JPH01202277A - 食品の変敗防止方法 - Google Patents
食品の変敗防止方法Info
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- JPH01202277A JPH01202277A JP63027397A JP2739788A JPH01202277A JP H01202277 A JPH01202277 A JP H01202277A JP 63027397 A JP63027397 A JP 63027397A JP 2739788 A JP2739788 A JP 2739788A JP H01202277 A JPH01202277 A JP H01202277A
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- Japan
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- food
- bacteriocin
- spoilage
- preventing
- pediococcus
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23B—PRESERVATION OF FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES
- A23B2/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general
- A23B2/70—Preservation of foods or foodstuffs, in general by treatment with chemicals
- A23B2/725—Preservation of foods or foodstuffs, in general by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
- A23B2/729—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23B2/783—Microorganisms; Enzymes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
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- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
微生物の寄託
この発明を実施するのに使用される好適したバクテリオ
シンは、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関す
るブダペスト条約の規定に基いてアメリカ合衆国、イリ
ノイ州、ペオリア、アスダのノーサン０リイジヨナル・
リサーチ・ラボラトリ−（Ｎｏｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏ
ｎａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ）
に寄託されているペジオコツクス・アシデイラフティシ
イ （Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉ
ｃｉ ） ＮＲＲＩ−−Ｂ −１８０５０によって生
産される。
シンは、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関す
るブダペスト条約の規定に基いてアメリカ合衆国、イリ
ノイ州、ペオリア、アスダのノーサン０リイジヨナル・
リサーチ・ラボラトリ−（Ｎｏｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏ
ｎａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ）
に寄託されているペジオコツクス・アシデイラフティシ
イ （Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉ
ｃｉ ） ＮＲＲＩ−−Ｂ −１８０５０によって生
産される。
産業上の利用分野
この発明はグラム陽性菌、特に乳酸桿菌による食品Ｏ変
敗を防止するのにバクテリオシン（ｂａｃ −ｔｅｒｉ
ｏｃＩｎ ） を用いる食品の変敗防止法に関するもの
である。またこの発明は特に、冷蔵さ扛るサラダ用のド
レッシング中にペジオコツクス・アシデイラフティシイ
（ＰｅｄｉｑｃｏｃＣｕｓ−ａｃｊｄｊｊｐ、ｃｔｊ
ｃｉ−） Ｎ ＲＲＬ−Ｂ−１８０５０（ＰＡＣｌ、０
）によって生産されるバクテリオシンを添加する変敗防
止法に係る。
敗を防止するのにバクテリオシン（ｂａｃ −ｔｅｒｉ
ｏｃＩｎ ） を用いる食品の変敗防止法に関するもの
である。またこの発明は特に、冷蔵さ扛るサラダ用のド
レッシング中にペジオコツクス・アシデイラフティシイ
（ＰｅｄｉｑｃｏｃＣｕｓ−ａｃｊｄｊｊｐ、ｃｔｊ
ｃｉ−） Ｎ ＲＲＬ−Ｂ−１８０５０（ＰＡＣｌ、０
）によって生産されるバクテリオシンを添加する変敗防
止法に係る。
従来の技術
ペジオコツクス属はグラム陽性でホモ型発酵性の乳酸菌
の一群であり、これらの細菌は乳酸生産菌に対する阻害
物質であるバクテリオシン生産性ずることが知られてい
る。該微生物は腐生的に野菜類において見い出される（
Ｍｕｎｄｔ 、Ｊ、０．、 Ｗ、Ｇ。
の一群であり、これらの細菌は乳酸生産菌に対する阻害
物質であるバクテリオシン生産性ずることが知られてい
る。該微生物は腐生的に野菜類において見い出される（
Ｍｕｎｄｔ 、Ｊ、０．、 Ｗ、Ｇ。
Ｂａｔｔｉｅ及びＦ、Ｒ，Ｗｅｉｌａｎｄ 、 Ｊ 、
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ 、 ９８．９３８−９４２（１９
６９））。産業上においてペジオコツクス属の細菌は野
菜類の発酵（Ｐｅｄｅｒｓｏｎ 、Ｃ、Ｓ 、 、Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌ 。
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ 、 ９８．９３８−９４２（１９
６９））。産業上においてペジオコツクス属の細菌は野
菜類の発酵（Ｐｅｄｅｒｓｏｎ 、Ｃ、Ｓ 、 、Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌ 。
Ｒｅｖ 、 １３．２２５−２３２ （１９４９） ）
及び肉類の発酵■１ｅｂｅｌ。
及び肉類の発酵■１ｅｂｅｌ。
Ｒ，Ｈ，、Ｇ、Ｄ、Ｗｉｌｓｏｎ及びＣ、Ｆ 、 Ｎ１
ｖｅｎ 、 Ｊｒ 、 ＩＡＩ）ｐｌ、Ｍｉｃｒｏ−ｂ
ｉｏｌ 、 ９ 、２３９−２４３ （１９６１） 、
Ｓｍ１ｔｈ 、 Ｊ 、Ｌ、及びＳ、Ａ。
ｖｅｎ 、 Ｊｒ 、 ＩＡＩ）ｐｌ、Ｍｉｃｒｏ−ｂ
ｉｏｌ 、 ９ 、２３９−２４３ （１９６１） 、
Ｓｍ１ｔｈ 、 Ｊ 、Ｌ、及びＳ、Ａ。
Ｐａ１ｕｎｂｏ 、Ｊ 、Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔ 、４６
、９９７−１００６ （１９８３））においてｉＬ要
である。
、９９７−１００６ （１９８３））においてｉＬ要
である。
ペジオコツクス属の細菌中にはプラスミドＤＮＡが存在
することが示されている（ Ｇｏｎｚａｌｅｚ 、Ｃ、
Ｆ。
することが示されている（ Ｇｏｎｚａｌｅｚ 、Ｃ、
Ｆ。
及びＢ、Ｓ、Ｋｕｎｄａ 、Ａｐｐｌ、 Ｅｎｖｉｒｏ
ｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 、 ４６ 。
ｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 、 ４６ 。
８１−８９゜Ｇｏｎｚａｌｅｚ、 Ｃ、Ｆ 、及びＢ、
Ｓ 、Ｋｕｎｄａ 、 Ａｐｐｌ、Ｅｎ−ｖｉｒｏｎ、
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ 、５１ 、１０５−１０９ （１
９８６）。Ｄａｅｓｃｈｅｌ 。
Ｓ 、Ｋｕｎｄａ 、 Ａｐｐｌ、Ｅｎ−ｖｉｒｏｎ、
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ 、５１ 、１０５−１０９ （１
９８６）。Ｄａｅｓｃｈｅｌ 。
Ｍ、及びＴ、Ｒ，に１ａｅｎｈａｍｍｅｒ 、Ａｐｐｌ
、Ｅｎｖｉｒｏｎ 、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。
、Ｅｎｖｉｒｏｎ 、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。
５０．１５３８−１５４１（１９８５）。Ｇｒａｈａｍ
、Ｄ、Ｃ，及びり、Ｌ。
、Ｄ、Ｃ，及びり、Ｌ。
Ｍｃｋａｙ、Ａｐｐｌ 、Ｅｎｖｉｒｏｎ、Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ 、 ５０．５３２−５３４（１９８５） ）
。またバクテリオシンとプラスミドＤＮＡとの共生が、
ペジオコツクス・ベントサセウス（カ史四曽凄脛ｏｓａ
ｃｅｕｓ、）株及びペジオコツクス・セレビシェ−（Ｐ
ｅｄｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃｅｒｅｖｌｓｉａｅ）株ＧＣ
オいてそれぞれ見出されている（ Ｄａｅｓｃｈｅｌ
、 Ｍ汲びＴ。
ｂｉｏｌ 、 ５０．５３２−５３４（１９８５） ）
。またバクテリオシンとプラスミドＤＮＡとの共生が、
ペジオコツクス・ベントサセウス（カ史四曽凄脛ｏｓａ
ｃｅｕｓ、）株及びペジオコツクス・セレビシェ−（Ｐ
ｅｄｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃｅｒｅｖｌｓｉａｅ）株ＧＣ
オいてそれぞれ見出されている（ Ｄａｅｓｃｈｅｌ
、 Ｍ汲びＴ。
Ｒ、Ｋｌａｅｎｈａｍｍｅｒ 、 Ａｐｐｌ 、 Ｅｎ
ｖｉｒｏｎ 、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ 、５０ 、１５
３８−１５４１（１９８５）、Ｇｒａｈａｍ、Ｄ、Ｃ，
及びＬ 、 Ｌ 、 Ｍｃｋａｙ 、Ａｐ−ｐｌ、 Ｅ
ｎｖＩｒｏｎ、Ｍｌｃｒｏｂｌｏｌ、５０ 、５３２−
５３４ （１９８５） ）。
ｖｉｒｏｎ 、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ 、５０ 、１５
３８−１５４１（１９８５）、Ｇｒａｈａｍ、Ｄ、Ｃ，
及びＬ 、 Ｌ 、 Ｍｃｋａｙ 、Ａｐ−ｐｌ、 Ｅ
ｎｖＩｒｏｎ、Ｍｌｃｒｏｂｌｏｌ、５０ 、５３２−
５３４ （１９８５） ）。
バクテリオシンの食品、特にサラダ用ドレッシング及び
該ドレッシングを含む食品、中での利用について、従来
技術は何も示唆していない。
該ドレッシングを含む食品、中での利用について、従来
技術は何も示唆していない。
発明課題
この発明はグラム陽性菌、特に乳酸桿菌（ラクトバチル
ス）による食品の変敗を阻止するバクテリオシンを提供
して、該バクテリオシンを利用して食品の変敗を防止す
る経済的で効果的な方法を提供することを目的とする。
ス）による食品の変敗を阻止するバクテリオシンを提供
して、該バクテリオシンを利用して食品の変敗を防止す
る経済的で効果的な方法を提供することを目的とする。
一般的な説明
この発明はグラム陽性菌による食品の変敗を防止する方
法に係り、バクテリオシン生産性のペジオコツクス（Ｐ
ｅｄｌｏｃｏｃｃｕｓ ）属の細菌から取出した変敗防
止性のバクテリオシンを食品中に有効量だけ添加するこ
とを特徴とする。
法に係り、バクテリオシン生産性のペジオコツクス（Ｐ
ｅｄｌｏｃｏｃｃｕｓ ）属の細菌から取出した変敗防
止性のバクテリオシンを食品中に有効量だけ添加するこ
とを特徴とする。
またこの発明はグラム陽性菌によシ変敗される食品素材
を含む食品であって、バクテリオシン生産性のペジオコ
ツクス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ）属の細胞から抽出
した変敗防止性のバクテリオシンを食品１グラム当り約
１０−１００，０ＯＯＡＵ有し、ペジオコツクス属の細
菌の生細胞を含まない変敗防止食品に係る。
を含む食品であって、バクテリオシン生産性のペジオコ
ツクス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ）属の細胞から抽出
した変敗防止性のバクテリオシンを食品１グラム当り約
１０−１００，０ＯＯＡＵ有し、ペジオコツクス属の細
菌の生細胞を含まない変敗防止食品に係る。
この発明の実施に当７？ｔ）用いるバクテリオシンとし
て好適したものは、前述したペジオコツクス・アシデイ
ラフティシイ （Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉ
ｌａｃｔｉｃｉ）ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０５０（ＰＡＣｌ
、０とも称する。）に工って生産される。ペジオコツク
ス・アシデイラフティシイは産業上、食肉の発酵に利用
されている菌株である。この菌株はバクテリオシン生産
遺伝情報を有する約６．２ＭＤａ（メガダルトン）のプ
ラスミドを含む。
て好適したものは、前述したペジオコツクス・アシデイ
ラフティシイ （Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉ
ｌａｃｔｉｃｉ）ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０５０（ＰＡＣｌ
、０とも称する。）に工って生産される。ペジオコツク
ス・アシデイラフティシイは産業上、食肉の発酵に利用
されている菌株である。この菌株はバクテリオシン生産
遺伝情報を有する約６．２ＭＤａ（メガダルトン）のプ
ラスミドを含む。
バクテリオシンを作製する最も簡単な方法は、細胞増殖
後に増殖培地を乾燥して粉体にすることである。バクテ
リオシンはたんばく質性の物質であり沈澱法によって、
或は逆浸透法のような他の公知の方法によって、増殖培
地から分離できる。
後に増殖培地を乾燥して粉体にすることである。バクテ
リオシンはたんばく質性の物質であり沈澱法によって、
或は逆浸透法のような他の公知の方法によって、増殖培
地から分離できる。
食品中に添加するバクテリオシンの望ましい量は、食品
１グラム当りｉ ｏ −ｉｏｏ、ｏｏｏ任意単位（Ａｒ
ｂｉｔｒａｒｙ Ｕｎｉｔ 、 ＡＵ ）である。ＩＡ
Ｕは寒天平板上のグラム陽性細菌の指示法（公式にはペ
ジオコツクス・セレビシェ−（Ｐｅ−ｄｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｃｅｒｅｖｌｓｉａｅ ）ＦＲＢ−６３として知ら
れているペジオコツクス・ベントサセウス（ヱ、−匹供
ｏｓａｃｅμｓ） ＦＢＢ−６３）の密生地（ｌａｗｎ
）について明確な生育阻止領域（ａｄｅｆｉｎｉｔｅ
ｚｏｎｅ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ １ｎｈｌｂｉｔｉｏｎ
）をなお生じさせるところの、培養物上澄液の最大限希
釈液（ｈｉｇｈｅｓｔｄｉｌｕｔｉｏｎ）の５ｕｌと、
定義され次。
１グラム当りｉ ｏ −ｉｏｏ、ｏｏｏ任意単位（Ａｒ
ｂｉｔｒａｒｙ Ｕｎｉｔ 、 ＡＵ ）である。ＩＡ
Ｕは寒天平板上のグラム陽性細菌の指示法（公式にはペ
