳しくは、種々のウィルス、特にエイズ
ウィルス、及び発ガン遺伝子産物の構成タンパク質に含
まれるＮ−ミリストイルグリシン（以下、Ｎ−Ｍｙｒ−
Ｇｌｙという）分子を認識することができるモノクロー
ナル抗体に関し、その抗体を産することのできるハイブ
リドーマに関し、さらにミリストイル化タンパク質を発
現していると疑われる試料に対するミリストイル化タン
パク質の発現を検出する方法に関する。
ンパク質を認識することができるモノクローナル抗体に
関する。さらに詳しくは、種々のウィルス、特にエイズ
ウィルス、及び発ガン遺伝子産物の構成タンパク質に含
まれるＮ−ミリストイルグリシン（以下、Ｎ−Ｍｙｒ−
Ｇｌｙという）分子を認識することができるモノクロー
ナル抗体に関し、その抗体を産することのできるハイブ
リドーマに関し、さらにミリストイル化タンパク質を発
現していると疑われる試料に対するミリストイル化タン
パク質の発現を検出する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ミリストイル化タンパク質は、タンパク
質のアミノ末端に炭素数１４個の長鎖飽和脂肪酸である
ミリスチン酸が酸アミド結合を介し共有結合されている
タンパク質であり、アデノシン３′，５′−サイクリッ
クモノフォスフェート（ｃＡＭＰ）−依存性プロテイン
キナーゼの全一次構造決定の途上、１９８２年に庄司ら
によって発見されている〔庄司 et al. Proc.Natl.Aca
d.Sci.USA.,79,6128(1982) 〕。その後、相次いで細胞
由来のタンパク質やウィルス構成タンパク質についての
アミノ基末端のミリストイル基の同定がなされている。
質のアミノ末端に炭素数１４個の長鎖飽和脂肪酸である
ミリスチン酸が酸アミド結合を介し共有結合されている
タンパク質であり、アデノシン３′，５′−サイクリッ
クモノフォスフェート（ｃＡＭＰ）−依存性プロテイン
キナーゼの全一次構造決定の途上、１９８２年に庄司ら
によって発見されている〔庄司 et al. Proc.Natl.Aca
d.Sci.USA.,79,6128(1982) 〕。その後、相次いで細胞
由来のタンパク質やウィルス構成タンパク質についての
アミノ基末端のミリストイル基の同定がなされている。
【０００３】例えば、アミノ基末端がミリストイル化さ
れた細胞由来のタンパク質には、前記ｃＡＭＰ−依存性
プロテインキナーゼをはじめ、ホスホプロテインホスホ
ターゼであるカルシニューリンＢ、ＮＡＤＨ−シトクロ
ームｂ5 レダクターゼ、ＢＣ 3 Ｈ1 筋細胞系の細胞内タ
ンパク質、ｐｐ６０v-src （ｓｒｃ−ｇｅｎｅ遺伝子産
物，チロシンキナーゼ）のｐ３６Ｋ基質タンパク質、マ
クロファージ内の細胞内タンパク質、インシュリンレセ
プター、ビンキュリン等が知られている。
れた細胞由来のタンパク質には、前記ｃＡＭＰ−依存性
プロテインキナーゼをはじめ、ホスホプロテインホスホ
ターゼであるカルシニューリンＢ、ＮＡＤＨ−シトクロ
ームｂ5 レダクターゼ、ＢＣ 3 Ｈ1 筋細胞系の細胞内タ
ンパク質、ｐｐ６０v-src （ｓｒｃ−ｇｅｎｅ遺伝子産
物，チロシンキナーゼ）のｐ３６Ｋ基質タンパク質、マ
クロファージ内の細胞内タンパク質、インシュリンレセ
プター、ビンキュリン等が知られている。
【０００４】アミノ基末端がミリストイル化されたウィ
ルス構成タンパク質については、ラウシャーとモロニー
のマウス白血病ウィルスのＰｒ６５ｇａｇコアタンパク
質、ＦｅＳＶのｇａｇ−ｏｎｃタンパク質、モロニーの
マウス白血病ウィルスのチロシンプロテインキナーゼ、
ラウス肉腫ウィルス（以下ＲＳＶと言う）のｐｐ６０
ｖ−ｓｒｃタンパク質〔Ａ．Ｍ．Ｓｕｈｕｌｔｚ，ｅｔ
ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２７，４２７（１９８
５）］、成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）ウィルス（以下、
ＨＴＬＶ−１と言う）のｐ１９ｇａｇタンパク質、後天
性免疫不全症候群（エイズ）の原因ウィルス（以下、Ｈ
ＩＶ−１と言う）のｐ１７ｇａｇタンパク質〔Ｊ．Ｓｏ
ｒｉｃ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２７，４２７
（１９８５）〕、ポリオーマウィルス及びＳＶ４０の外
被タンパク質ＶＰ２、メーソン−ファイザーモンキーウ
ィルスのコアタンパク質、肝炎Ｂ型ウィルス（以下、Ｈ
ＢＶと言う）のＳＩコアタンパク質〔Ｃ．Ｈ．Ｓｔｒｅ
ｕｌｉ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ），
３２６，６１９（１９８７）〕、ポリオウィルスのコア
タンパク質ＶＰ４等が知られている。また、ヒト癌遺伝
子（ｓｒｃ−ｇｅｎｅ）産物であるｐｐ６
０ｃ−ｓｒｃ、グアノシントリフォスフェート（ＧＴ
Ｐ）結合タンパク質のα−サブユニットにミリストイル
基が見出され、また免疫グロブリンにもミリストイル基
の結合が示唆されている。
ルス構成タンパク質については、ラウシャーとモロニー
のマウス白血病ウィルスのＰｒ６５ｇａｇコアタンパク
質、ＦｅＳＶのｇａｇ−ｏｎｃタンパク質、モロニーの
マウス白血病ウィルスのチロシンプロテインキナーゼ、
ラウス肉腫ウィルス（以下ＲＳＶと言う）のｐｐ６０
ｖ−ｓｒｃタンパク質〔Ａ．Ｍ．Ｓｕｈｕｌｔｚ，ｅｔ
ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２７，４２７（１９８
５）］、成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）ウィルス（以下、
ＨＴＬＶ−１と言う）のｐ１９ｇａｇタンパク質、後天
性免疫不全症候群（エイズ）の原因ウィルス（以下、Ｈ
ＩＶ−１と言う）のｐ１７ｇａｇタンパク質〔Ｊ．Ｓｏ
ｒｉｃ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２７，４２７
（１９８５）〕、ポリオーマウィルス及びＳＶ４０の外
被タンパク質ＶＰ２、メーソン−ファイザーモンキーウ
ィルスのコアタンパク質、肝炎Ｂ型ウィルス（以下、Ｈ
ＢＶと言う）のＳＩコアタンパク質〔Ｃ．Ｈ．Ｓｔｒｅ
ｕｌｉ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ），
３２６，６１９（１９８７）〕、ポリオウィルスのコア
タンパク質ＶＰ４等が知られている。また、ヒト癌遺伝
子（ｓｒｃ−ｇｅｎｅ）産物であるｐｐ６
０ｃ−ｓｒｃ、グアノシントリフォスフェート（ＧＴ
Ｐ）結合タンパク質のα−サブユニットにミリストイル
基が見出され、また免疫グロブリンにもミリストイル基
の結合が示唆されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】以上のように、ミリス
トイル化されたタンパク質は種々の細胞内タンパク質、
