JPH01199576A - α−アミノアジピニルモノアミノ化合物の加水分解性を有するγ−グルタミルトランスペプチダーゼ - Google Patents
α−アミノアジピニルモノアミノ化合物の加水分解性を有するγ−グルタミルトランスペプチダーゼInfo
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
γ−グルタミルトランスペプチダーゼ（以下γ−ＧＴＰ
と略記）は動物組織および微生物のアミノ酸代謝および
グルタチオンサイクルにおいて重要な役割を果たしてい
る（ Ｍｅｔｈ、 ＥｎｚｙｍｏＬ７７：２３７（１９
８１） ）。このものはγ−グルタミル誘導体の形態に
おける種々のアミノ酸の輸送、バチルス中におけるポリ
グルタミン酸の生成およびグルタチオン（γ−グルタミ
ルーシステイニルーグリシン）の分解を担っている。
と略記）は動物組織および微生物のアミノ酸代謝および
グルタチオンサイクルにおいて重要な役割を果たしてい
る（ Ｍｅｔｈ、 ＥｎｚｙｍｏＬ７７：２３７（１９
８１） ）。このものはγ−グルタミル誘導体の形態に
おける種々のアミノ酸の輸送、バチルス中におけるポリ
グルタミン酸の生成およびグルタチオン（γ−グルタミ
ルーシステイニルーグリシン）の分解を担っている。
ｒ −ＧＴＰをアジピニルまたはグルタリル−モノアミ
ノ化合物の加水分解に使用することは既に提案されてい
る（ ＥＰ Ｏ，２７５，９０１）。
ノ化合物の加水分解に使用することは既に提案されてい
る（ ＥＰ Ｏ，２７５，９０１）。
今驚くべきことにｒ−、ＧＴＰが式■ 。
ＨＯＯＣ−ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ−ＮＨ−Ｒ１（Ｉ）
品２１１ （式中、Ｒ１はアミノ酸、ジペプチド、セフェム、セフ
ァムあるいはそれらの誘導体を意味する）を有するα−
アミノアジピニルモノアミノ化合物の加水分解を触媒す
ることが見出された。
品２１１ （式中、Ｒ１はアミノ酸、ジペプチド、セフェム、セフ
ァムあるいはそれらの誘導体を意味する）を有するα−
アミノアジピニルモノアミノ化合物の加水分解を触媒す
ることが見出された。
これまでＣ４−側鎖もＣ６−側鎖もγ−ＧＴＰＯ活性中
心には受容されないと思われていたので、上記のことは
なおさら驚くべきことであった（Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏ
ｌ、 Ｃｈｅｍ、 ４２ ＝ ３７１〜８１ （１９７
８） ）。
心には受容されないと思われていたので、上記のことは
なおさら驚くべきことであった（Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏ
ｌ、 Ｃｈｅｍ、 ４２ ＝ ３７１〜８１ （１９７
８） ）。
それゆえ本発明は
１）下記性質、すなわち
一分子量が４０，０００〜８０．Ｏ’００、−等電点が
ＰＨ４，４〜５．９、 一基質としてのＬ−γ−グルタミルパラニトロアニリド
に対し最適−が６．５〜１０でｐ）＋ ８でのｂが９〜
６６μＭ１そして 一式Ｉ ＨＯＯＣ−ＣＨ−（ＣＨ２）５−Ｃ−ＮＨ−Ｒ１（Ｉ）
糺 １１ （式中、Ｒ１はアミノ酸、ジペプチド、セフェム、セフ
ァムまたはそれらの誘導体を意味する）を有するα−ア
ミノアジピニルモノアミノ化合物の加水分解性、 を有するγ−グルタミルトランスはブチダーゼ。
ＰＨ４，４〜５．９、 一基質としてのＬ−γ−グルタミルパラニトロアニリド
に対し最適−が６．５〜１０でｐ）＋ ８でのｂが９〜
６６μＭ１そして 一式Ｉ ＨＯＯＣ−ＣＨ−（ＣＨ２）５−Ｃ−ＮＨ−Ｒ１（Ｉ）
糺 １１ （式中、Ｒ１はアミノ酸、ジペプチド、セフェム、セフ
ァムまたはそれらの誘導体を意味する）を有するα−ア
ミノアジピニルモノアミノ化合物の加水分解性、 を有するγ−グルタミルトランスはブチダーゼ。
２）シュードモナス、フロテラス、アースロパクターお
よびバチルス属の細菌を前記γ−ＧＴＰが栄養培地中に
蓄積するまで栄養培地中で培養することからなる、前記
１′ｍ記載の性質を有するγ−グルタミルトランスはブ
チダーゼの製法、および ６）式Ｉヲ有スるα−アミノアジピニルモノアミノ化合
