JPH01321361A - 乾式免疫分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野］ 本発明は抗原−抗体反応を利用する酵素免疫分析法によ
る免疫学的に有用な乾式免疫分析要素に関する。

〔従来の技術〕

体液などに含有されている生化学物質を定量する方法と
して種々の方法が知られているが、比較的感度よく測れ
る方法として酵素免疫測定法が知られている。一方、簡
便さ、迅速性の観点から乾式分析要素を用いる方法が開
発されている（例えば、特開昭４９−５３８８８、特開
昭５５−１６４３５６、特開昭５９−１０２３８８）。

両技術を結合することにより乾式分析要素及び酵素免疫
測定法の欠点を互いに克服した乾式免疫分析要素の開発
が望まれていた。そこで、本発明者らは特開昭６１−８
００４９、特開昭６１−８００５０に記載の酵素抗体結
合物の基質として、水に不溶性の高分子物質を使用する
酵素免疫測定法を乾式分析要素に組込むことを試み鋭意
努力した結果、基質である水に不溶性の高分子物質と酵
素抗体結合物を組込んだ乾式免疫分析要素を作製するこ
とに成功した。そして、この乾式免疫分析要素が、遠心
分離や予備反応などの繁雑な操作のない簡便で迅速な分
析要素であることを見出し、本発明に到達した。

〔発明の目的〕

本発明の目的は簡便な操作で高感度の酵素免疫分析法を
実施することができる乾式免疫分析要素を提供すること
である。

〔発明の構成〕

本発明の前記目的は、少なくとも１つの水浸透性層を有
する、検体中のリガンドの測定のための酵素免疫分析法
による乾式免疫分析要素であって、前記水浸透性層中に
、 （Ａ）水不溶性高分子物質、及び、 （Ｂ）検体中のリガンドと反応する抗体と前記水不溶性
高分子物質に作用しうる酵素との結合物であるところの
酵素抗体結合物、 を含有することを特徴とする乾式免疫分析要素により達
成することができた。

〔発明の構成の詳細な説明］ 本発明の乾式免疫分析要素の測定対象は検体に含まれる
抗原決定基を有するリガンドである。検体の種類は限定
されないが、例えば血液（全血、血漿、血清）、リンパ
液、尿などである。血漿、血清、尿などの場合には、通
常特別な前処理を必要とせず、検体そのままについて測
定を行うことができる。

リガンドは抗原決定基を１又は２以上有しているもので
あり、例としては各種内分泌腺に由来するホルモン類、
免疫グロブリン、アルブミン、フェリチン等の血漿蛋白
質、ＨＢ抗原等のウィルス、バクテリア類、α−フェト
プロティン、癌関連性抗原等の各種臓器あるいは血中、
尿中に存在する抗原などである。本発明の乾式免疫分析
要素は特に高分子量のリガンド、例えば分子量約２万以
上のものの測定に威力を発揮する。

また、本発明に用いる抗体と前記水不溶性高分子物質に
作用しうる酵素との結合物のその抗体はリガンドの抗原
決定基と反応するものである。この抗体にはＦ（ａｂ’
）ｚ、Ｆａｂ’、Ｆａｂなとのフラグメントも含まれる
。

抗体の製造方法としてはリガンドと蛋白との結合物を兎
、山羊、馬、モルモット、ニワトリなどの温血動物に体
重１　ｋｇあたり０．３〜２ｍｇを１〜数回背中皮下、
フットパッド、大腿筋等にアジュバントとともに注射し
て当該動物の体内に形成させる。この抗体は血清をその
まま用いてもよく、血清から抗体すなわち免疫グロブリ
ンを採取する公知の方法によって精製してから用いても
よい。

一方、この抗体はモノクローナル抗体として取得するこ
ともできる。その場合にはマウスに前記のいずれかの抗
原をアジュバントとともに数回腹腔等に注射し肺臓細胞
を取り出してポリエチレングリコール等を用いてマウス
ミエローマ細胞と融合させる。そして、この融合細胞の
なかから当該抗体を産生ずるものをクローニングによっ
てモノクローン細胞として増殖させ、マウス腹腔中で増
殖させることによって単一抗体、すなわちモノクローナ
ル抗体を大量に製造することができる。

