JPH01240179A - 酒類の品質改良法 - Google Patents
酒類の品質改良法Info
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- JPH01240179A JPH01240179A JP63286428A JP28642888A JPH01240179A JP H01240179 A JPH01240179 A JP H01240179A JP 63286428 A JP63286428 A JP 63286428A JP 28642888 A JP28642888 A JP 28642888A JP H01240179 A JPH01240179 A JP H01240179A
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- alcoholic beverages
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12H—PASTEURISATION, STERILISATION, PRESERVATION, PURIFICATION, CLARIFICATION OR AGEING OF ALCOHOLIC BEVERAGES; METHODS FOR ALTERING THE ALCOHOL CONTENT OF FERMENTED SOLUTIONS OR ALCOHOLIC BEVERAGES
- C12H1/00—Pasteurisation, sterilisation, preservation, purification, clarification, or ageing of alcoholic beverages
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- Genetics & Genomics (AREA)
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- Physiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Distillation Of Fermentation Liquor, Processing Of Alcohols, Vinegar And Beer (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は酒類の品質改良法に関する。
従来の技術
酒類、たとえば清酒、ビール、ぶどう酒、老酒などすべ
ての醸造酒およびウィスキー、ブランデー、焼酎などの
蒸留酒には発ガン性物質と考えられているカルバミン酸
エチルが含まれており、酒類を常時飲用する人にとって
、その含量はできるだけ低いものであることが望まれて
いる。
ての醸造酒およびウィスキー、ブランデー、焼酎などの
蒸留酒には発ガン性物質と考えられているカルバミン酸
エチルが含まれており、酒類を常時飲用する人にとって
、その含量はできるだけ低いものであることが望まれて
いる。
従来、酒類中でカルバミン酸エチルが生成される原因が
明らかにされておらず、また、酒類中のカルバミン酸エ
チルを除去する方法か知られていない。
明らかにされておらず、また、酒類中のカルバミン酸エ
チルを除去する方法か知られていない。
発明か解決しようとする課題
上記のように、酒類中のカルバミン酸エチルを実用的有
利に除去する方法の開発が望まれている。
利に除去する方法の開発が望まれている。
課題を解決するための手段
本発明者らは、カルバミン酸エチル含量の低い酒類を製
造するために、当該物質を分解できる能力を持った微生
物を、鋭意、探索して、その取得に成功し、さらに該分
解酵素を添加して酒類を処理することによって、カルバ
ミン酸エチルを効率よく除去できるという知見を得、さ
らに研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
造するために、当該物質を分解できる能力を持った微生
物を、鋭意、探索して、その取得に成功し、さらに該分
解酵素を添加して酒類を処理することによって、カルバ
ミン酸エチルを効率よく除去できるという知見を得、さ
らに研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は（１）酒類をカルバミン酸工チル分
解酵素で処理することを特徴とする酒類の品質改良法、
および（２）グルコノバクタ−属、ロドトルラ属、ロド
スポリディウム属、トリコスポロン属、キャンディダ属
、フラボバクテリウム属、アルスロバクタ−属、アクロ
モバクタ−属、アルカリゲネス属、シュードモナス属あ
るいはタレプシエラ属に属し、カルバミン酸エチルを分
解する能力を有する微生物の培養物またはその処理物を
酒類と接触させることを特徴とする酒類の品質改良法で
ある。
解酵素で処理することを特徴とする酒類の品質改良法、
および（２）グルコノバクタ−属、ロドトルラ属、ロド
スポリディウム属、トリコスポロン属、キャンディダ属
、フラボバクテリウム属、アルスロバクタ−属、アクロ
モバクタ−属、アルカリゲネス属、シュードモナス属あ
るいはタレプシエラ属に属し、カルバミン酸エチルを分
解する能力を有する微生物の培養物またはその処理物を
酒類と接触させることを特徴とする酒類の品質改良法で
ある。
本発明に用いられるカルバミン酸エチル分解酵素は、カ
ルバミン酸エチルを分解して、アンモニア、炭酸ガス、
エタノールのいずれか一種類以上を生成するものであれ
ばよく、酵素の一般的性質をあられす至適ｐＨ，ｐＨ安
定性、至適温度、温度安定性、基質特異性などによって
は、とくに制限を受けない。
ルバミン酸エチルを分解して、アンモニア、炭酸ガス、
エタノールのいずれか一種類以上を生成するものであれ
ばよく、酵素の一般的性質をあられす至適ｐＨ，ｐＨ安
定性、至適温度、温度安定性、基質特異性などによって
は、とくに制限を受けない。
本発明において、カルバミン酸エチルを分解する能力を
有する微生物は、その培養物または処理物中にカルバミ
ン酸エチル分解作用を有するものであれば特に限定され
ない。この微生物菌株としては、グルコノバクタ−属な
どの細菌やロドトルラ属、ロドスポリディウム属、トリ
コスポロン属、キャンディダ属、７ラボバクテリウム属
、アルスロバクタ−属、アクロモバクタ−属、アルカリ
ゲネス属、シュードモナス属あるいはクレブシェラ属な
どの酵母が例示され、その代表例として、グルコノバク
タ−・アルビダス（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒａｌｂ
ｉｄｕｓ）、ロドトルラ・グルチニス（Ｒｈｏｄｏｔｏ
ｒｕ Ｉａｇｌｕｔｉｎｉｓ ）、ロドトルラ・ミニュ
タ・バールｅテキセンシス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ
ｍ１ｎｕｔａ ｖａｒ。
有する微生物は、その培養物または処理物中にカルバミ
ン酸エチル分解作用を有するものであれば特に限定され
ない。この微生物菌株としては、グルコノバクタ−属な
どの細菌やロドトルラ属、ロドスポリディウム属、トリ
コスポロン属、キャンディダ属、７ラボバクテリウム属
、アルスロバクタ−属、アクロモバクタ−属、アルカリ
ゲネス属、シュードモナス属あるいはクレブシェラ属な
どの酵母が例示され、その代表例として、グルコノバク
タ−・アルビダス（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒａｌｂ
ｉｄｕｓ）、ロドトルラ・グルチニス（Ｒｈｏｄｏｔｏ
ｒｕ Ｉａｇｌｕｔｉｎｉｓ ）、ロドトルラ・ミニュ
タ・バールｅテキセンシス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ
ｍ１ｎｕｔａ ｖａｒ。
ｔｅｘｅｎｓｉｓ）、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏ
Ｌｏｒｕｌａｒｕｂｒａ ）％ ロドスポリディウム・
トルロイデス（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏ
ｒｕｌｏｉｄｅｓ ）、トリコスポロン・クタニュウム
（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｃｕｔａｎｅｕｍ ）、
キャンデイダ・バラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａｐａｒ
ａｐｓｉｌｏｓｉｓ ）、キャンデイダ・インタメディ
ア（Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ）、キ
