JPH01199590A - アスコルビン酸−２−リン酸の製造法 - Google Patents
アスコルビン酸−２−リン酸の製造法Info
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- JPH01199590A JPH01199590A JP63070218A JP7021888A JPH01199590A JP H01199590 A JPH01199590 A JP H01199590A JP 63070218 A JP63070218 A JP 63070218A JP 7021888 A JP7021888 A JP 7021888A JP H01199590 A JPH01199590 A JP H01199590A
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はアスコルビン酸−２−リン酸（以下ＡｓＡ２Ｐ
と略記する）の製造方法に関する。アスコルビン酸は医
薬品、食品、化粧品などの分野に広く用いられているが
熱、空気、光などにより分解されやずい。Δ５Ａ２Ｐは
、このようなアスコルビン酸の欠点を取り除いた安定化
誘導体であり、生体中では容易に脱リン酸化されてアス
コルビン酸となりビタミンＣ活性を示す。このような性
質を利用してΔＳ△２Ｐは主として化栢−品工業分野に
おいて用いられる。
と略記する）の製造方法に関する。アスコルビン酸は医
薬品、食品、化粧品などの分野に広く用いられているが
熱、空気、光などにより分解されやずい。Δ５Ａ２Ｐは
、このようなアスコルビン酸の欠点を取り除いた安定化
誘導体であり、生体中では容易に脱リン酸化されてアス
コルビン酸となりビタミンＣ活性を示す。このような性
質を利用してΔＳ△２Ｐは主として化栢−品工業分野に
おいて用いられる。
従来の技術
これまでＡｓＡ２Ｐの製造法としては、化学的な合成法
（特公昭４５−３０３２８号公報、特公昭５２−１８１
９１号公報、特公昭、ｌ１ｌ−１５６０５号公報参照）
および微生物由来の酵素を用いた酵素法による製造法（
日本農芸化学会昭和６２年度大会講演要旨集４Ｌ−Ｉ
Ｐ、６９６）などが知られている。
（特公昭４５−３０３２８号公報、特公昭５２−１８１
９１号公報、特公昭、ｌ１ｌ−１５６０５号公報参照）
および微生物由来の酵素を用いた酵素法による製造法（
日本農芸化学会昭和６２年度大会講演要旨集４Ｌ−Ｉ
Ｐ、６９６）などが知られている。
発明が解決しようとする課題
これらのうちすでに工業的に実用化されているのは化学
的合成法であるが、この方法では、目的とするアスコル
ビン酸の２位のリン酸化物の他に、６位のリン酸化物な
どの異性体の副生が避けられない。このためΔＳ△２Ｐ
を高収率で得ることを目的として保護基の導入、選択的
反応条件の検別、リン酸基供与体の検ｉ＝１などがなさ
れている。しかし操作が煩雑となり、また高純度のΔ５
Ａ２Ｐを得ることができない。また、シトロバクタ−・
フ酵素を用いる酵素法による製造法（日本農芸化学会昭
和６２年度人会講演要旨集４Ｌ−Ｉ Ｐ、６９６）で
も、主としてアスコルビン酸の６位のリン酸化物が生成
し、２位のリン酸化物であるΔ５Ａ２Ｐを得るためには
、酵素反応に先立つ保護基の導入（イソプロピリデン化
など）と反応終了後に保護基を取り除く各操作が必要で
ある。
的合成法であるが、この方法では、目的とするアスコル
ビン酸の２位のリン酸化物の他に、６位のリン酸化物な
どの異性体の副生が避けられない。このためΔＳ△２Ｐ
を高収率で得ることを目的として保護基の導入、選択的
反応条件の検別、リン酸基供与体の検ｉ＝１などがなさ
れている。しかし操作が煩雑となり、また高純度のΔ５
Ａ２Ｐを得ることができない。また、シトロバクタ−・
フ酵素を用いる酵素法による製造法（日本農芸化学会昭
和６２年度人会講演要旨集４Ｌ−Ｉ Ｐ、６９６）で
も、主としてアスコルビン酸の６位のリン酸化物が生成
し、２位のリン酸化物であるΔ５Ａ２Ｐを得るためには
、酵素反応に先立つ保護基の導入（イソプロピリデン化
など）と反応終了後に保護基を取り除く各操作が必要で
ある。
課題を解決するだめの手段
本発明者は、先にＡｓΔ２Ｐを工業的に安価に製造する
方法を開発するために、アスコルビン酸の２位を特異的
にリン酸化する活性を有する微生物を検索し、アスコル
ビン酸とＡＴＰからΔＳΔ２Ｐを生成する活性を有する
微生物を見いだし、ＡｓΔ２Ｐの効率的な生産方法を開
発することに成功した（特願昭６ｌ−３０２４０９）。
方法を開発するために、アスコルビン酸の２位を特異的
にリン酸化する活性を有する微生物を検索し、アスコル
ビン酸とＡＴＰからΔＳΔ２Ｐを生成する活性を有する
微生物を見いだし、ＡｓΔ２Ｐの効率的な生産方法を開
発することに成功した（特願昭６ｌ−３０２４０９）。
しかしながらＡＴＰは高価な物質であることから、ＡＴ
Ｐに代わるリン酸基供与体を用いる製造法を種々検別し
た。その結果、種々の微生物がアスコルビン酸とピロリ
ン酸などのリン酸基供与体から目的とするアスコルビン
酸の２位のリン酸化物を特異的に生成する活性を有する
ことを見いだし、本発明を完成するに至った。
