JPH1189566A - 二糖類ホスホリラーゼの製造方法 - Google Patents
二糖類ホスホリラーゼの製造方法Info
- Publication number
- JPH1189566A JPH1189566A JP25322197A JP25322197A JPH1189566A JP H1189566 A JPH1189566 A JP H1189566A JP 25322197 A JP25322197 A JP 25322197A JP 25322197 A JP25322197 A JP 25322197A JP H1189566 A JPH1189566 A JP H1189566A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phosphorylase
- microorganism
- producing
- genus
- trehalose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 トレハロースホスホリラーゼやマルトースホ
スホリラーゼのような二糖類ホスホリラーゼをより高い
収率で製造できる方法を提供すること。 【解決手段】 バリダマイシンを含有する培地中で二糖
類ホスホリラーゼ生産能を有する微生物を培養し、生成
した二糖類ホスホリラーゼを回収する二糖類ホスホリラ
ーゼの製造方法。二糖類ホスホリラーゼは、例えば、ト
レハロースホスホリラーゼ及びマルトースホスホリラー
ゼである。
スホリラーゼのような二糖類ホスホリラーゼをより高い
収率で製造できる方法を提供すること。 【解決手段】 バリダマイシンを含有する培地中で二糖
類ホスホリラーゼ生産能を有する微生物を培養し、生成
した二糖類ホスホリラーゼを回収する二糖類ホスホリラ
ーゼの製造方法。二糖類ホスホリラーゼは、例えば、ト
レハロースホスホリラーゼ及びマルトースホスホリラー
ゼである。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、二糖類ホスホリラ
ーゼの製造方法に関する。特に、本発明は、食品の物性
改良剤あるいは、医薬品や酵素の安定化剤として有用な
トレハロースを酵素的に製造する際に必要とされる二糖
類ホスホリラーゼであるトレハロースホスホリラーゼ及
びマルトースホスホリラーゼを効率よく製造する方法に
関する。
ーゼの製造方法に関する。特に、本発明は、食品の物性
改良剤あるいは、医薬品や酵素の安定化剤として有用な
トレハロースを酵素的に製造する際に必要とされる二糖
類ホスホリラーゼであるトレハロースホスホリラーゼ及
びマルトースホスホリラーゼを効率よく製造する方法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】二糖類ホスホリラーゼは、二糖類を無機
リン酸の存在下で加燐酸分解して、グルコース１リン酸
とグルコースとにする分解反応とグルコース１リン酸と
グルコースとから二糖類を生成する合成反応の可逆的反
応を触媒する酵素であり、例えば、トレハロースホスホ
リラーゼ、マルトースホスホリラーゼ、セルビオースホ
スホリラーゼ等が知られている。トレハロースホスホリ
ラーゼは、下記(1)で示される可逆的反応を触媒する酵
素である。また、マルトースホスホリラーゼは、下記
(2)で示される可逆的反応を触媒する酵素である。但
し、いずれの式中でも、右向き矢印は正反応を示し、左
向き矢印は逆反応を示す。
リン酸の存在下で加燐酸分解して、グルコース１リン酸
とグルコースとにする分解反応とグルコース１リン酸と
グルコースとから二糖類を生成する合成反応の可逆的反
応を触媒する酵素であり、例えば、トレハロースホスホ
リラーゼ、マルトースホスホリラーゼ、セルビオースホ
スホリラーゼ等が知られている。トレハロースホスホリ
ラーゼは、下記(1)で示される可逆的反応を触媒する酵
素である。また、マルトースホスホリラーゼは、下記
(2)で示される可逆的反応を触媒する酵素である。但
し、いずれの式中でも、右向き矢印は正反応を示し、左
向き矢印は逆反応を示す。
【０００３】
【化１】
【０００４】トレハロースホスホリラーゼは、例えば、
ユーグレナ グラチリス（Euglena gracilus）［バイオ
ケミストリー・アンド・バイオフィジオロジー・アクタ
（Biochim. Biophys. Acta.）、第１９８巻、１５１−
１５４頁（１９７０）、ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）、第２４７巻、
３２２３−３２２８頁（１９７２）］、フラムリナ ベ
ルチペス（Flammulina velutipes）［エフィーエムエス
・マイクロバイオロジ・レターズ（FEMS Microbiol. Le
tt.）、第５５巻、１４７−１５０頁（１９８８）］及
びブラジヒゾビウム ジャポニカム（Bradyhizobium ja
ponicum）［プラント・フィジオロジー（Plant Physio
l.）、第８１巻、５３８−５４１頁（１９８６）］等の
微生物が菌体内酵素として有することが知られている。
ユーグレナ グラチリス（Euglena gracilus）［バイオ
ケミストリー・アンド・バイオフィジオロジー・アクタ
（Biochim. Biophys. Acta.）、第１９８巻、１５１−
１５４頁（１９７０）、ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）、第２４７巻、
３２２３−３２２８頁（１９７２）］、フラムリナ ベ
ルチペス（Flammulina velutipes）［エフィーエムエス
・マイクロバイオロジ・レターズ（FEMS Microbiol. Le
tt.）、第５５巻、１４７−１５０頁（１９８８）］及
びブラジヒゾビウム ジャポニカム（Bradyhizobium ja
ponicum）［プラント・フィジオロジー（Plant Physio
l.）、第８１巻、５３８−５４１頁（１９８６）］等の
微生物が菌体内酵素として有することが知られている。
【０００５】マルトースホスホリラーゼは、ナイセリア
メニンギチヂス（Neiserria meningitidis）［ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol.