ウイルス構成タンパク質及び発ガン遺伝子産物等で見出
されている。特に、前記したようにウィルス構成のタン
パク質にミリストイル基が多く発見されていることは、
ウィルスの機能にとってタンパク質のミリストイル化が
必須であると推定されている。このミリストイル化され
たタンパク質を認識するためのモノクローナル抗体を提
供することは、前記のウィルス、特にＨＩＶ−１、及び
発ガン遺伝子産物に関連する分析、治療、診断等に役立
つものとして期待される。
トイル化されたタンパク質は種々の細胞内タンパク質、
ウイルス構成タンパク質及び発ガン遺伝子産物等で見出
されている。特に、前記したようにウィルス構成のタン
パク質にミリストイル基が多く発見されていることは、
ウィルスの機能にとってタンパク質のミリストイル化が
必須であると推定されている。このミリストイル化され
たタンパク質を認識するためのモノクローナル抗体を提
供することは、前記のウィルス、特にＨＩＶ−１、及び
発ガン遺伝子産物に関連する分析、治療、診断等に役立
つものとして期待される。
【０００６】従来、ミリストイル基の分析手法として
は、タンパク質を化学的切断及び酵素消化し、高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でブロックペプチドを
精製し、ガス−マススペクトロメトリー法によりＮ−ミ
リストイル化を確認する方法が行われている。また、最
近では、主に培養細胞中のタンパク質におけるＮ−ミリ
ストイル化の確認を行っているために培地中に放射標識
したミリスチン酸を加えることにより細胞に取り込ま
せ、代謝させた後、細胞を可溶化し、得られた上清をヒ
ドロキシルアミン処理後、放射線免疫沈澱検定法（ＲＩ
ＰＡ）により分析を行っている。
は、タンパク質を化学的切断及び酵素消化し、高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でブロックペプチドを
精製し、ガス−マススペクトロメトリー法によりＮ−ミ
リストイル化を確認する方法が行われている。また、最
近では、主に培養細胞中のタンパク質におけるＮ−ミリ
ストイル化の確認を行っているために培地中に放射標識
したミリスチン酸を加えることにより細胞に取り込ま
せ、代謝させた後、細胞を可溶化し、得られた上清をヒ
ドロキシルアミン処理後、放射線免疫沈澱検定法（ＲＩ
ＰＡ）により分析を行っている。
【０００７】しかしながら、これらのＮ−ミリストイル
化の確認方法は、煩雑な手法であった。従来、ＡＴＬ患
者血清を認識するモノクローナル抗体、及びＨＩＶ−１
のｐ１７gag を認識するモノクローナル抗体はそれぞれ
公知であったが、ＡＴＬ患者血清及びＨＩＶ−１のｐ１
７gag に共通して存在するＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を認
識するモノクローナル抗体、即ち、ミリストイル化され
たタンパク質の全てを認識する同一のモノクローナル抗
体は存在していなかった。特に、ＲＳＶ、ＨＩＶ−１、
ＨＴＬＶ−１及びＨＢＶ等の病原性ウイルスでは、その
病原性の発現においてタンパク質のミリストイル化が必
須であるとされいる。
化の確認方法は、煩雑な手法であった。従来、ＡＴＬ患
者血清を認識するモノクローナル抗体、及びＨＩＶ−１
のｐ１７gag を認識するモノクローナル抗体はそれぞれ
公知であったが、ＡＴＬ患者血清及びＨＩＶ−１のｐ１
７gag に共通して存在するＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を認
識するモノクローナル抗体、即ち、ミリストイル化され
たタンパク質の全てを認識する同一のモノクローナル抗
体は存在していなかった。特に、ＲＳＶ、ＨＩＶ−１、
ＨＴＬＶ−１及びＨＢＶ等の病原性ウイルスでは、その
病原性の発現においてタンパク質のミリストイル化が必
須であるとされいる。
【０００８】そこで本発明は、種々のミリストイル化タ
ンパク質を認識することができ、同一のモノクローナル
抗体で同時に検出が可能な、しかも簡単な方法で検出す
ることができるＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を認識するモノ
クローナル抗体（以下、抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクロ
ーナル抗体という）を提供することを目的とする。
ンパク質を認識することができ、同一のモノクローナル
抗体で同時に検出が可能な、しかも簡単な方法で検出す
ることができるＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を認識するモノ
クローナル抗体（以下、抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクロ
ーナル抗体という）を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】上記した目的を達成する
ために本発明は、ミリストイル化タンパク質のＮ−Ｍｙ
ｒ−Ｇｌｙ分子を認識し、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬ
Ｈ、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡ及びミリスチン酸と強
く反応し、ＫＬＨ、ＢＳＡ、カプリン酸、ラウリン酸、
パルミチン酸とは反応しないモノクローナル抗体を提供
するものである。ミリストイル化タンパク質の構造上の
特徴であるＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を認識する抗Ｎ−Ｍ
ｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を作成するために、Ｎ
−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ抗原の調製を行なう。この抗原の調製
には、水溶性活性エステル化試薬（ＤＳＰ：４−（Ｎ−
ミリストイルグリコサイロキシ）フェニルジメチルスル
ホニウムメチルサルフェート）を用いることができる。
免疫抗原としては、キーホールリンペットヘモシアニン
（以下、ＫＬＨという）を結合させたＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌ
ｙ−ＫＬＨを調製する。スクリーニング抗原としては、
ウシ血清アルブミン（以下、ＢＳＡという）を結合させ
たＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡを調製する。
ために本発明は、ミリストイル化タンパク質のＮ−Ｍｙ
ｒ−Ｇｌｙ分子を認識し、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬ
