JPH01121223A - 生長因子を含有する安定な凍結乾燥した配合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この開示を通じて、種々の刊行物、特許および特許出願
を参照する。これらの刊行物、特許および特許出願の開
示を、それらの全体において、この開示中に引用によっ
て加えて、ここに記載する本発明および特許請求の範囲
の日までに当業者に知られている技術水準をより一層完
全に記載する。

本発明は、ヒトミトゲンまたは脈管形成活性を有するポ
リペプチド生長因子、とくに表皮生長因子を含有する安
定な凍結乾燥した配合物に関する。

ヒトポリペプチド生長因子は、正常ヒト細胞の生長を調
節する分子である。多くのヒトポリペプチド生長因子は
同定され、かつそれらの化学構造は決定されてきている
。この群の範囲内に入るものは、次の通りである二表皮
生長因子（ＥＧＦ）、酸性および塩基性の線維芽生長因
子（ＦＧＦ）、小板誘導生長因子（ＰＤＦＧ）、形質転
換生長因子−α（ＴＦＧ−α）、形質転換生長因子−β
（ＴＦＧ−β）、インスリン様生長因子（１，ＧＦ−ｒ
およびＩＧＦ−１１）、および神経生長因子（ＮＧＦ）
。それらは細胞の増殖を刺激する能力をもつため、ヒト
ポリペプチド生長因子は創傷の治癒過程を刺激するとき
有用であるとして記載されてきた。

より特徴づけられた因子の１つは、表皮生長因子である
。ヒトＥＧＦは、ある数の種類の細胞、例えば、上皮細
胞および開業細胞についてミトゲン活性を有する５３ア
ミノ酸のポリペプチド生長因子である。天然に産出する
ＥＧＦ分子の変異型、例えば、５２アミノ酸のガンマ−
ウロガストロンが報告された。ＥＧＦは、また、脈管形
成活性を有することが報告された。表皮生長因子は、表
皮増殖促進活性および胃酸分泌阻害活性を示し、それゆ
え、薬物として有用である。表皮生長因子は湿気の存在
下に生物学的活性を失うことが発見された。これは、こ
のような活性の損失は延長した期間にわたって表皮生長
因子の水性調製物の貯蔵を不可能とするので、不利益で
ある。本発明は、ポリペプチド生長因子、例えば、ＥＧ
Ｆの配合物の活性の損失を、これらの生長因子を含有す
る安定な凍結乾燥した配合物を提供することによって、
減少または防止する手段を提供する。

凍結した溶液中においてさえ急速に劣化する多くの生物
学的物質は、物質を凍結乾燥することによって長期間生
存しうる状態を保持することができる。凍結乾燥は、凍
結後組成物中の水を組成物から昇華させる、組成物の乾
燥法である。この方法の特定の利点は、水溶液中で比較
的不安定な生物学的物質および薬剤を、処理し、そして
液体状態で投与容器中に充填することができ、こうして
液体の処理を比較的容易になるという利点がえら＝３− れ、高い温度を用いないで乾燥し、これによって悪い熱
の作用を排除することができ、次いで貯蔵の問題が比較
的少ない乾燥状態で貯蔵することができるということで
ある。

凍結乾燥は、本質的に、次の工程から成る。第１に、生
成物の水溶液を共融温度より低い温度で排気室内で凍結
する。次いで、この室を、通常０゜１トル以下に排気す
る。氷は冷たい凝縮表面上で生成物のそれより低い温度
で昇華し、凝縮表面は室内にあるいは接続室内に存在す
る。次いで、熱を生成物に制御した条件下に導入し、こ
れによって生成物をその共融温度より低く保持するよう
に設計した速度で昇華のためのエネルギーを提供する。

単に全体の薬物の凍結乾燥に基づく配合物を設計するこ
とはしばしば不可能である。なぜなら、通常配合物中に
使用する薬物の量は非常に少ないからである。これは問
題を生ずる。なぜなら、凍結乾燥の間、薬物はこの方法
にお用いる真空によって凍結乾燥容器から抜出されうる
からである。さらに、多くのポリペプチドは小さい濃度
で凍結乾燥されるとき比較的不安定である。それらは生
成物の包装材料に吸収され、活性を失う。多くの凍結乾
燥された製薬学的組成物は、凍結乾燥の間に存在する固
体の量増加するために希釈剤または増量剤を使用し、こ
れによって少量の薬物全体の凍結乾燥に関連する問題を
排除する。

凍結乾燥したＥＧＦ調製物は、米国特許第３゜９１７．
８２４号（Ｃａｍｂｌｅら）に記載されており、ここで
無菌の密閉したバイアル中にマウスＥＧＦおよびデキス
トロースを含有する凍結乾燥した調製物が調製された。

デキストロースは、凍結乾燥調製物の再構成によって等
張の注射溶液が形成されるように、添加された。

本発明は、ヒトミトゲンまたは脈管形成活性を有するポ
リペプチドおよび凍結乾燥のための水溶性増量剤を含有
する安定な凍結乾燥した組成物を提供する。生長因子対
増量剤の重量比は約０．００００１〜約０．５の範囲内
であることができる。

凍結乾燥した組成物中の水または水分は１重量％より少
ないことが好ましいが、５重量％程度に高いことができ
る。生長因子はヒトポリペプチド生長因子であることが
好ましく、そしてヒトポリペプチド生長因子は表皮生長
因子であることが好ましい。

１つの実施態様において、本発明によれば、ヒトミトゲ
ンまたは脈管形成活性および水溶性または水膨潤性を有
するポリペプチド生長因子、および組成物の再構成した
溶液に粘度を付与するか、あるいは粘度を増加すること
ができる製薬学的に許容されうるポリマーを含んでなる
ことを特徴とする安定な凍結乾燥した組成物が提供され
る。凍結乾燥したケーク中のゲル形成ポリマーの濃度を
変化することによって、再構成した溶液の粘度を消耗の
レベルに変化させることができる。ポリマーが凍結乾燥
したケーク中に存在する場合、それは０．１〜ｌＯ重量
％の濃度（再構成した後）の範囲であることができる。