一方、この結合物を構成している酵素は水工）容性高分
子物質に作用しうるちのである。使用するにあたっては
活性の測定方法が容易なものがよく、例えばこのような
酵素としてはアミラーゼ、デキストラナーゼ、セルラー
ゼ、コラ−ゲナーゼ、マンナーゼ、プロテアーゼ、エラ
スターゼ、リパーゼ、グルコアミラーゼなどである。

これらの酵素の作用する水不溶性高分子物質としては例
えば澱粉、アミロース、アミロペクチン、ペプチド、セ
ルロース等をあげることができ、詳しくは丸尾、田宮、
監修「酵素ハンドブック］（朝食書店、１９８２年）、
日本生化学会編「生化学ハンドブック］（丸善、１９８
０年）に記載されている。

また、上記水不溶性高分子物質には直接または間接に検
出できる官能基又は化合物がついていてもよい。

前記直接または間接に検出できる官能基又は化合物とし
ては、色素部を有する化合物、蛍光、発光を生じる化合
物等をあげることができる。また、特公昭５７−３００
００、特開昭５９−３００６３等に記載されているよう
な色素形成化合物（例、カプラー）などであってもよい
。

前記物質の検出の為には、極大吸収波長における透過又
は反射による光学的測定が適しているが、目的や必要精
度によっては目視により判定してもよい。発光、蛍光等
の測定には発光、蛍光等の主波長付近における光学的測
定が適している。

水不溶性高分子物質に前記官能基を結合させる方法とし
ては、例えばに、Ｖｅｎｋａｔａｒｍａｎ　４Ｑ　ｒＴ
ｂｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　５ｙｎｔｈｅｔｉｃ　
Ｄｙｅｓ、１第６巻（Ａｃａｄｅ−ｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ
社、１９７２年発行）に記載の反応性染料を用いる方法
、特公昭５７−３００００、特開昭５９−３００６３等
に記載の方法等の公知の方法から適宜に選択することが
できる。

水不溶性高分子物質に検出できる官能基又は化合物を結
合させたものの好ましい具体例として、色素を結合させ
た澱粉（ダイスターチ）がある。

酵素と抗体との結合方法は双方の官能基を考慮して決定
すればよい。官能基は、アミノ基、カルボキシル基、水
酸基、チオール基、イミダゾール基、フェニル基などを
利用することができる。例えばアミノ基相互間を結合さ
せる場合には、ジイソシアネート法、グルタルアルデヒ
ド法、ジフルオロベンゼン法、ベンゾキノン決算数多く
知られている。また、アミノ基とカルボキシル基との間
を結合させる方法としては、カルボキシル基をサクシン
イミドエステル化する方法のほかカルボジイミド法、ウ
ッドワード試薬法等が知られており、アミノ基とＩＪ！
鎖を架橋する過ヨウ素酸酸化法（Ｎａ−ｋａｎｅ法）も
ある。チオール基を利用する場合には、例えば一方の側
のカルボキシル基をサクシンイミドエステル化してこれ
にシスティンを反応させてチオール基を導入し、チオー
ル基反応性二価架橋試薬を用いて双方を結合することが
できる。フェニル基を利用する方法としてはジアゾ化法
、アルキル化法などがある。結合方法はこれらの例示に
限られるものではなく、このほか例えばｒＭｅｔｈｏｄ
ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍ＋ｗｕｎｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪあるいは石川、河合、宮井編「酵
素免疫測定法」（医学書院、１９７８年発行）等の底置
に記載されている方法のなかから適宜選択して利用する
ことができる。反応後はゲル濾過法、イオン交換クロマ
トグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーなど
を適宜組み合せて精製を行い、必要により凍結乾燥法等
で乾燥する。

一方、結合物の酵素と同種の酵素が検体に含まれている
場合には、この検体中の酵素を阻害する程度が前記の結
合物に結合されている酵素の活性を阻害する程度より大
きい酵素阻害物質を接触させるのがよい。

この酵素阻害物質は検体に含まれている酵素を完全に失
活させかつ結合物に結合されている酵素を全く阻害しな
いものが最も望ましいことはいうまでもないが、実用上
は単に測定時においてブランク値を上昇させなければよ
く、測定後に酵素阻害物質が失活するなどしてこの酵素
活性が回復してもよい。この酵素阻害物質の作用が問題
になるもう一方の酵素は、抗体に結合されている状態の
ものであり、遊離状態では酵素阻害物によって失活する
ものであってもよい。この酵素阻害物質にはこのような
特異性を有する公知の酵素阻害物質を利用すればよいが
、そのほか、検体に含まれている酵素を温血動物に投与
してその抗体を取得し、これを酵素阻害物質として用い
ることもできる。