ジオコツクス・セレビシェ−（Ｐｅ−ｄｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｃｅｒｅｖｌｓｉａｅ ）ＦＲＢ−６３として知ら
れているペジオコツクス・ベントサセウス（ヱ、−匹供
ｏｓａｃｅμｓ） ＦＢＢ−６３）の密生地（ｌａｗｎ
）について明確な生育阻止領域（ａｄｅｆｉｎｉｔｅ
ｚｏｎｅ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ １ｎｈｌｂｉｔｉｏｎ
）をなお生じさせるところの、培養物上澄液の最大限希
釈液（ｈｉｇｈｅｓｔｄｉｌｕｔｉｏｎ）の５ｕｌと、
定義され次。
本明細書で「食品（ｆｏｏｄ ｓｙｓｔｅｍ） ｊとは
サラダ用のドレッシング、及び該ドレッシングを添加さ
れたキャベツサラダ、マカロニサラダ、ポテトサラダ及
び他の野菜混合物を含む。ま友、乳酸桿菌（ラクトバチ
ルス）によって変敗を受ける何れの食品も含む。かかる
食品は普通、２℃から１８℃の温度で冷蔵して保存され
る。次に「変敗（ｓｐｏローａｇｅ） Ｊどは（１）、
望ましい感覚刺戟性の減少及び過剰量の乳酸の生成、ま
九酢酸とかジアセチル等の不所望の異臭を発生する化合
物の生成、（２）、ガス（ＣＯＤの発生、！３）−たん
ばく分解、＋４１．粘液化を、意味する。
サラダ用のドレッシング、及び該ドレッシングを添加さ
れたキャベツサラダ、マカロニサラダ、ポテトサラダ及
び他の野菜混合物を含む。ま友、乳酸桿菌（ラクトバチ
ルス）によって変敗を受ける何れの食品も含む。かかる
食品は普通、２℃から１８℃の温度で冷蔵して保存され
る。次に「変敗（ｓｐｏローａｇｅ） Ｊどは（１）、
望ましい感覚刺戟性の減少及び過剰量の乳酸の生成、ま
九酢酸とかジアセチル等の不所望の異臭を発生する化合
物の生成、（２）、ガス（ＣＯＤの発生、！３）−たん
ばく分解、＋４１．粘液化を、意味する。
変敗により食品は外観及びにおいを悪くする。
すな説明
以下の説明と実施例１は好ましいバクテリオシンの製造
と試験、及びサラダ用のドレッシング中で同バクテリオ
シンを使用することに係る。
と試験、及びサラダ用のドレッシング中で同バクテリオ
シンを使用することに係る。
菌株と培地：菌株１に第１表に掲げる。炭水化物の発酵
は培地ＢＭを用い、ゴンザレツ等（Ｇｏｎｚａｌｅｚ。
は培地ＢＭを用い、ゴンザレツ等（Ｇｏｎｚａｌｅｚ。
Ｃ，Ｆ汲びＢ、 Ｓ、Ｋｕｎｋａ 、 Ａｐｐｌ 、
Ｅｎｖｉｒｏｎ 、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、４６ 。
Ｅｎｖｉｒｏｎ 、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、４６ 。
８１−８９ （１９８３））に従って検定した。
プラスミドの単離と精製ニブラスミドＤＮＡ１単離し、
ＤＮＡ試料を寒天ゲル電気泳動法にかけた。後に説明す
る第１図にその結果が示されている。対照プラスミドＤ
ＮＡをゴンザレッ等（Ｇｏｎｚａｌｅｚ。
ＤＮＡ試料を寒天ゲル電気泳動法にかけた。後に説明す
る第１図にその結果が示されている。対照プラスミドＤ
ＮＡをゴンザレッ等（Ｇｏｎｚａｌｅｚ。
Ｃ，Ｆ、及びＢ、 Ｓ、 Ｋｕｎｋａ 、Ａｐｐｌ 、
Ｅｎｖｉｒｏｎ 、Ｍｉｃｒｏｂｌｏｌ 、 ４６
。
Ｅｎｖｉｒｏｎ 、Ｍｉｃｒｏｂｌｏｌ 、 ４６
。
８１−８９ （１９８３））に従って調製した。
養生試験：昇温下での生育によるプラスミド遺伝情報担
持特性の安定性とプラスミドＤＮＡの消失トについて、
ゴンザレツ等の方法（Ｇｏｎｚａｌｅｚ 。
持特性の安定性とプラスミドＤＮＡの消失トについて、
ゴンザレツ等の方法（Ｇｏｎｚａｌｅｚ 。
Ｃ，Ｆ、及びＢ、 Ｓ、 Ｋｕｎｋａ 、 Ａｐｐｌ
、 Ｅｎｖｌ ｒｏｎ 、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ 。
、 Ｅｎｖｌ ｒｏｎ 、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ 。
４６ 、８１−８９ （１９８３） ）で試験した。養
生突＠（ｃｕｒ−ｉｎｇ ｅＸｐｅｒｔｍｅｎｔｓ ）
に使用すべきＰＡＣＩ、ＯをＢＭ−ショ糖に画線接種し
た。単一の酸発酵菌集落を次いで、養生試験において使
用するために採取した。
生突＠（ｃｕｒ−ｉｎｇ ｅＸｐｅｒｔｍｅｎｔｓ ）
に使用すべきＰＡＣＩ、ＯをＢＭ−ショ糖に画線接種し
た。単一の酸発酵菌集落を次いで、養生試験において使
用するために採取した。
バクテリオシン生産性の表現型（Ｂａｃ”）を育生する
九めに、単離された集落を画線接種した平板から個別の
集落を採取して二重平板上に画線接種した。検定平板に
画線接種した単離集落から後述の方法によりＢａｃ＋表
現型をスクリーニングした。
九めに、単離された集落を画線接種した平板から個別の
集落を採取して二重平板上に画線接種した。検定平板に
画線接種した単離集落から後述の方法によりＢａｃ＋表
現型をスクリーニングした。
２枚目の平板は養生実験の九めの接種材料源として用い
た。細胞を４５℃、４７℃及び５０℃で１８時間、生育
させることによシ養生した。
た。細胞を４５℃、４７℃及び５０℃で１８時間、生育
させることによシ養生した。
バクテリオシンの検定：バクテリオシンの産生ｆ、ＭＲ
５寒天（アメリカ合衆国、ミシガン州、デトロイトのＤ
ｉｆｃｏ社製）上に細胞を滴下し３５℃で１８時間、培
養することにより検定した。検定平板をクロロホルム蒸
気に３０分間さらすことにより細胞を殺ろし、指示細胞
を接種しである軟寒天（０，７５％）Ｋ重ね友。これら
の平板について３２℃で１８時間、培養を行なった。明
確な阻止領域を生じさせる単離物をバクテリオシン生産
性のものとみなした。
５寒天（アメリカ合衆国、ミシガン州、デトロイトのＤ
ｉｆｃｏ社製）上に細胞を滴下し３５℃で１８時間、培
養することにより検定した。検定平板をクロロホルム蒸
気に３０分間さらすことにより細胞を殺ろし、指示細胞
を接種しである軟寒天（０，７５％）Ｋ重ね友。これら
の平板について３２℃で１８時間、培養を行なった。明
確な阻止領域を生じさせる単離物をバクテリオシン生産
性のものとみなした。
バクテリオシンの部分精弛： ＭＲＳブロス■ｉｆｃ。
社製）の４１に同じ培地で培養したＰＡＣＩ、０の８時
間培養物（６００ｎｍでの光学密度０．６０）の１チを
接種し、３５℃で１８時間、静置培養した。１８時間後
に培養物のｐＨｔ測定し、ｐＨを６．０に調整し友。細
胞を５°で１５分間、１６，３００ｘｇでの遠心分離に
より取除いた。上澄液ｉ０．４５μｍフィルター（アメ
リカ合衆国、マサチュウセツツ州、ベツドフォードのＭ
ｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ、製）で濾過した。濾過さ
れた上澄液についてバクテリオシンの活性を、指示株細
胞を接種されている軟寒天に重ねたＭＲ５平板上へと二
倍希釈法による一連の希釈物の５ａｌ宛全滴下して検定
した。検定平板について３２℃で培養を行なった。指示
菌株としてはペジオコツクス・セレビシェ−（Ｐ、ｃｅ
ｒｅｖｉｓｉａｅ） ＦＢＢ６３（Ｇｒａｈａｍ 、
Ｄ、 Ｃ，及びＬ−Ｌ、Ｍｃｋａｙ ＋ Ａｐｐｌ 、
Ｅｎｖ！ ｒｏｎ 、 Ｍｉ −ｃｒｏｂｉｏｌ 、
５０ 、５３２−５３４ （１９８５） ）を用いた
が、これはグラビイ （Ｇｒａｖｉｅ 、Ｅ、 Ｉｎｔ
、 Ｊ、 ５ｙｓｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、２４゜３０
１−３０６ （１９７４））が述べているように糖料用
特性と温度生育特性とからペジオコツクス・ペントサセ
ウス（ヱ、 ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）であると再同定
されたもので必る。この指示菌株もバクテリオシンの生
産者であるが、比較的有効でない。バクテリオシンのＩ