Ｈ、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡ及びミリスチン酸と強
く反応し、ＫＬＨ、ＢＳＡ、カプリン酸、ラウリン酸、
パルミチン酸とは反応しないモノクローナル抗体を提供
するものである。ミリストイル化タンパク質の構造上の
特徴であるＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を認識する抗Ｎ−Ｍ
ｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を作成するために、Ｎ
−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ抗原の調製を行なう。この抗原の調製
には、水溶性活性エステル化試薬（ＤＳＰ：４−（Ｎ−
ミリストイルグリコサイロキシ）フェニルジメチルスル
ホニウムメチルサルフェート）を用いることができる。
免疫抗原としては、キーホールリンペットヘモシアニン
（以下、ＫＬＨという）を結合させたＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌ
ｙ−ＫＬＨを調製する。スクリーニング抗原としては、
ウシ血清アルブミン（以下、ＢＳＡという）を結合させ
たＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡを調製する。
【００１０】本発明においては、免疫抗原としてＮ−Ｍ
ｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨをマウスに対して免疫し、マウス
をしゃ血致死させ、脾細胞を得、常法に従い、ＰＥＧを
用いてマウスミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）と細胞融合
し、ＨＡＴ培地によりハイブリドーマの選別を行う。得
られるハイブリドーマを、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡ
抗原により２度スクリーニングを行い、限界希釈法によ
りミリストイル化タンパク質中のＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分
子を認識するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを
得る。
ｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨをマウスに対して免疫し、マウス
をしゃ血致死させ、脾細胞を得、常法に従い、ＰＥＧを
用いてマウスミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）と細胞融合
し、ＨＡＴ培地によりハイブリドーマの選別を行う。得
られるハイブリドーマを、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡ
抗原により２度スクリーニングを行い、限界希釈法によ
りミリストイル化タンパク質中のＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分
子を認識するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを
得る。
【００１１】上記のようにして得られたハイブリドーマ
を常法により培養し、培養終了後、培地を濾過して培養
上清を得る。この培養上清は限外濾過等によって濃縮
し、硫安によりタンパク質を沈澱させて、沈澱物を回収
する。この沈澱を透析することにより脱塩して本発明の
抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を得る。ま
た、別の製造方法として、このハイブリドーマをマウス
の腹腔内に移植し、増殖させて、腹水を採取し、この腹
水を上記と同じ方法によって、濃縮、沈澱、透析等によ
り抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を得る。
を常法により培養し、培養終了後、培地を濾過して培養
上清を得る。この培養上清は限外濾過等によって濃縮
し、硫安によりタンパク質を沈澱させて、沈澱物を回収
する。この沈澱を透析することにより脱塩して本発明の
抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を得る。ま
た、別の製造方法として、このハイブリドーマをマウス
の腹腔内に移植し、増殖させて、腹水を採取し、この腹
水を上記と同じ方法によって、濃縮、沈澱、透析等によ
り抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を得る。
【００１２】本発明におけるハイブリドーマによって生
産される抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体のサ
ブクラスは、ＩｇＧ３に分類されるものである。本発明
はさらに、ミリストイル化タンパク質を発現するヒト又
は動物の組織、体液、細胞又はセルラインを含んでいる
と疑われる試料に対して、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を認
識するモノクローナル抗体を接触させることにより免疫
化学的にミリストイル化タンパク質の発現を検出する方
法を提供する。
産される抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体のサ
ブクラスは、ＩｇＧ３に分類されるものである。本発明
はさらに、ミリストイル化タンパク質を発現するヒト又
は動物の組織、体液、細胞又はセルラインを含んでいる
と疑われる試料に対して、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を認
識するモノクローナル抗体を接触させることにより免疫
化学的にミリストイル化タンパク質の発現を検出する方
法を提供する。
【００１３】本発明で適用可能な免疫化学的な検出方法
には、例えば、凝集反応法、凝集阻止法、免疫拡散法、
免疫比漏法、免疫比濁法、ラテックス比濁法、競合反応
法（固相法、第二抗体法等）、サンドイッチ法、イムノ
メトリック法、リポソームイムノライシスアッセイ（Ｌ
ＩＬＡ）があり、また標識物質を用いる検出方法には、
ラジムオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、エンザイムイムノ
アッセイ（ＥＩＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、
化学発光イムノアッセイ、金属イムノアッセイ、スピン
イムノアッセイ等が挙げられる。
には、例えば、凝集反応法、凝集阻止法、免疫拡散法、
