JPH01308293A - 抗菌および抗腫瘍剤ＬＬ―Ｅ３３２８８ε―ＩおよびＬＬ―Ｅ３３２８８ε―Ｂｒ、前記剤を生産する方法および中間体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ＬＬ−Ｅ３３２８８複合体として集合的に知
られている抗生物質および抗腫瘍の族は、１９８６年５
月２８日に欧州特許（ＥＰ）１８２゜１５２号として発
行された、１９８５年１０月２９日提出の本出願人に係
る欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）８５１１２７’５１．３号
に記載され、そして特許請求されている。

この発行された出願は１．ＬＬ−Ｅ３３２８’８の複合
体、それらの成分、すなわち、ＬＬ−Ｅ３３２８８　α
、−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８　α＋−Ｉ。

ＬＬ−Ｅ３３２８８　α２−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８
ａ＝−．ＬＬ−Ｅ３３２８８　α３−Ｂ、ｒ、ＬＬ−Ｅ
３３２８８　α３−　　Ｉ、　　ＬＬ−Ｅ３３２！ａｓ
ａ４　　Ｂｒ、　　ＬＬ　　　Ｅ３３２８８　β＋−Ｂ
　ｒ　％　　Ｌ　Ｌ−Ｅ３３２８８β、−Ｉ、ＬＬ−Ｅ
３３２８８β２−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β２−Ｉ、
ＬＬ−Ｅ３３２８８　γ、−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８
　γ１−ＩおよびＬＬ−Ｅ　３３２８８β１−１１およ
び新規なミクロモノスポラ・エキノスポラ　ｓｓｐカリ
ケンシス（Ｍ　ｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　　ｅｃｈ
ｉｎｏｓｐｏｒａｓｓｐ　　ｃａｌｉｃｌｌｅｎｓｉｓ
）　　（以後、Ｍ　ｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｅｃｈ
ｉｎｏｓｐｏｒａ　　ｓｓｐ　　ｃａｌｉｃｈｅｎｓｉ
ｓと呼ぶ）の新規な株またはその天然または誘導された
突然変異体を利用する好気的発酵によって、それらを生
産する方法を記載している。

ある種の他の抗生物質は、本発明に関連し、それらは次
の通りである： ［）ニスペルマイシンＢＢＭ−１６７５、効力のある抗
腫瘍抗生物質■の新規なりラス。物理化学的データおよ
び部分的構造。Ｍ、コニシ（Ｋｏｎｉｓｈｉ）ら、ジャ
ーナル・オブ・アンチヒオチックス（Ｊ　、　Ａｎｔｉ
ｂｉｔｉｃｓ）　、３８．１６０５（１９８５）。新規
な抗腫瘍抗生物質複合体。Ｍ、コニシ（Ｋ　（＋１ｉｓ
ｈｉ）ら、英国特許出願ＧＢ２，１４１゜４２５Ａ、１
９８５年５月１５日。

２）新規な抗腫瘍抗生物質、ＦＲ−９００４０５および
ＦＲ−９００４０６ｏ　１．生産生株の分類学。Ｍ、イ
ワミ（Ｉ　ｗａｍｉ）ら、ジャーナル・オブ・アンチビ
オチックス（Ｊ　、　Ａｎｔｉｂｉｔｉｃｓ）、３８．
８３５（、、，１９８５）。新規な抗腫瘍抗生物質、Ｆ
Ｒ−９００４０５およびＰＲ−９００４０６゜Ｉ１）生
産、分離、特性づけおよび抗腫瘍活性。Ｓ、キヨト（Ｋ
　１ｙｏｔｏ）ら、ジャーナル・オブ・アンチヒオチッ
クス（Ｊ　、　Ａｎｔｉｂｉｔｉｃｓ）、３８．８４０
　（１９８５）。

３）ＰＤ　　１１４７５９およびＰＤ　　１１５０２８
、現象の効力をもつ新規な抗腫瘍抗生物質。

Ｒ，Ｒ，ブンゲ（Ｂ　ｕｎｇｅ）ら、ジャーナル・オブ
・アンチビオチノクス（Ｊ　、　Ａｎｔｉｂｉｔｉｃｓ
）　、３７、］、　５６．６　（＋、９８．４）。新規
な抗腫瘍抗生物質ＰＤ　１１４７５９および関連誘導体
の生物学的および生化学的活性。Ｄ、Ｗ　　フライ（Ｆ
　ｒｙ）ら、イベスティケインヨナル・ニュー・ドラッ
グス（ＬｎｖｅｓｔｉｇａｔｉＯｎａｌ　　Ｎｅｗ　　
Ｄｒｕｇｓ）　、４．３（．９，８６）。

４）ストレゾ１゛マイセス（ＳＬｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
）　ｓｐ、ＡＴＣＣ３９３６３によって生産される新規
な抗生物質複合体ＣＬ−１’５７７ＡおよびＣＬ−５７
７８゜米国特許第４．５３９．２０３号。

５）ＣＬ−７２４抗生物質化合物、それらの生産および
使用。米国特許第．５５４，１６２．号。

本発明は、Ｍ　ｉｃｒｏｍｏｈｏｓｐｏｒａｅｃｈ　１
ｎｏｓｐｏｒａ　　ｓｓｐ　　ｃａｌｉｃｈｅ、ｎ５ｉ
ｓの新規な株またはその天然または誘導された突然変異
体の好気的発酵によって誘導される、新規な成分、ＬＬ
−Ｅ３３２８８εに関する、。Ｌ、Ｌ−Ｅ３３２８８ε
は抗菌および抗腫瘍活性を有する。

ＬＬ−Ｅ３３２８８複合体の他の成分を使用する場合に
おけるように、ヨウ素含有成分は無機および有機のヨウ
化物を含有する培地を使用する発酵においてのみ見出さ
れ、これに対して臭素含有成分は無機および有機の臭化
物を含有する培地を使用する発酵においてのみ見出され
るので、本発明はＬＬ、−Ｅ、３３２８８ε−１１ヨウ
素含有成分およ、びＬＬ−Ｅ３３２８８ε−’Ｂｒ１臭
素含有成分の両者を包含する。本発明は、また、対応す
るヨウドおよび臭素のＬＬ−Ｅ３３２’８８γ１誘導体
かＬＵＬ、−Ｅ３３２８’８ε−■およびＬＬ＝Ｅ３３
２８８ε−Ｂｒを合成誘導化する２つの方法に関する。

ＬＬ−Ｅ３３２８８ε−■の物理化学的特性を下に記載
する：・　　　　　　・ ａ）分子式：　Ｃ５４Ｈ７＋　Ｎ　３’Ｏ’２１　Ｉ　
Ｓ　２、ｂ）元素分析：　Ｃ，４８，３７、Ｈ，５，７
２；Ｎ、３．０４．Ｓ、４．９８およびＩ、９．２８、
Ｃ）旋光度：　　［ｆｆｌ　２５＝−”Ｉ’４ｆ１”　
　（Ｃ。

１．１１５％、メタノール）、 ｄ）光学密度二〇、２３、メタノール中１０７１ｇ’／
’ｍ’１）２’ｂ ＝１２− ｅ）プロトン磁気共鳴スペクトル：第１図に示す（３０
０ＭＨ２１ＣＤＣ１３）、有意のピーク、７．１６（二
重線）、７．２１および７．２６（三重線）および？、
５５　ｐｐｍ　（二゛重線）、およびｆ）炭素−１３磁
気共鳴スペクトル：第２図に示す（７５，４６ＭＩ４　
Ｚｌ：　ＣＤＣ１３）　、有意のピーク、１．２０’−
１６０およびｌ　９’（Ｌ−２・ｌ　Ｏｐｐｍの領域。

