JPH0516438B2

JPH0516438B2 -

Info

Publication number: JPH0516438B2
Application number: JP60076777A
Authority: JP
Inventors: Akihiro Yoshimoto; Osamu Shiromichi; Yoshio Watanabe; Tomoyuki Ishikura; Tsutomu Sawa; Tomio Takeuchi; Hamao Umezawa
Original assignee: MERUSHAN KK
Current assignee: MERUSHAN KK
Priority date: 1985-04-12
Filing date: 1985-04-12
Publication date: 1993-03-04
Also published as: DE3665304D1; US4734493A; EP0203329B1; EP0203329A1; JPS61236792A

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕本発明は、ストレプトミセス（Streptomyces）
属に属する微生物が生産する新規なアトラサイク
リン抗生物質に関する。〔従来の技術〕アントラサイクリン系抗生物質としては、従来
から防線菌の培養液から得られるダウノマイシン
（米国特許第3616242号明細書参照）及びアドリア
マイシン（米国特許第3590028号明細書参照）が
知られており、これらの化合物は実験腫瘍に対し
て広い抗癌スペクトルを有し、癌化学療法剤とし
て癌床的にも広く利用されている。しかし、ダウ
ノマイシン及びアドリアマイシンはかなり強力な
抗癌作用を示すが決して満足できるものではな
く、発酵法、半合成法、微生物変換法等各種の手
段により種々の類縁化合物を創製する試みが行わ
れており、更にいくつかのアントラサイクリン抗
生物質が提案されている〔例えば、特公昭51−
34915号公報（アクラシノマイシンＡ及びＢ）、
T.OKI et al，The Jornal of Antibiotics，
Vol.33、第1331〜1340頁、F.Areamone，Topics
in Antibiotic Chemistry，Vo12、第102〜279
頁、ELLIS HORWOOD LIMITED発行、特開
昭57−56494号公報（４−デメトキシ−11−デオ
キシダウノマイシン等）、特開昭56−15299号（ロ
ドマイシン群抗生物質）等参照〕。〔発明が解決しようとする問題点〕抗腫瘍剤としてのアントラサイクリン抗生物質
は、上述の如く、各種の類縁化合物が提案され、
既に一部は臨床的に広く利用されているものもあ
り、また、臨床試験に供されているものもある。しかし、毒性、抗癌作用双方について共に満足
できるものはない。しかも、抗腫瘍剤は、試験管
内試験、動物試験の結果が必ずしも直接人間の抗
癌作用として反映できないため、多角的な研究が
要求される。そのため、抗腫瘍剤として一応の評
価がされているアントラサイクリン抗生物質類に
ついて、更に新たな部類に属する化合物の提案が
望まれている。〔問題点を解決するための手段〕本発明者等は、より有用なアントラサイクリン
抗生物質又はその合成中間体となり得る新規化合
物を提案すべく研究を重ねた結果、ロドマイシン
生産菌の一株であるストレプトミセス
（Streptomyces violaceus）A262株の変異株が、
新規物質を含むアントラサイクリン抗生物質群を
生産することを見出し、本発明を完成した。本発明により提供される新規アントラサイクリ
ン抗生物質は、一般式式中、R₁が水素原子を表わすとき、R₂は式、