再構成した溶液中の生長因子の濃度は、０．０１〜１０
００マイクログラム／ｍ＋の範囲であることができる。

凍結乾燥した固体は固体の希釈剤とポリマーの混合物で
あることができ、この場合希釈剤対ポリマーの重量比は
約３：１　（希釈剤：ポリマー）であることができる。

ゲル調製物または安定化した水溶液を再構成後に望むと
き、粘度増大ポリマーを凍結乾燥した組成物中に含める
。ここで使用するとき、再構成は水性希釈剤の添加によ
って乾燥した凍結乾燥組成物をその前の水性形態に回復
させることを意味する。

従来、ヒトポリペプチド生長因子は適当な成分とともに
凍結乾燥して、ヒト創傷の治癒の適用における使用に適
当な配合された生成物に調製されてきていない。本発明
は、ヒト創傷の治癒において使用するための凍結乾燥し
た配合物およびキットならびに長い貯蔵寿命を有する安
定な凍結乾燥した組成物を提供する。凍結乾燥した配合
物は、標準化した物理的形態、標準化した物理化学的性
質、化学的および生化学的一体性、増大した生物学的生
存能力および使用時における水溶液への急速かつ全体の
再水和の能力という利点を提供する。

本発明の凍結乾燥した組成物は非常に低い水分、好まし
くは１重量％より低い水分を有することが重要である。

凍結乾燥した組成物中、とくにＥＧＦ中の水の存在は、
生長因子の生物学的活性を減少する傾向がある。生物学
的活性は認識されたバイオアッセイ、例えば、同時係属
米国特許出願第０９６．４５５号に記載されたＥＧＦリ
セプター結合アッセイにおいて測定することができる。

さらに、生長因子の安定性は任意の適当なＨＰＬＣ法に
よって測定できる。１つの極端において、組成物は０％
の水を有する絶乾燥組成物であろう。

しかしながら、実際には、ポリペプチド溶液の凍結乾燥
はｌＯ％程度に高い水分を有する凍結乾燥したケークを
生じうる。

本発明の組成物において使用する生長因子対増量剤の重
量比は約０．（１０００１〜約０．５の範囲内であるべ
きである。ここで使用するとき、用語「増量剤」は、最
終の凍結乾燥した組成物中に存在する固体物質を増加す
ることによって、凍結乾燥を促進するために使用する水
溶性の固体粒子の希釈剤を意味する。増量剤は凍結乾燥
したケークに機械的一体性を与える。生長因子／増量剤
の比は、最終調製物に使用しようとする生長因子の量に
依存して変化させるとかできる。生長因子の希薄水溶液
を究極的に望む場合において、凍結乾燥した組成物中の
生長因子／増量剤の比は低いであろう。生長因子の量が
高いのを望む場合、例えば、凍結乾燥した調製物を火傷
のような創傷に直接適用する場合において、凍結乾燥し
た組成物中の生長因子／増量剤の比は高いであろう。好
ましい実施態様において、凍結乾燥した組成物中の生長
因子／増量剤の比は約０．０００１〜約０．　１である
。

本発明における使用に適する水溶性増量剤は、配合分野
における凍結乾燥に典型的には使用される、製薬学的に
許容されうる本質的に不活性の固体材料のいずれである
こともできる。増量剤は無毒であるべきであり、生長因
子の生物学的活性を減少してはならず、そして使用する
量において特定の薬理学的作用を有してはならない。こ
のような増量剤は、次のものを包含する：簡単な糖類、
例えば、単糖類、例えば、グルコース、デキストロース
および糖アルコールマンニトール；二糖量、例えば、ス
クロースおよびラクトース：多糖類、例えば、デキスト
ラン；アミノ酸、例えば、グリシンおよびアラニン；短
鎖（Ｃｓ　　Ｃａ）　トリカルボン酸およびジカルボン
酸、例えば、それぞれ、クエン酸および酒石酸；および
ある種の無機塩類、例えば、リン酸ナトリウムおよびリ
ン酸カリウム。

本発明の最終の再構成した溶液において、増量剤の濃度
は約０．１〜約６．０％（ｗ／ｖ）の間であるべきであ
る。生長因子、例えば、ＥＧＦはよく結晶化しないか、
あるいはまったく結晶化せず、そして凍結乾燥された形
態でよく充填しないので、増量剤は凍結乾燥された生長
因子の固体の「ケーク」への充填を増大する。

ここに言及するポリペプチド生長因子は、ＥＧＦ１酸性
ＦＧＦ、塩基性ＦＧＦ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−ａ、アン
ギオゲニン（ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ）　、Ｎ　ＧＦ、Ｉ
ＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩまたはそれらの混合物から成る
群より選択されるヒトミトゲンまたは脈管形成活性を有
するものである。これらの生長因子の生物学的に活性な
断片または化学的に合成された誘導体を、無傷の天然産
出する分子の代わりに使用できることが考えられる。ミ
トゲン活性に加えて、ＥＧＦ、ＥＧＦ類、ＩＧＦ類およ
びアンギオゲニンは脈管形成活性を有することが報告さ
れている。生長因子は組み換えＤＮＡ技術によって調製
されることが好ましい。ここで使用するとき、用語「生
長因子」は、いわゆる造血素、エリトロポイエチンおよ
びコロニー刺激因子を包含しない。

ここで使用するとき、ＥＧＦは認めらたバイオアッセイ
、例えば、ＥＧＦリセプター結合アッセイ、において測
定して、天然のヒトＥＧＦポリペプチドが示すものと同
様な生物学的活性を有し、そして、例えば、カーペンタ
−（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ）ら、「表皮生長因子、そのリ
セプター、および関連する蛋白質（Ｅ　ｐｉｄｅｒｍａ
ｌ　　Ｇ　ｒｏｗｔｈ　　Ｆ　ａｃｔｏｒ、　１ｔｓｒ
ｅｃｅｐｔｅｒ、　ａｎｄ　　ｒｅｌａｔｅｄ　　ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ）　Ｊ　、実験の細胞研究（Ｅ　ｘｐｅｒ
ｆｍｅｎｔａｌ　　Ｃａｌｌ　　Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、
１６４　：　ｌ−１０（１９８６）に記載されているよ
うな、ある種の保存されたアミノ酸残基およびジサルフ
ァイド結合の共通の位置を有する、ポリペプチドのクラ
スを包含することを意図する。こうして、ＥＧＦは次の
ものを包含する：組み換えＤＮＡ技術によって生成され
たＥＧＦ、マウスの顎下線から分離されたマウスＥＧＦ
、ラットＥＧＦ１およびヒト尿から分離できる、天然の
ヒト表皮生長因子、および前記のいずれかの生物活性誘
導体および関連するポリペプチド、蛋白質分解プロセス
によってその場で活性な表皮生長因子に転化される前駆
体を包含する。ヒトＥＧＦは、ウルデア（Ｕｒｄｅａ）
　、Ｍ、　Ｓ　、ら、プロシーデインダス・オブ・ナシ
ョナル・アカデミ−・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、
　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　）ＵＳＡ
、８０，７４６１−７４６５　（１９８３）に記載され
る、ポリペプチド配列またはその実質的な部分を有する
ＥＧＦを意味する。ヒトＥＧＦは、また、天然に産出す
る変異型、例えば、ガン−１２＝ マーウロガストロンを呼ぶ。