ＬＬ−、Ｅ３３２８８ε−■およびＬ　Ｌ　−Ｅ　３　
”３”’２８８ｔ−Ｂｒの構造は完全には明らかにされ
なかったが、提案する構造を下に記載する。

新規な抗菌および抗腫瘍剤ＬＬ−Ｅ３３２８８Ｅ−■お
よびＬＬ−Ｅ３３２８８Ｅ　−Ｂｒは、Ｍｉｃｒｏｍｏ
ｎｏｓｐｏｒａ　　ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ　　ｓｓｐ
　　ｃａｌｉｃｈｅｎｓｉｓ　　ＮＲＲＬ　　１５８３
９、ＮＲ−ＲＬ　　１５９７５およびＮＲＲＬ　　１８
１４９のコントロールした条件下の培養の間の生成する
。

これらの新規は微生物は、アメリカン・サイアナミド拳
カンパニー（Ａ　ｍｅｒｉｃａｎ　　Ｃｙａｎａｍｉｄ
Ｃｏｍｐａｎｙ）　　（米国ニューヨーク州パールリバ
ー）の医学研究部（Ｍｅｄｉｃａｌ　　Ｒｅ５ｅａｒ、
ｃｈ　　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）の培養物コレクションにお
いて、ＬＬ−Ｅ３３２８８（ＮＲＲＬ　　　１５８３９
）、　ＬＬ−Ｅ３３２８８−Ｒ６６（ＮＲＲＬ　　１５
９７５）およびＬＬ−Ｅ３３２８８　　　ＵＶ　　　７
８４　　（ＮＲＲＬ　　　１８１４９）として維持され
ている。これらの新規な微生物の生存しうる培養物は、
米国農坤省（Ｕ。

Ｓ　、　　Ｄ　ｅｐａｒｔｍｅｎＬ　　ｏｆ　　Ａ　ｇ
ｒｉｃｕｌｔｕｒｅ）　　（イリノイ州ペオリア）のノ
ーザーン・リージョナル・リサーチ・センター（Ｎ　ｏ
ｒＬｈｅｒｎ　　Ｒｅｇｉｏｎａｌ　　Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ　　Ｃｅｎｔｅｒ）　、ザ・カルチャー・コレクショ
ン・ラボラトリ−（ｔｈｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　Ｃｏ
１１ｅｃｔｉｏｎＬ　ａｂｏｒａｔｏｒｙ）に受託され
ており、およびその永久的コレクションに加えられてい
る。

培養物ＬＬ−Ｅ３：３２８８（ＮＲＲＬ　　１５８３９
）は、テキサス州において集められたカリチエ年度の土
の試料から単離された。培養物ＬＬ−Ｅ　’３３２８８
’−、Ｒ’６八（’Ｎ、’Ｒ’ＲＬ　　１５９７５およ
びＬＬ−Ｅ３．３２８８　　ＵＶ、　　７８４　（ＮＲ
ＲＬ　　１８１４９）は、後述するようにして得られＩ
こ。

ミクロモノスポラ（Ｍ　ｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）
属へのＮＲＲ’ｒ−”　ｌ’５８．３’９ｃ７）二や、
イ４−ｃ＋よ、ゎアラ的にかつ化学的に確証された。こ
の株は、栄養型菌糸上で単一にあるあいは塊で単胞子を
産生ずる。

気中の菌糸は観察されなかった。電子顕微鏡検査は胞子
がいぼ状であることを示した。細胞の分析は、この株が
ジアミノピメリン酸のメソ異性体を含有することを示し
た。ジアミノピメリン酸の３−○Ｈ誘導体は、大きい（
主要）量で存在した。

さらに、この株はその全細胞の糖加水分解物中にキシロ
ース＋微量のアラヒノースの存在（Ｄ型の全細胞の糖の
パターン）を示した。

マクロ形態学的および生理学的研究から、ＮＲＲＬ　　
１５８３９は、ミクロモノスポラ・エキノスポラ（Ｍ　
、　ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）のそして種と考えること
ができると結論された（それはＭ、　６ｃｈｉｎｏｓｐ
ｏｒａ　　ｓｓｐ、　ｐａｌｌｉｄａに最も近い）。Ｎ
ＲＲＬ　　１５８３９の形態学のデータを表ＩおよびＩ
Ｉに記載する。生理学的データは、表ＩＩＩおよびＩＶ
に記載する。

表　　　　■ 表ＩＩＩ ＮＲＲＬ　　１５８３９の炭水化物の利用アラビノース
　　　　　　＋ セルロース　　　　　　　　− フルクトース　　　　　　　＋ グルコース　　　　　　　　＋ イノシトール　　　　　　− マンニトール　　　　　　− ラフィノース　　　　　　土 ラムノース　　　　　　　＋ スクロース　　　　　　　士 キンロース　　　　　　　十 表ＩＶ ＮＲＲＩ−１５８３９の生理学的反応 法の物質゛の加水分解 カゼイン　　　　　　　　　＋ キサンチン　　　　　　　− ハイポキサンチン　　　　− チロシン　　　　　　　　＋ アデニン　　　　　　　　− ゼラチン　　　　　　　　＋ ジャカイモ澱粉　　　　　士 エスクリン　　　　　　　十 次の物質の生産 硝酸塩リタクターゼ　　　＋ ホス７アターセ　　　　　弱い ウレアーゼ　　　　　　　− 次の物質の存在下の増殖 ザリシン　　　　　　　　− ５％塩化ナトリウム　　　− リソチームブロス　　　　− 次の物質の脱カルボキシル反応 アセテート　　　　　　　士 ヘンンエート　　　　　　　− ントレートー ラクテ−１・− マレート　　　　　　　　　− ム・ケ−１・− オキサレート　　　　　　− 一２０＝ プロピオ矛−ト　　　　　　十 ピルベート　　　　　　　＋ スクシネート　　　　　　− タートレ−１・− 次の物質からの酸 アドニトール　　　　　　− アラビノース　　　　　　＋ セロヒオース　　　　　　」− デキストリン　　　　　　士 ズルシトール　　　　　　− エリスリトール　　　　　− フルクトース　　　　　　　＋ ガラクトース　　　　　　変動 グルコース　　　　　　　士 グリセロール　　　　　　− イノシ）・−ル　　　　　　− ラフＩ・−ス　　　　　　　− マルトース　　　　　　　＋ マンニトール　　　　　　− マンノース　　　　　　　＋ α−メヂル−Ｄ−クコンド　　　士 ノリヒオース　　　　　　〜 ラフィノース　　　　　　＋ ラムノース　　　　　　　士 ザリ／ン　　　　　　　　＋ ソルヒト−ル　　　　　　　− スクロース　　　　　　　＋ トレハロース　　　　　　＋ キシロース　　　　　　　士 α−メグール〜Ｄ−キンロシド　　　一次の温度におけ
る増殖 １０’ｏ　　　　　　　　　　− ４２°Ｃ十 ４５°Ｃ＋ →−−陽性：−陰性 ２つの抗生物質産生突然変異体は、次の説明およびダイ
ヤグラムに従って、もとの培養物ＬＬ−Ｅ３３２８８　
（ＮＲＲＬ　　］　５８３９）から誘導した。もとの培
養物ＬＬ−Ｅ３３２８８　（ＮＲＲＬ　　１５８３９）
を平板培養し、そして５０の単一のコロニーを分離した
。これらをＮＳＩ〜Ｎ５５０と表示した（ＮＳ−自然の
選択）。

これらの分離物の発酵は、中程度の胞子形成のものは一
般にＬ　Ｌ　−Ｅ　３３’　２８８複合体のより・すぐ
れた生成物であることを示した。分離物ＮＳ６はこの群
の代表として選択した。

出発培養物として分離物ＮＳ５を使用して、胞子懸濁液
を調製し、そして種々の突然変異源に暴露した。紫外線
照射への１系列の暴露から、単一のコロニーを得、これ
から分離物ＵＶ６１０を高い生成の突然変異体として選
択した。分離物ＵＶ６１０を画線し、そして下位分離物
（５ｕｂｉｓｏｌａｔｅ）１〜７をさらに得た。下位分
離物ＵＶ６１０　（３）をそれ以上の研究のために選択
した。

