JPH01207239A - 高純度のヒト因子ｉｘ濃縮物および他の血漿蛋白質およびそれらの治療学的使用 - Google Patents
高純度のヒト因子ｉｘ濃縮物および他の血漿蛋白質およびそれらの治療学的使用Info
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- JPH01207239A JPH01207239A JP63267004A JP26700488A JPH01207239A JP H01207239 A JPH01207239 A JP H01207239A JP 63267004 A JP63267004 A JP 63267004A JP 26700488 A JP26700488 A JP 26700488A JP H01207239 A JPH01207239 A JP H01207239A
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- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
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- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、出発物質として、因子■Ｘを含有するヒト血
漿の分画を使用して、イオン交換クロマトグラフィーお
よびアフィニティークロマトグラフィーにより高純度の
因子ＩＸ濃縮物を得ることに関する。本発明によれば、
また、アルファー抗トリプシン、蛋白質Ｃおよび蛋白質
Ｓ１プロトロンビンまたは因子１１およびスチャート因
子または因子Ｘが濃縮した分画を得ることが可能である
。
漿の分画を使用して、イオン交換クロマトグラフィーお
よびアフィニティークロマトグラフィーにより高純度の
因子ＩＸ濃縮物を得ることに関する。本発明によれば、
また、アルファー抗トリプシン、蛋白質Ｃおよび蛋白質
Ｓ１プロトロンビンまたは因子１１およびスチャート因
子または因子Ｘが濃縮した分画を得ることが可能である
。
また、この方法によると、アルブミン、抗トロンビンＩ
１１および免疫グロブリンを回収することが可能である
。
１１および免疫グロブリンを回収することが可能である
。
第１に、因子Ｖｌｌ濃縮物および、第２に、剛製活性を
もつ他の蛋白質を含まない因子ＩＸ！縮物を利用可能と
することは、因子Ｖｌｌおよび因子ＩＸの両者を欠く患
者（Ｂ血友病者）のために極めて有益である。事実、病
気のこれら２つのカテゴリーは、４種類の凝固蛋白質、
すなわち、因子ＩＩ、因子Ｖｌｌ、因子■Ｘおよび因子
Ｘを含有するプロトロンビン複合体（また、ＰＰ５Ｂと
して知られている）の血漿蛋白質の濃縮物を使用するこ
とによって現在処置されている。出血の出来事の間、Ｐ
Ｐ５Ｂにより処置すると、因子Ｖｌ■を欠く患者および
因子ＩＸを欠く患者の両者は、大きい量の他の凝固因子
（因子ＩＩおよび因子Ｘ）を投与され、これに対して、
処置前、患者は正常のレベルを有する。この過剰の凝固
蛋白質は、血栓症の危険を誘発しうる。この危険は、因
子ＶＩＩを欠く患者Ｉこおいていっそう起こりうる。な
ぜなら、生体内において、この蛋白質は比較的短い半減
期（７〜９時間）を有し、正常の生理学的レベルを再び
達成するためには、大量の投与量のＰＰ５Ｂおよびこう
して因子ＩＩ、因子ＩＸおよび因子Ｘを注射を包含する
からである。この現象は、ＰＰ５Ｂは因子ＶＩ［におい
て通常劣るという事実によって増幅される（例えば、２
０〜４５１ｔＪ／ｍｇの因子Ｘに比較してＩ Ｏ−１８
ｒ Ｕ／ｍｇ）。
もつ他の蛋白質を含まない因子ＩＸ！縮物を利用可能と
することは、因子Ｖｌｌおよび因子ＩＸの両者を欠く患
者（Ｂ血友病者）のために極めて有益である。事実、病
気のこれら２つのカテゴリーは、４種類の凝固蛋白質、
すなわち、因子ＩＩ、因子Ｖｌｌ、因子■Ｘおよび因子
Ｘを含有するプロトロンビン複合体（また、ＰＰ５Ｂと
して知られている）の血漿蛋白質の濃縮物を使用するこ
とによって現在処置されている。出血の出来事の間、Ｐ
Ｐ５Ｂにより処置すると、因子Ｖｌ■を欠く患者および
因子ＩＸを欠く患者の両者は、大きい量の他の凝固因子
（因子ＩＩおよび因子Ｘ）を投与され、これに対して、
処置前、患者は正常のレベルを有する。この過剰の凝固
蛋白質は、血栓症の危険を誘発しうる。この危険は、因
子ＶＩＩを欠く患者Ｉこおいていっそう起こりうる。な
ぜなら、生体内において、この蛋白質は比較的短い半減
期（７〜９時間）を有し、正常の生理学的レベルを再び
達成するためには、大量の投与量のＰＰ５Ｂおよびこう
して因子ＩＩ、因子ＩＸおよび因子Ｘを注射を包含する
からである。この現象は、ＰＰ５Ｂは因子ＶＩ［におい
て通常劣るという事実によって増幅される（例えば、２
０〜４５１ｔＪ／ｍｇの因子Ｘに比較してＩ Ｏ−１８
ｒ Ｕ／ｍｇ）。
全血漿を使用する処置は、提案されたが、ウィルス汚染
のよく知られた危険を誘発する。なぜなら、治療学的血
漿は病原性ウィルスに関して通常不活性化されていす、
モしてＰＰ５Ｂを使用するときと同一の大量の反復した
注射を必要とし、そして付随する血漿誘導蛋白質の過度
の配合を生ずるからである。
のよく知られた危険を誘発する。なぜなら、治療学的血
漿は病原性ウィルスに関して通常不活性化されていす、
モしてＰＰ５Ｂを使用するときと同一の大量の反復した
注射を必要とし、そして付随する血漿誘導蛋白質の過度
の配合を生ずるからである。
イオン交換（ＤＥＡＥ）クロマトグラフィーおヨヒアフ
ィニティークロマトグラフィ−［ヘパリン−セファロー
ス（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ） ］の有用性を立証するあ
る種の刊行物が存在する（アンダーリン（Ａ ｎｄｅｒ
ｓｓｏｎ）ら、トロンボシス・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂ
ｏｓｉｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）；７．４５１−４５９
．１９７５］が、わずかの治療学的因子Ｖ１１および因
子ＩＸの濃縮物が存在するだけである。現在、因子Ｖｌ