本発明の他の実施態様１こおいて、本発明によれば、ポ
リペプチド生長因子、および組成物の再構成した溶液に
粘度を付与するか、あるいは粘度を増加することができ
る製薬学的に許容されうるポリマーを含んでなることを
特徴とする安定な凍結乾燥した組成物が提供される。ポ
リマーは高い水分を有する親水性基であるという特性を
有し、ここでゲルのマトリックスは生長因子の坦体とし
てはたらく。最終の再構成した溶液がゲル、またはより
粘性の水溶液または安定化された水溶液であることを望
むとき、ポリマー含有凍結乾燥した組成物を調製するこ
とができる。種々のポリマーの再構成した溶液について
の所望の粘度の範囲は、患者について意図する適用の各
々について変化するであろう。眼の適用のため、粘度の
範囲は１〜５０００ｃｐｓ（センチポアズ）であるべき
である。

眼の前眼房における使用のため、粘度の範囲は１０．０
００〜ｌ　００．０００ｃｐｓであるべきである。皮膚
または切開の創傷の治癒の適用のため、粘度の範囲は１
．０００〜１２，０００，０００ｃｐｓであることが好
ましい。ここで述べる粘度の値は、室温、例えば、２２
〜２６℃においてブルックフィールド法によって決定す
る。

粘度増大ポリマーは、ビニルポリマー、ポリオキシエチ
レン−ポリオキシプロピレンポリマーまたはコポリマー
（プルロニック（Ｐ　１ｕｒｏｎｉｃ＠　）、多糖類、
蛋白質、ポリ（エチレンオキシド）、アクリルアミドポ
リマーおよびそれらの誘導体または塩類から成る群より
選択することができる。ポリ（エチレンオキシド）はポ
リエチレングリコールを包含することを理解すべきであ
る。本発明において有用なビニルポリマーは、ポリアク
リル酸、ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドンおよ
びポリビニルアルコールから成る群より選択することが
できる。本発明において有用な多糖類はセルロース、セ
ルロース誘導体、グリコサミノグリカン（ｇｌｙｃｏｓ
ａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）　、寒天、ペクチン、アルギ
ン酸、デキストラン、澱粉およびチトサンから成る群よ
り選択することができる。グリコサミノグリカンはヒア
ルロン酸、コンドロイチンおよび関連する分子から成る
群より選択することができる。本発明において有用な蛋
白質はコラ−ベン、ゼラチンおよびフィブロネクチンか
ら成る群より選択することができる。プルロニック（Ｐ
　１ｕｒｏｎｉＣ■）およびポリエチレングリコールは
凍結乾燥できず、それゆえ凍結乾燥したケーク中に存在
することができない。しかしながら、それらはケークの
再構成に使用する溶液中に存在することができる。

セルロース誘導体は、アルキルセルロース、ヒドロキシ
アルキルセルロース、例えば、メチルセルロース、ヒド
ロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース
、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキ
シプロピルセルロースを包含することができる。

ポリマーの分子量は、患者の処理に使用するポリマーの
適用に依存するであろう。例えば、眼の前眼房において
使用するため、適度に粘性のゲルが必要であり、そして
分子量はこのような粘度を提供するように選択される。

ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、前眼房におけ
る使用のための２％溶液中で８６．０００の分子量を有
することができる。ポリアクリルアミドは、前眼房の使
用のための４．５％の溶液中で１３ＸｌＯ’の分子量を
有することができる。

本発明において使用するゲル形成物質は粘性の水溶液を
形成できる水溶性ポリマーであることができるが、非水
溶性であるが、粘性溶液を、また、形成できる、水膨潤
性ポリマー（例えば、コラーゲン）であることができる
。膨潤性ポリマーは水中に溶解するよりはむしろ水を吸
収するものでである。

セルロース誘導体は、ポリペプチド生長因子、とくにＥ
ＧＦを、水溶液中の生物学的活性の損失に対して安定化
することができる。生物学的活性の損失に対して生長因
子を安定化するセルロース誘導体の使用は、本願と同時
に提出した同時係属米国特許出願第０９６．４５５号お
よび米国特許出願第　　　　　　　号に記載されている
。

＝１６− 生長因子を含有するゲル配合物は、［生長因子を含有す
るゲル配合物」と題する、本願と同時に提出した同時係
属米国特許出願第 号に記載されている。

本発明の水性ゲル配合物は眼および皮膚の創傷の治癒に
おいて有用である。ゲルは、創傷へ付着し、そして不規
則な体または創傷の輪郭に順応するとう利点を有する。

ゲルは、創傷の部位へ直接、あるいは創傷の部位へ適用
すべき、柔軟な（ｃａｍｐｌｉａｎｔ）多孔質または微
孔質の支持体、例えば、コーティングの形態のそれと組
み合わせて適用することができる。ゲルは、高い水分（
これは創傷を湿潤状態に保持する）、創傷の滲出物を吸
収する能力、創傷への適用の容易さおよび洗浄による除
去の容易さという、それ以上の利点を有する。

ゲルは創傷へ適用するとき冷たい感触を有し、こうして
患者の快さおよび、ことに感受性創傷径の、配合物の受
容性を増加することができる。

本発明の再構成したゲル配合物は、また、創傷部位上の
生長因子のだめの制御された供給系を提供する。制御さ
れた供給は、延長した期間、例えば、２４時間以上まで
、好ましくは１〜１２時間、より好ましくは１〜８時間
にわたって、治療レベルを維持するために十分な薬物の
解放を言及する。