分離物ｕｖ６１０　（３）からの栄養型増殖（次のダイ
ヤグラム参照）を、発酵に使用したように調製し、そし
てペプトン、デキストロース、糖蜜および水から成る培
地のフラスコを接種するために使用した。この培地にＬ
Ｌ−Ｅ３３２８８β１−Ｂｌ−を８μｇ／ｍｌの濃度で
補充した。このフラスコからある数の平板培養を実施し
、そして抵抗性の集団を第７日に得た。合計９７のコロ
ニー（Ｒｌ　−Ｒ９７）を分離した。分離物Ｒ６６は引
続いてＮＲＲＬ　　１５９７５として受託された。

分離物８０は、その生合成のポテンシャルがＲ６６に本
質的に類似し、出発培養物として使用し、これから胞子
懸濁液を調製し、そして比較的高い濃度のＬＬ−Ｅ３３
２８８複合体に暴露して、ＬＬ−Ｅ３３２８８抗生物質
に対して抵抗性の高い生成性の分離物を得た。１つの生
存物、Ｔ２と表示した、は、フラスコ発酵においてより
高い収量のＬＬ−Ｅ３３２８８β、−ＢｒおよびＬＬ−
Ｅ３３２８８γ１−■を生成した。

Ｔ２の胞子懸濁液を調製し、そして紫外線照射に暴露し
た。次いで、合計１３１のコロニー（Ｕｖ７０３〜ＵＶ
８３４）を分離し、発酵させ、そしてアッセイした。分
離物ＵＶ７８４をその比較的高い収量について選択し、
そしてこれは引続いてＮＲＲＬ　　１８１４９として受
託された。

誘導化のダイヤグラム Ｅ−３３２８８（野生型）（ＮＲＲＬ１５８３９）ＵＶ
６１０ ＵＶ６１０　（３） Ｒ８０Ｒ６６（ＮＲＲＬ　　１５９７５：）ＵＶ７８４
　（ＮＲＲＬ、１８１４９）ｒ−Ｔ−−Ｅ　３３２８８
ε−■およびＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｂｒの生産のため
、本発明は前述の有機体に、あるいは、例示の目的での
み記載した、上の増殖および顕微鏡的特性を完全に応答
する有機体に限定されない。事実、これらの有機体から
種々の手段、例えは、Ｘ線照射、紫外線輻射、Ｎ’−メ
チル−Ｎ’−二トローＮ−ニトロソクアニジン、アクチ
ノファージ（ａｃｔｉｎｏｐｈａｇｅｓ）などへの暴露
によって生産された突然変異体の使用を包含する。

ＬＬ−Ｅ３：３２８８ε−■の生体外抗菌活性を、標準
の寒天希釈法によって、ダラム陽性およびダラム陰性の
バクテリアのスペクトルに対して決定した。２倍に減少
する濃度の抗生物質を含有するムエラーーヒントン（Ｍ
ｕｅｌｌｅｒ　−Ｈ１ｎｔｏｎ）寒天をぺ１・り皿中に
注いだ。寒天表面を１〜５×１０’のコロ・ニー形成単
位でスティーアス（’Ｓ’Ｅｅｅｒｓ）増殖装置によっ
て接種した。３５°Ｃにおいて約・１８時間後バクテリ
ア株の増殖を阻害するＬＬ−Ｅ　３３２８８ε−■の最
低濃度を、その株に対する最小阻害濃度（ＭＩＣ）とし
て記録した。

結果を表Ｖに記載する。

！テ　　　寸　　　寸　　　寸　　　大ｒ　　　＼デ　
　　ｘｒ　　　ｘｒ　　　ｘｒ　　　ｘｒ　　　＼ｒα
フ　　　αフ　　　αフ　　　■　　αフ　　　αフ　
　　ｑフ　　　αフ　　　αフ　　　αフ△　△　△　
△　△　△　△　△　△　△Ｑ、ｃつ ００Ｑつω１０つ０フＯつ１ ω　　ω　　≧　　ロー　　００＜＜　　　ρイ　　出
　　の（’）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　（”）　　　Ｃｏ　　　ＣＮ−Ｃ’、］　０　（’
）　−２−ｆｆ　（Ｙ）　Ｃ’、］　−１Ｌｎ　ＣＱＮ
Ｏ囚Ｎへ１ｊ”）　−１ＣＮ　Ｃ’、＋■のｌ　　　　
Ｌｌ’）　　　　ｌ　　　　　ｌ　　　　　ｌ　　　　
　ｌ　　　　　ｌ　　　　へ　　０　　１　　　１Ｃ’
Ｊ　（’Ｎ　ＣＮ　（’、Ｉ　Ｃ’Ｊ　ＣＮの−Ｎ寸■
ＣＯＯり　　　Ｃｏ　　　　ＣＩＯ００ｏつ　　　　　
　　　　　　　０００りＱ　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　ＯＱｏＵ　　　ＯＱ　　ＵＱＵＯＵｉ
［、）ω　　ω　　ω　　の　　の　　ω　　ω　　の
　　（イ）　　ω　　ω今回、抗菌および抗腫瘍剤Ｌ　
’Ｌ　−Ｅ　３３２’、８８ε−■およびＬ　Ｌ　−Ｅ
　３３２８８ε−Ｂ１−は、対応するヨウドまたは証書
のＬ　Ｌ　−Ｅ　３３２　’８８γ１誘導体を試薬、例
えは、トリフェニルホスフィン、β−メルカプト−エタ
ノール、還元したグルタチオン、．４−ジチオスレイト
ールまたは種々の他のスルフヒドリル含有試薬で、溶媒
、例え１Ｊ、ジクロロメタン、アセトニトリル、酢酸エ
チル、メタノール、エタノールまたはクロロホルム中で
還元的に芳香族化することによって合成的に誘導される
ことか発見された。収量および生成物は、かなりな程度
において、試薬および溶媒の極性に依存する。さらに、
試薬の極性を増加すると、反応の速度に役立つ。好まし
い実施態様において、．４−ジチオスレイト−ルは試薬
であり、そしてアセトニトリルは溶媒である。

前述の抗生物質ＬＬ−Ｅ、：３３２８８α、７Ｂｒ、Ｌ
　Ｌ　−Ｅ　３３２８８α、−．ＬＬ−Ｅ３３２８８α
２−Ｂｒ、ＬＬ−Ｂ３：３２８８α２−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３
３２８８ａ３−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８ａ　３　　１
　％　　Ｌ　Ｌ　　　Ｅ　３３２８８　ａｔ−Ｂ　ｒ　
、’Ｌ　Ｌ−Ｅ３３２８８β、−Ｂ　ｒ、　　ＬＬ−Ｅ
’３３２８８β１−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β２−Ｂｒ
、ＬＬ−Ｂ３、　：３２．８８β２−１およびＬＬ−Ｅ
３３２８８δ１−１　Ｉを、前述の試薬で処理すると、
対応する還元的に芳香族化された抗生物質を生産される
ことが、さらに、決定された。

さらにへ、前述の抗生物質ＢＢ’Ｍ−．６７５、ＦＲ−
９００４０５、ＦＲ−９，，００４０６、Ｐ’Ｄ１１４
７５９、ＰＤ　　１１５０．２８、Ｃ４−１５７７Ａ１
ＣＬ−１５７７ＢＸＣＬ−１５７７Ｄ１ＣＬ−１５７７
ＥおよびＣＬ−１７２４を、前述の試薬で処理すると、
対応する還元的に芳香族化された抗生物質を生産される
ことが決定された。

ＬＬ−Ｅ３３２８８成分の構造は完全には推定されてい
ないが、提案する構造は反応の概要を例示するために下
に記載する。

一３６− 本発明は、さらに、ＬＬ−Ｅ３３２８８ε−■およびＬ
　Ｌ　−Ｅ　３３２８８ε”　Ｂ　ｒをＬＬ−Ｅ３３２
８８γ、−ＩおよびＬＬ−Ｅ３３２８８γ１−Ｂｒから
生産する合成法、およびこの方法の間開光された、それ
ら自体抗腫瘍活性を有する、中間体、デチオメチルγ＋
”Ｉまたは二量体と呼ぶ、に関する。

これらの反応は下、に概略的に示されており、そしてｒ
−Ｌ−Ｅ３３２８８γ、−ＩおよびＬ　Ｌ　、−Ｅ３、
３２８８γ、＝１３ｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８δ１−Ｉお
よびヨウドおよびブロモの二量体が記載されている。

