JPH0144200B2 - - Google Patents

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JPH0144200B2
JPH0144200B2 JP59153273A JP15327384A JPH0144200B2 JP H0144200 B2 JPH0144200 B2 JP H0144200B2 JP 59153273 A JP59153273 A JP 59153273A JP 15327384 A JP15327384 A JP 15327384A JP H0144200 B2 JPH0144200 B2 JP H0144200B2
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JP
Japan
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csf
human
cells
manufactured
culture
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Masayoshi Ono
Hitoshi Nomura
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Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
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    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
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Description

【発明の詳細な説明】
本発明は骨髄細胞の分化増殖を促進する因子
（Colony Stimulating Factor）（以下「CSF」と
する）に関し、特にヒト好中球への分化増殖促進
作用を有し、他系統のコロニーの形成促進は認め
られない新規なCSF（ヒトＧ−CSF）に関する。 〔産業上の利用分野〕 本発明のCSFは白血球減少症等の治療薬として
その効果が期待される他、臨床検査用試薬や研究
用試薬として、使用しうる。 〔従来の技術〕 CSFは動物の骨髄細胞に作用してマクロフアー
ジまたは顆粒球への分化増殖を促進する物質であ
り、今までに数種のものが報告されている。例え
ばStanley E.R.等は、健常人尿より分子量45000
の糖蛋白質でマウスの骨髄細胞に対してはコロニ
ー形成促進活性を示すが、ヒト骨髄細胞に対して
はコロニー形成促進活性が認められないCSFを純
化したと報告している（Fed.Proc.34巻、2272〜
2278.1975年）。またBurgess A.W.等はヒト胎盤
から（Blood49巻573〜583、1977年）（Blood54
巻614〜627頁、1979年）、Shah R.G.等はヒト末
梢血単球、PHA刺激リンパ球から（Blood50巻
811頁、1977年）、Fojo S.S.等はヒト肺の培養上
清から（Blochemistry 17巻、3109〜3116頁、
1978年）それぞれヒトに有効なCSFを部分精製し
たことを報告している。これらのCSFは、いずれ
も分子量25000〜41000の範囲の糖蛋白質であり、
ヒト骨髄非付着性細胞の直接作用して好中球、マ
クロフアージ、好酸球のコロニーを形成する。し
かしいずれの場合も材料に制約があることから、
いま完全に純化されたCSFを得るには至つていな
い。以上はヒト正常組織由来のCSFであるが、近
年ある種のヒト腫瘍細胞において、CSFを産生す
るものが報告されている。例えばAsano S.等は
ヌードマウス移植肺癌細胞から（Blood49巻845
〜852頁、1977年）、Okabe T.等は下顎部扁平上
皮癌株化細胞、甲状腺癌株化細胞から（Cancer
Res.38巻3910〜3917頁、1978年）（JNCI69巻1235
〜1243頁、1982年）（J.Cell Physiol.110巻 43〜
49頁、1982年）、Wu.M.C.等はすい臓癌株化細胞
から（J.Biol.Chem.254巻6226〜6228頁、1979年）
（J.Clin Invest.65巻772〜775頁、1980年）、
Dipersio J.F.等は、Ma−lignant Histiocytoma
患者から樹立したGCT Cell Lineから（Blood51
巻1068頁、1978年）（Blood56巻717〜727頁、
1980年）、またGolde D.W.等はHairy Ce−ll
Leukemia患者から樹立したMO Cell Lineから
（Blood52巻1068〜1072頁、1978年）（Blood57巻
13〜21頁、1981年）、それぞれCSFを得たことを
報告している。いずれの場合もヒトに有効なCSF
は分子量が27000〜34000の範囲に含まれる糖蛋白
質であり、等電点はｐ＝4.5〜5.7の間の値を有
するものである。これらのうちGCT Cell Line
の培養上清から得られるCSFは比活性1.12×
106U／mg、MO Cell Lineの培養上清からのCSF
は3.5×106U／mgの純度までそれぞれ精製が進め
られているが、この他の上記CSFも含めいずれも
完全純化には至つていないのが現状である。 〔発明の開示〕 本発明者等は口腔底癌患者の腫瘍細胞から、
CSFの極めて高い産生能を有し、かつ良好な増殖
能を示す細胞株の樹立に成功した。この細胞株は
「CHU−１」と命名され、フランス国のパスツー
ル。インスチチユート コレクシヨン ナシヨナ
ル デ カルツレス デ ミクロオルガニズムス
（COLLECTION NATIONALE DE
CULTURES DE MICROORGANISMES）（C.