Chem.）第１９９巻、１５３頁、１９５２年］、ラクト
バチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）IFO3345
［アグリカルチュラル・アンド・バイオロジカル・ケミ
ストリー（Agr. Biol. Chem）、第３７巻、２８１３
頁、１９７３年］、ラクトバチルス ブレビス（Lactob
acillus brevis）DSM 20054、NCIB 8836、8561、8526、
ラクトバチルス プランタラム(Lactobacillus plantar
um)DSM 20174及び微工研寄第４６２８号、ラクトバチル
ス・レウテリ（Lactobacillus reuteri）DSM20016、ラ
クトバチルス・ファーメンタム（Lactobacillus fermen
tum）DSM 20052、ストレプトコッカス属細菌(Streptoco
ccus sp.)微工研菌寄第４６２４号、微工研菌寄第４６
２５号、微工研菌寄第４６２６号、微工研菌寄第４６２
７号、等（特公昭６０−５４０３６号公報）:ラクトバ
チルス・サンフランシスコ（Lactobacillus sanfrancis
co）（特開平１−９１７７８号公報）等の微生物が菌体
内酵素として有することが知られている。さらに、プレ
シオモナス（Plesiomonas）属に属するプレシオモナス
ＳＨ３５株（生命研条寄第５１４４）は、マルトースホ
スホリラーゼ及びトレハロースホスホリラーゼの両酵素
を同時に生産する有用な菌体であることが知られている
（特開平８−１３１１５７）。
メニンギチヂス（Neiserria meningitidis）［ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol.
Chem.）第１９９巻、１５３頁、１９５２年］、ラクト
バチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）IFO3345
［アグリカルチュラル・アンド・バイオロジカル・ケミ
ストリー（Agr. Biol. Chem）、第３７巻、２８１３
頁、１９７３年］、ラクトバチルス ブレビス（Lactob
acillus brevis）DSM 20054、NCIB 8836、8561、8526、
ラクトバチルス プランタラム(Lactobacillus plantar
um)DSM 20174及び微工研寄第４６２８号、ラクトバチル
ス・レウテリ（Lactobacillus reuteri）DSM20016、ラ
クトバチルス・ファーメンタム（Lactobacillus fermen
tum）DSM 20052、ストレプトコッカス属細菌(Streptoco
ccus sp.)微工研菌寄第４６２４号、微工研菌寄第４６
２５号、微工研菌寄第４６２６号、微工研菌寄第４６２
７号、等（特公昭６０−５４０３６号公報）:ラクトバ
チルス・サンフランシスコ（Lactobacillus sanfrancis
co）（特開平１−９１７７８号公報）等の微生物が菌体
内酵素として有することが知られている。さらに、プレ
シオモナス（Plesiomonas）属に属するプレシオモナス
ＳＨ３５株（生命研条寄第５１４４）は、マルトースホ
スホリラーゼ及びトレハロースホスホリラーゼの両酵素
を同時に生産する有用な菌体であることが知られている
（特開平８−１３１１５７）。
【０００６】前記式（１）及び（２）に従い、マルトー
ス及び無機リン酸を原料として、マルトースホスホリラ
ーゼ及びトレハロースホスホリラーゼを用いて、トレハ
ロースを酵素的に製造することができる。トレハロース
は、食品の物性改良剤あるいは、医薬品や酵素の安定化
剤として有用な化合物であり、応用範囲が広がりつつあ
る。さらに、両酵素は、マルトース及びトレハロースの
定量にも用いられている（特開平８−２８０３９９）。
ス及び無機リン酸を原料として、マルトースホスホリラ
ーゼ及びトレハロースホスホリラーゼを用いて、トレハ
ロースを酵素的に製造することができる。トレハロース
は、食品の物性改良剤あるいは、医薬品や酵素の安定化
剤として有用な化合物であり、応用範囲が広がりつつあ
る。さらに、両酵素は、マルトース及びトレハロースの
定量にも用いられている（特開平８−２８０３９９）。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】上記マルトースホスホ
リラーゼ及びトレハロースホスホリラーゼのような二糖
類ホスホリラーゼは、上述のような種々の微生物を培養
することにより、菌体内酵素として得られる。トレハロ
ースに対するニーズが高まりつつあることから、トレハ
ロースを安価に製造するために、その生産に不可欠な酵
素でるマルトースホスホリラーゼ及びトレハロースホス
ホリラーゼの効率的な生産が望まれているが、これまで
菌株による酵素の生産性を改善することはほとんど行わ
れていなかった。そこで本発明の目的は、トレハロース
ホスホリラーゼやマルトースホスホリラーゼのような二
糖類ホスホリラーゼをより高い収率で製造できる方法を
提供することにある。上記目的を達成するため、本発明
者らが種々検討した結果、バリダマイシンを含む培地中
でトレハロースホスホリラーゼやマルトースホスホリラ
ーゼ等の二糖類ホスホリラーゼ生産能を有する微生物を
培養すると、酵素の生産量が、顕著に向上することを新
たに見出して本発明を完成した。
リラーゼ及びトレハロースホスホリラーゼのような二糖
類ホスホリラーゼは、上述のような種々の微生物を培養
することにより、菌体内酵素として得られる。トレハロ
ースに対するニーズが高まりつつあることから、トレハ
ロースを安価に製造するために、その生産に不可欠な酵
素でるマルトースホスホリラーゼ及びトレハロースホス
ホリラーゼの効率的な生産が望まれているが、これまで
菌株による酵素の生産性を改善することはほとんど行わ