ャンデイダ・ギヤマンデ（（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉ
ｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ）、キャンデイダ・クルンイ
デス（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ）、キ
ャンデイダ・カテヌレイタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃａｔ
ｅｎｕ−１ａｔａ）、フラボバクテリウム・メニンゴセ
プティキュム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅ
ｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、アルスロバクタ−１ラ
モサス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｒａｍｏｓｕｓ
）、アクロモバクタ−・キセロシス（Ａｃｈｒｏｍｏｂ
ａｃｔｅｒｘｅｒｏｓｉｓ ）、アルカリゲネスｅ７エ
カリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ
）、シュードモナスｅオレオポランス（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ ）あるいはクレ
ブシェラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅ ）などの微生物があげられる。これらの
菌株は特に限定されるものではなく、新たに土壌、食品
、動植物などから分離した株であっても、カルバミン酸
エチルを分解する能力を有するものであれば、本発明の
方法に使用できる。またそれらの菌株に紫外線照射や変
異剤処理を施して、人為的に変異を誘起させた株や、当
該分解活性の発現に必要な遺伝子断片を人為的にきりだ
し、それを組み入れた他の微生物菌体であっても、本発
明の方法に使用できる。
Ｌｏｒｕｌａｒｕｂｒａ ）％ ロドスポリディウム・
トルロイデス（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏ
ｒｕｌｏｉｄｅｓ ）、トリコスポロン・クタニュウム
（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｃｕｔａｎｅｕｍ ）、
キャンデイダ・バラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａｐａｒ
ａｐｓｉｌｏｓｉｓ ）、キャンデイダ・インタメディ
ア（Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ）、キ
ャンデイダ・ギヤマンデ（（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉ
ｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ）、キャンデイダ・クルンイ
デス（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ）、キ
ャンデイダ・カテヌレイタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃａｔ
ｅｎｕ−１ａｔａ）、フラボバクテリウム・メニンゴセ
プティキュム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅ
ｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、アルスロバクタ−１ラ
モサス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｒａｍｏｓｕｓ
）、アクロモバクタ−・キセロシス（Ａｃｈｒｏｍｏｂ
ａｃｔｅｒｘｅｒｏｓｉｓ ）、アルカリゲネスｅ７エ
カリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ
）、シュードモナスｅオレオポランス（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ ）あるいはクレ
ブシェラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅ ）などの微生物があげられる。これらの
菌株は特に限定されるものではなく、新たに土壌、食品
、動植物などから分離した株であっても、カルバミン酸
エチルを分解する能力を有するものであれば、本発明の
方法に使用できる。またそれらの菌株に紫外線照射や変
異剤処理を施して、人為的に変異を誘起させた株や、当
該分解活性の発現に必要な遺伝子断片を人為的にきりだ
し、それを組み入れた他の微生物菌体であっても、本発
明の方法に使用できる。
次に、カルバミン酸エチル分解酵素を産生する菌株の具
体例をあげる。
体例をあげる。
Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ａｌｂｉｄｕｓ Ｉ
ＦＯ３２５０Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌｕＬｉｎ
ｉｓ ＩＦＯ１５０１Ｒｈｏｄｏｒｏｒｕｌａ ｍ
１ｎｕｔａ ｖａｒ、 ｔｅｘｅｎｓｉｓ ＩＦＯ１
５４１ＲｈｏｄｏＬｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ ＩＦ
Ｏ０９１０Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕ
ｌｏｉｄｅｓ ＩＦＯ１００３２Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏ
ｒｏｎ ｃｕｔａｎｅｕｍ ＩＦＯ１１９８Ｔｒｉ
ｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｃｕｔａｎｅｕｍ ＩＦＯ１
２００Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ
ＩＦＯ０７０８Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌ
ｏｓｉｓ ＡＴＣＣ７３３６Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎ
ｔｅｒｍｅｄｉａ ＩＦＯ０７６１Ｃａｎｄｉｄａ
ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ＩＦＯ０８３８Ｃ
ａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣＣ７３
４５Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣ
Ｃ１０７５５Ｃａｎｄｉｄａ ｃａｔｅｎｕｌａｔａ
ＩＦＯ０７４５Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ ＩＦＯ１２５３５
Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｒａｍｏｓｕｓ Ｉ
ＦＯ１２９５８Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ ｘｅｒ
ｏｓｉｓ ＩＦＯ１２６６８Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ
ｆａｅｃａｌｉｓ ＩＦＯ１３１１１Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ ＩＦＯ１
３５８３Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｓ ＩＦＯ１３７０３上記のＩＦＯ番号は財団法人発
酵研究所［Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｆｅｒｍ
ｅｎｔａｔｉｏｎ、 ０ｓａｋａ（Ｉ Ｆ Ｏ）、大阪
市淀用区十三本町２丁目１７番８５号］における寄託番
号を示し、これらの菌株は同研究所発行の「リスト・オ
ブ・カルチャーズ（Ｌｉ５ｔ ｏｆＣｕｒｕｒｅｓ
）、第７版、１９８４年および第８版、１９８８年」に
掲載されている公知菌株である。
ＦＯ３２５０Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌｕＬｉｎ
ｉｓ ＩＦＯ１５０１Ｒｈｏｄｏｒｏｒｕｌａ ｍ
１ｎｕｔａ ｖａｒ、 ｔｅｘｅｎｓｉｓ ＩＦＯ１
５４１ＲｈｏｄｏＬｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ ＩＦ
