JPH01224317A - 細胞性抗体産生抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、細胞性抗体関与の疾患に対する治療剤に関す
るしのである。

［従来の技術および課題］ 慢性肝炎、感染型または混合型喘息、ネフローゼ症候群
等の細胞性抗体が関与する疾患は、患者数も多く社会的
に関心の高い疾患である。

従来、これらの疾患の治療のために、細胞性抗体産生を
抑制するステロイド剤等が使われているが、副作用が多
いため使用を制限されている。そこで、副作用が少なく
、優れた薬効を有する細胞性抗体産生抑制剤の開発が望
まれていた。

［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、慢性肝炎、ネフローゼ症候群等の疾患治
療に有効な細胞性抗体産生抑制剤を提供すべく、生薬黄
柏の抽出エキスについて細胞性抗体産生抑制作用のスク
リーニングを行った結果、黄柏の成分であるフェロデン
ドリンに強力な細胞性抗体産生抑制作用のあることを見
い出した。

本発明はこの知見に基づくもので、フェロデンドリンま
たはフェロデンドリンの薬理学的に許容し得る塩を有効
成分とする細胞性抗体産生抑制剤である。

黄柏は、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）のキハダ（Ｐ’
ｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ　ａｍｕｒｅｎｓｅ　ＲＵＰ
Ｒ，）またはその他同属植物の層成を除いた樹皮であり
、鎮痙、健胃、抗菌の目的で古来から用いられてきた生
薬である。

フェロデンドリンは、この黄柏より抽出単離された化合
物であり、次のような構造式で表される。

フェロデンドリンは黄柏より、例えば次のようにして得
ることができる。

黄柏をメタノールで抽出、濃縮して得たメタノール抽出
エキスを水に溶解し、酢酸エチルと振盪分配する。分配
後、水層を濃縮し、Ｍ（ｌ　　ゲルＣＨＰ　２０　Ｐ、
セファデックス　Ｌ　Ｉ−（２０等の多孔性ゲルを担体
としてカラムクロマトグラフィーに付し、水、水−メタ
ノール、メタノール、塩酸−メタノールにより順次溶出
する。水−メタノールの溶出部よりフェロデンドリン、
マグノフロリンおよびフェノール類を含む粗画分を得る
。

この粗画分を、再びカラムクロマトグラフィーに付し、
酢酸−水−メタノールの混合溶媒で溶出し、溶出部より
フェロデンドリンを含む両分を得る。

さらに、該両分をカラムクロマトグラフィーに付し、水
、水−メタノール、メタノールにより順次溶出する。水
−メタノールの溶出部より粗フェロデンドリンを得る。

次に、粗フェロデンドリンをカラムクロマトグラフィー
に付し、エタノールで溶出して得た溶出液を留去後、ア
セトン−メタノールより再結晶し、フェロデンドリンを
得る。

以下に、フェロデンドリンの製造の具体例を示す。

具体例１ 黄柏２　ｋｇをメタノール８Ｑで４回抽出し、得られた
抽出エキスを混合し、減圧上濃縮し、メタノール抽出エ
キス３６０ｇを得た。該抽出エキスを水ｌσに溶解し、
酢酸エチル５００７で３回抽出した後、水層を減圧上濃
縮し、水可溶部２８０ｇを得た。これをＭＣＩゲル　Ｃ
ＨＰ　２０　Ｐを用いたカラムクロマトグラフィーに付
し、水、水：メタノールの混合割合を順次増加させた水
＝メタノール、メタノール、塩酸−メタノール（２：９
８）の順で溶出し、１２０−ずつ分取し、水−メタノー
ル（７：３）から水−メタノール（３：２）の溶出部を
混合し、減圧上濃縮し、褐色粉末フェロデンドリンおよ
びフェノール類を含む粗画分６０ｇを得た。

この祖両分６０２をＭＣＩゲル　ＣＨＰ２０Ｐを用いた
カラムクロマトグラフィーに付し、酢酸−水（２：９８
）、酢酸：水：メタノールの混合割合を順次増加させた
酢酸−水−メタノール、酢酸−メタノール（２：９８）
の順で展開し、１２０−ずつ分取し、酢酸−水−メタノ
ール（２：８８　：１　ｏ）から酢酸−水−メタノール
（２：５８　：４０）で溶出して得た溶出部を混合し、
減圧上濃縮し、褐色粉末のフェロデンドリンを含む両分
１２ｇを得た。

さらに、該画分１２９をフジ（Ｆｕｊｉ）ゲル　０ＤＳ
Ｇ３を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、水、水
：メタノールの混合割合を順次増加させた水−メタノー
ル、メタノールの順で展開し、２〇−ずつ分取し、水−
メタノール（４：ｌ）から水−メタノール（３：２）の
溶出部を混合し、減圧上濃縮し、粗フェロデンドリン３
９を得た。

