JPH01156666A - オカダ酸群の測定試薬及び測定法 - Google Patents
オカダ酸群の測定試薬及び測定法Info
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- JPH01156666A JPH01156666A JP31538087A JP31538087A JPH01156666A JP H01156666 A JPH01156666 A JP H01156666A JP 31538087 A JP31538087 A JP 31538087A JP 31538087 A JP31538087 A JP 31538087A JP H01156666 A JPH01156666 A JP H01156666A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［発明の属する技術分野］
本発明は、オカダ酸群の測定試薬及び測定法に関するも
のである。ざらに詳しくは、オカダ酸群に対する、酵素
で標識されたモノクローナル抗体を含有するオカダ酸群
の測°定試薬及びそれを用いる測定法に関する。
のである。ざらに詳しくは、オカダ酸群に対する、酵素
で標識されたモノクローナル抗体を含有するオカダ酸群
の測°定試薬及びそれを用いる測定法に関する。
［従来の技術］
ホタテガイ、ムラサキガイ、イガイ、アサリ、コタマガ
イなどの貝類で見出される下痢性置溝としては、オカダ
酸群、ペクテトキシン詳、イエソトキシンなどが知られ
ている。
イなどの貝類で見出される下痢性置溝としては、オカダ
酸群、ペクテトキシン詳、イエソトキシンなどが知られ
ている。
これらの下痢性置溝による中毒発生例としては、多数の
例があるが、中でも１９７６年の岩手系、１９７７年の
神奈川系・宮城県および１９７８年の茨城県・福島県で
発生した事件が有名である。
例があるが、中でも１９７６年の岩手系、１９７７年の
神奈川系・宮城県および１９７８年の茨城県・福島県で
発生した事件が有名である。
これらの事件では、−度に数十人から数百人の食中毒患
者が発生した。
者が発生した。
そこで、食中毒を起こす恐れがある量の下痢性置溝が前
記のような貝類の中に含まれているか否かの検査が必要
とされるようになった。
記のような貝類の中に含まれているか否かの検査が必要
とされるようになった。
このような問題点を解決する方法としては、下痢性置溝
（例えば、オカダ酸群、ペクテトキシン群および／また
はイエソトキシン）に対して非常に高い特異的な反応性
を示すモノクローナル抗体を試薬として用いた免疫学的
測定方法が優れた方法であると考えられているが、これ
までに、オカダ酸群に対するモノクローナル抗体からな
るオカダ酸群の測定試薬およびその試薬を用いたオカダ
酸群の測定方法に関する報告は認められていない。
（例えば、オカダ酸群、ペクテトキシン群および／また
はイエソトキシン）に対して非常に高い特異的な反応性
を示すモノクローナル抗体を試薬として用いた免疫学的
測定方法が優れた方法であると考えられているが、これ
までに、オカダ酸群に対するモノクローナル抗体からな
るオカダ酸群の測定試薬およびその試薬を用いたオカダ
酸群の測定方法に関する報告は認められていない。
［発明が解決すべき問題点］
本発明の目的は、下痢性置溝であるオカダ酸群に対して
非常に高い特異的な反応性を示すモノクローナル抗体か
らなるオカダ酸群の測定試薬およびその試薬を用いたオ
カダ酸群の測定方法を提供することである。
非常に高い特異的な反応性を示すモノクローナル抗体か
らなるオカダ酸群の測定試薬およびその試薬を用いたオ
カダ酸群の測定方法を提供することである。
［問題点を解決するための手段］
本発明者らは、前記の問題点を解決するために鋭意研究
した結果、オカダ酸群に対して非常に高い特異的な反応
性を示すモノクローナル抗体からなるオカダ酸群の測定
試薬を用いることによってオカダ酸群を容易に、かつ高
感度に測定できることを見出し、本発明を完成するに至
った。
した結果、オカダ酸群に対して非常に高い特異的な反応
性を示すモノクローナル抗体からなるオカダ酸群の測定