Ｏ０９１０Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕ
ｌｏｉｄｅｓ ＩＦＯ１００３２Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏ
ｒｏｎ ｃｕｔａｎｅｕｍ ＩＦＯ１１９８Ｔｒｉ
ｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｃｕｔａｎｅｕｍ ＩＦＯ１
２００Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ
ＩＦＯ０７０８Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌ
ｏｓｉｓ ＡＴＣＣ７３３６Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎ
ｔｅｒｍｅｄｉａ ＩＦＯ０７６１Ｃａｎｄｉｄａ
ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ＩＦＯ０８３８Ｃ
ａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣＣ７３
４５Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣ
Ｃ１０７５５Ｃａｎｄｉｄａ ｃａｔｅｎｕｌａｔａ
ＩＦＯ０７４５Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ ＩＦＯ１２５３５
Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｒａｍｏｓｕｓ Ｉ
ＦＯ１２９５８Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ ｘｅｒ
ｏｓｉｓ ＩＦＯ１２６６８Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ
ｆａｅｃａｌｉｓ ＩＦＯ１３１１１Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ ＩＦＯ１
３５８３Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｓ ＩＦＯ１３７０３上記のＩＦＯ番号は財団法人発
酵研究所［Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｆｅｒｍ
ｅｎｔａｔｉｏｎ、 ０ｓａｋａ（Ｉ Ｆ Ｏ）、大阪
市淀用区十三本町２丁目１７番８５号］における寄託番
号を示し、これらの菌株は同研究所発行の「リスト・オ
ブ・カルチャーズ（Ｌｉ５ｔ ｏｆＣｕｒｕｒｅｓ
）、第７版、１９８４年および第８版、１９８８年」に
掲載されている公知菌株である。
またＡＴＣＣ番号はアメリカン・タイプ・カルチャー嗜
コレクション［Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ
１ｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、１２３
０１ ＰａｒｋｌａｗｎＤｒｉｖｅ Ｒｏｃｋｖｉ
ｌｌｅ、 Ｍａｒｙｌａｎｄ ２０８５２］における寄
託番号を示し、これらの菌株はＡＴＣＣ発行のｒＡＴＣ
ＣＣａｔａｌｏｇｕｅ ｏｆ Ｆ ＵＮＧ Ｉ ／
ＹＥＡＳＴＳ、１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、１９８４
Ｊに掲載されている公知菌株である。
コレクション［Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ
１ｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、１２３
０１ ＰａｒｋｌａｗｎＤｒｉｖｅ Ｒｏｃｋｖｉ
ｌｌｅ、 Ｍａｒｙｌａｎｄ ２０８５２］における寄
託番号を示し、これらの菌株はＡＴＣＣ発行のｒＡＴＣ
ＣＣａｔａｌｏｇｕｅ ｏｆ Ｆ ＵＮＧ Ｉ ／
ＹＥＡＳＴＳ、１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、１９８４
Ｊに掲載されている公知菌株である。
これらの微生物菌株を培養してカルバミン酸エチル分解
酵素を生成させるには、通常の静置培養、振盪培養、通
気撹拌培養あるいは固体培養などにより連続的あるいは
間欠的に行なうことができる。
酵素を生成させるには、通常の静置培養、振盪培養、通
気撹拌培養あるいは固体培養などにより連続的あるいは
間欠的に行なうことができる。
用いる培地は、使用する微生物の生育しうる通常の組成
のものでもよく、炭素源には炭水化物、油脂、脂肪酸、
有機酸あるいはアルコール類などのなかから資化しうる
ものを適宜選択し、単独または混合して使用される。ま
た窒素源には例えばペプトン、大豆粉、綿実粉、コーン
ステイープリカー、酵母エキス、肉エキス、麦芽エキス
、ホエー、尿素などの有機窒素源のほか、硫安、塩安、
硝安、燐安なとの無機窒素源が必要に応じて、適宜混合
してまたは単独で用いられる。培地には炭素源、窒素源
のほか生育に必要なミネラル、アミノ酸あるいはビタミ
ンなどの生育必須因子や生育促進物質を添加するのがよ
い。さらにカルバミン酸エチル分解酵素の生成を誘導す
るために、カルバミン酸エチルやそのアナログ類、また
はそれらの関連化合物、例えばカルバミル燐酸、ビウレ
ットなどやアセトアミド、ブチルアミド、アクリルアミ
ド、ラクトアミドなどのアミド化合物を添加することも
ある。培養中のｐＨおよび泡の管理の目的で苛性アルカ
リ液、炭酸ナトリウム液、カルシウム塩類を適宜補添し
たり、消泡剤の添加も有効である。
のものでもよく、炭素源には炭水化物、油脂、脂肪酸、
有機酸あるいはアルコール類などのなかから資化しうる
ものを適宜選択し、単独または混合して使用される。ま
た窒素源には例えばペプトン、大豆粉、綿実粉、コーン
ステイープリカー、酵母エキス、肉エキス、麦芽エキス
、ホエー、尿素などの有機窒素源のほか、硫安、塩安、
硝安、燐安なとの無機窒素源が必要に応じて、適宜混合
してまたは単独で用いられる。培地には炭素源、窒素源
のほか生育に必要なミネラル、アミノ酸あるいはビタミ
ンなどの生育必須因子や生育促進物質を添加するのがよ
い。さらにカルバミン酸エチル分解酵素の生成を誘導す
るために、カルバミン酸エチルやそのアナログ類、また
はそれらの関連化合物、例えばカルバミル燐酸、ビウレ
ットなどやアセトアミド、ブチルアミド、アクリルアミ
ド、ラクトアミドなどのアミド化合物を添加することも
ある。培養中のｐＨおよび泡の管理の目的で苛性アルカ
リ液、炭酸ナトリウム液、カルシウム塩類を適宜補添し
たり、消泡剤の添加も有効である。
培養の温度は、用いる微生物の生育に適した温度を選択
すればよく、通常１５℃乃至５５℃、好ま□ しく
は２５℃乃至４５°Ｃで培養するのが有利である。また
培養の時間は、用いる微生物の生育およびカルバミン酸
エチル分解酵素の生成に十分な時間続行されるが、通常
５乃至１２０時間を要する。
すればよく、通常１５℃乃至５５℃、好ま□ しく
は２５℃乃至４５°Ｃで培養するのが有利である。また
培養の時間は、用いる微生物の生育およびカルバミン酸
エチル分解酵素の生成に十分な時間続行されるが、通常
５乃至１２０時間を要する。
かくして、本発明でいうカルバミン酸エチルを分解する
能力を有する微生物の培養物が得られる。
能力を有する微生物の培養物が得られる。
次に、本発明でいう培養物の処理物とは、上記のような
方法で得られた培養物から得られる生菌体、乾燥菌体、
包括菌体、菌体磨砕物、粗あるいは精製酵素、不溶化酵
素など、カルバミン酸エチルを分解するために関係する
酵素系を含有する標品をいう。該処理物としては、たと
えば（１）培養液から遠心分離、沈降分離、凝集分離、
多孔性膜や高分子膜、セラミック膜などによるろ過など
の方法によって集菌された生菌体；（２）該生菌体をそ
のまま、もしくは熱殺菌、薬剤殺菌などの殺菌処理を施
したのち、凍結乾燥、噴霧乾燥、アセ１−ン乾燥などの
手段を用いて得られる乾燥菌体：（３）該菌体を凍結融
解処理、磨砕処理、超音波処理、浸透圧処理、細胞壁膜
の溶解処理、界面活性剤処理などの方法を単独もしくは
組み合わせて行なうことによって、該酵素を可溶化し、
プロタミン処理、塩析、有機溶媒処理、等電点沈殿、電
気泳動、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過、ア
フィニティークロマトグラフィー、晶出などの通常の酵
素の精製手段を適宜組み合わせることによって、比活性
の向上した粗酵素乃至精製酵素；（４）さらには該菌体