次に粗フェロデンドリン３ｇをセファデックスＬＨ２０
を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、エタノール
ＩＱの溶出部を混合し、減圧上濃縮し、アセトン−メタ
ノールより結晶化し、無色針状晶２．１９を得た。この
無色針状晶の理化学的性質は以下の如くであり、これら
の性質より酢酸フェロデンドリンであると決定した。

融　　点　　＝　２０５〜２０８℃ 比旋光度：［α］’５　　１１８．９゜（ｃ−０，４、
Ｈｔｏ　） 赤外線吸収スペクトルνＫＢｔα−１：３４００．１６
２０．１４００ プロトン核磁気共鳴スペクトル （δＰｐｍ　１１１　ＣＤ３０Ｄ）： １．８８（３Ｈ，ｓ）、　　３．２１（３Ｈ，ｓ）。

２．８〜３．６　（４Ｈ、ｍ）。

３．８５，３．８６（ｅａｃｈ３Ｈ，ｓ）。

３．８５　（２Ｈ、ｍ）。

４　．５　５　．４　．７　３ （ｅａｃｈｌ　　Ｈ、ｄ　、Ｊ　＝　１　５　Ｈｚ）。

４．７　５（Ｉ　　Ｈ，ｍ）、　　　”６．６　５．６
．７　１，６．７　５，６．８　６（ｅａｃｈ　ｌ　　
Ｈ、ｓ　） 具体例２ 具体例１で得た酢酸フェロデンドリンを少量の水に溶解
し、１％塩酸水溶液で酸性とした。これを減圧上濃縮し
、淡褐色無晶形粉末を得た。この淡褐色無晶形粉末の理
化学的性質は以下の如くであり、これらの性質より塩化
フェロデンドリンであると決定した。

比旋光度＝［αコＩｓ　　−１３６，４゜（ｃ＝　０．
４１　、　Ｃ）［３０Ｈ）赤外線吸収スペクトルν二２
に　ｃＭ−’：３４００．１６１０．１５２０ 具体例３ 具体例２で得た塩化フェロデンドリンを少量の水に溶解
し、濃ヨウ化カリウム水溶液を加え、褐色の沈澱を得、
これを濾取し、メタノール−エタノール−アセトン（１
：１　：２）で結晶化し、無色針状晶を得た。この無色
針状晶の理化学的性質は以下の如くであり、これらの性
質よ−り臭化フェロデンドリンであると決定した。

融　　　点　・　２５７〜２５９°Ｃ 比旋比変光［α］’、：　　−１２５，８゜（ｃ＝　０
．４１　、ＣＨ３０Ｈ） 赤外線吸収スペクトルνｖａａ：　　（’７１７−　’
　：３２００．１６２０．１５３０ 次に、フェロデンドリンが細胞性抗体産生抑制作用を有
することを実験例を挙げて説明する。

実験例１ ｄｄＹ系雄性マウス（８週齢）の腹部を剪毛し、１％塩
塩化シクリルエタノール溶液０　、　Ｉ　ＲＱを塗布、
感作した。６日後に１％塩塩化シクリルオリーブ油溶液
＋５ｄずつを両耳朶の裏表に塗布し誘発した（−次誘発
）。その２４時間後に耳朶の腫張をダイアル・ンツクネ
スゲージ（ｄｉａｌ　ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ　ｇａｎｇｅ
）を用いて測定した。得られた測定値より誘発面の測定
値を差し引いたものを１次免疫反応による腫張塵とし、
細胞性抗体産生抑制作用の指標とした。

２日後に上記と同様にして感作し、６日後に誘発しく二
次誘発）、先と同様にその２４時間後に耳朶の腫張をダ
イアル・シックネスゲーノを用いて測定した。得られた
測定値より誘発前の値を差し引いたものを２次免疫反応
にょる腫張塵とし、細胞性抗体産生抑制作用の指標とし
た。

また、フェロデンドリンの生理食塩水溶液を最初の感作
臼より５日間腹腔内投与し、コントロールには生理食塩
水のみを投与した。１次免疫反応、２次免疫反応におけ
る腫張塵はそれぞれ第１表に示す如くである。

第１表 また、実験例１において、二次誘発直前およ゛び１６時
間後の２回フェロデンドリンを投与した場合には、第２
表に示すように耳朶の腫張塵には変化が見られないこと
より、フェロデンドリンが、細胞性抗体産生を抑制する
ことが確認された。

第２表 実験例２ Ｂａｌｂ／ｃマウスおよびＣＢＦ　、マウスの牌臓を無
菌的に摘出し、ハングの平衡塩溶液（ｌｌａｎｋ’　ｓ
　ｂａｌａｎｃｅｄｓａｌｔ　５ｏｌｕｔｉｏｎ）中で
ステンレスワイヤーメツシュ（２００メツシユ）を通し
て細胞浮遊液とした。