創傷部位における生長因子、とくにＥＧＦの接触時間の
増加は、創傷の治癒速度の有意の増加を達成するために
必要であることが報告された。本発明のゲル配合物は、
創傷部位における生長因子の接触時間を増加させ、そし
て持続した解放の投与形態を提供する。これは重要な利
点である。なぜなら、頻度が低い配合物の創傷への適用
が可能となり、これによって、とくに有糸分裂の異なる
期における、創傷およびその細胞成分の混乱が少なくす
ることができるからである。

他の実施態様において、本発明によれば、生長因子の溶
液を調製するためのキットが提供される。

このキットはヒトミトゲン活性を有する凍結乾燥したヒ
トポリペプチド生長因子を含有する第１バイアルを含む
。さらに、このキットは緩衝化液状希釈剤を含有する第
２バイアルを含む。このキットは、長い貯蔵寿命を有す
る生長因子の安定な配合物を提供するという利点を有す
る。生長因子の新鮮な安定溶液は、任意の所望の時間に
、第２バイアルの内容物を第１バイアルのそれと混合す
ることによって調製できる。次いで、得られる溶液は、
直ちに使用できるか、あるいは数日の期間にわたって、
すなわち、多使用の容器を調製するとき、使用できる。

溶液を直ちに使用しないとき、液状希釈剤中のセルロー
ス誘導体の１種を存在させ、こうして再構成した水溶液
が生物学的活性の損失に対して安定化されるようにする
ことが望ましい。さらに、微生物の増殖を防止するだめ
の防腐剤を多使用の容器中に存在させるべきである。

好ましい実施態様において、第１バイアル中の生長因子
は表皮生長因子である。

第１バイアル中の凍結乾燥した生長因子は、さらに、こ
こに記載するような、水溶性増量剤または本質的、粘度
増大ポリマーを含有することができる。第２バイアル中
の液状希釈剤は、純粋な水であることができるか、ある
いは約５．０〜約８゜〇、好ましくは７．０〜８，０の
溶液のｐＨを維持するための緩衝剤をさらに含有するこ
とができる。Ｊ）Ｈは、存在する場合、使用する特定の
防腐剤に依存することがある。適当な緩衝剤は、リン酸
塩緩衝剤、クエン酸塩緩衝剤、ホウ酸塩緩衝剤および酢
酸塩緩衝剤から成る群より選択されるものである。

液状希釈剤中に含めることができる任意の成分は、水溶
液を等張および等しい浸透圧にするための張度剤である
。張度剤は約１．８％（ｗ／ｖ）までの濃度で存在でき
る。適当な張度剤は塩化物塩類、例えば、塩化ナトリウ
ムおよび塩化カリウムである。前述の増量剤、例えば、
マンニトールは、また、張度剤としてならびに増量剤と
して作用うろことができ、それゆえ張度剤は配合物から
省略し、溶液より多くの増量剤を添加して所望の張度の
作用を達成することができる。

液状希釈剤は、また、防腐剤を、約ｏ、ｏｏ。

２〜約２．５％（Ｗ／Ｖ）の濃度で含有することができ
、濃度は使用する特定の防腐剤に依存する。

適当な防腐剤は、チメロサル（０，０００２〜０゜０１
％）、ソルビン酸（０，０５〜５％）、クロロブタノー
ル（０，０５〜０．６％）、およびイミダゾリジニル尿
素（０，０１−０，１％）テする。パラバンのクラスの
防腐剤は、また、適当である。

本発明のキットにおける液状希釈剤は、ここに記載する
１種または２種以上水溶性の粘度増大ポリマーを含有す
ることができる。ワックス、例えば、ポリエチレングリ
コールおよびプルロニック（Ｐ　１ｕｒｏｎｉｃ■）で
あるポリマーは、凍結乾燥に使用する温度（３５℃）に
近いかあるいはそれより低いガラス転移温度を有するの
で、凍結乾燥したケーク中に直接添加するために適さな
い。ガラス転移温度付近またはそれより低い温度でポリ
マーは溶融し、そして凍結乾燥の間に流れ、ケークの構
造体はつぶれ、その結果ケークは再構成のためい再溶解
ことか困難である。こうして、ポリマーをケーク中に添
加しようとする場合、ポリマーは３７°Ｃより実質的に
高いガラス転移温度を有することが好ましい。それ以外
、ここに記載するポリマーのいずれをも液状希釈剤中に
使用することができる。このような場合において、第１
バイアル中の凍結乾燥した組成物は生長因子および増量
剤のみを含有するであろう。次いで、ポリマー含有希釈
剤を凍結乾燥したケークを含有するバイアルに添加して
ゲル溶液を形成する。

第２バイアルの液状希釈剤中に存在するとして記載する
成分のいずれかあるいはすべては、交互に、第１バイア
ルの凍結乾燥したケーク中に存在することができるが、
ただし前述の揮発性または非適合性ポリマーである成分
は排除する。揮発性成分、例えば、ある種の防腐剤は凍
結乾燥の間に失われ、それゆえ、最終の再構成した水性
配合物中に使用しようとするとき、液状希釈剤中に存在
しなくてはならない。こうして、凍結乾燥したケークは
生長因子、増量剤、ポリマー、緩衝剤、張度剤または非
揮発性防腐剤の任意の組み合わせを含有することができ
る。すべての追加の成分が凍結乾燥したケーク中に存在
する場合、液状希釈剤は単に水であることができる。張
度剤がケーク中に存在しない場合、この希釈剤は塩類溶
液（ｓａｌｉｎｅ）であることができる。

水性生長因子溶液を調製する方法は、まず、本発明の凍
結乾燥した組成物のいずれかを調製し、次いで凍結乾燥
した組成物をここに記載する水性希釈剤と混合すること
からなる。このような方法の利点は、生長因子を延長し
た期間にわたって安定な形態で貯蔵し、次いで、それを
使用しようとするとき、水性形態（液体またはゲル）で
新しく調製できるということである。この溶液中の生長
因子の濃度は、約０．０１〜約１０００マイクログラム
／ｍｌの範囲であることができる。生長因子の濃度は好
ましくは約１〜５０００マイクログラム／　ｍｌ、より
好ましくは１〜１００マイクログラム／ｍｌである。