免疫比漏法、免疫比濁法、ラテックス比濁法、競合反応
法（固相法、第二抗体法等）、サンドイッチ法、イムノ
メトリック法、リポソームイムノライシスアッセイ（Ｌ
ＩＬＡ）があり、また標識物質を用いる検出方法には、
ラジムオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、エンザイムイムノ
アッセイ（ＥＩＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、
化学発光イムノアッセイ、金属イムノアッセイ、スピン
イムノアッセイ等が挙げられる。
【００１４】本発明の検出方法によりミリストイル化さ
れたタンパク質を検出した例を次に挙げる。ＨＩＶ−１
には、ｇａｇタンパク質中にミリストイル化されたタン
パク質があることが知られている。図１は、ＨＩＶ−１
の遺伝子マップを示す。その遺伝子産物であるｇａｇタ
ンパク質中には、Ｐｒ５５及びＰ１７と呼ばれるタンパ
ク質中にＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を含むミリストイル化
タンパク質が存在することが知られている。本発明の抗
Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体は、ＨＩＶ−１
のミリストイル化タンパク質であるＰｒ５５Ｋ、４１Ｋ
及び１７Ｋに特異的に反応することが本発明者らによっ
て確かめられている。
れたタンパク質を検出した例を次に挙げる。ＨＩＶ−１
には、ｇａｇタンパク質中にミリストイル化されたタン
パク質があることが知られている。図１は、ＨＩＶ−１
の遺伝子マップを示す。その遺伝子産物であるｇａｇタ
ンパク質中には、Ｐｒ５５及びＰ１７と呼ばれるタンパ
ク質中にＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を含むミリストイル化
タンパク質が存在することが知られている。本発明の抗
Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体は、ＨＩＶ−１
のミリストイル化タンパク質であるＰｒ５５Ｋ、４１Ｋ
及び１７Ｋに特異的に反応することが本発明者らによっ
て確かめられている。
【００１５】また、本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノ
クローナル抗体は、ＲＳＶ感染ＣＥＦ細胞の可溶化上清
に対しても反応し、ミリストイル化されていることが知
られているＲＳＶの遺伝子産物である６０Ｋタンパク質
に特異的に反応することが本発明者らによって確かめら
れている。さらに、本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノ
クローナル抗体は、結腸ガン細胞株ＣＯＬＯ３２０ＤＭ
細胞可溶化上清に対しても反応し、結腸ガン細胞中に特
異的に含まれており、ミリストイル化されていることが
知られている６０Ｋタンパク質に特異的に反応すること
が本発明者らによって確かめられている。
クローナル抗体は、ＲＳＶ感染ＣＥＦ細胞の可溶化上清
に対しても反応し、ミリストイル化されていることが知
られているＲＳＶの遺伝子産物である６０Ｋタンパク質
に特異的に反応することが本発明者らによって確かめら
れている。さらに、本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノ
クローナル抗体は、結腸ガン細胞株ＣＯＬＯ３２０ＤＭ
細胞可溶化上清に対しても反応し、結腸ガン細胞中に特
異的に含まれており、ミリストイル化されていることが
知られている６０Ｋタンパク質に特異的に反応すること
が本発明者らによって確かめられている。
【００１６】
〔実施例１〕ハイブリドーマの製造 ４−（Ｎ−ミリストイルグリシルオキシ）フェニルジメ
チルスルホニウムメチルサルフェート（以下、Ｎ−Ｍｙ
ｒ−Ｇｌｙ−ＤＳＰと略す）の合成：４ｍｍｏｌのＮ−
Ｍｙｒ−Ｇｌｙをクロロホルム−アセトニトリル（１：
１）混液３０ｍｌに溶解し、これに４ｍｍｏｌの４−ヒ
ドロキシフェニルジメチルスルフォニウムメチルサルフ
ェート（ＤＳＰと略す）及び４．４ｍｍｏｌのジシクロ
ヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣと略す）を加えて室温
で一夜攪拌した。生じたジシクロヘキシルウレアを濾別
して除き、上清を蒸発乾固してＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−Ｄ
ＳＰを調製した。この反応のフローを次に示す。
チルスルホニウムメチルサルフェート（以下、Ｎ−Ｍｙ
ｒ−Ｇｌｙ−ＤＳＰと略す）の合成：４ｍｍｏｌのＮ−
Ｍｙｒ−Ｇｌｙをクロロホルム−アセトニトリル（１：
１）混液３０ｍｌに溶解し、これに４ｍｍｏｌの４−ヒ
ドロキシフェニルジメチルスルフォニウムメチルサルフ
ェート（ＤＳＰと略す）及び４．４ｍｍｏｌのジシクロ
ヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣと略す）を加えて室温
で一夜攪拌した。生じたジシクロヘキシルウレアを濾別
して除き、上清を蒸発乾固してＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−Ｄ
ＳＰを調製した。この反応のフローを次に示す。
【００１７】
【化１】
【００１８】免疫抗原及びアッセイ抗原の調製：免疫抗
原（Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨ）は、次のよう調製し
た。キーホールリンペットホモシアニン（ＫＬＨ）１５
０ｍｇをｐＨ９．６で１０ｍｌの５０ｍＭ Ｎａ2 ＣＯ
3 −ＮａＨＣＯ3 緩衝液に溶解し、同緩衝液に一夜透析
した。その透析内液に、先に調製したＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌ
ｙ−ＤＳＰの水溶液を５ｍｌ（１５０ｍｇ／ｍｌ）をゆ
っくり滴下し、ｐＨ９．６に調整して４８時間室温で反
応させた。未反応の試薬を除く目的で同緩衝液に対し３
日間透析し、さらに水に対し３日間透析して凍結乾燥し
て、免疫抗原（Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨ）を得た。
原（Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨ）は、次のよう調製し
た。キーホールリンペットホモシアニン（ＫＬＨ）１５
０ｍｇをｐＨ９．６で１０ｍｌの５０ｍＭ Ｎａ2 ＣＯ
3 −ＮａＨＣＯ3 緩衝液に溶解し、同緩衝液に一夜透析
した。その透析内液に、先に調製したＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌ
ｙ−ＤＳＰの水溶液を５ｍｌ（１５０ｍｇ／ｍｌ）をゆ