物の加水分解への前記１項記載の性質を有するγ−グル
タミルトランスベゾチダーゼの使用、 に関する。
よびバチルス属の細菌を前記γ−ＧＴＰが栄養培地中に
蓄積するまで栄養培地中で培養することからなる、前記
１′ｍ記載の性質を有するγ−グルタミルトランスはブ
チダーゼの製法、および ６）式Ｉヲ有スるα−アミノアジピニルモノアミノ化合
物の加水分解への前記１項記載の性質を有するγ−グル
タミルトランスベゾチダーゼの使用、 に関する。
以下に本発明を特にその好ましい態様に関して詳細に説
明する。
明する。
γ−グルタミルトランスはブチダーゼ（γ−（）ＴＰ
）は前記定義された式Ｉを有するα−アミノアジピニル
モノアミノ化合物の、対応する酸およびモノアミノ化合
物への加水分解を触媒する。基質として７−アミツセフ
アロスボラン酸誘導体を使用するのが好ましい。
）は前記定義された式Ｉを有するα−アミノアジピニル
モノアミノ化合物の、対応する酸およびモノアミノ化合
物への加水分解を触媒する。基質として７−アミツセフ
アロスボラン酸誘導体を使用するのが好ましい。
この酵素は微生物の細胞質および細胞外に存在しそして
分子量４０，０００〜８０，００．０．好ましくは５０
，０００〜７０．Ｄ ００、特に５５，０００〜６５，
０００および等電点ｐ８４．４〜５．９、好ましくは４
．８〜５．５により特徴づけられうる。基質としてのＬ
−γ−グルタミルｐ−二）ロアニリドにとって最適の声
は６５〜１０である。同じ基質に対し本発明によるトラ
ンスペプチダーゼはｐＨ８でｂが９〜６６μＭ１好まし
くは１５〜２０μＭ７．、特に１７．８μＭである。
分子量４０，０００〜８０，００．０．好ましくは５０
，０００〜７０．Ｄ ００、特に５５，０００〜６５，
０００および等電点ｐ８４．４〜５．９、好ましくは４
．８〜５．５により特徴づけられうる。基質としてのＬ
−γ−グルタミルｐ−二）ロアニリドにとって最適の声
は６５〜１０である。同じ基質に対し本発明によるトラ
ンスペプチダーゼはｐＨ８でｂが９〜６６μＭ１好まし
くは１５〜２０μＭ７．、特に１７．８μＭである。
アザセリンまたはヨードアセトアミドゞの存在下で本発
明によるγ−Ｃ）ＴＰは不可逆的に阻害される。鋼、水
銀、およびセリンと硼酸塩との混合物の存在下、ならび
に７−アミツセ７アロスポラン酸の存在下でこの酵素は
可逆的な阻害を示す。
明によるγ−Ｃ）ＴＰは不可逆的に阻害される。鋼、水
銀、およびセリンと硼酸塩との混合物の存在下、ならび
に７−アミツセ７アロスポラン酸の存在下でこの酵素は
可逆的な阻害を示す。
γ−ＧＴＰはヨーロッパ特許出願ＥＰ Ｄ、２７５，９
０１号にも記載されるように微生物を用いて調製される
。この方法では細菌、特にシュードモナス、プロテウス
、アースロパクターおよびバチルス属の細菌をγ−〇Ｔ
Ｐが栄養培地中に蓄積されるまで栄養培地中で培養する
。適当な例をあげれば、シュードモナス０プチダ（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａ） ＡＴＣＣ１７３９
０、シュードモナス・アエルギノザ（Ｐ、 ａｅｒｕｇ
ｉｎｏｓａ） ＮＣＴＣ１０７０１、プロテウス・ブル
ガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ） ＡＴＣ
Ｃ９６３４、アースロパクター・バラフイネウス（Ａｒ
ｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｐａｒａｆｉｎｅｕｓ） ＡＴ
ＣＣ３１９１７ならびにシュードモナス−７ラギ（Ｐ、
ｆｒａｇｉ） ＤＡＭ６８８１およびバチルス・スブ
チリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ） ＩＦＯ
３０２５である。バチルス・スブチリスＩＦＯ５０２５
から得られる酵素が特に好ましい。前記微生物の突然変
異体および変種も適する。
０１号にも記載されるように微生物を用いて調製される
。この方法では細菌、特にシュードモナス、プロテウス
、アースロパクターおよびバチルス属の細菌をγ−〇Ｔ
Ｐが栄養培地中に蓄積されるまで栄養培地中で培養する