ｌ濃縮物は存在するが、この誘導体は因子ＩＸ、因子Ｉ
Ｉおよび因子Ｘの抗原、および大量の投与量のヘパリン
を含有する。高純度の因子ＩＸ濃縮物を調製する方法は
発表された［メナシェ（Ｍ ｅｎａｃｈｅ）ら、ブラッ
ド（Ｂ Ｉｏｏｄ） 、６４．１２２０−１２２７．１
９８４］ ；この方法は２種類のクロマトグラフィー
の吸着工程を使用し、第１はＤＥＡＥ−セファデックス
（Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ）の存在下におけるバッチ処理で
あり、第２は硫酸デキストランのカラムの通過である。
ィニティークロマトグラフィ−［ヘパリン−セファロー
ス（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ） ］の有用性を立証するあ
る種の刊行物が存在する（アンダーリン（Ａ ｎｄｅｒ
ｓｓｏｎ）ら、トロンボシス・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂ
ｏｓｉｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）；７．４５１−４５９
．１９７５］が、わずかの治療学的因子Ｖ１１および因
子ＩＸの濃縮物が存在するだけである。現在、因子Ｖｌ
ｌ濃縮物は存在するが、この誘導体は因子ＩＸ、因子Ｉ
Ｉおよび因子Ｘの抗原、および大量の投与量のヘパリン
を含有する。高純度の因子ＩＸ濃縮物を調製する方法は
発表された［メナシェ（Ｍ ｅｎａｃｈｅ）ら、ブラッ
ド（Ｂ Ｉｏｏｄ） 、６４．１２２０−１２２７．１
９８４］ ；この方法は２種類のクロマトグラフィー
の吸着工程を使用し、第１はＤＥＡＥ−セファデックス
（Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ）の存在下におけるバッチ処理で
あり、第２は硫酸デキストランのカラムの通過である。
この技術は、まず、ＰＰ５Ｂの精製［Ｄ Ｅ Ａ Ｅ−
セファデックス（Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ） ］および引続
く硫酸デキストランへの親和性による因子ＩＸの単離か
ら成る。しかしながら、パッチの吸着工程（わずかにの
み自動化可能でありかつ再現性に劣る方法）のために工
業的カラムクロマトグラフィーの利点のすべてを提供せ
ず、そして他の潜在的に有用な血漿分画の最適化された
回収を損なう。最後に、それはプロコンパ−チンの同時
回収に好適ではない。
セファデックス（Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ） ］および引続
く硫酸デキストランへの親和性による因子ＩＸの単離か
ら成る。しかしながら、パッチの吸着工程（わずかにの
み自動化可能でありかつ再現性に劣る方法）のために工
業的カラムクロマトグラフィーの利点のすべてを提供せ
ず、そして他の潜在的に有用な血漿分画の最適化された
回収を損なう。最後に、それはプロコンパ−チンの同時
回収に好適ではない。
今回、普通のクロマトグラフィー技術を使用する方法が
発見され、この方法は、因子ＩＸを含有するヒト血漿の
任意の分画について使用して、分画を適当に処理した後
、高純度の因子Ｉｘ１すなわち、Ｉ ２０１ Ｕ／ｍｇ
より大きい比活性を有しかつ主として因子Ｉ！、因子Ｖ
ｌｌおよび因子Ｘを含何しない因子ＩＸを得ることがで
きる。
発見され、この方法は、因子ＩＸを含有するヒト血漿の
任意の分画について使用して、分画を適当に処理した後
、高純度の因子Ｉｘ１すなわち、Ｉ ２０１ Ｕ／ｍｇ
より大きい比活性を有しかつ主として因子Ｉ！、因子Ｖ
ｌｌおよび因子Ｘを含何しない因子ＩＸを得ることがで
きる。
こうして、本発明は、ヒト血漿の分画を予備精製して、
脂質および蛋白質の汚染物質を排除し、次いでこの予備
精製した分画をりａマドグラフィー処理し、そしてクロ
マトグラフィー処理は、なかでも、アニオン交換クロマ
トグラフィーおよびアフィニティークロマトグラフィー
の組み合わせである、高純度の因子ＩＸを調製する方法
に関する。
脂質および蛋白質の汚染物質を排除し、次いでこの予備
精製した分画をりａマドグラフィー処理し、そしてクロ
マトグラフィー処理は、なかでも、アニオン交換クロマ
トグラフィーおよびアフィニティークロマトグラフィー
の組み合わせである、高純度の因子ＩＸを調製する方法
に関する。
上に示したように、本発明の方法は、因子ＩＸを含有す
る任意の分画、とくに、また、因子１１、因子Ｘおよび
因子Ｖｌｌ、ならびに蛋白質Ｓおよび蛋白質Ｃを含をす
る分画に適用することができ、次いで、これらは前記方
法によって、また、分離することができる。
る任意の分画、とくに、また、因子１１、因子Ｘおよび
因子Ｖｌｌ、ならびに蛋白質Ｓおよび蛋白質Ｃを含をす
る分画に適用することができ、次いで、これらは前記方
法によって、また、分離することができる。
血漿分画について実施できる処理のうちで、っぎのもの
を記載することができるニ ー 軟質または硬質のイオン交換樹脂上の吸着、−リン
酸三カルシウムを使用する処理、−硫酸バリウムまたは
塩化バリウムを使用する処理、 〜 硫酸アンモニウムを使用する沈殿、−アルミニウム
ゲル上の吸着。
を記載することができるニ ー 軟質または硬質のイオン交換樹脂上の吸着、−リン
酸三カルシウムを使用する処理、−硫酸バリウムまたは
塩化バリウムを使用する処理、 〜 硫酸アンモニウムを使用する沈殿、−アルミニウム
ゲル上の吸着。
これらの処理は、因子ＩＸ、ならびに引続くクロマトグ
ラフィー工程を実施する前に、脱着される、存在しうる
因子！■、因子Ｖ１１および因子Ｘを吸着する。
ラフィー工程を実施する前に、脱着される、存在しうる
因子！■、因子Ｖ１１および因子Ｘを吸着する。
予備精製処理は、因子ＩＸの比活性が０．５■Ｕ／ｍｇ
より大きいかあるいはそれに等しい、分画を得るように
設計される。一般に、約１１０／ｍｇの比活性は、この
方法の満足な使用を可能とし、そして所望の純度を有す
る因子■ｘを得ることを可能とする。
より大きいかあるいはそれに等しい、分画を得るように
設計される。一般に、約１１０／ｍｇの比活性は、この
方法の満足な使用を可能とし、そして所望の純度を有す
