JP3204971B2 - 阻害剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、血清蛋白である腫瘍壊死因子（TNF）のin
vivo生産の阻害剤である化合物に関する。

発明の背景 過剰なまたは非制御的なTNF生産は、慢性関節リウマ
チ、リウマチ様脊椎炎、変形性関節症、通風性関節炎お
よび他の関節炎症状；敗血症、敗血症性ショック、内毒
素性ショック、グラム陰性菌敗血症、トキシックショッ
ク症候群、成人呼吸窮迫症候群、大脳マラリア、慢性肺
炎症性疾患、珪肺症、肺サルコイドーシス、骨吸収病、
再灌流損傷、対宿主性移植片反応、同種移植片拒絶反
応、インフルエンザのような感染症による熱および筋肉
痛、感染症または悪性疾患に伴う悪液質、急性免疫不全
症候群（AIDS）に伴う悪液質、AIDS、ARC（AIDS関連症
候群）、ケロイド形成、瘢痕組織形成、クローン病、潰
瘍性大腸炎、またはピレシス（pyresis）を含む多くの
疾患を媒介するか、あるいは悪化させるのに関連する。

AIDSはヒト免疫不全ウイルス（HIV）によるＴリンパ
球の感染が原因である。HIVについては、少なくとも３
つのタイプまたは菌株、即ちHIV−１、HIV−２およびHI
V−３が同定されている。HVI感染の結果、Ｔ細胞によっ
て媒介される免疫が低下し、感染した個体は重篤な易感
染症および／または異常腫瘍を発現する。HIVがＴリン
パ球に侵入するには、Ｔリンパ球の活性化が必要であ
る。HIV−１やHIV−２などの他のウイルスはＴ細胞活性
化の後にＴリンパ球に感染し、このようなウイルス蛋白
の発現および／または複製は、このようなＴ細胞活性化
によって媒介または維持される。活性化Ｔリンパ球がHI
Vに感染すると、このＴリンパ球は、HIV遺伝子発現およ
び／またはHIV複製を可能にするために、活性化状態に
維持され続けなければならない。モノカイン、特にTNF
は、Ｔリンパ球活性化を維持する役割を果すことによっ
て、活性化Ｔ細胞媒介HIV蛋白発現および／またはウイ
ルス複製に関連している。したがって、HIVに感染した
個体におけるモノカイン、特にTNFの生産を阻害するこ
とによるようなモノカイン活性の妨害は、Ｔ細胞活性化
の維持を制限する助けとなり、それによって、まだ感染
していない細胞に対するHIV感染性の進行を低下させ、
その結果、HIV感染によって引き起こされる免疫不全の
進行を遅延または排除する。単球、マクロファージ、な
らびにクッパー細胞およびグリア細胞などの関連細胞
も、HIV感染の維持に関連している。これらの細胞は、
Ｔ細胞と同様、ウイルス複製に関する標的であり、ウイ
ルス複製のレベルは当該細胞の活性化状態に依存する
［ローゼンバーグ（Rosenberg）ら、ジ・イムノパソジ
ェネシス・オブ・HIV・インフェクション，アドバンシ
ズ・イン・イムノロジー（The Immunopathogenesis of
HIV Infection,Advances in Immunology）、第57巻、
（1989）を参照］。TNFなどのモノカインは、単球およ
び／またはマクロファージにおけるHIV複製を活性化す
ることが示されており［ポリ（Poli）ら、プロシーディ
ングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシズ（Proc.Natl.Acad.Sci.）、87:782−784（1990）
を参照］、したがって、モノカインの生産または活性の
阻害は、Ｔ細胞について前記したように、HIVの進行を
制限する助けとなる。さらなる研究は、in vitroでHIV
の活性化における一般的な因子としてTHF−αを同定
し、核因子κＢ、細胞の細胞質において見られる核調節
蛋白を介する作用のメカニズムを明らかにした［オズボ
ーン（Osborn）ら、PNAS（86）2336−2340］。この証拠
は、TNF合成の低下が、転写およびその結果のウイルス
生産の低下によって、HIV感染における抗ウイルス性効
果を有することを示唆する。

TNFは、ここに記載した理由と同様の理由により、サ
イトメガロウイルス（CMV）、インフルエンザウイル
ス、アデノウイルス、およびヘルペスウイルスなどの他
のウイルス感染に関して、種々の役割に関連している。

TNFの逆効果を制御する能力は、このような使用を必
要とする哺乳類においてTNFを阻害する化合物の使用に
よって促進される。過剰および／または非制御的なTNF
生産によって悪化するか、あるいは引き起こされるTNF
媒介疾患状態を処置するのに有用である化合物が依然と
して必要とされている。

発明の概要 本発明は、処置の必要なヒトを含む哺乳類に有効なTN
F阻害量の式（Ｉ）の化合物を投与することからなる、
哺乳類におけるTNF生産を阻害することにおける式
（Ｉ）の化合物の使用に関する。また、特に、TNF生産
の阻害は、過剰または非制御的なTNF生産によって悪化
するか、または引き起こされる、哺乳類におけるいずれ
の疾患状態の予防的処置または治療的処置にも有用であ
る。

式（Ｉ）の本発明の化合物は以下の構造式で示される
化合物およびその薬学的に許容される塩である。

式中、 R₁およびR₂は、各々独立して、アルキルまたは−（CH
₂）_ｍ−Ａであり； ｍは０ないし３の数であり； Ａは非置換または置換の環状炭化水素基であり； R₃はハロゲン、ニトロ、または−NR₄R₅であり； R₄およびR₅は独立して水素、アルキル、アルキルカル
ボニルまたはそれらが結合している窒素と一緒になって
所望により置換されていてもよい複素環式環を形成す
る。

発明の詳細な説明 式（Ｉ）の化合物はウイルス感染症の処置にも有用で
ある。ここで、かかるウイルスは、TNFによる上方制御
（upregulation）に感受性を有するか、あるいはin viv
oでのTNF生産を誘起する。ここでの処置を意図されるウ
イルスは、感染の結果としてTNFを生産するもの、また
は式（Ｉ）のTNF阻害剤によって、直接的または間接的
に、複製を減少させることによるような、阻害に対して
感受性を有するものである。かかるウイルスの例として
は、HIV−１、HIV−２およびHIV−３、サイトメガロウ
イルス（CMV）、インフルエンザ、アデノウイルス、な
らびに、例えば帯状疱疹および単純疱疹（これらに限定
されない）のようなヘルペス群のウイルスが挙げられる
が、これらには限定されない。

また、本発明は、特に、式（Ｉ）の化合物の有効TNF
阻害量をヒト免疫不全ウイルス（HIV）に罹患した哺乳
類に投与することからなる、かかる哺乳類の治療方法に
関する。

また、式（Ｉ）の化合物は、TNF生産の阻害を必要と
するヒト以外の哺乳類の獣医学的治療に関しても使用さ
れ得る。動物における治療的処置または予防的処置に関
するTNF媒介疾患としては、前記したような疾患状態が
挙げられるが、特にウイルス感染である。このようなウ
イルスの例としては、ネコ免疫不全ウイルス（FIV）ま
たはウマ伝染性貧血ウイルス、ヤギ関節炎ウイルス、ビ
スナウイルス、メデウイルスおよび他のレンチウイルス
のような他のレトロウイルス感染症が挙げられるが、こ
れらに限定されない。

本発明の好ましい方法は、特に、有効量の式（Ｉ）の
化合物または最も好ましくは化合物1,3−ジ−シクロプ
ロピルメチル−８−アミノキサンチンまたはその医薬的
に許容される塩を投与することによって、ウイルスが、
TNFによる上方制御に感受性を有するか、またはin vivo
でのTNF生産を誘起する、ウイルス感染症の治療的また
は予防的処置である。

式（Ｉ）の本発明の化合物は、構造式： ［式中、R₁およびR₂は各々独立してアルキルまたは式−
（CH₂）_ｍ−Ａの基； ｍは０〜３の数字、 Ａは非置換または置換の環状炭化水素の基； R₃はハロゲン、ニトロまたは−NR₄R₅; R₄およびR₅は独立して水素、アルキル、アルキルカル
ボニルまたはそれらが結合している窒素と一緒になって
所望により置換されていてもよい複素環式環を形成す
る］ で示される化合物およびその薬学的に許容される塩であ
る。

好ましくは、R₁およびR₂は共に−（CH₂）_ｍ−Ａを表
す。好ましくは、基ＡはC_3-8シクロアルキル基、特にC
_3-6シクロアルキルを表し、好ましくは非置換である。
より好ましくは、Ａはシクロプロピル基またはシクロブ
チル基である。好ましくは、ｍは０または１である。い
ずれの環状炭化水素にも関する好適な所望による置換基
としては、C_1-6アルキル基またはハロゲン原子が挙げら
れる。

R₁またはR₂に関する好ましい基は炭素原子１〜６個の
アルキル基、特にメチル、エチル、プロピルまたはｎ−
ブチルである。より好ましくはｎ−ブチルである。

R₃がハロゲンである場合、好ましい置換基は臭素また
は塩素である。

R₃が−NR₄R₅であり、R₄およびR₅がアルキルまたはア
ルキルカルボニルを表す場合、R₄またはR₅のうちの一方
は水素であるのが好ましい。

好適な複素環式基としては、各環が５〜７個の環原子
を有し、該環原子が所望によりＯ、ＮまたはＳから選択
される２個までのさらなるヘテロ原子からなっていてよ
い単環または縮合環を有する飽和または非飽和複素環式
基が挙げられる。

好ましい複素環式基としては、５〜７個の環原子、よ
り好ましくは５〜６個の環原子、最も好ましくは６個の
環原子からなる単環が挙げられる。好ましい複素環式基
はピロリジニル、ピペリジニルまたはモルホリニル環で
ある。