ＡＵは前述した通り、指示菌株の密生地に明確な生育阻
止領域をなお生じさせるところの、培養物上澄液の最大
限希釈液の５μｌと、定義された。
間培養物（６００ｎｍでの光学密度０．６０）の１チを
接種し、３５℃で１８時間、静置培養した。１８時間後
に培養物のｐＨｔ測定し、ｐＨを６．０に調整し友。細
胞を５°で１５分間、１６，３００ｘｇでの遠心分離に
より取除いた。上澄液ｉ０．４５μｍフィルター（アメ
リカ合衆国、マサチュウセツツ州、ベツドフォードのＭ
ｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ、製）で濾過した。濾過さ
れた上澄液についてバクテリオシンの活性を、指示株細
胞を接種されている軟寒天に重ねたＭＲ５平板上へと二
倍希釈法による一連の希釈物の５ａｌ宛全滴下して検定
した。検定平板について３２℃で培養を行なった。指示
菌株としてはペジオコツクス・セレビシェ−（Ｐ、ｃｅ
ｒｅｖｉｓｉａｅ） ＦＢＢ６３（Ｇｒａｈａｍ 、
Ｄ、 Ｃ，及びＬ−Ｌ、Ｍｃｋａｙ ＋ Ａｐｐｌ 、
Ｅｎｖ！ ｒｏｎ 、 Ｍｉ −ｃｒｏｂｉｏｌ 、
５０ 、５３２−５３４ （１９８５） ）を用いた
が、これはグラビイ （Ｇｒａｖｉｅ 、Ｅ、 Ｉｎｔ
、 Ｊ、 ５ｙｓｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、２４゜３０
１−３０６ （１９７４））が述べているように糖料用
特性と温度生育特性とからペジオコツクス・ペントサセ
ウス（ヱ、 ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）であると再同定
されたもので必る。この指示菌株もバクテリオシンの生
産者であるが、比較的有効でない。バクテリオシンのＩ
ＡＵは前述した通り、指示菌株の密生地に明確な生育阻
止領域をなお生じさせるところの、培養物上澄液の最大
限希釈液の５μｌと、定義された。
硫酸アンモニウム（アメリカ合衆国、ミズーリ州、セン
ト・ルイスのＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、
ｇ） ｔ濾過した上澄液に対し、５℃で飽和濃度の６０
％（ｗ／ｖ）加え九〇ゆっくりと１８時間撹拌しｔ後、
５℃におき２０分間、１６，３００ｘｇでの遠心分離に
より沈澱物を集めた。その沈鮫物を０．０５ Ｍ Ｔｒ
ｉｓ−マレアート緩衝液ｐＨ６゜５ （Ｓｉｇｍａ Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ。
ト・ルイスのＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、
ｇ） ｔ濾過した上澄液に対し、５℃で飽和濃度の６０
％（ｗ／ｖ）加え九〇ゆっくりと１８時間撹拌しｔ後、
５℃におき２０分間、１６，３００ｘｇでの遠心分離に
より沈澱物を集めた。その沈鮫物を０．０５ Ｍ Ｔｒ
ｉｓ−マレアート緩衝液ｐＨ６゜５ （Ｓｉｇｍａ Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ。
ＩＭ）の８０Ｗｌ中に戻し、検定した。沈澱物を戻した
緩衝液について遠心分離を行ない、粒状物を除去した。
緩衝液について遠心分離を行ない、粒状物を除去した。
上澄液を検定し、次に５ｐｅｃｔｒａｐｅｒ ｎｏ、１
メンプラン・チュービング（アメリカ合衆国、カリホル
ニア州、ロスアンゼルスのＳｐｅｃｔｒｕｍ Ｍｅｃｌ
ｉｃａ １Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ 、 Ｉｎｃ、製）を
用い、０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ −７レアート緩衝液に対
し５℃で透析した。透析物について活性回復をみるため
に活性を検定した。部分精製したバクテリオシンを事後
の試験に用い、このバクテリオシンをバクテリオシンＰ
Ａ−１と命名し７？−Ｏ 熱処理及び酵素の効果：部分精製したバクテリオシンＰ
Ａ−１の試料（６，４００ＡＵ／、／）について、熱安
定性と酵素効果を検定した。バクテリオシンを各酵素と
共に６０分間、５００ ｕａ／ゴの最終濃度で培養した
〇アルファーキモトリプシン及びトリプシンの存在下で
の培養は２５℃で行ない、その他の全ての酵素−バクテ
リオシン混合物は３７℃で培養し友。酵素の不活化は３
分間の煮沸によって達成された。
メンプラン・チュービング（アメリカ合衆国、カリホル
ニア州、ロスアンゼルスのＳｐｅｃｔｒｕｍ Ｍｅｃｌ
ｉｃａ １Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ 、 Ｉｎｃ、製）を
用い、０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ −７レアート緩衝液に対
し５℃で透析した。透析物について活性回復をみるため
に活性を検定した。部分精製したバクテリオシンを事後
の試験に用い、このバクテリオシンをバクテリオシンＰ
Ａ−１と命名し７？−Ｏ 熱処理及び酵素の効果：部分精製したバクテリオシンＰ
Ａ−１の試料（６，４００ＡＵ／、／）について、熱安
定性と酵素効果を検定した。バクテリオシンを各酵素と
共に６０分間、５００ ｕａ／ゴの最終濃度で培養した
〇アルファーキモトリプシン及びトリプシンの存在下で
の培養は２５℃で行ない、その他の全ての酵素−バクテ
リオシン混合物は３７℃で培養し友。酵素の不活化は３
分間の煮沸によって達成された。
バクテリオシンの温度安定性はバクテリオシンの溶液ｔ
−６０分間で８０″Ｃまで、３分間及び１０分間で１０
０℃まで、そして１５分間で１２１ ’Ｃまで、加熱す
ることによって調べた。各処理後にバクテリオシン試料
についてバクテリオシンの力価を検定した。
−６０分間で８０″Ｃまで、３分間及び１０分間で１０
０℃まで、そして１５分間で１２１ ’Ｃまで、加熱す
ることによって調べた。各処理後にバクテリオシン試料
についてバクテリオシンの力価を検定した。
災亥：全ての酵素は、前述のＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏ。
ａｌ Ｃｏ。
から入手し几。アルファーキモトリプシン（タイプ［，
４７Ｕ／ｍｇ）及びリパーゼ（タイプ１．８．６Ｕ／＃
）は０．ＯＩＭ ＣａＣ１，ｉ含む０．０５ Ｍ Ｔｒ
ｉｓ −ハイドロクロライド緩衝液（ｐＨａｏ）中に溶
解し、プロテアーゼ（タイプＶ 、 Ｉ Ｕ／＊） 、
インチーム（グレード１．・４．”ｌ、４．ＯＩＯ’旧
゛／・＃）、パパイン（タイプ■。
４７Ｕ／ｍｇ）及びリパーゼ（タイプ１．８．６Ｕ／＃
）は０．ＯＩＭ ＣａＣ１，ｉ含む０．０５ Ｍ Ｔｒ
ｉｓ −ハイドロクロライド緩衝液（ｐＨａｏ）中に溶
解し、プロテアーゼ（タイプＶ 、 Ｉ Ｕ／＊） 、
インチーム（グレード１．・４．”ｌ、４．ＯＩＯ’旧
゛／・＃）、パパイン（タイプ■。
１０９Ｕ／ｗ）及びトリプシン（タイプＩＸ 、 １５
，０ＯＯＵ／−）は０．０５Ｍ Ｔｒｌｓ−ハイドロク
ロライド緩衝液（ｐＨ８，０）中に溶解し、ペプシン（
３，２００Ｕ／■）は０２Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ６，
０）中に溶解し、ホスホリパーゼ Ｃ（タイプ１．１０
Ｕ／−は０．０１Ｍ ＣａＣ１ｔを含む０．０５ Ｍ
Ｔｒ ｉ ｓ−ハイドロクロライド緩衝液（ｐＨ７，１
０）中に溶解した。
，０ＯＯＵ／−）は０．０５Ｍ Ｔｒｌｓ−ハイドロク
ロライド緩衝液（ｐＨ８，０）中に溶解し、ペプシン（
３，２００Ｕ／■）は０２Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ６，
０）中に溶解し、ホスホリパーゼ Ｃ（タイプ１．１０
Ｕ／−は０．０１Ｍ ＣａＣ１ｔを含む０．０５ Ｍ
Ｔｒ ｉ ｓ−ハイドロクロライド緩衝液（ｐＨ７，１