Ｐに代わるリン酸基供与体を用いる製造法を種々検別し
た。その結果、種々の微生物がアスコルビン酸とピロリ
ン酸などのリン酸基供与体から目的とするアスコルビン
酸の２位のリン酸化物を特異的に生成する活性を有する
ことを見いだし、本発明を完成するに至った。
以下に、本発明の詳細な説明する。
本発明は、アスコルビン酸またはアラポアスコルビン酸
とリン酸基供与体さからアスコルビン酸−２−リン酸を
生成する活性を有する微生物の菌体、培養液またはそれ
らの処理物の存在下、水性媒体中でアスコルビン酸また
はアラポアスコルビン酸とリン酸基供与体とを反応させ
てアスコルビン酸−２−リン酸を生成させ、反応液から
生成したアスコルビン酸−２−リン酸を採取することを
特徴とするアスコルビン酸−２−リン酸の製造法を提供
する。
とリン酸基供与体さからアスコルビン酸−２−リン酸を
生成する活性を有する微生物の菌体、培養液またはそれ
らの処理物の存在下、水性媒体中でアスコルビン酸また
はアラポアスコルビン酸とリン酸基供与体とを反応させ
てアスコルビン酸−２−リン酸を生成させ、反応液から
生成したアスコルビン酸−２−リン酸を採取することを
特徴とするアスコルビン酸−２−リン酸の製造法を提供
する。
リン酸基供与体としては、パラニトロフェニールフォス
フェート、アセチルリン酸、ピロリン酸、トリポリリン
酸、テトラポリリン酸またはポリリン酸などがあげられ
る。
フェート、アセチルリン酸、ピロリン酸、トリポリリン
酸、テトラポリリン酸またはポリリン酸などがあげられ
る。
本発明に用いる微生物としては、タレブシエラ属、セル
ロモナス属、アルカリゲネス属、エアロモナス属、ブレ
ビバクテリウム属、シュードモナス属、フラボバクテリ
ウム属、キサントモナス属、モルガ洋う属、セラチア属
、エンテロバクタ−属、バチルス属またはコリネバクテ
リウム属に属し、アスコルビン酸とリン酸基供与体から
ＡｓΔ２Ｐを生成する能力を有する微生物があげられる
。具体的に好適な菌株は下記のとおりである。
ロモナス属、アルカリゲネス属、エアロモナス属、ブレ
ビバクテリウム属、シュードモナス属、フラボバクテリ
ウム属、キサントモナス属、モルガ洋う属、セラチア属
、エンテロバクタ−属、バチルス属またはコリネバクテ
リウム属に属し、アスコルビン酸とリン酸基供与体から
ＡｓΔ２Ｐを生成する能力を有する微生物があげられる
。具体的に好適な菌株は下記のとおりである。
りしブシエラ・オキシトーカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ
ｏｘｙｔｏｃａ） ＡＴＣＣ８７２４セルａｔナス
・カルテ（Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ ｃａｒｔａｅ
） 八ＴＣＣ２１６８１アルカリゲネス・ｔ−）ｏ７
ｙス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ
）ＡＴＣ［： １７６９７未同定細菌（Ｌｌｎｉｄｅ
ｎｔｉｆｉｅｄ ｂａｃｔ、ｅｒｉｕｍ）ＡＴＣＣ１５
８０３工ｙｏｔナス・７１イドｏフイラ（Ａｅｒｏｍｏ
ｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）八ＴＣＣ１１１６３
グレブシエラ・’ニー、’−ｔニアｘ（Ｋｌｅｂｓｉｅ
ｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＡＴＣＣ２］５２４
ブレビバクテリウム・リティカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｌｙｔｉｃｕｍ）＾Ｔｌｌ：Ｃ１５９２
１ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ）ＡＴＣＣ１３８２６シユ
ードモナス・ディミヌータ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｄｉｍｉｎｕｔａ）八ＴＣＣ１１５６８牛サントＩナ
ス−１リゼー（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａ
ｅ） ＩＰＯ３９９５干ル刀ネラ・モルｊニー（Ｍｏ
ｒｇａｎｅｌｌａ ｍｏｒｇａｎｉｉ） 八ＴＣＣ
２５８３０セラチ７−ルビテカ（Ｓｅｒｒａｔｉａ
ｒｕｈｉｄａｅｃａ） ΔＴＣＣ１１６３４バチルス
・リチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）
ＡＴＣ［’ １９２２１これらの微生物の培養に
は、通常の細菌の培養に用いられる培地、例えばポリペ
プトン１０ｇ／β、肉エキス７ｇ／β、酵母エキス５ｇ
／ｊ２およびＮａＣＡ３ｇ／βを含みｐ Ｈ７，２に調
整した培地（ＫＭ１０２培地）など、これらの微生物が
生育てきかつＡｓΔ２Ｐ生成活性を阻害しないものであ
れば、炭素源、窒素源、その他の栄養素を含む天然培地
、半合成培地、合成培地などいかなる培地でも使用でき
る。
ｏｘｙｔｏｃａ） ＡＴＣＣ８７２４セルａｔナス