N.C.M.）に1984年７月11日付受託番号「Ｉ−
315」として寄託されている。 本発明者等はこのCHU−１をイン−ビトロで
培養し、その培養上清から、ヒト好中球のコロニ
ー形成促進活性を示し、分子量約19000（ドデシル
硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動による定量）、比活性が3.94×107U／mg≦の極
めて純度の高いCSFを得ることに成功した。すな
わち本発明は次の理化学的性質を有するCSFであ
り、これは文献未記載の新規なものである。 「理化学的的性質」 (i) 分子量：ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動法による測定で19000
±1000。 (ii) 等電点：以下の表の−１に示す三つの等電点
（Ａ、Ｂ、Ｃ）のうち少なくとも１つを有する。
〔実施例〕
実施例 １ 「CHU−１」の樹立 (i) 腫 瘍 著明な好中球の増多が認められた口腔底癌患
者の腫瘍をnu／nuマウス移植した。この腫瘍
は移植後10日後に著明な腫瘍の増大と好中球の
増多が認められた。この腫瘍を移植12日後に無
菌的に摘出し、１〜２mm3角に細切し、これを
以下の如く培養した。 (ii) 初代培養 上記細切した腫瘍塊10〜15片を50mlのプスチ
ツク遠心管に入れ、５mlのトリプシン溶液（ト
リプシン0.25％、EDTA0.02％含む）を加え、
37℃の温溶中で10分間振とうしたのち上清を捨
て、再度、同トリプシン溶液５mlを加え、37℃
で15分間撹拌しながらトリプシン消化を行なつ
た。上清の細胞浮遊液を回収し、ウシ胎児血清
を１ml加えてトリプシンの作用を止めたのち氷
中に保存した。 以上の操作を再度行ない細胞浮遊液を回収
し、前回の分と合わせて1500r.p.m.10分間の遠
心より細胞ペレツトを得た。この細胞ペレツト
をウシ胎児血清を10％含むＦ−10にて２回洗滌
したのち、25cm2のプラスチツク培養フラスコに
細胞濃度５×106個／フラスコになるようにし
て植え込んだ。ウシ胎児血清を10％含有するＦ
−10培養液を用い、炭酸ガスインキユベーター
（炭酸ガス濃度５％、湿度100％）中にて一晩イ
ンキユベートしたのち、上清を非付着細胞と共
に除去し、新しい培養液を加えて培養を継続し
た。培養開始後６日目に細胞がいつぱいに増殖
したので、この時点で培養液を新しいものに替
えた。翌日、この培養液を捨て、PRMI1640で
５倍希釈した抗マウス赤血球（Cappel社製）
２mlと同じくRPMI1640で2.5倍希釈したモル
モツト補体（極東製薬社製）２mlを加え37℃、
20分間インキユベートした。インキユベーシヨ
ン終了後ウシ胎児血清を10％含むＦ−10にて２
回洗滌し、nu／nuマウス由来のフイブロブラ
ストを除去し、引き続きウシ胎児血清を10％含
むＦ−10培養液を加えて培養を行なつた。 (iii) 継代培養 初代培養において細胞が完全に密に増殖した
時点で再度ウシ胎児血清10％を含むＦ−10培養
液にて液替えを行ない、翌日継代を行なつた。
駒込ピペツトにて培養液を除去したのち、あら
かじめ37℃に加温したEDTAを0.02％含む生理
食塩水を２ml加え、ホツトプレート上で37℃２
分間加温後、ピペツテイングにて細胞をはく離
せしめた。ウシ胎児血清0.5mlを添加後、15ml
の遠心管に細胞浮遊液を移し、1500r.p.m.10分
間の遠心により細胞ペレツトを得た。１mlのＦ
−10培養液に細胞を浮遊せしめ、1/10に分割し
て継代を行なつた。以後、同様の操作により４
〜５日間隔にて継代を行なつた。このようにし
て得た細胞の増殖能を調べるため、５×
104Cells／mlの細胞浮遊液を作成し、直径35mm
のプラステイツクデイツシユに１mlずつ植え込
みを行ない（20枚）炭酸ガスインキユベーター
にて培養し、一定時間の経過毎にデイツシユを
取り出し、接着細胞を回収して細胞数を算定し
た。この結果は第４図に示した。細胞植え込み
後、約20〜24時間後に増殖が始まり、平均倍化
時間（PDT）は約20時間であつた。 実施例 ２ CSFの単離 上述の如くして樹立された細胞が完全に密に増
殖した150cm2の培養フラスコ２本より細胞を回収
し、これをウシ胎児血清を10％含有するＦ−10培
養液500mlに浮遊させたのち、1580cm2のガラス製
ローラーボトル（Belco社製）に移し、0.5r.p.m.