特に例示される式（Ｉ）の化合物は、 1,3−ジ−ｎ−ブチル−８−ニトロキサンチン； 1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−ニトロキサン
チン； 1,3−ジ−シクロブチルメチル−８−ニトロキサンチ
ン； 1,3−ジ−シクロペンチルメチル−８−ニトロキサン
チン； 1,3−ジ−シクロヘキシルメチル−８−ニトロキサン
チン； 1,3−ジ−ｎ−ブチル−８−アミノキサンチン； 1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−アミノキサン
チン； 1,3−ジ−シクロブチルメチル−８−アミノキサンチ
ン； 1,3−ジ−シクロペンチルメチル−８−アミノキサン
チン； 1,3−ジ−シクロヘキシルメチル−８−アミノキサン
チン； 1,3−ジ−シクロプロピル−８−アミノキサンチン； 1,3−ジ−ｎ−ブチル−８−アセトアミドキサンチ
ン； 1,3−ジ−ｎ−ブチル−８−クロロキサンチン； 1,3−ジ−ｎ−ブチル−８−ブロモキサンチン； 1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−クロロキサン
チン； 1,3−ジ−シクロヘキシル−８−クロロキサンチン； 1,3−ジ−ｎ−ブチル−８−ピペリジノキサンチン； 1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−モルホリノキ
サンチン； 1,3−ジ−ｎ−ブチル−８−ピロリジニルキサンチ
ン； 1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−ピロリジニル
キサンチン； 1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−ピペリジニル
キサンチン； 1,3−ジ−シクロヘキシルメチル−８−ピペリジニル
キサンチン； 1,3−ジ−シクロヘキシルメチル−８−ブロモキサン
チン；および 1,3−ジ−シクロヘキシル−８−ニトロキサンチン；
またはその薬学的に許容される塩である。

本発明の方法における使用のための最も好ましい式
（Ｉ）の化合物は、1,3−ジ−シクロプロピルメチル−
８−アミノキサンチンまたはその薬学的に許容される塩
である。

本明細書で使用する場合、「アルキル」基という用語
は、単独または他の基の一部分として使用される場合
（例えば、アルキルカルボニル）、鎖の長さが限定され
ない限り、１〜12個の炭素原子を有する直鎖状または分
枝鎖状の基を含むことを意味し、メチル、エチル、ｎ−
プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、sec−ブチル、
イソブチル、tert−ブチルなどが挙げられるが、これら
に限定されない。

本明細書で使用する場合、「環状炭化水素」という用
語は、特記しない限り、３〜８個の炭素原子を有する単
環または縮合環を意味する。環状炭化水素は、各環にお
いて８個までの炭素原子からなっていてよい。本明細書
で使用する場合、「シクロアルキル」または「シクロア
ルキルアルキル」という用語は、「環状炭化水素」とい
う用語と置き換えることができることを意味する。シク
ロアルキルおよびシクロアルキル−アルキル基は、シク
ロプロピル、シクロプロピル−メチル、シクロペンチル
またはシクロヘキシルを含むことを意味するが、これら
に限定されない。

本明細書で使用する場合、「ハロ」という用語は、全
てのハロゲン、すなわち、クロロ、フルオロ、ブロモお
よびヨードを意味する。

「IL−１の生産を阻害する」または「TNFの生産を阻
害する」という用語は、 ａ）単球またはマクロファージ（これらに限定されな
い）を含む全ての細胞によるIL−１のin vivo放出の阻
害によって、各々、哺乳類、特にヒトの過剰in vivo IL
−１またはTNFレベルを正常レベルにまたは正常レベル
以下に低下させること； ｂ）哺乳類、特にヒトの過剰in vivo IL−１またはTNF
レベルを、各々、翻訳または転写レベルで、正常レベル
にまたは正常レベル以下に下方調整すること；または を意味する。

「TNF媒介疾患または疾患状態」という用語は、TNF
が、TNF自体の生産による、あるいはIL−１またはIL−
６（これらに限定されない）などの他のサイトカインを
放出させるTNFによる役割を果すいずれの疾患状態をも
意味する。すなわち、IL−１が主成分であり、生産また
は作用がTNFに応答して悪化するか、あるいは分泌され
る疾患状態は、それゆえTNFによって媒介される疾患状
態と考えられる。TNF−β（リンホトキシンとしても知
られる）がTNF−α（カケクチンとしても知られる）と
厳密な構造的相同性を有するので、また、各々が同様の
生物学的応答を誘発し、同一細胞レセプターと結合する
ので、TNF−αおよびTNF−βは、共に、本発明の化合物
によって阻害され、かくして、特記しない限り、総体的
に「TNF」と称される。好ましくは、TNF−αが阻害され
る。

本明細書で使用する「サイトカイン」という語は、細
胞の機能に影響を及ぼし、かつ、免疫または炎症応答に
おいて細胞間の相互作用を調節する分子である、いずれ
の分泌ポリペプチドをも意味する。サイトカインとして
は、どの細胞がそれらを生産するかにかかわらず、モノ
カインおよびリンホカインが挙げられるが、これらに限
定されない。すなわち、モノカインは、一般的には、マ
クロファージおよび／または単球などの単核細胞によっ
て生産および分泌されるものを称するが、ナチュラルキ
ラー細胞、線維芽細胞、好塩基球、好中球、内皮細胞、
脳星状細胞、骨髄間質細胞、表皮ケラチノサイト、およ
びβ−リンパ球などの他の多くの細胞がモノカインを生
産する。リンホカインは、通常、リンパ球細胞によって
生産されるものを称する。本発明に関するサイトカイン
の例としては、インターロイキン−１（IL−１）、イン
ターロイキン−６（IL−６）、インターロイキン−８
（IL−８）、腫瘍壊死因子−アルファ（TNF−α）およ
び腫瘍壊死因子ベータ（TNF−β）が挙げられるが、こ
れらに限定されない。

本発明によってHIV感染ヒトの処置への使用が意図さ
れるサイトカインの阻害は、（ａ）Ｔ細胞活性化の開始
および／または維持、および／または活性化Ｔ細胞媒介
HIV遺伝子の発現および／または複製、および／または
（ｂ）悪液質または筋肉退化などのサイトカイン媒介疾
患に関連したいずれかの問題に関連するサイトカインで
なければならない。特に阻害することが望まれるサイト
カインは、TNF−αである。

製造方法 式（Ｉ）の化合物の製造は、ここに概略記載される方
法に従って当業者によって行われることができる。

式（Ｉ）の化合物の製造方法は、式（II）： ［式中、R₁ ^aは式（Ｉ）に関する定義と同じR₁、またはR
₁に変換可能な基を表し、R₂ ^aは式（Ｉ）に関する定義と
同じR₂、またはそれに変換可能な基を表す］ で示される化合物を、式（II）の化合物のＣ−８水素を
基R₃ ^a（ここで、R₃ ^aは式（Ｉ）に関する前記定義と同じ
R₃、またはそれに変換可能な基を表す）で置換すること
ができる試薬と反応させ；次いで、所望により、以下の
所望による工程： （ｉ） 基R₁ ^aをR₁に、および／またはR₂ ^aをR₂に変換す
ること； （ii） 式（Ｉ）の化合物をさらなる式（Ｉ）の化合物
に変換すること； （iii） 式（Ｉ）の化合物を薬学的に許容される塩に
変換すること のうちの１以上の工程を行うことからなる。

式（II）の化合物のＣ−８水素を基₃ ^aで置換するため
の好適な試薬は、よく知られている慣用の試薬である。
式（II）の化合物のＣ−８水素の置換に関する反応条件
は、もちろん、選択された個々の試薬に依存し、一般
に、使用される条件は、使用する試薬に関して慣用的で
ある条件である。ある特定の好適な試薬はニトロ化剤で
ある。

前記方法の１つの好都合な形態において、式（II）の
化合物を好適なニトロ化剤と反応させて、R₃がニトロ基
を表す式（Ｉ）の化合物を得、次いで、ニトロ基をハロ
ゲン原子または前記定義の式−NR₄R₅の基に変換され
る。

式（II）の化合物は、式（III）： 式中、R₁ ^aは式（Ｉ）に関する定義と同じR₁、またはR₁
に変換可能な基、R₂ ^aは式（Ｉ）に関する定義と同じ
R₂、またはそれに変換可能な基であり、A₁は−NOまたは
−NHCHOであり、A₂は−NHCH₃またはNH₂である；ただ
し、A₁が−NOである場合、A₂は−NHCH₃であり、A₁が−N
HCHOである場合、A₂はNH₂である で示される化合物の脱水環化；次いで、所望により、R₁
^aをR₁に、および／またはR₂ ^aをR₂に変換することによっ
て製造してよい。式（III）の化合物の脱水環化は、い
ずれの好適な条件下で行ってもよい。好ましくは、選択
された条件は、形成された水が反応混合物から除去され
る条件である。かくして、該反応は、一般に100℃〜200
℃の範囲、例えば180℃〜190℃の範囲のような高温で行
われる。

当該方法の１つの態様では、特に、A₁が−NOであり、
A₂が−NHCH₃である場合、該反応は、水分離器を使用し
て水を除去しつつ、トルエンのような水と不混和性の溶
媒中で、溶媒の還流温度で行われる。

R₁ ^aおよびR₂ ^aに関する好適な意義としては、各々、R₁
およびR₂、またはベンジル基のような窒素保護基が挙げ
られる。

R₁ ^aまたはR₂ ^aが各々、R₁またはR₂以外のものを表す場
合、R₁ ^aからR₁へ、およびR₂ ^aからR₂への前記変換は、適
当な慣用方法を使用して行ってよい。例えば、R₁ ^a（ま
たはR₂ ^a）がベンジル基のような窒素保護基を表す場
合、該保護基は、接触水素添加のような適当な慣用方法
を使用して除去してよく、得られた生成物を式（IV）： Ｘ−（CH₂）_ｍ−Ａ （IV） ［式中、Ａおよびｍは式（Ｉ）に関する定義と同じであ
り、Ｘは好適な離脱基、例えば、臭化物またはヨウ化物
のようなハロゲン化物を表す］ で示される化合物と反応させる。

キサンチン窒素原子のような反応性基または原子の保
護は、前記工程のいずれの適当な段階で行ってもよい。
好適な保護基としては、保護される個々の基または原子
について当該技術分野で慣用的に使用されるものが挙げ
られ、例えば、キサンチン窒素原子に関する好適な保護
基は、ベンジル基である。このような保護基は、当業者
に知られており、グリーン・ティ（Greene,T.）、有機
合成における保護基（Protective Groups in Organic S
ynthesis）、ウィリィ・パブリッシャーズ、ニューヨー
ク（1981）に簡単に開示されている。この内容は本明細
書に引用記載する。保護基は、以下に説明するような適
当な慣用方法を使用して調製および除去してよい。

例えば、Ｎ−ベンジル保護基は、トリエチルアミンの
ような塩基の存在下、適当な式（II）の化合物を塩化ベ
ンジルで処理することによって調製され得る。Ｎ−ベン
ジル保護基は、好都合には高温で、エタノールのような
好適な溶媒中、活性炭上パラジウムのような好適な触媒
上での接触水素添加によって、または室温で、乾燥ベン
ゼン中、無水塩化アルミニウムとの処理によって除去さ
れ得る。