【式】で示される置換基を表わし、 R₁が式

【式】で示される置換基を表わすとき、R₂は水酸基を表わし、 R₁が式で示される置換基を表わすとき、R₂は式で示される置換基を表わす、で示される化合物で
ある。これらの化合物はβ−イソロドマイシノンアン
トラサイクリノン骨格を有する従来の文献に未載
の新規な抗生物質である。本発明者は、一般式（）で示される化合物の
うち、それぞれ式で示される抗生物質をオベルマイシンＡ
（obelmycin Ａ）、式で示される抗生物質をオベルマイシンＤ
（obelmycin Ｄ）、式で示される抗生物質をオベルマイシンＥ
（obelmycin Ｅ）、式で示される抗生物質をオベルマイシンＦ
（obelmycin Ｆ）および式で示される抗生物質をオベルマイシンＧ
（obelmycin Ｇ）と命名した。さらに、本発明の
化合物と同時に発酵生産される式で示される抗生物質をオベルマイシンＢ
（obelmycin Ｂ）、式で示される抗生物質をオベルマイシンＣ
（obelmycin Ｃ）と命名し、以降、本明細書にお
いて各化合物を上記名称を用いて説明する。上述の本発明の化合物は、それぞれ培養白血病
細胞L1210に対して高い増殖阻止作用を有し、そ
れ自体制癌剤として有用である。マウス白血病L1210培養細胞に対する増殖及び
核酸合成阻害作用例えば20％仔牛血清を含むRPM11640培地（ロ
ーズウエルバーグ研究所）へL1210細胞を５×
10⁴ケ／ml接種し、同様に本発明の物質を0.02〜
0.25μｇ／mlの濃度で添加し、37℃にて炭酸ガス
培養器中で培養し対照区に対する50％増殖阻害濃
度を求めた。更に上記のL1210培養細胞を10％仔
牛血清を含むRPM11640培地へ５×10⁵ケ／mlと
なる様に懸濁し、37℃にて炭酸ガス培養器中で１
〜２時間培養を行つたのち、本物質を種々濃度で
添加し、15分後にさらに¹⁴C−ウリジン
（0.05μCi／ml）または¹⁴C−チミジン（0.05μCi／
ml）を添加し、37℃にて60分間培養した。反応液
へ冷10％トリクロル酢酸を添加し、反応を中止す
ると同時に、酸不溶物を沈澱させ、冷５％トリク
ロル酢酸にてさらに２回洗滌したのち、ギ酸に溶
解し、放射活性を測定し、無添加対照区に対する
放射能の取込み率から50％取込み阻害濃度を求め
た。第１表に結果を示す。

【表】以上のアントラサイクリン抗生物質の製造は、
アクテイノミセイテス属に属するロドマイシン系
抗生物質及びその類縁化合物を生産する能力を有
する土壌分離菌株又は公知の菌株を、変異原とし
て例えば紫外線或いはＮ−メチル−N′−ニトロ
−−Ｎ−ニトロソグアニジン（NTG）を用いる
通常の変異処理により容易に単離される本発明の
生産物を生産する菌株を、適当な栄養源から成る
培地に培養することにより行なうことが出来る。
これらの生産菌株のうち具体的なものとしては、
当研保存中のβ−ロドマイシン類生産菌ストレプ
トミセスビオラセウス（Streptomyces
violaceus）A262菌株をNTGで変異処理し、得
られる変異株SE2−2385菌株を挙げることが出来
る。該菌株は昭和60年３月28日付で工業技術院微生
物工業技術研究所に微工研条寄第1004号
（FERM BP−1004）として寄託されている。以下にSE2−2385菌株の菌学的性状を示す。 (i) 形態良く分枝した基中菌糸より、螺旋状の気中菌糸
を形成し、輪生枝はみとめられない。成熟した胞
子鎖は10〜50ケの胞子の連鎖を認める。胞子の表
面はとげ状である。 (ii) 各種培地における生育状態色の記載について（）内に示す標準はH.D.
Tresner＆E.j.Backus著System of color wheels
for Strepromycete taxonomy（J.Appl.
Microbiol.11巻335〜338頁、1963年）を用い、補
足的に日本色彩研究所出版の「色の標準」も用い
た。 (iii) 次の各培地における生育状態（特にことわら
ないがぎり28℃培養）