を寒天やカラギーナンなどの天然高分子、ポリアクリル
アミドやウレタン樹脂などの合成高分子に包括固定した
もの、あるいは、活性炭、セラミック、デキストラン、
アガロース系物質、多孔性ガラスなどの担体に結合固定
したものなとがあげられる。この固定化酵素調製に際し
ては酵素の安定化のために他の蛋白質や糖類、ＳＨ基保
護剤、キレート剤、抗酸化剤、基質のアナログなどを添
加して用いてもよい。
方法で得られた培養物から得られる生菌体、乾燥菌体、
包括菌体、菌体磨砕物、粗あるいは精製酵素、不溶化酵
素など、カルバミン酸エチルを分解するために関係する
酵素系を含有する標品をいう。該処理物としては、たと
えば（１）培養液から遠心分離、沈降分離、凝集分離、
多孔性膜や高分子膜、セラミック膜などによるろ過など
の方法によって集菌された生菌体；（２）該生菌体をそ
のまま、もしくは熱殺菌、薬剤殺菌などの殺菌処理を施
したのち、凍結乾燥、噴霧乾燥、アセ１−ン乾燥などの
手段を用いて得られる乾燥菌体：（３）該菌体を凍結融
解処理、磨砕処理、超音波処理、浸透圧処理、細胞壁膜
の溶解処理、界面活性剤処理などの方法を単独もしくは
組み合わせて行なうことによって、該酵素を可溶化し、
プロタミン処理、塩析、有機溶媒処理、等電点沈殿、電
気泳動、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過、ア
フィニティークロマトグラフィー、晶出などの通常の酵
素の精製手段を適宜組み合わせることによって、比活性
の向上した粗酵素乃至精製酵素；（４）さらには該菌体
を寒天やカラギーナンなどの天然高分子、ポリアクリル
アミドやウレタン樹脂などの合成高分子に包括固定した
もの、あるいは、活性炭、セラミック、デキストラン、
アガロース系物質、多孔性ガラスなどの担体に結合固定
したものなとがあげられる。この固定化酵素調製に際し
ては酵素の安定化のために他の蛋白質や糖類、ＳＨ基保
護剤、キレート剤、抗酸化剤、基質のアナログなどを添
加して用いてもよい。
本発明においては、上記のような方法で得られたカルバ
ミン酸エチルを分解する能力を有する微生物の培養物ま
たはその処理物と酒類とを接触させて、酒類中のカルバ
ミン酸エチルを分解除去する。
ミン酸エチルを分解する能力を有する微生物の培養物ま
たはその処理物と酒類とを接触させて、酒類中のカルバ
ミン酸エチルを分解除去する。
本発明の対象とする酒類としては、清酒、ビール、ぶど
う酒、老酒などの醸造酒をはじめ、ウィスキー、ブラン
デー、焼酎などの蒸留酒等、カルバミン酸エチルを含有
するものであればよく、またそれらを製造する中間工程
品でもさしつかえない。
う酒、老酒などの醸造酒をはじめ、ウィスキー、ブラン
デー、焼酎などの蒸留酒等、カルバミン酸エチルを含有
するものであればよく、またそれらを製造する中間工程
品でもさしつかえない。
これらの酒類をカルバミン酸エチル分解酵素で処理する
場合、添加するカルバミン酸エチル分解酵素の量は、酒
類中１ｍＱ当り０．０００１ユニツト乃至＋００ユニツ
ト、とりわけ０．０１ユニツト乃至Ｉユニットが実用的
で、有利に用いられる。
場合、添加するカルバミン酸エチル分解酵素の量は、酒
類中１ｍＱ当り０．０００１ユニツト乃至＋００ユニツ
ト、とりわけ０．０１ユニツト乃至Ｉユニットが実用的
で、有利に用いられる。
なお、本培養物またはその処理物中のカルバミン酸エチ
ル分解活性は、適宜希釈した培養液から遠心分離によっ
て集菌し、無菌脱イオン水に懸濁したのち、カルバミン
酸エチルを含む０．２Ｍクエン酸バッファー（ｐＨ５，
５）と等全混合し、３０°Ｃで３０分間反応させて生成
したアンモニアを、ニトロプルジッド法で比色定量する
方法で測定し、単位時間（分）当りに１マイクロモルの
アンモニアを生成する酵素量を１ユニツト（ＩＵ）とし
て表示する。
ル分解活性は、適宜希釈した培養液から遠心分離によっ
て集菌し、無菌脱イオン水に懸濁したのち、カルバミン
酸エチルを含む０．２Ｍクエン酸バッファー（ｐＨ５，
５）と等全混合し、３０°Ｃで３０分間反応させて生成
したアンモニアを、ニトロプルジッド法で比色定量する
方法で測定し、単位時間（分）当りに１マイクロモルの
アンモニアを生成する酵素量を１ユニツト（ＩＵ）とし
て表示する。
酒類を処理する温度は、通常１０°Ｃ乃至８０°Ｃ１と
りわけ１０°Ｃ乃至６０°Ｃが好んで用いられる。
りわけ１０°Ｃ乃至６０°Ｃが好んで用いられる。
ｐＨは２乃至７、とりわけｐＨ３乃至６がよい。処理の
時間は、酒類中のカルバミン酸エチルが消失するのに十
分な時間があればよいが、通常２０分乃至２００日、と
りわけ５時間乃至１２０日間が好ましい。
時間は、酒類中のカルバミン酸エチルが消失するのに十
分な時間があればよいが、通常２０分乃至２００日、と
りわけ５時間乃至１２０日間が好ましい。
本発明方法で処理した酒類中のカルバミン酸エチル分解
酵素は、通常、ろ過などの方法によって酒類中からとり
除くことができる。この場合、ろ過動剤や滓下げ剤、活
性炭などを添加してろ布ろ過してもよいし、さらに精密
ろ過や限外ろ過なども有効な手段である。
酵素は、通常、ろ過などの方法によって酒類中からとり
除くことができる。この場合、ろ過動剤や滓下げ剤、活
性炭などを添加してろ布ろ過してもよいし、さらに精密
ろ過や限外ろ過なども有効な手段である。
衷奥男
以下に実施例をもって、本発明の内容をより具体的に説
明するが、これらはいずれも本発明の内容を例示するも
のにすぎず、本発明の範囲を限定するものではない。
明するが、これらはいずれも本発明の内容を例示するも
のにすぎず、本発明の範囲を限定するものではない。
なお、酒類中に含まれるカルバミン酸エチルはフランク
・エル・ジョー・ジュニアら（Ｆｒａｎｋ Ｌ。
・エル・ジョー・ジュニアら（Ｆｒａｎｋ Ｌ。
Ｊｏｅ、 Ｊｒ、 ｅｔ ａｌ、）の方法（ジャーナ
ル・オブ・ザ・アソシエーション・オブ・オフィシャル
・アナリティカル・ケミスツ、Ｊ、ＡＯＡＣ，６０，５
０９（１９７７）に記載）に準じて、ガスクロマトグラ
フィー法で測定した。
ル・オブ・ザ・アソシエーション・オブ・オフィシャル
・アナリティカル・ケミスツ、Ｊ、ＡＯＡＣ，６０，５
０９（１９７７）に記載）に準じて、ガスクロマトグラ
フィー法で測定した。
実施例１
市販ＹＭ寒天培地（デイフコ社製）上に生育した、Ｔｒ
ｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｃｕｔａｎｅｕｍ Ｉ Ｆ
Ｏ１１９８株をグルコース０．２５％、燐酸１カリウム
０．５％、硫安０．５％、酵母エキス０．２％、食塩０
．０１％、塩化カルシウム（２水塩）０．２％、硫酸マ
グネシウム（７水塩）０．０５％、ｎ−ブチルアミド０
．２５％、ｐＨ５，５からなる滅菌シード培地２５ｍ（
２を含む２００ｍｄ容三角フラスコに接種して、２８°
Ｃで２４時間、振盪培養した。このシード培養物２５ｍ
１２を同じ組成からなる滅菌培地２５０ｍ（２を含むＩ
Ｑ容三角フラスコに移植し、２８℃で３日間振盪培養し
た。このもののカルバミン酸エチル分解活性を測定した
ところ、０．００５Ｕ／ｍ（２の酵素力価であった。こ
の培養液を遠心分離機で集菌し、これらの菌体を市販の
清酒（アルコール１７％、カルバミン酸エチルｌ ４８
ｐｐｂ、 ｐＨ４，３）に、０−０１Ｕ／ｍＱまたは０
．０５Ｕ／ｍＱになるように添加し、２８°Ｃに保持し
て、清酒中のカルバミン酸エチルの分解反応を行なわせ
たところ、表１に示す結果が得られた。
ｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｃｕｔａｎｅｕｍ Ｉ Ｆ
Ｏ１１９８株をグルコース０．２５％、燐酸１カリウム
０．５％、硫安０．５％、酵母エキス０．２％、食塩０
．０１％、塩化カルシウム（２水塩）０．２％、硫酸マ
グネシウム（７水塩）０．０５％、ｎ−ブチルアミド０
．２５％、ｐＨ５，５からなる滅菌シード培地２５ｍ（
２を含む２００ｍｄ容三角フラスコに接種して、２８°
Ｃで２４時間、振盪培養した。このシード培養物２５ｍ
１２を同じ組成からなる滅菌培地２５０ｍ（２を含むＩ
Ｑ容三角フラスコに移植し、２８℃で３日間振盪培養し
た。このもののカルバミン酸エチル分解活性を測定した
ところ、０．００５Ｕ／ｍ（２の酵素力価であった。こ
の培養液を遠心分離機で集菌し、これらの菌体を市販の
清酒（アルコール１７％、カルバミン酸エチルｌ ４８
ｐｐｂ、 ｐＨ４，３）に、０−０１Ｕ／ｍＱまたは０
．０５Ｕ／ｍＱになるように添加し、２８°Ｃに保持し
て、清酒中のカルバミン酸エチルの分解反応を行なわせ
たところ、表１に示す結果が得られた。
表 １ 清酒中のカルバミン酸エチルの変化（単位：
ｐｐｂ） 実施例２ 市販ＹＭ寒天培地（デイフコ社製）上に生育した、表２
に掲げる各菌株を、実施例１と同様に培養して、その培
養物のカルバミン酸エチル分解活性を測定したところ、
表２に示すような分解活性であっｔこ。