A₁が−NHCHOを表し、R₂が−NH₂を表す式（III）の化
合物は、好適には、以下の反応工程式に従って式（Ａ）
の６−アミノウラシルから製造され得る： ［式中、R₁ ^aおよびR₂ ^aは式（II）に関する定義と同じで
ある］。

好適には、前記反応工程式で使用される反応条件は、
適当な慣用条件である。当該方法の好ましい態様では、
６−アミノウラシル（Ａ）の、（Ｂ）および（Ｃ）を介
する、対応する式（III）の化合物への変換、ならびに
式（III）の化合物の式（II）の化合物への環化は、エ
イチ・ブレデレク（H.Bredereck）およびエイ・エデン
ホファー（A.Edenhofer）、ヒェミシェ・ベリクテ（Che
m.Berichte）、88、1306−1312（1955）の方法と類似の
方法を使用することによって、全て、in situで行われ
る。

式（Ａ）の６−アミノウラシルは、それ自体、ブイ・
パペッシュ（V.Papesch）およびイー・エフ・シュロダ
ー（E.F.Schroder）、ジャーナル・オブ・オーガニック
・ケミストリー（J.Org.Chem.）、16、1879−90（195
1）、またはヨゾ・オーツカ（Yozo Ohtsuka）、ブリチ
ン・オブ・ザ・ケミカル・ソサイエティ・オブ・ジャパ
ン（Bull.Chem.Soc.Jap.）、1973、46（２）、506−９
の方法によって製造されてよい。

A₁が−NOを表し、A₂が−NHCH₃を表す式（III）の化合
物は、好都合には、以下の反応工程式に従って、式
（Ｅ）の６−クロロウラシルから製造されてよい： ［式中、R₁ ^aおよびR₂ ^aは式（II）に関する定義と同であ
る］。

好適には、直前に記載した工程式で使用される反応条
件は、適当な慣用的条件、例えば、ハー・ゴルドナー
（H.Goldner）、ゲー・ディーツ（G.Dietz）およびエー
・カルシュテンス（E.Carstens）、リービヒス・アンナ
ーレン・デル・ヒェミィ（Liebigs Annalen der Chemi
e）、691、142−158（1965）の方法において使用される
条件である。式（Ｄ）の６−クロロウラシルはディーツ
らの方法に従って製造されてもよい。

R₃がニトロ基を表す場合、このニトロ基から別の基R₃
^aへの好適な変換としては以下のものが挙げられる： （ｉ） ニトロ基からハロゲン原子への変換； （ii） ニトロ基からアミノ基への変換； （iii） ニトロ基からハロゲン原子への変換、次い
で、ハロゲン原子から基−NR₄R₅への変換（ここで、R₄
およびR₅はそれらが結合している窒素原子と一緒になっ
て所望により置換されていてもよい複素環式基を形成す
る）； （iv） ニトロ基からアミノ基への変換、次いで、アミ
ノ基をアルキル化および／またはアシル化して基−NR₄R
₅（ここで、R₄は水素、アルキルまたはアルキルカルボ
ニルを表し、R₅はアルキルまたはアルキルカルボニルを
表す）を提供する。

ニトロ基は、いずれかの好都合なハロゲン化剤を使用
することによってハロゲン原子に変換され得る。１つの
好適なハロゲン化剤は、ハロゲン化水素であり、好適に
は、高温で、例えば50〜150℃の範囲で濃塩酸または濃
臭化水素酸を用いることにより水性条件下で反応させ
る。

さらなる好適なハロゲン化剤は、オキシ塩化第一リン
のようなオキシハロゲン化第一リンであり、ジメチルホ
ルムアミドのようないずれの好適な溶媒中でも、好適に
は、例えば50℃〜150℃の範囲のような高温で反応し得
る。

ニトロ基は、好都合には、慣用の還元方法によって、
例えば、室温でスズ粉末および濃塩酸を使用することに
よって、または室温で、水性メタノール中、亜二チオン
酸ナトリウムを使用することによって、アミノ基に変換
され得る。

式（Ｉ）の化合物におけるR₃がハロゲン原子を表す場
合、式（III）： −HNR^4aR^5a （III） ［式中、R^4aおよびR^5aは各々、式（Ｉ）におけるR₄およ
びR₅の前記定義と同じである］ で示される試薬との反応によって、基−NR₄R₅に変換さ
れ得る。

式（Ｉ）の化合物および式（III）の化合物の間の反
応は、大気圧または高圧下で、好都合な生成物形成速度
を生じるいずれの温度でも、好適には50℃〜180℃の範
囲のような高温で、トルエンのようないずれの好適な溶
媒中でも行うことができる。

前記変換における使用のための好適なアルキル化方法
としては、当該技術分野において慣用的に使用される方
法、例えば、アセトニトリルまたはトルエンのようない
ずれかの好都合な溶媒中、炭酸カリウムのような塩基の
存在下、ハロゲン化物、好ましくはヨウ化物を使用する
方法が挙げられる。

前記変換における使用のための好適なアシル化方法と
しては、当該技術分野で慣用的に使用される方法が挙げ
られ、かくして、アミノ基は、適当なアシル化剤を使用
することによってアルキルカルボニルアミノ基に変換さ
れ得る。例えば、アミノ基は、高温で無水酢酸を使用す
ることによってアセチルアミノ基に変換され得る。

処置の方法 式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩
は、ヒトまたは他の哺乳類における、かかるヒトの細
胞、例えば、単球および／またはマクロファージ（これ
らに限定されない）による過剰または非制御的なTNF生
産によって悪化したり、それに起因する疾患状態、特に
過剰または非制御的なTNF生産に起因する疾患状態の予
防的処置用または治療的処置用の薬剤の製造に使用する
こともできる。病態を改善または予防するように、TNF
生産を正常なレベルにまで、またはある場合には、正常
以下のレベルにまで降下して制御される程度に、TNF生
産を阻害するのに十分な量にて式（Ｉ）の化合物を投与
する。TNFの異常なレベルは、本発明では、１）1mlあた
り１ピコグラムより多いか、あるいは等しい遊離の（細
胞非結合性の）TNF;2）いずれかの細胞関連TNF;または
３）TNFが生産される細胞または組織における基礎レベ
ル以上のTNF mRNAの存在のレベルを構成する。

単球および／またはマクロファージによる過剰または
非制御的なTNF生産が疾患を悪化させること、および／
または引き起こすことに関係するいくつかの疾患状態が
ある。これらの例としては、内毒素血症および／または
トキシックショック症候群［トレイシー（Treacey）
ら、ネイチャー（Nature）、330:662−664（1987）；お
よびヒンショウ（Hinshaw）ら、Circ.Schock、30:279−
292（1990）を参照］；悪液質［デヅーブ（Dezube）
ら、ランセット（Lancet）、335（8690）:662（1990）
を参照］;12,000pg/ml以上の濃度のTNFがARDS患者から
の肺吸引液中で検出された成人呼吸窮迫症候群［ミラー
（Millar）ら、ランセット、２（8665）:712−714（198
9）を参照］が挙げられる。組換えTNFの全身輸液はARDS
において典型的に見られる変化を生じた［フェライーバ
リビエラ（Ferrai−Baliviera）ら、アーカイブス・オ
ブ・サージェリィ（Arch.Surg.）、124（12）:1400−14
05（1989）を参照］;T−細胞およびマクロファージ株に
おける潜伏性HIVのAIDSウイルス複製はTNFによって誘発
され得る［フォルクス（Folks）ら、PNAS、86:2365−23
68（1989）を参照］。ウイルス誘発活性に関する分子メ
カニズムは、ウイルス調節遺伝子配列（LTR）に結合す
ることを介するHIV複製を促進させる、細胞の細胞質に
おいて見られる遺伝子調節蛋白（NF−kB）を活性化する
TNFの能力によって示唆される［オズボーン（Osborn）
ら、PNAS、86:2336−2340（1989）を参照］。AIDS関連
悪液質におけるTNFは、患者由来の高い血清TNFおよび末
梢血液単球における高いレベルの自発的なTNF生産によ
って示唆される［ライト（Wright）ら、ジャーナル・オ
ブ・イムノロジー（J.Immunol.）、141（１）:99−104
（1988）を参照］。関節炎を含む骨吸収疾患におけるTN
Fの場合、活性化されると白血球が骨吸収活性を生じる
ことが決定され、データはTNF−αおよびTNF−βが共に
この活性に寄与することを示唆する［例えば、バートリ
ニ（Bertolini）ら、ネイチャー（Nature）、319:516−
518（1986）およびジョンソン（Johnson）ら、エンドク
リノロジー（Endocrinology）、124（３）:1424−1427
（1989）を参照］。骨芽細胞機能の阻害と組み合わせた
骨芽細胞形成および活性化の刺激を介して、TNFがin vi
troおよびin vivoで骨吸収を刺激し、骨形成を阻害する
ことが決定された。TNFが関節炎を含む多くの骨吸収疾
患に含まれ得るが、疾患との最も強制的な連結は、腫瘍
または宿主組織によるTNFの生産および悪性疾患に関連
した高カルシウム血症間の関連である［カルシファイド
・ティシュー・インターナショナル（Calci.Tissue In
t.）（US）46（Suppl.）S3−10（1990）を参照］。対宿
主性移植片反応における高い血清TNFレベルは、急性同
種異型骨髄移植後の主たる合併症に関連し［ホラー（Ho
ller）ら、ブラッド（Blood）、75（４）:1011−1016
（1990）を参照］；血中高レベルのTNFに伴う致死性激
症神経性症候群である脳性マラリアは、マラリア患者に
て生じる最も重度の合併症である。ヒト疾患のある特徴
を再現する、一の形態の実験的脳性マラリア（ECM）
は、抗TNF抗体を投与することでマウスにて予防され
た。［Grauら、Imm.Review112:49−70（1989）を参照の
こと］。血清TNFのレベルは、急性マラリア発作の患者
における疾患の重篤度および予後に直接関係した［グラ
ウ（Grau）ら、ニュー・イングランド・ジャーナル・オ
ブ・メディシン（N.Engl.J.Med.）、320（24）:1586−1
591（1989）を参照］。TNFが役割を果す他の疾患状態は
慢性肺炎症性疾患の領域である。シリカ粒子の付着は珪
肺症を誘発し、進行性呼吸不全の疾患は線維性反応によ
って生じた。TNFに対する抗体は、マウスにおけるシリ
カ誘発性肺線維症を完全にブロックした［ピゲット（Pi
guet）ら、ネイチャー（Nature）、344:245−247（199
0）を参照］。高レベルのTNF生産（血清中および単離し
たマクロファージ中）は、シリカおよびアスベスト誘発
性線維症の動物モデルにおいて示された［ビスソネット
（Bissonnette）ら、インフラメイション（Inflammatio
n）、13（３）:329−339（1989）を参照］。肺サルコイ
ドーシス患者からの肺胞マクロファージは、正常な、ド
ナーからのマクロファージと比較して多量のTNFを自発
的に放出することも判明した［バウマン（Baughman）
ら、ジャーナル・オブ・ラボラトリー・アンド・クリニ
カル・メディシン（J.Lab.Clin.Med.）、115（１）:36
−42（1990）を参照］。TNFは、再灌流損傷と称される
再灌流の後に続き、血流損失後の組織損傷の主な原因で
ある炎症応答のような別の急性疾患状態にも関係する
［ベッダー（Vedder）ら、PNAS、87:2643−2646.（199
0）を参照］。TNFは、また、内皮細胞の性質を変え、組
織因子凝固前活性（pro−coagulant activity）の増加
および抗凝固性蛋白Ｃ経路の抑制を生じること、ならび
にトロンボモジュリン（thrombomodulin）の発現を下方
制御すること（down−regulating）のような種々の凝固
前活性を有す［シェリー（Sherry）ら、ジャーナル・オ
ブ・セル・バイオロジー（J.Cell Biol.）、107:1 1269
−1277（1988）を参照］。TNFは、また、その初期生産
と一緒になって（炎症事象の初期段階の間）、心筋梗
塞、発作および循環器ショック（これらに限定されな
い）を含むいくつかの重要な疾患における組織損傷の有
望な媒介物質を作る炎症前活性（pro−inflammatory ac
tivity）を有する。細胞間付着分子（ICAM）または内皮
細胞上の内皮白血球付着分子（ELAM）のような付着分子
のTNF誘発性発現は特に重要なものである［ムンロ（Mun
ro）ら、アメリカン・ジャーナル・オブ・パッソロジー
（Am.J.Path.）、135（１）:121−132（1989）を参
照］。