次いで、適量の０．７５％塩化アンモニウム溶液を加え
て、細胞浮遊液中の赤血球を溶解し、ハングの平衡塩溶
液で３回洗浄した後、１０’細胞／Ｉｄ、に調整した。

ＣＢＦ　、マウスの右後肢足跡にＢａ１ｂ／ｃマウスの
牌細胞浮遊液０．０５−を、左後肢足鍍にＣＢＦ　、マ
ウスの牌細胞浮遊液０．ＯＪｄをそれぞれ皮下注射した
。８日後に両足の腋窩リンパ節を摘出して重量を測定し
た。右側の腋窩リンパ節の重量より左側の腋窩リンパ節
の重量を差し引いて、移植片対宿主反応の強度を求めた
。

フェロデンドリンは腹腔内投与では生理食塩水に、経口
投与では、精製水にそれぞれ溶解し、細胞移入日から８
日間投与した。また、コントロールにはそれぞれ溶媒の
みを投与した。フェロデンドリンを腹腔内投与した場合
と経口投与した場合の移植片対宿主反応の強度はそれぞ
れ第３表に示す如くである。

第３表 実験例３ ベンドパルビタール麻酔下のＣ５７ＢＬ／６マウスの背
部正中線に直径ｌＬ：１１の皮膚の全層を除去し、移植
用ベツドを作製した。これに、供給皮膚片として無菌的
に採取した同サイズのＣ３ＩＩ　／　Ｈｅマウスの皮膚
を移植し、皮膚片の離脱を観察した。フェロデンドリン
は移植３日前から１１日間腹腔内投与し、コントロール
には生理食塩水のみを投与した。

その結果、コントロールの移植皮膚の生着時間は８．７
日であり、フェロデンドリン５ｍｇ／に９および１０１
！９７に９投与群の移植皮膚の生着時間はそれぞれ９．
５日、９．６日であった。

これらの結果よりフェロデンドリンが優れた細胞性抗体
産生抑制作用および同種移植拒絶反応抑制作用を有する
ことが確認された。このフェロデンドリンは、混合型喘
息、慢性肝炎、ネフローゼ症候群、サルコイド−シス、
ベーチェット病等の細胞性抗体関与の疾患の治療に用い
ることができる。

また、これらの実験においてフェロデンドリンの投与に
よる副作用は確認されなかった。

さらに、フェロデンドリンを、腹腔内投与の場合は生理
食塩水に溶解し、経口投与の場合は精製水に溶解してそ
れぞれをマウス（１２匹）に投与し、７２時間後の生死
判定によりＬ　Ｄ　ｓ。値（Ｌｉｔｃｈｒｉｅｌｄ−ｗ
ｉｌｌｃｏｘｏｎ法による）を算出した結果、腹腔内投
与では１４０　Ｒ９／に９、経口投与では１９７に９以
上であり、フェロデンドリンの安全性が確認された。

次に、フェロデンドリンの投与量および製剤化について
説明する。

フェロデンドリンは、フェロデンドリン自身に薬効を有
するものであるから、薬理学的に許容し得る塩であれば
、どのような塩であってもかまわない。塩の具体例とし
ては、酢酸塩、塩化物、臭化物等が挙げられる。

フェロデンドリンは、そのまま、あるいは慣用の製剤担
体と共に動物および人に投与することができる。投与形
態としては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選択して
使用され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等
の経口剤、注射剤、半割等の非経口剤が挙げられる。

経口剤として所期の効果を発揮するためには、組合の年
令、体重、疾患の程度により異なるか、通常成人でフェ
ロデンドリンの重重として５〜５００　ｔｘｙを、１日
数回に分けての服用が適当と思われる。

フェロデンドリンの錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口
剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カル
ボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等
を用いて常法に従って製造される。

この種の製剤には、適宜前記賦形剤の池に、結合剤、崩
壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着
色剤、香料等を使用することかできる。それぞれの具体
例は以下に示す如くである。

［結合剤コ デンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、
ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキノプロピ
ルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポ
リビニルピロリドン、マクロゴール。

［崩壊剤］ デンプン、ヒドロキンプロピルスターチ、カルボキンメ
チルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロー
スナトリウム、カルボキノメチルセルロース、低置換ヒ
ドロキンプロピルセルロース。

［界面活性剤］ ラウリル硫酸ナトリウム、大豆レンチン、ンヨ糖脂肪酸
エステル、ポリソルベート　８０゜［滑沢剤］ タルク、ロウ類、水素添加植物油、ンヨ糖脂肪酸エステ
ル、ステアリン酸マグネンウム、ステアリン酸カルシウ
ム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコー
ル。