ｐｐｂ） 実施例２ 市販ＹＭ寒天培地（デイフコ社製）上に生育した、表２
に掲げる各菌株を、実施例１と同様に培養して、その培
養物のカルバミン酸エチル分解活性を測定したところ、
表２に示すような分解活性であっｔこ。
表 ２ 培養液当りのカルバミン酸エチル分解活性菌株
（Ｕ／ｍの Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｃｕｔａｎｅｕｍ
ＩＦＯ１２０００，００４Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇ
ｌｕｔｉｎｉｓ ＩＦＯ１５０１０−００１Ｒｈｏｄｏ
ｔｏｒｕｌａ ｍ１ｎｕｔａ ｖａｒ、ｔｅｘｅｎｓｉ
ｓ ＩＦＯ１５４１０，００１Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ
ｒｕｂｒａ ＩＦＯ０９１００，００２Ｇｌｕｃｏｎ
ｏｂａｃｔｅｒ ａｌｂｉｄｕｓ ＩＦＯ３２５００，
００４Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｉ
ｄｅｓ ＩＦＯ１００３２０，００１Ｃａｎｄｉｄａ
ｐａｒａｐｓｉ！ｏｓｉｓ ＩＦＯ０７０８０，００６
Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ ＡＴＣＣ
７３３６０，００５Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅｄ
ｉａ ＩＦＯ０７６１０，００３Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕ
ｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ＩＦＯ０８３８０，００２
Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣＣ７３４
５０，００６Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ Ａ
ＴＣＣ１０７５５０，００６表２の各菌株の培養液を遠
心分離して、菌体を集め、実施例１と同じ市販ｒｉ？酒
に、０．０２Ｕ／ｍαになるように添加して、２８°Ｃ
でときどき撹拌しながら７日間保持したところ、清酒中
のカルバミン酸エチルの濃度は次のようであった。
（Ｕ／ｍの Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｃｕｔａｎｅｕｍ
ＩＦＯ１２０００，００４Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇ
ｌｕｔｉｎｉｓ ＩＦＯ１５０１０−００１Ｒｈｏｄｏ
ｔｏｒｕｌａ ｍ１ｎｕｔａ ｖａｒ、ｔｅｘｅｎｓｉ
ｓ ＩＦＯ１５４１０，００１Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ
ｒｕｂｒａ ＩＦＯ０９１００，００２Ｇｌｕｃｏｎ
ｏｂａｃｔｅｒ ａｌｂｉｄｕｓ ＩＦＯ３２５００，
００４Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｉ
ｄｅｓ ＩＦＯ１００３２０，００１Ｃａｎｄｉｄａ
ｐａｒａｐｓｉ！ｏｓｉｓ ＩＦＯ０７０８０，００６
Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ ＡＴＣＣ
７３３６０，００５Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅｄ
ｉａ ＩＦＯ０７６１０，００３Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕ
ｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ＩＦＯ０８３８０，００２
Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣＣ７３４
５０，００６Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ Ａ
ＴＣＣ１０７５５０，００６表２の各菌株の培養液を遠
心分離して、菌体を集め、実施例１と同じ市販ｒｉ？酒
に、０．０２Ｕ／ｍαになるように添加して、２８°Ｃ
でときどき撹拌しながら７日間保持したところ、清酒中
のカルバミン酸エチルの濃度は次のようであった。
表 ３ 処理後のカルバミン酸エチル濃Ｋ （ｐｐｂ）
Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ａｌｂｉｄｕｓ Ｉ
ＦＯ３２５０９４Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂ
ｒａ ｒＦｏ ０９１０ ６６Ｒｈｏ
ｄｏＬｏｒｕｌａ ｇｌｕｔｉｎｉｓ ＩＦＯ１
５０１８２ＲｈｏｄｏＬｏｒｕｌａ ｍ１ｎｕｔａ
ｖａｒ、 ｔｅｘｅｎｓｉｓ ＩＦＯ１５４１４８Ｒ
ｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ
ＩＦＯ１００３２２２Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ
ｃｕｔａｎｅｕｍ ＩＦＯ１２００１５Ｃａｎｄｉ
ｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ ＩＦＯ０７０８
０Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ Ａ
ＴＣＣ７３３６１２Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅ
ｄｉａ ＩＦＯ０７６１２２Ｃａｎｄｉｄａ ｇ
ｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ＩＦＯ０８３８３８Ｃａ
ｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣＣ７３４
５０Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣ
Ｃ１０７５５０Ｃａｎｄｌｄａ ｃａｔｅｎｕｌａｔ
ａ ＩＦＯ０７４５３実施例３ （１）栄養寒天培地上に生育した、表４に掲げる各菌株
を、グルコース０．２５％、燐酸１カリウム０゜０３％
、ポリペプトン０．２５％、食塩０．５％、ホルミルア
ミド０．１％、Ｉ）Ｈ４−５からなる滅菌シート培地２
５ｍ１２を含む２００ｍ（２容三角フラスコに接種して
、３０°Ｃで４８時間、振盪培養した。
Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ａｌｂｉｄｕｓ Ｉ
ＦＯ３２５０９４Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂ
ｒａ ｒＦｏ ０９１０ ６６Ｒｈｏ
ｄｏＬｏｒｕｌａ ｇｌｕｔｉｎｉｓ ＩＦＯ１
５０１８２ＲｈｏｄｏＬｏｒｕｌａ ｍ１ｎｕｔａ
ｖａｒ、 ｔｅｘｅｎｓｉｓ ＩＦＯ１５４１４８Ｒ
ｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ
ＩＦＯ１００３２２２Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ
ｃｕｔａｎｅｕｍ ＩＦＯ１２００１５Ｃａｎｄｉ
ｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ ＩＦＯ０７０８
０Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ Ａ
ＴＣＣ７３３６１２Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅ
ｄｉａ ＩＦＯ０７６１２２Ｃａｎｄｉｄａ ｇ
ｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ＩＦＯ０８３８３８Ｃａ
ｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣＣ７３４
５０Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣ
Ｃ１０７５５０Ｃａｎｄｌｄａ ｃａｔｅｎｕｌａｔ
ａ ＩＦＯ０７４５３実施例３ （１）栄養寒天培地上に生育した、表４に掲げる各菌株
を、グルコース０．２５％、燐酸１カリウム０゜０３％
、ポリペプトン０．２５％、食塩０．５％、ホルミルア
ミド０．１％、Ｉ）Ｈ４−５からなる滅菌シート培地２
５ｍ１２を含む２００ｍ（２容三角フラスコに接種して
、３０°Ｃで４８時間、振盪培養した。