式（Ｉ）の化合物は、各々、ウイルス感染、例えば、
ヘルペスウイルスによって生じたもの、またはウイルス
性結膜炎などの、過剰TNF生産によって媒介されるか、
または悪化される局所疾患状態の治療または予防におい
て局所的に使用され得る。

すなわち、TNF媒介疾患の治療としては、限定されな
いが、例えば、慢性関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、
変形性関節症、通風関節炎および他の関節炎状態；敗血
症、敗血症性ショック、内毒素性ショック、グラム陰性
菌敗血症、トキシックショック症候群、成人呼吸窮迫症
候群、大脳マラリア、慢性肺炎症、珪肺症、肺サルコイ
ドーシス、骨吸収症、再灌流損傷、対宿主性移植片反
応、急性移植片拒絶反応、同種移植片拒絶反応、熱およ
び関連症候群）、ケロイド形成、瘢痕組織形成、クロー
ン病、潰瘍性大腸炎、ピレシス（pyresis）およびウイ
ルス感染症のような疾患が挙げられる。

式（Ｉ）の化合物は全て、本発明の方法、すなわち、
処置の必要な哺乳類、特にヒトにおける、好ましくはマ
クロファージ、単球またはマクロファージおよび単球に
よる生産を阻害する方法において有用である。本発明の
方法は、ホスホジエステラーゼ（PDE IV）酵素によって
媒介されないTNF媒介疾患を予防的または治療的に処置
するために使用されるのが好ましい。好ましくは、本発
明の方法は、多数の好酸球に関連する疾患以外の疾患、
例えば、1989年３月23日に出願れさたマッシュラー（Ma
schler）らのイギリス特許出願第8906792.0（内容は本
明細書中に引用記載する）に開示されているような、繁
殖性皮膚疾患状態、すなわち、乾癬、アトピー性皮膚
炎、非特異的皮膚炎、一次刺激性接触皮膚炎、アレルギ
ー性接触皮膚炎、またはアレルギー性疾患、例えば、ア
トピー、じんましん、湿疹、鼻炎、脂漏性皮膚炎、およ
び家畜の疥癬に使用される。しかしながら、式（Ｉ）の
化合物は、PDE IVの阻害または媒介に関連する疾患、ま
たは多数の好酸球に関連する疾患、大脳虚血性事象、例
えば手術または発作から生じるニューロンの退化に関連
する疾患、または可逆性気道閉塞または喘息のような気
管支拡張薬活性に関連する他の疾患の治療に有用な別の
薬物と同時に投与され得る。

更に、本発明では、多くの生物学的疾患状態が、TNF
生産の場合と同様に、インターロイキン−１（IL−１）
活性に起因するものと考える。IL−１活性に関する包括
的なリストは、ディナレロ（Dinarello）［ジャーナル
・オブ・クリニカル・イムノロジー（J.Clinical Immun
ology）、５（５）、287−297（1985）］に見い出すこ
とができる。これらの効果のうちいくつかは、他者によ
って、IL−１の間接的効果として記載されていることに
注目すべきである。

インターロイキン−１（IL−１）は、免疫調節および
炎症のような他の生理学的症状において重要であると思
われる種々の生物学的活性を媒介することが示された
［例えば、ディナレロら、リビューズ・オブ・インフェ
クシャス・ディジージズ（Rev.Infect.Disease）、６、
51（1984）を参照］。IL−１の無数の既知の生物学的活
性としては、Ｔヘルパー細胞の活性化、発熱の誘発、プ
ロスタグランジンやコラゲナーゼの生産の刺激、好中球
の走化性、急性期蛋白の誘発および血漿の鉄レベルの抑
制などが挙げられる。これらの疾患状態は、TNF活性の
適当な疾患状態とも考えられ、それゆえ、式（Ｉ）の化
合物はそれらの処置に同様に有用でもあり、式（Ｉ）の
化合物の使用が、特にここに記載したTNF媒介疾患状態
に単純に限定されると考えるべきではない。したがっ
て、本発明の化合物は、TNFおよびIL−１が相乗的に作
用するので、IL−１媒介疾患状態に効能がある。TNFも
同様に、場合によっては、モノカインIL−１の放出を媒
介し、したがって、TNFレベルの低下はIL−１が主要な
成分である疾患状態の治療に有用であり得る。

それゆえ、本発明は、ヒトの単球および／またはマク
ロファージによる過剰または非制御的なIL−１生産によ
って悪化するか、あるいはそれに起因する、すなわちIL
−１が主要な成分であるヒトの疾患状態を予防的または
治療的に処置するのに有用な、有効なTNF生産阻害量の
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩に関
する。

免疫不全またはサイトカイン媒介疾患に関連した問題
を示すHIVに感染したヒトを処置およびモニターする方
法は、ハンナ（Hanna）［WO90/15534、1990年12月27日
付］に教示されている。一般に、初期の処置法は、式
（１）の化合物によって他のTNF媒介疾患状態のTNF活性
を阻害する際に有効であることが知られている方法を模
倣することができる。治療した個体は、Ｔ細胞数および
T4/T8比、および／または逆転写酵素やウイルス蛋白の
レベルなどのウイルス血症の指標、および／または悪液
質や筋肉の退化などのモノカイン媒介疾患に関連した問
題の進行度を定期的にチェックされる。通常の処置法の
後に効果が見られなければ、モノカイン活性阻害剤の投
与量を、例えば１週間あたり50％だけ増加させる。

悪液質のようなモノカイン媒介疾患に関連した問題を
示すHIVに感染したヒトにおいて、有効量のモノカイン
活性阻害剤での処置によって、まず、当該疾患に関連し
た問題の進行速度の遅延が生じ、これによって疾患進行
の遅延が生じるであろう。疾患に関連した問題の進行は
最後には終わり、逆転し、それによって、このような方
法で処置したHIV感染個体の生活の質を向上させると思
われる。式（Ｉ）の化合物は、免疫異常、免疫不全AIDS
関連症候群（ARC）および急性免疫不全症候群（AIDS）
と称されるもの自体のようなHIV感染に関連する全ての
疾患状態の治療方法において有用である。式（Ｉ）の化
合物は、ニューモシスティック（Pneumocystic）肺炎ま
たはサイトメガロウイルス感染症のような（これに限定
されないが）日和見性（二次）感染によって生じる炎症
関連損傷／病理学を軽減または除去するのに有用であろ
う。

もちろん、治療効果に必要とされるモノカイン活性阻
害剤の実用量が選択した薬物、所望の投与経路、HIV−
感染の性質および重篤度、および処置を受けるHIVに感
染したヒトの個々の症状によって様々な値を取り得、最
終的には医師の裁量であることは当業者の認識するとこ
ろである。また、モノカイン活性阻害剤の個々の投与の
最適量および間隔が処置される症状の性質および程度、
投与の形態、経路および部位、処置される個々の患者に
よって決定され、かかる最適条件が慣用技術によって決
定され得ることは当業者が認識するところである。ま
た、処置の最適経路、すなわち、所定の日数の間、１日
あたりに投与するモノカイン（TNF）活性阻害剤の投与
回数が処置決定試験の慣用の経路を使用して当業者によ
って確定され得ることは当業者が理解するところであ
る。

式（Ｉ）の化合物は、慣用手順に従い、かかる薬剤を
治療的TNF活性阻害活性を生じるのに充分な量で、標準
的な薬学的担体と組み合わせることによって調製された
慣用の投与形態で、経口的に（この経路が活性な場
合）、局所的に、非経口的に、または吸入によって投与
すればよい。

使用される薬学的担体は、かかる決定が、使用される
個々のモノカイン活性阻害剤の性質、量および特徴、な
らびに所望の投与の形態および経路のような種々のよく
知られた要因に依存することを認識しているであろう当
業者によって容易に決定されることができる。使用され
る担体は、本明細書において他の場所に記載されるもの
であってよい。

式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩
は、ヒトおよび他の哺乳類の処置に使用するためには、
通常、標準的な薬事業務に従って医薬組成物として製剤
化される。

本発明の医薬組成物は、有効な非毒性量の式（Ｉ）の
化合物および薬学的に許容される担体または希釈剤から
なる。式（Ｉ）の化合物は、TNF生産阻害活性を生じる
のに充分な量の式（Ｉ）の化合物を、それぞれ、慣用手
段に従い、標準的な薬学的担体と組み合わせることによ
って調製された慣用の投与形態で投与される。これらの
手段には、所望の調製物に適するように、成分を混合、
造粒および打錠または溶解することを含み得る。