ＬＬ−Ｅ３３２８８γｌ−Ｉ＋）リフェニルホスフィン
上 ０°Ｃ２ン メタノール　　　ＬＬ−Ｅ３３２８８ε＋Ｉ本発明は、
また、次の反応式によって調製できるＬＬ−Ｅ３３２８
８δ、−ｒのデチオメチル誘導体に関する。

ＬＬ−Ｅ３３２８８δ、−Ｉ＋　トリフェニルホスフィ
ン０℃ さらに、同一の反応を使用してＬＬ−Ｅ３３２８８δ、
−Ｂｒからデチオメチルδ１−Ｂｒを調製することがで
きる。

上の反応の概要に従い、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ１−Ｉ　
１　をジクロロメタン中に溶解し、氷浴中で冷却し、ジ
クロロメタン中のトリフェニルホスフィンで処理すると
、デチオメチルγ、−Ｉ又　が得られ、これを分離技術
からのカラムを使用する、逆相、調製用高性能液体クロ
マトグラフィーにより精製し、メタノール中に溶解し、
トリフェニルホスフィンで、わずかに加温しながら、処
理してＬＬ−Ｅ３３２８８ε−■を生成する。

上の順序を使用するＬ　Ｌ　−Ｅ　３３２８８γ１−Ｂ
　ｒの反応は、デチオメチルγ、−Ｂｒを生成し、次い
でＬ　Ｌ　−Ｅ　３３２８８　ε−Ｂ　ｒを生成する。

同様に、同様な順序を使用してデチオメチルδ１−Ｂｒ
をＬＬ−Ｅ３３２８８ＥＩ　　Ｂｒに転化することかで
きる。

一３９＝ デチオメチルγビＩ デチオメチルγ１− デチオメチルδ１− （Ｘ＝　ＩＸＲ＝ＣＨ２ＣＨ３） Ｂ　ｒ　　（Ｘ＝Ｂ　ｒＸ　Ｒ＝ＣＨ２ＣＨ３）Ｉ　　
　（Ｘ＝Ｉ、Ｒ＝ＣＨ３） 一１２６’６” デチオメチルγ、−１の物理化学的特性は、次の通りで
ある： ａ）元素分析：Ｃ，４６，４６；Ｈ，５，８０。

Ｎ、３．０１；Ｉ、９．１０およびＳ、　５．７．４、
ｂ）分子式：　Ｃ１０８１（１１２Ｎ　６ｏ　４２　Ｉ
　２Ｓ　６、Ｃ）分子量：　２６０８．４．（ＦＡＢＭ
、Ｓ）　、および ｄ）第３図に示すプロトン磁気共鳴スペクトル（３００
ＭＨｚ、ＣＤＣＩ　３）。

デチオメチルγ１−■の生体外抗菌活性を、標準の寒天
希釈法によって、ダラム陽性およびダラム陰性のバクテ
リアに対して決定した。２倍で減少する濃度の抗生物質
を含有するムエラーーヒントン寒天を、ペトリ皿中に注
いた。寒天表面を１〜５ＸｌＯ’のコロニー形成単位で
スティーアス増殖装置によって接種した。３５°Ｃにお
いて約１８時間後ハタテリア株の増殖を阻害するデチオ
イチルγ、−Ｉの最低濃度を、その株に対する最小阻害
濃度（ＭＩＣ）として記録した。結果を表Ｖに記載する
。

＝４２− 一４３＝ 寸　で　で　（ト）　寸　Ｎ　寸　寸　寸　寸　フシ へ 山　　の ■　　　　　　　ω　　（ト）　　　ｌ　　　（ト）　
　ω　　ω　　　ｌ−一の一一、−１（Ｎ−旧ｌＯ師 ■ Ｃｆ＞　　　　　（ト）Ｃｏ（Ｎ −Ｉ　（Ｎ　０のマ寸（イ）ｃｑ　−ｕｔ（イ）＋Ｎ　
ｃｒＩＣＮ　ｃｓ　ｃｑ　ｗ　−＝　ｃｓ■のｌ　Ｌｌ
”）　ｌ　ｌ　ｌ　ｌ　ｌ囚０１１へへへＣ’ｊ　ＣＮ
　ＣＮ（イ）−ＮでのＣｏ　　ＣＸ）ωωω■　　■■ ＯＯＱ ω　　ω　　ω　　ω　　ω　　ω　　（イ）　　ω　
　の　　ω　　（ト）ある付の生体内試験系およびプロ
トコル（ｐｒｏＬｏｃｏｌｓ）は、ナショナル・キャン
ザー・インスチチュート（Ｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｃａｎ
ｃｅｒ　　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）によって、試験化合物
について、抗新生物剤としての適当性を決定するために
開発された。これらは［癌の化学的治療の報告（Ｃａｎ
ｃｅｒ　　ＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙＲｅｐｏｒｔｓ）
　Ｊ　、部１１１．　Ｖｏ１）　３、Ｎｏ。

２（１９７２）、ゲラン（Ｇ　ｅｒａｎ）ら、に報告さ
れた。これらのプロトコルは標準化されたスクリーニン
グ試験を確立し、この試験は、一般に、抗腫瘍剤につい
て試験する分野において用いられている。これらの系の
うちで、リンパ性白血病Ｐ３８８はとくに本発明におい
て意味がある。この新生物は、マウスにおける移植可能
な腫瘍として試験するために利用される。対照（Ｃ）動
物をこえる処置した（Ｔ）動物の平均生存時間の増加百
分率によって、このプロトフルにおいて示される有意の
抗腫瘍活性は、ヒｉ〜の白血病および固体の腫瘍におい
て同様な結果を示す。

リンパ性白血病Ｐ３８８の試験 使用した動物は、Ｂ’ＤＰＩマウス、すべて１つの性、
体重の最小１７ｇおよびずへて３ｇの体重の範囲内、で
あった。試験群につき５匹または６匹のマウスか存在し
た。腫瘍の移植は、リンパ性白血病Ｐ３８８の１０６の
細胞を含有する稀薄な腹水の０．．５ｍｌの腹腔内注射
によって実施した。

試験化合物は、示す投与量において、第Ｌ　５および９
日（腫瘍の移植に関して）に通常の生理的食塩水中の０
．２％のクルセル（Ｋｌｕｃｅｌ）中のＱ、５ｍｌの体
積で腹腔的投与した。マウスを体重測定し、および生存
するマウスを３０日間正規の基準で記録した。メジアン
生存時間および処置（Ｔ）／対照（Ｃ，）動物について
の生存時間の比を計算した。ＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｉ
について陽性の対照化合物は、．４−ジヒドロキシ−５
゜８−ヒス［［、、（２−ヒドロキンエチルアミノ）エ
チル］アミノ］アントラキノン、二塩酸塩（米国特許第
４，１９７，２４９号）であった。デチオメチルγ、−
Ｉについて陽性の対照化合物は、Ｉ、４−ヒス［２−（
２−ヒドロキンエチルアミノ）エチルアミノ］−５，８
−ジヒドロキシアン１−ラキノンニ塩酸塩、レーデルレ
・ラボラ）・リーズ（Ｌ　ｅｄｅｒｌｅ　　Ｌ　ａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ）　、ニューヨーク、パールリバー（
”Ｎｏｂａｎｔｒｏｎ”　）であった。対照は、示す投
与量において、第．５および９日に０．２％のクルセル
（Ｋ　１ｕｃｅｌ）中の０．５ｍｌの体積で腹腔内注射
として投与した。結果を表ＶＩＩに記載する。