０）中に溶解した。
活性のｐＨ安定性：部分精製ＰＡ−１の１−を種々のｐ
属の緩衝液に対し透析した。このバクテリオシン溶液（
６，４００ＡＵ／＊）を１８時間、０．０５Ｍ グリシ
ン−ハイドロクロライド緩衝液（ｐＨ２，０）、０．０
５Ｍ クエン酸緩衝液（ｐＨ３−６）、０．０５ Ｍ
Ｔｒｉｓ−ハイドロクロライド緩衝液（１７−９） 、
及び０．０５Ｍ 炭酸塩−炭酸水素塩緩衝液（ｐＨ１Ｏ
−１１）に対し、緩衝液を２回交換して透析した。透析
後に透析管（チュービング）の内容物について活性を検
定した。
属の緩衝液に対し透析した。このバクテリオシン溶液（
６，４００ＡＵ／＊）を１８時間、０．０５Ｍ グリシ
ン−ハイドロクロライド緩衝液（ｐＨ２，０）、０．０
５Ｍ クエン酸緩衝液（ｐＨ３−６）、０．０５ Ｍ
Ｔｒｉｓ−ハイドロクロライド緩衝液（１７−９） 、
及び０．０５Ｍ 炭酸塩−炭酸水素塩緩衝液（ｐＨ１Ｏ
−１１）に対し、緩衝液を２回交換して透析した。透析
後に透析管（チュービング）の内容物について活性を検
定した。
吸収試験：感受性及び耐性の細胞に対するバクテリオシ
ンＰＡ−１の吸収について、バレフット及びクレンハ−
ｒ −（Ｂａｒｅｆｏｏｔ 、Ｓ、Ｆ、及びＴ、 Ｒ，
に１ａｅｎｈａｍｍｅｒ。
ンＰＡ−１の吸収について、バレフット及びクレンハ−
ｒ −（Ｂａｒｅｆｏｏｔ 、Ｓ、Ｆ、及びＴ、 Ｒ，
に１ａｅｎｈａｍｍｅｒ。
Ａｐｐｌ、ＥｎｖＩｒｏｎ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ 、４
５ 、１８０８−１８１５（１９８３））が述べている
方法に準じた方法で試験した。ＭＲＳグロス培地（Ｄｉ
ｆｃｏ社製）中に一晩おい友培養物からの細胞ｆｔ２５
−の新鮮なプロス培地で継代培養し、１０’ＣＦＵ／ｙ
の濃度にまで増殖させた。細胞を遠心分離法で採取し、
０．０５ Ｍ Ｔ ｒ ｉ ｓ−マレアート緩衝液（ｐ
Ｈ６，５）で２回洗滌し、バクテリオシンを含む同じ緩
衝液の０．５ 、ｔに２００ＡＵ／−で再懸濁させた。
５ 、１８０８−１８１５（１９８３））が述べている
方法に準じた方法で試験した。ＭＲＳグロス培地（Ｄｉ
ｆｃｏ社製）中に一晩おい友培養物からの細胞ｆｔ２５
−の新鮮なプロス培地で継代培養し、１０’ＣＦＵ／ｙ
の濃度にまで増殖させた。細胞を遠心分離法で採取し、
０．０５ Ｍ Ｔ ｒ ｉ ｓ−マレアート緩衝液（ｐ
Ｈ６，５）で２回洗滌し、バクテリオシンを含む同じ緩
衝液の０．５ 、ｔに２００ＡＵ／−で再懸濁させた。
混合物を氷上で１時間、養生した。
細胞を遠心分離法、そしてそれに続＜ ０．２２ ミク
ロ−ポア・フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ
、製）を通してのｐ過によって除去し友。細胞を含まな
いＦ液の活性度を測定した。対照標準としては細胞なし
てのバクテリオシンＰＡ−１の養生物及びバクテリオシ
ンＰＡ−１を加えない細胞を用いた。
ロ−ポア・フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ
、製）を通してのｐ過によって除去し友。細胞を含まな
いＦ液の活性度を測定した。対照標準としては細胞なし
てのバクテリオシンＰＡ−１の養生物及びバクテリオシ
ンＰＡ−１を加えない細胞を用いた。
プラスミドに関連する表現型：第１図はＣｓＣ１−臭化
エチジウムーペジオコツクス・アシデイラクテシイ（上
、 ａｃｉｄｉｌａｃｔｌｃｉ ）及びその誘導味から
の精製プラスミドＤＮＡについての寒天ゲル電気泳動試
験の結果を示している。ＤＮＡの電気泳動け０．７％寒
天、１００ｖで２時間行なつ九。（５）、エシエＩＪ
ヒフ −：Ｉす（Ｅｓｃｈｅｒｌｃｈｉａ ｃｏｌｌ）
Ｖ５１７ （図上で上から下にかけての＠） ３５．
８．４．８ 、３゜７．３．４゜２．６ 、 Ｚｏ 、
１．８及び１−４ Ｍ Ｄ ａの共役的に閉じた環状
Ｄ Ｎ Ａ ｏ （Ｂ）、 ＰＡＣｌ、 ＯＳｕｃ＋、
Ｂａｃ＋。（ＣχＰＡＣ１，１４Ｓｕｃ” 、 Ｂａ
ｃ−０Ｑ））、 ＰＡＣ１，１７Ｓｕｃ−、Ｂａｃ”。
エチジウムーペジオコツクス・アシデイラクテシイ（上
、 ａｃｉｄｉｌａｃｔｌｃｉ ）及びその誘導味から
の精製プラスミドＤＮＡについての寒天ゲル電気泳動試
験の結果を示している。ＤＮＡの電気泳動け０．７％寒
天、１００ｖで２時間行なつ九。（５）、エシエＩＪ
ヒフ −：Ｉす（Ｅｓｃｈｅｒｌｃｈｉａ ｃｏｌｌ）
Ｖ５１７ （図上で上から下にかけての＠） ３５．
８．４．８ 、３゜７．３．４゜２．６ 、 Ｚｏ 、
１．８及び１−４ Ｍ Ｄ ａの共役的に閉じた環状
Ｄ Ｎ Ａ ｏ （Ｂ）、 ＰＡＣｌ、 ＯＳｕｃ＋、
Ｂａｃ＋。（ＣχＰＡＣ１，１４Ｓｕｃ” 、 Ｂａ
ｃ−０Ｑ））、 ＰＡＣ１，１７Ｓｕｃ−、Ｂａｃ”。
ペジオコツクス・アシデイラフティシイ由来のプラスミ
ドＤＮＡの分子量（単位： ＭＤ ａ）は、第１表に示
されている。標準的なプラスミドＤＮＡの分子量を示し
た。
ドＤＮＡの分子量（単位： ＭＤ ａ）は、第１表に示
されている。標準的なプラスミドＤＮＡの分子量を示し
た。
ペジオコツクス・アシデイラフ・ティシイ （上。
ａｃｉｄｉｌａｃｔｌｃｉ） ＰＡＣｌ、０は以前に（
Ｇｏｎｚａｌｅｚ 、 Ｃ、Ｆ 。
Ｇｏｎｚａｌｅｚ 、 Ｃ、Ｆ 。
及びＢ、Ｓ、Ｋｕｎｄａ 、 Ａｐｐｌ、Ｅｎｖｉｒｏ
ｎ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ４６ 。
ｎ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ４６ 。
８ｌ−８９（１９８３） ） 、それぞれｐｓＲＱｌｏ
及びｐＳＲＱｌｌと名付けられた２３ＭＤａ及び６．２
Ｍ Ｄ ａの２つの１ラスミドを含むと報告されてい
る（第１図のＢ列）。菌株ＰＡＣ１，０はショ糖発酵表
現型（Ｓｕｃ”）を示し、バクテリオシンを生産する。
及びｐＳＲＱｌｌと名付けられた２３ＭＤａ及び６．２
Ｍ Ｄ ａの２つの１ラスミドを含むと報告されてい
る（第１図のＢ列）。菌株ＰＡＣ１，０はショ糖発酵表
現型（Ｓｕｃ”）を示し、バクテリオシンを生産する。
Ｓｕｅ”表現型の安定性に対する昇温下での生育の影響
を、ＰＡＣｌ、０を４５．４７及び５０℃で培養するこ
とによって調べた。各々の処理から得られ九個劇的な集
落につき、Ｓｕｅ＋表現型を定量した。ショ糖非発酵型
（Ｓｕｃ”−）の分離体が４５．４７及び５０℃での培
養物からそれぞれ、１．１±０．１，１．４±０．１及
び４．７±０．２％の頻度で検出された。各処理から得
られた代表的なＳｕｃ＋及び５ｕｃ−分離体についてプ
ラスミド含有量を調べた。Ｓｕｃのバクテリオシン生産
性（Ｂａｃ” ）のものは２３ＭＤａ及び６．２ＭＤａ
の両者のプラスミドが存在することを示した（ＷＪ１図
のＢ列） ｏ ５ｕｃ−、Ｂａｃ＋の表現型を示す単離
物は２３ＭＤａのプラスミドの不存在を示し友。
を、ＰＡＣｌ、０を４５．４７及び５０℃で培養するこ
とによって調べた。各々の処理から得られ九個劇的な集
落につき、Ｓｕｅ＋表現型を定量した。ショ糖非発酵型
（Ｓｕｃ”−）の分離体が４５．４７及び５０℃での培
養物からそれぞれ、１．１±０．１，１．４±０．１及
び４．７±０．２％の頻度で検出された。各処理から得
られた代表的なＳｕｃ＋及び５ｕｃ−分離体についてプ
ラスミド含有量を調べた。Ｓｕｃのバクテリオシン生産
性（Ｂａｃ” ）のものは２３ＭＤａ及び６．２ＭＤａ
の両者のプラスミドが存在することを示した（ＷＪ１図
のＢ列） ｏ ５ｕｃ−、Ｂａｃ＋の表現型を示す単離
物は２３ＭＤａのプラスミドの不存在を示し友。
代表的な５ｕｃ−、Ｂａｃ＋株はＰＡＣｌ、１７と命名
され友（第１図のＤ列）。
され友（第１図のＤ列）。
残留するプラスミドがＢａｃ＋の表現型をもつかどうか
について確認するために、株ＰＡＣ１，１７を４５℃で
培養し友。ＰＡＣｌ、１７のバクテリオシン非生産性（