抗体の取得方法は前述のリガンドに対する抗体の取得方
法と同様である。

本発明は更にリガンドによる酵素活性の低下が不充分な
場合には、リガンドの他の決定基を認識し得る第２抗体
の使用が好ましい。第２抗体としては例えば、抗原をマ
ウス免疫して、モノクローナル抗体を取得し、その中で
お互いに異なる２種以上の抗原決定基に反応する抗体を
得、この異なる一方の抗体を第２抗体として用いること
もできる。

本発明の乾式免疫分析要素は公知の多種の乾式分析要素
と同様の層構成とすることができる。分析要素は多孔性
層、後述する試薬層のほか、支持体、展開層、検出層、
光遮蔽層、接着層、濾過層、吸水層、下塗り層その他の
層を含む多重層の構成を有してもよい。かような分析要
素として、米国特許第３，９９２．１５８号、同４，０
４２，３３５号および特開昭５５−１６４３５６号各明
細書に開示されたものがある。

光透過性水不透過性支持体を用いる場合、本発明の乾式
免疫分析要素は、実用的に次のような構成を採りうる。

もちろん本発明はこれに限定されるわけではない。

（１）支持体上に試薬層、その上に展開層を有するもの
。

（２）支持体上に検出層、試薬層、展開層をこの順に有
するもの。

（３）支持体上に試薬層、光反射層、展開層をこの順に
有するもの。

（４）支持体上に検出層、試薬層、光反射層、展開層を
この順に有するもの。

（５）支持体上に検出層、光反射層、試薬層、展開層を
この順に有するもの。

（６）支持体上に第二試薬層、光反射層、第一試薬層、
展開層をこの順に有するもの。

（７）支持体上に検出層、第二試薬層、光反射層、第一
試薬層、展開層をこの順に有するもの。

（８）支持体上に検出層、免疫反応試薬含有展開層をこ
の順に有するもの。

（９）支持体上に検出層、光反射層、免疫反応試薬含有
展開層をこの順に有するもの。

上記（１）ないしく５）において試薬層は異なる複数の
層から成ってもよい。また、試薬層は免疫反応しうる成
分を含む免疫試薬層であってもよい。支持体と試薬層ま
たは検出層との間には吸水層を設けてもよい。上記（１
）ないしく３）と（６）において試薬層と検出層または
展開層の間に濾過層を設けてもよい。

上記（３）ないしく７）において光反射層と検出層、試
薬層または展開層との間、試薬層と検出層との間または
試薬層と展開層との間に、さらに濾過層を設けてもよい
。試薬層が複数層から成る場合に、試薬層と試薬層の間
にさらに濾過層を設けてもよい。試薬層、検出層は後述
する多孔性と同様な多孔性試薬層、多孔性検出層であっ
てもよい。

光透過性水不透過性支持体の材料として好ましいものは
ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレンである。親
水性層を強固に接着させるため通常、下塗り層を設ける
か、親水化処理を施すことが好ましい。

支持体としては光反射性又は光不透過性（不透明）で水
不透過性の支持体も用いることができる。

光反射性又は不透明支持体の例として、二酸化チタン微
粒子又は硫酸バリウム微粒子を分散含有させた白色又は
乳白色不透明ポリエチレンテレフタレートがある。

本発明の乾式分析要素の水浸透性層としては、親水性ポ
リマーを結合剤とする実質的に均一の層のほか、例えば
特開昭５８−７０１６３５号、特開昭６１−４９５９号
、特願昭６０−２５６４０８号、同６０−２７９８５９
号、同６０−２７９８６０号、同６０−２７９８６１号
等に記載されているような多孔性層も好適である。親水
性ポリマーとして例えば、ゼラチンおよびこれらの誘導
体（例えばフタル化ゼラチン）、セルロース誘導体（例
えばヒドロキシメチルセルロース）、アガロース、アク
リルアミド共重体、メタアクリルアミド共重体、アクリ
ルアミドまたはメタアクリルアミドと各種ビニル性七ツ
マ−との共重合体等が利用できる。