る因子■ｘを得ることを可能とする。
この予備精製カラムの溶離物は、アルブミン、免疫グロ
ブリン、抗トロンビンＩＩＩおよびアルファー抗トリブ
ンンを含有する；これらの異なる物質は、引続いて精製
し、そして濃縮することができる。
ブリン、抗トロンビンＩＩＩおよびアルファー抗トリブ
ンンを含有する；これらの異なる物質は、引続いて精製
し、そして濃縮することができる。
引続くクロマトグラフィー工程は、好ましくは、イオン
交換クロマトグラフィー、例えば、ＤＥＡＥ−セファロ
ース（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ）を使用するクロマトグラ
フィーを使用することによって実施し、このクロマトグ
ラフィーはヘパリンの存在下に実施することができ、次
いでアフィニティータロマドグラフィー、ことに固定化
されたヘパリンを使用するアフィニティークロマトグラ
フィーを実施する。
交換クロマトグラフィー、例えば、ＤＥＡＥ−セファロ
ース（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ）を使用するクロマトグラ
フィーを使用することによって実施し、このクロマトグ
ラフィーはヘパリンの存在下に実施することができ、次
いでアフィニティータロマドグラフィー、ことに固定化
されたヘパリンを使用するアフィニティークロマトグラ
フィーを実施する。
本発明の他の面に従い、予備精製の代わりに、透析した
水を使用して寒冷沈殿の上澄み液を希釈−ろ過してその
イオン力を減少させ、そしてクロマトグラフィーゲルへ
の選択した蛋白質の吸着を可能とすることができる。有
利には、ヘパリンを１１Ｕ／ｍｌの最終投与量で添加す
る。
水を使用して寒冷沈殿の上澄み液を希釈−ろ過してその
イオン力を減少させ、そしてクロマトグラフィーゲルへ
の選択した蛋白質の吸着を可能とすることができる。有
利には、ヘパリンを１１Ｕ／ｍｌの最終投与量で添加す
る。
本発明のこの特定の面に従い、アルファー抗トリプシン
は第１アニオン交換クロマトグラフイーにより保持され
る；それは０．１３〜０．１７モルのＮａＣ１を含有す
る、より特定的には０．１６モルのＮａＣｌに調節され
た緩衝液により、わずかに酸性のｐＨにおいて脱着する
。
は第１アニオン交換クロマトグラフイーにより保持され
る；それは０．１３〜０．１７モルのＮａＣ１を含有す
る、より特定的には０．１６モルのＮａＣｌに調節され
た緩衝液により、わずかに酸性のｐＨにおいて脱着する
。
もちろん、この方法の任意の段階において、この分野に
おいてよく知られた技術によってウィルスの不活性化を
実施すること、ができる。
おいてよく知られた技術によってウィルスの不活性化を
実施すること、ができる。
しかしながら、とくに満足すべき結果は、予備精製した
血漿分画を溶媒−洗浄剤剋理、例えは、欧州特許出願０
１３１ ７４０号に記載される処理に付すことによっ
て得られた。
血漿分画を溶媒−洗浄剤剋理、例えは、欧州特許出願０
１３１ ７４０号に記載される処理に付すことによっ
て得られた。
本発明による方法は、アニオン交換樹脂、とくにＤＥＡ
Ｅ−セファロース（Ｓ ｅｐｂａｒｏｓｅ）ゲルを使用
するクロマトグラフィーを包含する；イオン力が増大す
る緩衝液を使用する溶離によって、３つの分画、それぞ
れ、プロコンパ−チン（因子ＶＩＩ）、蛋白質Ｃおよび
蛋白質８１およびアルファーインター−トリプシン阻害
剤が濃縮物された分画、および最後に因子ＩＸ、因子Ｉ
Ｉおよび因子Ｘを含む分画が回収される。
Ｅ−セファロース（Ｓ ｅｐｂａｒｏｓｅ）ゲルを使用
するクロマトグラフィーを包含する；イオン力が増大す
る緩衝液を使用する溶離によって、３つの分画、それぞ
れ、プロコンパ−チン（因子ＶＩＩ）、蛋白質Ｃおよび
蛋白質８１およびアルファーインター−トリプシン阻害
剤が濃縮物された分画、および最後に因子ＩＸ、因子Ｉ
Ｉおよび因子Ｘを含む分画が回収される。
プロコンパ−チンが濃縮物した分画は、０．１８〜０．
２０モル、好ましくは０．１９モルのＮａＣ１を含有し
かつわずかに酸性のｐＨにおける緩衝液によって脱着さ
れる。それが溶離されるとすぐに、それにＩＩＵ／ｍｌ
（最終濃度）の投与量のヒト抗トロンビンＩｎを添加す
ることが好ましい。次いで、分画を濃縮し、そして、こ
の段階において、ヘパリン濃度を５〜ｌ ＯＩ Ｕ／ｍ
ｌ、好ましくは５ＩＵ／ｍｌの調節する。
２０モル、好ましくは０．１９モルのＮａＣ１を含有し
かつわずかに酸性のｐＨにおける緩衝液によって脱着さ
れる。それが溶離されるとすぐに、それにＩＩＵ／ｍｌ
（最終濃度）の投与量のヒト抗トロンビンＩｎを添加す
ることが好ましい。次いで、分画を濃縮し、そして、こ
の段階において、ヘパリン濃度を５〜ｌ ＯＩ Ｕ／ｍ
ｌ、好ましくは５ＩＵ／ｍｌの調節する。
この方法によって、約４５％の収率で、少なくとも０．
７［Ｕ／ｍｇ蛋白質の比活性をもつプロコンバーチンを
得ることができる。
７［Ｕ／ｍｇ蛋白質の比活性をもつプロコンバーチンを
得ることができる。
アニオン交換樹脂上に吸着された他の血漿分画の回収は
、イオン強度を徐々に増大することによって実施する。
、イオン強度を徐々に増大することによって実施する。
こうして、蛋白質Ｃおよび蛋白質Ｓを含有するが、他の
凝固因子（ＩＩ、ＶＩ Ｉ、ＩＸ、Ｘ）を含有しない分
画は、好ましくは、クロマトグラフィーの緩衝液の塩類
濃度を増加することによって実施する。塩類、好ましく
は塩化ナトリウム、の濃度は、０．２６〜０．３０モル
、そして、有利には、０．２８モルに調節し、そしてわ
ずかに酸性のｐＨである。
凝固因子（ＩＩ、ＶＩ Ｉ、ＩＸ、Ｘ）を含有しない分
画は、好ましくは、クロマトグラフィーの緩衝液の塩類
濃度を増加することによって実施する。塩類、好ましく
は塩化ナトリウム、の濃度は、０．２６〜０．３０モル
、そして、有利には、０．２８モルに調節し、そしてわ
ずかに酸性のｐＨである。
因子ＩＸ、因子ＩＩおよび因子Ｘが濃縮した分画け、ク
ロマトグラフィー緩衝液の塩類濃度を新しく増大するこ
とによって溶離され、この濃度は０．３４〜０．３８モ
ルの塩化ナトリウム、好ましくは０．３６モルの塩化ナ
トリウムであり、ｐＩ（は８．０の調節する。
ロマトグラフィー緩衝液の塩類濃度を新しく増大するこ
とによって溶離され、この濃度は０．３４〜０．３８モ