【表】 (iii) 生理的性質 (1) 生育温度範囲：（イースト・麦芽・寒天培地
を使用、PH6.0で、20℃、28℃、30℃、37℃、
42℃の各温度で実験）20℃から37℃までの各温
度では生育がみとめられた。42℃では生育しな
い。 (2) ゼラチンの液化：陽性（グルコース・ペプト
ン・ゼラチン培地を使用し、20℃で培養） (3) スターチの加水分解：陽性（スターチ・無機
塩寒天培地） (4) スキム・ミルクの凝固、ペプトン化：始めは
すべて陰性、培養15日間過ぎる頃ペプトン化を
はじめる。 (5) メラニン様色素の生成：（トリプトン・イー
スト・ブロス、ペプトン・イースト・鉄・寒
天、及びチロシン寒天培地使用）いずれの培地
でも陽性。 (iv) 各種炭素源の利用性：（フリドハム・ゴドリ
ープ寒天培地上）１Ｌ−アラビノース陽性２Ｄ−キシロース陽性３Ｄ−グルコース陽性４Ｄ−フラクトース陽性５シユクロース陽性６イノシトール陽性７Ｌ−ラムノース陽性８ラフイノース陽性９Ｄ−マンニツト陽性本発明に関する生産菌株の培養は、放線菌の栄
養源として通常使用されそれ自体公知の培地組成
物中で行うことができる。例えば、炭素源として
は、グルコース、グリセリン、蔗糖、澱粉、マル
トーズ、動植物油などが使用でき、窒素源として
は、例えば大豆粉、肉エキス、酵母エキス、ペプ
トン、コーンステープリカー、綿実粕、魚粉など
の有機物並びに硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、硝酸ナトリウム、リン酸アンモニウムなど
の無機体窒素が使用できる。又必要に応じて食
塩、塩化カリウム、リン酸塩その他Mg⁺⁺，
Ca⁺⁺，Zn⁺⁺，Fe⁺⁺，Cu⁺⁺，Mn⁺⁺あるいはNi⁺⁺
などの２価金属塩類及びアミノ酸やビタミン類を
添加する他発酵中の発泡を抑制するため、例えば
シリコーン（信越化学KK製、−KM75；商標）な
どの消泡剤を適宜添加することもできる。温度、PH、通気攪拌および発酵時間等の発酵条
件は、用いられる菌株が最大量の該化合物を蓄積
する様に選択する。例えば温度は20〜40℃、好ま
しくは28℃、PHは５〜９、好ましくは６〜７にお
いて、発酵時間は１〜10日間、好ましくは６日間
で発酵を行うのが有利である。該培養物からオベルマイシン物質を単離、採取
するには、発酵終了後の培養物を遠心分離による
か、ケイ藻士の如き適当な濾過助剤の存在下で濾
過することにより、菌体と上澄または濾液に分離
する。上澄からはPH７〜９でクロロホルム、トル
エン、酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出する。菌体からは必要により、アセトン、メタノー
ル、エタノールもしくはブタノール等の有機溶媒
を用いて抽出する。それぞれ濃縮乾涸して紫色の
粗粉末を得る。これを吸着担体、例えば、合成吸
着樹脂、シリカゲルを用いたクロマトグラフイー
により処理するか、陰イオン交換樹脂、陽イオン
交換樹脂を用いる処理等を単独にあるいは適宜組
合せて使用することより、オベルマイシン物質は
それぞれ純粋な形で採取できる。以下に本発明を実施例により更に詳細に説明す
る。実施例１ストレプトミセス、ビオラセウスA262 SE2−
2385菌株（微工研条菌寄第8165号）のYS（0.3％
酵母エキス、１％可溶性デンプン、1.5％寒天、
PH7.2）斜面培養より一白金耳を採り、下記する
種母培地100mlを分注殺菌した500ml容三角フラス
コに接種し、20℃、ロータリーシエカー
（220rpm）にて２日間振盪培養して種母を作成し
た。種母培地可溶性デンプン 0.5％グルコース 0.5％エスサンミート（大豆粉、味の素社製）
1.0％酵母エキス 0.1％食塩 0.1％第二リン酸カリ 0.1％硫酸マグネシウム（含H₂Ｏ） 0.1％水道水 PH7.4（殺菌前）次いで、下記組成の生産培地15を入れ、殺菌
した30容ジヤーフアーメンター２基に上記の種
母培養液を750ml（５％に相当）ずつ添加接種し
た。生産培地エスサンミート（味の素社製） 2.5％可溶性デンプン 4.0％酵母エキス 0.1％食塩 0.25％炭酸カルシウム 0.3％ミネラル混液^* 0.2％水道水で15とする。 PH8.2（殺菌前）＊ CuSO₄・5H₂Ｏ 2.8ｇ、FeSO₄・7H₂Ｏ
４ｇ、MnCl₂・4H₂Ｏ 3.2ｇ、ZnSO₄・2H₂
Ｏ 0.8ｇ、蒸溜水500mlに溶解したもの通気量15／分、攪拌300回転／分で28℃、100
時間培養すると生産物のため培養液は濃紫色を呈
する。ジヤーフアーメンターより培養液を集め、
濾過助剤を２％添加し、濾過した。菌体区分にア
セトン10加え、20分間攪拌し抽出した。濾過
し、アセトン抽出液を採り、およそ３まで減圧
濃縮し4N苛性ソーダでPHを8.5に調整して、クロ
ロホルム（総量３）で抽出した。得られたクロ
ロホルム抽出液を水洗、さらに飽和食塩水で洗浄
し、芒硝を添加して乾燥した。芒硝を濾別後少量
まで減圧濃縮し、ｎ−ヘキサンを過剰に加えて沈
澱せしめ、濾過集積し、真空乾燥して、オベルマ
イシンＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ及びＧを含む粗粉
末9.4ｇを得た。実施例２実施例１で得た粗粉末５ｇをクロロホルムに溶
解し、10ｇシリカゲル（ワコーゲルＣ−200：和
光純薬社製）に吸着、濃縮乾涸したものを、予め
クロロホルムで充填したシリカゲルカラム（φ40
mm：同シリカゲル90ｇ）上に重層した。最初クロ
ロホルム／メタノール（100/1）混液（500ml）
で、次いで同（100/2）混液（500ml）で展開し、
アグリコン類を含む夾雑物を除去したのち、同
（100/5）混液（1000ml）で展開して、オベルマイ
シンＥ，Ｆ，Ｂ，Ｃ，Ｄを含む各区分を順次溶出
させ分取した。次いで同（100/10）混液（1000
ml）で展開し、オベルマイシンＧ及びＡを順次溶
出分取した。それぞれの溶出区分を濃縮乾涸し、
オベルマイシンＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，ＦおよびＧ
の部分精製粉末を得た。実施例３実施例２で得たオベルマイシンＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅ
及びＦの部分精製粉末を、それぞれ分取用シリカ
ゲル薄層（シリカゲル60PF254：メルク社製）を
用いて精製した。薄層の下端より1.5cmの位置に
横線状に塗布し、クロロホルム／メタノール／濃
アンモニア水（100／10／１）で展開した。オベ
ルマイシンＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅ及びＦに相当する紫色
分離バンド部分をかきとり、クロロホルム／メタ
ノール（7/1）混液で抽出した。またオベルマイ
シンＡ及びＧ部分精製粉末に関してはクロロホル
ム／メタノール／濃アンモニア水（100／18／２）
で展開分離した。オベルマイシンＡ及びＧの分離
バンドをかきとり、クロロホルム／メタノール
（7/1）混液で抽出した。各抽出液を濃縮乾涸した
のち、それぞれ0.1M酢酸緩衝液（PH3.5）20mlに
溶解し、トルエン20mlで２回抽出洗浄した。抽出
残水層を飽和重炭酸ソーダー水を添加してPH7.5
に調整し、クロロホルムで抽出した。各クロロホ
ルム抽出液を水洗し、芒硝で乾燥させたのち、
別し、減圧濃縮した。これにヘキサンを加え攪
拌、生成した沈澱を過集積せしめ、真空乾燥し
て純粋なオベルマイシンＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ
及びＧ物質を18，126，73，42，18，12及び10mg
を得た。以下にオベルマイシンＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ
及びＧの理化学的性状を示す。オベルマイシンＡ形状：紫色粉末融点：191〜194℃（分解）分子量：560 比旋光度：〔α〕²³ _D＋682° （Ｃ 0.004、クロロホルム中）紫外、可視部吸収スペクトル