用いられる薬学的担体は、例えば、固形または液状の
いずれでもよい。固形担体の例としては、ラクトース、
白土、シュークロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペク
チン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、ステ
アリン酸などが挙げられる。液状担体の例としては、シ
ロップ、落花生油、オリーブ油、ポリエチレングリコー
ル、ヤシ油、水などが挙げられる。同様に、担体または
希釈剤には、モノステアリン酸グリセリンまたは二ステ
アリン酸グリセリンの単独またはワックスとの組合せな
どの当該技術分野でよく知られた時間遅延物質（time d
elaymaterial）を含有させてもよい。

式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学的に許容される
塩は種々様々な薬剤形態で使用することができる。薬学
的に許容される塩の調製は、この化合物自体の性質によ
って決定され、当業者が容易に利用可能な慣用技術によ
って調製することができる。それゆえ、固形担体を使用
すれば、製剤は、錠剤にしたり、粉末状またはペレット
状でゼラチン硬カプセルに入れたり、あるいはトローチ
剤またはロゼンジ剤の形態とすることができる。固形担
体の量は、様々な値を取りうるが、好ましくは約25mg〜
約1gである。液状担体を使用すると、調製物は、シロッ
プ、乳剤、ゼラチン軟カプセル、アンプルや非水性懸濁
液剤などの無菌注射液の形態となるであろう。組成物が
カプセルの形態である場合、例えば、ゼラチン硬カプセ
ルの殻の中に前記の担体を用いた通常のカプセル化が適
当である。組成物がゼラチン軟カプセルの形態である場
合、分散剤や懸濁剤を調製するのに通常使用される薬学
的担体としては、例えば、水性ゴム、セルロース、ケイ
酸塩または油を考えればよく、ゼラチン軟カプセルの殻
の中に入れられる。シロップ製剤は、一般的には、例え
ば、エタノール、ポリエチレングリコール、ヤシ油、グ
リセリンまたは水などの液状担体中における、フレーバ
ー剤や着色剤を含んだ、当該化合物または塩の懸濁液ま
たは溶液からなる。

局所的な投与における治療効果に必要な式（Ｉ）の化
合物の量は、もちろん、選択した化合物、炎症症状の性
質および重篤度、ならびに動物が受ける治療によって様
々な値を取り得るが、最終的には、医師の裁量による。

ここで使用されている「非経口的」という用語には、
静脈内、筋肉内、皮下、鼻腔内、直腸内、膣内または腹
腔内への投与が含まれる。一般的には、皮下および筋肉
内への非経口投与の形態が好ましい。かかる投与に関す
る適当な投与形態は、慣用技術によって調製すればよ
い。

典型的な非経口組成物は、所望により非経口的に許容
される油、例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニ
ルピロリドン、レシチン、落花生油またはゴマ油を含有
していてもよい。無菌の水性または非水性の担体中にお
ける当該化合物もしくは塩の溶液または懸濁液からな
る。非経口投与による、TNF生産の阻害に関する毎日投
与治療法は、遊離塩基として計算して式（Ｉ）の化合物
またはその薬学的に許容される塩約0.001mg/kg〜約40mg
/kg、好ましくは約0.01mg/kg〜20mg/kgが適当である。

式（Ｉ）の化合物は経口投与してもよい。経口投与の
ための毎日投与治療法は、約0.1mg/kg〜1000mg日である
のが適当である。投与に関して、投与量は、遊離塩基と
して算出して、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許
容される塩約0.001mg/kg〜40mg/kg、好ましくは約0.01
〜20mg/kgであるのが適当である。有効成分は、活性を
示すのに充分なように、１日に１〜６回投与すればよ
い。

式（Ｉ）の化合物は吸入によって投与してもよい。
「吸入」とは、鼻腔内吸入投与および経口吸入投与を意
味する。かかる投与に適当な投与形態、例えば、エアロ
ゾル製剤または用量計量型吸入器などは、慣用技術によ
って調製すればよい。吸入投与に対する毎日投与治療法
は、遊離塩基として算出して、式（Ｉ）の化合物または
その薬学的に許容される塩約0.001mg/kg〜40mg/kg、好
ましくは、0.01〜20mg/kgが適当である。

吸入用の典型的な組成物は、乾燥粉末として投与し得
る溶液、懸濁液もしくは乳剤の形態、またはジクロロジ
フルオロメタンやトリクロロフルオロメタンなどの慣用
の噴射剤を用いたエアロゾルの形態である。

当該組成物は、単位投与形態、例えば、錠剤、カプセ
ル剤または用量計量型エアロゾル投薬などであることが
好ましく、患者は自分自身に一回用量を投与することが
できる。

式（Ｉ）の化合物は局所的に投与してもよい。局所投
与とは、非全身的な投与を意味し、式（Ｉ）の化合物の
表皮、口腔前庭への外部からの塗布、ならびにかかる化
合物の耳、眼および鼻への滴下を含み、この場合、当該
化合物は血流中には有意には進入しない。それゆえ、式
（Ｉ）の化合物は、過剰のTNF生産によって媒介される
か、あるいは悪化する炎症性局所的疾患状態、例えば、
湿疹、乾癬、または日焼けのような他の炎症性の皮膚の
症状；結膜炎を含む炎症性の眼の症状；炎症に関連した
ピレシス（pyresis）、痛みおよび他の症状；ヘルペス
または他の局所的ウイルス感染症を、それぞれ処置また
は予防するには、局所的に投与すればよい。局所投与の
ための毎日投与治療法は、好適には、遊離塩基として算
出して、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され
る塩約0.001mg/kg〜100mg/kg、好ましくは、0.1〜20mg/
kgである。

全身投与とは、経口、静脈内、腹腔内および筋肉内の
投与を意味する。

局所投与とは、非全身的な投与を意味し、式（Ｉ）の
化合物の表皮、口腔前庭への外部からの塗布、ならびに
かかる化合物の耳、眼および鼻への滴下を含み、この場
合、当該化合物は血流中には有意には進入しない。

有効成分は原料化学物質として単独で投与することが
可能であるが、医薬組成物として存在することが好まし
い。有効成分は、局所投与の場合には、製剤の0.001％
〜10％w/w、例えば１重量％〜２重量％からなってもよ
いが、それは、製剤の10％w/w程度からなってもよく、
好ましくは５％w/wを越えることはなく、より好ましく
は0.1％〜１％w/wからなる。

本発明の局所用製剤は、１種以上の許容される担体
と、所望により他の治療成分と共に、有効成分からな
る。担体は、製剤の他の成分と適合することができ、そ
の受容者にとって有害ではないという意味で、「許容さ
れ」なければならない。

局所投与に適する製剤としては、皮膚を通して炎症部
位に浸透するのに適した液状または半液状製剤、例え
ば、リニメント剤、ローション剤、クリーム剤、軟膏剤
またはペースト剤、および眼、耳または鼻への投与に適
した滴剤が挙げられる。

本発明による滴剤は、無菌の水性または油性の溶液ま
たは懸濁液からなっていてよく、殺菌剤および／または
殺真菌剤および／または他の適当な保存剤の、好ましく
は界面活性剤を含む好適な水溶液に有効成分を溶解する
ことによって調製しうる。次いで、得られた溶液は、濾
過によって清澄化し、適当な容器に移し替えればよい。
次いで、この容器を密封し、オートクレーブにかける
か、あるいは98〜100℃で半時間維持することによって
滅菌する。別法としては、前記溶液を濾過によって除菌
し、無菌技術によって容器に移し替えればよい。滴剤に
含有させるのに適した殺菌剤および殺真菌剤の例として
は、硝酸フェニル水銀または酢酸フェニル水銀（0.002
％）、塩化ベンザルコニウム（0.01％）および酢酸クロ
ルヘキシジン（0.01％）が挙げられる。油性溶液の調製
に適した溶剤としては、グリセロール、希釈したアルコ
ールおよびプロピレングリコールが挙げられる。

本発明によるローション剤としては、皮膚または眼へ
の塗布に適したものが挙げられる。眼科用ローション剤
は、所望により殺菌剤を含有していてもよい無菌水溶液
からなっていてよく、滴剤を調製する方法と同様の方法
によって調製すればよい。皮膚に塗布するためのローシ
ョン剤またはリニメント剤には、更に乾燥を速め、皮膚
を冷却する薬剤、例えばアルコールまたはアセトンな
ど、および／または、グリセロールなどの保湿剤または
ヒマシ油もしくは落花生油などの油を含有させてもよ
い。

本発明によるクリーム剤、軟膏剤またはペースト剤
は、有効成分を含む外用の半固形製剤である。それら
は、細かく砕いたり、粉末状にした有効成分を、単独
で、或いは、水性または非水系の液体中における溶液や
懸濁液として、適当な機械を用いて、油分を含むかまた
は含まない基剤と混合することによって製造すればよ
い。この基剤としては、硬質、軟質または流動パラフィ
ン、グリセロール、蜜蝋、金属石鹸；粘滑剤；アーモン
ド油、コーン油、落花生油、ヒマシ油またはオリーブ油
などの天然起源の油；羊毛脂またはその誘導体、あるい
は、プロピレングリコールまたはマクロゴールなどのア
ルコールと組み合わせたステアリン酸またはオレイン酸
などの脂肪酸のような炭化水素からなっていてよい。こ
の製剤には、適当な界面活性剤、例えば、ソルビタンエ
ステルまたはそのポリオキシエチレン誘導体などのアニ
オン性、カチオン性または非イオン性界面活性剤を含有
させてもよい。また、懸濁化剤、例えば天然ゴム、セル
ロース誘導体、またはシリケイシャス・シリカス（sili
caceous silicas）などの無機物質、およびラノリンな
どの他の成分を含有させてもよい。

薬学的に許容される担体または希釈剤の形態および性
質が、それと組み合わせるべき有効成分、式（Ｉ）の化
合物の量、投与の経路および他のよく知られた可変要素
によって定まることは、当業者が理解するところであ
る。

式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の
個々の投与に関する至適な量および間隔が、処置する症
状の性質および程度、投与の形態、経路および部位、な
らびに治療する個々の患者によって決定されることや、
かかる至適条件が慣用技術によって決定できることは、
当業者が理解するところである。至適な処置法、即ち所
定の日数にわたって１日あたりに投与される式（Ｉ）の
化合物またはその薬学的に許容される塩の投与回数が、
慣用の処置決定試験法を用いて当業者が確認できること
も、当業者が認識するところである。