ルの塩化ナトリウム、好ましくは０．３６モルの塩化ナ
トリウムであり、ｐＩ（は８．０の調節する。
アニオン交換樹脂を使用するこのクロマトグラフィー後
、本発明による方法は、とくに因子Ｉ＋および因子Ｘの
調製を可能とするアフィニティークロマトグラフィーに
よる、新しい精製工程を包含する。このアフィニティー
クロマトグラフィーは、好ましくは、固定化されたヘパ
リン、とくにヘパリン−セファロース（Ｓ ｅｐｈａｒ
ｏｓｅ）を使用して、クエン酸塩緩衝液中において実施
する。
、本発明による方法は、とくに因子Ｉ＋および因子Ｘの
調製を可能とするアフィニティークロマトグラフィーに
よる、新しい精製工程を包含する。このアフィニティー
クロマトグラフィーは、好ましくは、固定化されたヘパ
リン、とくにヘパリン−セファロース（Ｓ ｅｐｈａｒ
ｏｓｅ）を使用して、クエン酸塩緩衝液中において実施
する。
このクロマトグラフィーにより、因子ＩＩを含有するろ
液を分離することができ、これは引続いてトロンビンの
調製のために収集することができる。
液を分離することができ、これは引続いてトロンビンの
調製のために収集することができる。
クエン酸塩緩衝液中の塩類濃度を増大することによって
、より精確には、塩化ナトリウムの量を０．２３〜０．
２７の範囲に、より好適には０．２５モルに調節するこ
とによって、因子Ｘの富み、そして多分蛋白質Ｃおよび
Ｆ阻害剤およびアルファーインター−トリプシン阻害剤
を含有する分画が溶離される。
、より精確には、塩化ナトリウムの量を０．２３〜０．
２７の範囲に、より好適には０．２５モルに調節するこ
とによって、因子Ｘの富み、そして多分蛋白質Ｃおよび
Ｆ阻害剤およびアルファーインター−トリプシン阻害剤
を含有する分画が溶離される。
最後に、ＮａＣ１濃度を約０．４３〜０．４７モル以上
、好ましくは０．４５モルに上昇することによって、因
子Ｘに富んだ分画が溶離される。次いで、この分画を限
外ろ過によって濃縮し、そして凍結乾燥する。
、好ましくは０．４５モルに上昇することによって、因
子Ｘに富んだ分画が溶離される。次いで、この分画を限
外ろ過によって濃縮し、そして凍結乾燥する。
例えば、０．０１４１ Ｕ／ｍｇの比活性の相当する量
で因子ＩＸを含有する寒冷沈殿の上澄み液を使用して出
発することによって、この方法に従い、約１２０１ Ｕ
／ｍｇ蛋白質の高純度の因子ＩＸを得ることができる。
で因子ＩＸを含有する寒冷沈殿の上澄み液を使用して出
発することによって、この方法に従い、約１２０１ Ｕ
／ｍｇ蛋白質の高純度の因子ＩＸを得ることができる。
因子ＩＸを安定化するために、因子ＩＸの劣化および凝
固剤活性の損失を防止する、１種または２種以上の安定
剤を準備することができる。好ましくは、これらの安定
化は溶離緩衝液に添加する。
固剤活性の損失を防止する、１種または２種以上の安定
剤を準備することができる。好ましくは、これらの安定
化は溶離緩衝液に添加する。
評価する種々の物質のうちで、アルギニンは因子ＩＸを
安定化するためにとくに有効であるように思われる。好
ましくは、少なくとも１ｇ／ｌ、例えば、１〜５ｇ／ｌ
は最少投与量として使用する。
安定化するためにとくに有効であるように思われる。好
ましくは、少なくとも１ｇ／ｌ、例えば、１〜５ｇ／ｌ
は最少投与量として使用する。
その上、因子ＩＸがクロマトグラフィーのカラムから溶
離されるとすぐに、他の安定剤を添加することによって
、因子ＩＸを、ことに凍結乾燥に関して、安定化するこ
とが、また、好ましい。二の場合において、リジンを少
なくとも０．５ｇ／ｌ。
離されるとすぐに、他の安定剤を添加することによって
、因子ＩＸを、ことに凍結乾燥に関して、安定化するこ
とが、また、好ましい。二の場合において、リジンを少
なくとも０．５ｇ／ｌ。
例えば、０．５〜２ｇ／ｌの濃度で使用することが好ま
しい。
しい。
こうして得られる生成物は、治療学的に、ことに血友病
の処置に、有利に使用することができる。
の処置に、有利に使用することができる。
すでに使用されている同等の物質に比較して、この生成
物は他の凝固因子、血漿蛋白質および脂質の汚染物質を
含有しないという利点ををする。
物は他の凝固因子、血漿蛋白質および脂質の汚染物質を
含有しないという利点ををする。
以下の実施例によって、本発明をさらに説明するが、こ
れらの実施例は本発明を限定しない。
れらの実施例は本発明を限定しない。
実施例
出発物質として、凍結した新鮮な血漿を融解し、そして
０〜３°Ｃにおいて遠心することによって得られる寒冷
沈殿の上澄み液を使用する。この物質は因子ＩＸ（比活
性０．０１４１ Ｕ／ｍｇ）を含有する。
０〜３°Ｃにおいて遠心することによって得られる寒冷
沈殿の上澄み液を使用する。この物質は因子ＩＸ（比活
性０．０１４１ Ｕ／ｍｇ）を含有する。
■、 精製
上澄みのバッチを、生理学的血清の存在下にＤＥＡＥ−
セファデックス（Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ） Ａ ５０で処
理する。０．０１モルのクエン酸塩ｐＨ７，０中の０６
２モルの塩化ナトリウムで洗浄した後、０．０１モルの
クエン酸塩ｐＨ７，０中の２モルの塩化ナトリウムで溶
離を実施する。次いで、塩を限外ろ過によって排除する
。
セファデックス（Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ） Ａ ５０で処
理する。０．０１モルのクエン酸塩ｐＨ７，０中の０６
２モルの塩化ナトリウムで洗浄した後、０．０１モルの
クエン酸塩ｐＨ７，０中の２モルの塩化ナトリウムで溶
離を実施する。次いで、塩を限外ろ過によって排除する
。
この予備精製した因子ＩＸの比活性は、ＩＩＵ／ｍｇ蛋
白質の範囲である。
白質の範囲である。
この予備精製カラムの溶離液は、他の蛋白質のなかでも
、アルブミン、免疫グロブリン、抗トロンビンＩＩＩ、
アルファー抗トリプシンおよびトランスフェリンを含有
し、これらの蛋白質は引続いて収集し、精製し、そして
濃縮することができる。
、アルブミン、免疫グロブリン、抗トロンビンＩＩＩ、
アルファー抗トリプシンおよびトランスフェリンを含有
し、これらの蛋白質は引続いて収集し、精製し、そして
濃縮することができる。
あるいは、セファデックスを使用するこの精製の代わり