れていなかった。そこで本発明の目的は、トレハロース
ホスホリラーゼやマルトースホスホリラーゼのような二
糖類ホスホリラーゼをより高い収率で製造できる方法を
提供することにある。上記目的を達成するため、本発明
者らが種々検討した結果、バリダマイシンを含む培地中
でトレハロースホスホリラーゼやマルトースホスホリラ
ーゼ等の二糖類ホスホリラーゼ生産能を有する微生物を
培養すると、酵素の生産量が、顕著に向上することを新
たに見出して本発明を完成した。
【０００８】バリダマイシンは、農業用抗生物質として
広く用いられており、バリドキシルアミンとＤ−グルコ
ースとからなる構造を有している。バリダマイシン及び
その基本骨格であるバリドキシルアミンは、上記(1)で
示されるトレハロースホスホリラーゼの加燐酸分解反応
の正反応を強く阻害することが報告されている［Biosc
i. Biotech. Biochem.、第５９巻、１９０８−１９１２
頁（１９９５）］。また、トレハロースを生産する能力
を有する微生物を培養する際に、バリダマイシンまた
は、その誘導体を添加するとトレハロース生産量が顕著
に向上することも知られている（特公平３−１３００８
４）。しかるに、バリダマイシンを含む培地中でトレハ
ロースホスホリラーゼやマルトースホスホリラーゼ等の
二糖類ホスホリラーゼ生産能を有する微生物を培養する
と、酵素の生産量が顕著に向上することは、全く知られ
ていなかった。
広く用いられており、バリドキシルアミンとＤ−グルコ
ースとからなる構造を有している。バリダマイシン及び
その基本骨格であるバリドキシルアミンは、上記(1)で
示されるトレハロースホスホリラーゼの加燐酸分解反応
の正反応を強く阻害することが報告されている［Biosc
i. Biotech. Biochem.、第５９巻、１９０８−１９１２
頁（１９９５）］。また、トレハロースを生産する能力
を有する微生物を培養する際に、バリダマイシンまた
は、その誘導体を添加するとトレハロース生産量が顕著
に向上することも知られている（特公平３−１３００８
４）。しかるに、バリダマイシンを含む培地中でトレハ
ロースホスホリラーゼやマルトースホスホリラーゼ等の
二糖類ホスホリラーゼ生産能を有する微生物を培養する
と、酵素の生産量が顕著に向上することは、全く知られ
ていなかった。
【０００９】
【課題を解決するための手段】即ち本発明は、バリダマ
イシンを含有する培地中で二糖類ホスホリラーゼ生産能
を有する微生物を培養し、生成した二糖類ホスホリラー
ゼを回収することを特徴とする二糖類ホスホリラーゼの
製造方法に関する。
イシンを含有する培地中で二糖類ホスホリラーゼ生産能
を有する微生物を培養し、生成した二糖類ホスホリラー
ゼを回収することを特徴とする二糖類ホスホリラーゼの
製造方法に関する。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明は、二糖類ホスホリラーゼ
の製造方法に関し、二糖類ホスホリラーゼとしては、例
えば、トレハロースホスホリラーゼ及び／又はマルトー
スホスホリラーゼを挙げることができる。さらに本発明
の製造方法では、バリダマイシンを含有する培地を用い
る。バリダマイシンは、農業用抗生物質として広く用い
られており、それらはＡ〜Ｆの６種の構造異性体があ
り、通常それらの混合物として市販品を入手することが
できる。また、本発明にはバリタマイシン基本骨格であ
るバリダマイシルアミンも使用することができ、本発明
においてバリタマイシンは、バリダマイシルアミンも包
含する。培地に添加するバリダマイシンの量は、用いる
微生物の生育を抑制しない範囲で選択すれば良く、培地
全体に対して、通常約０．０００１〜０．５０％（ｗ／
ｖ）、好ましくは０．０２〜０．１０％（ｗ／ｖ）の範
囲が効果的である。
の製造方法に関し、二糖類ホスホリラーゼとしては、例
えば、トレハロースホスホリラーゼ及び／又はマルトー
スホスホリラーゼを挙げることができる。さらに本発明
の製造方法では、バリダマイシンを含有する培地を用い
る。バリダマイシンは、農業用抗生物質として広く用い
られており、それらはＡ〜Ｆの６種の構造異性体があ
り、通常それらの混合物として市販品を入手することが
できる。また、本発明にはバリタマイシン基本骨格であ
るバリダマイシルアミンも使用することができ、本発明
においてバリタマイシンは、バリダマイシルアミンも包
含する。培地に添加するバリダマイシンの量は、用いる
微生物の生育を抑制しない範囲で選択すれば良く、培地
全体に対して、通常約０．０００１〜０．５０％（ｗ／
ｖ）、好ましくは０．０２〜０．１０％（ｗ／ｖ）の範
囲が効果的である。
【００１１】二糖類ホスホリラーゼ生産能を有する微生
物は、例えば、トレハロースホスホリラーゼ生産能を有
する微生物、マルトースホスホリラーゼ生産能を有する
微生物、またはトレハロースホスホリラーゼ及びマルト
ースホスホリラーゼ生産能を有する微生物であることが
できる。具体的には、トレハロースホスホリラーゼ及び
マルトースホスホリラーゼ生産能を有する微生物とし
て、例えば、プレシオモナス（Plesiomonas）属に属す
る微生物を挙げることができ、プレシオモナス（Plesio
monas）属に属する微生物としては、プレシオモナスSH-
35株（生命研条寄第５１４４号）を挙げることができ
る。但し、これに限られない。
物は、例えば、トレハロースホスホリラーゼ生産能を有
する微生物、マルトースホスホリラーゼ生産能を有する
微生物、またはトレハロースホスホリラーゼ及びマルト
ースホスホリラーゼ生産能を有する微生物であることが
できる。具体的には、トレハロースホスホリラーゼ及び
マルトースホスホリラーゼ生産能を有する微生物とし
て、例えば、プレシオモナス（Plesiomonas）属に属す
る微生物を挙げることができ、プレシオモナス（Plesio
monas）属に属する微生物としては、プレシオモナスSH-
35株（生命研条寄第５１４４号）を挙げることができ