の速度で回転培養を行なつた。細胞がローラーボ
トルの内壁に完全に密に増殖した時点で培養液を
血清を含まないRPMI1640に交換し、４日間培養
したのち培養上清を回収し、ウシ胎児血清を10％
含有するＦ−10を加えて培養を続行する。３日間
培養したのち再び血清を含まないRPMI1640に液
替を行ない、４日後に培養上清を回収した。以下
同様の操作をくり返すことにより、毎週１ボトル
より500mlずつの血清を含まない培養上清が得ら
れ、しかもこの方法によりかなり長期間にわたつ
て細胞を維持し、培養上清を回収することが可能
であつた。 得られた培養上清５を１バツチとし、これに
0.01％ツイーン20を添加後Hollow Fi−ber DC
−４およびAmicon PM−10（アミコン社製）を
用いた限外ろ過法により約1000倍に濃縮したの
ち、これを以下の順序で精製した。 (i) 直径4.6cm、長さ90cmのUltrogel AcA54カラ
ム（LKB社製）を用い、0.15M NaClおよび
0.01％ツイーン20（半井化学社製）を含む
0.01Mトリス塩酸緩衝液（PH7.4）を用いて前
記濃縮した培養上清５mlを流速約50ml／時間で
ゲルろ過した。尚カラムはあらかじめウシ血清
アルブミン（分子量67000）、オボアルブミン
（分子量45000）、チトクロームＣ（分子量12400）
にてキヤリブレーシヨンを行なつた。ゲルろ過
終了後各フランクシヨンより0.1mlずつを採取
し、10倍に希釈した後、前述した「CSAの測
定方法(b)」により活性を示す画分を調べた。こ
の結果、先ずVe＝400〜700mlの画分がマクロ
フアージ優位のCSAを示し、Ve＝800〜1200ml
の画分が顆粒球優位のCSAを示すことがわか
つたので、後者の画分を集めPM−10（アミコ
ン社製）を用いる限外ろ過器によつて約５mlに
に濃縮した。 (ii) 上記濃縮画分にｎ−プロパノール（東京化成
社製、アミノ酸配列決定用）を30％含む0.1％
トリフルオロ酢酸水溶液を添加し、氷中に15分
程度放置したのち、15000r.p.m.10分の遠心に
より沈殿を除去した。次いで先のｎ−プロパノ
ールおよびトリフルオロ酢酸を含む水溶液で平
衡化したμBondapak C18カラム（Wa−ters社
製、セミ分取用、８mm×30cm）に吸着後、30〜
60％の直線の直線濃度勾配のｎ−プロパノール
を含む0.1％トリフルオロ酢酸水溶液で順次溶
出した。高速液体クロマト装置は日立685−50
型を、検出は日立638−41型検出器（いずれも
日立製作所社製）を用い、220nｍと280nｍの
吸収を同時に測定した。溶出後、各画分より
10μを分取100倍希釈したのち、前述の
「CSAの測定方法(b)」により活性を示す画分を
調べた。この結果、ｎ−プロパノール40％にて
溶出されるピークに活性が認められたので、こ
のピークを集め再度同条件で再クロマトを行な
い上記と同様にしてCSAを調べたところ、や
はりｎ−プロパノール40％の位置のピークに活
性が認められたので、このピークを集め（４フ
ラツシヨン＝４ml）凍結乾燥した。 (iii) 上記凍結乾燥粉末をｎ−プロパノールを40％
含む0.1％トリフルオロ酢酸水溶液200μに溶
解し、TSK−G3000SWカラム（東洋曹達社
製、2.5mm×60cm）を用いた高速液体クロマト
グラフイにかけた。溶出は同水溶液により0.4
ml／分の流速で行ない、フラクシヨンコレクタ
ーFRAC−100（フアルマシア社製）により0.4
mlずつ分取した。分取した各画分について
CSAを前記と同様にして調べた結果、保持時
間が37〜38分の画分（分子量約２万に相当）に
活性が認められたので、この画分を回収し、更
に分析用μBondapak C18カラム（4.6mm×30
cm）による精製を施したのち、メインピークを
回収し凍結乾燥した。 実施例 ３ 理化学的性質 実施例２で得た本発明のCSFの理化学的性質を
調べるため次の分析、試験を行なつた。 (i) 分子量 ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動（SDS−PAGE）により行