っくり滴下し、ｐＨ９．６に調整して４８時間室温で反
応させた。未反応の試薬を除く目的で同緩衝液に対し３
日間透析し、さらに水に対し３日間透析して凍結乾燥し
て、免疫抗原（Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨ）を得た。
【００１９】次に、アッセイ抗原（Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ
−ＢＳＡ）の調製は、上記の免疫抗原の調製方法におい
て、ＫＬＨのかわりにウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を
用い、同様に行って得た。ハプテンＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ
の結合量は、６Ｎ ＨＣｌで加水分解して、生じたミリ
スチン酸を蛍光ラベル化した後、ＨＰＬＣで定量した。
その結果、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙの結合量は、ＫＬＨ及び
ＢＳＡ １ｍｏｌに対して約２０〜３０ｍｏｌであっ
た。
−ＢＳＡ）の調製は、上記の免疫抗原の調製方法におい
て、ＫＬＨのかわりにウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を
用い、同様に行って得た。ハプテンＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ
の結合量は、６Ｎ ＨＣｌで加水分解して、生じたミリ
スチン酸を蛍光ラベル化した後、ＨＰＬＣで定量した。
その結果、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙの結合量は、ＫＬＨ及び
ＢＳＡ １ｍｏｌに対して約２０〜３０ｍｏｌであっ
た。
【００２０】ハイブリドーマの調製：免疫抗原（Ｎ−Ｍ
ｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨ）を１ｍｇ／ｍｌ濃度になるよう
にＰＢＳ（−）に溶解し、等容量の完全アジュバンドと
エマルジョンを調製した。これをマウスに対して１匹当
り２００μｇを１週間毎に４回、腹腔内に基礎免疫し
た。
ｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨ）を１ｍｇ／ｍｌ濃度になるよう
にＰＢＳ（−）に溶解し、等容量の完全アジュバンドと
エマルジョンを調製した。これをマウスに対して１匹当
り２００μｇを１週間毎に４回、腹腔内に基礎免疫し
た。
【００２１】３週間後、免疫抗原（Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ
−ＫＬＨ）０．２ｍｇ／ｍｌＰＢＳ（−）溶液を２００
μｌ尾静注し、最終免疫とした。最終免疫の３日後、マ
ウスをしゃ血致死させ、脾細胞を得、常法に従い、ＰＥ
Ｇを用いてマウスミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）と細胞融
合し、ＨＡＴ培地によりハイブリドーマの選別を行っ
た。得られたハイブリドーマは、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−
ＢＳＡ抗原により２度スクリーニングを行った後、限界
希釈法により抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ抗体産生ハイブリド
ーマＡＭＧを確立した。
−ＫＬＨ）０．２ｍｇ／ｍｌＰＢＳ（−）溶液を２００
μｌ尾静注し、最終免疫とした。最終免疫の３日後、マ
ウスをしゃ血致死させ、脾細胞を得、常法に従い、ＰＥ
Ｇを用いてマウスミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）と細胞融
合し、ＨＡＴ培地によりハイブリドーマの選別を行っ
た。得られたハイブリドーマは、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−
ＢＳＡ抗原により２度スクリーニングを行った後、限界
希釈法により抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ抗体産生ハイブリド
ーマＡＭＧを確立した。
【００２２】このハイブリドーマＡＭＧは、平成４年１
０月２２日から通商産業省微生物工業技術研究所（ＦＲ
Ｉ）に受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１３２１６として寄託さ
れている。 〔実施例２〕抗Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体の精製 ハイブリドーマＡＭＧとＳＦＭ１０１培地「ニッスイ」
（商品名：日水株式会社製）を用いてスピナーで４．５
ｌを７日間培養した。培養終了後、培地をガラスフィル
ターに通して細胞を除去して培養上清を得た。次に培養
上清は限外濾過によって１／１０量まで濃縮した。次
に、濃縮された培養上清に４０％飽和濃度になるように
硫安を徐々に加えてタンパク質を沈澱させて、沈澱物を
回収した。この沈澱を最小量のＰＢＳで溶解後、これを
ＰＢＳで一晩透析して脱塩した。透析後に得られた抗体
は約２２５ｍｇであった。
０月２２日から通商産業省微生物工業技術研究所（ＦＲ
Ｉ）に受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１３２１６として寄託さ
れている。 〔実施例２〕抗Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体の精製 ハイブリドーマＡＭＧとＳＦＭ１０１培地「ニッスイ」
（商品名：日水株式会社製）を用いてスピナーで４．５
ｌを７日間培養した。培養終了後、培地をガラスフィル
ターに通して細胞を除去して培養上清を得た。次に培養
上清は限外濾過によって１／１０量まで濃縮した。次
に、濃縮された培養上清に４０％飽和濃度になるように
硫安を徐々に加えてタンパク質を沈澱させて、沈澱物を
回収した。この沈澱を最小量のＰＢＳで溶解後、これを
ＰＢＳで一晩透析して脱塩した。透析後に得られた抗体
は約２２５ｍｇであった。
【００２３】〔実施例３〕抗Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体の性質 （エライザ法） 抗原プレートの作成：Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡ，Ｂ
ＳＡをそれぞれ２００μｇ／ｍｌの濃度で、１０ｍＭの
ＭｇＣｌ2 及び０．１％のＴｗｅｅｎ８０を含む５０ｍ
Ｍのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）に溶解して抗原溶液