る。但し、これに限られない。
【００１２】また、トレハロースホスホリラーゼ生産能
を有する微生物としては、例えば、ユーグレナ（Euglen
a）属、フラムリナ（Flammulina）属、ブラジヒゾビウ
ム（Bradyhizobium）属、アクチノマデュラ（Ａｃｔｉ
ｎｏｍａｄｕｒａ）属、アミコラータ（Ａｍｙｃｏｌａ
ｔａ）属及びキネオスポリア（Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉ
ａ）属に属する微生物を挙げることができる。ユーグレ
ナ（Euglena）属、フラムリナ（Flammulina）属に属す
る微生物は前述のとおりである。アクチノマデュラ（Ａ
ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）属、アミコラータ（Ａｍｙｃ
ｏｌａｔａ）属及びキネオスポリア（Ｋｉｎｅｏｓｐｏ
ｒｉａ）属に属する微生物は、より具体的には、アクチ
ノマデュラ・ルテオフルオレッセンス（Ａｃｔｉｎｏｍ
ａｄｕｒａ ｌｕｔｅｏｆｌｕｏｒｅｓｅｎｓ、ＡＴＣ
Ｃ２５４６９）、アクチノマデュラ・ベルコソスポラ
（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｖｅｒｒｕｃｏｓｏｓｐ
ｏｒａ、ＡＴＣＣ２７２９９）、アミコラッタ・オート
ロフィリカ（Ａｍｙｃｏｌａｔａ ａｕｔｏｒｏｐｈｉ
ｌｉｃａ、ＡＴＣＣ１９７２７）、キネオスポリアオー
ランチアカ（Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉａ ａｕｒａｎｔｉ
ａｃａ、ＡＴＣＣ２９７２７）を挙げることができる。
但し、これらに限定されない。
を有する微生物としては、例えば、ユーグレナ（Euglen
a）属、フラムリナ（Flammulina）属、ブラジヒゾビウ
ム（Bradyhizobium）属、アクチノマデュラ（Ａｃｔｉ
ｎｏｍａｄｕｒａ）属、アミコラータ（Ａｍｙｃｏｌａ
ｔａ）属及びキネオスポリア（Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉ
ａ）属に属する微生物を挙げることができる。ユーグレ
ナ（Euglena）属、フラムリナ（Flammulina）属に属す
る微生物は前述のとおりである。アクチノマデュラ（Ａ
ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）属、アミコラータ（Ａｍｙｃ
ｏｌａｔａ）属及びキネオスポリア（Ｋｉｎｅｏｓｐｏ
ｒｉａ）属に属する微生物は、より具体的には、アクチ
ノマデュラ・ルテオフルオレッセンス（Ａｃｔｉｎｏｍ
ａｄｕｒａ ｌｕｔｅｏｆｌｕｏｒｅｓｅｎｓ、ＡＴＣ
Ｃ２５４６９）、アクチノマデュラ・ベルコソスポラ
（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｖｅｒｒｕｃｏｓｏｓｐ
ｏｒａ、ＡＴＣＣ２７２９９）、アミコラッタ・オート
ロフィリカ（Ａｍｙｃｏｌａｔａ ａｕｔｏｒｏｐｈｉ
ｌｉｃａ、ＡＴＣＣ１９７２７）、キネオスポリアオー
ランチアカ（Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉａ ａｕｒａｎｔｉ
ａｃａ、ＡＴＣＣ２９７２７）を挙げることができる。
但し、これらに限定されない。
【００１３】さらに、マルトースホスホリラーゼ生産能
を有する微生物としては、ナイセリア（Neiserria）
属、、ストレプトコッカス(Streptococcus) 、エントロ
コッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトバチ
ルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属及びロイコノス
トック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属に属する微生物を
挙げることができる。ナイセリア（Neiserria）属、、
ストレプトコッカス(Streptococcus)に属する微生物の
例は上述のとおりである。また、エントロコッカス（Ｅ
ｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトバチルス（Ｌａｃ
ｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属及びロイコノストック（Ｌｅ
ｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属に属する微生物は、より具体的
には、エントロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ
ｓｐ．、ＡＴＣＣ１０５４１）、ラクロバチルス マリ
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍａｌｉ、ＡＴＣＣ２
７０５３）、ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillu
s brevis IFO3345）、ロイコノストック メッセンテ
ロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒ
ｏｉｄｅｓ ＡＴＣＣ１０８３０）を挙げることができ
る。但し、これらに限定されない。
を有する微生物としては、ナイセリア（Neiserria）
属、、ストレプトコッカス(Streptococcus) 、エントロ
コッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトバチ
ルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属及びロイコノス