に、透析した水で寒冷沈殿の上澄み液を希釈およびろ過
する工程を用いることができる。
に、透析した水で寒冷沈殿の上澄み液を希釈およびろ過
する工程を用いることができる。
ヘパリンをろ過少１１Ｕ／ｍｌの最終濃度に添加する。
この場合において、アルブミン、免疫グロブリンおよび
抗トロンビンＩＩＩは次のカラムのる液中に回収され、
モしてアルファー抗トリプシンはこの方ラム上に吸着さ
れるであろう。それは、また、例えば、０．１６モルの
ＮａＣ１を含有する低いイオン強度の緩衝液で溶離する
こともできる；次いで、それをセファクリル（Ｓ ｅｐ
ｈａｃｒｙｌ） ５−２００（Ｐ ｈａｒｍａｃｉａ）
によって、欧州特許出願８８．４００２３５．３に記載
されたプロトコルに従い、さらに精製することができる
。
抗トロンビンＩＩＩは次のカラムのる液中に回収され、
モしてアルファー抗トリプシンはこの方ラム上に吸着さ
れるであろう。それは、また、例えば、０．１６モルの
ＮａＣ１を含有する低いイオン強度の緩衝液で溶離する
こともできる；次いで、それをセファクリル（Ｓ ｅｐ
ｈａｃｒｙｌ） ５−２００（Ｐ ｈａｒｍａｃｉａ）
によって、欧州特許出願８８．４００２３５．３に記載
されたプロトコルに従い、さらに精製することができる
。
この希釈／ろ過工程は、セファデックスを使用する予備
精製を実施するとき、精製される因子ＩＸを、この方法
の終りおいて得ることができない。
精製を実施するとき、精製される因子ＩＸを、この方法
の終りおいて得ることができない。
わずかに３０％の収率で、５〜ｌ０ＩＵ／ｍｇ蛋白質の
比活性を有する因子ＩＸが得られるであろう。
比活性を有する因子ＩＸが得られるであろう。
２、 アニオン交換クロマトグラフィー前述のように樹
脂から脱着され、そして因子■ｘ８よび因子ＩＩ、因子
Ｖｌｌおよび因子Ｘを含有し、ＩＩＵ／ｍｌ（最終濃度
）のヘパリンが多分添加された、予備精製された分画は
、ＤＥＡＥ−セファロース（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ）
ＣＬ ａ Ｂカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ） （リン
酸塩緩衝液ｐＨ６，０と平衡化するように充填でいる）
上に注入する。
脂から脱着され、そして因子■ｘ８よび因子ＩＩ、因子
Ｖｌｌおよび因子Ｘを含有し、ＩＩＵ／ｍｌ（最終濃度
）のヘパリンが多分添加された、予備精製された分画は
、ＤＥＡＥ−セファロース（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ）
ＣＬ ａ Ｂカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ） （リン
酸塩緩衝液ｐＨ６，０と平衡化するように充填でいる）
上に注入する。
ウィルス不活性を確保するために、溶媒−洗浄剤型の処
理は０．３％のトリーローブチルホスフェートおよび１
％のツイーン（Ｔ ｗｅｅｎ） （Ｍ ｅｒｃｋ）を
使用することによって実施することができ、この処理は
２４°Ｃで６時間実施する。
理は０．３％のトリーローブチルホスフェートおよび１
％のツイーン（Ｔ ｗｅｅｎ） （Ｍ ｅｒｃｋ）を
使用することによって実施することができ、この処理は
２４°Ｃで６時間実施する。
異なる分子は、カラムから、イオン強度が増大する緩衝
液を使用する溶離によって脱着される。
液を使用する溶離によって脱着される。
因子Ｖ１１（プロコンパ−チン）に富んだ分画の回収
０．１９モルの塩化ナトリウムと混合した５ミリモルの
クエン酸塩の存在下に６ミリモルのリン酸塩緩衝液で溶
離することによって、因子Ｖｌｌが濃縮された分画を収
集する。これに、抗トロンビンＩＩＩをＩＩＵ／ｍｌの
最終濃度で添加する。
クエン酸塩の存在下に６ミリモルのリン酸塩緩衝液で溶
離することによって、因子Ｖｌｌが濃縮された分画を収
集する。これに、抗トロンビンＩＩＩをＩＩＵ／ｍｌの
最終濃度で添加する。
蛋白質濃度を約３０ｇ／ｌに調節するために限外ろ過を
実施した後、ヘパリン濃度を５１Ｕ／ｍｌに調節し、そ
してこの濃縮物を２０ｍ１／びんの割合に再分配し、そ
して凍結乾燥する。
実施した後、ヘパリン濃度を５１Ｕ／ｍｌに調節し、そ
してこの濃縮物を２０ｍ１／びんの割合に再分配し、そ
して凍結乾燥する。
こうして得られた濃縮物を分析すると、プロコンパ−チ
ンは通常１．０〜２．ＯＩＵ／ｍｇ蛋白質の比活性につ
いて約２５１Ｕ／ｍｇの活性をもってここで存在するこ
とが立証される。また、生成物の血栓形成性を増加する
原因となりうる凝固因子Ｉ！、因子ＩＸおよび因子Ｘの
不存在、および蛋白質Ｃの不存在が確証される。この生
成物の弱い血栓形成力は、さらに、ウサギについての「
生体外試験Ｊ（ＮＡＰＴＴ、ＴＧＴ ５０）および「
生体内試験」 ［有効投与量５０（ＥＤ５０）］によっ
て、ＰＰ５Ｂを使用する約３０〜６０１Ｕ／ｋｇと比較
して、５００１Ｕ／ｋｇより高いことによって立証され
る。
ンは通常１．０〜２．ＯＩＵ／ｍｇ蛋白質の比活性につ
いて約２５１Ｕ／ｍｇの活性をもってここで存在するこ
とが立証される。また、生成物の血栓形成性を増加する
原因となりうる凝固因子Ｉ！、因子ＩＸおよび因子Ｘの
不存在、および蛋白質Ｃの不存在が確証される。この生
成物の弱い血栓形成力は、さらに、ウサギについての「
生体外試験Ｊ（ＮＡＰＴＴ、ＴＧＴ ５０）および「
生体内試験」 ［有効投与量５０（ＥＤ５０）］によっ
て、ＰＰ５Ｂを使用する約３０〜６０１Ｕ／ｋｇと比較
して、５００１Ｕ／ｋｇより高いことによって立証され
る。
生成物の特性は、プロコンパ−チンが欠乏した患者につ
いての抗出血処置に対する有意の改良を提供することを
確立する。
いての抗出血処置に対する有意の改良を提供することを
確立する。
蛋白質Ｃおよび蛋白質Ｓの分画の回収
問題の分画は、ｐＨ６，０において５ミリモルのクエン
酸ナトリウムの存在下に０．２８モルの塩化ナトリウム
を含有するリン酸塩緩衝液の通過によって、ＤＥＡＥ−
セファロース（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ）カラムから脱着
する。
酸ナトリウムの存在下に０．２８モルの塩化ナトリウム
を含有するリン酸塩緩衝液の通過によって、ＤＥＡＥ−