・カルテ（Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ ｃａｒｔａｅ
） 八ＴＣＣ２１６８１アルカリゲネス・ｔ−）ｏ７
ｙス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ
）ＡＴＣ［： １７６９７未同定細菌（Ｌｌｎｉｄｅ
ｎｔｉｆｉｅｄ ｂａｃｔ、ｅｒｉｕｍ）ＡＴＣＣ１５
８０３工ｙｏｔナス・７１イドｏフイラ（Ａｅｒｏｍｏ
ｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）八ＴＣＣ１１１６３
グレブシエラ・’ニー、’−ｔニアｘ（Ｋｌｅｂｓｉｅ
ｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＡＴＣＣ２］５２４
ブレビバクテリウム・リティカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｌｙｔｉｃｕｍ）＾Ｔｌｌ：Ｃ１５９２
１ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ）ＡＴＣＣ１３８２６シユ
ードモナス・ディミヌータ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｄｉｍｉｎｕｔａ）八ＴＣＣ１１５６８牛サントＩナ
ス−１リゼー（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａ
ｅ） ＩＰＯ３９９５干ル刀ネラ・モルｊニー（Ｍｏ
ｒｇａｎｅｌｌａ ｍｏｒｇａｎｉｉ） 八ＴＣＣ
２５８３０セラチ７−ルビテカ（Ｓｅｒｒａｔｉａ
ｒｕｈｉｄａｅｃａ） ΔＴＣＣ１１６３４バチルス
・リチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）
ＡＴＣ［’ １９２２１これらの微生物の培養に
は、通常の細菌の培養に用いられる培地、例えばポリペ
プトン１０ｇ／β、肉エキス７ｇ／β、酵母エキス５ｇ
／ｊ２およびＮａＣＡ３ｇ／βを含みｐ Ｈ７，２に調
整した培地（ＫＭ１０２培地）など、これらの微生物が
生育てきかつＡｓΔ２Ｐ生成活性を阻害しないものであ
れば、炭素源、窒素源、その他の栄養素を含む天然培地
、半合成培地、合成培地などいかなる培地でも使用でき
る。
炭素源としてはクルコース、フラクトース、シュクロー
ス、マルトースなどの各種の炭水化物、マンニトール、
ソルビトールなどの糖アルコールやクリセロールなどの
アルコール類、さらにピルビン酸、乳酸、クエン酸など
の各種の有機酸、グルタミン酸、メチオニン、リシンな
どの各種のアミノ酸、さらには澱粉加水分解物、糖蜜、
廃糖蜜、白糠、イヤソザバ、バガス、コーン・ステイー
プ・リカーなどの天然有機栄養源などこれらの微生物が
資化できるものであればいずれでも使用できる。
ス、マルトースなどの各種の炭水化物、マンニトール、
ソルビトールなどの糖アルコールやクリセロールなどの
アルコール類、さらにピルビン酸、乳酸、クエン酸など
の各種の有機酸、グルタミン酸、メチオニン、リシンな
どの各種のアミノ酸、さらには澱粉加水分解物、糖蜜、
廃糖蜜、白糠、イヤソザバ、バガス、コーン・ステイー
プ・リカーなどの天然有機栄養源などこれらの微生物が
資化できるものであればいずれでも使用できる。
窒素源としては、尿素、アンモニアあるいは塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸ア
ンモニウムなどの各種無機および有機アンモニウム塩類
、グルタミン酸、グルタミン、メチオニンなどのアミノ
酸類、あるいはペプトン、ＮＺアミン、コーン・ステイ
ープ・リカー、肉エキス、酵母エキス、カゼイン加水分
解物、フィツシュミールあるいはその消化物、さなぎ加
水分解物などの含窒素有機物など種々の物質が使用可能
である。
ニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸ア
ンモニウムなどの各種無機および有機アンモニウム塩類
、グルタミン酸、グルタミン、メチオニンなどのアミノ
酸類、あるいはペプトン、ＮＺアミン、コーン・ステイ
ープ・リカー、肉エキス、酵母エキス、カゼイン加水分
解物、フィツシュミールあるいはその消化物、さなぎ加
水分解物などの含窒素有機物など種々の物質が使用可能
である。
さらに、無機物としては、リン酸二水素カリウム、リン
酸−水素ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化す） Ｉ
Ｊウム、塩化カルシウム、塩化鉄、硫酸銅、塩化マンガ
ン、モリブデン酸アンモン、硫酸亜鉛などが使用できる
。また必要に応じて、微生物の生育に必要なビタミン、
アミノ酸、核酸その他のものを添加するが、前記したよ
うな他の培地成分に伴って培地に供給されれば特に加え
なくても良い。
酸−水素ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化す） Ｉ
Ｊウム、塩化カルシウム、塩化鉄、硫酸銅、塩化マンガ