試薬を用いることによってオカダ酸群を容易に、かつ高
感度に測定できることを見出し、本発明を完成するに至
った。
即ち、本発明は、オカダ酸群に対する、酵素で標識され
たモノクローナル抗体を含有するオカダ酸群の測定試薬
に関するものである。
たモノクローナル抗体を含有するオカダ酸群の測定試薬
に関するものである。
また、本発明は、オカダ酸群に対する、酵素で標識され
たモノクローナル抗体を用いて、オカダ酸群を競争的反
応条件下で測定することを特徴とするオカダ酸群の測定
法に関するものである。
たモノクローナル抗体を用いて、オカダ酸群を競争的反
応条件下で測定することを特徴とするオカダ酸群の測定
法に関するものである。
本発明において用いられるモノクローナル抗体としては
、特願昭６２−２５３７８２号に示されたハイプリドー
マ株である０Ａ−１株、０Ａ−２株および０Ａ−３株が
産生じた抗体を少なくとも１種以上含む）ものを挙げる
ことができ、それを標識する酵素としては、ペルオキシ
ダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダ
ーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼ、乳酸オキ
シダーゼ、アルコールオキシダーゼおよびモノアミンオ
キシダーゼから選ばれた一以上の酸素が好ましく採用さ
れる。
、特願昭６２−２５３７８２号に示されたハイプリドー
マ株である０Ａ−１株、０Ａ−２株および０Ａ−３株が
産生じた抗体を少なくとも１種以上含む）ものを挙げる
ことができ、それを標識する酵素としては、ペルオキシ
ダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダ
ーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼ、乳酸オキ
シダーゼ、アルコールオキシダーゼおよびモノアミンオ
キシダーゼから選ばれた一以上の酸素が好ましく採用さ
れる。
本発明によれば、酵素で標識されたモノクローナル抗体
を含むオカダ菌群測定試薬を用いて、オカダ酸群（オカ
ダ酸、ディノフィシストキシン−１、デイノフィシスト
キシンニ３など）を競争的反応条件下で迅速且つ高感度
で測定することができる。
を含むオカダ菌群測定試薬を用いて、オカダ酸群（オカ
ダ酸、ディノフィシストキシン−１、デイノフィシスト
キシンニ３など）を競争的反応条件下で迅速且つ高感度
で測定することができる。
本発明のオカダ酸群の測定法は、例えば９６ウエルのイ
ムノプレートなどの固相支持体ヘオカダ酸詳を固定化し
、本発明の上記オカダ菌群測定用試薬と試料とを一緒に
添加し、未反応物を除去後、基質溶液（この時の抗体標
識に用いた酵素に対応する基質を使用）を添加し、次い
で反応呈色液の吸光度を測定するという測定操作手順で
行なうことができる。この操作手順のうちのオカダ菌群
測定試薬と試料の添加段階で、支持体固定化オカダ酸群
（オカダ菌群測定用抗原）と試料中オカダ酸群に対する
オカダ菌群測定試薬の競争的反応が起こることによって
、その試料中のオカダ震詳但を迅速かつ高感度に測定で
きる。
ムノプレートなどの固相支持体ヘオカダ酸詳を固定化し
、本発明の上記オカダ菌群測定用試薬と試料とを一緒に
添加し、未反応物を除去後、基質溶液（この時の抗体標
識に用いた酵素に対応する基質を使用）を添加し、次い
で反応呈色液の吸光度を測定するという測定操作手順で
行なうことができる。この操作手順のうちのオカダ菌群
測定試薬と試料の添加段階で、支持体固定化オカダ酸群
（オカダ菌群測定用抗原）と試料中オカダ酸群に対する
オカダ菌群測定試薬の競争的反応が起こることによって
、その試料中のオカダ震詳但を迅速かつ高感度に測定で
きる。
オカダ酸群の固定化には、イムノプレートの他に例えば
ポリエチレンビーズ、ポリスチレンビーズ、ＡＢＳ樹脂
ビーズ等を使用することができる。
ポリエチレンビーズ、ポリスチレンビーズ、ＡＢＳ樹脂
ビーズ等を使用することができる。
以下に、オカダ菌群測定用抗原の作成、抗体の生産およ
