JPH01240170A - 経口摂食組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野］ 本発明は、高血圧予防のための健康食品等として用いて
有用な経口摂食物に関するものである。

〔従来の技術〕

今日、高血圧症は我が国において死亡率の上位を占める
疾病の一つであり、その治療あるいは予防は緊急かつ重
要な課題となっている。

高血圧症には、二次性高血圧症と本態性高血圧症とがあ
るが、前者のうち腎性高血圧症あるいは内分泌性高血圧
症等とさらに後者の本態性高血圧症の発病、病態に、い
ずれも血中活性ペプチド産生系、特にレニン・アンジオ
テンシン系が深いがかわりを持っていることはよく知ら
れている。このレニン・アンジオテンシン系には、血圧
１）１Ｊに関与するアンジオテンシン転換酵素（Ａｎｇ
ｉｏｔｅｎｓｉｎＣｏｎｖｅｒｔｉｎｇ　　Ｅｎｚｙｍ
ｅ、以下ＡＣＥということがある）が存在しており、該
酵素によって、血管壁平滑筋収縮作用を有する活性ペプ
チド（アンジオテンシン■）が産生されることにより、
強い血圧上昇がもたらされる。

従って、この酵素活性を阻害すれば、血圧上昇を＠御す
ること（降圧）が可能となることが考えられ、現にかか
る観点から種々の天然物および合成物について阻害物質
の探索が進められ、既に合成物についてはプロリン誘導
体化合物のある種のものがその有効性を認められて降圧
剤として実用に供されている。

一方、天然物からのＡＣＥ阻害物質として、カゼインの
トリプシン分解物中（特開昭５８−１０９４２５号公報
）にＡＣＥ阻害ペプチドが存在することが報告されてい
る。

これら天然物由来のＡＣＥ阻害物質は、食品あるいは食
品原料から得られるものであるので、低毒性で安全性の
高い降圧剤となることが期待でき、その降圧剤、として
の実用化が検討されている。

しかしながら、いまだ十分なるものは得られていない。

〔発明の解決課題〕

本発明者らは予てより、高血圧症、特に本態性高血圧症
の根本的治癒の困難性に鑑み、血圧の日常的、継続的な
調節（例えば、血圧降下作用を有する健康食品の１■取
等）とそれに基づく高血圧症の発症予防、あるいは高血
圧傾向の緩和の重要性に着目し、かかる目的に適用可能
な低毒性でしかも経口投与（摂取）により有効性を発揮
する降圧物質について探索を進めて来たが、前述の豚血
しょう由来のＡＣＥ阻害ペプチドのすぐれた特性、特に
その低毒性からして、これを上記の目的に使用すること
の可能性について検討を行ったところ、該ペプチド単独
投与で降圧作用が見られ、更に、該ペプチドと卵黄を併
用投与する事により、降圧作用が強まる事を見い出した
。この適度な降圧作用、低毒性、高い安全性と相俟って
、ここに、高血圧予防、高血圧傾向緩和のための健康食
品等として有用な経口摂食物の提供が可能となることを
見い出し、本発明を完成するに至った。

〔発明の構成〕

即ち、本発明は、豚血しょうを蛋白分解酵素により分解
して得られる、アンジオテンシン転換酵素を阻害するペ
プチドを含有することを特徴とする経口摂食組成物であ
り、また上記組成物において更に卵黄を含有する事を特
徴とする経口摂食物に関するものである。

豚血しょうを蛋白分解、酵素により分解して得られる、
アンジオテンシン転換酵素を阻害するペプチドの調製は
、例えば以下のようにして行われる。

豚血しょうを、Ｐ　Ｈ１−Ｐ　Ｈ２に調整し、蛋白質分
解酵素を作用させ、加水分解を行う。この分解液に過剰
のメタノールを加え、生じた沈澱物を除く。上澄液を減
圧濃縮後、イオン交換樹脂カラム及びゲル口過等を用い
て精製したペプチドを得る。

使用される蛋白分解酵素は、ペプシン、トリプシン、キ
モトリプシン、パパイン、プロメレインのほか、細菌プ
ロテアーゼ（ズブチリシン、サーモリシン、ナガーゼ等
）等も広く利用できる。これらの酵素が単独で又は混合
して使用し得る。