ン、モリブデン酸アンモン、硫酸亜鉛などが使用できる
。また必要に応じて、微生物の生育に必要なビタミン、
アミノ酸、核酸その他のものを添加するが、前記したよ
うな他の培地成分に伴って培地に供給されれば特に加え
なくても良い。
培養は、振盪培養、通気撹拌培養などの好気的条件下で
行うことが望ましい。温度は２０〜４０℃好ましくは２
５〜３５℃、ｐＨは５〜１０好ましくは６５〜７５で通
常５〜１００時間培養を行う。
行うことが望ましい。温度は２０〜４０℃好ましくは２
５〜３５℃、ｐＨは５〜１０好ましくは６５〜７５で通
常５〜１００時間培養を行う。
アスコルビン酸またはアラボアスコルどン酸とリン酸基
供与体とを反応させ−ＣΔ５Ａ２Ｐを生成させる反応は
、微生物の培養中、培地にアスコルビン酸またはアラポ
アスコルビン酸とリン酸基供与体とを存在させる方法（
方法１）、または微生物の培養液、菌体またはそれらの
処理物とアスコルビン酸またはアラポアスコルビン酸お
よびリン酸基供与体を含有する液とを混合する方法（方
法２）により行われる。
供与体とを反応させ−ＣΔ５Ａ２Ｐを生成させる反応は
、微生物の培養中、培地にアスコルビン酸またはアラポ
アスコルビン酸とリン酸基供与体とを存在させる方法（
方法１）、または微生物の培養液、菌体またはそれらの
処理物とアスコルビン酸またはアラポアスコルビン酸お
よびリン酸基供与体を含有する液とを混合する方法（方
法２）により行われる。
反応液中には必要に応じて界面活性剤、有機溶剤などを
存在させることによりΔ５Ａ２Ｐの生成率を向上させる
ことができる。
存在させることによりΔ５Ａ２Ｐの生成率を向上させる
ことができる。
界面活性剤としては、ポリオキシエチレン・ステアリル
アミン（例えはナイミーンＳ−２１５、日本油脂社製）
、七チルトリメチルアンモニウト・ブロマイドなどのカ
チオン性界面活性剤、ナトリウムオレイルアミド硫酸な
どのアニオン性界面活性剤、ポリオキシエチレンソルビ
タン・モノステアレート（例えばノニオン５Ｔ２２＋、
日本油脂社製）などの非イオン性界面活性剤など、アス
コルビン酸またはアラポアスコルビン酸とリン酸基供与
体からＡｓΔ２Ｐを生成する反応を促進するものであれ
ばいずれでも使用でき、これらは通常１〜５０ｍｇ／ｍ
ｌ、好ましくは１〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で用いられる
。
アミン（例えはナイミーンＳ−２１５、日本油脂社製）
、七チルトリメチルアンモニウト・ブロマイドなどのカ
チオン性界面活性剤、ナトリウムオレイルアミド硫酸な
どのアニオン性界面活性剤、ポリオキシエチレンソルビ
タン・モノステアレート（例えばノニオン５Ｔ２２＋、
日本油脂社製）などの非イオン性界面活性剤など、アス
コルビン酸またはアラポアスコルビン酸とリン酸基供与
体からＡｓΔ２Ｐを生成する反応を促進するものであれ
ばいずれでも使用でき、これらは通常１〜５０ｍｇ／ｍ
ｌ、好ましくは１〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で用いられる
。
有機溶剤としてはトルエン、キシレン、アセトン、脂肪
族アルコール、ベンセン、酢酸エチルなどを用いること
ができ、０．１〜５０μＱ ／ ｍ ｌ、好ましくは１
〜２０μＱ ／ ｍ ｌの濃度で用いる。
族アルコール、ベンセン、酢酸エチルなどを用いること
ができ、０．１〜５０μＱ ／ ｍ ｌ、好ましくは１
〜２０μＱ ／ ｍ ｌの濃度で用いる。
アスコルビン酸またはアラポアスコルビン酸およびリン
酸基供与体としては、化学的な純品でも粗ｆ？ｊ製物で
も良く、またアスコルビン酸もしくはアラポアスコルビ
ン酸またはリン酸基供与体を含みＡｓΔ２Ｐの生成を妨
げないものであればいかなるものでも使用できる。水性
媒体中アスコルビン酸またはアラポアスコルビン酸は１
〜５００ｍＭ。
酸基供与体としては、化学的な純品でも粗ｆ？ｊ製物で
も良く、またアスコルビン酸もしくはアラポアスコルビ
ン酸またはリン酸基供与体を含みＡｓΔ２Ｐの生成を妨
げないものであればいかなるものでも使用できる。水性
媒体中アスコルビン酸またはアラポアスコルビン酸は１
〜５００ｍＭ。
リン酸基供与体は１〜１．０００ｍＭの濃度範囲で用い
る。
る。
方法２における反応は、温度２０〜７０℃で、アンモニ
ア、水酸化カリウド、水酸化ナトリウトなどによりｐＨ
を３〜１１に保ぢ、１〜４８時間行う。
ア、水酸化カリウド、水酸化ナトリウトなどによりｐＨ
を３〜１１に保ぢ、１〜４８時間行う。
培養液の処理物としては、培養液の濃縮物、乾燥物、界
面活性剤および／または有機溶剤添加物、溶菌酵素処理
物など−があげら°れる。また、菌体処理物としては、
菌体の乾燥物、界面活性剤および／または有機溶剤処理
物、溶菌酵素処理物、固定化菌体あるいは菌体からの抽
出酵素標品なとがあげられる。
面活性剤および／または有機溶剤添加物、溶菌酵素処理
物など−があげら°れる。また、菌体処理物としては、
菌体の乾燥物、界面活性剤および／または有機溶剤処理
物、溶菌酵素処理物、固定化菌体あるいは菌体からの抽
出酵素標品なとがあげられる。
