JPH01235583A - 新規シュードモナス属菌 - Google Patents
新規シュードモナス属菌Info
- Publication number
- JPH01235583A JPH01235583A JP6128688A JP6128688A JPH01235583A JP H01235583 A JPH01235583 A JP H01235583A JP 6128688 A JP6128688 A JP 6128688A JP 6128688 A JP6128688 A JP 6128688A JP H01235583 A JPH01235583 A JP H01235583A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- pseudomonas
- bacteria
- strains
- proteins
- Prior art date
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ものである。
従来、一般に蛋白質を微生物によって生産させるという
場合、微生物を培養し、微生物国体を磨砕後、蛋白質を
抽出，精製することにより得ていた。
場合、微生物を培養し、微生物国体を磨砕後、蛋白質を
抽出，精製することにより得ていた。
また、一般に遺伝子組換えの微生物生産の宿主としては
、大腸菌が主に使用されているが、大腸菌では、組換え
遺伝子によって合成されるペプチドや蛋白質はａｌｌ内
にとどまり培地中に分泌生産されないため、自づとその
生産量は制限されていた。
、大腸菌が主に使用されているが、大腸菌では、組換え
遺伝子によって合成されるペプチドや蛋白質はａｌｌ内
にとどまり培地中に分泌生産されないため、自づとその
生産量は制限されていた。
その上、綱胞麿砕によりペプチド、蛋白質な抽出精製す
ることは、掻体が煩雑になるなどの欠μが指摘されてい
る。
ることは、掻体が煩雑になるなどの欠μが指摘されてい
る。
鵜高は、先に、遺伝子組換えにおける宿主菌として蛋白
質を菌体外に分泌する微生物を求めて研究した結果、蛋
白質を多量に分泌生産する微生物として，約１，２００
株のなかからバチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｒｅｖｉｓ） ４株、新菌株バチルス・プロテアーマ
ンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｒｏｔｅｉｆｏｒｍａｎｓ
）１株の計５株を分Ｎ同定するに至った， ［ Ａｇｒ
ｉｅ．Ｂｉｏｌ。
質を菌体外に分泌する微生物を求めて研究した結果、蛋
白質を多量に分泌生産する微生物として，約１，２００
株のなかからバチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｒｅｖｉｓ） ４株、新菌株バチルス・プロテアーマ
ンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｒｏｔｅｉｆｏｒｍａｎｓ
）１株の計５株を分Ｎ同定するに至った， ［ Ａｇｒ
ｉｅ．Ｂｉｏｌ。
Ｃｈｅｍ．、４０ （３）、 ５２３−５２８（１９７
６）］また、一Ｒ１分泌宿主−ベクターとして枯草菌も
利用され、α−アミラーゼ、インターフェロンなど各穫
異種蛋白質を培地中に蓄積させることに成功しているが
、菌体内外の強いプロテアーゼにより生産量が制限され
たり、分解されたりして、良好な結果は得られていない
。
６）］また、一Ｒ１分泌宿主−ベクターとして枯草菌も
利用され、α−アミラーゼ、インターフェロンなど各穫
異種蛋白質を培地中に蓄積させることに成功しているが
、菌体内外の強いプロテアーゼにより生産量が制限され
たり、分解されたりして、良好な結果は得られていない
。
先に、鵜高らは、バチルス・ステアロサーモフィルス（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒ＋ｍｏｐｈｉ
Ｌｕｓ） ＤＹ−５の耐熱性α−アミラーゼ遺伝子をプ
ラスミド ｐＵＢｌｌｏに組込んだｐＢＡＭｉｏ＋を保