とする。該抗原溶液をイムノプレート（Ｎｕｎｃ）に５
０μｌ／ｗｅｌｌ添加する。次に３７℃で３時間インキ
ュベートする。その後、０．１％のＴｗｅｅｎ８０で１
回洗浄し、水道水で１回洗浄する（これを１セットとす
る。）。次に２％ＢＳＡ水溶液をイムノプレート（Ｎｕ
ｎｃ）に１００μｌ／ｗｅｌｌ添加する。これを４℃で
一夜マスキングする。その後洗浄を１セット行い、４℃
で保存して抗原プレートとする。
ＳＡをそれぞれ２００μｇ／ｍｌの濃度で、１０ｍＭの
ＭｇＣｌ2 及び０．１％のＴｗｅｅｎ８０を含む５０ｍ
Ｍのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）に溶解して抗原溶液
とする。該抗原溶液をイムノプレート（Ｎｕｎｃ）に５
０μｌ／ｗｅｌｌ添加する。次に３７℃で３時間インキ
ュベートする。その後、０．１％のＴｗｅｅｎ８０で１
回洗浄し、水道水で１回洗浄する（これを１セットとす
る。）。次に２％ＢＳＡ水溶液をイムノプレート（Ｎｕ
ｎｃ）に１００μｌ／ｗｅｌｌ添加する。これを４℃で
一夜マスキングする。その後洗浄を１セット行い、４℃
で保存して抗原プレートとする。
【００２４】インヒビション・アッセイ：インヒビター
としてＫＬＨ、ＢＳＡ、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨ、
Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡを用いて抗Ｍｙｒ−Ｇｌｙ
モノクローナル抗体のインヒビション・アッセイを次の
ように行った。前記各インヒビターを各々１ｍｇ／ｍｌ
になるように、５０ｍＭのトリス−塩酸，ｐＨ８．０，
１０ｍＭの塩化マグネシウム，０．１％Ｔｗｅｅｎ８０
に溶解した。調製された各インヒビター溶液を２倍連続
希釈した。次に、濃度を種々に変えた各濃度のインヒビ
ター溶液３０ｍｌと抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナ
ル抗体溶液３０μｌを混合し、３７℃で１時間インキュ
ベートした。得られた混合溶液５０μｌを抗原吸着イム
ノプレートに添加した。次に、３７℃で２時間インキュ
ベートし、洗浄を５セットした。次に、２次抗体溶液
（３ＭのＮａＣｌ及び２％ＢＳＡを含むｐＨ７．５の
０．５Ｍのトリス−塩酸中の抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋
Ｌ））を５０μｌ／ｗｅｌｌ添加した。次に、３７℃で
１時間インキュベートした。さらに洗浄を５セットし
た。次に、ＴＭＢＺ発色液を５０μ／ｗｅｌｌ添加し
た。次に５０μ／ｗｅｌｌの０．３Ｎの硫酸で発色反応
を停止し、主波長４５０ｎｍ、副波長６３０ｎｍのオー
トリーダで測定した。図２にその結果を示す。
としてＫＬＨ、ＢＳＡ、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨ、
Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡを用いて抗Ｍｙｒ−Ｇｌｙ
モノクローナル抗体のインヒビション・アッセイを次の
ように行った。前記各インヒビターを各々１ｍｇ／ｍｌ
になるように、５０ｍＭのトリス−塩酸，ｐＨ８．０，
１０ｍＭの塩化マグネシウム，０．１％Ｔｗｅｅｎ８０
に溶解した。調製された各インヒビター溶液を２倍連続
希釈した。次に、濃度を種々に変えた各濃度のインヒビ
ター溶液３０ｍｌと抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナ
ル抗体溶液３０μｌを混合し、３７℃で１時間インキュ
ベートした。得られた混合溶液５０μｌを抗原吸着イム
ノプレートに添加した。次に、３７℃で２時間インキュ
ベートし、洗浄を５セットした。次に、２次抗体溶液
（３ＭのＮａＣｌ及び２％ＢＳＡを含むｐＨ７．５の
０．５Ｍのトリス−塩酸中の抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋
Ｌ））を５０μｌ／ｗｅｌｌ添加した。次に、３７℃で
１時間インキュベートした。さらに洗浄を５セットし
た。次に、ＴＭＢＺ発色液を５０μ／ｗｅｌｌ添加し
た。次に５０μ／ｗｅｌｌの０．３Ｎの硫酸で発色反応
を停止し、主波長４５０ｎｍ、副波長６３０ｎｍのオー
トリーダで測定した。図２にその結果を示す。
【００２５】図２によれば、本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇ
ｌｙモノクローナル抗体は、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬ
Ｈ及びＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡと強く反応し、ＫＬ
Ｈ及びＢＳＡとは反応せず、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を
特異的に認識していることが確認される。また、本発明
の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を用いたＥ
ＬＩＳＡ法によるインヒビション・アッセイの結果、本
発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体は、Ｎ
−Ｍｙｒ−Ｇｌｙの５０％阻害濃度（以下、ＣＩ50とい
う）は、２８．５μｍｏｌ／ｍｌであり、その他のＮ−
Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ペプチドとも同程度のＣＩ50値を示し
た。
ｌｙモノクローナル抗体は、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＫＬ
Ｈ及びＮ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡと強く反応し、ＫＬ
Ｈ及びＢＳＡとは反応せず、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ分子を
特異的に認識していることが確認される。また、本発明
の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を用いたＥ
ＬＩＳＡ法によるインヒビション・アッセイの結果、本
発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体は、Ｎ
−Ｍｙｒ−Ｇｌｙの５０％阻害濃度（以下、ＣＩ50とい
う）は、２８．５μｍｏｌ／ｍｌであり、その他のＮ−
Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ペプチドとも同程度のＣＩ50値を示し
た。
【００２６】次に、インヒビターとして、カプリン酸、