このようにして得られたペプチドは、分子量が５００〜
５，０００の範囲内にあり、ＡＣＥ阻害活性を有してい
る。

以上の如き、本発明の豚血しょう由来のペプチド類は、
これをそのまま、もしくはより好適には適当な無毒性の
経口投与（摂食）用担体と共に適宜の形状、形態からな
る組成物として経口摂食用に供する。

組成物の例としては、ＡＣＥ阻害ペプチドを、薬学的に
許容される担体（賦形剤、滑沢剤、結合剤、着色剤、矯
味剤、賦香剤等）と共に、経口投与用の製薬製剤の形態
、例えば錠剤（ｔＪ！衣錠、発泡錠、フィルムコート錠
、咀哨錠等）、カプセル剤、トローチ剤、粉末剤、細粒
剤、顆粒剤等としたものが挙げられる。

また、固形あるいは液状の食品ないしは嗜好品、例えば
菓子類、粉末茶、アイスクリーム、ヨーグルト、アルコ
ール飲料、スポーツ飲料等の形態としてもよい。

経口摂食物中に於けるＡＣＥ阻害ペプチドの含有量は、
剤型により適宜選択が可能であるが、−般には１〜１０
０重量％の範囲である。

以上の如き構成からなる本発明の経口摂食物は、後に試
験例で示す通り、経口投与によっても良好な降圧作用を
示し、しかも著しく低毒性であるところから、これを高
血圧症の予防及び高血圧傾向緩和あるいは血圧調節を目
的として、継続的に経口投与（摂取）することが可能で
あり、高血圧予防のための健康食品等として用いてその
有効性が期待できる。

かかる目的に本発明の経口摂食物を用いる場合、その摂
取量は、−ｍに成人男子１日当り１．０　ｍ　ｇ〜５０
０　ｍ　ｇ　／　Ｋ　ｇ体重）の範囲が適当である。

本発明者らは、更に該活性ペプチドと卵黄を併用して経
日１バ る事を見い出した。

即ち、卵黄は市販の鶏あるいはウズラやダチョウ等の卵
の黄身を用いればよい。又卵黄は液状でも粉末化したも
のでも使用できる。

この場合、本発明の経口摂食組成物中の、上記ペプチド
と卵黄との含有比率は１　：　０．　３〜１：ｌＯの範
囲が好ましい。

本発明組成物の例としては、既に前述したものと同様で
あり、即ち活性成分を薬学的に許容される担体と共に経
口投与用の割薬製剤の形態（例えば錠剤等）にしたり、
また、食品ないしは嗜好品の形態にしてもよい。

本発明経口摂食組成物中に於ける活性ペプチドと卵黄と
の含有量は剤型により適宜選択が可能であるが、−ａに
は合計して５〜１００重量％の範囲である。

又、この場合、その摂取量は該ペプチドの重量に換算し
て成人男子１日当たり１ｍｇ〜５００ｍｇ／Ｋｇ体重の
範囲、卵黄は５ｍｇ〜２ｇ／Ｋｇ体重の範囲は好ましい
。

以下に、本発明経口摂食物の活性成分たる前記豚血しょ
う由来のＡＣＥ阻害ペプチドの製造例と、それらペプチ
ド単独及び該ペプチドと卵黄との併用経口投与が有効で
あることを示す動物実験（血圧降下試験）の結果を挙げ
る。

なお、ＡＣＥ阻害ペプチドの活性（！Ｄ，。）は、以下
の方法によって測定したものである。

［ＡＣＥ阻害ペプチドのＡＣＥ阻害活性の測定］ｉ）ア
ンジオテンシン転換酵素液（ＡＣＥＩ）の調製 ５ｇのラビットラングアセトンパウダー（シグマ社製）
を５０ｍ２のＯ．　ｌ　Ｍホウ酸緩衝液（Ｐ　Ｈ　８．
　３　）に溶解し、４０，０００ｘｇ，４０分の条件下
で遠心処理し、その上清液をさらに、上記緩衝液で、５
倍に稀釈し、アンジオテンシン転換酵素液を得た。