有するバチルス・ブレビス４７及び枯草菌を３７℃、４
８時間培養した時、バチルス・プレビス４７では約１５
．ｏｏＯＵ／ｍＩ、枯草菌では３．０００Ｕ／ｍｅ程度
のα−アミラーゼをそれぞれ培地中に生産蓄積するのを
確認した。［Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、１６４゜（３
）、１１８２−１１８７＜１９８５）］ここに、全く同
一のプラスミドを保有するバチルス・プレビス４７と枯
草菌とでは、耐熱性α−アミラーゼの生産においてバチ
ルス・プレビス４７の方が約５倍も生産効率のよいとい
う事実から蛋白質生産菌の有する蛋白質分泌能を用いる
ことにより異種遺伝子産物を効率良く分泌生産させうろ
ことが判明した。
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒ＋ｍｏｐｈｉ
Ｌｕｓ） ＤＹ−５の耐熱性α−アミラーゼ遺伝子をプ
ラスミド ｐＵＢｌｌｏに組込んだｐＢＡＭｉｏ＋を保
有するバチルス・ブレビス４７及び枯草菌を３７℃、４
８時間培養した時、バチルス・プレビス４７では約１５
．ｏｏＯＵ／ｍＩ、枯草菌では３．０００Ｕ／ｍｅ程度
のα−アミラーゼをそれぞれ培地中に生産蓄積するのを
確認した。［Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、１６４゜（３
）、１１８２−１１８７＜１９８５）］ここに、全く同
一のプラスミドを保有するバチルス・プレビス４７と枯
草菌とでは、耐熱性α−アミラーゼの生産においてバチ
ルス・プレビス４７の方が約５倍も生産効率のよいとい
う事実から蛋白質生産菌の有する蛋白質分泌能を用いる
ことにより異種遺伝子産物を効率良く分泌生産させうろ
ことが判明した。
そこで、本発明者らは、蛋白質を著量分泌しする菌が遺
伝子聞損えにおける宿主菌としてすぐれたものであると
の発想から、このような菌株を求めず鋭意選別を行った
ところ、各種資料から分離した約 １００．０００株の
なかから菌体外に著量の蛋白質を生産する株を単離した
。
伝子聞損えにおける宿主菌としてすぐれたものであると
の発想から、このような菌株を求めず鋭意選別を行った
ところ、各種資料から分離した約 １００．０００株の
なかから菌体外に著量の蛋白質を生産する株を単離した
。
ここに単離された株について、種の同定を行ったところ
、はとんどはバチルス属に−するものと同定された。
、はとんどはバチルス属に−するものと同定された。
本発明者等は、更に鋭意選別を行ったところ、バチルス
属以外にも、蛋白質を著量に菌体外に分泌生産する菌株
を単離することに成功したのである。ここに単離された
株について、種の同定と行ったところ、シュードモナス
属に属するものと同定され、本発明を完成するに到った
。
属以外にも、蛋白質を著量に菌体外に分泌生産する菌株
を単離することに成功したのである。ここに単離された
株について、種の同定と行ったところ、シュードモナス
属に属するものと同定され、本発明を完成するに到った
。
本発明は、菌体外に著量の蛋白質を生産するシュードモ
ナス属菌である。
ナス属菌である。
従来、バチルス属において、蛋白質を生産する菌株は知
られているが、シュードモナス属菌で蛋白質を５８ハ以
上らの著量菌体外に生産する菌株は知られていない。
られているが、シュードモナス属菌で蛋白質を５８ハ以
上らの著量菌体外に生産する菌株は知られていない。
本発明においてはじめて分離された新菌株、即ち、菌体
外に著量の蛋白質を生産するシュードモナス属の新菌株
は全く新規である。
外に著量の蛋白質を生産するシュードモナス属の新菌株
は全く新規である。
本発明においては、蛋白質を５ ｇ＃以上培地中に分泌
生産する菌株を目標に選択分離された。
生産する菌株を目標に選択分離された。
まず、土壌などの試料から分離された約１００．０００
株の菌株をＴ２寒天平板培地（１％グルコース、１％へ
プトン、０．５％肉エキス、０．２％酵母エキス、１．
５％寒天末、ｐＨ７，０）に接種し、平板培地上でコロ
ニー周辺が５％過塩素酸により白濁する細菌を選択した
０次に、ここに分離した４１１株をＴ２液体培地（１５