び精製を参考例として示す。
び精製を参考例として示す。
参考例１ オカダ菌群測定用抗原の作成９５％のジオキ
サン１１Ｉｄｌに、オカダ酸群の１種で必るオカダ酸（
以下、ＯＡと略す）を０．５ｍｙ溶解し、これに１．５
１ｎｇのＮ−ヒドロキシコハク酸イミドおよび２．５ｍ
ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミンプロピル）
カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＰＣ）を添加し、空温下３
時間攪拌し、０Ａ−Ｎ−コハク酸イミドエステルを生成
させた。
サン１１Ｉｄｌに、オカダ酸群の１種で必るオカダ酸（
以下、ＯＡと略す）を０．５ｍｙ溶解し、これに１．５
１ｎｇのＮ−ヒドロキシコハク酸イミドおよび２．５ｍ
ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミンプロピル）
カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＰＣ）を添加し、空温下３
時間攪拌し、０Ａ−Ｎ−コハク酸イミドエステルを生成
させた。
この反応液を２０ｄの水に加え、さらに、２０．ｄの酢
駿エチルを加えて攪拌し、酢酸エチル層を得、この層を
水洗後、溶媒を減圧留去して０Ａ−Ｎ−コハク鼠イミド
エステルを精製分離した。そして、この全量を０．０５
Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ７゜３）２．５ｄに溶解し、２
．５戒のピリジンと１０ｍｇの牛血清アミン（ＢＳＡ）
を添加し、４℃下２４時間攪拌し、この溶液を純水に対
して透析し、非透析画分を凍結乾燥して、オカダ酸とＢ
ＳＡとの結合物（以下、０Ａ−ＢＳＡと略す）を６．０
ｍｇ得た。
駿エチルを加えて攪拌し、酢酸エチル層を得、この層を
水洗後、溶媒を減圧留去して０Ａ−Ｎ−コハク鼠イミド
エステルを精製分離した。そして、この全量を０．０５
Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ７゜３）２．５ｄに溶解し、２
．５戒のピリジンと１０ｍｇの牛血清アミン（ＢＳＡ）
を添加し、４℃下２４時間攪拌し、この溶液を純水に対
して透析し、非透析画分を凍結乾燥して、オカダ酸とＢ
ＳＡとの結合物（以下、０Ａ−ＢＳＡと略す）を６．０
ｍｇ得た。
この分析用抗原は、酵素標識抗体を使用する場合に用い
た。
た。
参考例２ 抗体の生産と精製
特願昭６２−２５３７８２号に記載の方法で作成した本
発明者らが所有するオカダ酸群に対して特異性が高いモ
ノクローナル抗体を生産し、精製した。
発明者らが所有するオカダ酸群に対して特異性が高いモ
ノクローナル抗体を生産し、精製した。
モノクローナル抗体の生産は、リン１１１液で浮遊させ
た１０７個の株細胞をＢＡＬＢ／Ｃマウス＜（Ｉｆ、８
適齢、２週間前にプリスタンを０．５ｄ腹腔内投与）の
腹腔内に投与して行なった。マウス体重の顕著な増加は
１週目頃から認められ、１〜３週目に適宜腹水を取り出
した。こうして得られたモノクローナル抗体価は、１０
６〜１０８であった。
た１０７個の株細胞をＢＡＬＢ／Ｃマウス＜（Ｉｆ、８
適齢、２週間前にプリスタンを０．５ｄ腹腔内投与）の
腹腔内に投与して行なった。マウス体重の顕著な増加は
１週目頃から認められ、１〜３週目に適宜腹水を取り出
した。こうして得られたモノクローナル抗体価は、１０
６〜１０８であった。
得られた腹水からのモノクローナル抗体の精製は、次の
ようにして行なった。まず、腹水をトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７，４＞で透析し、同緩衝液で平衡化したＤＥＡ
Ｅ−セルロースカラムに流した。素通り画分を５０％飽
和硫安で塩析し、得られた沈澱をリン酸緩衝液（ｐＨ７
，４＞に溶解し、透析した。このようにして得られオカ
ダ酸群に対するモノクローナル抗体の純度は、ＳＤＳポ
リアクリルアミドを用いたスラブゲル電気泳動で、いず
れの抗体も高純度であることがわかった。