なつた。電気泳動装置はGE−２／４（フアル
マシア社製）、ゲルはＴ＝15％、Ｃ＝2.6％の
ポリアクリルアミドスラブゲル（70mm×70mm
×３mm）および濃縮ゲル（Ｔ＝３％、Ｃ＝20
％）を用いた。試料はあらかじめ0.64M2−
メルカプトエタノールにドデシル硫酸ナトリ
ウムを濃度が２％になるように加えた溶液中
で３分間煮沸後、尿素を4Mになるように添
加することにより変性させておいたものを
2μｇ用いた。120Vで３時間泳動したのちゲ
ルを取り出し、メタノール：酢酸：水（４：
１：５）にて固定し、銀染色（Silver
Stain：バイオラツド社製によりバンドを検
出した。分子量マーカーとしてウシ血清アル
ブミン（BSA、分子量67000）、オボアルブ
ミン（OVA、45000）、チトクローム（Cyt.
C、12000）、インスリン（Ins.A鎖：3300、
Ｂ鎖：2400）を同様に処理して用いた。この
結果、分子量約18000の単一バンドが認めら
れた。測定結果は第１図に示す。 ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動（SDS−PAGE）により行
つた。電気泳動装置はPROTEANTM16cm
（バイオラツド社製）、ゲルはＴ＝15％、Ｃ＝
2.6％のポリアクリルアミドスラブゲル（140
mm×160mm×1.5mm）および濃縮ゲル（Ｔ＝３
％、Ｃ＝20％）を用いた。試料はあらかじめ
0.64M2−メルカプトエタノールにドデシル
硫酸ナトリウムを濃度が２％になるように加
えた溶液中で３分間煮沸し変性させておいた
ものを4μｇ用いた。30ｍＡ定電流で４時間
泳動したのちゲルを取り出し、0.25％クーマ
シーブリリアントブル−R250（シグマ社製）
による染色にてバンドを検出した。分子量マ
ーカーとしてホスホリラーゼＢ（Ph−
osphorylase Ｂ、分子量92500）、ウシ血清ア
ルブミン（BSA、67000）オボアルブミン
（OVA、45000）、カルボニツクアンヒドラー
ゼ（Carbonic Anhydrase、31000）、ソイビ
ーントリプシンインヒビター（Soybean
Trypsin Inhibitor、21500）、リゾチーム
（Lysozyme、14400）を同様に処理して用い
た。この結果、分子量約19000の単一バンド
が認められた。測定結果は第５図に示す。 以上およびの結果から、本発明のCSF
の分子量はSDS−PAGEによる測定で19000
±1000であると考えられる。 (ii) 等電点 フラツトベツド型等電点電気泳動装置FBE
−3000（フアルマシア社製）を用いた。PH４〜
6.5のPharmalyte（フアルマシア社製）及び4M
尿素を含むポリアクリルアミドゲル（Ｔ＝５
％、Ｃ＝３％、115mm×230mm）にて30W定電力
（最大電圧2000V）で２時間泳動を行なつたの
ち、30％メタノール／10％トリクロル酢酸／35
％スルホサリチル酸により固定し、次いでクマ
ーシーブリリアントブルーＲ−250染色を行な
つた。等電点マーカーとしてLow ｐ Kit
PH2.5〜6.5（フアルマシア社製）を用いた。 PH４〜6.5の間で分離を検討したところｐ
＝5.73、6.03、6.37の３本のバンドが認められ
た。このうちｐ＝5.73および6.03の２本のバ
ンドが主たる成分であつた。この結果は第２図
に示す。図中CSF0、CSF1、CSF2は等電点の
異なる本発明のCSFを示す。尚、尿素不存在下
で同様に等電点電気泳動を行つた結果ｐ＝
5.52、5.80および6.13の３本のバンドが認めら
れた。この方法による等電点測定を10回繰り返
し行つた結果、その値は表−１に示すとおりで
あり、等電点Ａ、Ｂ、Ｃは互いにほぼ0.3ずつ
の相違が常に見られた。 この３本のバンドとCSAとの相関をみる目
的で実施例２−(iii)におけるTSK−G3000SWカ
ラムにより精製した段階のCSFを、調整用等電
点電気泳動装置（FBE−3000、フアルマシア
社製）を用いて分離した。尚、分離条件は以下
