JPH0121160B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

この発明はバソプレシンの類似体に関する。こ
の類似体は酵素による分解に対して安定であり、
９位のグリシンアミド残基が除去されており、そ
して中枢神径系に対して有意な効果を有する。 脳下垂体後葉ホルモン及びその若干の類似体
が、実験動物の記憶、睡眠、及び学習に影響を与
えることが知られている〔D.デ・ウイード（de
Wied）、Proc.Roy.Soc.B210、183（1980年）〕。し
かしながら、実際に使用するためには、使用する
化合物は天然ホルモンが有する内分泌作用を発揮
せず、且つ酵素による分解から保護されなければ
ならない。 ここに、この発明の類似体により前記の要求が
満たされることが見出された。この類似体は、天
然ホルモンに比べて９位のグリシンアミド残基が
除去されており、８位のＬ−アルギニンがその立
体異性体又はオルニチン残基により置き替えられ
ている。この化合物の１つはチオエーテル結合に
替えてジスルフイド結合を有する。 この発明は、次の式（）、 （式中、R¹はＨであり、R²はCH₂−Ｓであり、
そしてR³はＤ−Argであり、そして他のすべての
対掌性アミノ酸はＬ−型である）で示されるバソ
プレシン類似体に関する。この明細書において、
Tryはチロシル基、Pheはフエニルアラニル基、
Glnはグルタミニル基、Asnはアスパラギニル基、
Proはプロリル基、Ｄ−ArgはＤ−アルギニン、
そしてＬ−OrnはＬ−オルニチンをそれぞれ表わ
す。 この明細書において、R¹がＨ、R²がCH₂−Ｓ
そしてR³がＤ−Argである式（）の化合物を
「化合物ａ」とし；R¹がNH₂、R²がＳ−Ｓそし
てR³がＤ−Argである式（）の化合物を「化合
物ｂ」とし；そしてR¹がNH₂、R²がＳ−Ｓそ
してR³がＬ−Ornである式（）の化合物を「化
合物ｃ」とする。 ラツトにおいて測定した内分泌生物活性〔国際
単位（I.U.／mg）、「Handbook of Experimental
Pharmacology」Vol.、
Neurohypophysial hormones and similar
polypeptides（B.Berde）、131頁、Speringer−
Verlag、ベルリン（1968年）を参照のこと〕を
第１表に示す。比較のため天然ホルモンであるア
ルギニン−バソプレシンの値も示してある。

【表】

【表】 子宮緊縮作用、催乳作用及び昇圧作用は、天然
ホルモンの対応する作用に比べて少なくとも３オ
ーダー低く、抗利尿作用は少なくとも２オーダー
低い。 調製した類似体を、受動防御反応、すなわちい
わゆる受動回避（パツシブ・アボイダンス）試験
に用いた。この試験において天然バソプレシンが
記憶過程に好ましい影響を与えることが証明され
ている。試験の原理は、ラツトが足に穏和な電気
刺激を受けた空間を回避するという事実に基く。
この回避時間の長さを測定する。化合物の投与に
よりこの反応時間が延長されれば、この実験条件
に関し記憶が強化されたものとして説明される。
化合物は、動物が足に刺激を受けた直後又は回避
反応維持試験の20時間前に5μｇ／Kgの投与量で
皮下投与した。投与の20時間後においても効果が
生ずるという事実によりこの類似体の長期持続効
果が証明され、この点において高く評価される。 例において使用した分析方法は次の通りであ
る。アミノ酸の分析は自動装置（Development
workshops、Czechoslovak Academy of
Sciences、6020型）により行つた。ペプチド試料
は105℃、150Paにて20時間、6M HClを用いて
加水分解した。薄層クロマトグラフイーは、シリ
カゲル板（商標名「Silufol−Kavalier」）を用
い、次の溶媒系により行つた。 系１ ２−ブタノール／98％HCOOH／H₂O
（75：13.5：11.5） 系２ ２−ブタノール／25％NH₄OH／H₂O
（85：7.5：7.5） 系３ １−ブタノール／CH₃COOH／H₂O（40：
10：10） 系４ １−ブタノール／CH₃COOH／ピリジ
ン／H₂O（15：３：10：６） 系９ メタノールを20％含むベンゼン 系13 １−ブタノール／CH₃COOH／H₂O（50：
15：40） 系23 酢酸エチル／ピリジン／CH₃COOH／
H₂O（５：５：１：３） 電動泳動分析は、湿室中、電圧勾配20V／cmに