０ｓ＠容三角フラスコ、培地量１０ｍ１ ）で振盪培養
り３０℃、４８時間）シ、その培養ｒ液中に１．２ｇ＃
以上の蛋白質を生産する菌株を８０株得々菌体外蛋白質
の測定においては、培養液に等量の０．２Ｎ ＮａＯＨ
を加え攪拌ｆ＆ １０．ＯＯＯｒｐｍ ｘ ５分遠心分
離処理して１１体を除き、上清に等量の１０％トリクロ
ル酢酸を加えて１０分子！ ３．０００ｒｐｍＸ １０
分間遠心分離して沈殿を亀め、ＩＮ ＮａＯＨで溶解し
た後Ｌｏｗｒｙ法［Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、 １９３
．２６５（１９５１）］によって定量し、蛋白質量は牛
血清アルブミンとして攬算した。
株の菌株をＴ２寒天平板培地（１％グルコース、１％へ
プトン、０．５％肉エキス、０．２％酵母エキス、１．
５％寒天末、ｐＨ７，０）に接種し、平板培地上でコロ
ニー周辺が５％過塩素酸により白濁する細菌を選択した
０次に、ここに分離した４１１株をＴ２液体培地（１５
０ｓ＠容三角フラスコ、培地量１０ｍ１ ）で振盪培養
り３０℃、４８時間）シ、その培養ｒ液中に１．２ｇ＃
以上の蛋白質を生産する菌株を８０株得々菌体外蛋白質
の測定においては、培養液に等量の０．２Ｎ ＮａＯＨ
を加え攪拌ｆ＆ １０．ＯＯＯｒｐｍ ｘ ５分遠心分
離処理して１１体を除き、上清に等量の１０％トリクロ
ル酢酸を加えて１０分子！ ３．０００ｒｐｍＸ １０
分間遠心分離して沈殿を亀め、ＩＮ ＮａＯＨで溶解し
た後Ｌｏｗｒｙ法［Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、 １９３
．２６５（１９５１）］によって定量し、蛋白質量は牛
血清アルブミンとして攬算した。
蛋白質高生産培地として第１表に示す培地を選んだ。
第１表 蛋白質高生産培地
これらの５種類の培地のすべての培地に、先に得られた
８０株の菌をＳ盪培養し、いずれかの培地で菌体外蛋白
質を５ｇ／を以上生産する菌株を３１株選択した。
８０株の菌をＳ盪培養し、いずれかの培地で菌体外蛋白
質を５ｇ／を以上生産する菌株を３１株選択した。
これら３１株を、Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏ
ｆ Ｄｅｔｅｒｍｉ−ｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ （第８版） 、Ｂｅｒｇｅｙ’Ｍａｎｕａ
ｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｉｇｙ ＶＯｌ、１及び、ＴｈｅＰｒｏｋａｒｙｏｔｅ
（Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｎ Ｈａｂｉｔａｔｓ。
ｆ Ｄｅｔｅｒｍｉ−ｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ （第８版） 、Ｂｅｒｇｅｙ’Ｍａｎｕａ
ｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｉｇｙ ＶＯｌ、１及び、ＴｈｅＰｒｏｋａｒｙｏｔｅ
（Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｎ Ｈａｂｉｔａｔｓ。
ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔ
ｉｏｎ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉａ）によって同定したと
ころ、６株は、まず、好気性、ダラム染色陰性、桿菌、
胞子を形成しない点においてシュードモナス属に属する
ものと認められたそのうち、Ｈ３Ｏ５株をその他の形態
的性質、各培地における生育状弓、生理学的性質につい
て、シュードモナス属の従来知られている菌種と比較検
討した結果、シュードモナス属のどの菌種とも異ってい
た。
ｉｏｎ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉａ）によって同定したと
ころ、６株は、まず、好気性、ダラム染色陰性、桿菌、