ようにして行なった。まず、腹水をトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７，４＞で透析し、同緩衝液で平衡化したＤＥＡ
Ｅ−セルロースカラムに流した。素通り画分を５０％飽
和硫安で塩析し、得られた沈澱をリン酸緩衝液（ｐＨ７
，４＞に溶解し、透析した。このようにして得られオカ
ダ酸群に対するモノクローナル抗体の純度は、ＳＤＳポ
リアクリルアミドを用いたスラブゲル電気泳動で、いず
れの抗体も高純度であることがわかった。
以上のようにして得たオカダ酸群に対する精製モノクロ
ーナル抗体を酵素標識して作成したオカダ酸酢測定試薬
を用いたオカダ酸酢測定法（ＥＬＩＳＡ法）によって、
高純度でかつ迅速なオカダ酸群の測定が可能となった。
ーナル抗体を酵素標識して作成したオカダ酸酢測定試薬
を用いたオカダ酸酢測定法（ＥＬＩＳＡ法）によって、
高純度でかつ迅速なオカダ酸群の測定が可能となった。
以下、本発明の詳細な説明する。
（ｉ）オカダ酸群測定試薬の作成
抗体への酵素標識は、公知の方法、例えばグルタルアル
デヒドを用いた１段階法［イムノケミストリイ（Ｉｍｍ
ｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒＶ ） 、６．４３（１９６９
）］または２段階法［イムノケミストリイ（Ｉｍｍｕｎ
ｏｃｈｅｍｉ ５ｔｒｙ）、８．１１７５ （１９７１
）］過沃素酸酸化法［メソッド・イン・エンジモロジイ
（）ｆｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ（ｌｙ７ｍｏｌｏｇｙ
＞ 、３７．１３３（１９７５）］やマレイミド法［ジ
ャーナル・オブ・ザ・バイオケミストリイ（ＪＯｔＪｒ
ｎａｌ ｏｆ ｔｈｅＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＞ 、
７８．２３５ （１，７５） ］等で行うことができる
が、後２者の方法が好ましい。
デヒドを用いた１段階法［イムノケミストリイ（Ｉｍｍ
ｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒＶ ） 、６．４３（１９６９
）］または２段階法［イムノケミストリイ（Ｉｍｍｕｎ
ｏｃｈｅｍｉ ５ｔｒｙ）、８．１１７５ （１９７１
）］過沃素酸酸化法［メソッド・イン・エンジモロジイ
（）ｆｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ（ｌｙ７ｍｏｌｏｇｙ
＞ 、３７．１３３（１９７５）］やマレイミド法［ジ
ャーナル・オブ・ザ・バイオケミストリイ（ＪＯｔＪｒ
ｎａｌ ｏｆ ｔｈｅＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＞ 、
７８．２３５ （１，７５） ］等で行うことができる
が、後２者の方法が好ましい。
酵素と抗体を結合後、そのままオカダ酸群の測定に用い
ることもできるが、ざらに感度を上げるためには５ｅｐ
ｈａｄｅｘ、５ｅｐｈａｃｒｙｌなどを用いたゲ／１４
過で精製して得た酵素標識抗体をオカダ酸酢測定試薬と
して用いた法が好ましい。酵素標識抗体画分は、リン酸
緩衝液（ｐＩ−１７，４＞またはトリス−塩該緩衝液（
ＤＨ７，４）などで透析し、゛凍結乾燥または除菌フィ
ルターで濾過してオカダ酸群測定試薬として用いる。
ることもできるが、ざらに感度を上げるためには５ｅｐ
ｈａｄｅｘ、５ｅｐｈａｃｒｙｌなどを用いたゲ／１４
過で精製して得た酵素標識抗体をオカダ酸酢測定試薬と
して用いた法が好ましい。酵素標識抗体画分は、リン酸
緩衝液（ｐＩ−１７，４＞またはトリス−塩該緩衝液（
ＤＨ７，４）などで透析し、゛凍結乾燥または除菌フィ
ルターで濾過してオカダ酸群測定試薬として用いる。
（ｉｉ）オカダ酸群の測定
オカダ酸群を測定するには、まずオカダ酸詳−高分子蛋
白質結合物をイムノアッセイ用９６ウエル平底プレート
のようなプレートに静置して固定化する。この抗原処理
ウェルを洗浄し、抗原が結合していないウェルの部分と
オカダ酸群に対する抗体とが非特異的に結合しないよう