て、ワツトマン（Whatman）3MM紙上で行つ
た。化合物はニンヒドリン法又は塩素化法により
検出した。 次に、この発明の類似体の製造方法を例により
示す。 例 １ 化合物ａの製造 出発物質（中間体）の製造 ｏ−ニトロベンゼンスルフエニルプロリル−
N^G−ｐ−トルエンスルホニル−Ｄ−アルギニ
ンのベンジルエステルの製造 ジメチルホルムアミド（５ml）中ｏ−ニトロベ
ンゼンスルフエニルプローリンの２，４，５−ト
リクロロフエニルエステル（2.5ｇ）及びN^G−ｐ
−トルエンスルフオニル−Ｄ−アルギニンのベン
ジルエステルの臭酸塩（2.5ｇ）の溶液を、室温
にて40分間撹拌した。ジメチルホルムアミドを真
空蒸発せしめ、残渣を酢酸エチルに溶解し、そし
て酢酸エチル溶液を、炭酸水素ナトリウムの飽和
溶液、水、PH２のKHSO₄／K₂SO₄溶液及び水で
抽出した。MgSO₄上で乾燥した後、酢酸エチル
を蒸発せしめ、そして酢酸エチル及び石油エーテ
ルから結晶化し、３ｇ（90％）の生成物を得た。
融点90〜92℃。〔α〕_D＝−40.4゜（ｃ＝0.4、メタノ
ール）。薄層クロマトグラフイーにおけるR_f値：
0.88（系１）、0.75（系２）、0.75（系３）、0.83（系
４）、0.60（系９）。 元素分析：式C₃₁H₃₆N₆O₇S₂（分子量668.8） Ｃ Ｈ Ｎ Ｓ 計算値(%) 55.67 5.43 12.56 9.59 測定値(%) 55.92 5.38 12.68 9.38 チロシル−フエニルアラニル−グルタミニル−
アスパラギニル−ｓ−（γ−カルボキシプロピ
ル）システイニル−プロリル−N^G−ｐ−トル
エンスルホニル−Ｄ−アルギニンのラクタムの
ベンジルエステルの製造 エーテル（１ml）中2.6M塩酸溶液を、ジメチ
ルホルムアミド（１ml）中上記の保護されたベン
ジルエステル（177mg）の溶液に加え、そしてこ
の反応混合物を室温に４分間放置した。こうして
生成した塩酸塩をエーテルで沈澱せしめ、そして
乾燥した（E^Gly _2.6〕0.96、E^His _5.7＝0.70）。 Ｎ−エチルピペリジンを、ジメチルホルムアミ
ド（１ml）中塩化物の溶液にPHが約10になるよう
に加え、そしてこれに、ジメチルホルムアミド
（1.5ml）中１−デアミノ−１−カルバプレシノン
酸〔ブルトニク（Brtnik）F.、バース（Barth）
T.、ジヨスト（Jost）K.、Collect.Czechoslovak
Chem.Commun.46、278（1981）〕100mg及びＨ−
ヒドロキシベンゾトリアゾール23mgの溶液を注入
した。この反応混合物を−30℃に冷却し、ジメチ
ルホルムアミド（0.5ml）中ジシクロヘキシルカ
ルボジイミド（31mg）を加え、そしてこの混合物
を−５℃にて４時間撹拌し、さらに周囲温度にて
20時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素を去
し、ジメチルホルムアミドを蒸発せしめ、残渣を
塩酸（PH２）と共にすりつぶし、そして過器上
で水、炭酸水素ナトリウム飽和溶液、水、及びエ
ーテルで洗浄した。粗製物を160mg得、ジメチル
ホルムアミド中ゲル過により精製した。純粋な
化合物を含有する溶出液を蒸発せしめ、そして残
渣をジメチルホルムアミド及び水から結晶化し
た。収量100mg（60％）であつた。融点152〜154
℃。〔α〕_D＝−34.0゜（ｃ＝0.45、ジメチルホルムア
ミド）。薄層クロマトグラフイーにおけるR_f値：
0.50（系１）、0.54（系３）、0.66（系４）。アミノ酸
分析、Pro：0.98、Arg：0.97、Cys
（C₃H₆CO₂H）：0.94、Gin：1.05、Asp：1.04、
Try：0.92、Phe：1.08。 元素分析：式C₅₉H₇₄N₁₂O₁₄S₂・H₂O（分子量
1257） Ｃ Ｈ Ｎ Ｓ 計算値(%) 56.36 6.09 13.37 5.10 測定値(%) 56.52 6.13 13.27 5.09 最終生成物の製造 チロシル−フエニルアラニル−グルタミニル−
アスパラギニル−ｓ−（γ−カルボキシプロピ
ル）システイニル−プロリル−Ｄ−アルギニン
のラクタム トリフルオロ酢酸（300μ）中上記化合物
（30mg）の溶液を０℃に冷却し、トリフルオロメ
タンスルホン酸（200μ）及びアニソール（20μ
）を加え、そしてこの混合物を上記の温度にて
30分間置いた。エーテルを用いてこの混合物を沈