胞子を形成しない点においてシュードモナス属に属する
ものと認められたそのうち、Ｈ３Ｏ５株をその他の形態
的性質、各培地における生育状弓、生理学的性質につい
て、シュードモナス属の従来知られている菌種と比較検
討した結果、シュードモナス属のどの菌種とも異ってい
た。
従って、本ｒｊｉ種はシュードモナス属の新ｍｓとして
同定された。
同定された。
かくて１本Ｇｌはシュードモナス ｓｐ、Ｈ３Ｏ５と命
名された。シュードモナスｓｐ、＋ｌ５０５はＦＥＲＭ
Ｐ−９７４４として微工げに寄託されている。
名された。シュードモナスｓｐ、＋ｌ５０５はＦＥＲＭ
Ｐ−９７４４として微工げに寄託されている。
次にシェードモナス ｓｐ、ｌ１５０５のＱ学的性質を
示す。
示す。
（Ａ）形態的性質
（Ｂ）各培地における生育状５
（Ｃ）生理学的性質
つづきあり
（Ｄ）酸及びガスの生成
（Ｅ）炭素源の資化性
＾ｃｅｔａｔｅ 中
５ｕｃｃｉｎａｔｅ 十
ＦｕｉＩａｒａｔｅ −Ｌ−Ｍａ
ｌａｔｅ 十 ｊ−Ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｌａｔｅ 十Ｌａｃｔａｔ
ｅ 十 Ｃ１ｔｒａｔｅ ４−ａ−Ｋｅ
ｔｏｇｌｕｔａｒａｔｅ −Ｇｌｙｃｅ
ｒｏｌ 十 Ｌ−Ａｌａｎｉｎｅ 十 Ｌ−Ａｓｐａｒｔａｔｅ −Ｌ−Ｇ
ｌｕｔａＩｌａｔｅ 十 し＾ｒｇｉｎｉｎｅ −Ｌ−Ｐｒｏｌ
ｉｎｅ ＋ し−τｙｒｏｓｉｎｅ
＋５ｕｃｒｏｓｅ
−Ｍａｌｔｏｓｅ
＋Ｃｅ１ｌｏｂｉｏｓｅ
−Ｌａｃｔｏｓｅ
−Ｄ−＾ｒａｂｉｎｏｓｅ
−＾ｒａｂｉ ｔｏｌ
＋５ｔａｒｃｈ
−１ｎｕｌｉｎ
＋０ｘａｌａｔｅ
−Ｅｔｈｙｌｅｎ ｇｌｙｃｏｌ
−Ｌ−Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ
−Ｄ−Ｒｉｂｏｓｅ ＋ Ｍａｎｎｉｔｏｌ ＋
［＋−Ｘｙｌｏｓｅ −
Ｌ−＾ｒａｂｉｎｏｓｅ ＋
Ｌ−Ｒｈａ＋ａｎｏｓｅ
−Ｇｌｕｃｏｓｅ
＋Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｅ
＋Ｄ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ 十Ｌ−
１１ｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌ ｉｎｅ
＋璽ｎｏｓｉｎｅ＋ Ｂｅｔａｉｎｅ
−Ｄ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ
＋５ｕｃｒｏｓｅ
＋Ｔｒｅｈａｒｏｓｅ
−Ｇｌｕｃｏｎａｔｅ
＋Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ
＋Ｍａｌｏｎａｔｅ
−Ｄ（−）−Ｔａｒｔｒａｔｅ
−５ｏｒｂｉｔｏｌ
−Ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ
−Ｅｔｈａｎｏｌ
−ｎ−Ｂｕｔａｎｏｌ
＋Ｂｅｎｚｏａｔｅ
−ｍ−Ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚ
ｏａｔｅ −ｐ−Ｈｙｄｒｏｘｙｂｅ
ｎｚｏａｔｅ −Ｐｈｅｎｏｌ
−Ｇｌｙｃｉｎｅ
−Ｌ−３ｅｒｉｎｅ
＋Ｌ−Ｌｅｕｃｉｎｅ
＋Ｌ−１ｓｏｌｅｕ
ｃｉｎｅ ＋Ｌ−Ｖａｌｉｎｅ
＋し−Ｌｙｓｉｎｅ
＋し一〇
ｒｎｉｔｈｉｎｅ
−Ｌ−Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ
＋しＰｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ ＋し−
Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ
−Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ
十Ｒａｆｆ１ｎｏｓｅ
−Ｃｒｅａｔｉｎｅ
−Ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ
−Ｄ−Ｇｌｕｃｕｒｏｎａｔｅ
−本発明は、菌体外に著量の蛋白質を生産するシ