セファロース（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ）カラムから脱着
する。
溶離液は次の顔料によって特徴づけられる：蛋白質Ｃ：
５ｒＵ／ｍｌ 蛋白質Ｓ ： ５ＩＵ／ｍｌそれは凝固因子
ＩＩ、因子Ｖｌｒ、因子［Ｘおよび因子Ｘを含有しない
。
５ｒＵ／ｍｌ 蛋白質Ｓ ： ５ＩＵ／ｍｌそれは凝固因子
ＩＩ、因子Ｖｌｒ、因子［Ｘおよび因子Ｘを含有しない
。
因子ＩＩ、因子！Ｘおよび因子Ｘを含有する分画の溶離
この分画は、ｐＨ８，０に調節し、そして０．３６モル
の塩化ナトリウムを含有する５ミリモルのクエン酸塩−
リン酸塩緩衝液の通過によって溶離する。
の塩化ナトリウムを含有する５ミリモルのクエン酸塩−
リン酸塩緩衝液の通過によって溶離する。
因子ＩＸは、この溶離液中に、約３１Ｕ／ｍｇの比活性
に相当する量で存在する。この分画は因子ＶＩ Ｉ ：
Ｃを含有しないことが保証されている。
に相当する量で存在する。この分画は因子ＶＩ Ｉ ：
Ｃを含有しないことが保証されている。
前のカラムから溶離された最後の分画は、因子■！、因
子ＩＸおよび因子Ｘの混合物を含有する；それを透析し
てイオン強度を調節し、そして安定剤を３ｇ／Ｉの濃度
に添加する；次いで、それを２０ミリモルのクエン酸塩
緩衝液、ｐＨ７，４、で均衡させた、ヘパリン−セファ
０−ス（Ｓ ｅｐｈａｒ。
子ＩＸおよび因子Ｘの混合物を含有する；それを透析し
てイオン強度を調節し、そして安定剤を３ｇ／Ｉの濃度
に添加する；次いで、それを２０ミリモルのクエン酸塩
緩衝液、ｐＨ７，４、で均衡させた、ヘパリン−セファ
０−ス（Ｓ ｅｐｈａｒ。
ｓｅ）クロマトグラフィーケルを含有するカラム上に注
入する。
入する。
因７１１を含有するろ液を集める。次いで、基を０．２
５モルのＮａＣ１を含有するクエン酸塩緩衝液で溶離し
、そして因子Ｘが濃縮物された分画を集める。
５モルのＮａＣ１を含有するクエン酸塩緩衝液で溶離し
、そして因子Ｘが濃縮物された分画を集める。
０．４５モルの塩化ナトリウムを含有する緩衝液でさら
に各々し、これに３．５ｇのアルギニンを安定剤として
添加することによって、因子ＩＸ濃縮物を集める。
に各々し、これに３．５ｇのアルギニンを安定剤として
添加することによって、因子ＩＸ濃縮物を集める。
それが溶離されるとすぐに、安定剤として１ｇ／ｌのリ
ジン、および必要に応じてヘパリンを５ＩＵ／ｍｌ最終
濃度で添加する。次いで、生成物を限外ろ過によって濃
縮し、ろ過により滅菌し、そして凍結乾燥する。
ジン、および必要に応じてヘパリンを５ＩＵ／ｍｌ最終
濃度で添加する。次いで、生成物を限外ろ過によって濃
縮し、ろ過により滅菌し、そして凍結乾燥する。
生成物の平均の生化学的特性を下に記載する：蛋白質類
（ｇ／Ｉ） ０．１９±０．０３因子ＩＸ：Ｃ２
５±３ 因子■Ｘの比活性 （ＩＵ／ｍｇ蛋白質） １３０±ＩＯ因子Ｉ Ｉ
： Ｃ（ＩＵ／ｍｌ） ０．１因子ＶＩ Ｉ ：
Ｃ（ＩＵ／ｍｌ） ０．１因子ＩＸａ（％）
Ｏ ＡＴ Ｉ Ｉ Ｉ （ＩＵ／ｍｌ）
０この因子■Ｘ濃縮物は、検出可能な因子（因子ＸＩ
、ＸＩＩ、プレカリクレイン ＨＭＷ キニノゲン）
または活性化因子（トロンビン、Ｘａ。
（ｇ／Ｉ） ０．１９±０．０３因子ＩＸ：Ｃ２
５±３ 因子■Ｘの比活性 （ＩＵ／ｍｇ蛋白質） １３０±ＩＯ因子Ｉ Ｉ
： Ｃ（ＩＵ／ｍｌ） ０．１因子ＶＩ Ｉ ：
Ｃ（ＩＵ／ｍｌ） ０．１因子ＩＸａ（％）
Ｏ ＡＴ Ｉ Ｉ Ｉ （ＩＵ／ｍｌ）
０この因子■Ｘ濃縮物は、検出可能な因子（因子ＸＩ
、ＸＩＩ、プレカリクレイン ＨＭＷ キニノゲン）
または活性化因子（トロンビン、Ｘａ。
ｐｋａ、 、 、 、 ）を含有しない。それは、また
、プロトロンビン複合体の主要な汚染物質である、他の
蛋白質、例えば、インター−アルファートリプシン阻害
剤または因子Ｃ４）を本質的に含有しない。
、プロトロンビン複合体の主要な汚染物質である、他の
蛋白質、例えば、インター−アルファートリプシン阻害
剤または因子Ｃ４）を本質的に含有しない。
その血栓形成活性は、ウサギ血行停止モデル（Ｗｅｓｓ
ｌｅｒ 試験）によって決定して、究めて低い： Ｄ
Ｅ、。＞４５０１ Ｕ／ｋｇ０安定剤によって、可溶化
後、因子ＩＸの量は、室温において、活性を損失しない
で、少なくとも８時間安定である。
ｌｅｒ 試験）によって決定して、究めて低い： Ｄ
Ｅ、。＞４５０１ Ｕ／ｋｇ０安定剤によって、可溶化
後、因子ＩＸの量は、室温において、活性を損失しない
で、少なくとも８時間安定である。
最初のヒトの研究は、注射の時間において、非耐性の反
応を示さない。因子Ｖ１フイブリノゲンおよび血小板の
投与は、変動を示さざう、生成物の可能な血栓形成性を
示す。
応を示さない。因子Ｖ１フイブリノゲンおよび血小板の
投与は、変動を示さざう、生成物の可能な血栓形成性を
示す。
人間への注射は、因子ＩＸの４０〜４５％の回収率およ
び２０〜２５時間の半減期を示し、こうしてこれらの値
はＰＰ５Ｂを使用して得られるものに匹敵する。
び２０〜２５時間の半減期を示し、こうしてこれらの値
はＰＰ５Ｂを使用して得られるものに匹敵する。
この濃縮は、高品質の生成物であると思われ、モしてＢ
血友病の出血を処置するとき、増大した安全性を提供す
る。
血友病の出血を処置するとき、増大した安全性を提供す
る。
本発明の主な態様および特徴は、次の通りである。
ｌ、因子ＩＸを含有するヒト血漿の分画を、アニオン交
換クロマトグラフィーにかけ、次いで固定化されたヘパ
リンを使用するアフィニティークロマトグラフィーにか
けることを特徴とする、因子■Ｘを含有するヒト血漿の
分画を分離する方法。
換クロマトグラフィーにかけ、次いで固定化されたヘパ
リンを使用するアフィニティークロマトグラフィーにか
けることを特徴とする、因子■Ｘを含有するヒト血漿の
分画を分離する方法。
２、アニオン交換クロマトグラフィーはヘパリンの存在
下に実施する上記第１項記載の方法。
下に実施する上記第１項記載の方法。
３、アニオン交換クロマトグラフィーは半硬質ＤＥＡＥ
ゲルを使用して実施する上記第１または２方法。
ゲルを使用して実施する上記第１または２方法。
４、アニオン交換クロマトグラフィーはＤＥＡＥ−セフ