Ｔ／Ｃｘ１００（％）か１２５またはそれより大きいと
き、試験した化合物は有意の抗腫瘍活性を有すると考え
た。

本発明を次の実施例によりさらに説明する。これらの実
施例は本発明を限定することを意図していない。

実施例１ 接種物の調製 一次接種物を成長するために使用する典を的な培地は、
次の処方Ｉａに従って調製した：デキストリン　　　　
　　　　　２．４％グルコース　　　　　　　　　　０
．５％酵母エキス　　　　　　　　　０．５％トリプ１
−ン０．５％ 牛肉エキス　　　　　　　　　０．３％炭酸力ルンウム
　　　　　　　０．４％消泡剤　　　　　　　　　　　
０，３％水　　　　　　　　　　　　」００％とする量
この培地を滅菌し、そして１００ｍ１の部分をフラスコ
内で培養物ＮＲＲＬ　　１８１４９の菌糸体て接種する
。この培地を回転振盪器上に配置し、そして３２°Ｃに
おいて激しく撹拌した。次いで、−次接種物を使用して
、び内の上の無菌培地の５ｌ− １Ｏリットルを接種する。この培地を３２°Ｃで４８時
間撹拌して、二次接種物を得た。次いで、この二次接種
物を使用して、槽内の上の無菌培地の３００リツトルを
接種し、これを３２°Ｃにおいて４８時間２２０ｒｐｍ
で駆動される羽根車および２００リットル／分の無菌の
空気流によって撹拌しなからインキュベーションして、
三次接種物を得ｌこ。

実施例２ 槽発酵 発酵培地を、次の処方に従って調製したニスクロース　
　　　　　　　　　２．０％硫酸第二鉄七水和物　　　
　　０．０１％硫酸マグネシウム七水和物　　０．０２
％ペプトン　　　　　　　　　　０．５％糖蜜　　　　
　　　　　　　　０．５％ヨウ化カリウム＊　　　　　
　　０．０５％炭酸カルシウム　　　　　　　０．５％
消泡剤　　　　　　　　　　　０．３％水　　　　　　
　　　　　　ｉｏｏ％とする量＊臭化カリウムを置換す
ると、ブロモ誘導体か得られるであろう。

上の培地の２７００リットルの部分を滅菌し、次いで実
施例１に記載するように調製した三次接種物の３００リ
ットルを接種する。１リツトルのマッシュにつき６．５
リットル／分の無菌の空気の速度で通気し、そして撹拌
を１２０　ｒｐｍで駆動する羽根車によって実施する。

温度を３０°Ｃに維持し、そして発酵を約１２５時間後
に停止し、このときマツシュを収穫する。

実施例３ Ｌ　Ｉ−−Ｅ　３３２８８ε−■の単離実施例２に記載
するようにして実施した発酵からのマツシュの合計２４
００リツ１〜ルを、等体積の酢酸エチルとともに１時間
撹拌した。酢酸エチル相を分離し、約２００リットルに
減圧下に蒸発させ、そしてＩＮ水酸化すトリウムでｐＨ
６〜７に調節した。酢酸エチル相企分離し、３０〜４０
リットルに濃縮し、次いて３０リンドルの水で希釈して
乳化を容易にし、撹拌し、次いで沈降させると、３相か
形成した。水性（底の）相を分離し、そして酢酸エチル
で抽出した。この抽出液を透明な（上の）溶媒相と一緒
にし、そして約６リツトルに濃縮した。

油状懸濁液の６リツトルを１リツトルの部分に分割し、
それらの各々を油に濃縮し、そしてヘキサンとメタノー
ルとの間の分配によって脱脂する。

メタノール相を油の段階に蒸発させ、次いで一緒にした
。この油をジクロロメタン中で再構成し、３０．５ｃｍ
（１２インチ）の床のカラム中の２ｋｇのシリカゲル上
に供給し、４リッ１−ルのジクロロメタンで展開し、次
いでジクロロメタン中の２．５％のメタノールおよびジ
クロロメタン中の５％のメタノールの各々の４リツトル
で展開した。

１リツトルの分画を２０分毎に集めた。活性は生化学的
誘導アッセイにより分画９〜１４において見出された。

これらの分画を一緒にし、そして蒸発させると、２４ｇ
の粗製の暗褐色の固体が得られ　ｌこ　。

この固体を約６ｇの４つの部分に分割した。各部分を１
．００　ｍ、Ｉのアセトニトリル中で３０形成物質撹拌
し、次いでろ過した。濾液を１５０ｍ１の０．２モルの
酢酸アンモニウム溶液で希釈し、そして再びろ過した。

この濾液をプレバック（Ｐ　ｒｅｐａｋ）逆相カートリ
ッジを含有するウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）　Ｌ　／
　Ｃ５００器具上にポンピングした。前記カートリッジ
は前もってアセトニトリル、０．２モルの酢酸アンモニ
ウム溶液（４５＋５５）で平衡化されていた。このカラ
ムを７〜８リメトルの同一溶媒で展開した。溶離のプロ
セスは２５４ｎｍで監視した。第二リットルの溶離液は
ＬＬ−Ｅ３３２８８ε−■を含有した。この溶離液を十
分に蒸発させてアセトニトリルの大部分を除去した。残
りの水性懸濁液をその体積の半分の酢酸エチルで抽出し
た。酢酸エチルの抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥
し、１０〜２０ｍ、Ｉに濃縮し、そして７５ｍ１の激し
く撹拌したヘキサン中に滴下した。得られた沈殿を集め
、そして乾燥するど、］、６９４ｇｏ′）ＬＬ−Ｅ３３
２８８ε−■が得られた。

５５一 実施例４ ＬＬ−Ｅ３３２８８ε−■の精製 実施例３からのＬＬ−Ｅ３３２８８ε−■の１．６９ｇ
の部分を、プレパック逆相クロマトグラフィーに再びか
け、溶媒系のアセトニトリル二〇、２モルの酢酸アンモ
ニウム溶液（３７：６３）を使用した。対称ピークのコ
ア分画を取り、そして処理すると、９６０ｍｇの灰色固
体か得られた。

上の固体の８８０ｍｇの部分を、逆相クロマトグラフィ
ーにかけ、同−溶媒系を使用した。監視したプロフィル
の主要なピークを２つの部分に削った。前方の分画を処
理すると、１８６ｍｇの純粋なＬ　Ｌ　−Ｅ　３３２８
８ε−■が得られた。

実施例５ ε−■の調製 １００ｍｌのジクロロメタン中の］　、６７ｇのＬＬＥ
３３２８８ε−１の溶液を、５ｍｌのジクロロメタン中
の５００ｍｇのトリフェニルホスフィンの溶液で処理し
た。この混合物を２時間撹拌し、次いてろ過した。濾液
を蒸発乾固し、残留物をメタノール中に溶解し、そして
２６８ｍｇのトリフェニルホスフィンで加温しながら処
理して溶解した。

次いて、この反応混合物を１６時間室温において撹拌し
、そしてろ過した。濾液を蒸発乾固し、次いで６０　Ｘ
　３０　ｃｍ　［Ｌ　Ｈ−ｈａｒｍａｃｉａ）　］　カ
ラムのクロマ［・グラフィーにかけ、ヘキザン：ジクロ
ロメタン：メタノール（２：　１　：　１）で溶離した
。

Ｌ　Ｌ　−Ｅ　３３２８８ε−■を含有する分画を一緒
にすると３３６ｍｇの部分的に精製された生成物か得ら
れ、次いで同一カラムで再びクロマトグラフィーにかけ
た。ＬＬ−Ｅ３３２８８ε−■を含有する分画を、薄層
クロマトグラフィー（「ＴＬＣ」）で同定した。ＴＬＣ
板を、１０％のインプロパツールを含有する０、２モル
のリン酸水素二カリウムの緩衝液で飽和した酢酸エチル
中に入れた。次いで、板を紫外線でクエンチングして（
ｑｕｅｃｂｅｄ）問題の分画（分画１１〜１５）を同定
した。分画１１〜＋５（各々５ｍ１）を−緒にし、濃縮
乾固し、そして少量の酢酸エチル中に取った。これを過
剰量の撹拌したヘキサンに嫡々添加し、そして沈殿を集
めると、１１２ｍｇが得られた。次いで、１００ｍｇの
部分を調製様逆相クロマトグラフィーのカラムのクロマ
トグラフィーにかけ、アセトニトリル：０．２モルの酢
酸アンモニウム緩衝液（３７：６３）で溶離した。活性
な分画をカラム上のそれらの保持時間に基づいて同定し
た。ＬＬ−Ｅ３３２８８εの分画を一緒にし、活性成分
を酢酸エチル中に抽出し、そしてヘキサンで沈殿させる
と、２００ｍｇの純粋なＬＬ−Ｅ３３２８８ε−１が得
られた。生成物の同定は、前述のように自然の源から得
られた生成物と比較することによって確証した。

実施例６ ε−Ｂｒの調製 ＬＬ−Ｅ３３２８８γ１−Ｂ「の一部を実施例５に記載
する手順に従って、ＬＬ−Ｅ３３２Ｂ８ε−Ｂｒを得た
。

実施例７ 一部の調製　　　　　　　　　　　　　　　　　□８ｍ
ｌのアセトニトリル中のｌ　ＯＯｍｇのＬ　Ｌ−Ｅ’３
３２８８γ、−１の溶液を、５９ｎｉｇの１．４−ジヂ
オスレイト−ルで処理した。この混合物を３時間撹拌し
、次いてろ過した。濾液を濃縮乾固し、少量のメタノー
ルを含有するジクロロメタン中に取り、そしてシリカゲ
ルのクロマトグラフィーにかけ、ジクロロメタン中の２
％、４％および５％のメタノールで溶離した。分画７．
８および９を−ｍにし、そして蒸発させた。残留物をヘ
キサン／酢酸エチルから沈殿さぜると、３’Ｏｍｇの純
粋なＬ　Ｌ　−Ｅ　３３２８８ε−Ｉか得られた。

実施例８ −Ｂｒの調製 ＬＬ＝Ｅ３３２８８γ、−Ｂｒの一部を実施例７に記載
する手順に従って、ＬＬ−Ｅ３３２８８ｉ−Ｂｒを得た
。

林！１廷 ヂチ゛オメチルγ、−Ｉの調製 ５０’ｍｌの゛ジクロロメタン中のＩｇのＬＬ−Ｅ３３
２８８γ、−■を水浴中で冷却し、そして２ｍｌのジク
ロロメタン中の２９３ｍｇのトリフェニルホスフィンで
処理した。氷浴の温度で２時間撹拌□した後、溶液を室
温に加温し、そして粒状デチオメチルγ１−■を集めた
。この生・酸物をＣ１８逆相支持体（２”’　５　ｐ　
）を充填した１Ｘ３５，６ｃｍ（１’４インチ）のセパ
レイションズ・テクノロジー（Ｓ　ｅｐａｒａｔｉｏｎ
ｓ　　Ｔ　ｅｃｈｎｏｔｏｇｙ）を使用する調製用ＨＰ
’Ｌ　Ｃによって精製し、溶媒系のアセトニトリル：０
，２モルの酢酸アンモニウム（４８：５２）を使用した
。デチオメチルγ、−Ｉを含有する分画を、薄層クロマ
トグラフィー（’ｒＴ　Ｌ　ＣＪ）で同定した。ＴＬＣ
板を、１０％の′イソプロパツールを含有する０、２モ
ルのリン酸水素二カリウムの緩衝液で飽和した酢酸エチ
ル中に入れた。次いで、板を紫外線によりクエンチング
して問題の分画（分画５および６）を同定した。分画５
および６を一緒にし、アセトニトリルを真空下に除去し
、得られる曇った溶液を水で洗浄し、乾燥し、小さい体
積に濃縮し、そして１００ｍ１のヘキサンに撹拌しなか
ら滴々添加した。沈殿を集め、そして乾燥すると、１６
８ｍｇのデチオメチルγ、−Ｉが得られた。

実施例ＩＯ デチオメチルγＩＩのＬｔ−Ｅ３３２８８ε−■への転
化 １０ｍ１のメタノール中の４２ｍｇのデチオメチルγ、
−Ｉの溶液に、１０ｍｇのトリフェニルホスフィンを添
加した。この混合物を加温し、次いで室温において１６
時間撹拌した。１２ｍｇの部分のトリフェニルホスフィ
ンを添加し、次いで４０〜５０°Ｃに１時間加温した。

ワットマン（Ｗａｈｔｏｍａｎ）■０００μのシリカゲ
ル板を使用する調製用ＴＬＣによって、得られるＬ　Ｌ
　−Ｅ　３３２８８ε−■を精製した。ＬＬ−Ｅ３３２
８８ε−■を酢酸エチルで抽出すると、４ｍｇの純粋な
生成物が得られた。

本発明の主な態様および特徴は、次の通りである。

１）次の特性： ａ）分子式：　Ｃ６４Ｈ７１Ｎ　３０２１１Ｓ２、ｂ）
元素分析：Ｃ，４８，３７ｉＨ，５，７２；Ｎ、３．０
４　；　Ｓ、　４．９８およびＬ９．２８、Ｃ）旋光度
：［α］２５−１４±１’　　（Ｃ１．１’１５％、メ
タノール）、 ｄ）光学密度：０．２３、メタノール中ＩＯμｇ／ｍ１
）２３０　ｎｍ。

ｅ）図面の第１図に示すプロトン磁気共鳴スペクトル、
および ｆ）図面の第２図に示す炭素−１３磁気共鳴スペクトル
、 を有する化合物Ｌ　Ｌ　−Ｅ　３３２８８ε−Ｉ。

２、工程： ａ）有機体ミクロモノスポラ・エキノスポラｓｓｐ　　
カリケンシス（Ｍ　ｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　　ｅ
ｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ　　ｓｓｐ　　ｃａｌｉｃｈｅｎ
ｓｉｓ）　　　Ｎ　ＲＲＬ　　　ｌ　　５８３９または
その抗生物質産生突然変異体ＮＲＲＬ１５９７５または
ＮＲＲＬ　　１８１４９を、炭素、窒素、ヨウ素および
無機塩類の同化可能な源を含有する液状培地中で、実質
的な抗生物質活性が前記培地に付与されるまで好気的に
発酵させ、次いでそれから抗生物質を回収し、 ｂ）ＬＬ−Ｅ３３２８８γ、−１をトリフェニルホスフ
ィンまたはスルフヒドリル含有試薬と溶媒中で反応させ
、次いでＬ　Ｌ　−５３３２８８ε−１をクロマトグラ
フィーにより分離し、そして精製し、 ｃ）　　Ｌ　Ｌ　７．Ｅ　３３２８８γ＋１をトリ７エ
二ルホスフインとジクロロメタン中で水浴の温度におい
て反応させ、室温に加温し、そのようにして生成したデ
チオメチルγ＋−１を集め、前記デチオメヂルγ、−Ｉ
をトリフェニルホスフィンとメタノール中でわずかに加
温しながら反応させ、そしてそのようにして生成したＬ
Ｌ−Ｅ３３２８８ε−■を集めるか、あるいは ｄ）　　Ｌ　Ｌ　−Ｅ　３３２８８δ＋１をトリフェニ
ルホスフィンとジクロロメタン中で水浴の温度において
反応させ、室温に加温し、そのようにして生成したデチ
オメチルδ、−Ｉを集め、前記デチオメチルδ＋−Ｉを
トリフェニルホスフィンとメタノール中でわずかに加温
しながら反応させ、そしてそのようにして生成したＬＬ
−Ｅ３３２８８ε−■を集める、 からなる上記第１項記載のＬＬ−Ｅ３３２８８ε−■を
生産する方法。

３、有機体はミクロモノスポラ・エキノスポラｓｓｐ　
　カリケンシス（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　　ｅ
ｃｈｉｎ。

５ｐｏｒａ　　ｓｓｐ　　ｃａｌｉｃｈｅｎｓｉｓ）　
　Ｎ　ＲＲＬ　　ｌ　８１４９であり、そしてスルフヒ
ドリル含有試薬はβ−メルカプト−エタン−ル、還元し
たグルタチオンまたは１．４−ジチオスレイトールから
成る群より選択され、そして溶媒はジクロロメタン、ア
セトニトリル、酢酸エチル、メタノール、エタノールま
たはクロロホルムから成る群より選択される上記第２項
記載の方法。

′　　４、工程： ａ）有機体ミクロモノスポラ・エキノスポラｓｓｐ　　
カリケンシス（Ｍ　ｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　　ｅ
ｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ　　ｓｓｐ　　ｃａｌｉｃｈｅｎ
ｓｉｓ）　　Ｎ　ＲＲＬ　　ｌ　５８３９またはその抗
生物質産生突然変異体Ｎ　ＲＲＬ１５９７５またはＮＲ
ＲＬ　　１８１４９を、炭素、窒素、臭素および無機塩
類の同化可能な源を含有する液状培地中で、実質的な抗
生物質活性が前記培地に付与されるまで好気的に発酵さ
せ、次いでそれから抗生物質を回収し、 １））　　Ｉ−Ｌ　−Ｅ　３３２８８γ、−Ｂｒをトリ
フェニルホスフィンまたはスルフヒドリル含有試薬と溶
媒中で反応させ、次いでｒ−ｒ−−Ｅ　３３２８８ε−
Ｂｒをクロマトグラフィーにより分離し、そして精製し
、 ｃ）　　ＬＬ−Ｅ３３２８８γ、−Ｂｒをトリフェニル
ホスフィンとジクロロメタン中で氷浴の温度において反
応させ、室温に加温し、そのようにして生成したデチオ
メチルγ、−Ｂｒを集め、前記デチオメチルγ、−Ｂｒ
をトリフェニルホスフィンとメタノール中でわずかに加
温しなから反応させ、そしてそのようにして生成したＬ
Ｌ−Ｅ３３２８８ε−Ｂｒを集めるか、あるいは ｄ）　　Ｌ　Ｌ　−Ｅ　３３２８８δ、−Ｂｒをトリフ
ェニルホスフィンとジクロロメタン中で水浴の温度にお
いて反応させ、室温に加温し、そのようにして生成した
デチオメチルδ、−Ｂｒを集め、前記デチオメチルδ、
−Ｂｒをトリフェニルホスフィンとメタノール中でわず
かに加温しなから反応させ、そしてそのようにして生成
したＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｂｒを集める、 からなる上記第１項記載のｒ−Ｌ　−Ｅ　３３２８８ε
−Ｂｒを生産する方法。

５、有機体はミクロモノスポラ・エキノスポラｓｓｐ　
　カリケンシス（Ｍ　ｉｃｒｏｍｏｎ、ｏｓｐｏｒａ　
、ｅｃｈｉｎ。

５ｐｏｒａ　　ｓｓｐ　　ｃａｌｉｃｈｅｎｓｉｓ）　
　Ｎ　ＲＲＬ　　ｌ　８１４９であり、そしてスルフヒ
ドリル含有試薬はβ−メルカプト−エタノール、還元し
たグルタチオンまたは１．４−ジチオスレイトールから
成る群より選択され、そして溶媒はジクロロメタン、ア
セトニトリル、酢酸エチル、メタノール、エタノールま
たはクロロホルムから成る群より選択される上記第４項
記載の方法。

６、上記第４項記載の方法によって生産された化合物Ｌ
Ｌ−Ｅ３３２８８Ｅ−Ｂｒ０ ７、特性： ａ）分子式：Ｃ１０８Ｈ１４２Ｎ６０４２Ｉ２Ｓ５、 ｂ）元素分析：Ｃ，４６，４６；Ｈ，５，８０；Ｎ、３
．０１　、Ｌ　９．１０およびＳ、５．７４、Ｃ）分刊
１２６０８．４　（ＦＡＢＭＳ）　、および ｄ）図面の第３図に示すプロ１−ン磁気共鳴スペクトル
、 を有する化合物デチオメチルγ１−Ｉ０８、ＬＬ−Ｅ３
３２８８γ、−Ｉをトリフェニルホスフィンとジクロロ
メタン中で水浴温度において反応させたとき生産される
化合物デチオメチルγ、−１゜ ９、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ、−Ｂｒをトリフェニルホス
フィンとジクロロメタン中で水浴温度において反応させ
たとき生産される化合物デチオメチルγ１　　Ｂｒ０ ＩＯｌＬＬ−Ｅ３３２８８δ、−ｒをトリフェニルホス
フィンとジクロロメタン中で水浴温度において反応させ
たとき生産される化合物デチオメチルδ、−Ｉ。

１１、ＬＬ−Ｅ３３２８８δ、−Ｂｒをトリフェニルホ
スフィンとジクロロメタン中で水浴温度において反応さ
せたとき生産される化合物デチオメ゛チルδ、−Ｂｒ。

１２、ＬＬ　　Ｅ３３２８８α＋−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３
２８８σ＋−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α２−Ｂｒ５ＬＬ
　　Ｅ３３２８８ｃｒ２１．ＬＬ−Ｅ３３２８　Ｆ３’
ａ３−’Ｂｒ、　ＬＬ　−、Ｅ　３３２８８　ａ３−　
Ｉ、ＬＬ’−Ｅ３３２８Ｂ、ａ７−Ｂｒ、Ｌ、Ｌ−Ｅ３
３２８８β、−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β、−Ｉ、Ｌ
ＬＬＥ、　３．：３２８８β２−ＢｒＸＬＬ　　Ｅ３３
２８８β２−Ｉ’、Ｌ’Ｌ−Ｅ３３２８８δ、１）ＢＢ
Ｍ−１６７５、　ＦＲ−！’１００４０５、　ＦＲ−９
００４０６、ＰＤ　　　Ｉ１）’４７５９、　ＰＤ　　
　１１５０２８、　ＣＬ−１５’７７ＡＳ’ＣＬ−１５
７７８，ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７ＥおよびＣ
Ｌ−１７２４から成る群より選択される化合物の還元的
に芳香族化された誘導体を生産する方法であって、前記
抗生物質の１種を１−リフェニルホスフィンまたはスル
フヒドリル含有試薬と溶媒中で反応させ、次いでクロマ
トグラフィーにより分離し、そして精製することからな
る方法。

■・３、スルフヒドリル含有試薬はβ−メルカプト−エ
タノール、還元したグルタチオンまたはｌ。

４−ジチオスレイトールから成る群より選択され、そし
て溶媒はジクロロメタン、アセトニトリル、酢酸エチル
、メタノール、エタノールまたはクロロホルムから成る
群より選択される上記第１２項記載の方法。

１４、上記第１項記載のＴ−ｒ−−Ｅ’３３２’８８ε
−■または上記第６項記載のＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｂ
ｒを温血動物に投与することからなる、温血動物におけ
るバクテリアの感染を処置する方法。

１５、上記第１項記載のＬ　Ｌ−Ｅ　３３２８８ε−■
または上記第６項記載のｒ−Ｌ　−Ｅ　３３２　’８８
ε−Ｂｒを温血動物に投与することからなる、温血動物
における腫瘍の増殖を抑制する方法。