創傷の治癒速度を増大する方法は、ヒトミトゲン活性を
有するヒトポリペプチド生長因子からなる凍結乾燥した
組成物の創傷治癒有効量を創傷と直接接触することから
なる。生長因子を含有する凍結乾燥した粉末を、任意の
方法で、例えば、標準の粉末デイスペンサーまたはエア
ゾール噴霧粉末デイスペンサーから、創傷の上に直接ふ
りかけることができる。凍結乾燥ｌ−だ粉末を創傷の上
にふりかけた後、それを保護用クリーム、ゲルまたは包
帯で覆って、粉末を創傷の上に維持することができる。

本発明の凍結乾燥した粒子の供給系は、生長因子が長期
間安定でありかつ適用が容易であるという利点を有する
。凍結乾燥生長因子−増量剤組成物は、創傷への適用の
前に、非常に微細な粉末に粉砕することができる。「乾
燥した」タイプの創傷、例えば、火傷または共与部位で
ある創傷について、粉末は創傷を脱水すべきではない。

「湿潤した」タイプの創傷、例えば、ある種の潰瘍にお
いて、粉末による脱水は重要な問題ではない。

生長因子を含有するゲル化した系は、凍結乾燥して、フ
オーム（ｆｏａｍ）のシートまたはパッドを形成するこ
とができる。液体の滲出物は粉末を水和させ、これによ
ってフオームをゲルの状態に回復させ、こうして生長因
子を標的組織に開放することができる。このような系は
、ゲルを持続して開放するという利点および乾燥した凍
結乾燥状態の安定性を提供する。

本発明の凍結乾燥した組成物は、吸収性ガーゼの包帯の
繊維を被覆して、創傷の治癒の包帯を形成し、次いでこ
れを創傷の上に配置することができる。創傷の治癒の包
帯は、吸収性ガーゼの包帯を、ヒトミトゲン活性を有す
るヒトポリペプチド生長因子を含有する溶液でソーキン
グし、次いで包帯を凍結乾燥して、包帯の繊維が凍結乾
燥した状態の生長因子で被覆されている包帯を形成する
ことによって調製できる。次いで、包帯を創傷に適用し
、こうして繊維の中または上の生長因子が創傷と接触し
、そして細胞の増殖を刺激して創傷の治癒速度を増大さ
せることができる。包帯が創傷の上に配置された後、そ
れを水または任意の適当な水溶液でソーキングして、ガ
ーゼから創傷への凍結乾燥した生長因子の開放を増大す
ることができる。

本発明の再構成した組成物は、点眼配合物、ウェル形成
治癒のための軟膏、ゲル配合物、フオームなどにおいて
有用である。本発明の凍結乾燥した粉末および再構成し
た溶液を含むことができる生成物は、リポソーム配合物
、人工皮膚、縫合糸被膜、外科用ステープルおよび胃腸
適用のための生成物、例えば、胃酸分泌抑制に使用する
生成物である。

本発明の組成物を使用して治癒できる創傷は、表皮の損
傷を起こす偶発的または医学的損傷、例えば、眼の創傷
、これは角膜の潰瘍、ラジオケタトミイ（ｒａｄｉｏｋ
ｅｔａｔｏｍｙ）　、角膜移植、エビケラトファキア（
ｅｐｉｋｅｒａｔｏｐｈｋｉａ）から生ずる、および他
の眼における外科的に誘発した創傷；および皮膚の創傷
、例えば、火傷の創傷、皮膚移植からの共与部位の創傷
、および潰瘍（皮膚、とこすれ、静脈の血行静止および
糖尿病）から生ずるものである。内部の創傷は、また、
切開の組成物によって処置することができる。

凍結乾燥の方法は、技術的によく知られており、そして
、例えば、次の文献に記載されている二メソッズ・イン
・エンジモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ　　１ｎＥｒ＋ｚｙ
ｍｏｌｏｇｙ）　、Ｖｏｌ、　　２２．３３−３９ペー
ジ、アカデミツク・プレス（Ａ　ｃａｄｅｍｉｃ　　Ｐ
　ｒｅｓｓ）、ニューヨーク（１９７１）、および凍結
乾燥（旦ｒｅｅｚ　−Ｄｙｉｎｇ）　、Ｅ　、　Ｗ、エ
ロスドルフ（Ｅ　１ｏｓｄｏｒｆ）　、レインホルト（
Ｒｅｉｎｈｏｌｄ）　、ニューヨーク（１９４９）。本
発明のキットの調製において、販売する同一キット内で
生長因子を凍結乾燥することが望ましい。生長因子の水
溶液を、ポリペプチドの凍結乾燥において標準的に使用
される滅菌ろ通糸、例えば、０．２２ミクロンのフィル
ターを通してろ過した後、バイアルに添加する。次いで
、バイアルの各々の内容物を凍結乾燥し、その後無菌条
件下にバイアルに蓋をし、そして密閉する。無菌の最終
生成物は、生成物を創傷の治癒に使用しようとするとき
、望ましい。一般に、バイアルのための大抵の有用な容
器は、生物学的材料の凍結乾燥に標準的に使用されてい
るガラスびんである。他の適当な容器は２隔室の注射器
であり、ここで一方の隔室は凍結乾燥したケークを含有
し、そして他方の隔室は水性希釈剤を含有する。凍結乾
燥が完結した後、バイアルまたはアンプル内の真空を不
活性ガスで系を充填することによって開放し、標準の装
置を使用して所定位置に栓をし、次いで締結密閉する。

このような方法は無菌の最終生成物を保証するであろう
。

種々の容器は凍結乾燥に適する。適切な容器は、容器を
密閉し、そして部分的真空下に貯蔵するとき、外部の圧
力に耐えることができるべきである。

容器は、外側から内側への熱の合理的伝達を可能とする
材料から作るべきである。容器の大きさは、凍結乾燥す
べき溶液が有用な体積の２０％以下を満たすようなもの
であるべきである。例えば、１ｍｌの溶液は５ｍｌのバ
イアル中に充填することができ、あるいは２４ｍ１の溶
液は１２０ｍ１のバイアル中に充填することができる。