ブロッキング処理する。次に、このウェルを洗浄し、試
料（または検量線作成のためには既知量のオカダ酸群を
使用）と（ｉ）に記載のオカダ酸酢測定試薬とを各々同
容量づつ加えて一定時間静置する。このウェルを十分に
洗浄し、オカダ酸詳測定試薬中の抗体の標識に用いた酵
素と対応する基質溶液（酵素反応が起きると呈色する物
質を含む）を加え、一定時間酵素反応させた後に、その
呈色が最大吸光度を示すときの波長で、その反応液の吸
光度を測定する。このようにして既知量のオカダ酸群を
用いた結果から、検量線を作成し、試料中のオカダ竣群
遣を知ることができる。
白質結合物をイムノアッセイ用９６ウエル平底プレート
のようなプレートに静置して固定化する。この抗原処理
ウェルを洗浄し、抗原が結合していないウェルの部分と
オカダ酸群に対する抗体とが非特異的に結合しないよう
ブロッキング処理する。次に、このウェルを洗浄し、試
料（または検量線作成のためには既知量のオカダ酸群を
使用）と（ｉ）に記載のオカダ酸酢測定試薬とを各々同
容量づつ加えて一定時間静置する。このウェルを十分に
洗浄し、オカダ酸詳測定試薬中の抗体の標識に用いた酵
素と対応する基質溶液（酵素反応が起きると呈色する物
質を含む）を加え、一定時間酵素反応させた後に、その
呈色が最大吸光度を示すときの波長で、その反応液の吸
光度を測定する。このようにして既知量のオカダ酸群を
用いた結果から、検量線を作成し、試料中のオカダ竣群
遣を知ることができる。
［実施例］
以下、本発明の実施例を具体的に説明する。
なお、これらの実施例は、本発明を例示するためのもの
で必って、本発明の範囲を限定するものではない。
で必って、本発明の範囲を限定するものではない。
実施例１ オカダ酸群測定試薬の作成
参考例２に記載した精製モノクローナル抗体（特願昭６
２−２５３７８２号に記載された０Ａ−２株が産生じた
モノクローナル抗体である０Ａ−２）を次に示すような
公知の酵素標識方法で標識し、オカダ菌群測定試薬を作
成した。
２−２５３７８２号に記載された０Ａ−２株が産生じた
モノクローナル抗体である０Ａ−２）を次に示すような
公知の酵素標識方法で標識し、オカダ菌群測定試薬を作
成した。
まず、西洋ワサビペルオキシダーゼ７．３２ｍｇを蒸留
水１ｄに溶解し、０．１Ｍ過沃素醒改ナトリウムを２０
０μｇ加えて室温で３０分間静置した。この酵素溶液を
１ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４゜５）を用いて４℃で１晩透
析後、０．２Ｍ炭敢ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，５）１
００μｊを添加してｐＨ９，５に調整した。一方、０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４＞に溶解していた８１ｆ
ｆのモノクローナル抗体（ＯＡ−２＞を０．０１Ｍ炭駿
ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，５＞を用いて４°Ｃで１晩
透析した。このようにして得たベリオキシダーゼ溶液と
モノクローナル抗体溶液を混合し、室温で２時間半静置
した。この反応液に０．４重量％テトラヒドリドホウ［
１００〜２００μｇを加え、４℃で２時間静置した。こ
のようにして得たペルオキシダーゼ標識モノクローナル
抗体は、リン酸緩衝液（ｐＨ７，４＞を用いて４°Ｃで
十分に透析し、そのままあるいは凍結乾燥してオカダ酸
酢測定試薬としてオカダ酸群の測定に用いた。
水１ｄに溶解し、０．１Ｍ過沃素醒改ナトリウムを２０
０μｇ加えて室温で３０分間静置した。この酵素溶液を
１ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４゜５）を用いて４℃で１晩透
析後、０．２Ｍ炭敢ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，５）１