製剤の実施例 本発明の化合物を一体化した薬学的用途の製剤は、種
々の形態で、種々の賦形剤と一緒に調製することができ
る。液状製剤の例を以下に挙げる。

1.式（Ｉ）の化合物を含有する溶液は、安息香酸のよう
な保存剤を含むかまたは含まずに、水または他の適当な
担体に当該化合物を溶解することによって調製されて、
使用当たりの所望の量の薬物を輸送する。当該化合物
は、担体1ml当たり約10μｇ〜約30μｇの量で存在す
る。

2.式（Ｉ）の化合物を含有する溶液は、BHA/BHT保存剤
を含むか含まずに、PEG 400 1ml当たり約１〜約10mgの
量の化合物を溶解することによって調製される。別法と
して、該溶液は、ゼラチン軟カプセル中に充填されて固
形経口投与形態を調製し得るか、またはシロップとして
使用され得る。

3.1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−アミノキサチ
ンのような式（Ｉ）の化合物を含有する固形投与形態
は、化合物50mgと、種々の濃度（mg）のマンニトール、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カリファーム
（calipharm）、スターチ1500、およびステアリン酸マ
グネシウム（滑沢剤として）とを混合することによって
調製されて、適当なサイズのカプセルに充填されるか、
または所望により、当該組成物は、錠剤に打錠されても
よい。種々の成分の製剤を、１〜６の番号を付して第１
表に示す。

有用性の実施例 実施例Ａ ヒト単球によるin vitro TNF生産に対する式（Ｉ）の化
合物の阻害効果 第Ｉ節：アッセイ機構 ヒト単球によるTNFのin vitro生産に対する式（Ｉ）
の化合物の効果を以下のプロトコールを使用して実験し
た。

コロッタ，アール（Colotta,R.）ら、ジャーナル・オ
ブ・イムノロジー（J.Immunol.）、132（２）:936（198
4）の方法に従って、血液銀行バフィーコートまたは血
小板フェレーシス残物からヒトの末梢血液単球を単離お
よび精製した。単球を、24ウエルのマルチ−ディッシュ
中で、ウエルにつき培地1ml当たり１×10⁶細胞の密度で
平板培養した。当該細胞を１時間付着させた後、上清を
吸引し、１％ウシ胎児血清ならびに10単位/mlのペニシ
リンおよびストレプトマイシンを含有する新しい培地
［RPMI−1640、カリフォルニア州ホワイテイカーのホワ
イテイカー・バイオメディカル・プロダクツ（Whitaker
Biomedical Products）］1mlを添加した。当該細胞
を、1nM−10μＭの投与範囲の試験化合物の存在下また
は不在下で45分間インキュベートした（化合物はジメチ
ルスルホキシド／エタノールに溶解されて、培養培地中
の最終溶媒濃度は0.5％ジメチルスルホキシド/0.5％エ
タノールであった）。次いで、細菌性リポ多糖類（シグ
マ・ケミカルズ・カンパニー（Sigma Chemicals Co.）
からのイー・コリ（E.coli）055:B5［LPS］）をリン酸
塩緩衝化生理食塩水（PBS）10ml中100ng/mlで添加し、
培養物を５％CO₂インキュベーター中、37℃で16〜18時
間インキュベートした。このインキュベーションの後
に、培養上清を細胞から取り出し、3000回転／分（rp
m）で遠心して細胞デブリを除去し、下記のラジオイム
ノアッセイを使用してTNF活性について上清0.05mlをア
ッセイした。

第II節:TNF活性に関するラジオイムノアッセイ方法 アッセイ緩衝液は、pH7.4で、0.01M NaPO₄、0.15M Na
Cl、0.025M EDTAおよび0.1％アジ化ナトリウムから構成
された。チェン（Chen）ら、ネイチャー（Nature）、33
0:581−583（1987）の方法を使用して得られたヒト組換
えTNF（rhTNF）を、下記第III節に記載の変形クロラミ
ン−Ｔ法によってヨウ素化した。試料（培養上清50μ
）またはrhTNF標準に、ポリクローン性ウサギ抗rhTNF
（マサチューセッツ州ボストンのゲンザイム（Genzym
e））の1/9000希釈液および¹²⁵I−TNF8000cpmを最終容
量400μの緩衝液中で添加し、４℃で一晩（18時
間）、インキュベートした。正常なウサギの血清および
ヤギの抗ウサギIgG（カルビオケム（Calbiochem））
を、抗rh−TNFの最大沈殿のためにお互いに対して滴下
した。キャリアーの正常なウサギの血清の適当な希釈液
（1/200）、ヤギ抗ウサギIgGの適当な希釈液（1/4）お
よび25単位ヘパリン（カルビオケム）を沈殿させ、アッ
セイ管当たりこの複合物200μを添加し、４℃で一
晩、インキュベートした。管を2000rpmで30分間遠心
し、上清を注意して吸引し、ペレットに関する放射能を
ベックマン・ガンマ（Beckman Gamma）5500カウンター
で測定した。計算のためにlogit−log直線変換曲線（lo
git−log linear transformation curve）を使用した。
試料中のTNFの濃度を、157〜20,000pg/mlの範囲で直線
であったrhTNFの標準曲線から読み取った。

第III節:rhTNFの放射性ヨウ素化 フロリック（Frolik）ら、ジャーナル・オブ・バイオ
ロジカル・ケミストリー（J.Biol.Chem.）、259:10995
−11000（1984）の変形クロアミン−Ｔ法を使用してrhT
NFのヨウ素化を行った。すなわち、20MMトリス（pH7.
5）5ml中のrhTNF 5mgを0.5M KPO₄ 15mlおよび担体不含
¹²⁵I（100mCi/ml;INC）10mlで希釈した。反応を開始さ
せるために、100mg/ml（水溶液）クロラミン−Ｔ溶液の
アリコット5mlを添加した。室温で２分後、さらなるア
リコット5mlを添加し、1.5分後に最後のクロラミン−T
5mlを添加した。当該反応を停止させ、１分後に50mMメ
タ重亜硫酸ナトリウム20ml、120mMヨウ化カリウム100ml
および1.2mg/ml尿素200mlを添加した。内容物を混合
し、該反応混合物を、予め充填した、平衡化したセファ
デックス（Sephadex）Ｇ−25カラム（PD 10ファルマシ
ア（Pharmacia））を通過させ、0.25％ゼラチンを含有
するリン酸塩緩衝化生理食塩水（pH7.4）で溶離した。
ピーク放射能を含有する画分をプールし、−20℃で貯蔵
した。¹²⁵I−TNFの比活性は、80〜100mCi/mg蛋白であっ
た。ヨウ素化されたTNFの生物学的活性を、ニール，エ
ム・エル（Neale.M.L.）ら、ヨーロピアン・ジャーナル
・オブ・キャンサー・アンド・クルニカル・オンコロジ
ー（Eur.J.Can.Clin.Oncol.）、25（１）:133−137（19
89）のL929細胞毒性アッセイによって測定し、非標準TN
Fのものの80％であることが判明した。

第IV節:TNFの測定−ELISA ウインストン（Winston）ら、分子生物学における現
代のプロトコル（Current Protocols in Molecular Bio
logy）、第11.2.1頁、アウスベル（Ausubel）ら編、（1
987）ジョン・ウイリィ・アンド・サンズ（アメリカ合
衆国ニューヨーク）に開示されている基本的なサンドイ
ッチELISAアッセイ法を使用してTNFのレベルを測定し
た。該ELISA法は、カプチャー（cupture）抗体として下
記のネズミ・モノクローン性抗ヒトTNF抗体を、第２抗
体として下記のポリクローン性ウサギ抗ヒトTNFを使用
した。検出については、ペルオキシダーゼとコンジュゲ
ート化したヤギ抗ウサギ抗体（アメリカ合衆国インディ
アナ州インディアナポリスのベーリンガー・マンハイム
（Boehringer Mannheim）、カタログ＃605222）を添加
し、次いで、ペルオキシダーゼに対する基質（0.1％過
酸化尿素を含む1mg/mlオルトフェニレンジアミン）を添
加した。試料中のTNFレベルは、イー・コリ（E.Coli）
中で生産された組換えヒトTNF（アメリカ合衆国ペンシ
ルベニア州キング・オブ・プルシアのスミスクライン・
ビーチャム・ファーマシューティカルズ（SmithKline B
eecham Pharmaceuticals）から入手した）で生成した標
準曲線から計算した。

第Ｖ節：抗ヒトTNF抗体の生産： コーラー（Kohler）およびミルスタイン（Millstei
n）、ネイチャー、256:495（1975）の方法（全内容は本
明細書中に引用記載する）の変形を使用して組換えヒト
TNFで免疫化したBALB/cマウスの脾臓からヒトTNFに対す
るモノクローナル抗体を調節した。フロイント完全アジ
ュバント（アメリカ合衆国イリノイ州のDIFCO）中に乳
化された組換えヒトTNFによるニュージーランド・ホワ
イト（NZW）ウサギの免疫化を反復することによってポ
リクローン性ウサギ抗ヒトTNF抗体を調製した。

結果 1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−アミノキサン
チンがin vitro TNF生産アッセイシステム中約0.005μ
ＭのIC₅₀を示すことが測定された。

有用性の実施例Ｂ Ｄ−gal−感作されたマウスにおける内毒性ショック 本発明の方法の化合物を試験するために使用したプロ
トコールは、本質的には、ガラノス（Galanos）ら、プ
ロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オ
ブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ（Proc.Nat'l.Aca
d.Sci USA）、76:5939−43（1979）（内容は本明細書中
に引用記載される）に開示された方法に従った。すなわ
ち、Ｄ−gal（Ｄ（＋）ガラクトシダーゼ）は、マウス
の種々の菌株を内毒素の致命的な影響に対して感作す
る。Ｄ−gal（300〜500mg/kg）の静脈内（i.v.）投与
は、0.1μｇ程度のリポ多糖類（LPS）の投与量に対して
マウスを感作する。すなわち、チャールズ・リバー・ラ
ボラトリーズ（Charles River Laboratories）（アメリ
カ合衆国ニューヨークのストーン・リッジ（Stone Ridg
e））から入手した６〜12週齢の雄性のC57BL/6マウス
に、パイロジェン不含生理食塩水0.20〜0.25ml中、Ｄ
（＋）−gal（シグマ（Sigma）;500mg/kg）と混合した
サルモネラ・チィホサ（Salmonella typhosa）（アメリ
カ合衆国ミシガン州デトロイトのディフコ・ラボラトリ
ーズ（Difco Laboratories））由来のLPC 0.1μｇをi.
v.注射した。LPS/D−galのi.v.注射の前または後の様々
な時点で試験されるべき化合物を投与した。このモデル
において、対照動物は一般にLPSの注射の５〜６時間後
に死んだが、時折、24〜48時の間で死亡が見られる。