の通りである。 試 料：凍結乾燥粉末500μｇを4M尿素を含む
0.05Nリン酸１mlに溶解。 支持体：15ｇのSephadex−IEF（フアルマシア
社製）に、4M尿素、0.1％ツイーン20を含む
２回蒸留水225mlを加えたのち、更に12mlの
フアルマライト４−6.5（フアルマシア社製）
を加え室温にて一晩放置して膨潤せしめた。
膨潤後、吸引びんを用いて充分脱気を行つた
のち230mm×230mmのガラスプレート上に５mm
厚の均一なゲル層を作成した。プレート上最
も均一な部位を選んで50mm×230mmのゲルを
残し、他の部分のゲルは除去した。 電極液：（陽極）0.1Mリン酸、（陰極）0.1M
NaOHを電極ストリツプ（６×10mm、フア
ルマシア社製）に含ませ、ゲルの両端に接し
て平行に置く。パワーサプライ
（ECPS2000／300、フアルマシア社製）を用
いて定電力。 前泳動：8W45分間泳動に行つた。 試料添加：陽極から５cmの位置にて、１cm巾に
ゲルをかき取り、試料液を混合したのちもと
の位置にもどした。 本泳動：前述のパワーサプライを用い、50W定
電力、４時間泳動を行なつた。 泳動終了後、ゲルプレートをとり出し、分画
格子を用いて26分画に分け、各分画のPHを測定
後、各分画のゲルをかき取りポリプロピレン製
ミニカラム（ムロマツク、室町化学社製）中に
移し４mlの4M塩酸グアニジンを含む0.1％トリ
フルオロ酢酸−水溶液により抽出を行つた。各
抽出画分より5μをとり２mlの１％ウシ血清
アルブミンを含むRPMI1640培養液にて希釈し
たのち、前述した「CSAの測定方法(b)」に従
つてCSAを調べた。この結果溶出全画分中に
三つの活性ピークが存在し、各活性ピークの位
置は前述の等電点ｐ＝5.73、6.03、6.37とよ
く一致した。ここでみられた等電点の違いが、
ペプタイド部分に起因するのか、あるいは糖鎖
（特にシアル酸の付加数）に起因するのかを明
らかにする目的で、ノイラミニダーゼ処理した
試料と未処理の試料について等電点電気泳動を
行つたところ、後者には３本のバンドが認めら
れたのに対し、前者はｐ＝6.37のバンドのみ
が観察された。またノイラミダーゼ処理の代り
に6Mグアニジン塩酸水溶液に試料を溶解し、
1N塩酸でPHを1.5としたのち、80℃、120分の
処理を行つた試料について同様に等電点電気泳
動を行つたところ、同様なバンドの移動が認め
られた。尚、ノイラミニダーゼ処理を行つても
CSAは全く損なわれなかつた。この結果から
等電点の違いはシアル酸の付加数の違いによる
ものと推定される。 (iii) 紫外部吸収 試料をｎ−プロパノールを40％含む0.1％ト
リフルオロ酢酸をレフアレンス（reference）
とし、分光光度計を用いて紫外部吸収を調べた
結果、第３図に示した如く280nｍに極大吸収、
250nｍに極小値を示した。 (iv) 蛋白質部分のアミノ酸組成 試料を常法により加水分解し、その蛋白部分
のアミノ酸組成を日立835アミノ酸自動分析装
置（日立製作所社製）を用いて特殊アミノ酸分
析法により分析した。この結果を表−２に示し
た。尚、加水分解条件は次の如くである。 6N HCl、110℃、24時間、真空中 4Nメタンスルホン酸＋0.2％３−（２−ア
ミノエチル）インドール、110℃、24時間、
48時間、72時間、真空中 試料は、40％ｎ−プロパノールと0.1％トリ
フルオロ酢酸を含む溶液（1.5ml）に溶かした
後、各々0.1mlをとり、乾燥窒素ガスにより乾
燥させた後、又はの試薬を加えて真空封管
し、加水分解に供した。 表中、実測値はの24時間値との24、48、
72時間値の合計４回の平均値である。但し
Thr、Ser、１／2Cys、Met、Val、Ileおよび
Trpは以下の方法で算出した。（生化学実験講
座、タンパク質化学（東京化学同人出版）を
参照） ●Thr、Ser、１／2Cys、Metはの24、48、
72時間値の経時変化をとり、零時間に補外。 ● Val、Ileはの72時間値。 ● Trpはの24、48、72時間値の平均値。 表中のアミノ酸残基数はLeuを33個と仮定し