分離菌体を用いる場合は、湿菌体重量にて１〜４００
ｍｇ／ｍｌの範囲が好ましい。
ｍｇ／ｍｌの範囲が好ましい。
△ＳΔ２Ｐは、ヌクレオンルＩＯＣ，８カラム〔マシェ
レーーナーゲル（Ｍａｓｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ）社製
〕を用いる高速液体クロマトクラフィーを用いて、２５
４ｎｍの吸収を測定することにより、合成法により製造
された純品を標準品として定量することができる。
レーーナーゲル（Ｍａｓｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ）社製
〕を用いる高速液体クロマトクラフィーを用いて、２５
４ｎｍの吸収を測定することにより、合成法により製造
された純品を標準品として定量することができる。
培養液および水性媒体反応液からのＡｓΔ２Ｐの採取は
、菌体除去および除蛋白操作後、」二清液を中和し、イ
オン交接樹脂、セファデックスなとを用いるカラトクロ
マトクラフィーや高速液体クロマトクラフィーにより行
う。
、菌体除去および除蛋白操作後、」二清液を中和し、イ
オン交接樹脂、セファデックスなとを用いるカラトクロ
マトクラフィーや高速液体クロマトクラフィーにより行
う。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例１゜
シュードモナス・アゾトコリガンスＡＴＣＣ＋２４１７
を、ＫＭ１０２培地３０ｍ１に植菌し、２２Ｏｒｐｍで
３０℃、２０時間培養した。ついでＫＭＩ０２培地３０
０ｍ１に」１記で得られた種培養液１２ｍ１を植菌し、
２２Ｏｒｐｍで３０℃、２０時間培養した。得られた培
養液を１０．０００×ｇにて１０分間遠心分離し、湿菌
体１１．８ｇを得て、−２０℃にて凍結保存した。
を、ＫＭ１０２培地３０ｍ１に植菌し、２２Ｏｒｐｍで
３０℃、２０時間培養した。ついでＫＭＩ０２培地３０
０ｍ１に」１記で得られた種培養液１２ｍ１を植菌し、
２２Ｏｒｐｍで３０℃、２０時間培養した。得られた培
養液を１０．０００×ｇにて１０分間遠心分離し、湿菌
体１１．８ｇを得て、−２０℃にて凍結保存した。
アスコルビン酸２００ｍＭ 、酢酸ナトリウム緩衝液１
００ｍＭ 、ナイミーンＳ−２１５（日本油脂社製）４
ｇ／β、キンレン１０ｍ１／βの組成の液に、凍結保存
菌体５０ｍｇ／ｍｌ （湿菌体重量）および第１表に示
すリン酸基供与体のいずれか一つを４０ｍＭ含む反応液
５０ｍ１を、マクネチンク・スターターにて１１００ｒ
ｐで撹拌しつつ、温度を３０℃に保って１０時間反応さ
せた。反応ｐＨは、Ｎ ａ ＯＴ−Ｔまたは塩酸を用い
て調整した。生成したＡｓΔ２Ｐを高速液体クロマトグ
ラフィーにて定量した。ΔＴＰを用いた場合のＡｓＡ２
Ｐの生成量を１００としたときのそれぞれの相対活性と
反応ｐＨを第１表に示す。
００ｍＭ 、ナイミーンＳ−２１５（日本油脂社製）４
ｇ／β、キンレン１０ｍ１／βの組成の液に、凍結保存
菌体５０ｍｇ／ｍｌ （湿菌体重量）および第１表に示
すリン酸基供与体のいずれか一つを４０ｍＭ含む反応液
５０ｍ１を、マクネチンク・スターターにて１１００ｒ
ｐで撹拌しつつ、温度を３０℃に保って１０時間反応さ
せた。反応ｐＨは、Ｎ ａ ＯＴ−Ｔまたは塩酸を用い
て調整した。生成したＡｓΔ２Ｐを高速液体クロマトグ
ラフィーにて定量した。ΔＴＰを用いた場合のＡｓＡ２
Ｐの生成量を１００としたときのそれぞれの相対活性と
反応ｐＨを第１表に示す。
第 １ 表
リン酸基供与体 反応ｐｌ＋ 相対活性（％
）オルソリン酸 ４．００ ｔｒ（
＊）ハラニトロフェニルフォスフェートｔｒ： 微量 （リン酸基供与体はすべて牛丼化学工業社製の試薬を使
用。） 実施例２ シュードモナス・アゾトコリガンスＡＴＣＣ１２４１７
苓、ＫＭ１０２培地３０ｍ ｌに植菌し、３０℃で、２
０時間培養した。ついでＫＭ１０２培地３００ｍ１に上
記で得られた種培養液１２ｍ１を植菌し、３０℃で、２
０時間培養した。得られた培養液を１０，０００Ｘｇに
て１０分間遠心分離し、湿菌体］１．８ｇを得て、−２
０℃にて凍結保存した。凍結保存菌体５０ｍｇ／ｍｌ
（湿菌体ｍＨを含む、アスコルビン酸２００ｍＭ 、ピ
ロリン酸カリウム２００ｍＭ 、酢酸ナトリウム緩衝液
（ｐｆ１４．０）］０００ｍＭ、ナイミーンＳ−２１５
４ｇ／ｅ、キシレン］Ｏｍｌ／βの組成の反応液５０ｍ
１を、マクネチンク・スターシーにて１００ ｒｐｍで
撹拌しつつ、温度を４０℃に保って３６時間反応させた
。生成したＡ ｓ Ａ ２ Ｐを高速液体クロマトクラ
フィーにて定量したところ、反応終了時に反応液上清中
には３２、０ｍｇ／ｍｌのＡｓＡ２Ｐが生成蓄積してい
た。なお、アスコルビン酸−６−リン酸、アスコルビン
酸−３〜リン酸、およびそれらのピロリン酸化物などの
副生物はほとんど生成しなかった。
）オルソリン酸 ４．００ ｔｒ（
＊）ハラニトロフェニルフォスフェートｔｒ： 微量 （リン酸基供与体はすべて牛丼化学工業社製の試薬を使
用。） 実施例２ シュードモナス・アゾトコリガンスＡＴＣＣ１２４１７
苓、ＫＭ１０２培地３０ｍ ｌに植菌し、３０℃で、２