［流動性促進剤］ 軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケ
イ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム。

また、フェロデンドリンは、懸濁液、エマルジョン剤、
ンロツブ剤、エリキシル剤としても投与することかでき
、これらの各種剤層には、矯味矯臭剤、着色剤を含有し
てもよい。

非経口剤として所期の効果を発揮するためには、患晋の
年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人でフ
ェロデンドリンの重量として１日０．５〜！００■まで
の静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が適当と思われ
る。

この非経口剤は常法に従って製造され、希釈剤として一
般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射
用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロ
コン油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル等を用いることができる。さらに必要に応じて、殺菌
剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また、この非経口
剤は安定性の点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常
の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に凍結乾
燥物から液剤を再調製することもできる。更に、必要に
応じて適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を
加えてら良い。

その他の非経口剤としては、外用液剤、軟膏等の塗布剤
、直腸内投与のための半割等が挙げられ、常法に従って
製造される。

実施例１ ■コーンスターチ　　　　　　４４ｇ ■結晶セルロース　　　　　　４０ｇ ■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　５９ ■軽質無水ケイ酸　　　　　　０．５９■ステアリン酸
マグネシウム　０．５９■フエロデンドリン　　　　　
　ｔｏ９計　　　　　　１００ｇ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、打鍵機にて
圧縮成型して一錠２００　Ｍ９の錠剤を得た。

この錠剤−錠には、化合物２（Ｊ１９が含有されており
、成人１日５〜２５錠を数回にわけて服用する。

実施例２ ■結晶セルロース　　　　　８４．５９■ステアリン酸
マグネシウム　０．５９■カルボキンメチル セルロースカルシウム　　　　５９ ■フエロデンドリン　　　　　　ＩＯｇ計　　　　　１
００９ 上記の処方に従って■、■および■の一部を均一に混合
し、圧縮成型した後、粉砕し、■および■の残量を加え
て混合し、打鍵機にて圧縮成型して一部２００　ｍ９の
錠剤を得た。

この錠剤−錠には、化合物２０ｍ９が含有されており、
成人１日５〜２５錠を数回にわけて服用する。

実施例３ ■結晶セルロース　　　　　３４．５９■ｌＯ％ヒドロ
キシプロピル セルロースエタノール溶液　５０９ ■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　５２ ■ステアリン酸マグネシウム　０゜５ｇ■フェロデンド
リン　　　　　　１０９計　　　　　　１００９ 上記の処方に従って■、■および■を均一に池合し、常
法によりねつ和し、押し出し造粒機により造粒し、乾燥
・解砕した後、■および■を混合し、打錠機にて圧縮成
型して一部２００〜の錠剤を得た。

この錠剤−錠には、化合物２０ｍ９が含有されており、
成人１日５〜２５錠を数回にわけて服用する。

実施例４ ■コーンスターチ　　　　　　　８４ｇ■ステアリン酸
マグネシウム　０．５９■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　５９ ■軽質無水ケイ酸　　　　　　０．５９■フエロデンド
リン　　　　　　１０ｇ計　　　　　１００ｙ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、圧縮成型機
にて圧縮成型後、破砕機により粉砕し、篩別して顆粒剤
を得た。

この顆粒剤１９には、化合物１００１１９が含有されて
おり、成人１日０．５〜５ｇを数回にわけて服用する。

実施例５ ■結晶セルロース　　　　　　４０９ ■ｌＯ％ヒドロキシプロピル セルロースエタノール溶液５０９ ■フェロデンドリン　　　　　　１Ｍ 計　　　　　　１００　ｇ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、ねっ和した
。押し出し造粒機に上り造粒後、乾燥し、篩別して顆粒
剤を得た。

この顆粒剤Ｎ）には、化合物１００〜が含有されており
、成人１日０．５〜５９を数回にわけて服用する。

実施例６ ■コーンスターチ　　　　　８９５ｇ ■軽質無水ケイ酸　　　　　　０．５９■フエロデンド
リン　　　　　　１０ｇ計　　　　　　１０（Ｍ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、２００　ｔ
ｑを２号カプセルに充填した。

このカプセル剤１カプセルには、化合物２（１＠が含有
されており、成人１日５〜２５カプセルを数回にわけて
服用する。

実施例７ ■注射用蒸留水　　　　　　　適量 ■ブドウ糖　　　　　　　　　２００　Ｑ■フェロデン
ドリン　　　　　５０！ｉｒ９全量　　　　　　　　　
５ｄ 注射用蒸留水に■および■を溶解させた後、５ｄのアン
プルに注入し、１２１　’Ｃで１５分間加圧滅菌を行っ
て注射剤を得た。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. フエロデンドリンまたはフエロデンドリンの薬理学的に
   許容し得る塩を有効成分とする細胞性抗体産生抑制剤。