。適当な例をあげれば、シュードモナス０プチダ（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａ） ＡＴＣＣ１７３９
０、シュードモナス・アエルギノザ（Ｐ、 ａｅｒｕｇ
ｉｎｏｓａ） ＮＣＴＣ１０７０１、プロテウス・ブル
ガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ） ＡＴＣ
Ｃ９６３４、アースロパクター・バラフイネウス（Ａｒ
ｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｐａｒａｆｉｎｅｕｓ） ＡＴ
ＣＣ３１９１７ならびにシュードモナス−７ラギ（Ｐ、
ｆｒａｇｉ） ＤＡＭ６８８１およびバチルス・スブ
チリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ） ＩＦＯ
３０２５である。バチルス・スブチリスＩＦＯ５０２５
から得られる酵素が特に好ましい。前記微生物の突然変
異体および変種も適する。
微生物は場合によシ空気または酸素を導入しながら例え
ば振盪下あるいは振盪フラスコまたは発酵器中で撹拌下
に個々にあるいは混合培養にて好気的に深部培養される
。発酵は温度約２０〜３７°Ｃ１好ましくは約２５〜６
０°Ｃ１特に２８〜３０℃で実施できる。ｐＨ５〜８．
５好ましくは５．５〜８．０で発酵が行われる。これら
の条件下で培養ブロス中に一般に１〜３日後に酵素がか
なシ蓄積する。γ−ＧＴＰの合成は対数増殖後期に始ま
シそして定常期に最大に達する。細胞質の酵素の生成は
ＨＰＬＣ分析によシ活性を検査することによるかあるい
は測光的に追跡できる。
ば振盪下あるいは振盪フラスコまたは発酵器中で撹拌下
に個々にあるいは混合培養にて好気的に深部培養される
。発酵は温度約２０〜３７°Ｃ１好ましくは約２５〜６
０°Ｃ１特に２８〜３０℃で実施できる。ｐＨ５〜８．
５好ましくは５．５〜８．０で発酵が行われる。これら
の条件下で培養ブロス中に一般に１〜３日後に酵素がか
なシ蓄積する。γ−ＧＴＰの合成は対数増殖後期に始ま
シそして定常期に最大に達する。細胞質の酵素の生成は
ＨＰＬＣ分析によシ活性を検査することによるかあるい
は測光的に追跡できる。
γ−ＧＴＰの生成に使用される栄養溶液は０．２〜５％
、好ましくは０．５〜２％の有機窒素化合物ならびに無
機塩を含有する。有機窒素化合物としては下記のもの、
すなわち、アミノ酸、ペプトン、さらに丙エキス、例え
ばとうもろこし、小麦、豆類、大豆、あるいは木綿植物
の粉砕された種子、アルコール製造の蒸留残留物、肉粉
あるいは酵母エキスが適当である。栄養溶液は無機塩と
して例えばアルカリ金属、アルカリ土類金属、鉄、亜鉛
およびマンガンの塩化物、炭酸塩、硫酸塩、または燐酸
塩を含有でき、アンモニウム塩および硝酸塩も含有でき
る。
、好ましくは０．５〜２％の有機窒素化合物ならびに無
機塩を含有する。有機窒素化合物としては下記のもの、
すなわち、アミノ酸、ペプトン、さらに丙エキス、例え
ばとうもろこし、小麦、豆類、大豆、あるいは木綿植物
の粉砕された種子、アルコール製造の蒸留残留物、肉粉
あるいは酵母エキスが適当である。栄養溶液は無機塩と
して例えばアルカリ金属、アルカリ土類金属、鉄、亜鉛
およびマンガンの塩化物、炭酸塩、硫酸塩、または燐酸
塩を含有でき、アンモニウム塩および硝酸塩も含有でき
る。
同化可能な炭水化物を添加するとバイオマス我輩が高ま
る。炭水化物も同様に前記濃度で添加されうる。好まし
い炭素源として例えばグルコースあるいはスクロースの
ような糖、ならびに麦芽エキスのような炭水化物含有天
然産物が栄養溶液に添加されうる。
る。炭水化物も同様に前記濃度で添加されうる。好まし
い炭素源として例えばグルコースあるいはスクロースの
ような糖、ならびに麦芽エキスのような炭水化物含有天
然産物が栄養溶液に添加されうる。
最適の発酵条件はそれぞれの微生物で異なるが、当業者
にはすでに知られているがあるいは簡単な予備試験によ
勺設定できる。
にはすでに知られているがあるいは簡単な予備試験によ
勺設定できる。
精製は古典的な方法に従いリゾチーム消化、硫酸アンモ