トック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属に属する微生物を
挙げることができる。ナイセリア（Neiserria）属、、
ストレプトコッカス(Streptococcus)に属する微生物の
例は上述のとおりである。また、エントロコッカス（Ｅ
ｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトバチルス（Ｌａｃ
ｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属及びロイコノストック（Ｌｅ
ｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属に属する微生物は、より具体的
には、エントロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ
ｓｐ．、ＡＴＣＣ１０５４１）、ラクロバチルス マリ
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍａｌｉ、ＡＴＣＣ２
７０５３）、ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillu
s brevis IFO3345）、ロイコノストック メッセンテ
ロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒ
ｏｉｄｅｓ ＡＴＣＣ１０８３０）を挙げることができ
る。但し、これらに限定されない。
【００１４】バリダマイシンは、予め培地に添加してお
くことが好ましい。また、培養に用いられる培地の栄養
源としては、菌株が利用し得る、炭素源、窒素源、無機
塩類、有機酸塩及び微量栄養素を用いることができる。
例えば、炭素源としては、マルトース、トレハロース、
グルコース、シュークロース、ガラクトース、ラクトー
ス、でんぷん等が用いられ、該菌体が利用し得る炭素源
であれば制限されるものではない。窒素源としては、例
えば各種アンモニウム塩（硫安、硝安、塩安、燐安）、
コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、大豆粉、尿素などの無機または有機の窒
素化合物が上げられる。又、無機塩類としては、カリウ
ム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、マン
ガン、コバルト、亜鉛及び燐酸の塩類が用いられる。
くことが好ましい。また、培養に用いられる培地の栄養
源としては、菌株が利用し得る、炭素源、窒素源、無機
塩類、有機酸塩及び微量栄養素を用いることができる。
例えば、炭素源としては、マルトース、トレハロース、
グルコース、シュークロース、ガラクトース、ラクトー
ス、でんぷん等が用いられ、該菌体が利用し得る炭素源
であれば制限されるものではない。窒素源としては、例
えば各種アンモニウム塩（硫安、硝安、塩安、燐安）、
コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、大豆粉、尿素などの無機または有機の窒
素化合物が上げられる。又、無機塩類としては、カリウ
ム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、マン
ガン、コバルト、亜鉛及び燐酸の塩類が用いられる。
【００１５】培養の手段は、静置培養でも振とう培養あ
るいは通気攪拌培養などを用いても良い。勿論、菌株の
種類等によって異なり、要するに目的物が最も効率よく
生産するように個々の場合に応じて選択すればよい。
るいは通気攪拌培養などを用いても良い。勿論、菌株の
種類等によって異なり、要するに目的物が最も効率よく
生産するように個々の場合に応じて選択すればよい。
【００１６】超音波処理、又は溶菌酵素処理で各酵素
は、常法により単離することが出来る。さらに、菌体か
ら酵素を抽出することで、粗酵素を回収することもでき
る。また、菌体外の培養上清中にも酵素は含まれてお
り、菌体を分離した残りの培養液を粗酵素含有液として
利用できる。さらに、これら粗酵素は、エタノール、ア
セトン、イソプロパノール等による溶媒沈殿法、硫安分
画法、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルクロマトグ
ラフィー等の通常の方法を用いて、精製することが出来
る。
は、常法により単離することが出来る。さらに、菌体か
ら酵素を抽出することで、粗酵素を回収することもでき
る。また、菌体外の培養上清中にも酵素は含まれてお
り、菌体を分離した残りの培養液を粗酵素含有液として
利用できる。さらに、これら粗酵素は、エタノール、ア
セトン、イソプロパノール等による溶媒沈殿法、硫安分
画法、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルクロマトグ
ラフィー等の通常の方法を用いて、精製することが出来
る。
【００１７】酵素活性測定法 分解反応：５０ｍＭの燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解
した２０ｍＭのマルトースもしくはトレハロース溶液
０．５ｍｌに酵素液０．０１ｍｌを添加し、５０℃で１
５分間反応させた後、沸騰水浴中で３分間加熱して、酵
素反応を止める。次いで、流水中で冷却した後、生成し
たグルコースをグルコースオキシダーゼ法（和光純薬工
業製、グルコースＣ−ＩＩテストワコー）で測定する。
ここで１単位の酵素活性は、同条件化で１分間に１μmo
l（マイクロモル）のグルコースを生成する酵素量とす
る。
した２０ｍＭのマルトースもしくはトレハロース溶液
０．５ｍｌに酵素液０．０１ｍｌを添加し、５０℃で１
５分間反応させた後、沸騰水浴中で３分間加熱して、酵
素反応を止める。次いで、流水中で冷却した後、生成し