澱処理し、酢酸塩サイクル中陰イオン交換カラム
を通して過した。溶出液を凍結乾燥し、そして
凍結乾燥物をフリーフロー電気泳動（2500V、
135ｍＡ）により精製した。生成物６mgが得られ
た。〔α〕_D＝−47゜（ｃ＝0.1、1M酢酸）。薄層クロ
マトグラフイーのR_f値：0.34（系１）、0.57（系
４）、0.74（系23）。E^Gly _2.4＝0.80。アミノ酸組成、
Arg：1.01、Pro：1.04、Glu：1.01、Asp：1.02、
Phe：0.97、Try：0.94、Cys（C₃H₆CO₂H）：
0.98。 元素分析：式C₄₅H₆₂N₁₂O₁₂S・CH₃COOH・
3H₂O（分子量1109） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値(%) 50.89 6.54 15.15 測定値(%) 50.68 6.45 14.92 例 ２（参考例） 化合物ｃの製造 出発物質の製造 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−ｓ−（２，４，
６−トリメチルベンジル）システイニル−チロ
シル−フエニルアラニル−グルタミン−アスパ
ラギニル−ｓ−（２，４，６−トリメチルベン
ジル）システイニル−プロリル−N〓−ベンジ
ルオキシカルボナルオルニチンのベンジルエス
テル ジオキサン（130μ）中3M塩酸溶液を、撹拌
しながら、ジメチルホルムアミド（２ml）中Ｎ−
ベンジルオキシカルボニル−ｓ−（２，４，６−
トリメチルベンジル）システイニル−チロシル−
フエニルアラニル−グルタミニル−アスパラギニ
ル−ｓ−（２，４，６−トリメチルベンジル）シ
ステインのヒドラジド〔ブルトニクF.、バース
T.、クレジー（Krejci）I.、ジヨストK.、
Collection Czechoslovak Chemical
Communications、（印刷中）〕（238mg）の溶液に
加えた。この溶液を−20℃に冷却し、そしてこれ
にジメチルホルムアミド（0.5ml）中亜硝酸ブチ
ル（21mg）を加えた。この反応混合物を20分間撹
拌し、−40℃に冷却し、Ｎ−エチルピペリジンで
中和（湿潤PH試験紙上PH７）し、そして次のよう
にして調製した溶液を加えた。 ｏ−ニトロベンゼンスルフエニルプロリル−
N〓−ベンジルオキシカルボニルオルニチンのベ
ンジルエステル〔ブルトニクF.、バースT.、ク
レジーI.、ジヨストK.、Collection
Czechoslovak Chemical Communications、（印
刷中）〕（182mg）をジメチルホルムアミド（１ml）
に溶解し、そしてこの溶液にエーテル（0.5ml）
中3M HClを加えた。５分後、反応混合物をエー
テルで希釈し、そして分離した沈澱をデカント
し、そしてエーテルで洗浄した。こうして得られ
る塩酸塩をジメチルホルムアミド（２ml）に溶解
し、この溶液をＮ−エチルピペリジンでPH10に調
整し、そしてこの溶液を上記の方法で調製したア
ジドに加えた。０℃にて60時間置いた後、反応混
合物を蒸発せしめ、そして残渣を、0.5M HCl、
水、NaHCO₃の飽和溶液、そして再び水と共に
次々とすりつぶした。生成物を、ジメチルホルム
アミド−水混合物液から結晶化し、そしてジメチ
ルホルムアミド中ゲル過を行うことにより精製
した。300mg（93％）の生成物が得られた。融点
238〜240℃、〔α〕_D＝−27.6゜（ｃ＝0.15、ジメチル
ホルムアミド）。薄層クロマトグラフイーのR_f
値：0.86（系１）、0.97（系２）、0.82（系３）、0.91
（系４）。 元素分析：式C₈₆H₁₀₆N₁₁O₁₆S₂・2H₂O（分子量
1617） Ｃ Ｈ Ｎ Ｓ 計算値(%) 63.88 6.67 9.53 3.97 測定値(%) 64.00 6.38 9.57 3.95 最終生成物の製造 〔８−オルニチン、９−グリシンアミド除去〕
バソプレシン 上記の保護されたオクタペプチド（100mg）を
トリフルオロ酢酸（1.25ml）に溶解し、チオアニ
ソール（100μ）を加え、そしてこの溶液を０
℃に冷却した。同じ温度に冷却したトリフルオロ
メタンスルホン酸（１ml）を上記の反応混合物に
加えた。０℃にて30分間置いた後、混合物をエー
テルで希釈し、分離した沈澱を取し、そして水
（300ml）に溶解した。この溶液のPHを0.1N
NaOHにより6.8に調整し、そしてこの反応混合