ニウム沈澱、イオン交換クロマトグラフィーおよびゲル
透過クロマトグラフィーによシ行うことができる。酵素
の場合は慣用の方法によシ行うことができる（ Ｃｏｌ
ｏｗｉｃｋ他、Ｍｅｔｈ。
ニウム沈澱、イオン交換クロマトグラフィーおよびゲル
透過クロマトグラフィーによシ行うことができる。酵素
の場合は慣用の方法によシ行うことができる（ Ｃｏｌ
ｏｗｉｃｋ他、Ｍｅｔｈ。
Ｒｎｚｙｍｏｌ、 ＸＬＩＶ ）。
酵素反応には、β−ラクタマーゼ不活化剤例えばクラプ
ラン酸またはチェナマイシンを添加して細胞全体を遊離
または固定化された形態で用いることもできるし、ある
いは同様に担体に結合されていることができる単離され
た酵素を用いることもできる。細胞全体を固定するのに
適する物質の例をあげれば、キトサン、アルギネート、
に−カラゲーニン、ポリアクリルヒドラジドおよび文献
（Ｋ、 Ｖｅｎｋａｔｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ氏の工ｍ
ｍｏｂ、 Ｃｅ１ｌｓ （１９７９）、ＡｃＳＳｙｍｐ
ｏｓｉｕｍ ８ｅｒｉｅｓ。
ラン酸またはチェナマイシンを添加して細胞全体を遊離
または固定化された形態で用いることもできるし、ある
いは同様に担体に結合されていることができる単離され
た酵素を用いることもできる。細胞全体を固定するのに
適する物質の例をあげれば、キトサン、アルギネート、
に−カラゲーニン、ポリアクリルヒドラジドおよび文献
（Ｋ、 Ｖｅｎｋａｔｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ氏の工ｍ
ｍｏｂ、 Ｃｅ１ｌｓ （１９７９）、ＡｃＳＳｙｍｐ
ｏｓｉｕｍ ８ｅｒｉｅｓ。
１０６頁）記載の方法から知られた他の物質である。
加水分解反応は…約６．６〜８および温度約２８〜３８
℃で実施するのが最も適当である。好ましい式Ｉの化合
物はＲ１が基 （式中Ｒ２は水素、ＯＨまたは一〇−Ｃｏ−ＣＨ５であ
る）を意味する化合物である。
℃で実施するのが最も適当である。好ましい式Ｉの化合
物はＲ１が基 （式中Ｒ２は水素、ＯＨまたは一〇−Ｃｏ−ＣＨ５であ
る）を意味する化合物である。
ｒ −ＧＴＰは特にセファロスポリンＣから７−アミノ
セ７アロスポラン酸を得るのに工業的に重要である。し
かしながらこれまでは常にはじめに酵母（Ｔｒｉｇｏｎ
ｏｐｓｉｓ ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）を用いてセファロ
スポリンＣからグルタリル−７−アミノセファロスポラ
ン酸を生成させ、次にこれを第２の反応段階ではじめて
酵素的に加水分解して７−アミノセ７アロスポラン酸を
生成させていた。本発明方法を用いることによシ、セフ
ァロスポリンＣからただ一つの段階で７−アミノセファ
ロスポラン酸を製造することが可能となった。
セ７アロスポラン酸を得るのに工業的に重要である。し
かしながらこれまでは常にはじめに酵母（Ｔｒｉｇｏｎ
ｏｐｓｉｓ ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）を用いてセファロ
スポリンＣからグルタリル−７−アミノセファロスポラ
ン酸を生成させ、次にこれを第２の反応段階ではじめて
酵素的に加水分解して７−アミノセ７アロスポラン酸を
生成させていた。本発明方法を用いることによシ、セフ
ァロスポリンＣからただ一つの段階で７−アミノセファ
ロスポラン酸を製造することが可能となった。
以下の実施例によシ本発明の詳細な説明する。
％表示は別に断わシなければ重量によるものとする。
実施例 １
ｒ −ＧＴＰ産生性微生物菌株を下記組成の斜面寒天上
で維持する。
で維持する。
グルツース １ ％
カゼインペプトン ０．４ ％
肉エキス ０．４ ％
酵母エキス ０．０５％
肝臓エキス ０．０５％
ＮａＣ１０，２５％
ｐＩ（７，２
斜面管を２８°Ｃで２日間インキュベートする。
次に細胞を生理食塩溶液１０ゴで洗い夫シ、そしてこの
懸濁液１ゴを容量６００−の三角フラスコ中の下記組成
の前培養物５０ゴを接種するのに使用する。
懸濁液１ゴを容量６００−の三角フラスコ中の下記組成
の前培養物５０ゴを接種するのに使用する。