多孔性層を構成する材料としては、例えば濾紙、不織布
、織物布地（例えば平織布地）、編物生地（例えば、ト
リコット編布地）、ガラス繊維濾紙等を用いることがで
きる。展開層としては、これらのうち織物、編物等が好
ましい。織物等は特開昭５７−６６３５９号に記載され
たようなグロー放電処理をしてもよい。展開層には、展
開面積、展開速度等を調節するため、特開昭６０−２２
２７７．０号、特願昭６１−１２２８７５号、６１−１
２２８７６号、６１−１４３７５４号に記載したような
親水性高分子あるいは界面活性剤を含有してもよい。

免疫反応試薬層は、本発明の分析要素の主要な免疫反応
試薬組成物の成分である （Ａ）水不溶性高分子物質、及び、 （８）検体中のリガンドと反応する抗体と前記水不溶性
高分子物質に作用しうる酵素との結合物であるところの
酵素抗体結合物、所望により更には第２抗体の一部又は
全部を含有する水浸透性層である。水不溶性高分子物質
の含有量は約１．０■／ｒｒｔ〜約１００ｍｇ／ｒｒ？
、好ましくは約１．０ｍｇ／ｒｒｒ　〜約１０■／ｒｒ
ｆ、そして酵素抗体結合物の含有量は約０．１ｍｇ／ｒ
ｒｒ〜約１００■／ボ、好ましくは約１．０ｍｇ／ｎ（
〜約１０ｍｇ／ボが適当である。

免疫反応試薬層は、複数の層からなりたっていてもよい
。この場合、上記の各成分は複数の層にわかれて含有さ
れていてもよい。

さらに詳しくは、本発明の乾式分析要素において、酵素
抗体結合物（Ｌ）、水不溶性高分子物質（Ｓ）は下表に
記載のような組合せで乾式免疫分析要素に含有されても
よい。

○の中の数字は分析要素の態様を示す番号である。

■ いずれの態様においても、試薬層の支持体と反対側に展
開層を設けてもよいし、試薬層が展開層をかねていても
よい。また上記■〜■において、Ｌ、Ｓ以外の試薬（例
、呈色試薬）を含有する試薬層をさらに設けてもよい。

本発明の分析要素の試薬層に含有させることができる緩
衡剤の例としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩やｒ　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓ　ｔｒｙＪ　、　５　（２）　、　４
６７−４７７　（１９６６）に記載されているＧｏｏｄ
の緩衡剤などを挙げることができる。これらの緩衝剤は
「蛋白質・酵素の基礎実験法Ｊ（堀尾武−ほか著、南江
堂、１９８１年）、前記ｒ　Ｂｉｏｃｈｅ＋ｎ１ｓｔｒ
ｙ　」等の文献を参考にして選択することができる。

多孔性層を展開層として利用する場合、液体計量作用（
メータリング作用）を有する層であることが好ましい。

液体計量作用とは、その表面に点着供給された液体試料
を、その中に含有している成分を実質的に偏在させるこ
となく面の方向上に単位面積当たりほぼ一定量の割合で
広げる作用である。

多孔性層を接着し積層するための接着層を試薬層、光反
射層、濾過層、吸水層、検出層等の層の上に設けてもよ
い。接着層は水で膨潤したときに多孔性層を接着するこ
とができるような親水性ポリマー、例えばゼラチン、ゼ
ラチン誘導体、ポリアクリルアミド、澱粉等からなるこ
とが好ましい。

光反射層は、検出層、試薬層等に生じた検出可能な変化
（色変化、発色等）を光透過性を有する支持体側から反
射測定する際に、展開層に点着供給された被検液の色、
特に試料が全血である場合のヘモグロビンの赤色等を遮
蔽するとともに背景層としても機能する。光反射層は、
親水性ポリマーをバインダーとして、二酸化チタン、硫
酸バリウム等の光反射性微粒子が分散された水浸透性の
層であることが好ましい。バインダーとしてはゼラチン
、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド、澱粉等からな
ることが好ましい。

分析要素には、光反射層を設ける代わりに、またはそれ
と同時に、展開層、試薬層、検出層等に二酸化チタン等
の光反射粒子を含有させてもよい。

本発明の乾式免疫分析要素は前述の諸特許明細書に記載
の公知の方法により調製することができる。

本発明の分析要素は一辺約１５Ｍから約３０ＩｎＩ１１
の正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁断し、
特公昭５７−２８３３１、実開昭５６−１４２４５４、
特開昭５７−６３４５２、実開昭５８−３２３５０、特
表昭５８−５０１１４４等に記載のスライド枠に収めて
免疫スライドとして用いることが、製造、包装、輸送、
保存、測定操作等諸種の観点で好ましい。使用目的によ
っては、長いテープ状でカセットまたはマガジンに収め
て用いること、または小片を開口のあるカードに添付ま
たは収めて用いることなどもできる。