７０−ス（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ） ＣＬ ５ Ｂゲ
ルを使用して実施する上記第３項記載の方法。
７０−ス（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ） ＣＬ ５ Ｂゲ
ルを使用して実施する上記第３項記載の方法。
５、アフィニティークロマトグラフィーはヘパリン−ア
ガロースを使用して実施する上記第１〜４項のいずれか
に記載の方法。
ガロースを使用して実施する上記第１〜４項のいずれか
に記載の方法。
６、アフィニティークロマトグラフィーはヘパリン−セ
ファロース（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ） ＣＬ ６ Ｂを
使用して実施する上記第５項記載の方法。 ７、血漿分
画は寒冷沈殿の上澄み液である上記第１〜６項のいずれ
かに記載の方法。
ファロース（Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅ） ＣＬ ６ Ｂを
使用して実施する上記第５項記載の方法。 ７、血漿分
画は寒冷沈殿の上澄み液である上記第１〜６項のいずれ
かに記載の方法。
８、高純度の因子１）ｌ絹物を調製するため、寒冷沈殿
の上澄み液を、アニオン交換クロマトグラフィーの前に
、予備精製する上記第１〜７項のいずれかに記載の方法
。
の上澄み液を、アニオン交換クロマトグラフィーの前に
、予備精製する上記第１〜７項のいずれかに記載の方法
。
９、予備精製はＤＥＡＥ−セファデックス（Ｓ ｅｐｈ
ａｄｅｘ）を使用するクロマトグラフィーによって実施
する上記第８項記載の方法。
ａｄｅｘ）を使用するクロマトグラフィーによって実施
する上記第８項記載の方法。
ＩＯ１予備精製した分画の因子ＩＸの比活性は少なくと
もＱ、５１Ｕ／ｍｇ蛋白質である上記第８または９項記
載の方法。
もＱ、５１Ｕ／ｍｇ蛋白質である上記第８または９項記
載の方法。
ｌｌ、予備精製した分画の因子ｔＸの比活性は約１１Ｕ
／ｍｇ蛋白質である上記第１Ｏ項記載の方法。
／ｍｇ蛋白質である上記第１Ｏ項記載の方法。
１２、因子ＩＸの安定剤を溶離緩衝液に添加する上記第
８〜１１項のいずれかに記載の方法。
８〜１１項のいずれかに記載の方法。
１３、安定剤はアルギニンである上記＠１２項記載の方
法。
法。
１４、Ｉｇ／ｌの最少量のアルギニンを添加する上記第
１３項記載の方法。
１３項記載の方法。
１５、凍結屹燥の安定剤として、リジンを、溶離直後に
、因子■Ｘ濃縮物に添加する上記第８〜１４項のいずれ
かに記載の方法。
、因子■Ｘ濃縮物に添加する上記第８〜１４項のいずれ
かに記載の方法。
１６、予備精製した分画を溶媒−洗浄剤処理によってウ
ィルス不活性化する上記第８〜１５項のいずれかに記載
の方法。
ィルス不活性化する上記第８〜１５項のいずれかに記載
の方法。
１７、ｌ ２０１ Ｕ／ｍｇ蛋白質に等しいかあるいは
それより大きい比活性を有する高純度の因子■Ｘ濃縮物
。
それより大きい比活性を有する高純度の因子■Ｘ濃縮物
。
１８、上記第８〜１６項のいずれかに記載の方法に従っ
て得られる上記第１７項記載の濃縮物。
て得られる上記第１７項記載の濃縮物。
１９、上記第１７または１８項記載の因子ＩＸ濃縮物を
含有する製薬学的配合物。
含有する製薬学的配合物。
２０、アニオン交換クロマトグラフィーのる液を分離し
た後、溶離をイオン力が増大する緩衝液を使用して実施
して、それぞれ、アルファーｌ−抗トリプシン（ＡＡＴ
） 、プロコンパ−チン（因子Ｖｌｌ）、蛋白質Ｃおよ
び蛋白質Ｓが濃縮した４種類の分画および最後に因子Ｉ
Ｘを分離する上記第１〜７項のいずれかに記載の方法。
た後、溶離をイオン力が増大する緩衝液を使用して実施
して、それぞれ、アルファーｌ−抗トリプシン（ＡＡＴ
） 、プロコンパ−チン（因子Ｖｌｌ）、蛋白質Ｃおよ
び蛋白質Ｓが濃縮した４種類の分画および最後に因子Ｉ
Ｘを分離する上記第１〜７項のいずれかに記載の方法。
２１、アニオン交換クロマトグラフィーより荊に、希釈
−ろ過工程を実施する上記第２０項記載の方法。
−ろ過工程を実施する上記第２０項記載の方法。
２２、ＡＡＴか濃縮した分画を、０．■３〜０．１７モ
ル／１の塩化ナトリウムを含有する緩衝液により、わず
かに酸性のｐＨにおいて溶離する上記第２０または２１
項記載の方法。
ル／１の塩化ナトリウムを含有する緩衝液により、わず
かに酸性のｐＨにおいて溶離する上記第２０または２１
項記載の方法。
２３、因子Ｖｌｌが濃縮した分画を、０，１８〜０．２
０モル／ｌの塩化ナトリウムを含有する緩衝液により、
わずかに酸性のｐＨにおいて溶離する上記第２０〜２２
項のいずれかに記載の方法。
０モル／ｌの塩化ナトリウムを含有する緩衝液により、
わずかに酸性のｐＨにおいて溶離する上記第２０〜２２
項のいずれかに記載の方法。
２４、因子Ｖｌｌｉｌ縮物を得絹物め、溶離した分画を
、それにヘパリンおよび抗トロンビンＩＩ■を添加する
ことによって、処理する上記第２０〜２３項のいずれか
に記載の方法。
、それにヘパリンおよび抗トロンビンＩＩ■を添加する
ことによって、処理する上記第２０〜２３項のいずれか
に記載の方法。
２５、蛋白質Ｃおよび蛋白質Ｓが濃縮した分画を、０．
２６〜０．３０モル／１の塩化ナトリウムを含有する緩
衝液により、わずかに酸性のｐＨにおいて溶離する上記
第２０〜２４項のいずれかに記載の方法。
２６〜０．３０モル／１の塩化ナトリウムを含有する緩
衝液により、わずかに酸性のｐＨにおいて溶離する上記
第２０〜２４項のいずれかに記載の方法。
２６、因子ＩＸか濃縮した分画を、０３４〜０．３８モ
ル／ｌの塩化ナトリウムを含有する緩衝液により、わず
かに酸性のｐＨにおいて溶離する上記第２０〜２５項の
いずれかに記載の方法。
ル／ｌの塩化ナトリウムを含有する緩衝液により、わず
かに酸性のｐＨにおいて溶離する上記第２０〜２５項の
いずれかに記載の方法。
２７、因子ｌＸ１Ａ縮物を得るため、因子ＩＸをリジン
の添加により安定化する上記第２０〜２６項のいずれか
に記載の方法。
の添加により安定化する上記第２０〜２６項のいずれか
に記載の方法。
２８、リジンは、アフィニティークロマトグラフィーの
前および後に、添加する上記第２７項記載の方法。
前および後に、添加する上記第２７項記載の方法。