００μｊを添加してｐＨ９，５に調整した。一方、０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４＞に溶解していた８１ｆ
ｆのモノクローナル抗体（ＯＡ−２＞を０．０１Ｍ炭駿
ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，５＞を用いて４°Ｃで１晩
透析した。このようにして得たベリオキシダーゼ溶液と
モノクローナル抗体溶液を混合し、室温で２時間半静置
した。この反応液に０．４重量％テトラヒドリドホウ［
１００〜２００μｇを加え、４℃で２時間静置した。こ
のようにして得たペルオキシダーゼ標識モノクローナル
抗体は、リン酸緩衝液（ｐＨ７，４＞を用いて４°Ｃで
十分に透析し、そのままあるいは凍結乾燥してオカダ酸
酢測定試薬としてオカダ酸群の測定に用いた。
実施例２ ＯＡの標準曲線の作成
０Ａ−ＢＳＡ （オカダ酸とＢＳＡとの結合物、５μ９
／ｍりをイムノアッセイ用９６ウエル平底プレート（Ｎ
ｔＪｎＣ製）を用いて、４℃で１晩静置して固定化した
。次にこのプレートへの抗体の非特異的吸着を防ぐため
に１０％牛血清を含む洗浄液（０，０５％丁ｗｅｅｎ２
０を含む１）Ｈ７，４のリン酸緩衝液）で室温下３０分
間静置した。次に同洗浄液で洗浄後、オカダ菌群測定試
薬を５０μｇと４５％メタノール水溶液で調整した標準
ＯＡ液［（０〜４５Ｐ９＞１５０μＮ］５０！ｉ、Ｑを
各ウェルに同時に加え、室温で５分（Ａ＞または３７℃
、３０分（Ｂ）間装置した。つづいて洗浄後、基質溶液
（０−フェニレンジアミンと町０２の混合溶液）を１０
０μｇづつ分注し、アルミホイルで遮光して室温で３分
（Ａ＞または３７℃、１５分（Ｂ）間装置した。最後に
２Ｎ硫酸を５０μρづつ分注して酵素反応を停止し、マ
イクロプレート光度計を用いて４９２μｍにおけるその
反応停止後の吸光度を測定した。
／ｍりをイムノアッセイ用９６ウエル平底プレート（Ｎ
ｔＪｎＣ製）を用いて、４℃で１晩静置して固定化した
。次にこのプレートへの抗体の非特異的吸着を防ぐため
に１０％牛血清を含む洗浄液（０，０５％丁ｗｅｅｎ２
０を含む１）Ｈ７，４のリン酸緩衝液）で室温下３０分
間静置した。次に同洗浄液で洗浄後、オカダ菌群測定試
薬を５０μｇと４５％メタノール水溶液で調整した標準
ＯＡ液［（０〜４５Ｐ９＞１５０μＮ］５０！ｉ、Ｑを
各ウェルに同時に加え、室温で５分（Ａ＞または３７℃
、３０分（Ｂ）間装置した。つづいて洗浄後、基質溶液
（０−フェニレンジアミンと町０２の混合溶液）を１０
０μｇづつ分注し、アルミホイルで遮光して室温で３分
（Ａ＞または３７℃、１５分（Ｂ）間装置した。最後に
２Ｎ硫酸を５０μρづつ分注して酵素反応を停止し、マ
イクロプレート光度計を用いて４９２μｍにおけるその
反応停止後の吸光度を測定した。
操作（Ａ＞によって測定した結果、および操作（Ｂ）に
よって測定した結果を第１図に示す（ＯＡがＯμｇ／ｒ
Ｉｄｌの吸光度を１００％とした）。操作（Ａ＞、（Ｂ
）のいずれの方法でも、ＯＡｉを数ｐｇオーダーでも測
定できる。
よって測定した結果を第１図に示す（ＯＡがＯμｇ／ｒ
Ｉｄｌの吸光度を１００％とした）。操作（Ａ＞、（Ｂ
）のいずれの方法でも、ＯＡｉを数ｐｇオーダーでも測
定できる。
実施例３ ０Ａの添加回収実験
市販のホタテ貝から中腸腺のみを取り出し、ミキサーで
粉砕後、この５ｇに９０％メタノール水溶液を１２．５
ｍｌ’（２，５倍Ｎ）加え、ざらに、ミキサーで１分間
かけてＯＡを抽出した。
粉砕後、この５ｇに９０％メタノール水溶液を１２．５
ｍｌ’（２，５倍Ｎ）加え、ざらに、ミキサーで１分間
かけてＯＡを抽出した。
この抽出液を東洋口紙ｓａｃ １で濾過して１尋られた
濾液を純水で希釈（１：１）した（４５％メタノール水
＠液となる）。これを試料として、実施例２に準じてＯ
Ａの添加回収実験を行った。なお、この実験は、この調
製した試料中におらかじめ既知】のＯＡを添加してその
添加量を測定することによって行なった。その結果、第
１表に示したように、試料中に添加したＯＡ”の計Ｗ１
Ｍと測定直とは殆んど一致した（ＯＡがＯμｇ／Ｉｎｉ
の吸光度を１００％とした）。
濾液を純水で希釈（１：１）した（４５％メタノール水