バイアルは単一の使用または多数の使用の適用のための
ものであることができる。バイアルはガラスまたはプラ
スチック、例えば、ポリプロピレンから作ることができ
る。

本発明のキットの調製において、キットから調製した究
極の供給系は無菌であり、非抗原性であり、そして感染
因子、例えば、バクテリアを含有してはならない。した
かて、キットは無菌の条件下に調製するか、あるいはキ
ットおよび成分は滅菌可能でなくてはならない。滅菌の
ろ過およびオートクレーブ処理は、この目的に適当な手
段である。すべての包装材料、例えば、ガラスおよびゴ
ムは水蒸気によって滅菌することができる。ゲル（生長
因子の添加前）（訃また、水蒸気によって大 滅菌することができる。液体および生長因子は滅菌ろ過
することができる。さらに、多数の使用の容器として使
用すべき容器またはバイアルについて、容器内に防腐剤
を含めることが望ましい。

次の実施例によって、本発明を例示する。本発明は、こ
れらの実施例によって限定されるものと考慮すべきでな
く、特許請求の範囲によってのみ限定される。

実施例Ｉ 点眼剤のための配合物を設計した。配合物を凍結乾燥す
べき部分と液体希釈剤とに分割した。配合物を次のよう
に分割した： 凍結乾燥したケーク　　液体希釈剤 ＥＧＦ　　　　　　　　　ＮａＣ１／張度剤マンニトー
ル／増量剤　防腐剤 緩衝液（任意）　　　緩衝液 粘度を増加するための ポリマー 凍結乾燥すべきケークの成分を２ｍｌの無菌の見ず中に
溶解した。利用するヒトＥＧＦを組み換え技術（Ｃｉｒ
ｏｎＣｏｒｐ、；Ｅｍｅｒｙｖｉ＋　１　ｅ、Ｃａ）ａ
この溶液の２ｍｌの部分を５ｍｌの血清バイアル中に入
れた。部分的に充填したバイアルを、凍結乾燥した室内
のトレー上に配置し、そして凍結した。次の凍結乾燥サ
イクルを使用して、この実施例にきさいする試料を処理
した（温度は貯蔵温度であり、生成物の温度ではない）
。

１．１気圧において一５５°Ｃで１時間。

２．１気圧において一２５°Ｃで１４時間。

３、完全な真空下で一５５℃で０．５時間。室内の圧力
を監視するゲージは、この期間の間２゜マイクロメート
ルＨｇを読んだ。

４、貯蔵温度は、２２℃に上昇し、そして完全な真空下
で６５時間保持した。生成物の温度は１２時間にわたっ
て貯蔵温度に上昇した。室を監視するゲージは、最初に
６０マイクロメートルＨｇを読み、氷が完全に昇華する
につれて、２０マイクロメートルＨｇに低下した。試料
２０６５−２９Ａ、ＢおよびＣをこの時間に取り出した
。

５、実施例２０６５−２９ＢＸは、３７℃で２０マＨｇ
で４時間さらに処理した。この工程の終わりにおいて、
残りの試料を取り出した。

いくつかのケーク物質の実施例を調製し、そしてそれら
の安定性を３７°Ｃにおいて試験した。これらの配合物
のデータおよび組成を表１に記載する。これらの生成物
の液相は、再構成後配合物の安定性を増加するセルロー
ス誘導体を含有するであろう。安定性のデータは１０マ
イクログラム／ｍ＋の希釈物に基づく。

嚢−」。

凍結乾燥したケークの組成および安定性、３７°Ｃ乾燥
日数 配合物　　組　成　　　　刈−則！　用虹　世２０６５
−２９Ａ　　ＥＧＦ５０μｇ　　　　　９．４８．９５
．４　１１．９１０．６マンニト一ル５０ｍｇ ２０６５−２９Ｂ　　ＥＧＦ５０μｇ　　　　１０．３
６．８４．２　９．５　６．５マンニト一ル５０ｍｇ クエン酸ナトリウム８．１ｍｇ クエン酸１．５ｍｇ ２０６５−２９ＢＸ上ノ２９Ｂと同一；　　１１．２　
　８．０　３．５　１０．４９．３ より長い乾燥 サイクル ２０６５−２９ＣＥＧＦ　５ｈｇ　　　　　７．７９．
２４．６　１１．２　　測定マンニトール５０ｍｇ　　
　　　　　　　　せずクエン酸ナトリウム１６−３ｍｇ クエン酸３．０ｍｇ ■　第７０日に得られたデータは、受容体結合アッセイ
に使用した細胞の品質が劣っていたため、低い。

実施例２ ＥＧＦ／マンニトールおよびリン酸塩緩衝液を含有する
凍結乾燥したケークのための配合物を設計した。変化量
のリン酸塩緩衝液を含有する実施例を下に記載する。こ
れらの配合物から誘導したケークは、適当な水性希釈剤
で再構成することができ、張度剤および／または粘度増
加のためのポリマーおよび防腐剤を含有することができ
る。このような希釈剤は局所的使用のために適当な効率
よい溶液を生ずるであろう。あるいは、ケークは実施例
３および４におけるように、ポリマーを含有する試料で
希釈してゲル調製物を形成することができる。

表２ ＥＧＦ　　　　、　５０．０ｇｇ ＥＧＦ　　　　　５０．０ｇｇ ＥＧＦ　　　　　５０．０ｇｇ ＥＧＦ　　　　　５０．０ｇｇ ＥＧＦ　　　　　５０．０ｇｇ 表２に記載する配合物は、無菌の水の２ｍｌの部分ちゆ
うに溶解し、そして５ｍｌのバイアル中に充填した。バ
イアルをトレー上に配置し、そして凍結乾燥室に入れた
。この実施例にきさいする試料を処理するために使用し
た凍結乾燥サイクル貯蔵温度は、次のとおりである。

１．１気圧において一４０℃で３時間。

２．１気圧において一２５℃で１４時間。

３、完全な真空下に一４０°Ｃで０．５時間。室の圧力 ゲージは２０マイクロメートルＨｇを読んだ。

４、貯蔵温度は、一般に、２０’Ｏに上昇し、そして完
全な真空下に６４時間維持した。室の圧力を監視するゲ
ージは６０マイクロメートルＨｇを読み、試料中の氷が
完全に昇華するにつれて、２０マイクロメートルＨｇに
徐々に低下した。

５、貯蔵温度は完全な真空下に３７℃に増加した。室の
圧力は２０マイクロメートルＨｇと監視された。試料は
２０°Ｃにおいて６４時間を越えた後５．８および２４
時間に取り出して、３７°Ｃ似おいて増加した時間の生
成物の乾燥度へのんしょうげきを決定した。