物を空気中酸素により１時間酸化した。次に酢酸
を用いてPHを3.9に調整し、そしてこの溶液を、
酢酸塩サイクル中弱塩基性イオン交換カラムを通
して過した。溶出液を凍結乾燥し（89mg）、凍
結乾燥物を50％酢酸水溶液に溶解し、そして生成
物をゲル過により精製した。15.3mg（24％）の
生成物を得た。〔α〕_D＝−15.1゜（ｃ＝0.2、1M酢
酸）。E^Gly _2.4＝0.89、E^His _5.7＝0.34。薄層クロマトグ
ラ
フエーにおけるR_f値：0.37（系４）、0.43（系13）、
0.89（系23）。アミノ酸分析、Phe：1.01、Try：
0.92、Gln：1.00、Asp：1.00、Pro：1.03、Orn：
0.99。試料の一部を過蟻酸により酸化した後シス
テイン酸として求めたシスチンの量、1.92。 元素分析：式C₄₃H₅₉N₁₁O₁₂S₂・2CH₃CO₂H・
2H₂O（分子量1142） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値(%) 49.42 6.26 13.48 測定値(%) 49.18 5.95 13.30 例 ３（参考例） 化合物ｂの製造 出発物質の製造 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−ｓ−（２，４，
６−トリメチルベンジル）システイニル−チロ
シル−フエニルアラニル−グルタミニル−アス
パラギニル−ｓ−（２，４，６−トリメチルベ
ンジル）システイニル−プロリル−N^G−ｐ−
トルエンスルホニル−Ｄ−アルギニンのベンジ
ルエステル 例１に記載したのと同様の方法で、保護された
アジドの溶液を調製した。 ｏ−ニトロベンゼンスルホニルプロリル−N^G
−ｐ−トルエンスルホニル−Ｄ−アルギニンのベ
ンジルエステルをチエコスロバキア国特許（出願
第2099−81号）に従つて調製した。エーテル
（0.5ml）中塩酸（2M溶液）を、ジメチルホルム
アミド（１ml）中上記化合物（200mg）の溶液に
加えた。この反応混合物を５分間周囲温度に置
き、そしてエーテルで希釈した。沈澱する塩酸塩
を吸引分離し、エーテルで洗浄し、ジメチルホル
ムアミド（２ml）に溶解し、そしてこの溶液のPH
をＮ−エチルピペリジンで10に調整した。この溶
液をアジドの溶液に加え、そして反応混合物を０
℃にて60時間静置した。ジメチルホルムアミドを
蒸発せしめ、そして残渣を採取し、例１に記載し
た方法により精製した。生成物310mg（93％）を
得た。融点230〜232℃。〔α〕_D＝−28.6゜（ｃ＝0.5、
ジメチルホルムアミド）。薄層クロマトグラフイ
ーのR_f値：0.94（系１）、0.75（系２）、0.90（系３）
、
0.96（系４）。 元素分析：式C₈₆H₁₀₅N₁₃O₁₆S₃・H₂O（分子量
1691） Ｃ Ｈ Ｎ Ｓ 計算値(%) 61.08 6.26 10.77 5.69 測定値(%) 60.89 6.23 10.75 5.42 最終生成物の製造 〔８−Ｄ−アルギニン、９−グリシンアミド除
去〕バソプレシン 上記のオクタペプチド（100mg）から保護基を
脱離し、例１に記載した方法と同様にして酸化を
行つた。同様にして脱塩及びゲル過も行つた。
14mg（23％）の生成物を得た。〔α〕_D＝−17.7゜（ｃ
＝0.27、1M酢酸）。E^Gly _2.4＝0.56、E^His _5.7＝0.32。薄
層
クロマトグラフイーにおけるR_f値：0.34（系４）、
0.42（系13）、0.91（系23）。アミノ酸分析、Phe：
1.02、Try：0.91、Asp：1.02、Gln：1.04、Pro：
1.02、Arg：1.00、Cys（O₃H）：1.92（試料の一部
を過蟻酸で酸化した後にシステイン酸として求め
た値）。 元素分析：式C₄₄H₆₁N₁₃O₁₂S₂・2CH₃COOH（分
子量1124） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値(%) 49.14 6.19 16.20 測定値(%) 49.02 5.98 15.94

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の式（）、 （式中、R¹はＨであり、R²はCH₂−Ｓであり、
   そしてR³はＤ−Argであり、そして他のすべての
   対掌性アミノ酸はＬ−型である）、 で示されるバソプレシン類似体。