たグルコースをグルコースオキシダーゼ法（和光純薬工
業製、グルコースＣ−ＩＩテストワコー）で測定する。
ここで１単位の酵素活性は、同条件化で１分間に１μmo
l（マイクロモル）のグルコースを生成する酵素量とす
る。
【００１８】
【実施例】以下に、実施例を挙げて、本発明を具体的に
説明する。 実施例１菌体内及び菌体外トレハロースホスホリラーゼ及び／又
はマルトースホスホリラーゼの製造 プレシオモナスＳＨ３５株（生命研条寄第５１４４号）
を、トレハロース１．６５％（ｗ／ｖ）、大豆ペプチド
（ハイニュートＳＭＳ、不二製油）２．０％、酵母エキ
ス（ＲＢ−２、サッポロビール）１．５％、尿素０．３
％、硝酸アンモニウム０．２％、燐酸２カリウム０．３
％、硫酸マグネシウム０．０２％、塩化マンガン３０ｍ
ｇ／ｌを含むｐＨ８．０の液体培地に植菌した。次に、
この液体培地２５ｍｌに各菌体を植菌し、を３７℃で２
４時間１８０ｒｐｍで振とうし、好気的に培養した。培
養液に最初から各種濃度のバリダマイシンを添加したも
のと、又比較例としてバリダマイシンを添加せずに同様
に培養したものを調製した。このように培養して得られ
た培養液を超音波菌体破砕機で処理し、菌体を破壊、次
いで該破砕菌体懸濁液１ｍｌ当たりの該酵素活性を測定
した。その結果、表１に示すように、バリダマイシン添
加によって、該酵素生産性が向上した。
説明する。 実施例１菌体内及び菌体外トレハロースホスホリラーゼ及び／又
はマルトースホスホリラーゼの製造 プレシオモナスＳＨ３５株（生命研条寄第５１４４号）
を、トレハロース１．６５％（ｗ／ｖ）、大豆ペプチド
（ハイニュートＳＭＳ、不二製油）２．０％、酵母エキ
ス（ＲＢ−２、サッポロビール）１．５％、尿素０．３
％、硝酸アンモニウム０．２％、燐酸２カリウム０．３
％、硫酸マグネシウム０．０２％、塩化マンガン３０ｍ
ｇ／ｌを含むｐＨ８．０の液体培地に植菌した。次に、
この液体培地２５ｍｌに各菌体を植菌し、を３７℃で２
４時間１８０ｒｐｍで振とうし、好気的に培養した。培
養液に最初から各種濃度のバリダマイシンを添加したも
のと、又比較例としてバリダマイシンを添加せずに同様
に培養したものを調製した。このように培養して得られ
た培養液を超音波菌体破砕機で処理し、菌体を破壊、次
いで該破砕菌体懸濁液１ｍｌ当たりの該酵素活性を測定
した。その結果、表１に示すように、バリダマイシン添
加によって、該酵素生産性が向上した。
【００１９】
【表１】
【００２０】実施例２トレハロースホスホリラーゼの製造 アクチノマデュラ・ルテオフルオレッセンス（Ａｃｔｉ
ｎｏｍａｄｕｒａ ｌｕｔｅｏｆｌｕｏｒｅｓｅｎｓ、
ＡＴＣＣ２５４６９）、アクチノマデュラ・ベルコソス
ポラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｖｅｒｒｕｃｏｓｏ
ｓｐｏｒａ、ＡＴＣＣ２７２９９）、アミコラータ・オ
ートロフィリカ（Ａｍｙｃｏｌａｔａａｕｔｏｒｏｐｈ
ｉｌｉｃａ、ＡＴＣＣ１９７２７）、キネオスポリア
オーランチアカ、Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉａ ａｕｒａｎ
ｔｉａｃａ）を、トレハロース１．０％（ｗ／ｖ）、ペ
プトン０．２％、肉エキス０．１％、酵母エキス０．１
％を含むｐＨ７．２の液体培地に植菌した。
ｎｏｍａｄｕｒａ ｌｕｔｅｏｆｌｕｏｒｅｓｅｎｓ、
ＡＴＣＣ２５４６９）、アクチノマデュラ・ベルコソス
ポラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｖｅｒｒｕｃｏｓｏ
ｓｐｏｒａ、ＡＴＣＣ２７２９９）、アミコラータ・オ
ートロフィリカ（Ａｍｙｃｏｌａｔａａｕｔｏｒｏｐｈ
ｉｌｉｃａ、ＡＴＣＣ１９７２７）、キネオスポリア
オーランチアカ、Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉａ ａｕｒａｎ
ｔｉａｃａ）を、トレハロース１．０％（ｗ／ｖ）、ペ
プトン０．２％、肉エキス０．１％、酵母エキス０．１
％を含むｐＨ７．２の液体培地に植菌した。
【００２１】次に、この液体培地２５ｍｌに各菌体を植
菌し、２８℃で４日間、１８０ｒｐｍで振とうし、好気
的に培養した。培養液に最初から０．０２％のバリダマ
イシンを添加したものと、又比較例としてバリダマイシ
ンを添加せずに同様に培養したものを調製した。このよ
うに培養して得られた培養液を超音波菌体破砕機で処理
し、菌体を破壊、次いで該破砕菌体懸濁液１ｍｌ当たり
の該酵素活性を測定した。その結果、表２に示すよう
に、バリダマイシン添加によって、該酵素生産性が向上
した。
菌し、２８℃で４日間、１８０ｒｐｍで振とうし、好気
的に培養した。培養液に最初から０．０２％のバリダマ
イシンを添加したものと、又比較例としてバリダマイシ
ンを添加せずに同様に培養したものを調製した。このよ
うに培養して得られた培養液を超音波菌体破砕機で処理
し、菌体を破壊、次いで該破砕菌体懸濁液１ｍｌ当たり
の該酵素活性を測定した。その結果、表２に示すよう
に、バリダマイシン添加によって、該酵素生産性が向上
した。
【００２２】
【表２】
【００２３】実施例３マルトースホスホリラーゼの製造 エントロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓ
ｐ．、ＡＴＣＣ１０５４１）、ラクロバチルス マリ
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍａｌｉ、ＡＴＣＣ２
７０５３）、ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillu
s brevis）IFO3345、ロイコノストック・メッセンテロ
イデス（Leuconostoc mesenteroides）をシュークロー
ス２．０％（ｗ／ｖ）、トリプトン１．０％、ｙｅａｓ