はプトン １ ％
麦芽エキス ０５％
ｐＨ７，０
このフラスコを回転振盪器上３０°Ｃで２４時間１９０
ｒｐｍでインキュイードする。この培養物２．５ツを主
培養物５０ゴの接種原として用いる。
ｒｐｍでインキュイードする。この培養物２．５ツを主
培養物５０ゴの接種原として用いる。
工ど」−乞１ユ
はプトン ０．１２ ％
酵母エキス Ｄ、１２ ％
グルコース ０．２５ ％
Ｎａ−ラクテート（６０％）５，６ｍＡＮＨ４（Ｊｌ
Ｏ，１２％に２ＨＰ○４
０．１２％ＫＨ２ＰＯ４０，０３４％ ＭｇＳＯ４Ｘ ７ Ｈ２Ｏ０，０２５％ＮａＣＡ！
０．５ ％ＫＣＪ
Ｏ・５ ％ＣａＣ１２Ｘ ２ Ｈ２Ｏ０，０
０１５％ＭｎＣｌ２×４ Ｈ２Ｏ０，０００７％Ｆｅ（
ＮＨ４）サイトレート ０．０００１５％この培養
物を２８°Ｃおよび振盪頻度１９０ ｒｐｍで２４時間
インキュベーションしそして次に遠心分離することによ
多収穫する。
Ｏ，１２％に２ＨＰ○４
０．１２％ＫＨ２ＰＯ４０，０３４％ ＭｇＳＯ４Ｘ ７ Ｈ２Ｏ０，０２５％ＮａＣＡ！
０．５ ％ＫＣＪ
Ｏ・５ ％ＣａＣ１２Ｘ ２ Ｈ２Ｏ０，０
０１５％ＭｎＣｌ２×４ Ｈ２Ｏ０，０００７％Ｆｅ（
ＮＨ４）サイトレート ０．０００１５％この培養
物を２８°Ｃおよび振盪頻度１９０ ｒｐｍで２４時間
インキュベーションしそして次に遠心分離することによ
多収穫する。
下記の表にいくつかの菌株のγ−ＧＴＰ活性を示す。
菌 株 γ−ＧＴＰ（ボン−培養溶液）
Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓ ＩＦＯ３０２５６０ＩＦＯ３
０１３１５ １／ Ｉ’［ｌ”０３３３５
２５実施例 ２ 実施例１と同様にしてＢ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ ＩＦＯ
３０２５を用いて前培養物を調製する。この培養物５〇
−を５ノ一発酵器中の主培養溶液２１の接種源として用
いる。菌株は６４°Ｃおよび酸素分圧７０％で培養する
。γ−ＧＴＰの形成を測光によシ追跡しそして酵素力価
が最高になったところで培養物を収穫する。所定の条件
下にγ−ＧＴＰの力価は１５０ ｍＵ／−培養液に達す
る。
Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓ ＩＦＯ３０２５６０ＩＦＯ３
０１３１５ １／ Ｉ’［ｌ”０３３３５
２５実施例 ２ 実施例１と同様にしてＢ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ ＩＦＯ
３０２５を用いて前培養物を調製する。この培養物５〇
−を５ノ一発酵器中の主培養溶液２１の接種源として用
いる。菌株は６４°Ｃおよび酸素分圧７０％で培養する
。γ−ＧＴＰの形成を測光によシ追跡しそして酵素力価
が最高になったところで培養物を収穫する。所定の条件
下にγ−ＧＴＰの力価は１５０ ｍＵ／−培養液に達す
る。
実施例 ３
９１の培養溶液を十字流濾過（排除限界３００、ＯＤＤ
ダルトン）によシ培養ｐ液とバイオマスに分離する。か
くして得られた培養Ｆ液は１３５０Ｕのγ−ＧＴＰ
活性を含有する。
ダルトン）によシ培養ｐ液とバイオマスに分離する。か
くして得られた培養Ｆ液は１３５０Ｕのγ−ＧＴＰ
活性を含有する。
７０％飽和となるまで硫酸アンモニウムを添加すること
により酵素を沈澱させそしてこの量の１名。中に再びと
る。声８．０の２０ｍＭ）リスで透析したのち、ＤＥＡ
Ｅセルロースカラム（ＤＥ５２、Ｗｈａｔｍａｎ ）
によシさらに酵素を精製する。
により酵素を沈澱させそしてこの量の１名。中に再びと
る。声８．０の２０ｍＭ）リスで透析したのち、ＤＥＡ
Ｅセルロースカラム（ＤＥ５２、Ｗｈａｔｍａｎ ）
によシさらに酵素を精製する。
活性溶出液を合して濃縮する。かくして得られたγ−Ｇ
ＴＰ製品（γ−ＧＴＰ約２５ Ｕ／−）を反応に用いる
。
ＴＰ製品（γ−ＧＴＰ約２５ Ｕ／−）を反応に用いる
。
実施例 ４
デアセチル−ＣＰＣを調製的に反応させるのに下記混合
物が選択される。
物が選択される。
実施例６におけるようにして調製された酵素濃縮物１０
０μ、Ｊ、およびｐＨ７，３の２０ｍＭ燐酸カリウム緩