TNF活性の測定 ウインストン（Winston）ら、分子生物学における現
代のプロトコル（Current Protocols in Molecular Bio
logy）、第11.2.1頁、アウスベル（Ausubel）ら編、（1
987）ジョン・ウイリィ・アンド・サンズ（アメリカ合
衆国ニューヨーク）に開示されている基本的なサンドイ
ッチELISA法の変形を使用してTNFの血漿レベルを測定し
た。当該ELISA法はカプチャー抗体としてハムスター・
モノクローン性抗マウスTNF（アメリカ合衆国マサチュ
ーセッツ州ボストンのゲンザイム（Genzyme））を、お
よび検出抗体としてポリクローン性ウサギ抗ネズミTNF
（アメリカ合衆国マサチューセッツ州ボストンのゲンザ
イム）を使用した。マウス試料中のTNFのレベルは、組
換えネズミTNF（アメリカ合衆国マサチューセッツ州ボ
ストンのゲンザイム）で生成した標準曲線から算出され
た。ELISAによって測定されたTNFレベルは、ラッフ（Ru
ff）ら、ジャーナル・オブ・イムノロジー（J.Immuno
l.）、125:1671−1677（1980）のL929バイオアッセイに
よって検出されたレベルと相互に関係をもつ。バイオア
ッセイにおける活性１単位はELISAにおけるTNF 70ピコ
グラム（pg）に相当する。ELISAは、25pg/mlに低下した
TNFのレベルを検出した。

結果 1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−アミノキサン
チンが前記の有用性モデルにおいて陽性のin vivo応答
を示し、腹腔内で、約0.1mg/kgの血清TNFの低下に関す
るED₅₀を有することが測定された。当該化合物はこの投
与量で動物の生存率100％を示す。

有用性の実施例Ｃ HIV in vitro単球アッセイ 以下のプロトコールを使用して、慢性的に感染してい
る細胞のHIV生産のin vitro阻害に対する式（Ｉ）の化
合物の効果を実験する。

HIV感染細胞株の単離 ヒト免疫不全ウイルス（HIV_IIIB）のHTL V_IIIB菌株で
H9 T細胞株の培養物を感染させ、該細胞を５週間培養
し、その間に慢性的に感染している細胞株を増殖させる
ことによって、クローンHIV感染細胞株を誘導した。RPM
I1640＋15％ウシ胎児血清およびH9細胞調節培地の1:1混
合物中で希釈平板培養を制限することによって、この培
養物からクローンを誘導した。クローンは細胞約４×10
⁷個まで増加した。アリコットを冷凍し、次いで、以下
に記載のとおり、培養物をTNFまたは他の組換えサイト
カインによる刺激を伴う場合と伴わない場合のそれらの
HIV生産についてアッセイした。

HIVの誘発 活性を誘発することについて試験するべき物質の存在
下で４日間、クローンHIV感染細胞株を培養することに
よってHIV誘発をアッセイした。HIV誘発の阻害の測定の
ために、試験化合物の存在下または不在下で18時間、リ
ポ多糖類（LPS）での処理によって、培養したヒト単球
を刺激してサイトカインを生産させた。刺激の後、単球
培養物からの上清培地を収集し、−80℃でアリコット中
で冷凍し、ELISAによって、１つのアリコット中のTNF、
IL1−βおよびIL−６の濃度を測定した。次いで、単球
上清を完全なRPMI増殖培地中に希釈して、陽性対照（LP
S刺激した）単球試料の場合にTNFの最適誘発濃度を得
た。最適な誘発は、指示細胞株に依存して、TNF 10〜10
0単位/ml（0.5〜50ng/ml）で達成された。各実験におい
て、実験的に処理した単球培養からの上清を、陽性対照
について使用したものと同一の因子によって希釈した。

４日間の実験の後、培養上清液（90μ）をHIV感染
細胞株から取り出し、５％（v/v）トリトン（Triton）
−Ｘ−100（10μ；シグマ・ケミカル・カンパニー（S
igma Chemical Company））に添加してHIV粒子から逆転
写酵素を除去し、ウイルスを不活化した。８個の培養物
を２以上の実験で各処置について評価した。逆転写酵素
活性についてアッセイするまで、試料を−80℃で貯蔵し
た。

逆転写酵素アッセイ ゴッフ（Goff）ら（ジャーナル・オブ・バイロロジー
（J.Virol）、38:239−248、1981）の微量滴定アッセイ
の変形方法によって、HIV逆転写酵素をアッセイした。
ドット−ブロット装置上でのNA45メンブランフィルター
（シュライヒャー・アンド・シュール（Schleicher and
Scheull））、およびオートラジオグラフィもしくはAM
BIS定量測定器またはその両方を用いて反応生成物を濾
過することによってオリゴ−A:ポリ−dT鋳型：プライマ
ー上のポリヌクレオチドへの³²P−dTTPの取込みを測定
した。全ての試料について逆転写酵素アッセイを２回行
った。

統計学的方法 RS/エクスプロアー（Explore）・ソフトウエア・パッ
ケージのCOMPARE関数を使用して結果の統計学的有意性
を計算した。

結果： ほとんどのクローンHVI感染細胞株は培養培地中でTNF
に応答して高レベルのHIVを発現する。RPMI 1640＋10％
fbs 1ml当たり5ngのrTNFを用いるかまたは用いずに４日
間、クローンH9細胞株10個を４回培養した。実験後、培
養培地中の逆転写酵素を測定して、各培養物によるHIV
生産のレベルを決定した。試験した細胞株10個のうち８
個は、TNFの存在下で培養した場合、高レベルのHIVを生
産した。特定のクローン、細胞株3.7は当業者に知られ
ている典型的な形態でTNFに応答した。細胞株3.7を選択
し、使用して単球上清に応答する誘発を評価した。

クローンHIV感染細胞はTNFに応答するだけではなく、
LPS刺激された培養ヒト単球（対照ではない）由来の上
清液に応答して高レベルのHIVを発現する。培養ヒト単
球由来の液またはLPSで刺激された培養ヒト単球由来の
液1ml当たり5ngのTNF−αで補足された培地中で４日
間、細胞株3.7を培養し、４日後、上清液中の逆転写酵
素レベルを測定することによって、生産されたHIVのレ
ベルを測定した。

細胞株3.7は組換えTNFに応答してHIVを再生可能に誘
発するので、該細胞株3.7を選択した。ここでの結果
は、細胞株4,7,3,U−１およびACH−２を用いて得られ
た。このアッセイでは、市販の細胞株も有用である。

TNF合成の阻害剤の存在下でLPSで刺激された培養ヒト
単球からの上清は、阻害剤の不在下でLPSで刺激された
単球からの上清と比較して低いHIV活性化活性を有す
る。対照ヒト単球、LPSで刺激されたヒト単球、および
式（Ｉ）の化合物、1,3−ジ−シクロプロピルメチル−
８−アミノキサンチン10μＭの存在下でLPSで刺激され
たヒト単球からの上清で補足された培地中で４日間、HI
V−感染クローン細胞株3.7を培養した。

このアッセイは、TNFの阻害剤としての式（Ｉ）の化
合物が、存在するとすればLPS刺激の、LPS刺激された単
球上清によってHIV誘発を阻害することを示す。特に、
1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−アミノキサンチ
ンは10μＭの濃度で（％＋／−誤差）＋／−（75−５）
^＊のHIV阻害を示した。

^＊かっこ内のパーセント阻害は、代表的な実験からの
ものである。いずれの実験における実際の阻害も、単球
ドナー、試験HIV感染Ｔ細胞株の用量応答曲線、および
単球上清の希釈に依存して様々な値をとり得る。

有用性の実施例Ｄ インフルエンザウイルス誘発TNFのin vivo阻害 以下のプロトコールを使用して、in vivoでのウイル
ス誘発TNF生産に対する式（Ｉ）の化合物の効果を実験
した。

マウス： チャールズ・リバー・ラボラトリーズ（Charles Rive
r Laboratories）から、年齢が同じである雌性の、特定
病原体感染防止条件の（Balb/c x C57B/6）F₁（CB6F₁）
マウスを購入した。着荷時、マウスは４〜10週齢であっ
た。LD₅₀測定に下用したマウスは８〜14週齢であった。

ウイルス生産： 10週日の受精卵の尿膜腔中で、Ａ型インフルエンザウ
イルス菌株A/PR/8/34（H1N1サブタイプ）を増殖した。
卵を48時間インキュベートした後、それらを、尿膜腔液
を収穫する前に、少なくとも２−1/2時間冷凍した。プ
ールした尿膜腔液を遠心して（2000rpm、15分、４
℃）、細胞を除去し、次いで、−70℃で貯蔵するために
アリコットに分けた。

in vitroウイルス滴定 マディン−ダービィ（Madin−Darby）種イヌの腎臓
（MDCK）細胞を使用してin vitroマイクロアッセイでウ
イルスを定量化して50％組織培養感染価（TCID₅₀）を確
立した。付着性MDCK細胞を含有する丸底微量滴定ウエル
にウイルスまたは肺ホモジネートの連続希釈物（培地＋
2.5μg/mlトリプシン中）を添加し（４個ずつ）。37℃
で５日間（６％CO₂）インキュベートした後、ウエル当
たり0.5％ヒヨコ赤血球50μを添加し、室温で１時間
後、凝集を測定した。二元性用量−応答アッセイに関す
る50％有効量（ED₅₀）評価についてSASバージョン５プ
ログラムを使用してTCID₅₀用量を計算した［SAS/スタチ
ュサーズ・ガイド（Statuser's Guide）、第２巻、SAS
インスティチュート（SAS Institute）、ノース・カロ
ライナ州キャリィ（1985）および「アプライド・カテゴ
リカル・データ・アナリシス」（Applied Categorical
Data Analysis）、マーカル・デッカー・インコーポレ
イテッド（Marcal Dekker Inc.）、出版社、ニューヨー
ク州ニューヨーク］。

in vivoウイルス攻撃誘発： 新しく解凍したウイルスを、0.05〜１％ウシ血清アル
ブミンを有する無菌PBS中で10倍ずつ連続して希釈した
（10^-1〜10^-8）；希釈物は使用するまで氷上に維持し
た。ペーパータオルにしみ込ませたメトキシフルオラン
（メトファン；ピットマン・ムーア・カンパニー（Pitt
man Moore Co.））への短時間暴露によって、CB6F₁マウ
スを麻酔し、ウイルス50μで鼻腔内攻撃誘発した。こ
れらの実験では2LD₅₀と同じ用量を使用した。