Ｂａｃ）分離体はａ７％の頻度で得られた。ＰＡ Ｃ１
，１７の代表的なりａｃ−株はＰＡＣｌ、１９と命名さ
れた。さらにＢａｃ−表現型のものがプラスミドｐＳＲ
Ｑ１１と共生しうるかどうかについて確かめるために、
株ＰＡＣ１，０ｔ−４５、４７及び５０℃で培養した。
について確認するために、株ＰＡＣ１，１７を４５℃で
培養し友。ＰＡＣｌ、１７のバクテリオシン非生産性（
Ｂａｃ）分離体はａ７％の頻度で得られた。ＰＡ Ｃ１
，１７の代表的なりａｃ−株はＰＡＣｌ、１９と命名さ
れた。さらにＢａｃ−表現型のものがプラスミドｐＳＲ
Ｑ１１と共生しうるかどうかについて確かめるために、
株ＰＡＣ１，０ｔ−４５、４７及び５０℃で培養した。
ＰＡＣｌ、ＯのＳｕｃ” 、 ＢａＣ−の分離体がそれ
ぞれ、２，４゜２．１及び２．７チの頻度で得られた。
ぞれ、２，４゜２．１及び２．７チの頻度で得られた。
代表的なＳｕｃ”。
Ｂａｃ−の単離物はプラスミドｐｓＲＱ１０ （２３Ｍ
Ｄａ ）の存在を、そしてプラスミドｐ５ＲＱ１１の不
存在ヲ、示しｆｃ（第１図の０列）。代表的なＳｕｃ”
、 Ｂａｃ−の単離物はＰＡＣｌ、１４と命名され色
。
Ｄａ ）の存在を、そしてプラスミドｐ５ＲＱ１１の不
存在ヲ、示しｆｃ（第１図の０列）。代表的なＳｕｃ”
、 Ｂａｃ−の単離物はＰＡＣｌ、１４と命名され色
。
ＰＡ−１の阻止効果、 Ｂａｃ株としてＰＡＣｌ、０を
、そして対照標準Ｂａｃ−株としてＰＡＣｌ、１４ｈえ
る平板検定系をバクテリオシンがどの範囲の細菌に対し
て活性であるかを調べるために用いた。ＰＡＣｌ、１４
は、乳酸のような代謝副産物について指示法に対する阻
止効果をみるために含１せたものである。株ＰＡｃ１．
ｏはペジオコツクス・アシデイラフティシイ （Ｐ、
ａｃ回旦赳旦虹）、ペジオコツクス・ベントサセウス（
Ｐ、 ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ） 、ラクトバチルス・
プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ 世映ｙ唄
） 、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌ、 ９輿） 、及び
ロイコノストック・デクストラニカム（Ｌｅｕｃｏｎｏ
ｓｔｏｃ ｄ ｅｘ−用叶卯工）に対し活性金示した。
、そして対照標準Ｂａｃ−株としてＰＡＣｌ、１４ｈえ
る平板検定系をバクテリオシンがどの範囲の細菌に対し
て活性であるかを調べるために用いた。ＰＡＣｌ、１４
は、乳酸のような代謝副産物について指示法に対する阻
止効果をみるために含１せたものである。株ＰＡｃ１．
ｏはペジオコツクス・アシデイラフティシイ （Ｐ、
ａｃ回旦赳旦虹）、ペジオコツクス・ベントサセウス（
Ｐ、 ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ） 、ラクトバチルス・
プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ 世映ｙ唄
） 、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌ、 ９輿） 、及び
ロイコノストック・デクストラニカム（Ｌｅｕｃｏｎｏ
ｓｔｏｃ ｄ ｅｘ−用叶卯工）に対し活性金示した。
ストレプトコックス°ラクチス（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ １ａｃｔｉｓ ） 、ストレプトコックス・ラ
クチスの亜種ジアセチラクチス（Ｓ、 Ｉａｃｔｉｓ
５ｕｂｓｐ、 ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ ） 、ス
トレプトコックス°クレモリス（Σｃｒｅｍｏｒｉｓ
） 、或はストレプトコックス・サーモフィルス（Ｓ、
ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）に対しては、非活性であ
ることが観察された。Ｂａａ−株であるＰＡＣｌ、１４
はＦＡ−１に対し感受性を示さなかった。スタフイロコ
ックス・アウレウス■ｔ ａｐｈ−刈曽娶凝！唄耶）株
は親及び培養株に対し等しい感受性を示し、阻止がおそ
らく乳酸の阻止効果に基づくものであることを示した。
ｃｕｓ １ａｃｔｉｓ ） 、ストレプトコックス・ラ
クチスの亜種ジアセチラクチス（Ｓ、 Ｉａｃｔｉｓ
５ｕｂｓｐ、 ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ ） 、ス
トレプトコックス°クレモリス（Σｃｒｅｍｏｒｉｓ
） 、或はストレプトコックス・サーモフィルス（Ｓ、
ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）に対しては、非活性であ
ることが観察された。Ｂａａ−株であるＰＡＣｌ、１４
はＦＡ−１に対し感受性を示さなかった。スタフイロコ
ックス・アウレウス■ｔ ａｐｈ−刈曽娶凝！唄耶）株
は親及び培養株に対し等しい感受性を示し、阻止がおそ
らく乳酸の阻止効果に基づくものであることを示した。
部分精製したＰＡ −１（３２，０ＯＯＡＵ／ｄ）を用
いてミクロコックス・パリアンス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃ
ｕｓ ｖａｒｉａｎｓ ）、ミクロコックス・ンドネン
シス（Ｍ、 ５ｏｄｏｎｅ耶ｉｓ） 、スタフィロコッ
クス・キシロサス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｘ
ｙｌｏｓｕｓ）、スタフィロコックス・カーソサス（Ｓ
、 ｃａｒｎｏｓｕｓ ）、ラクトバチルス・アシドフ
ィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏ世石）
、ラクトバチルス・ラクチス（月。
いてミクロコックス・パリアンス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃ
ｕｓ ｖａｒｉａｎｓ ）、ミクロコックス・ンドネン
シス（Ｍ、 ５ｏｄｏｎｅ耶ｉｓ） 、スタフィロコッ
クス・キシロサス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｘ
ｙｌｏｓｕｓ）、スタフィロコックス・カーソサス（Ｓ
、 ｃａｒｎｏｓｕｓ ）、ラクトバチルス・アシドフ
ィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏ世石）
、ラクトバチルス・ラクチス（月。
１ａｃｔｉｓ ） 、及びラクトバチルス・ブルガリカ
ス（Ｌ、 ＄）についてバクテリオシンに対する感受性
を試験し友。これらの菌株の何れも、ＰＡ−１に対し感
受性を示さなかつ友。
ス（Ｌ、 ＄）についてバクテリオシンに対する感受性
を試験し友。これらの菌株の何れも、ＰＡ−１に対し感
受性を示さなかつ友。
酵素、熱処理及びｐ属の効果：部分精製したバクテリオ
シンを種々の酵素、熱及びｐＨにさらして感受性につき
調べた。ＰＡ−１はプロテアーゼ、パパイン、及びアル
ファーキモトリプシンに対し感受性であつ友。バクテリ
オシンの活性はリパーゼ、ホスホリパーゼ Ｃ、ＤＮア
ーゼ（ＤＮａｓｅ ） 、及びＲＮアーゼ（ＲＮａｓｅ
）により、筐た８０及び１００℃への加熱により、影響
されなかつ九。１２１℃にさらすと活性が一部破壊され
ｆｃ（第３表）。バクテリオシンの活性はｐＨ４−７で
最も安定であり、ｐＨ２，３，９及び１０では活性がい
くらか損なわれることを、見出した。ｐＨ１１では活性
が殆んど失なわれた。
シンを種々の酵素、熱及びｐＨにさらして感受性につき
調べた。ＰＡ−１はプロテアーゼ、パパイン、及びアル
ファーキモトリプシンに対し感受性であつ友。バクテリ
オシンの活性はリパーゼ、ホスホリパーゼ Ｃ、ＤＮア