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸も使用して、
前記と同じ方法により、インヒビション・アッセイを行
った。その結果を図３に示す。図３によれば、本発明の
抗Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体は、特異的にミリ
スチン酸に反応することが分かる。
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸も使用して、
前記と同じ方法により、インヒビション・アッセイを行
った。その結果を図３に示す。図３によれば、本発明の
抗Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体は、特異的にミリ
スチン酸に反応することが分かる。
【００２７】〔実施例４〕サブクラスの検討 本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を産
出するハイブリドーマの培養上清を限外濾過により１０
倍濃縮したものを試料とした。１０倍連続希釈した試料
１００μｌを９６ｗｅｌｌプレートに固相化（３７℃，
２時間）後、マウスの各サブクラスに対するアルカリフ
ォスファターゼ標識抗体を用いＥＩＡにより測定を行っ
た。その測定結果を下記の表１に示す。
出するハイブリドーマの培養上清を限外濾過により１０
倍濃縮したものを試料とした。１０倍連続希釈した試料
１００μｌを９６ｗｅｌｌプレートに固相化（３７℃，
２時間）後、マウスの各サブクラスに対するアルカリフ
ォスファターゼ標識抗体を用いＥＩＡにより測定を行っ
た。その測定結果を下記の表１に示す。
【００２８】
【表１】
【００２９】〔実施例５〕ＨＩＶ−１感染細胞を含む試料中の各種ミリストイル化
タンパク質の検出 ＨＩＶ−１持続感染細胞株ＣＥＭ／ＬＡＶ細胞可溶化上
清に対して、本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクロー
ナル抗体を用いて、ウェスタン・イミュノ−ブロッティ
ング・アッセイを行った。対照として、ＨＩＶ−１ポジ
ティブ血清を用いた。そのチャートを図４に示す。図４
によれば、本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナ
ル抗体は、ＨＩＶ−１のミリストイル化タンパク質であ
るＰｒ５５Ｋ、４１Ｋ及び１７Ｋに相当する部分に特異
的に反応することが分かる。
タンパク質の検出 ＨＩＶ−１持続感染細胞株ＣＥＭ／ＬＡＶ細胞可溶化上
清に対して、本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクロー
ナル抗体を用いて、ウェスタン・イミュノ−ブロッティ
ング・アッセイを行った。対照として、ＨＩＶ−１ポジ
ティブ血清を用いた。そのチャートを図４に示す。図４
によれば、本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナ
ル抗体は、ＨＩＶ−１のミリストイル化タンパク質であ
るＰｒ５５Ｋ、４１Ｋ及び１７Ｋに相当する部分に特異
的に反応することが分かる。
【００３０】ラウス肉腫感染細胞を含む試料中の各種ミ
リストイル化タンパク質の検出 上記のＨＩＶ−１感染細胞についてのミリストイル化タ
ンパク質の検出と同様に、ラウス肉腫ウイルス感染ニワ
トリ胚繊維芽細胞可溶化上清に対して本発明の抗Ｎ−Ｍ
ｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を用いて、上記と同じ
アッセイを行なった。対照として抗ｃ−ｓｒｃポリクロ
ナール抗体を用いた。その結果を図５に示す。図５によ
れば、本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗
体を用いたものは、ミリストイル化タンパク質として既
に知られている６０Ｋに相当する部分に特異的にチャー
トが表れた。
リストイル化タンパク質の検出 上記のＨＩＶ−１感染細胞についてのミリストイル化タ
ンパク質の検出と同様に、ラウス肉腫ウイルス感染ニワ
トリ胚繊維芽細胞可溶化上清に対して本発明の抗Ｎ−Ｍ
ｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を用いて、上記と同じ
アッセイを行なった。対照として抗ｃ−ｓｒｃポリクロ
ナール抗体を用いた。その結果を図５に示す。図５によ
れば、本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗
体を用いたものは、ミリストイル化タンパク質として既
に知られている６０Ｋに相当する部分に特異的にチャー
トが表れた。
【００３１】結腸ガン細胞を含む試料中の各種ミリスト
イル化タンパク質の検出 上記のＨＩＶ−１感染細胞についてのミリストイル化タ
ンパク質の検出と同様に、結腸ガン細胞株ＣＯＬＯ３２
０ＤＭ細胞可溶化上清に対して本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−
Ｇｌｙモノクローナル抗体を用いて、上記と同じアッセ
イを行なった。その結果を図６に示す。図６によれば、
本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を用
いたものは、ミリストイル化タンパク質として既に知ら
れている６０Ｋに相当する部分に特異的にチャートが表
れた。
イル化タンパク質の検出 上記のＨＩＶ−１感染細胞についてのミリストイル化タ
ンパク質の検出と同様に、結腸ガン細胞株ＣＯＬＯ３２
０ＤＭ細胞可溶化上清に対して本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−
Ｇｌｙモノクローナル抗体を用いて、上記と同じアッセ
イを行なった。その結果を図６に示す。図６によれば、
本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体を用
いたものは、ミリストイル化タンパク質として既に知ら
れている６０Ｋに相当する部分に特異的にチャートが表
れた。
【００３２】
【発明の効果】本発明の抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクロ
ーナル抗体は、その認識部位がタンパク質中のミリスチ
ン酸とグリシンが結合した非常に小さい部位であり、抗
原性の強い多くのエピトープを有するタンパク質中でこ
のエピトープを特異的に認識できる効果を有する。
ーナル抗体は、その認識部位がタンパク質中のミリスチ
ン酸とグリシンが結合した非常に小さい部位であり、抗
原性の強い多くのエピトープを有するタンパク質中でこ
のエピトープを特異的に認識できる効果を有する。
【００３３】種々のウィルス、特にエイズウィルス、及