０時間培養した。ついでＫＭ１０２培地３００ｍ１に上
記で得られた種培養液１２ｍ１を植菌し、３０℃で、２
０時間培養した。得られた培養液を１０，０００Ｘｇに
て１０分間遠心分離し、湿菌体］１．８ｇを得て、−２
０℃にて凍結保存した。凍結保存菌体５０ｍｇ／ｍｌ
（湿菌体ｍＨを含む、アスコルビン酸２００ｍＭ 、ピ
ロリン酸カリウム２００ｍＭ 、酢酸ナトリウム緩衝液
（ｐｆ１４．０）］０００ｍＭ、ナイミーンＳ−２１５
４ｇ／ｅ、キシレン］Ｏｍｌ／βの組成の反応液５０ｍ
１を、マクネチンク・スターシーにて１００ ｒｐｍで
撹拌しつつ、温度を４０℃に保って３６時間反応させた
。生成したＡ ｓ Ａ ２ Ｐを高速液体クロマトクラ
フィーにて定量したところ、反応終了時に反応液上清中
には３２、０ｍｇ／ｍｌのＡｓＡ２Ｐが生成蓄積してい
た。なお、アスコルビン酸−６−リン酸、アスコルビン
酸−３〜リン酸、およびそれらのピロリン酸化物などの
副生物はほとんど生成しなかった。
実施例３
第２表に示す各菌株を、ＫＭ１０２培地３０ｍ１に植菌
し、３０℃にて２０時間種培養した。ついでＫＭ１０２
培地３００ｍ１に」−記で得られた種培養液１２ｍ１を
それぞれ植菌し、３０℃にて２０時間培養した。得られ
た培養液をそれぞれ１０．０００ Ｘ ｇにてｌＯ分間
遠６分離し、各菌株の湿菌体を得て、−２０℃にて凍結
保存した。各凍結保存菌体５０ｍｇ／ｍｌ （湿菌体重
量）を含む、アスコルビン酸２００ｍＭ 、ピロリン酸
カリウム２００ｍＭ、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４，
０）１００ｍＭ 、ナイミーンＳ−２１５４ｇ／１２、
キシレン１０ｍ１／ｐの組成の反応液５０ｍ１をそれぞ
れマクネチンク・スターシーにて１１００ｒｐで撹拌し
つつ、Ｎａ計でｐＨを４．０付近に、温度を３０℃に保
って２４時間反応させた。反応終了時に反応液上清中に
生成した△ＳΔ２Ｐを高速液体クロマトグラフィーにて
定量した。結果を第２表に示す。
し、３０℃にて２０時間種培養した。ついでＫＭ１０２
培地３００ｍ１に」−記で得られた種培養液１２ｍ１を
それぞれ植菌し、３０℃にて２０時間培養した。得られ
た培養液をそれぞれ１０．０００ Ｘ ｇにてｌＯ分間
遠６分離し、各菌株の湿菌体を得て、−２０℃にて凍結
保存した。各凍結保存菌体５０ｍｇ／ｍｌ （湿菌体重
量）を含む、アスコルビン酸２００ｍＭ 、ピロリン酸
カリウム２００ｍＭ、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４，
０）１００ｍＭ 、ナイミーンＳ−２１５４ｇ／１２、
キシレン１０ｍ１／ｐの組成の反応液５０ｍ１をそれぞ
れマクネチンク・スターシーにて１１００ｒｐで撹拌し
つつ、Ｎａ計でｐＨを４．０付近に、温度を３０℃に保
って２４時間反応させた。反応終了時に反応液上清中に
生成した△ＳΔ２Ｐを高速液体クロマトグラフィーにて
定量した。結果を第２表に示す。
第 ２ 表
クレブシェラ・オキシトーカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ
ｏｘｙｔｏｃａ＞ ＡＴＣＣ８７２４０，５３実施
例４゜ シュートモづ一ス・アゾトコリガンスへＴＣＣ１２４１
７を、ＫＭ１０２培地３０ｍ１に植菌し、２２Ｏｒｐｍ
で３０℃、２０時間種培養した。ついでＫＭ１０２培地
３００ｍ１に上記で得られた種培養液１２ｍ１を植菌し
、２２Ｏｒｐｍで３０℃、２０時間培養した。
ｏｘｙｔｏｃａ＞ ＡＴＣＣ８７２４０，５３実施
例４゜ シュートモづ一ス・アゾトコリガンスへＴＣＣ１２４１
７を、ＫＭ１０２培地３０ｍ１に植菌し、２２Ｏｒｐｍ
で３０℃、２０時間種培養した。ついでＫＭ１０２培地
３００ｍ１に上記で得られた種培養液１２ｍ１を植菌し
、２２Ｏｒｐｍで３０℃、２０時間培養した。
得られた培養液を塩酸でｐＨ４，Ｏに調整した後、アス
コルビン酸２００ｍＭ 、ナイミーンＳ−２１５４ｇ／
β、キシレン１０ｍ１／ｊ！およびピロリン酸４０ｍＭ
を添加し、１１００ｒｐで撹拌しつつ、温度を３０℃に
保って１０時間反応させた。その結果Δ５Ａ２Ｐが８．
８４ｇ／β生成蓄積した。
コルビン酸２００ｍＭ 、ナイミーンＳ−２１５４ｇ／
β、キシレン１０ｍ１／ｊ！およびピロリン酸４０ｍＭ
を添加し、１１００ｒｐで撹拌しつつ、温度を３０℃に
保って１０時間反応させた。その結果Δ５Ａ２Ｐが８．
８４ｇ／β生成蓄積した。
実施例５゜
シュードモナス・アソ゛トコリカ゛ンスへＴＣＣ１２，
１１７を、実施例１と同様に培養し、得られた菌体を一
２０℃にて凍結保存した。
１１７を、実施例１と同様に培養し、得られた菌体を一
２０℃にて凍結保存した。
アラポアスコルビン酸２００ｍＭ、８３表に示すリン酸
基供与体それぞれ１５０ｍＭ、酢酸ナトリウト緩衝液（
ｐＨ４，０）４０ｍＭの組成の反応液５０ｍ１に、ナイ
ミーンＳ−２１５４ｇ／Ｉｌ。
基供与体それぞれ１５０ｍＭ、酢酸ナトリウト緩衝液（
ｐＨ４，０）４０ｍＭの組成の反応液５０ｍ１に、ナイ
ミーンＳ−２１５４ｇ／Ｉｌ。
キンレン１０ｍ１／ｊ！を加えて３０℃で１０分間処理
した凍結保存菌体５０ ｍｇ／ｍｌ （湿菌体重量）を