２９、アルギニンをアフィニティークロマトグラフィー
のために使用する溶離緩衝液中に添加する上記第２７ま
たは２８項記載の方法。
のために使用する溶離緩衝液中に添加する上記第２７ま
たは２８項記載の方法。
３０、上記第２０〜２９項のいずれかに記載の方法によ
って調製された血漿誘導体。
って調製された血漿誘導体。
３１、上記第３０項記載の血漿誘導体を含む製薬学的配
合物。
合物。
ド・リール
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、因子ＩＸを含有するヒト血漿の分画を、アニオン交
換クロマトグラフィーにかけ、次いで固定化されたヘパ
リンを使用するアフィニティークロマトグラフィーにか
けることを特徴とする、因子ＩＸを含有するヒト血漿の
分画を分離する方法。 ２、１２０ＩＵ／ｍｇ蛋白質に等しいかあるいはそれよ
り大きい比活性を有することを特徴とする高純度の因子
ＩＸ濃縮物。 ３、特許請求の範囲第２項記載の因子ＩＸ濃縮物を含有
することを特徴とする製薬学的配合物。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8714665A FR2622108B1 (fr) | 1987-10-23 | 1987-10-23 | Preparation de concentres de proconvertine (facteur vii), de facteur antihemophilique b (facteur ix) et d'autres proteines plasmatiques, et leur utilisation therapeutique |
| FR8714665 | 1987-10-23 | ||
| FR8806923 | 1988-05-25 | ||
| FR8806923A FR2631830B1 (fr) | 1988-05-25 | 1988-05-25 | Concentre de facteur ix de haute purete, sa preparation et son utilisation en therapeutique |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01207239A true JPH01207239A (ja) | 1989-08-21 |
| JP2768957B2 JP2768957B2 (ja) | 1998-06-25 |
Family
ID=26226280
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63267004A Expired - Lifetime JP2768957B2 (ja) | 1987-10-23 | 1988-10-22 | 高純度のヒト因子ｉｘ濃縮物および他の血漿蛋白質およびそれらの治療学的使用 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5457181A (ja) |
| EP (1) | EP0317376B2 (ja) |
| JP (1) | JP2768957B2 (ja) |
| DE (1) | DE3877529T2 (ja) |
| DK (1) | DK173859B1 (ja) |
| ES (1) | ES2045167T5 (ja) |
| GR (2) | GR3006910T3 (ja) |
| NO (1) | NO179997C (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02306994A (ja) * | 1989-05-05 | 1990-12-20 | Biotest Ag | 血液凝固因子９の単離方法 |
| JPH09506256A (ja) * | 1993-12-10 | 1997-06-24 | オクタファルマ・アクチェン・ゲゼルシャフト | メンブレンクロマトグラフィーによるビタミンｋ依存性蛋白の精製 |
Families Citing this family (39)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IE73210B1 (en) * | 1990-01-24 | 1997-05-07 | Warner Lambert Co | Process for the production of thrombin and high purity thrombin preparation thereby obtained |
| ATE177781T1 (de) * | 1990-02-20 | 1999-04-15 | Baxter Int | Gereinigtes, virusfreies menschliches thrombin |
| AT402261B (de) * | 1991-01-25 | 1997-03-25 | Immuno Ag | Komplex enthaltend den gerinnungsfaktor ix |
| DE69231401T2 (de) | 1991-03-01 | 2001-02-08 | Rhone-Poulenc Rorer International (Holdings) Inc., Greenville | Herstellung von faktor-ix |
| FR2711371B1 (fr) * | 1993-10-18 | 1995-12-29 | Aetsrn | Procédé de préparation d'un concentré d'inter-alpha-trypsine inhibiteur à usage thérapeutique et concentré obtenu. |
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| US6372716B1 (en) | 1994-04-26 | 2002-04-16 | Genetics Institute, Inc. | Formulations for factor IX |
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