本発明の分析要素は前述の諸特許明細書等に記載の操作
により液体試料中のアナライトであるリガンドの分析を
実施できる。例えば、約５μｅから約３０ｐｅ、好まし
くは約８　ｐｅから約１５ｐｇの範囲の全血、血漿、血
清、リンパ液、尿等の水性液体試料滴を展開層に点着し
１分から１０分の範囲で、約２゜°Ｃから約４０°Ｃの
岐囲の実質的に一定の温度で、好ましくは３７°Ｃ近傍
の実質的に一定の温度でインクベーションし、要素内の
発色又は変色を可視光又は紫外光の吸収極大波長または
その近傍の波長の光を用いて光透過性支持体から反射測
光し、予め作成した検量線を用いて比色測定法の原理に
より液体試料中のリガンドの含有量を求めることができ
る。あるいは、要素内の蛍光の強度を測定し、予め作成
した検量線を用いて液体試料中のリガンド含有量を求め
ることができる。点着する液体試料の量、インクベーシ
ョン時間及び温度を一定にすることによりリガンドの定
量分析を高精度で実施できる。光反射性又は不透明支持
体を用いる態様においては、分析要素内の発色又は変色
を支持体と反対側の最外層側から反射測定する。

測定操作は特開昭６０−１２５５４３、特開昭６０−２
２０８６２、特開昭６１−２９４３６７、特開昭５８−
１６１８６７等に記載の化学分析装置により極めて容易
な操作で高精度の定量分析を実施できる。

（合成例） （１）酵素抗体結合物の合成 ■ＣＨＭ化アミラーゼの作製 バチルス・サブチリスアミラーゼ５　ｍｇをｐＨ６，３
の０．１Ｍグリセロ燐酸１　ｍｌに溶かし、Ｃ８Ｍ３２
■／ｄのＤＭＦ溶液１００μｅを加えて室温で１時間放
置して反応させた。この反応液をセファデックスＧ−２
５のカラムに入れ、ｐＨ６，３の０．１Ｍグリセロ燐酸
を流してゲル濾過を行ない、素通り分画を分取した。

■抗ヒトフェリチンヤギＩｇＣ；Ｆ（ａｂ”）２の作製
抗ヒトフェリチンヤギＩｇＧ１０■（０，１Ｍ酢酸緩衝
液（ｐＨ４，２）　　２　ｍｌにペプシン０．５ｍｇを
加え、３７°Ｃ−夜撹拌し、０．ＩＮ−ＮＡＯＨを加え
てｐｌ＋を７．０に調節した。この反応液を予め０．１
Ｍ燐酸緩衡１ｍＭＥＤＴＡ溶液（ｐＨ７，０）で平衡化
したＡｃＡ　−４４分子量約ｌＯ万付近に溶出されたピ
ークの部分を集めて１　ｍｌに濃縮し、目的の抗ヒトフ
ェリチンヤギｌ　ｇＧ　Ｆ　（ａｂ’）ｚを得た。

■α−アミラーゼー抗ヒトフェリチンヤギＦａｂ’結合
物の作製 抗ヒトフェリチンヤギＦ（ａｂ’）ｚ６■を含む１ｍＭ
ＥＤＴＡ含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐｌ＋７．０）　ｄ
に０．１Ｍ　２−メルカプトエチルアミン塩酸塩水溶液
１００μｅを加え、３７°Ｃで２時間インキュベーショ
ンした。

この反応液を予め０．１Ｍグリセロ燐酸水溶液（ｐＨ７
，０）で平衡化したセファデックスＧ−２５のカラムで
分離しＦａｂ’−５Ｈ５■を分取した。このＦａｂ’−
５ｉｔ溶液に上記０８Ｍアミラーゼ０．６２ｍｇ加え、
４°Ｃ２−夜装置した。Ｐ　Ｅ　Ｇ−２０００で１　ｍ
ｌに濃縮後、予め０．１Ｍ酢酸緩衝液（５ｍＭ塩化カル
シウム含有ｐＨ７，０）で平衡化したセファクリルＳ−
３００カラムでゲル濾過し、分子１２０−３０万ダルト
ン前後の蛋白分画を分取し、目的の結合物を得た。