加えて反応させた。反応は、マグネチック・スタークー
にて１００ ｒｐｍで攪拌しつつ、ＮａＯＨでｐ Ｈを
４．０付近に、温度を３０℃に保って６０分間行った。
した凍結保存菌体５０ ｍｇ／ｍｌ （湿菌体重量）を
加えて反応させた。反応は、マグネチック・スタークー
にて１００ ｒｐｍで攪拌しつつ、ＮａＯＨでｐ Ｈを
４．０付近に、温度を３０℃に保って６０分間行った。
反応終了時に反応液上清中に生成したＡｓＡ２Ｐを高速
液体クロマトグラフィーにて定量した。結果を第３表に
示す。
液体クロマトグラフィーにて定量した。結果を第３表に
示す。
第３表
リン酸基供与体 ＡｓＡ２Ｐ（ｇ／ｊ７）ピ
ロ リ ン 酸
１５６トリポリリン酸１１４ テトラポリリン酸 １０５アセチル
リン酸 ２．００ｐ−ニトロフェニルリ
ン酸 １５３ＡＴＰ
０．３０Ａ Ｔ Ｐ （ｐＨ５，５＞
１．３７発明の効果 本発明によれば、微生物の菌体、培養液またはそれらの
処理物を酵素源として用いて、アスコルビン酸またはア
ラポアスコルビン酸とピロリン酸などのリン酸基供与体
とからＡｓＡ２Ｐを工業的に安価に製造することができ
る。
ロ リ ン 酸
１５６トリポリリン酸１１４ テトラポリリン酸 １０５アセチル
リン酸 ２．００ｐ−ニトロフェニルリ
ン酸 １５３ＡＴＰ
０．３０Ａ Ｔ Ｐ （ｐＨ５，５＞
１．３７発明の効果 本発明によれば、微生物の菌体、培養液またはそれらの
処理物を酵素源として用いて、アスコルビン酸またはア
ラポアスコルビン酸とピロリン酸などのリン酸基供与体
とからＡｓＡ２Ｐを工業的に安価に製造することができ
る。
Claims (3)
- （１）アスコルビン酸またはアラポアスコルビン酸とリ
ン酸基供与体とからアスコルビン酸−２−リン酸を生成
する活性を有する微生物の菌体、培養液またはそれらの
処理物の存在下、水性媒体中でアスコルビン酸またはア
ラポアスコルビン酸とリン酸基供与体とを反応させてア
スコルビン酸−２−リン酸を生成させ、反応液から生成
したアスコルビン酸−２−リン酸を採取することを特徴
とするアスコルビン酸−２−リン酸の製造法。 - （２）該リン酸基供与体が、パラニトロフェニールフォ
スフェート、アセチルリン酸、ピロリン酸、トリポリリ
ン酸、テトラポリリン酸またはポリリン酸から選ばれる
請求項１記載の方法。 - （３）該微生物が、クレブシエラ属、セルロモナス属、
アルカリゲネス属、エアロモナス属、ブレビバクテリウ
ム属、シュードモナス属、フラボバクテリウム属、キサ
ントモナス属、モルガネラ属、セラチア属、エンテロバ
クター属、バチルス属またはコリネバクテリウム属に属
する微生物から選ばれる請求項１記載の方法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63070218A JP2695180B2 (ja) | 1987-10-08 | 1988-03-24 | アスコルビン酸−２−リン酸の製造法 |
| EP88309279A EP0319130B1 (en) | 1987-10-08 | 1988-10-05 | Process for the preparation of ascorbic acid-2-phosphate |
| CA000579378A CA1335578C (en) | 1987-10-08 | 1988-10-05 | Process for the preparation of ascorbic acid-2-phosphate |
| DE3888307T DE3888307T2 (de) | 1987-10-08 | 1988-10-05 | Verfahren zur Herstellung von Ascorbinsäure-2-phosphat. |
| KR1019880013190A KR920009525B1 (ko) | 1987-10-08 | 1988-10-08 | 아스코르빈산-2-포스페이트의 제조방법 |
| US07/758,528 US5212079A (en) | 1987-10-08 | 1991-09-06 | Process for the preparation of ascorbic acid-2-phosphate |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25410687 | 1987-10-08 | ||
| JP62-254106 | 1987-10-08 | ||
| JP63070218A JP2695180B2 (ja) | 1987-10-08 | 1988-03-24 | アスコルビン酸−２−リン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01199590A true JPH01199590A (ja) | 1989-08-10 |
| JP2695180B2 JP2695180B2 (ja) | 1997-12-24 |
Family
ID=26411386