ｔ ｅｘｔｒａｃｔ１．０％、燐酸２カリウム０．５
％、硫酸マグネシウム０．０４％、硫化鉄０．００１
％、硫化マンガン０．００１％、ビタミンＣ０．００５
％を含むｐＨ７．５の液体培地に植菌した。
ｐ．、ＡＴＣＣ１０５４１）、ラクロバチルス マリ
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍａｌｉ、ＡＴＣＣ２
７０５３）、ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillu
s brevis）IFO3345、ロイコノストック・メッセンテロ
イデス（Leuconostoc mesenteroides）をシュークロー
ス２．０％（ｗ／ｖ）、トリプトン１．０％、ｙｅａｓ
ｔ ｅｘｔｒａｃｔ１．０％、燐酸２カリウム０．５
％、硫酸マグネシウム０．０４％、硫化鉄０．００１
％、硫化マンガン０．００１％、ビタミンＣ０．００５
％を含むｐＨ７．５の液体培地に植菌した。
【００２４】次に、この液体培地２５ｍｌに各菌体を植
菌し、３０℃で１〜２日間嫌気的に培養した。培養液に
最初から０．０２％のバリダマイシンを添加したもの
と、又比較例としてバリダマイシンを添加せずに同様に
培養したものを調製した。このように培養して得られた
培養液を超音波菌体破砕機で処理し、菌体を破壊、次い
で該破砕菌体懸濁液１ｍｌ当たりの該酵素活性を測定し
た。その結果、表３に示すように、バリダマイシン添加
によって、該酵素生産性が向上した。
菌し、３０℃で１〜２日間嫌気的に培養した。培養液に
最初から０．０２％のバリダマイシンを添加したもの
と、又比較例としてバリダマイシンを添加せずに同様に
培養したものを調製した。このように培養して得られた
培養液を超音波菌体破砕機で処理し、菌体を破壊、次い
で該破砕菌体懸濁液１ｍｌ当たりの該酵素活性を測定し
た。その結果、表３に示すように、バリダマイシン添加
によって、該酵素生産性が向上した。
【００２５】
【表３】
【００２６】
【発明の効果】本発明によれば、高単位のトレハロース
ホスホリラーゼやマルトースホスホリラーゼを含有する
培養液を容易に製造し、トレハロースホスホリラーゼや
マルトースホスホリラーゼのような二糖類ホスホリラー
ゼをより高い収率で製造できる方法を提供することがで
きる。
ホスホリラーゼやマルトースホスホリラーゼを含有する
培養液を容易に製造し、トレハロースホスホリラーゼや
マルトースホスホリラーゼのような二糖類ホスホリラー
ゼをより高い収率で製造できる方法を提供することがで
きる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 9/12 Ｃ１２Ｒ 1:36） (Ｃ１２Ｎ 9/12 Ｃ１２Ｒ 1:24）
Claims (9)
- 【請求項１】 バリダマイシンを含有する培地中で二糖
類ホスホリラーゼ生産能を有する微生物を培養し、生成
した二糖類ホスホリラーゼを回収することを特徴とする
二糖類ホスホリラーゼの製造方法。 - 【請求項２】 二糖類ホスホリラーゼがトレハロースホ
スホリラーゼ及びマルトースホスホリラーゼからなる群
から選ばれる少なくとも１種である請求項１に記載の製
造方法。 - 【請求項３】 二糖類ホスホリラーゼ生産能を有する微
生物が、トレハロースホスホリラーゼ生産能を有する微
生物、マルトースホスホリラーゼ生産能を有する微生
物、またはトレハロースホスホリラーゼ及びマルトース
ホスホリラーゼ生産能を有する微生物である請求項１ま
たは２に記載の製造方法。 - 【請求項４】 トレハロースホスホリラーゼ及びマルト
ースホスホリラーゼ生産能を有する微生物が、プレシオ
モナス（Plesiomonas）属に属する微生物である請求項
１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。 - 【請求項５】 プレシオモナス（Plesiomonas）属に属
する微生物がプレシオモナスSH-35株（生命研条寄第５
１４４号）である請求項４に記載の製造方法。 - 【請求項６】 トレハロースホスホリラーゼ生産能を有
する微生物が、ユーグレナ（Euglena）属、フラムリナ
（Flammulina）属、ブラジヒゾビウム （Bradyhizobiu
m）属、アクチノマデュラ（Actinomadura）属、アミコ
ラータ（Amycolata）属及びキネオスポリア（Kineospor
ia）属に属する微生物である請求項１〜３のいずれか１
項に記載の製造方法。 - 【請求項７】 トレハロースホスホリラーゼ生産能を有
する微生物が、アクチノマデュラ（Actinomadura）属、
アミコラータ（Amycolata）属及びキネオスポリア（Kin
eosporia）属に属する微生物である請求項６に記載の製
造方法。 - 【請求項８】 マルトースホスホリラーゼ生産能を有す
る微生物が、ナイセリア（Neiserria）属、、ストレプ
トコッカス(Streptococcus) 、エントロコッカス（Ente
rococcus）属、ラクトバチルス（Lactobacillus）属及
びロイコノストック（Leuconostoc）属に属する微生物
である請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。 - 【請求項９】 マルトースホスホリラーゼ生産能を有す
る微生物が、エントロコッカス（Enterococcus）属、ラ
クトバチルス（Lactobacillus）属及びロイコノストッ
ク（Leuconostoc）属に属する微生物である請求項８に