１６、上記第１項記載のＬＬ−Ｅ３３２８８ε−■また
は上記第６項記載のＬ　Ｌ　−Ｅ　３３２　’８８ε−
Ｂｒを温血動物に投与することからなる、温血動物にお
ける□白血病を後退させる方法。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｌ　Ｌ　−Ｅ　３３２８８ε−Ｉのプロｉ・
ン磁気共鳴スペク１−ルである。 第２図は、Ｌ’Ｌ　−Ｅ　３３２８’８ε−■の炭素−
１３磁気共鳴スペクトルである。 第３図は、Ｌ　Ｌ　−Ｅ　３３２８８−デチオメチルγ
１−■のプロトン磁気共鳴スペクトルである。 ＝７１−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）次の特性： ａ）分子式：Ｃ＿５＿４Ｈ＿７＿４Ｎ＿３Ｏ＿２＿１Ｉ
   Ｓ＿２、 ｂ）元素分析：Ｃ、４８．３７；Ｈ、５．７２；Ｎ、３
   ．０４；Ｓ、４．９８ およびＩ、９．２８、 ｃ）旋光度：［α］＾２＾５＿Ｄ＝−１４±１°（Ｃ、
   １．１１５％、メタノール）、 ｄ）光学密度：０．２３、メタノール中１０μｇ／ｍｌ
   、２３０ｎｍ、 ｅ）図面の第１図に示すプロトン磁気共鳴スペクトル、
   および ｆ）図面の第２図に示す炭素−１３磁気共鳴スペクトル
   、 を有することを特徴とする化合物ＬＬ−Ｅ３３２ａ）有
   機体ミクロモノスポラ・エキノスポラｓｓｐカリケンシ
   ス（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｅｃｈｉｎｏｓｐｏ
   ｒａｓｓｐｃａｌｉｃｈｅｎｓｉｓ）ＮＲＲＬ１５８３
   ９またはその抗生物質産生突然変異体ＮＲＲＬ１５９７
   ５またはＮＲＲＬ１８１４９を、炭素、窒素、ヨウ素お
   よび無機塩類の同化可能な源を含有する液状培地中で、
   実質的な抗生物質活性が前記培地に付与されるまで好気
   的に発酵させ、次いでそれから抗生物質を回収し、 ｂ）ＬＬ−Ｅ３３２８８γ＿１−Ｉをトリフェニルホス
   フィンまたはスルフヒドリル含有試薬と溶媒中で反応さ
   せ、次いでＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｉをクロマトグラフ
   ィーにより分離し、そして精製し、 ｃ）ＬＬ−Ｅ３３２８８γ＿１−Ｉをトリフエニルホス
   フィンとジクロロメタン中で氷浴の温度において反応さ
   せ、室温に加温し、そのようにして生成したデチオメチ
   ルγ＿１−Ｉを集め、前記デチオメチルγ＿１−Ｉをト
   リフェニルホスフィンとメタノール中でわずかに加温し
   ながら反応させ、そしてそのようにして生成したＬＬ−
   Ｅ３３２８８ε−Ｉを集めるか、あるいは ｄ）ＬＬ−Ｅ３３２８８δ＿１−Ｉをトリフェニルホス
   フィンとジクロロメタン中で氷浴の温度において反応さ
   せ、室温に加温し、そのようにして生成したデチオメチ
   ルδ＿１−Ｉを集め、前記デチオメチルδ＿１−Ｉをト
   リフェニルホスフィンとメタノール中でわずかに加温し
   ながら反応させ、そしてそのようにして生成したＬＬ−
   Ｅ３３２８８ε−Ｉを集める、 からなることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
   ＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｉを生産する方法。 ３、工程： ａ）有機体ミクロモノスポラ・エキノスポラｓｓｐカリ
   ケンシス（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｅｃｈｉｎｏ
   ｓｐｏｒａｓｓｐｃａｌｉｃｈｅｎｓｉｓ）ＮＲＲＬ１
   ５８３９またはその抗生物質産生突然変異体ＮＲＲＬ１
   ５９７５またはＮＲＲＬ１８１４９を、炭素、窒素、臭
   素および無機塩類の同化可能な源を含有する液状培地中
   で、実質的な抗生物質活性が前記培地に付与されるまで
   好気的に発酵させ、次いでそれから抗生物質を回収し、
   ｂ）ＬＬ−Ｅ３３２８８γ＿１−Ｂｒをトリフェニルホ
   スフィンまたはスルフヒドリル含有試薬と溶媒中で反応
   させ、次いでＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｂｒをクロマトグ
   ラフィーにより分離し、そして精製し、 ｃ）ＬＬ−Ｅ３３２８８γ＿１−Ｂｒをトリフェニルホ
   スフィンとジクロロメタン中で氷浴の温度において反応
   させ、室温に加温し、そのようにして生成したデチオメ
   チルγ＿１−Ｂｒを集め、前記デチオメチルγ＿１−Ｂ
   ｒをトリフェニルホスフィンとメタノール中でわずかに
   加温しながら反応させ、そしてそのようにして生成した
   ＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｂｒを集めるか、あるいは ｄ）ＬＬ−Ｅ３３２８８δ＿１−Ｂｒをトリフェニルホ
   スフィンとジクロロメタン中で氷浴の温度において反応
   させ、室温に加温し、そのようにして生成したデチオメ
   チルδ＿１−Ｂｒを集め、前記デチオメチルδ＿１−Ｂ
   ｒをトリフェニルホスフィンとメタノール中でわずかに
   加温しながら反応させ、そしてそのようにして生成した
   ＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｂｒを集める、 からなることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
   ＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｂｒを生産する方法。 ４、特性： ａ）分子式：Ｃ＿１＿０＿８Ｈ＿１＿４＿２Ｎ＿６Ｏ＿
   ４＿２Ｉ＿２Ｓ＿５、ｂ）元素分析：Ｃ、４６．４６；
   Ｈ、５．８０；Ｎ、３．０１；Ｉ、９．１０およびＳ、
   ５．７４、ｃ）分子量：２６０８．４（ＦＡＢＭＳ）、
   および ｄ）図面の第３図に示すプロトン磁気共鳴スペクトル、 を有することを特徴とする化合物デチオメチルγ＿１−
   Ｉ。 ５、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ＿１−Ｉをトリフェニルホス
   フィンとジクロロメタン中で氷浴温度において反応させ
   たとき生産されることを特徴とする化合物デチオメチル
   γ＿１−Ｉ。 ６、ＬＬ−Ｅ３３２８８γ＿１−Ｂｒをトリフェニルホ
   スフィンとジクロロメタン中で氷浴温度において反応さ
   せたとき生産されることを特徴とする化合物デチオメチ
   ルγ＿１−Ｂｒ。 ７、ＬＬ−Ｅ３３２８８δ＿１−Ｉをトリフェニルホス
   フィンとジクロロメタン中で氷浴温度において反応させ
   たとき生産されることを特徴とする化合物デチオメチル
   δ＿１−Ｉ。 ８、ＬＬ−Ｅ３３２８８δ＿１−Ｂｒをトリフェニルホ
   スフィンとジクロロメタン中で氷浴温度において反応さ
   せたとき生産されることを特徴とする化合物デチオメチ
   ルδ＿１−Ｂｒ。 ９、ＬＬ−Ｅ３３２８８α＿１−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２
   ８８α＿１−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α＿２−Ｂｒ、Ｌ
   Ｌ−Ｅ３３２８８α＿２−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α＿
   ３−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８α＿３−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３
   ３２８８ａ＿４−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β＿１−Ｂ
   ｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β＿１−Ｉ、ＬＬ−Ｅ３３２８
   ８β＿２−Ｂｒ、ＬＬ−Ｅ３３２８８β＿２−Ｉ、ＬＬ
   −Ｅ３３２８８δ＿１−Ｉ、ＢＢＭ−１６７５、ＦＲ−
   ９００４０５、ＦＲ−９００４０６、ＰＤ１１４７５９
   、ＰＤ１１５０２８、ＣＬ−１５７７Ａ、ＣＬ−１５７
   ７Ｂ、ＣＬ−１５７７Ｄ、ＣＬ−１５７７ＥおよびＣＬ
   −１７２４から成る群より選択される化合物の還元的に
   芳香族化された誘導体を生産する方法であって、前記抗
   生物質の１種をトリフェニルホスフィンまたはスルフヒ
   ドリル含有試薬と溶媒中で反応させ、次いでクロマトグ
   ラフィーにより分離し、そして精製することからなるこ
   とを特徴とする方法。 １０、特許請求の範囲第１項記載のＬＬ−Ｅ３３２８８
   ε−Ｉまたは特許請求の範囲第３項記載の方法によって
   生産されたＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｂｒを温血動物に投
   与することからなることを特徴とする温血動物における
   バクテリアの感染を処置する方法。 １１、特許請求の範囲第１項記載のＬＬ−Ｅ３３２８８
   ε−Ｉまたは特許請求の範囲第３項記載の方法によって
   生産されたＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｂｒを温血動物に投
   与することからなることを特徴とする温血動物における
   腫瘍の増殖を抑制する方法。 １２、特許請求の範囲第１項記載のＬＬ−Ｅ３３２８８
   ε−Ｉまたは特許請求の範囲第３項記載の方法によって
   生産されたＬＬ−Ｅ３３２８８ε−Ｂｒを温血動物に投
   与することからなることを特徴とする温血動物における
   白血病を後退させる方法。