【表】 IR（KBr）cm^-1：3400，2920，1590，1450，
1300，1190，1010，980，790¹ H−NMRスペクトラム（CDCl₃中）：δppm 1.13（ｔ，3H），1.41（ｄ，3H），1.75（ｍ，
4H），2.12（dd，1H），2.21（ｓ，6H），2.26
（ｄ，1H），3.71（ｓ，1H），4.08（ｑ，1H），
4.08（ｓ，1H），4.89（ｓ，1H），5.14（ｄ，
1H），5.50（ｄ，1H），7.29（ｓ，2H）オベルマイシンＢ形状：紫色粉末融点：175〜178℃（分解）分子量：1173 比旋光度：〔α〕²³ _D＋528° （Ｃ 0.004、クロロホルム中）紫外、可視部吸収スペクトル

【表】 IR（KBr）cm^-1：3450，2920，1580，1450，
1300，1190，1000，795¹ H−NMRスペクトラム（CDCl₃中）：δppm 1.1（ｂ，3H），2.21（ｓ，6H），3.5（bs，2H），
3.62（bs，2H），3.8（ｓ，1H），3.9〜4.3（ｍ，
4H），4.3〜4.7（ｑ，2H），4.89（bs，2H），
5.0（bs，2H），5.10（ｓ，1H），5.2（1H），5.5
（bs，1H），5.58（bs，1H），7.36（ｓ，2H）オベルマイシンＣ形状：紫色粉末融点：182〜185℃（分解）分子量：1189 比旋光度：〔α〕²³ _D＋788° （Ｃ 0.004、クロロホルム中）紫外、可視部吸収スペクトル