記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25322197A JPH1189566A (ja) | 1997-09-18 | 1997-09-18 | 二糖類ホスホリラーゼの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25322197A JPH1189566A (ja) | 1997-09-18 | 1997-09-18 | 二糖類ホスホリラーゼの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1189566A true JPH1189566A (ja) | 1999-04-06 |
Family
ID=17248258
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25322197A Pending JPH1189566A (ja) | 1997-09-18 | 1997-09-18 | 二糖類ホスホリラーゼの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1189566A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004108913A1 (ja) * | 2003-06-06 | 2004-12-16 | Kao Corporation | ホスホリラーゼの製造法 |
| JP2005013228A (ja) * | 2003-06-06 | 2005-01-20 | Kao Corp | ホスホリラーゼの製造法 |
-
1997
- 1997-09-18 JP JP25322197A patent/JPH1189566A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004108913A1 (ja) * | 2003-06-06 | 2004-12-16 | Kao Corporation | ホスホリラーゼの製造法 |
| JP2005013228A (ja) * | 2003-06-06 | 2005-01-20 | Kao Corp | ホスホリラーゼの製造法 |
| US7413886B2 (en) | 2003-06-06 | 2008-08-19 | Kao Corporation | Process for producing phosphorylase |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5900370A (en) | Process for the production of ascorbic acid with prototheca | |
| JP3523285B2 (ja) | 糖分解酵素の製造法 | |
| JP3951008B2 (ja) | カプサイシン分解合成酵素及びその生産方法 | |
| JP3691875B2 (ja) | 耐熱性マルトースホスホリラーゼ、その製造方法、その製造に使用する菌、および該酵素の使用方法 | |
| CN102586383B (zh) | 胞磷胆碱的制备方法 | |
| JP3761236B2 (ja) | 新規なβ−グルコシダーゼ、その製造法および用途 | |
| JP2695180B2 (ja) | アスコルビン酸−２−リン酸の製造法 | |
| JP3634883B2 (ja) | 耐熱性トレハロースホスホリラーゼ、その製造方法、その製造に使用する菌、及び該酵素を用いるトレハロースの製造方法 | |
| JP2926249B2 (ja) | アルギン酸リアーゼの製造法 | |
| JP3076856B2 (ja) | 細菌によるアルギン酸の分解法 | |
| JP5010291B2 (ja) | 新規ウリカーゼの製造方法 | |
| KR890001127B1 (ko) | 푸럭토 올리고(Fructo-oligo)당의 제조방법 | |
| JPS58201992A (ja) | 微生物によるβ−置換プロピオン酸またはそのアミドの製造法 | |
| Elshafei | Degradation of some sugars and sugar acids by the nonphosphorylated D‐gluconate pathway in Aspergillus ustus | |
| JP2001069975A (ja) | キトサナーゼ | |
| JP3040976B2 (ja) | トレハロースを含有する糖化液の製造方法 | |
| JPH1042886A (ja) | 微生物によるβ−アラニンの製造法 | |
| JP4439153B2 (ja) | 耐熱性マンノースイソメラーゼ及び該酵素を用いたマンノースの製造法 | |
| JP3802590B2 (ja) | マルトースホスホリラーゼおよびトレハロースホスホリラーゼ並びにこれら酵素の生産能を有するプレシオモナス属新菌株 | |
| JPS6228678B2 (ja) | ||
| JP3917723B2 (ja) | ラクトン加水分解酵素およびその製造法 | |
| JPH05137572A (ja) | 耐熱性アデノシン−５’−３リン酸スルフリラーゼ及びその製造法 | |
| JPH0797987B2 (ja) | 新規なβ−アガラーゼ及びその製造法 | |
| JPH04211369A (ja) | 好塩性アルカリアミラーゼおよびその製造方法 | |
| JP2001245691A (ja) | マンノースイソメラーゼによるマンノースの製造方法及び該マンノースイソメラーゼの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Effective date: 20040916 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20061101 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20070306 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |