JPH0143733B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規なデカプレニル置換アミノ酸誘導
体およびその件ならびにそれらを活性成分として
含有する抗ウイルス剤に関する。これらの化合物
は脊椎動物のウイルス感染を抑制するのに有用で
ある。 従来、脊椎動物を宿主とするウイルスによつて
惹起される疾病を予防または緩解する効果を有す
るものと判定された物質、あるいは有意に抗体活
性を増大させ、且つ症状を抑えることができるも
のと認められた物質が知られている。報告されて
いる抗ウイルス性物質はインターフエロン、イン
ターフエロンを誘起せしめる物質、すなわち誘起
剤（インターフエロンインデユサー）、そしてア
マンタジン塩酸塩またはメチサゾンのようにウイ
ルス増殖に対して直接作用する合成物質である。
インターフエロンは脊椎動物細胞がウイルスの感
染を受けた場合に細胞自体がつくり出す抗ウイル
ス性糖蛋白であつて、広範囲のウイルスに対して
有効である。ウイルス感染以外の方法で脊椎動物
にインターフエロンを誘起させるインデユーサー
としては、ある種のバクテリアフアージの二重鎖
リボ核酸のような天然高分子物質、あるいはポリ
イノシン酸―ポリシチジル酸で代表される二重鎖
リボ核酸のような合成高分子物質、さらにチロロ
ンのような低分子インデユーサーが知られてい
る。 しかしながら、インターフエロンはその精製に
おいて問題があり、実際上経済的な生産方法はい
まだに開発されていない。また従来のインターフ
エロンインデユーサーは主としてその毒性のため
に実用化されていない。今日市販されているウイ
ルス増殖に対して直接作用する合成抗ウイルス剤
は、それによつて治療できるウイルス感染症の範
囲がどちらかといえば狭いので新しい合成抗ウイ
ルス剤の出現が常に望まれている。このようなこ
とから本発明者らは高力価のインターフエロンを
産生し、しかも動物レベルで抗ウイルス作用を有
する化合物を見い出すべく種々研究を重ねた結
果、インターフエロン誘起能を示し、かつ動物試
験において優れた抗ウイルス作用および抗腫瘍作
用を有し、従つて医薬として期待される後記一般
式で表わされる新規なデカプレニル置換アミノ
酸誘導体およびその酸付加塩を得ることに成功し
た。 本発明に係る新規なデカプレニル置換アミノ酸
誘導体は一般式 （式中Ａは―CH₂CO―の２価の基を示し、そし
てＲはアラニン、フエニルアラニンまたはアラニ
ルグルタミン酸の残基を示す）で表わされる。一
般式（）で表わされるデカプレニル置換アミノ
酸誘導体およびその酸付加塩を製造するには、式 で表わされるデカプレニル酢酸あるいは式 で表わされるデカプレニルアミンに既知のペプチ
ド結合形成反応を適用することにより製造するこ
とができる。適用されるペプチド結合形成反応と
しては次のものがあげられる。ただし下記におい
てＱは

【式】であり、 ＲはメチルまたはベンジルでありそしてR′は低
級アルキルを意味する。 (A) カルボキシル基活性化法 (i) 酸塩化物法 (ii) アジド法 (iii) 混合酸無水物法 (iv) カルボジイミド法 (v) 活性エステル法 この中の一つを具体的に云えば、デカプレニル
酢酸とＮ―保護アミノ酸またはデカプレニルアミ
ンとアミノ酸エステルとを脱水剤の存在下に反応
させることによつて製造される。この反応に使用
する脱水剤としてはＮ，N′―ジシクロヘキシル
カルボジイミド、１―シクロヘキシル―３―（２
―モルホリノエチル）カルボジイミド、１―シク
ロヘキシル―３―（４―ジエチルアミノシクロヘ
キシル）カルボジイミド、１―エチル―３―（３
―ジエチルアミノプロピル）カルボジイミド等が
挙げられる。反応に用いる有機溶媒としてはアセ
ニトリルまたは塩化メチレンが好ましい。反応温
度は、０℃〜室温が最適である。反応後さらに塩
基（例えば水酸化カリウムまたは水酸化ナトリウ
ム）の存在下でエステルをけん化した後、抽出、
濃縮、カラムクロマトグラフイー、結晶化等の通
常の単離精製手段によつて所望のデカプレニル置
換アミノ酸誘導体を製造することができる。 次に本発明のデカプレニル置換アミノ酸誘導体
の製造例を示す。 製造例 １ Ｎ―デカプレニルアセチル―Ｌ―アラニン デカプレニル酢酸50ｇを含有する塩化メチレン
溶液200mlを０℃に冷却し、これにＮ，Ｎ―ジシ
クロヘキシルカーボジイミド16.7ｇを加え、そし
て得られる混合物を15分間撹拌する。次にＬ―ア
ラニンメチルエステル7.7ｇを加え、０℃に冷却
して２時間撹拌する。次に氷浴を除き室温でさら
に２時間撹拌する。反応後、析出したジシクロヘ
キシル尿素を別し、液を減圧下に濃縮する。
濃縮物71.1ｇをシリカゲル700ｇを充填したクロ
マトカラム上でベンゼン―酢酸エチルの混液を用
いてクロマトグラフ処理してＮ―デカプレニルア
セチル―Ｌ―アラニンメチルエステル47.1ｇを得
る。 得られたＮ―デカプレニルアセチル―Ｌ―アラ
ニンメチルエステル47.1ｇに５％水酸化カリウム
200mlを含むエタノール溶液300mlを加え、1.5時
間加熱還流する。反応液を冷却後、５％塩酸水溶
液1000mlを加え、そしてイソプロピルエーテルで
抽出する。抽出液を水および飽和食塩水で洗い、
無水硫酸ナトリウムで乾燥しそして減圧下に濃縮
する。濃縮物46.3ｇをシリカゲル470ｇを充填し
たクロマトカラム上でベンゼン―酢酸エチルの混
液を用いてクロマトグラフ処理して油状物20.4ｇ
を得る。この油状物をアセトン100mlに溶解し一
夜冷蔵庫に放置する。析出した結晶を別および
乾燥して式 で表わされるＮ―デカプレニルアセチル―Ｌ―ア
ラニン13.8ｇを得る。このものの物性値を示せば
下記のとおりである。 融 点 57.5〜60.2℃ N.M.R. （CDCl₃中、δ値） 8.84 （1H、ｓ） 6.48 （1H、ｄ） 5.46〜4.89 （10H、br） 4.63 （1H、ｍ） 1.98 （40H、br） 1.58 （36H、br） 元素分析値（C₅₅H₈₉NO₃・1/2H₂Oとして） 計算値 実測値 Ｃ（％） 80.43 80.63 Ｈ（％） 11.04 11.01 Ｎ（％） 1.71 1.70 製造例 ２ Ｎ―デカプレニルアセチル―Ｌ―フエニルアラ
ニン デカプレニル酢酸20ｇを含有する塩化メチレン
溶液100mlを０℃に冷却しこれに、Ｎ，Ｎ―ジシ
クロヘキシルカーボジイミド10ｇを加え、15分間
撹拌する。次にＬ―フエニルアラニンメチルエス
テルを4.8ｇを加え、０℃に冷却しながら２時間
撹拌し、次に氷浴を除いて室温で３時間撹拌す
る。反応終了後、析出したジシクロヘキシル尿素
を別し、そして液を減圧下に濃縮する。濃縮
物26.6ｇをシリカゲル300ｇを充填したクロマト
カラム上でベンゼン―酢酸エチルの混液を用いて
クロマトグラフ処理してＮ―デカプレニル―Ｌ―
フエニルアラニンメチルエステル10.7ｇを得る。
得られたＮ―デカプレニル―Ｌ―フエニルアラニ
ンメチルエステル10.7ｇに５％水酸化カリウム50
mlを含むエタノール溶液100mlを加え、撹拌下に
1.5時間加熱還流する。反応液を冷却後、これに
５％塩酸水溶液300mlを加えそしてイソプロピル
エーテルで抽出する。抽出液を水および飽和食塩
水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥しそして減
圧濃縮する。濃縮物10.1ｇをシリカゲル200ｇを
充填したクロマトカラム上でベンゼン―酢酸エチ
ルの混液を用いてクロマトグラフ処理して油状物
7.3ｇを得る。この油状物をアセトン30mlに溶解
し、一夜冷蔵庫に放置する。析出した結晶を別
および乾燥して式 で表わされるＮ―デカプレニルアセチル―Ｌ―フ
エニルアラニン4.9ｇを得る。このものの物性値
を示せば下記のとおりである。 融 点 39.2〜39.5℃ N.M.R. （CDCl₃中、δ値） 9.30 （1H、ｓ） 7.17 （5H、ｓ） 6.17 （1H、ｄ） 5.47〜4.66 （11H、br） 3.16 （2H、ｄ） 1.98 （40H、br） 1.58 （33H、ｓ） 元素分析値（C₆₁H₉₃NO₃として） 計算値 実測値 Ｃ（％） 82.47 82.07 Ｈ（％） 10.55 10.59 Ｎ（％） 1.58 1.53 製造例 ３ Ｎ―デカプレニルアセチル―Ｌ―アラニル―Ｌ
―グルタミン 製造例１で得たＮ―デカプレニルアセチル―Ｌ
―アラニン22.7ｇを含有する塩化メチレン溶液
100mlを冷却しながらＮ，Ｎ―ジシクロヘキシル
カーボジイミド8.0ｇを加え、15分間撹拌する。
次に、Ｌ―グルタミン酸ジメチルエステル5.5ｇ
を加え、０℃に冷却しながら２時間撹拌した後、
氷浴を除いて室温でさらに３時間撹拌する。反応
終了後、析出したジシクロヘキシル尿素を別
し、液を減圧下に濃縮する。濃縮物25.6ｇをシ
リカゲル300ｇを充填したクロマトカラム上でベ
ンゼン―酢酸エチルの混液を用いてクロマトグラ
フ処理してＮ―デカプレニルアセチル―Ｌ―アラ
ニル―Ｌ―グルタミン酸ジメチルエステル14.7ｇ
を得る。 得られたＮ―デカプレニルアセチル―Ｌ―アラ
ニル―Ｌ―グルタミン酸ジメチルエステル14.7ｇ
に５％水酸化カリウムのエタノール溶液100mlを
加え、1.5時間加熱還流する。反応液を冷却後５
％塩酸水溶液500mlを加え、そしてイソプロピル
エーテルで抽出する。抽出液を水および飽和食塩
水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥しそして減
圧下に濃縮する。濃縮物13.9ｇをシリカゲル150
ｇで充填したクロマトカラム上でベンゼン―酢酸
エチルの混液を用いてクロマトグラフ処理して油
状物7.2ｇを得る。油状物をアセトン50mlに溶解
し、一夜冷蔵庫に放置する。析出した結晶を別
および乾燥して式 で表わされるＮ―デカプレニルアセチル―Ｌ―ア
ラニル―Ｌ―グルタミン酸4.6ｇを得る。このも
のの物性値を示せば下記のとおりである。 融 点 45.8〜47.6℃ N.M.R. （CDCl₃中、δ値） 10.50 （2H、ｓ） 7.40 （1H、br） 6.45 （1H、br） 5.48〜4.35 （11H、br） 1.98 （44H、br） 1.58 （36H、br） 元素分析値（C₆₂H₉₂N₂O₆・H₂Oとして） 計算値 実測値 Ｃ（％） 75.11 75.34 Ｈ（％） 10.29 10.29 Ｎ（％） 2.92 2.86 以下の構造式中、Ｄはデカプレニル基、を示
す。 次に本発明のデカプレニル置換アミノ酸誘導体
の生理学的効果を詳細に説明する。 (1) ワクシニア・ウイルス感染マウスに対する効
果 体重15ｇ前後のICR雌性マウス１群10匹にワ
クシニア・ウイルスの希釈液0.1mlを尾の基部
から２cmのところに静脈内注射し、接種後８日
目に尾の表面に出現した病変を１％―フルオレ
セイン―0.5％メチレンブル―混液で染色して
数えた。供試化合物は界面活性剤を用いて懸濁
液としてウイルス接種24時間前に50mg／Kgで腹
腔内投与し、界面活性剤のみの投与群に対する
病変数との対比により抗ウイルス作用を評価し
た。各供試化合物の阻止率を第１表に示す。

【表】 (2) 毒 性 50％致死量は20〜25ｇのddY雄性マウスを使