このシード培養物２５ｍρを同じ組成からなる滅菌培地
２５０ｍＱを含むＩＣ容三角フラスコに移植し、３０°
Ｃで３日間振盪培養した。このもののカルバミン酸エチ
ル分解活性を測定したところ、表４に示す結果が得られ
た。
２５０ｍＱを含むＩＣ容三角フラスコに移植し、３０°
Ｃで３日間振盪培養した。このもののカルバミン酸エチ
ル分解活性を測定したところ、表４に示す結果が得られ
た。
表 ４ 培養液当りのカルバミン酸エチル分解活性菌
株 （ｔＪ／ｍ
Ｑ）Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅｎｉｎｇｏｓ
ｅｐｔｉｃｕｍ ＩＦＯ１２５３５０，００２Ａｒｔｈ
ｒｏｂａｃｔｅｒ ｒａｍｏｓｕｓ ＩＦＯ
１２９５８０，００１Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
ｘｅｒｏｓｉｓ ＩＦＯ１２６６８０，００１
Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ
ＩＦＯ１３１１１０，００１（２）栄養寒天培地上
に生育した、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｏｌｅｏｖｏｒａ
ｎｓ Ｉ Ｆ Ｏｌ ３５８３株を、燐酸２カリウム０
．１％、硫酸マグネシウム（７水塩）０．０２％、炭酸
カルシウム０．１％、硫酸第一鉄ｏ、。
株 （ｔＪ／ｍ
Ｑ）Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅｎｉｎｇｏｓ
ｅｐｔｉｃｕｍ ＩＦＯ１２５３５０，００２Ａｒｔｈ
ｒｏｂａｃｔｅｒ ｒａｍｏｓｕｓ ＩＦＯ
１２９５８０，００１Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
ｘｅｒｏｓｉｓ ＩＦＯ１２６６８０，００１
Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ
ＩＦＯ１３１１１０，００１（２）栄養寒天培地上
に生育した、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｏｌｅｏｖｏｒａ
ｎｓ Ｉ Ｆ Ｏｌ ３５８３株を、燐酸２カリウム０
．１％、硫酸マグネシウム（７水塩）０．０２％、炭酸
カルシウム０．１％、硫酸第一鉄ｏ、。
１％、モリブデン酸ナトリウム０．０００５％、食塩０
．０２％、カルバミン酸エチル０．５％、ｐＨ４，５か
らなる滅菌シード培地２５ｍＱを含む２００ｍ１２容三
角フラスコに接種して、３０℃で７２時間、振盪培養し
た。このシード培養物２５ｍＱを同じ組成からなる滅菌
培地２５０ｍ（２を含むｌＱ容三角フラスコに移植し、
３０°Ｃで３日間振盪培養した。このもののカルバミン
酸エチル分解活性を測定したところ、０．００５ Ｕ／
ｎ＋（！テアった。
．０２％、カルバミン酸エチル０．５％、ｐＨ４，５か
らなる滅菌シード培地２５ｍＱを含む２００ｍ１２容三
角フラスコに接種して、３０℃で７２時間、振盪培養し
た。このシード培養物２５ｍＱを同じ組成からなる滅菌
培地２５０ｍ（２を含むｌＱ容三角フラスコに移植し、
３０°Ｃで３日間振盪培養した。このもののカルバミン
酸エチル分解活性を測定したところ、０．００５ Ｕ／
ｎ＋（！テアった。
（３）栄養寒天培地上ｌコ生育した、Ｘ１ｅｂｓｉｅｌ
Ｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｉ Ｆ Ｏ１３７０３株
を、硫安０．２％、燐酸１カリウム０．６％、燐酸２カ
リウム１゜４％、＠酸マグネシウム（７水塩）０．０２
％、クエン酸ナトリウム０．１％、カルバミン酸エチル
０．５％、ｐＨ５，５からなる滅菌シード培地２５ｍＱ
を含む２００ｍ１２容三角フラスコに接種して、３０°
Ｃで４８時間、振盪培養した。このシード培養物２５ｍ
（ｌを同し組成からなる滅菌培地２５０ｍ（１を含むＩ
ｃ容三角フラスコに移植し、３０°Ｃで３日間振盪培養
した。このもののカルバミン酸エチル分解活性を測定し
たところ、０．００１０／ｍ１！であった。
Ｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｉ Ｆ Ｏ１３７０３株
を、硫安０．２％、燐酸１カリウム０．６％、燐酸２カ
リウム１゜４％、＠酸マグネシウム（７水塩）０．０２
％、クエン酸ナトリウム０．１％、カルバミン酸エチル
０．５％、ｐＨ５，５からなる滅菌シード培地２５ｍＱ
を含む２００ｍ１２容三角フラスコに接種して、３０°
Ｃで４８時間、振盪培養した。このシード培養物２５ｍ
（ｌを同し組成からなる滅菌培地２５０ｍ（１を含むＩ
ｃ容三角フラスコに移植し、３０°Ｃで３日間振盪培養
した。このもののカルバミン酸エチル分解活性を測定し
たところ、０．００１０／ｍ１！であった。
上記の（１）、（２）および（３）で得られた、各菌株
の培養液を遠心分離機で集菌し、生理食塩水で十分洗浄
し、さらに蒸留水で洗浄した。市販の白ブドウ酒（アル
コール１２％、ｐＨ３，２）にカルバミン酸エチルを添
加してその濃度が、１２０ｐｐｂになるようにした試験
ワインに、上記の洗浄菌体を、カルバミン酸エチル分解
活性が０．０５Ｕ／ｍＱになるように添加し、２０°Ｃ
に ２０日間保持して、白ブドウ酒中のカルバミン酸エ
チルの分解反応を行なわせたところ、表５に示す結果が
得られた。
の培養液を遠心分離機で集菌し、生理食塩水で十分洗浄
し、さらに蒸留水で洗浄した。市販の白ブドウ酒（アル
コール１２％、ｐＨ３，２）にカルバミン酸エチルを添
加してその濃度が、１２０ｐｐｂになるようにした試験
ワインに、上記の洗浄菌体を、カルバミン酸エチル分解
活性が０．０５Ｕ／ｍＱになるように添加し、２０°Ｃ
に ２０日間保持して、白ブドウ酒中のカルバミン酸エ
チルの分解反応を行なわせたところ、表５に示す結果が
得られた。
（以下余白）
菌 株 濃度Ａｒｔ
ｂｒｏｂａｃｔｅｒ ｒａｍｏｓｕｓ ＩＦ
Ｏ１２９５８２７Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ ｘｅ
ｒｏｓｉｓ ＩＦＯ１２６６８２５Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＩＦＯ
１３１１１２５Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖ
ｏｒａｎｓ ＩＦＯ１３５８３１２Ｋｌｅｂｓ
ｉａｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＩＦＯ
１３７０３２１Ｎｏｎｅ
ｌ ２０実施例４ 実施例１と同様の方法により、Ｃａｎｄｉｄａｋｒｕｓ
ｏｉｄｅｓ Ａ Ｔ ＣＣ７３４５を培養し、その培
養液１ａを遠心分離して菌体を集め、生理食塩水で十分
洗浄後、湿菌体５ｇを生理食塩水１５＋ｎＱ。
ｂｒｏｂａｃｔｅｒ ｒａｍｏｓｕｓ ＩＦ
Ｏ１２９５８２７Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ ｘｅ
ｒｏｓｉｓ ＩＦＯ１２６６８２５Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＩＦＯ
１３１１１２５Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖ
ｏｒａｎｓ ＩＦＯ１３５８３１２Ｋｌｅｂｓ
ｉａｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＩＦＯ
１３７０３２１Ｎｏｎｅ
ｌ ２０実施例４ 実施例１と同様の方法により、Ｃａｎｄｉｄａｋｒｕｓ
ｏｉｄｅｓ Ａ Ｔ ＣＣ７３４５を培養し、その培
養液１ａを遠心分離して菌体を集め、生理食塩水で十分
洗浄後、湿菌体５ｇを生理食塩水１５＋ｎＱ。
に懸濁し、滅菌した１％アルギン酸ナトリウム溶液１５
ｍＣとよく混合したのち、１％塩化カルシウム溶液中に
滴下して固定化菌体を調製した。次いで固定化菌体をろ
別し水で洗浄した。一方、市販ウィスキー（アルコール
４３％、ｐＨ４，８）にカルバミン酸エチルを添加しそ
の濃度が２３０ ｐｐｂになるように調整した試験用ウ
ィスキー３０ｍ１２中に、主苗の固定化菌体をに浸漬し
く酵素活性としては、０．０４Ｕ／ｍ（２に相当する。
ｍＣとよく混合したのち、１％塩化カルシウム溶液中に
滴下して固定化菌体を調製した。次いで固定化菌体をろ
別し水で洗浄した。一方、市販ウィスキー（アルコール
４３％、ｐＨ４，８）にカルバミン酸エチルを添加しそ
の濃度が２３０ ｐｐｂになるように調整した試験用ウ
ィスキー３０ｍ１２中に、主苗の固定化菌体をに浸漬し
く酵素活性としては、０．０４Ｕ／ｍ（２に相当する。
）、密封して３０’Ｏで２０日間保持した。このものの
残存カルバミン酸エチルを測定したところ、８１ｐｐｂ