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63070218A Expired - Lifetime JP2695180B2 (ja) | 1987-10-08 | 1988-03-24 | アスコルビン酸−２−リン酸の製造法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0319130B1 (ja) |
| JP (1) | JP2695180B2 (ja) |
| KR (1) | KR920009525B1 (ja) |
| CA (1) | CA1335578C (ja) |
| DE (1) | DE3888307T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007026871A1 (ja) * | 2005-09-02 | 2007-03-08 | Kagoshima University | 魚醤油の製造方法 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3122663B2 (ja) * | 1990-06-21 | 2001-01-09 | 協和醗酵工業株式会社 | アスコルビン酸―２―リン酸の製造法 |
| TWI459616B (zh) | 2004-08-16 | 2014-11-01 | Showa Denko Kk | Lithium batteries with positive and the use of its lithium batteries |
| CN1760199B (zh) * | 2004-10-13 | 2010-05-05 | 华北制药集团有限责任公司 | 一种制备l-抗坏血酸-2-磷酸酯及其盐的方法 |
| CA3027242C (en) | 2016-06-13 | 2021-09-14 | 3R Valo, S.E.C. | Phosphorylated lignocellulosic fibers, uses and processes of preparation thereof |
| KR101915847B1 (ko) * | 2016-09-21 | 2018-11-06 | 선문대학교 산학협력단 | 미생물을 이용한 생물전환 화합물의 생산 방법 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0740949A (ja) * | 1993-07-23 | 1995-02-10 | Koyo Autom Mach Co Ltd | ラべリングマシン |
-
1988
- 1988-03-24 JP JP63070218A patent/JP2695180B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-05 CA CA000579378A patent/CA1335578C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-10-05 DE DE3888307T patent/DE3888307T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-05 EP EP88309279A patent/EP0319130B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-08 KR KR1019880013190A patent/KR920009525B1/ko not_active Expired
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0740949A (ja) * | 1993-07-23 | 1995-02-10 | Koyo Autom Mach Co Ltd | ラべリングマシン |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007026871A1 (ja) * | 2005-09-02 | 2007-03-08 | Kagoshima University | 魚醤油の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR890006823A (ko) | 1989-06-16 |
| CA1335578C (en) | 1995-05-16 |
| DE3888307D1 (de) | 1994-04-14 |
| JP2695180B2 (ja) | 1997-12-24 |
| EP0319130A3 (en) | 1990-05-16 |
| DE3888307T2 (de) | 1994-06-16 |
| EP0319130A2 (en) | 1989-06-07 |
| EP0319130B1 (en) | 1994-03-09 |
| KR920009525B1 (ko) | 1992-10-17 |
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