用して静脈内投与により求めた。その結果を第
２表に示す。

【表】 (3) ヒトインターフエロン誘発作用（in vitro） ヒト由来正常二倍体細胞（線維芽様細胞）に
供試化合物の25n mol濃度の懸濁液（エタノー
ル溶液としPBS（−）で希釈）を作用させ、
Edward Ａ Havell氏等の方法に準拠してイ
ンターフエロンを誘発させた。H.Ishitsuka氏
等のラジオアイソトープマイクロアツセー法を
用いて ³H―ウリジン取込阻害率で誘発された
インターフエロンを測定した。各供試化合物の
³H―ウリジン取込阻害率を第３表に示す。

【表】 (4) 抗ワクシニア・ウイルス作用（in vitro） アフリカミドリザル腎臓由来Vero細胞に供
試化合物の50n mol濃度の懸濁液（エタノール
溶液としこれをHanks培養液で懸濁）および
ウイル希釈液を作用させてウイルス・プラーク
形成阻害率によつて求めた。各供試化合物の阻
害率を第４表に示す。

【表】 以上の試験結果から明らかなように本発明の活
性成分は生体内でのインターフエロン誘起能を有
するのみならず、毒性が低く且つ優れた抗ウイル
ス作用を有する。また、当該活性成分はインター
フエロン活性と個々の抗ウイルス作用とはかなら
ずしも相関しないことから、当該活性成分の動物
レベルでの抗ウイルス作用は必ずしもインターフ
エロンのみならず、それ以外の宿主介在性の防禦
メカニズムが関与している可能性も考えられる。
ウイルスに起因する疾病としては、例えばヒトは
単純細疹などのヘルペス感染症、インフルエン
ザ、はしかなどの多数の症状が知られている。し
たがつて、本発明の活性成分をウイルス感染予防
および治療に対して使用する場合は、経口、経気
道、ならびに皮下、筋肉および静脈注射等の方法
で投与される。投与量は患者の年令、症状および
投与経路などの条件に応じて0.5〜20mg／Kgの範
囲、好ましくは３〜５mg／Kgの範囲で１日数回
（２〜４回）使用される。 本発明の活性成分は任意の慣用方法で投与用組
成物例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉末剤、
経口用液剤、眼科用液剤、坐剤、軟膏剤、注射剤
等に調製することができる。 本発明の活性成分を経口投与する場合には錠
剤、カプセル剤、顆粒剤または粉末剤とすればよ
い。これら経口投与用固形剤は通常用いられる賦
形剤、例えば無水けい酸、メタけい酸アルミン酸
マグネシウム、合成けい酸アルミニウム、乳糖、
砂糖、とうもろこし澱粉、微結晶セルロース、ヒ
ドロキシプロピル―スターチまたはグリシン、結
合剤例えばアラビヤゴム、ゼラチン、トラガン
ト、ヒドロキシプロピルセルロースまたはポリビ
ニルピロリドン、潤滑剤例えばステアリン酸マグ
ネシウム、タルクまたはシリカ、崩壊剤例えば馬
鈴薯澱粉、カルボキシメチルセルロースカルシウ
ム、あるいは湿潤剤例えばポリエチレングリコー
ル、ソルビタンモノオレート、ポリオキシエチレ
ン硬化ヒマシ油、ラウリル硫酸ナトリウム等を含
有してもよい。また特に、ソフトカプセル剤とす
るには、ポリエチレングリコールあるいは通常用
いられる油脂性基剤であるゴマ油、落花生油、胚
芽油、ミグリオール等の分別ココナツツ油等に
溶解または懸濁させて製造することができる。錠
剤、および顆粒剤は常法に従つてコーテイングし
てもよい。 経口用液体製剤は水性または油性乳濁剤溶液、
シロツプ剤等にすればよく、あるいは使用する前
に適当なビヒクルで再溶解し得る乾燥生成物にし
てもよい。このような液体製剤は普通に用いられ
る添加剤例えば乳化補助剤であるソルビツトシロ
ツプ、メチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシ
エチルセルロースなど、また乳化剤例えばレシチ
ン、ソルビタンモノオレート、ポリオキシエチレ
ン硬化ヒマシ油、非水性ビヒクル例えば分別ココ
ナツツ油、アーモンド油、落花生油、防腐剤例え
ばｐ―ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ―ヒドロキ
シ安息香酸プロピルまたはソルビン酸を添加して
もよい。さらにまたこれらの経口投与製剤には必
要に応じて保存剤、安定化剤などを含有せしめて
もよい。 また本発明の活性成分を非経口的な坐薬の形態
で投与する場合はカカオ脂、ウイテプゾール等
の親油性基剤、ポリエチレングリコール等の親水
性基剤等を用いて通常の方法により製造するか、
またはポリエチレングリコール、ゴマ油、落花生
油、胚芽油、分別ココナツツ油等の混合液をゼラ
チンシートに包んで直腸カプセルとして用いるこ
とができる。直腸カプセルは必要に応じてワツク
ス状物質でコーテイングしてもよい。 次にこの化合物を注射剤に用いる場合には油溶
液、乳化液、水溶液のような形態にすればよく、
これらの溶剤は通常用いられる乳化剤、安定化剤
などを含有させてもよい。 これら組成物は投与方法により当該化合物を１
％以上、好ましくは５％〜50％を含有させること
ができる。 次に本発明の製剤例を示す。 製剤例 １ 経口用硬カプセル剤 Ｎ―デカプレニルアセチル―Ｌ―アラニン25ｇ
およびポリオキシエチレンヒマシ油7.5ｇをアセ
トンに溶解し、次に無水けい酸25ｇを混合する。
アセトンを蒸発した後さらにカルボキシメチルセ
ルロースカルシウム５ｇ、とうもろこし澱粉５
ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース7.5ｇおよび
微結晶セルロース20ｇを混合し、30mlの水を加え
て練合しそして粒状化する。これをNo.24メツシユ
（B.S.）のスクリーンを付した造粒機（エツクペ
レツター・不二パウダル社製）にて造粒した。顆
粒は水分５％以下に乾燥しそしてNo.16メツシユ
（B.S.）のふるいでふるつた。次にこの粒子をカ
プセル充てん機で１カプセル当り190mgに充填し
た。 製剤例 ２ 経口用軟カプセル剤 Ｎ―デカプレニルアセチル―Ｌ―フエニルアラ
ニン50ｇおよびポリエチレングリコール（マクロ
ゴール―400）130ｇを混合して均一な溶液とす
る。別にゼラチン93ｇ、グリセリン19ｇ、Ｄ―ソ
ルビトール10ｇ、パラオキシ安息香酸エチル0.4
ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル0.2ｇおよび酸
化チタン0.4ｇの組成からなるゼラチン溶液を調
製しこれをカプセル皮膜剤として手動式平板打法
により内容物180mgを含有するソフトカプセルを
製造した。 製剤例 ３ 注射剤 Ｎ―デカプレニルアセチル―Ｌ―アラニル―Ｌ
―グルタミン酸５ｇ、落花生油適量およびベンジ
ルアルコール１ｇを混合し、さらに落花生油を使
用して全量を100c.c.とする。本溶液を無菌操作に
よりアンプルに１c.c.分注し溶閉する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 （式中Ａは―CH₂CO―の２価の基を示し、Ｒは
   アラニン、フエニルアラニンまたはアラニルグル
   タミン酸の残基を示す）で表わされるデカプレニ
   ル置換アミノ酸誘導体およびその酸付加塩。 ２ 一般式 （式中Ａは―CH₂CO―の２価の基を示し、Ｒは
   アラニン、フエニルアラニンまたはアラニルグル
   タミン酸の残基を示す）で表わされるデカプレニ
   ル置換アミノ酸誘導体およびその酸付加塩を活性
   成分として含有する抗ウイルス剤。