Ｊ二減少していた。
残存カルバミン酸エチルを測定したところ、８１ｐｐｂ
Ｊ二減少していた。
実施例５
実施例１と同様に培養して得られた Ｃａｎｄ １ｄａ
Ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣＣ７３４５株の培養液（カ
ルバミン酸エチル分解活性は０．００７ Ｕ／ｍｆｆ）
２ｆｆを遠心分離して菌体を集め、０．０５Ｍ燐酸緩衝
液（ｐＨ７，２） で２回洗浄後、４Ｑ（７）Ｑ、Ｑ５
Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７，２）、１ｍＭのＥＤＴＡおよび
１ｍ Ｍのジチオスレイトールを含む液に懸濁し、径０
．１乃至０．２ｍｍのガラスピーズ２Ｑを加えて、菌体
破砕機で、４５００ｒｐｍ、２０分間処理をした。これ
を遠心分離し、その上清に９０％になるように硫安を添
加して、その沈澱区分を遠心分離によって集め、１ｍＭ
の２メルカプトエタノールを含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液
（ｐＨ７，０） ｌ：１解後、同緩衝液で緩衝化したセ
ファデックスＧ−２００カラム（径４−５ｃｍｘ長さ１
５０ｃｍ）に吸着後、同緩衝液で溶出して活性区分を集
液し、比活性を測定したところ、０．００３２０／ｍｇ
蛋白であり、活性の収率は４３．６％であった。
Ｋｒｕｓｏｉｄｅｓ ＡＴＣＣ７３４５株の培養液（カ
ルバミン酸エチル分解活性は０．００７ Ｕ／ｍｆｆ）
２ｆｆを遠心分離して菌体を集め、０．０５Ｍ燐酸緩衝
液（ｐＨ７，２） で２回洗浄後、４Ｑ（７）Ｑ、Ｑ５
Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７，２）、１ｍＭのＥＤＴＡおよび
１ｍ Ｍのジチオスレイトールを含む液に懸濁し、径０
．１乃至０．２ｍｍのガラスピーズ２Ｑを加えて、菌体
破砕機で、４５００ｒｐｍ、２０分間処理をした。これ
を遠心分離し、その上清に９０％になるように硫安を添
加して、その沈澱区分を遠心分離によって集め、１ｍＭ
の２メルカプトエタノールを含む０．０５Ｍ燐酸緩衝液
（ｐＨ７，０） ｌ：１解後、同緩衝液で緩衝化したセ
ファデックスＧ−２００カラム（径４−５ｃｍｘ長さ１
５０ｃｍ）に吸着後、同緩衝液で溶出して活性区分を集
液し、比活性を測定したところ、０．００３２０／ｍｇ
蛋白であり、活性の収率は４３．６％であった。
このものの酵素化学的性質は次の通りである。
（１）基質特異性
カルバミン酸エチルのほが、カルバミン酸メチル、ホル
ムアミドなどにも作用する。（表６）表 ６ 基質特
異性 （２）至適ｐＨおよびｐ Ｈ安定性 図１に示されるように、至適ｐＨはｐ Ｈ７である。３
７°Ｃで１５分間、各ｐＨに保持した場合の残存活性を
図２に示した。この図から明らかなように、ｐＨ６乃至
８で安定である。
ムアミドなどにも作用する。（表６）表 ６ 基質特
異性 （２）至適ｐＨおよびｐ Ｈ安定性 図１に示されるように、至適ｐＨはｐ Ｈ７である。３
７°Ｃで１５分間、各ｐＨに保持した場合の残存活性を
図２に示した。この図から明らかなように、ｐＨ６乃至
８で安定である。
（３）至適温度および温度安定性
図３に示されるように、至適温度は４０°Ｃ付近である
。また、ｐＨ７で１５分間保持した場合の残存活性を図
４に示した。この図から明らかなように、５０°Ｃまで
安定である。
。また、ｐＨ７で１５分間保持した場合の残存活性を図
４に示した。この図から明らかなように、５０°Ｃまで
安定である。
（４」阻害剤
表７に示されるように、水銀、鉄、銅、亜鉛などの金属
塩によって阻害される。（表７）表 ７ 阻害剤 （５）Ｋｍ値 Ｋｍ値は６５ｍＭである。（ｐＨ４，０，２クエン酸パ
ンフアー） この粗酵素を、実施例Ｉと同じ市販清酒に０゜０５Ｕ／
ｍ１２になるように添加し、６７°Ｃで５日間保持した
ところ、清酒中のカルバミン酸エチル濃度は１４ｐｐｂ
に低下していた。
塩によって阻害される。（表７）表 ７ 阻害剤 （５）Ｋｍ値 Ｋｍ値は６５ｍＭである。（ｐＨ４，０，２クエン酸パ
ンフアー） この粗酵素を、実施例Ｉと同じ市販清酒に０゜０５Ｕ／
ｍ１２になるように添加し、６７°Ｃで５日間保持した
ところ、清酒中のカルバミン酸エチル濃度は１４ｐｐｂ
に低下していた。
発明の効果
本発明によると酒類中のカルバミン酸エチルを容易に分
解することができ、その濃度が所望値、たとえば清酒で
１ｏＯｐｐｂ以下、ウィスキーでｔｓｏｐｐｂ以下、ワ
インで３０ｐｐｂ以下である質良好な酒類を提供でき、
実用的に極めて有用な方法である。
解することができ、その濃度が所望値、たとえば清酒で
１ｏＯｐｐｂ以下、ウィスキーでｔｓｏｐｐｂ以下、ワ
インで３０ｐｐｂ以下である質良好な酒類を提供でき、
実用的に極めて有用な方法である。
図１および２は、実施例５で得られた酵素のｐＨと酵素
活性との関係を、また図３および４は同酵素について温
度と酵素活性との関係をそれぞれ示す。 代理人 弁理士 岩 １） 弘嬰 ＠′ 渋
４ ≦ に１祁 ２ 兵 象状 議 ２ 手 舵龜 打１〕 正 ’ｔＦ（自発）１．事件の表示 昭和６３年特許願第２８６４２８号 ２、発明の名称 酒類の品質改良法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 大阪市東区道修町２丁目２７番地名称 （２９
３）武田薬品工業株式会社代表者 梅 本 純 正 ４、代理人 住所 大阪市淀用区十三本町２丁目１７番８５号６、補
正の内容 ｌ）明細書第４頁第２〜７行の［グルコノ／ （フタ−
属・・・・・・・・・・・・・・・例示され、」の記載
を「グルコノバクタ−届、フラボバクテリウム属、アル
スロノイクター属、アクロモバクタ−属、アリ力すゲネ
ス属、シュードモナス属あるいはクレブシェラ属など細
菌や、ロドトルラ属、ロドスボリデイウム属、トリコス
ポロン属あるいはキャンデイダ属などの酵母が例示され
る。」に補正する。 ２）明細書第５頁第１行のｒ ｃａｔｅｎｕ−ｆａｔａ
ｌをｒ ｃａＬｅｎｕｌａｔａ Ｊに補正する。 ３）明細書第５頁第９行のｒＫｌｅｂｓｉｅｌｌＪをｒ
ＫｌｅｂｓｉｅｌｌａＪに補正する。 ４）明細書第２３頁第１Ｏ行のｒ （４Ｊ Ｊをｒ（４
）Ｊに補正する。 ５）明細書第２４頁第５行の「６７°Ｃ」を「３７°Ｃ
」に補正する。 以上
活性との関係を、また図３および４は同酵素について温
度と酵素活性との関係をそれぞれ示す。 代理人 弁理士 岩 １） 弘嬰 ＠′ 渋
４ ≦ に１祁 ２ 兵 象状 議 ２ 手 舵龜 打１〕 正 ’ｔＦ（自発）１．事件の表示 昭和６３年特許願第２８６４２８号 ２、発明の名称 酒類の品質改良法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 大阪市東区道修町２丁目２７番地名称 （２９
３）武田薬品工業株式会社代表者 梅 本 純 正 ４、代理人 住所 大阪市淀用区十三本町２丁目１７番８５号６、補
正の内容 ｌ）明細書第４頁第２〜７行の［グルコノ／ （フタ−
属・・・・・・・・・・・・・・・例示され、」の記載
を「グルコノバクタ−届、フラボバクテリウム属、アル
スロノイクター属、アクロモバクタ−属、アリ力すゲネ
ス属、シュードモナス属あるいはクレブシェラ属など細
菌や、ロドトルラ属、ロドスボリデイウム属、トリコス
ポロン属あるいはキャンデイダ属などの酵母が例示され
る。」に補正する。 ２）明細書第５頁第１行のｒ ｃａｔｅｎｕ−ｆａｔａ
ｌをｒ ｃａＬｅｎｕｌａｔａ Ｊに補正する。 ３）明細書第５頁第９行のｒＫｌｅｂｓｉｅｌｌＪをｒ
ＫｌｅｂｓｉｅｌｌａＪに補正する。 ４）明細書第２３頁第１Ｏ行のｒ （４Ｊ Ｊをｒ（４
）Ｊに補正する。 ５）明細書第２４頁第５行の「６７°Ｃ」を「３７°Ｃ
」に補正する。 以上
Claims (1)
- （１）酒類をカルバミン酸エチル分解酵素で処理するこ
とを特徴とする酒類の品質改良法（２）グルコノバクタ
ー属、ロドトルラ属、ロドスポリディウム属、トリコス
ポロン属、キャンデイダ属、フラボバクテリウム属、ア
ルスロバクター属、アクロモバクター属、アルカリゲネ
ス属、シュードモナス属あるいはクレブシエラ属に属し
、カルバミン酸エチルを分解する能力を有する微生物の
培養物またはその処理物を酒類と接触させることを特徴
とする酒類の品質改良法
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63286428A JPH01240179A (ja) | 1987-12-11 | 1988-11-11 | 酒類の品質改良法 |
| EP19880311664 EP0320275A1 (en) | 1987-12-11 | 1988-12-09 | Quality improvement of alcoholic liquors |