（２）水不溶性ダイスターチの調製 ４０ｇのカルボキシメチルスターチ（木材産業社製、製
品名工クスプロクプ）を１５００ｄの蒸留水に懸濁させ
て、これに８ｇのダイアミラーブリリアントブルー（Ｄ
ｉａｍｉｒａ　Ｂｒ１ｌｌｉａｎｔ　Ｂｌｕｅ）　Ｒ（
Ｃ，ＩＮｕｍｂｅｒ　６１２００　；三菱化成工業社製
）を加え、室温で３０分間撹拌した。その後、この懸濁
液に１５０ｇの無水硫酸ナトリウムを加えて、さらに室
温で３０分間撹拌した後４５ｇの炭酸ナトリウムを添加
し、４５゛Ｃで一夜撹拌した。それから、このＱｉ液を
遠心し上滑を除いて沈澱物に蒸留水を加え、再び懸濁し
た後遠心した。この懸濁、遠心の操作を上清の着色がな
くなるまで繰り返した。最後に沈澱をエタノールで洗っ
て乾燥した。

実施例１ ゼラチン下塗層が設けられている厚さ１８０μｍの無色
透明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）シート（支
持体）の上に下記の被覆量になるように架橋剤含有吸水
層を水溶液を用いて塗布し、乾燥して設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　ｌＯｇ／ｒｄノニ
ルフェノキシポリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）　　　３３０ｍｇ／
ｎ？ビス〔（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミ
ノ］メタン　　　　　　　　　４００ｍｇ／ｒ＋’ｆ吸
水層の上に下記の被覆量で乾燥層厚５μｌになるように
して接着層を水分散液を用いて塗布し、乾燥して設けた
。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　６．１ｇ／ｒｒｉノ
ニルフェノキシポリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）６００ｍｇ／ｒｄつ
いで、接着層の表面に水を３０ｇ／ｎｆの割合ではぼ−
様に供給して湿潤させ、その上に公称孔径３．Ｏｕｍ、
Ｎさ約１４０μｍのセルロースアセテートメンブランフ
ィルタ−をラミネート接着し、多孔性検出層とした。

ついで多孔性検出層の上に、下記組成の免疫反応用試薬
組成物を含有させた、５０デニール相当のＰＥＴ！ｆｊ
５績糸３６ゲージ編した厚さ約２５０即のトリコツｌ−
編物布地をラミネート接着して多孔性展開層を設けた。

α−アミラーゼ−抗ヒトフェリチンヤギＦａｂ”結合物
（合成例（１））　　　　　　　　　　２■／ボツニル
フエノキシポリエトキシエタノール（平均１０オキシ工
チレン単位含有）　　５００＋＋＋ｇ／ｒｒ？ダイスタ
ーチ（合成例（２））　　　　　　７．２　ｇ　／　ｒ
ｒｉこれを一辺１５価の正方形チップに裁断し、特開昭
５８−３２３５０記載のスライドの枠に収めてフェリチ
ン分析用多層分析スライドとした。

性能評価実験 前記のフェリチン分析用多層免疫スライドの展開層に、
既知量のフェリチンを含有するｐＨ７の５０ｍＭグリセ
ロ燐酸緩衝溶液２０μ２滴下した。３７°Ｃで３０分間
反応後、支持体側より６４０ｎｍの反射光学濃度を測定
した。結果は第１図に示す。

第１図の検量線より、本発明のフェリチン分析用乾式免
疫分析要素はフェリチンの定量が精度よ〈実施できるこ
とがわかる。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１のテオフィリン分析用乾式免疫分析要
素の検量線を示す図である。 特許出願人　　富士写真フィルム株式会社同　　　　冨
士レビオ株式会社

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）少なくとも１つの水浸透性層を有する、検体中の
   リガンドの測定のための酵素免疫分析法による乾式免疫
   分析要素であって、前記水浸透性層中に、 （Ａ）水不溶性高分子物質、及び、 （Ｂ）検体中のリガンドと反応する抗体と前記水不溶性
   高分子物質に作用しうる酵素との結合物であるところの
   酵素抗体結合物、 を含有することを特徴とする乾式免疫分析要素
2. （２）一体化された少なくとも２つの水浸透性層を有し
   、そのうちの少なくとも１層が多孔性層である請求項（
   １）に記載の免疫分析要素
3. （３）他の決定基を認識し得る第２抗体を用いることか
   らなる請求項（１）に記載の免疫分析要素