６、各試料を湿分について分析した。存在する湿気の値
を表３に記載する。

嚢二一１ ２０６５−１０２ＡＩ　　　１．６　　　　　１．５　
　　　　　１．１２０６５−１０２Ｂ１　　１．５　　
　　１．４　　　　　　１．２２０６５−１０２ＣＩ　
　　１．６　　　　　１．６　　　　　　１．３２０６
５−１０２　ＤＩ　　１．６　　　測定せず　測定せず
２０６５−１０２Ｅｌ　　Ｏ，５０，４０，５実施例３ ヒアルロン酸ゲルを使用して、実施例２の生成物を再構
成して、ＥＧＦ／ヒアルロン酸誘導系を形成した。この
実施例において、２０６５−１゜２Ａｌのバイアルをヒ
アルロン酸ゲルで再構成した。ゲルは０．９％の塩類溶
液中に１％のヒアルロン酸（ｒＡｍｖ　ｉ　ｓ　ｃＲ；
Ｗｏ　ｂ　ｕ　ｒ　ｎ、　ＭＡ）。凍結乾燥したケーク
はゲルと接触して溶解し始めた。完全な溶解は、バイア
ルを穏やかに倒立させて内容物を約１分間混合すること
によって達成した。５０マイクログラムのＥＧＦ％　、
９．０ｍｇのＮａＨ２ＰＯ，’Ｈｚ０，２７．４ｍｇの
ＮａＨ２ＰＯ，−７ＨｘＱ、４５ｍｇのＮａＣｌ、５０
ｍｇのマンニトールおよび４．９ｇの無菌水を含有する
均一なゲルの５　ｍ　ｌが得られた。

実施例４ 実施例２の生成物を使用し、そして水性Ｐｌｕｒｏｎｉ
ｃＲ溶液出再構成することによって、熱ゲル化（ｔｈｅ
ｒｍｏｇｅｌｌｉｎｇ）系を調製した。この実施例にお
いて、２０６５−１０２Ａ１のバイアルを２０％のＰＩ
ｕｒｏｎｉｃＲＦ１２０溶液で再構成した。この溶液は
、冷却するとき、低い粘度であるが、２０〜３０°Ｃで
ゲル化する。このような配合物は、創傷の表面と接触す
るとき、ゲル化する液体として作ることができる。

成分を一緒にするために、５　ｍ　ｌのＰｌｕｒｏｎｉ
ｃＲ溶液を４℃で冷蔵庫内に貯蔵することによって、液
化した。液化した部分を注射器を使用してバイアルに添
加した。ケークは急速に溶解し、そして穏やかに倒立す
ると、１分以内に完全に溶解した。５０マイクログラム
のＥＧＦ、　、９．０＋ｍｇのＮａＨ２ＰＯ，・Ｈ，Ｏ
ｓ　２７．４ｍｇのＮａＨｘＰ　Ｏ４・７　Ｈ２０，５
０ｍｇのＮａＣ１，５０ｍｇのマンニトール、９０　Ｑ
ｍｇのＰｌｕｒｏｎｉｃ　　Ｆ１２７および４．１ｇの
無菌水を含有する溶液の５　ｍ　ｌが得られた。

実施例５ 好ましい方法において、凍結乾燥したＥＧＦ／マンニト
ールを３０ｍ１の血清バイアル中で調製した。潅流のた
めの無菌水（５０ｍｇ／ｍ＋）中のマンニトール（ＵＳ
Ｐ）の溶液を２４ｍｇのＥＧＦと混合した。試料の処方
は次のとおりであった２５ｇのマンニトール、２４ｍｇ
のＥＧＦおよび１００ｍ１の水。この処方物の５ｍの部
分のアリコートを３０ｍ１の血清バイアル中に入れた。

凍結乾燥の栓をバイアルの首の中に半分はどに挿入した
。バイアルを一４０°Ｃ以下に凍結した。完全な真空を
、室の圧力が１００マイクロメートルＨｇ以下になるま
で、加熱しないで加えた。次いで、加熱棚の温度を３７
°Ｃにセットした。完全な真空を維持し、そして生成物
の温度が最終温度に少なくとも４時間安定化するまで、
バイアルを加熱した。この最終温度は３２°Ｃであった
。３０℃以上であることが好ましい。サイクルの時間は
ほぼ２４時間であった。バイアルに窒素ガスの雰囲気の
下に栓をした。

実施例６ ＥＧＦを含有するゲル化した系は凍結乾燥し、そして水
性希釈剤で再構成した。５０マイクログラムのＥＧＦお
よび５％のマンニトールを含有する水中の０．５％のボ
リアクル酸（ＣａｒｂｏｐＯ］Ｒ９４０、Ｂ、Ｆ、Ｇｏ
ｏｄｒ　１ｃｈ）から構成され、ＮａＣ１でｐＨ７，０
に調節したゲルを調製し、そして実施例１におけるサイ
クルを使用して凍結乾燥した。血清バイアルに処理前に
このゲルの２ｍｌの部分を充填した。生ずる乾燥したケ
ークを２　ｍ　ｌの水と一緒にしたとき、１０分以内に
透明な均質ゲルが形成した。このゲルは、凍結乾燥しな
かったゲルと眼で見て区別できなかった。

本発明をある好ましい実施態様および実施例を参照しな
がら記載した。しかしながら、種々の変更は当業者にと
って明らかであるので、本発明はそれらに限定されず、
特許請求の範囲によってのみ限定される。

実施例７ この実施例において、ヒドロキシプロピルメチルセルロ
ース（ＭｅｔｈｏｃｅｌＲＥ４Ｍ　　ｐｒｅｍｉｕｍｓ
Ｄｏｗ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ）を水中で調製した。２０
　ｍ　ｌのアリコートを取り出し、そして２００マイク
ログラムのＥＧＦ　（水中１ｍｇ／ｍｌ）を添加して、
ＩＯマイクログラム／ｍ１の最終濃度を得た。ゲル混合
物のｌｏｇの部分を、平らな底のガラスの皿（はぼ１ｃ
ｍの深さ）に入れた。充填した皿を一４５°Ｃに凍結し
、モして２２°Ｃの最高最終温度に凍結乾燥した。柔軟
なスポンジ状パッドが得られた。このパッドは、反応速
度の研究において、３．３時間でそのＥＧＦの５０％を
解放した。