ュードモナスｉｉで、特にシュードモナス Ｓｐ。
ｌａｔｅ 十 ｊ−Ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｌａｔｅ 十Ｌａｃｔａｔ
ｅ 十 Ｃ１ｔｒａｔｅ ４−ａ−Ｋｅ
ｔｏｇｌｕｔａｒａｔｅ −Ｇｌｙｃｅ
ｒｏｌ 十 Ｌ−Ａｌａｎｉｎｅ 十 Ｌ−Ａｓｐａｒｔａｔｅ −Ｌ−Ｇ
ｌｕｔａＩｌａｔｅ 十 し＾ｒｇｉｎｉｎｅ −Ｌ−Ｐｒｏｌ
ｉｎｅ ＋ し−τｙｒｏｓｉｎｅ
＋５ｕｃｒｏｓｅ
−Ｍａｌｔｏｓｅ
＋Ｃｅ１ｌｏｂｉｏｓｅ
−Ｌａｃｔｏｓｅ
−Ｄ−＾ｒａｂｉｎｏｓｅ
−＾ｒａｂｉ ｔｏｌ
＋５ｔａｒｃｈ
−１ｎｕｌｉｎ
＋０ｘａｌａｔｅ
−Ｅｔｈｙｌｅｎ ｇｌｙｃｏｌ
−Ｌ−Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ
−Ｄ−Ｒｉｂｏｓｅ ＋ Ｍａｎｎｉｔｏｌ ＋
［＋−Ｘｙｌｏｓｅ −
Ｌ−＾ｒａｂｉｎｏｓｅ ＋
Ｌ−Ｒｈａ＋ａｎｏｓｅ
−Ｇｌｕｃｏｓｅ
＋Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｅ
＋Ｄ−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ 十Ｌ−
１１ｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌ ｉｎｅ
＋璽ｎｏｓｉｎｅ＋ Ｂｅｔａｉｎｅ
−Ｄ−Ｆｒｕｃｔｏｓｅ
＋５ｕｃｒｏｓｅ
＋Ｔｒｅｈａｒｏｓｅ
−Ｇｌｕｃｏｎａｔｅ
＋Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ
＋Ｍａｌｏｎａｔｅ
−Ｄ（−）−Ｔａｒｔｒａｔｅ
−５ｏｒｂｉｔｏｌ
−Ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ
−Ｅｔｈａｎｏｌ
−ｎ−Ｂｕｔａｎｏｌ
＋Ｂｅｎｚｏａｔｅ
−ｍ−Ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚ
ｏａｔｅ −ｐ−Ｈｙｄｒｏｘｙｂｅ
ｎｚｏａｔｅ −Ｐｈｅｎｏｌ
−Ｇｌｙｃｉｎｅ
−Ｌ−３ｅｒｉｎｅ
＋Ｌ−Ｌｅｕｃｉｎｅ
＋Ｌ−１ｓｏｌｅｕ
ｃｉｎｅ ＋Ｌ−Ｖａｌｉｎｅ
＋し−Ｌｙｓｉｎｅ
＋し一〇
ｒｎｉｔｈｉｎｅ
−Ｌ−Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ
＋しＰｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ ＋し−
Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ
−Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ
十Ｒａｆｆ１ｎｏｓｅ
−Ｃｒｅａｔｉｎｅ
−Ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ
−Ｄ−Ｇｌｕｃｕｒｏｎａｔｅ
−本発明は、菌体外に著量の蛋白質を生産するシ
ュードモナスｉｉで、特にシュードモナス Ｓｐ。
Ｈ３Ｏ５である。
本発明のシュードモナス ｓｐ、）Ｉ’５０５を培養す
ることにより著量生産した蛋白質の性質次第では、それ
自体食糧蛋白質やゲル化剤、膨化剤等の食品加工素材ま
たは、ガラス様素材、紙、人工皮革等の表面加工専の工
業素材としての利用等産業上の有用性が非常に高い。
ることにより著量生産した蛋白質の性質次第では、それ
自体食糧蛋白質やゲル化剤、膨化剤等の食品加工素材ま
たは、ガラス様素材、紙、人工皮革等の表面加工専の工
業素材としての利用等産業上の有用性が非常に高い。
また、本発明のシュードモナス ｓｐ、 Ｈ３Ｏ５を遺
伝子組換えの宿主菌として利用した場合遺伝子！ｌｌｌ
１＆えによる生産物を効率良く！１体外に分泌すること
ができるので、遺伝子組換えにおける“宿主山としてき
わめてすぐれたものになるであろう。
伝子組換えの宿主菌として利用した場合遺伝子！ｌｌｌ
１＆えによる生産物を効率良く！１体外に分泌すること