ｉｉ）活性の測定 試料を試験管に０．　０　３　ｍ　ｌ入れ、これに基質
として、２５０μ２のヒブリルーし一ヒスチジルーし一
ロイシン〔アンドリッヒ　ケミカル社（Ａｌｄｒｉｃｈ
　　ＣｈｅＩｌ．　　Ｃｏ．　）製、最終濃度５ｍＭ。

ＮａＣｌ３００ｍＭを含む．〕を添加し、３７°Ｃで１
０分間保温後、上記酵素液を０．　１　ｍ　ｌ添加し、
３７゛Ｃで３０分間反応させた．その後、ｌＮ塩酸０．
　２　５　ｍ　ｌを添加して反応を停止させた後、１．
　５　ｍ　ｌの酢酸エチルを加え、１５秒間激しく撹拌
した．その後、３．５０Ｏｒｐｍで１５分間遠心して、
酢酸エチルｉ　１　ｍ　ｌを採取した。その酢酸エチル
層を１２０°Ｃで３０分間加熱し、溶媒を除去した．溶
媒除去後、蒸留水１ｍｌを添加し、抽出されたヒプリル
酸の吸収（２　２　８　ｎｍの吸光度）を測定し、これ
を酸素活性とした。なお、この条件で阻害剤を含まない
場合の２２８ｎｍの吸光度は、０．　２　５　６である
阻害率は、次式より算出した。

阻害率＝　（Ａ−Ｂ）／ＡＸ　ｔ　Ｏ　Ｏ％Ａ：阻害剤
を含まない場合の２２８ｎｍの吸゛光度　（０．２５６
） Ｂ：阻害剤添加の場合の２２８ｎｍの吸光度そして、阻
害率５０％の時の試料濃度をＩＤ，。

とする。

〔タンパク質濃度の測定］ 試料中のタンパク質濃度をビユレット法にて測定した．
標準タンパク質として牛血清アルブミンを用いて、試料
濃度を算出した。

（製造例１） 豚血しょう溶液１０１をＩＮＨｃｌを用いてＰ　Ｈ　２
．　０に調整．しペプシン５．６ｇを添加する。

３７゛Ｃにて２０時間反応させる。

これに冷メタノール３８１を加え（８０％メタノール沈
澱法）、−夜冷所放置する．生じた沈澱をｔ去し、減圧
濃縮にて６１とする．これをＤｗｅｘ５　０　ｗ　（　
Ｈ’）カラムに吸着させる．脱イオン水にて充分洗浄し
た後、２Ｎ　　ＮＨ．０ＨＩＯＩｌにて）容重する．こ
れを２００ｍ１に減圧１ｔｌＬ、セファデックスＧ−２
５カラムクロマトゲラフイーにより活性画分を分取し、
凍結乾燥してペプチド試料とする。（収量５００ｇ）試
験例１　ペプチドの液体クロマトグラフィー測定 高速液体クロマトグラフ；東洋曹達■製ＨＬ（、−８０
３Ｄ型。カラム：ＴＳＫ　　ｇｅｌＧ　　３０００　ｐ
ｗＸＬ、　　φ７．８　ｒａｔｓ　Ｘ　３０　ｃｒ１）
２本連結。溶諦液二〇、１％　トリフルオロ酢酸−４５
％　アセトニトリル（５５：４５）。流速：　０．５　
ｍ　Ｑ／ｍｉｎ、検出器：　ＵＶ−８型、測定波長２１
Ｑｎｍ、検量線の作成：表１に示した各標準ペプチドを
用いた。試料溶液：ペプチド粉末１ｇを脱イオン水１０
０ｍ１に熔解した液を、更に溶離液にて５０倍稀釈した
溶液１００μｌを注入した。

表１　内部標準に使用したペプチド 物質　　　　　　　　　分子量 リボヌクレアーゼ　　　　　１３，７００チトクロムＣ
Ｉ２．３８４ 合成ペプチド　　　　　　　　２，２００サブスタンス
Ｐ　　　　　　　　１，３４９δ−３ｌｅｅｐ　Ｉｎｄ
ｕｃｉｎｇ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　　　　８４９メチニオン
　　　　　　　　　　　１４９結果を図１に示す。