ウイルス攻撃誘発されたマウスからの試料収集 血清：ヘパリン化したパスツールピペットを使用して
マウスの眼窩静脈叢から採血した。マウス３〜４匹から
血液をプールし、15Kで15分間遠心した；血漿はアリコ
ットに分け、−20℃で冷凍した。

肺ホモジネート：最初の３日間、鼻腔内感染したマウ
スから肺を無菌的に取り出し、１ミクロンのガラスビー
ズ（オクラホマ州バートルスヴィルのバイオスペック・
プロダクツ（Biospec Products））（約1/4full）なら
びにペニシリンおよびストレプトマイシンを含むイーグ
ル最小必須培地1mlを含有するバイアルに入れた（バイ
アル当たり肺１個）。ミニビーズビーター（バイオスペ
ック・プロダクツ）を使用して１分間、肺をホモジナイ
ズした；次いで、バイアルを、４℃、3000rpmで15分間
遠心し、肺上清を−20℃で冷凍した。

気管支肺胞洗浄：マウスを、頸部脱臼によって安楽死
させ、アルコールで湿らせた。脾臓を取り出して横隔膜
を暴露させた。横隔膜を切断して肺をつぶし、肋骨ケー
ジ（rib cage）を切除して気管支を暴露させた。肺の約
３〜5mm上で気管支を切り取り、鈍端の19ゲージの針を
介して肺にPBS 1mlを注入した。この液を注射器中に回
収し戻し（初期容量の〜60〜80％）、2000rpmで15分間
回転させて細胞およびデブリを除去した。アッセイの前
に、上清のアリコットを−20℃で冷凍した。

式（Ｉ）の化合物の投与：式（Ｉ）の化合物、1,3−
ジ−シクロプロピルメチル−８−アミノキサンチン（以
下、化合物（１）と記す）を、まず、DMSO/EtOHに溶解
し、FBS/生理食塩水で所定の容積にして、５％DMSO、５
％Etoh、40％FBSおよび50％通常生理食塩水1ml当たり1m
gの最終濃度にした。マウス20g当たり0.2mg（10mg/kg）
に匹敵するように注射液をip投与した（マウス当たり0.
2ml）；または、下記のとおりの他の投与量。

TNF Elisaアッセイ:TNF Elisaアッセイは前記有用性
の実施例Ｂに記載したものと同一である。

理論的解釈および全体的な目的:HIVウイルスの阻害剤
の活性を試験するためのHIV動物モデルおよびin vivoで
容易にモニターできる動物モデルがない。文献における
初期の報告は、インフルエンザ感染単球がTNFを生産す
ることを報告しており、したがって、TNFの阻害剤とし
て式（Ｉ）の化合物のin vivoモニターリングに有用で
あるものとしてインフルエンザ・モデルが選択される。

マウス・インフルエンザ・モデル：簡単な説明 ヒト
のインフルエンザ・ウイルスはマウスの肺中で複製する
が、顕在的疾患を生じない。しかしながら、マウスに関
する病原性はマウスの肺の中で連続通過によって増加す
る。マウス適合性ウイルスは致死性肺炎を生じるが、簡
単なヒトのインフルエンザにおけるような上気道感染は
生じない。ネズミのインフルエンザにおいて、ウイルス
複製は、肺に限定され、塊状炎症細胞浸潤を伴う。肺の
インターフェロンのレベルがネズミのインフルエンザの
間、上昇することはよく立証されており（ワイド（Wyd
e）ら）、最近の報告は、インフルエンザ感染マウスの
気管支肺胞洗液中のIL−１およびTNFレベルの非定量的
増加（バイオアッセイによる）を立証した（バチェロン
（Vacheron）ら）。

結果： in vivo TNF生産 最初の研究では、0.5、１および６時間目、ならびに
１、３、５、７、９および14日目に、A/PR/8/34ウイル
ス（2LD₅₀）で鼻腔内感染したマウスから血液および気
管支肺胞洗浄（BAW）試料を採取した。TNF Eliaアッセ
イによるプールした試料（グループ当たりマウス３匹）
の分析によって、TNFは肺中では生産されるが、血液中
ではいずれの時点でもTNFは検出されなかったことが確
認された。続いての実験では、BAWを個別にアッセイし
（グループ当たりマウス５匹）、TNF分析およびウイル
ス滴定のための肺ホモジネートを調製した。結果は、TN
Fレベルが感染の２〜７日後に増加し、一方、ウイルス
複製が24時間目までには明白になったことを示す。ウイ
ルス力価は３日後に衰弱し始めたが、TNFレベル上昇し
たままであった。結果は、ウイルス複製が局所的なTNF
生産を誘導する事象（すなわち、炎症細胞浸潤）を引き
起こしたこと、およびウイルスが肺から除去されると肺
のTNFレベルが維持されたことを示唆する。

インフルエンザ誘発TNF生産に対する化合物（１）の効
果 処置プロトコールは、肺で見られるTNF生産の動力学
に基づいて設計された。処置は、肺のTNFの如何なる検
出可能な上昇にも先行して、１日目に開始された。マウ
スに化合物（１）を、毎日10mg/kgでip投与し、最後の
注射の２時間後にBAWを行った。BAWにおけるTNFのレベ
ルは、最大67％の低下を伴って、未処置対照と比較して
２日目および３日目に有意に減少した（３回の実験のう
ちのｎ＝３）。肺ホモジネートにおいては３日目だけTN
Fレベルが有意に減少した（１回の実験のうちのｎ＝
１）（示さない）。化合物（１）の用量滴定は、当該化
合物が1mg/kgで活性であるが（BAW TNFの〜50％減
少）、0.1mg/kgでは効果は見られなかったを示した。

考察： これらの研究は、式（１）の化合物の治療的投与がin
vivoでのウイルス誘発TNF生産を減少させることができ
ることを示す。データは、化合物が組織中および循環中
でTNFレベルの低下に有効であることを示唆する。

マウスの肺におけるインフルエンザウイルス力価に対す
る化合物（１）の効果 ウイルス力価は、感染の１、２および３日後に化合物
（１）１〜10mg/kgで処置したマウスにおいて２〜５日
目に有意に低下した。

考察：これらのデータは、式（Ｉ）の化合物による処
置が肺のウイルス力価を低下させ、故に、ヒトのインフ
ルエンザ感染において直接有用であることを実証した。

ネズミのインフルエンザの致死性攻撃誘発モデルにおけ
る生存率に対する化合物（１）効果 A/PR/8/34インフルエンザウイルスの致死性鼻腔内攻
撃誘発投与をしたマウスにおいて、毎日、化合物（１）
10mg/kgで処置したマウスにおける生存率の有意な改善
があったが、より低い投与量で処置したマウスのグルー
プにおける生存率、または感染後、１、２および３日
間、0.1〜10mg/kgで処置したマウスのグループにおける
生存率は賦形剤処置対照とあまり異ならなかった。

考察：肺のTNFレベルの低下が判明した用量の化合物
（１）によるインフルエンザ攻撃誘発されたマウスの処
置によって、マウスに毎日10mg/kgを投与した場合に有
意であった生存率の適度な改善を生じた。かくして、TN
Fの減少は、この感染において不利益ではなかった。生
存率に対する効果は劇的ではなかったが、より有意な利
益が臨床的症状のような初期のエンドポイントを測定す
ることによって示され得る。しかし、これは、感染が下
気道に限定されるマウスモデルにおいては容易には行わ
れない。したがって、式（Ｉ）の化合物による処置は、
流出する鼻ウイルスのレベルが一般に臨床的症状と相互
関係があるヒトのインフルエンザにおいて罹病率および
／または死亡率を低下させることを示唆する。

前記説明は、全体的に、好ましい具体例を含む本発明
を記載する。ここに特に記載された具体例の変形および
改良は、以下の請求の範囲の範囲内である。さらに詳細
に記載せずとも、当業者は、前記記載を使用して、本発
明を最大限に利用できると思われる。したがって、本明
細書中の実施例は、単なる説明と解釈されるべきであ
り、如何なる場合も本発明の範囲を限定するものではな
い。排他的権利および特権が請求される本発明の具体例
は、以下のとおり定義される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 31/12 Ａ６１Ｐ 31/12 １７１ １７１ 31/18 31/18 37/00 37/00 37/02 37/02 37/04 37/04 43/00 １１１ 43/00 １１１ // Ｃ０７Ｄ 473/06 Ｃ０７Ｄ 473/06 (56)参考文献 特開 平２−273676（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−19327（ＪＰ，Ａ) 特表 平２−502542（ＪＰ，Ａ) Ａｌｌｅｒｇｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａ ｔｈｏｌ．，Ｖｏｌ．11，Ｎｏ．５ （1983）ｐ．321−327 Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒ ｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，Ｖｏｌ．155, Ｎｏ．３（1988）ｐ．1230−1236 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 31/522 C07D 473/06 ＣＡ（ＳＴＮ) ＣＡＯＬＤ（ＳＴＮ) ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (6)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】1,3−ジ−シクロプロピルメチル−８−ア
   ミノキサンチンまたはその薬学的に許容される塩を含む
   ことを特徴とする、腫瘍壊死因子（TNF）生産の阻害を
   必要とする哺乳類にてその生産を阻害するための医薬組
   成物。
2. 【請求項２】経口投与、非経口投与または吸入投与用で
   ある請求項１記載の医薬組成物。
3. 【請求項３】哺乳類が急性免疫不全症候群（AIDS）、AI
   DS関連症候群（ARC）またはHIV感染症関連疾患、AIDSに
   伴う悪液質、または癌に伴う悪液質、成人呼吸窮迫症候
   群、骨吸収症、対宿主性移植片反応、急性移植片拒絶反
   応、クローン病、潰瘍性大腸炎、敗血症性ショック、内
   毒素性ショック、グラム陰性菌性敗血症またはトキシッ
   クショック症候群に罹患しているヒトである請求項１記
   載の医薬組成物。
4. 【請求項４】TNFの生産を阻害するのに十分な量の1,3−
   ジ−シクロプロピルメチル−８−アミノキサンチンまた
   はその薬学的に許容される塩を含むことを特徴とする、
   哺乳類にてウイルス感染症を治療するための医薬組成
   物。
5. 【請求項５】ウイルス感染症がネコ免疫不全ウイルス
   （FIV）、ウマ伝染性貧血ウイルス、ヤギ関節炎ウイル
   ス、ビスナウイルス、メデウイルスを含むレンチウイル
   スによる感染症である請求項４記載の医薬組成物。
6. 【請求項６】TNFがTNF−αである請求項１または４記載
   の医薬組成物。