| US07/282,044 US5000966A (en) | 1987-12-11 | 1988-12-09 | Quality improvement of alcoholic liquors by enzymatic decomposing of ethyl carbamate |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31488287 | 1987-12-11 | ||
| JP62-314882 | 1987-12-11 | ||
| JP63286428A JPH01240179A (ja) | 1987-12-11 | 1988-11-11 | 酒類の品質改良法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01240179A true JPH01240179A (ja) | 1989-09-25 |
Family
ID=26556312
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63286428A Pending JPH01240179A (ja) | 1987-12-11 | 1988-11-11 | 酒類の品質改良法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5000966A (ja) |
| EP (1) | EP0320275A1 (ja) |
| JP (1) | JPH01240179A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000184878A (ja) * | 1998-12-19 | 2000-07-04 | Satoru Tabata | 酒類及び甘味食品の製造方法 |
| WO2018180187A1 (ja) * | 2017-03-30 | 2018-10-04 | 天野エンザイム株式会社 | カルバミン酸エチルの分解 |
| CN110747089A (zh) * | 2019-12-16 | 2020-02-04 | 江西陶令酒业有限公司 | 一种降低特香型白酒中氨基甲酸乙酯的方法 |
| JP2024544617A (ja) * | 2022-08-16 | 2024-12-03 | 大連工業大学 | カルバミン酸エチルを効率的に分解するロドトルラ及びその使用 |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2130097A1 (en) * | 1992-02-14 | 1993-08-19 | Olavi Leppanen | Procedure and apparatus for producing whisky |
| AU1277492A (en) * | 1992-02-14 | 1993-09-03 | Oy Alko Ab | Procedure and apparatus for producing whisky |
| US5358732A (en) * | 1993-08-10 | 1994-10-25 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Method and system for removing impurities from aliments |
| BRPI0621953B1 (pt) * | 2006-10-16 | 2016-09-13 | Ct De Investigacíon Em Alimentacíon Y Dessarolo A C | composição sólida, seca, eficaz no controle biológico de colletotrichum gloeosporioides; método para produção de uma composição; método para o controle biológico da enfermidade causada por colletotrichum gloeosporioides e método para reduzir a perda de peso durante a armazenagem de manga |
| CN102944636B (zh) * | 2012-11-07 | 2015-04-01 | 宜宾五粮液股份有限公司 | 蒸馏酒中氨基甲酸乙酯的高效液相色谱-质谱检测方法 |
| CN102994433B (zh) * | 2012-12-27 | 2014-07-09 | 江南大学 | 一株合成酸性氨基甲酸乙酯水解酶的产酸克雷伯氏菌及其应用 |
| CN110317693A (zh) * | 2019-07-13 | 2019-10-11 | 北京龙泉四喜酿造有限公司 | 一种浓香型白酒制备工艺 |
| CN110564562A (zh) * | 2019-10-23 | 2019-12-13 | 山东农业大学 | 一种降低山楂发酵酒中氨基甲酸乙酯的方法 |
| CN110656008B (zh) * | 2019-10-24 | 2022-04-26 | 浙江农林大学 | 一种降低黄酒酿造过程中尿素和氨基甲酸乙酯含量的方法 |
| WO2022099145A1 (en) * | 2020-11-06 | 2022-05-12 | Crain Scott Lowell | Reduction of ethyl carbamate in livestock feed production |
| CA3206441A1 (en) * | 2021-03-10 | 2022-09-15 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Aroma-infused coffee beans |
| CN113621469A (zh) * | 2021-07-16 | 2021-11-09 | 石河子大学 | 一种降解葡萄酒中氨基甲酸乙酯的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3733205A (en) * | 1970-08-07 | 1973-05-15 | Pfizer | Enzymatic removal of diacetyl from fermented beverages |
| DK145502C (da) * | 1980-08-07 | 1983-05-02 | Forenede Bryggerier As | Fremgangsmaade til fremstilling af fermenterede alkoholiske produkter |
| AU598305B2 (en) * | 1986-10-14 | 1990-06-21 | Gekkeikan Sake Company, Ltd. | Quality improvement of alcoholic liquors |
-
1988
- 1988-11-11 JP JP63286428A patent/JPH01240179A/ja active Pending
- 1988-12-09 EP EP19880311664 patent/EP0320275A1/en not_active Ceased
- 1988-12-09 US US07/282,044 patent/US5000966A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000184878A (ja) * | 1998-12-19 | 2000-07-04 | Satoru Tabata | 酒類及び甘味食品の製造方法 |
| WO2018180187A1 (ja) * | 2017-03-30 | 2018-10-04 | 天野エンザイム株式会社 | カルバミン酸エチルの分解 |
| JPWO2018180187A1 (ja) * | 2017-03-30 | 2020-02-20 | 天野エンザイム株式会社 | カルバミン酸エチルの分解 |
| CN110747089A (zh) * | 2019-12-16 | 2020-02-04 | 江西陶令酒业有限公司 | 一种降低特香型白酒中氨基甲酸乙酯的方法 |
| JP2024544617A (ja) * | 2022-08-16 | 2024-12-03 | 大連工業大学 | カルバミン酸エチルを効率的に分解するロドトルラ及びその使用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0320275A1 (en) | 1989-06-14 |
| US5000966A (en) | 1991-03-19 |
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