ペプチド試料の分子量は、約５００〜２，０００の範囲
であった。

試験例２　得られたペプチドのアミノ酸分析常法より、
得られたペプチド試料の塩酸加水分解を行い、試料とし
、アト−アミノ酸自動分析機を用いて分析した。

表２に結果を示す。

Ａｓ１ｎｏ　ａｃｉｄ　　　　　　　　％Ａｓｐ　　　
　　　　　　７．６５ Ｔｈｒ　　　　　　　　　４．９５ Ｓｅｔ　　　　　　　　　５．４３ Ｇｌｕ　　　　　　　　１）．７５ Ｐｒｏ　　　　　　　　　４．８１ ｃ１ｙ　　　　　　　　　４．０４ Ａｌａ　　　　　　　　　５．８Ｂ Ｃｙｓ　　　　　　　　　　　　　　　　−Ｖａｌ　　
　　　　　　　　　　　　　　　５．６０Ｍｅｔ　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　−１）ｅ　　　　
　　　　　　　　　　　　６．５ＢＬｅｕ　　　　　　
　　　　　　　　１　１．　７　５Ｔｙｒ　　　　　　
　　　　　　　　　　７．８１Ｐｈｅ　　　　　　　　
　　　　　　　　　７．　５　６Ｌｙｓ　　　　　　　
　　　　　　　　　８．　２　２１）ｉｓ　　　　　　
　　　　　　　　　　２．６２Ａｒｇ　　　　　　　　
　　　　　　　　７．　７　５Ｔｒｐ　　　　　　　　
　　　　　　　　−（製造例２） １、豚プラズマ由来ペプチドの調整 体兼産業■提供の豚プラズマ４６０ｍｊ！をＰＩｆ　２
．　Ｏに調整した後、豚胃粘膜由来ペプシン（メルク社
製）３ｇを加え４０°Ｃ，７時間酵素分解した。酵素分
解終了後、約１０分間煮沸して酵素を失活させ冷却した
後、吸引口過（東洋口紙　Ｎα２）し、淡黄色精澄口液
を得た。

得られた酵素分解液４６０ｍｌを透析チューブ（和光純
薬製３６／３２ｉｎｃｈ）に詰め、脱イオン水５１に対
して一夜低温室（５°Ｃ）にて透析した。透析外液を減
圧］ＩＷＬ、その際生じる不溶物をグラスフィルター（
３Ｇ−１）により吸引口過して除き、精澄口液を得た。

２、ゲル口過カラムクロマトグラフィーによる精製 上記精澄口液を減圧濃縮により２０ｍｊ！とじ、４回に
分は下に示す条件でゲル口過クロマトグラフィーした。

カラムクロマトグラフィーの条件 担体　　：５ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ−２５（Ｍ）カラム
サイズ：φ２．５　Ｘ　１４１．　Ｏｃｍ緩衝液：　０
．　Ｉ　Ｍリン酸緩衝液（Ｐ　Ｈ７，０＞１画分：容量
１０．０　ｍ　１２ 流　速：３３ｍ’ｊ！／ｈ 尚、標準物質としてＢｌｕｅ　　ｄｅｘｔｒａｎ（Ｖｏ
、分子量２００万）、Ｖｉｔａｍｉｎｅ　　Ｖ　Ｂ＋ｉ
　（Ｖ　Ｂ＋ｉ、分子１）１３５５）を用いマーカーと
した。

上記のゲル口過クロマトグラフ中、ＡＣＥＩｉＩｌ害活
性の強い両分を集め濃縮し、凍結乾燥により白色粉末を
得た。

実験例１　製造例−１で得たペプチドのラット経口投与
時の降圧作用 （］）被検試料及び投与方法 （イ）製造例−１で得たペプチドの投与量が１５００　
ｍ　ｇ　／　Ｋ　ｇになるように被検試料を生理食塩水
に溶解したもの６ｍｊ２／ａｎｉ■ａｌをゾンデにて強
制経口投与した。