【表】

【表】 IR（KBr）cm^-1：3400，2920，1580，1450，
1300，1190，990，790¹ H−NMRスペクトラム（CDCl₃中）：δppm 1.1（ｔ，3H），2.21（ｓ，6H），3.5（ｂ，1H），
3.65（ｂ，2H），3.8（ｂ，3H），3.9〜（ｍ，
5H），4.3〜（ｍ，2H），4.9（bs，2H），5.0
（bs，1H），5.10（ｓ，2H），5.2（bs，1H），
5.5（bs，2H），7.37（ｓ，2H）オベルマイシンＤ形状：紫色粉末融点：184〜187℃（分解）分子量：1205 比旋光度：〔α〕²³ _D＋815° （Ｃ 0.004、クロロホルム中）紫外、可視部吸収スペクトル

【表】 IR（KBr）cm^-1：3400，2920，1580，1450，
1300，1190，1000，800¹ H−NMRスペクトラム（CDCl₃中）：δppm 1.1（ｔ，3H），2.20（ｓ，6H），3.6（bs，2H），
4.4〜4.7（ｍ，2H），4.90（bs，2H），5.08（ｓ，
2H），5.22（bs，1H），5.5（bs，2H），7.37
（ｓ，2H）オベルマイシンＥ形状：紫色粉末融点：148〜151℃（分解）分子量：772 比旋光度：〔α〕²³ _D＋595° （Ｃ 0.008、クロロホルム中）紫外、可視部吸収スペクトル

【表】 IR（KBr）cm^-1：3400，2920，1580，1450，
1305，1190，1000，800¹ H−NMRスペクトラム（CDCl₃中）：δppm 1.1（ｔ，3H），2.27（ｓ，6H），2.96（ｍ，
2H），3.52（bs，1H），3.64（bs，1H），3.83
（bs，1H），3.9〜（ｍ，2H），4.50（ｑ，
1H），4.90（bs，1H），5.05（ｓ，2H），5.48
（bs，1H），7.30（ｓ，2H）オベルマイシンＦ形状：紫色粉末融点：160〜163℃（分解）分子量：788 比旋光度：〔α〕²³ _D＋523° （Ｃ 0.008、クロロホルム中）紫外、可視部吸収スペクトル

【表】 IR（KBr）cm^-1：3400，2930，1580，1450，
1305，1190，1000，800¹ H−NMRスペクトラム（CDCl₃中）：δppm 1.1（ｔ，3H），2.24（ｓ，6H），2.96（ｍ，
2H），3.6（bs，1H），3.7（bs，2H），3.9〜4.1
（1H），4.1〜（ｍ，2H），4.59（ｑ，1H），
4.94（bs，1H），5.06（ｓ，1H），5.11（bs，
1H），5.49（bs，1H），7.33（ｓ，2H）オベルマイシンＧ形状：紫色粉末融点：194〜197℃（分解）分子量：544 比旋光度：〔α〕²³ _D＋773° （Ｃ 0.008、クロロホルム中）紫外、可視部吸収スペクトル

【表】

【表】 IR（KBr）cm^-1：3400，2920，1580，1450，
1305，1190，1020，990，800¹ H−NMRスペクトラム（CDCl₃中）：δppm 1.1（ｔ，3H），1.6〜（ｍ，7H），2.27（ｓ，
6H），2.97（ｍ，2H），3.75（bs，1H），4.02
（ｑ，1H），5.05（bs，1H），5.45（bs，1H），
7.32（ｓ，2H）

Claims

【特許請求の範囲】１一般式式中、R₁が水素原子を表わすとき、R₂は式、【式】で示される置換基を表わし、 R₁が式【式】で示される置換基を表わすとき、R₂は水酸基を表わし、 R₁が式で示される置換基を表わすとき、R₂は式で示される置換基を表わす、で示される新規アントラサイクリン抗生物質。２一般式(1)のR₁が式【式】で示される置換基を表わし、かつR₂が水酸基を表わす、特許請求の範囲第
１項記載の新規アントラサイクリン抗生物質。３一般式(1)のR₁およびR₂が式で示される置換基を表わす、特許請求の範囲第１
項記載の新規アントラサイクリン抗生物質。４一般式(1)のR₁が水素原子を表わし、かつR₂
が式で示される置換基を表わす、特許請求の範囲第１
項記載の新規アントラサイクリン抗生物質。５一般式(1)のR₁が水素原子を表わし、かつR₂
が式で示される置換基を表わす、特許請求の範囲第１
項記載の新規アントラサイクリン抗生物質。６一般式(1)のR₁が水素原子を表わし、かつR₂
が式【式】で示される置換基を表わす、特許請求の範囲第１
項記載の新規アントラサイクリン抗生物質。