衝液中に溶解した４０ｍＭデアセチル−ＣＰＣＩ００μ
ｌを６６°Ｃでインキュベートする。
０μ、Ｊ、およびｐＨ７，３の２０ｍＭ燐酸カリウム緩
衝液中に溶解した４０ｍＭデアセチル−ＣＰＣＩ００μ
ｌを６６°Ｃでインキュベートする。
選択された条件下に１６％までのデアセチルｌ ７−
−７−アミンセフアロスポラン酸が生成する。
実施例 ５
実施例４に記載のインキュベーション条件と同様にして
３％の７−アミツセ７アロスポラン酸がＣＰＣから遊離
される。
３％の７−アミツセ７アロスポラン酸がＣＰＣから遊離
される。
実施例 ６
γ−ＧＴＰ活性の測定
ａ） ＨＰＬＣアッセイ
８０ ｍＭデアセチル−〇ＰＣ’の５０μｌをｐ１′（
５，００２５０ｍＭ燐酸カリウム緩衝液１００〜１４０
μ！ および酵素溶液１０〜５０μｌと混合し、６３°
Ｃでインキュベーションする。１０分後毎に試料２０μ
ｌを採取する。メタノール２０μｌを用いて反応を停止
させる。これを遠心分離しそして水で１：１０に希釈す
る。試、１５Ｉ−１０μｌを７−アミツセフアロスボラ
ン酸の含量に関しＨＰＬＣで検査する。
５，００２５０ｍＭ燐酸カリウム緩衝液１００〜１４０
μ！ および酵素溶液１０〜５０μｌと混合し、６３°
Ｃでインキュベーションする。１０分後毎に試料２０μ
ｌを採取する。メタノール２０μｌを用いて反応を停止
させる。これを遠心分離しそして水で１：１０に希釈す
る。試、１５Ｉ−１０μｌを７−アミツセフアロスボラ
ン酸の含量に関しＨＰＬＣで検査する。
定常相：Ｃ’−１８シリカゲル
移動相：Ｈ２Ｏ中の５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４／ＭｅＯＨ
（８０：２０）＋ａ、ｏａ１５ｇ硫酸テトラブチルアン
モニウムｂ）測光アッセイ Ｌ−ｒ−グルタミル−ｐ−ニトロアニリド（１６６ｐＭ
） ６ＱＤｐｌＸ燐酸カリウム緩衝液（ｐＨ５，７，５
０ｍＭ）３００μノ、および培養溶液１００μノを相互
に混合し、３７℃でインキュベートする。
（８０：２０）＋ａ、ｏａ１５ｇ硫酸テトラブチルアン
モニウムｂ）測光アッセイ Ｌ−ｒ−グルタミル−ｐ−ニトロアニリド（１６６ｐＭ
） ６ＱＤｐｌＸ燐酸カリウム緩衝液（ｐＨ５，７，５
０ｍＭ）３００μノ、および培養溶液１００μノを相互
に混合し、３７℃でインキュベートする。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）下記性質、すなわち −分子量が４０，０００〜８０，０００、 −等電点がｐＨ４．４〜５．９、 −基質としてのＬ−γ−グルタミルパラニトロアニリド
に対し最適ｐＨが６．５〜１０でｐＨ８でのＫｍが９〜
３６μＭ、そして、 −式 I ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＾１はアミノ酸、ジペプチド、セフェム、セ
ファムあるいはそれらの誘導体を 意味する）を有するα−アミノアジピニル モノアミノ化合物の加水分解性 を有するγ−グルタミルトランスペプチダーゼ。 ２）シュードモナス、プロテウス、アースロバクターお
よびバチルス属の細菌を請求項１記載のγ−ＧＴＰが栄
養培地中に蓄積されるまで栄養培地中で培養することか
らなる、請求項１記載のγ−グルタミルトランスペプチ
ダーゼの製法。 ３）バチルスサブチリスＩＦＯ３０２５を培養すること
によりγ−グルタミルトランスペプチダーゼを得ること
からなる請求項２記載の方法。 ４）式 I ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＾１はアミノ酸、ジペプチド、セフェム、セ
ファムまたはそれらの誘導体を意味する）を有するα−
アミノアジピニルモノアミノ化合物の加水分解への請求
項１記載のγ−グルタミルトランスペプチダーゼの使用
。 ５）式 I 〔式中Ｒ＾１は基 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ＾２は水素、ＯＨまたは−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ＿３
である）を意味する〕を有する化合物が加水分解される