び発ガン遺伝子産物に関連する分析、治療、診断等に役
立つものとして期待される。
び発ガン遺伝子産物に関連する分析、治療、診断等に役
立つものとして期待される。
【図１】エイズウィルスの遺伝子マップを示す。
【図２】インヒビターとしてＫＬＨ、ＢＳＡ、Ｎ−Ｍｙ
ｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨ、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡを用
いた抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体のインヒ
ビション・アッセイの結果を示す。
ｒ−Ｇｌｙ−ＫＬＨ、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡを用
いた抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体のインヒ
ビション・アッセイの結果を示す。
【図３】インヒビターとして、カプリン酸、ラウリン
酸、ミリスチン酸、パルミチン酸を用いたインヒビショ
ン・アッセイの結果を示す。
酸、ミリスチン酸、パルミチン酸を用いたインヒビショ
ン・アッセイの結果を示す。
【図４】ＨＩＶ−１持続感染細胞株ＣＥＭ／ＬＡＶ細胞
可溶化上清に対する抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナ
ル抗体を用いたウェスタン・イミュノ−ブロッティング
・アッセイの結果を示す。
可溶化上清に対する抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナ
ル抗体を用いたウェスタン・イミュノ−ブロッティング
・アッセイの結果を示す。
【図５】ラウス肉腫ウイルス感染ニワトリ胚繊維芽細胞
可溶化上清に対する抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナ
ル抗体を用いたウェスタン・イミュノ−ブロッティング
・アッセイの結果を示す。
可溶化上清に対する抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナ
ル抗体を用いたウェスタン・イミュノ−ブロッティング
・アッセイの結果を示す。
【図６】結腸ガン細胞株ＣＯＬＯ３２０ＤＭ細胞可溶化
上清に対する抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体
を用いたウェスタン・イミュノ−ブロッティング・アッ
セイの結果を示す。
上清に対する抗Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙモノクローナル抗体
を用いたウェスタン・イミュノ−ブロッティング・アッ
セイの結果を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 15/00 - 15/90 C07K 16/00 - 16/46 C12N 5/00 - 5/28 C12P 21/00 - 21/08 G01N 33/53 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (3)
- 【請求項１】 ミリストイル化タンパク質のＮ−ミリス
トイルグリシン分子を認識し、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−Ｋ
ＬＨ、Ｎ−Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−ＢＳＡ及びミリスチン酸と
強く反応し、ＫＬＨ、ＢＳＡ、カプリン酸、ラウリン
酸、パルミチン酸とは反応しないモノクローナル抗体。 - 【請求項２】 請求項１記載のモノクローナル抗体を生
産する能力を有するハイブリドーマ。 - 【請求項３】 ミリストイル化タンパク質を発現するヒ
ト又は動物の組織、体液、細胞又はセルラインを含んで
いると疑われる試料に対して、請求項１に記載のモノク
ローナル抗体を接触させることにより免疫化学的にミリ
ストイル化タンパク質の発現を検出する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04308990A JP3083005B2 (ja) | 1992-11-18 | 1992-11-18 | モノクローナル抗体、該抗体を生産するハイブリドーマ及びミリストイル化タンパク質を検出する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04308990A JP3083005B2 (ja) | 1992-11-18 | 1992-11-18 | モノクローナル抗体、該抗体を生産するハイブリドーマ及びミリストイル化タンパク質を検出する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06153980A JPH06153980A (ja) | 1994-06-03 |
| JP3083005B2 true JP3083005B2 (ja) | 2000-09-04 |
Family
ID=17987616
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04308990A Expired - Fee Related JP3083005B2 (ja) | 1992-11-18 | 1992-11-18 | モノクローナル抗体、該抗体を生産するハイブリドーマ及びミリストイル化タンパク質を検出する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3083005B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015137441A1 (ja) * | 2014-03-14 | 2015-09-17 | 国立大学法人東京工業大学 | 抗ミリストイル化タンパク質抗体又はその抗原結合フラグメント、ミリストイル化タンパク質検出キット、医薬、遺伝子、及びベクター |
-
1992
- 1992-11-18 JP JP04308990A patent/JP3083005B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，ＶＯＬ．１６２，Ｎｏ．２，（１９８９），Ｐ．７２４−７３２ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06153980A (ja) | 1994-06-03 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20000614 |
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