本発明の主な態様および特徴は、次の通りであ＝４０− る。

１１ヒトミトゲンまたは脈管形成活性および水溶性また
は水膨潤性を有するポリペプチド生長因子、および組成
物の再構成した溶液に粘度を付与できる製薬学的に許容
されうるポリマーを含んでなる安定な凍結乾燥した組成
物。

２、前記生長因子は表皮生長因子またはその生物学的に
活性な断片である上記第１項記載の組成物。

３、前記生長因子は、形質転換生長因子−アルファ、形
質転換生長因子−ベータ、酸性線維芽生長因子、塩基性
線維芽生長因子、アンギオゲニン、小板誘導生長因子、
神経生長因子、インスリン様生長因子、それらの生物学
的に活性な断片、またはそれらの混合物から成る群より
選択される上記第１項記載の組成物。

４、前記ポリマーは、多糖類、ビニルポリマー、蛋白質
、およびアクリルポリマーから成る群より選択される上
記第１項記載の組成物。

５、前記ビニルポリマーは、ポリビニルアルコ−ルまた
はポリビニルピロリドンである上記第１項記載の組成物
。

６、前記多糖類は、メチルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロー
スから成る群より選択されるセルロース誘導体である上
記第１項記載の組成物。

７、凍結乾燥のための水溶性増量剤をさらに含む上記第
１項記載の組成物。

８、生長因子の重量対増量剤の重量の比は約０゜０００
０１〜約０．５である上記第７項記載の組成物。

９、前記増量剤は、単糖類、二糖類、多糖類、アミノ酸
、短鎖（Ｃ３−Ｃａ）　トリカルボン酸および無機塩類
から成る群より選択される上記第７項記載の組成物。

ｌＯ１前記組成物の水分は約５．０重量％より少ない上
記第１項記載の組成物。

１１、構成成分： ａ）ヒトミトゲンまたは脈管形成活性を有する凍結乾燥
したポリペプチド生長因子を含有する第１バイアル、お
よび ｂ）緩衝化した水性希釈剤を含有する第２バイアル、 からなる生長因子の溶液を調製するためのキット。

１２、前記生長因子は表皮生長因子またはその生物学的
に活性な断片である上記第１１項記載のキット。

１３、前記生長因子は、形質転換生長因子−アルファ、
形質転換生長因子−ベータ、酸性線維芽生長因子、塩基
性線維芽生長因子、アンギオゲニン、小板誘導生長因子
、神経生長因子、インスリン様生長因子、それらの生物
学的に活性な断片、またはそれらの混合物から成る群よ
り選択される上記第１１項記載のキット。

１４、第１バイアルは凍結乾燥のための水溶性増量剤を
さらに含む上記第１１項記載のキット。

１５、前記増量剤は、単糖類、二糖類、多糖類、アミノ
酸、短鎖（Ｃ３−Ｃ６））リカルポン酸および無機塩類
から成る群より選択される上記第１４項記載のキット。

１６、生長因子の重量対増量剤の重量の比は約０．００
００１〜約０．５である上記第１４項記載のキット。

１７、前記液状希釈剤は約ｐＨ５，０〜約ｐＨ８，０に
緩衝化されている上記第１１項記載のキット。

１８、前記液状希釈剤は水溶性の製薬学的に許容されう
る粘度増大ポリマーを含有する上記第１Ｉ項記載のキッ
ト。

１９、前記ポリマーは、多糖類、ビニルポリマー、蛋白
質、プルロニック、ポリエチレングリコールおよびアク
リルポリマーから成る群より選択される上記第１１項記
載のキット。

２０、第１バイアルは前記組成物の再構成した溶液に粘
度を付与できる製薬学的に許容されうる凍結乾燥したポ
リマーを含有する上記第１１項記載のキット。

２１、前記液状希釈剤は防腐剤をさらに含有する上記第
１１項記載のキット。

２２、前記防腐剤はチメロサル、ソルビン酸、クロロブ
タノール、イミダゾリニル尿素およびパラベンから成る
群より選択される上記第２１項記載のキット。

２３、前記希釈剤はリン酸塩緩衝剤、クエン酸塩緩衝剤
、ホウ酸塩緩衝剤および酢酸塩緩衝剤から成る群より選
択される緩衝剤を含有する上記第１１項記載のキット。

２４、工程： ａ）上記第１項記載の凍結乾燥した組成物を調製し、そ
して ｂ）前記凍結乾燥した組成物を水性希釈剤と混合する、 からなろ水性生長因子溶液を調製する方法。

２５、ミトゲンまたは脈管形成活性を有する凍結乾燥し
たヒトポリペプチド生長因子の創傷治癒有効量を創傷に
直接接触させることからなる創傷を治癒する速度を増加
する方法。

２６、前記生長因子は表皮生長因子またはその生物学的
に活性な断片である上記第２５項記載の方法。

２７、前記バイアルは凍結乾燥圧力に耐えることができ
、そして熱を前記バイアルの外側から前記バイアルの内
側に伝達することができる上記第１１項記載のキット。

２８、前記バイアルは滅菌的に充填および密閉される上
記第１１項記載のキット。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒトミトゲンまたは脈管形成活性および水溶性また
   は水膨潤性を有するポリペプチド生長因子、および組成
   物の再構成した溶液に粘度を付与できる製薬学的に許容
   されうるポリマーを含んでなることを特徴とする安定な
   凍結乾燥した組成物。 ２、構成成分： ａ）ヒトミトゲンまたは脈管形成活性を有する凍結乾燥
   したポリペプチド生長因子を含有する第１バイアル、お
   よび ｂ）緩衝化した水性希釈剤を含有する第２バイアル、 からなることを特徴とする生長因子の溶液を調製するた
   めのキット。 ３、工程： ａ）特許請求の範囲第１項記載の凍結乾燥した組成物を
   調製し、そして ｂ）前記凍結乾燥した組成物を水性希釈剤と混合する、 からなることを特徴とする水性生長因子溶液を調製する
   方法。 ４、ミトゲンまたは脈管形成活性を有する凍結乾燥した
   ヒトポリペプチド生長因子の創傷治癒有効量を創傷に直
   接接触させることからなることを特徴とする創傷を治癒
   する速度を増加する方法。