ーゼ（ＤＮａｓｅ ） 、及びＲＮアーゼ（ＲＮａｓｅ
）により、筐た８０及び１００℃への加熱により、影響
されなかつ九。１２１℃にさらすと活性が一部破壊され
ｆｃ（第３表）。バクテリオシンの活性はｐＨ４−７で
最も安定であり、ｐＨ２，３，９及び１０では活性がい
くらか損なわれることを、見出した。ｐＨ１１では活性
が殆んど失なわれた。
実 施 例 １
以下に述べる実施例１はサラダ用のドレッシング中での
バクテリオシンＰＡ−１の使用に係る。
バクテリオシンＰＡ−１の使用に係る。
＠２表は試験条件を示し、より具体的には、（ｌ）、ド
レッシングとしてはＭａｒｉｅ（登録商標）のバターミ
ルク・スパイス・ランチ・ドレッシング（Ｍａｒｌｅ’
ｓ Ｂｕｔｔｅｒｍｉｌｋ ５ｐｉｃｅ Ｒａｎｃｈ
Ｄｒｅｓｓｉｎｇ ）を、使用した。このサラダ用ドレ
ッシングの一般的な組成物はダイズ油、新鮮なバターミ
ルク、新鮮なサワークリーム（５ｏｕｒ ｃｒｅａｍ
） 、全卵１蒸溜ビネガー、粘、塩、固形バターミルク
、グルタミン酸ナトリウム、脱水ニンニク、脱水タマネ
ギ、キサンタンガム、スパイス類、レモンジュース濃縮
物、パセリ及び天然賦香材であった。
レッシングとしてはＭａｒｉｅ（登録商標）のバターミ
ルク・スパイス・ランチ・ドレッシング（Ｍａｒｌｅ’
ｓ Ｂｕｔｔｅｒｍｉｌｋ ５ｐｉｃｅ Ｒａｎｃｈ
Ｄｒｅｓｓｉｎｇ ）を、使用した。このサラダ用ドレ
ッシングの一般的な組成物はダイズ油、新鮮なバターミ
ルク、新鮮なサワークリーム（５ｏｕｒ ｃｒｅａｍ
） 、全卵１蒸溜ビネガー、粘、塩、固形バターミルク
、グルタミン酸ナトリウム、脱水ニンニク、脱水タマネ
ギ、キサンタンガム、スパイス類、レモンジュース濃縮
物、パセリ及び天然賦香材であった。
１２＋、 変敗性細菌としては、ラクトバチルス・ビ
イファメンタンス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｉ
ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）Ａ ＴＣＣ３５４０９を、ドレ
ッシングに対し約Ｉ ＸＩ Ｏ’ＣＦＵ／ｆ添加した（
試料Ａには添加せず。）。
イファメンタンス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｉ
ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）Ａ ＴＣＣ３５４０９を、ドレ
ッシングに対し約Ｉ ＸＩ Ｏ’ＣＦＵ／ｆ添加した（
試料Ａには添加せず。）。
（３）、バクテリオシンＰＡ−１としては、６０％の硫
酸アンモニウムで調整したもの′ｆＩ：０．０５ Ｍ
ＴＲｌ５−マレアート緩衝液（ｐＨ６，８）に対し透析
し、次いで濾過殺菌して用い友（濃度：２０，０ＯＯＡ
Ｕ／ｄ）。
酸アンモニウムで調整したもの′ｆＩ：０．０５ Ｍ
ＴＲｌ５−マレアート緩衝液（ｐＨ６，８）に対し透析
し、次いで濾過殺菌して用い友（濃度：２０，０ＯＯＡ
Ｕ／ｄ）。
といった条件ｉｌｌ 、 ＋２１ 、 ＋３＋ （第２
表に加入のｆｉｌ 、 ＋２１ 。
表に加入のｆｉｌ 、 ＋２１ 。
（３）の具体条件）の下で、２５℃（室温）におき７日
間試験した。第２表で「接種」、「非接種」とは変敗性
細菌（指示菌株）についてのことを指す。
間試験した。第２表で「接種」、「非接種」とは変敗性
細菌（指示菌株）についてのことを指す。
試験結果を第３表、第４表及び第５表に掲げる。
第３表
サラダ用ドレッシング中でのバクテリオシンの検出可能
な活性 （ａ）二時間（日） ／ｂ） ： ＰＡ−１活性度（ＡＵ／Ｆ）第４表 （ａ）二時間（日） （ｂ） ： Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｉｆ
ｅｒｍｅｎｔａｎｓについてＣＦＵ／ｆＣＣＦＵ＝集落
形成単位）第 ５ 表 サラダ用ドレッシングの感覚刺戟性からみた評価 （ａ）二時間（日） （ｂ）：変敗の証拠として、におい及び、 味覚から酢
酸が検出され、′！友 ドレッシング中にガス（ＣＯｔ） が観察された。
な活性 （ａ）二時間（日） ／ｂ） ： ＰＡ−１活性度（ＡＵ／Ｆ）第４表 （ａ）二時間（日） （ｂ） ： Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｉｆ
ｅｒｍｅｎｔａｎｓについてＣＦＵ／ｆＣＣＦＵ＝集落
形成単位）第 ５ 表 サラダ用ドレッシングの感覚刺戟性からみた評価 （ａ）二時間（日） （ｂ）：変敗の証拠として、におい及び、 味覚から酢
酸が検出され、′！友 ドレッシング中にガス（ＣＯｔ） が観察された。
これらの表から明らかであるようにペジオコツクス・ア
シデイラフティシイ （Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ 貌←
Ｌａｃｔ坦）からのバクテリオシンは、普通にみられ５
変敗性細菌であるラクトバチルス・ビイファメンタンス
（し麩傅孕Ｑ旦μｓ四綽甲ｅｎｔａｎｓ）の成長を阻止
するのに極めて有効である。
シデイラフティシイ （Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ 貌←
Ｌａｃｔ坦）からのバクテリオシンは、普通にみられ５
変敗性細菌であるラクトバチルス・ビイファメンタンス
（し麩傅孕Ｑ旦μｓ四綽甲ｅｎｔａｎｓ）の成長を阻止
するのに極めて有効である。
バクテリオシンＰＡ−１は、サラダ用のドレッシングが
置かれる環境下で安定である。このバクテリオシンは変
敗性細菌の初期濃度を減少させ、この保藤効果を数日間
にわたり維持する。同様の結果はキャベツサラダ、マカ
ロニ→７ラダ及びポテトサラダの工うな他の食品でも達
成でき、特に食品素材中に天然に存在するグラム陽性菌
の成長を促進する他の成分が食品素材に混入されて食品
が製造される場合に有効である。
置かれる環境下で安定である。このバクテリオシンは変
敗性細菌の初期濃度を減少させ、この保藤効果を数日間
にわたり維持する。同様の結果はキャベツサラダ、マカ
ロニ→７ラダ及びポテトサラダの工うな他の食品でも達
成でき、特に食品素材中に天然に存在するグラム陽性菌
の成長を促進する他の成分が食品素材に混入されて食品
が製造される場合に有効である。
ｔｎｌＱＫｌｔｊ：、ペジオコツクス・アシデイラフテ
ィシイの選択され九菌株より得九プラスミドについての
寒天ゲル電気泳動試瞼の結果を示す線図である。 ＦＩＧ、 １
ィシイの選択され九菌株より得九プラスミドについての
寒天ゲル電気泳動試瞼の結果を示す線図である。 ＦＩＧ、 １
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、グラム陽性菌による食品の変敗を防止する方法であ
つて、バクテリオシン生産性のペジオコツクス（￥Ｐｅ
ｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥）属の細菌から取出した変敗防止
性のバクテリオシンを食品中に有効量だけ添加すること
を特徴とする、食品の変敗防止法。 ２、前記バクテリオシンがペジオコツクス・アシデイラ
クテイシイ（￥Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥ ￥ａｃｉｄ
ｉｌａｃｔｉｃｉ￥）ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０５０から取
出されたものである、請求項１に記載の食品の変敗防止
法。 ３、前記バクテリオシンがペジオコツクス属の細菌を増
殖培地中で増殖して誘導されたものであり、該バクテリ
オシンと共に増殖培地を乾燥させ粉体として食品中に添
加する、請求項１に記載の食品の変敗防止法。 ４、前記バクテリオシンがプロテアーゼ、パパイン及び
アルファーキモトリプシンによつて不活化され、１００
℃までの水溶液中で１０分間、熱不感性を示すものであ