（ロ）３０％鶏卵黄液（卵黄を生理食塩水中に懸濁させ
る）　５　ｍ（１／ａｎｉ＋ｍａｌを経口投与した。

（ハ）製造例−１で得たペプチドの投与量が１５００　
ｍ　ｇ　／　Ｋ　ｇになるように被検試料を３０％鶏卵
黄液に溶解したもの６　ｍ　ｌ　／ａｎｉａａｌをゾン
デにて強制経口投与した。

（２）使用動物 ラットはＨｏｓ：ＳＨＲ１０週令の雄性を１野実験動物
より購入し１週間予備飼育したのちｌ試験群につき３匹
使用した。

（３）血圧測定 投与前、後、非観血的尾動脈血圧装置（４１理研開発製
Ｉ’５−１００）を用いて経時的に血圧を測定した。

（３）試験結果 結果を第１表に示す。

第　　１　　表 与後血圧値が投与前血圧値と等しいがあるいはそれ以上
の値を示したときは０と表示した。

第１表かられがるように、製造例−１で得たペプチドは
、単独経口投与において顕著な血圧降下作用が認められ
た。更に、鶏卵黄と併用して経口投与すると、−層優れ
た血圧効果作用を示した。

実験例２　製造例−１で得たペプチドのラット経口投与
時の降圧作用（投与量依存性）実験例１と同様の方法で
、製造例−１で得たペプチドを含有する３０％鶏卵黄液
を用いて、投与量依存性を試験した。なお、ラットは１
試験群につき５匹を使用した。結果を第２表に示す。

第　　２　　表 第２表かられかるように、本ペプチドを鶏卵黄液と共に
経口投与すると、投与量に応じた血圧降下作用を示した
。また、その効果は、持続性にも優れており、６時間後
もあまり減少していない。

実験例３　製造例−２で得たペプチドのラット経口投与
時の降圧作用 製造例−２で得たペプチドについて、実験例１と同様に
して試験を行なった結果、製造例−２で得たペプチドも
経口投与すると優れた血圧降下作用を示す事が確認され
た。

（発明の効果） 本発明により、安全性が高く、有効性の高い降圧作用の
経口摂食組成物の提供が可能となった。

以下、実施例を示す、なお、実施例中の部とは、すべて
重量部を意味する。

実施例１　アイスクリーム 脱脂粉乳　　　　　　　　　　８．０％植物脂肪　　　
　　　　　　１０．０ 砂糖　　　　　　　　　　　　１３．０安定剤　　　　
　　　　　　　０．３ 乳化剤　　　　　　　　　　　０．３ バニラフレーバー　　　　　　０．１ 製造例１のペプチド　　　　　５．０ 卵黄　　　　　　　　　　　　７．５ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５５．
８通常の製造法にて作成した。（１０，０ｇ　／カンプ
）実施例２　ヨーグルト 牛乳　　　　　　　　　　　６４．０ 全乳　　　　　　　　　　　　４．０ 脱脂粉乳　　　　　　　　　　５．０ グラニユー糖　　　　　　　　　７．０水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　１０．０製造例２のペ
プチド　　　　　３．０ 卵黄　　　　　　　　　　　　７・０ 通常の製造法にて作成した。（１０，０ｇ　／　ｃ　ｕ
　ｐ　）実施例３　トローチ剤 製造例１で得たペプチド　　　　２０部乳ヰ店　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　４２蔗［３２，８ トラガカント末　　　　　　　　　　５．０ペパーミン
ト油　　　　　　　　　０．２乳糖４２．０部、蔗＄１
３２．８部、トラガカント末５．０部およびペパーミン
ト０．２部を混合し、これにペプチド２０．０部を蒸留
水２０．０部に溶解した溶液を加え、よく練合した。

次に、デンプンを散布したガラス板上に、上記の練合物
をめん棒で展延して厚さ約５ａｉｉのシート状をして後
、型で打ち抜き、乾燥してトローチ剤（０，，１ｇ／個
）とした。

【図面の簡単な説明】

第１図は製造例１のペプチドの液体クロマトグラムであ
る。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）豚血しょうを蛋白分解酵素により分解して得られ
   る、アンジオテンシン転換酵素を阻害するペプチドを含
   有することを特徴とする経口摂食組成物。
2. （２）更に、卵黄を含有する請求項１項記載の経口摂取
   組成物。