ことからなる、請求項４記載の使用。 ６）加水分解がｐＨ６．６〜８．０で行われることから
なる請求項４または５記載の使用。 ７）加水分解が２８〜３８℃で行われることからなる請
求項４〜６のいずれかに記載の使用。
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|---|---|---|---|
| DE3743323.7 | 1987-12-21 | ||
| DE19873743323 DE3743323A1 (de) | 1987-12-21 | 1987-12-21 | Verfahren zur enzymatischen hydrolyse von (alpha)-aminoadipinyl-monoaminoverbindungen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01199576A true JPH01199576A (ja) | 1989-08-10 |
| JP2816167B2 JP2816167B2 (ja) | 1998-10-27 |
Family
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|---|---|---|---|
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| CA (1) | CA1317246C (ja) |
| CZ (1) | CZ283529B6 (ja) |
| DE (2) | DE3743323A1 (ja) |
| DK (1) | DK710588A (ja) |
| ES (1) | ES2058224T3 (ja) |
| HU (1) | HU202917B (ja) |
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| PT (1) | PT89282B (ja) |
| ZA (1) | ZA889442B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04281787A (ja) * | 1991-03-04 | 1992-10-07 | Yoshihiro Asada | γ−グルタミルトランスペプチターゼの製造方法 |
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| JP3036775B2 (ja) * | 1990-02-07 | 2000-04-24 | 協和醗酵工業株式会社 | ｒ―グルタミルトランスペプチダーゼの製造法 |
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-
1987
- 1987-12-21 DE DE19873743323 patent/DE3743323A1/de not_active Withdrawn
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1988
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- 1988-12-20 JP JP63319704A patent/JP2816167B2/ja not_active Expired - Lifetime
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04281787A (ja) * | 1991-03-04 | 1992-10-07 | Yoshihiro Asada | γ−グルタミルトランスペプチターゼの製造方法 |
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| EP0321849A3 (en) | 1990-09-12 |
| KR890010211A (ko) | 1989-08-07 |
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