＠液となる）。これを試料として、実施例２に準じてＯ
Ａの添加回収実験を行った。なお、この実験は、この調
製した試料中におらかじめ既知】のＯＡを添加してその
添加量を測定することによって行なった。その結果、第
１表に示したように、試料中に添加したＯＡ”の計Ｗ１
Ｍと測定直とは殆んど一致した（ＯＡがＯμｇ／Ｉｎｉ
の吸光度を１００％とした）。
第１表
３００ ｊ ３２０ １ＬＯ７’
第１図は、標準溶液を用いて測定したＯＡの検量線を示
す。 ［発明の効果］ 本発明のオカダ酸酢の測定試薬及び測定方法を用いれば
、オカダ酸酢に起因する下痢性置溝による食中毒を簡単
、かつ高感度に予防することが可−能となるものと考え
られる。 特許出願人 宇部興産株式会社 第 １ 図 ＯＡ濃度（ρｇ／ｍｌ） 手続補正書 昭和６３年ユ月：Ｌｂ日
す。 ［発明の効果］ 本発明のオカダ酸酢の測定試薬及び測定方法を用いれば
、オカダ酸酢に起因する下痢性置溝による食中毒を簡単
、かつ高感度に予防することが可−能となるものと考え
られる。 特許出願人 宇部興産株式会社 第 １ 図 ＯＡ濃度（ρｇ／ｍｌ） 手続補正書 昭和６３年ユ月：Ｌｂ日
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、オカダ酸群に対する、酸素で標識されたモノクロナ
ール抗体を含有するオカダ酸群の測定試薬。 ２、上記モノクロナール抗体を標識する酵素がペルオキ
シダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシ
ダーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼ、乳酸オ
キシダーゼ、アルコールオキシダーゼおよびモノアミン
オキシダーゼから選ばれた一以上の酵素である特許請求
の範囲第１項記載のオカダ酸群の測定試薬。 ３、オカダ酸群に対する、酵素で標識されたモノクロナ
ール抗体を用いて、オカダ酸群を競争的反応条件下で測
定することを特徴とするオカダ酸群の測定法。 ４、上記モノクローナル抗体を標識する酵素がペルオキ
シダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシ
ダーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼ、乳酸オ
キシダーゼ、アルコールオキシダーゼおよびモノアミン
オキシダーゼから選ばれた一以上の酵素である特許請求
の範囲第３項記載のオカダ酸群の測定法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31538087A JPH01156666A (ja) | 1987-12-15 | 1987-12-15 | オカダ酸群の測定試薬及び測定法 |
| CA000579225A CA1302920C (en) | 1987-10-09 | 1988-10-05 | Monoclonal antibody to okadaic acids, process for producing the monoclonal antibody, assay reagent for assaying okadaic acids using the monoclonal antibody, and assay method |
| US07/254,686 US5171664A (en) | 1987-10-09 | 1988-10-07 | Monoclonal antibody to okadaic acids, process for producing the monoclonal antibody, assay reagent for assaying okadaic acids using the monoclonal antibody, and assay method |