る、請求項１に記載の食品の変敗防止法。 ５、前記バクテリオシンが食品素材中に天然に存在する
グラム陽性菌を抑制するものである、請求項１に記載の
食品の変敗防止法。 ６、前記グラム陽性菌がラクトバチルス・ビイフアメン
タンス（￥Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ￥ ￥ｂｉｆｅ
ｒｍｅｎｔａｎｓ￥）である、請求項５に記載の食品の
変敗防止法。 ７、食品１グラム当り約１０−１００，０００ＡＵのバ
クテリオシンを添加する、請求項１に記載の食品の変敗
防止法。 ８、前記バクテリオシンが、ペジオコツクス属の細菌を
増殖培地中で増殖させ、増殖培地から固形分を分離して
バクテリオシンの水溶液を作製し、この水溶液に過剰量
の塩を加えてバクテリオシンを沈澱させ、沈澱物からバ
クテリオシンを単離して得られたものである、請求項１
に記載の食品の変敗防止法。 ９、前記した塩が硫酸アンモニウムである、請求項８に
記載の食品の変敗防止法。 １０、前記したペジオコツクス属の細菌が、バクテオリ
シン生産遺伝情報を有する分子量約６．２ＭＤａのプラ
スミドを含むペジオコツクス・アシデイラクテイシン（
￥Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥ ￥ａｃｉｄｉｌａｃｔｉ
ｃｉ￥）である、請求項１に記載の食品の変敗防止法。 １１、前記食品がサラダ用のドレッシングである、請求
項１に記載の食品の変敗防止法。 １２、乳酸桿菌により変敗される食品素材を含み、バク
テリオシン生産性のペジオコツクス（￥Ｐｅｄｉｏ−ｃ
ｏｃｃｕｓ￥）属の細菌の細胞から抽出した変敗防止性
のバクテリオシンを食品１グラム当り約１０−１００，
０００ＡＵ有し、ペジオコツクス属の細菌の生細胞を含
まない変敗防止食品。 １３、サラダ用のドレッシングである、請求項１２に記
載の変敗防止食品。 １４、冷蔵して保存されるものである、請求項１２に記
載の変敗防止食品。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/012,619 US4883673A (en) | 1987-02-09 | 1987-02-09 | Method for inhibiting bacterial spoilage and resulting compositions |
| US012,619 | 1987-02-09 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01202277A true JPH01202277A (ja) | 1989-08-15 |
| JPH0448427B2 JPH0448427B2 (ja) | 1992-08-06 |
Family
ID=21755842
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63027397A Granted JPH01202277A (ja) | 1987-02-09 | 1988-02-08 | 食品の変敗防止方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4883673A (ja) |
| EP (1) | EP0293547B1 (ja) |
| JP (1) | JPH01202277A (ja) |
| AT (1) | ATE84683T1 (ja) |
| AU (1) | AU599451B2 (ja) |
| CA (1) | CA1297719C (ja) |
| DE (1) | DE3877625T2 (ja) |
| ES (1) | ES2053592T3 (ja) |
| NZ (1) | NZ223419A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04349846A (ja) * | 1990-04-24 | 1992-12-04 | Indpuco Inc | 食肉の保存法と保存用組成物 |
| JPH0584092A (ja) * | 1990-03-05 | 1993-04-06 | Indopco Inc | バクテリオシンの生産方法 |
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| US7247330B2 (en) * | 2002-07-23 | 2007-07-24 | Kraft Foods Holdings, Inc. | Method for controlling microbial contamination of a vacuum-sealed food product |
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| US20040175480A1 (en) * | 2003-03-03 | 2004-09-09 | Kraft Foods Holdings, Inc. | Hop beta acid compositions for use in food products |
| EP1722804B1 (en) * | 2004-03-04 | 2015-01-21 | E-L Management Corp. | Skin treatment method with lactobacillus extract |
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| US4956177A (en) * | 1985-11-04 | 1990-09-11 | Microlife Technics, Inc. | Method for inhibiting fungi |
| US4929445A (en) * | 1988-01-25 | 1990-05-29 | Microlife Technics, Inc. | Method for inhibiting Listeria monocytogenes using a bacteriocin |
-
1987
- 1987-02-09 US US07/012,619 patent/US4883673A/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-01-06 CA CA000555953A patent/CA1297719C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-28 AU AU10799/88A patent/AU599451B2/en not_active Expired
- 1988-02-04 ES ES88101624T patent/ES2053592T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-02-04 DE DE8888101624T patent/DE3877625T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-02-04 AT AT88101624T patent/ATE84683T1/de active
- 1988-02-04 EP EP88101624A patent/EP0293547B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-02-05 NZ NZ223419A patent/NZ223419A/xx unknown
- 1988-02-08 JP JP63027397A patent/JPH01202277A/ja active Granted
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