ができるので、遺伝子組換えにおける“宿主山としてき
わめてすぐれたものになるであろう。
この系は、医薬品、良質な食糧蛋白質やゲル化剤、膨化
剤等の食品加工素材または、ガラス様素材、紙、人工皮
革等の表面加工の工業素材などの生産手段としての活用
が期待できる。
剤等の食品加工素材または、ガラス様素材、紙、人工皮
革等の表面加工の工業素材などの生産手段としての活用
が期待できる。
以上のように本発明の有用性は産業上極めて意義深いも
のである。
のである。
以下に、実施例を埜げて本発明を更に具体的に１明する
。
。
大施鍔ｌ
＋Ｆｒ 、：ｌ！第１Ｑ記ａノ５Ｐｃ培地５０ｏ１を２
Ｑ容のジャーファーメンタ−に分注し、常法により １
２１℃２０分滅ａした俺、冷却した。
Ｑ容のジャーファーメンタ−に分注し、常法により １
２１℃２０分滅ａした俺、冷却した。
別に、 ５ＰＣ培地５＋ａｔ分注した試験管をオートク
レーブすることにより滅菌し、これにシュードモナスｓ
ｐ、Ｈ３Ｏ５を１白金耳摺種し、３７℃で１４時間振ａ
培養した。この前項！ｔｅ＋５ｍｌをジャーファーメン
タ−に接種し、３７℃４８時間通気量０．５ｅ／を回転
数４００ｒｐ＋ａで培養した。培養終了後、培養物に等
量の０．２８ Ｎａ０）ｌを加え攪拌１１ １００００
ｒｐ鴫Ｘ ５分遠心分画処理して１体を除き、上清１０
０ｍ１に￥ＪＭの１０χトリクロル酢酸を加え１０分１
＆ ３０ＵＯｒｐ＋ｗＸ １０分間遠心分離して沈殿
を集めた。５？≦トリクロル酢酸で洗浄し、遠心分離に
沈殿を集めＩＮ Ｎａυ１１で溶解したｔ麦Ｌｏｗｒｙ
法によって定量した。蛋白質は牛血清アルブミンに換算
して示した。その結果、菌体外に生産された蛋白ｉｔｔ
は５ｇ／Ｉであった。
レーブすることにより滅菌し、これにシュードモナスｓ
ｐ、Ｈ３Ｏ５を１白金耳摺種し、３７℃で１４時間振ａ
培養した。この前項！ｔｅ＋５ｍｌをジャーファーメン
タ−に接種し、３７℃４８時間通気量０．５ｅ／を回転
数４００ｒｐ＋ａで培養した。培養終了後、培養物に等
量の０．２８ Ｎａ０）ｌを加え攪拌１１ １００００
ｒｐ鴫Ｘ ５分遠心分画処理して１体を除き、上清１０
０ｍ１に￥ＪＭの１０χトリクロル酢酸を加え１０分１
＆ ３０ＵＯｒｐ＋ｗＸ １０分間遠心分離して沈殿
を集めた。５？≦トリクロル酢酸で洗浄し、遠心分離に
沈殿を集めＩＮ Ｎａυ１１で溶解したｔ麦Ｌｏｗｒｙ
法によって定量した。蛋白質は牛血清アルブミンに換算
して示した。その結果、菌体外に生産された蛋白ｉｔｔ
は５ｇ／Ｉであった。
Claims (1)
- 菌体外に著量の蛋白質を生産する新規シュードモナス属
菌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6128688A JPH01235583A (ja) | 1988-03-15 | 1988-03-15 | 新規シュードモナス属菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6128688A JPH01235583A (ja) | 1988-03-15 | 1988-03-15 | 新規シュードモナス属菌 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01235583A true JPH01235583A (ja) | 1989-09-20 |
Family
ID=13166803
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6128688A Pending JPH01235583A (ja) | 1988-03-15 | 1988-03-15 | 新規シュードモナス属菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01235583A (ja) |
-
1988
- 1988-03-15 JP JP6128688A patent/JPH01235583A/ja active Pending
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