| EP88309441A EP0311456A3 (en) | 1987-10-09 | 1988-10-10 | Monoclonal antibody to okadaic acids, process for producing the monoclonal antibody, assay reagent for assaying okadaic acids using the monoclonal antibody, and assay method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31538087A JPH01156666A (ja) | 1987-12-15 | 1987-12-15 | オカダ酸群の測定試薬及び測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01156666A true JPH01156666A (ja) | 1989-06-20 |
Family
ID=18064708
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31538087A Pending JPH01156666A (ja) | 1987-10-09 | 1987-12-15 | オカダ酸群の測定試薬及び測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01156666A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993003365A1 (en) * | 1991-08-09 | 1993-02-18 | Iatron Laboratories, Inc. | Immunoassay, monoclonal antibody and hybridoma |
| US5934473A (en) * | 1996-06-12 | 1999-08-10 | International Paper Co. | Method for packaging article and cradle insert |
| CN108845121A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-11-20 | 哈尔滨工业大学（威海） | 一种冈田酸三维金纳米柱阵列免疫电极的制备方法 |
-
1987
- 1987-12-15 JP JP31538087A patent/JPH01156666A/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| J TOXICAL TOXIN REV=1986 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993003365A1 (en) * | 1991-08-09 | 1993-02-18 | Iatron Laboratories, Inc. | Immunoassay, monoclonal antibody and hybridoma |
| US5525476A (en) * | 1991-08-09 | 1996-06-11 | Iatron Laboratories, Inc. | Immunoassay, monoclonal antibody, and hybridoma |
| US5934473A (en) * | 1996-06-12 | 1999-08-10 | International Paper Co. | Method for packaging article and cradle insert |
| CN108845121A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-11-20 | 哈尔滨工业大学（威海） | 一种冈田酸三维金纳米柱阵列免疫电极的制备方法 |
| CN108845121B (zh) * | 2018-06-22 | 2021-11-09 | 哈尔滨工业大学（威海） | 一种冈田酸三维金纳米柱阵列免疫电极的制备方法 |
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