て算出した予測値である。一般に上記の如き補
正が必要なアミノ酸は加水分解時に一部又はか
なりの部分が破壊されるか、あるいは加水分解
を受け難いものであり、さらにProは発色率が
低い等のことから、それ等のアミノ酸の実測値
（nmol）、従つてそれから算出される残基数は
実際よりも低い値を示す傾向がある（例えば前
述の生化学実験講座を参照）。
【表】
〔発明の効果〕
本発明のCSFは次の〜の実験結果から明ら
かな如くほぼ完全に純化されたものである。即ち
逆相系および分子ふるいに基づく高速液体クロ
マトグラフイーにおいて単一のピークを示し、活
性ピークもこれと一致する。SDS−PAGEにて
単一のバンドを与える。等電点電気泳動法によ
り３つの異なる等電点を持つた成分に分離される
が、各成分はいずれもCSAを示す単一成分であ
る。また、酵素的あるいは化学的に末端シアル酸
の除去を行なうと、等電点電気泳動においても単
一のバンドとなる。Ｎ末端21残基迄のアミノ酸
配列分析において、各ステツプで出現するPTH
アミノ酸は、常に一種類である。従来報告され
ているヒトに有効なCSFの純度と比較すると、比
活性において約10倍高い値が得られている。 このように純化された形のCSFは未だ例を見な
いものであり、本発明のCSFは遺伝子工学技術等
を用いたCSFの大量生産技術の確立のたための材
料として極めて好適であるほか、臨床検査用試薬
として、あるいは研究用試薬として使用しうる。
また骨髄移植時の骨髄細胞の増殖促進、放射線被
爆時の骨髄組織の回復促進、制癌剤使用後の白血
球レベル回復促進あるいは本発明のCSFが骨髄細
胞の好中球への分化増殖促進作用を有することか
ら、抗生物質で治療できない重症感染症等の治療
薬としての効果等が期待される。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明のCSFのSDS−PAGEの結果を
示す。図中●が本発明のCSFである。第２図は
4M尿素存在下における本発明のCSFの等電点電
気泳動の結果を示す。第３図は本発明のCSFの
UV吸収スペクトルである。第４図はCHU−１
の増殖能を示す。第５図は第１図と同様本発明の
CSFのSDS−PAGEの結果を示す。図中●が本発
明のCSFである。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ ヒト口腔底癌の腫瘍細胞等から得ることがで
    きる物質であつて次の理化学特性を有するヒトＧ
    −CSF。 (i) 分子量：ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアク
    リルアミドゲル電気泳動法による測定で19000
    ±1000。 (ii) 等電点：以下の表−１に示す三つの等電点
    （Ａ、Ｂ、Ｃ）のうち少なくとも１つを有する。 【表】 (iii) 紫外部吸収：280nｍに極大吸収を有し、
    250nｍに極小値をもつ。 ２ 等電点pIが特許請求の範囲第１項の表−１の
    Ａである特許請求の範囲第１項記載のヒトＧ−
    CSF。 ３ 等電点pIが特許請求の範囲第１項の表−１の
    Ｂである特許請求の範囲第１項記載のヒトＧ−
    CSF。 ４ 等電点pIが特許請求の範囲第１項の表−１の
    Ｃである特許請求の範囲第１項記載のヒトＧ−
    CSF。
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ES545502A ES8609365A1 (es) 1984-07-25 1985-07-23 Un factor estimulante de colonias (csf)
AR85301080A AR242835A1 (es) 1984-07-25 1985-07-24 Factor estimulante de colonias exclusivamente para su uso como reactivo y procedimiento de preparacion.
DK337885A DK166731B1 (da) 1984-07-25 1985-07-24 Human granulocyt-kolonistimulerende faktor (hg-csf), fremgangsmaade til dens fremstilling samt farmaceutiske praeparater indeholdende faktoren
FI852903A FI83881C (fi) 1984-07-25 1985-07-25 Foerfarande foer erhaollande av en terapeutiskt anvaendbar kolonistimulerande faktor csf.
AT85109336T ATE35271T1 (de) 1984-07-25 1985-07-25 Csf und verfahren zu seiner herstellung.
DE8585109336T DE3563444D1 (en) 1984-07-25 1985-07-25 Novel csf and method for obtaining the same
EP85109336A EP0169566B2 (en) 1984-07-25 1985-07-25 hG-CSF and method for obtaining the same
FI895231A FI84275C (fi) 1984-07-25 1989-11-03 Kolonistimulerande faktor csf.
SG415/91A SG41591G (en) 1984-07-25 1991-06-03 Novel csf and method for obtaining the same
HK504/91A HK50491A (en) 1984-07-25 1991-07-04 Novel csf and method for obtaining the same
NL930141C NL930141I2 (nl) 1984-07-25 1993-11-12 CSF en werkwijze voor de bereiding hiervan.
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SG (1) SG41591G (ja)
ZA (1) ZA855478B (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010131382A1 (ja) 2009-05-14 2010-11-18 Fukuda Keiichi 筋肉修復促進剤

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61227526A (ja) * 1984-07-25 1986-10-09 Chugai Pharmaceut Co Ltd 新規なコロニー刺激因子
US5837229A (en) * 1985-02-05 1998-11-17 Chiron Corporation Uses of recombinant colony stimulating factor-1
US5792450A (en) * 1985-02-05 1998-08-11 Chiron Corporation Purified human CSF-1
US5422105A (en) * 1985-02-05 1995-06-06 Cetus Oncology Corporation Use of recombinant colony stimulating factor 1
EP0209601B1 (en) * 1985-02-05 1993-12-15 Cetus Oncology Corporation Recombinant colony stimulating factor-1
US5573930A (en) * 1985-02-05 1996-11-12 Cetus Oncology Corporation DNA encoding various forms of colony stimulating factor-1
US5556620A (en) * 1985-02-05 1996-09-17 Cetus Oncology Corporation Use of recombinant colony stimulating factor-1 to enhance wound healing
US6103224A (en) * 1985-02-05 2000-08-15 Chiron Corporation N∇2 CSF-1 (short form) and carboxy truncated fragments thereof
US6156300A (en) * 1985-02-05 2000-12-05 Chiron Corporation Point mutants of N∇2 CSF-1 and carboxy truncated fragments thereof
EP0215126B1 (en) * 1985-02-08 1991-07-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Human granulocyte colony stimulating factor
US5532341A (en) * 1985-03-28 1996-07-02 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Human pluripotent hematopoietic colony stimulating factor
JPS63500636A (ja) * 1985-08-23 1988-03-10 麒麟麦酒株式会社 多分化能性顆粒球コロニー刺激因子をコードするｄｎａ
US6004548A (en) * 1985-08-23 1999-12-21 Amgen, Inc. Analogs of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor
US4810643A (en) * 1985-08-23 1989-03-07 Kirin- Amgen Inc. Production of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor
DE3681551D1 (de) * 1985-09-30 1991-10-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Menschlicher granulozyten-colony stimulierender faktor.
JPH0618778B2 (ja) * 1985-10-04 1994-03-16 中外製薬株式会社 白血球減少症治療剤
NZ218336A (en) * 1985-12-09 1991-08-27 Kirin Amgen Inc Monoclonal antibodies to human pluripotent granulocyte colony stimulating factor (hpg-csf)
ES2039209T5 (es) * 1986-01-22 1996-07-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Compuesto farmaceutico que promueve el restablecimiento de la capacidad hemopoyetica.
EP0231819B1 (en) * 1986-01-22 1992-04-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Pharmaceutical agent for the treatment of myelogenous leukemia
US5863531A (en) * 1986-04-18 1999-01-26 Advanced Tissue Sciences, Inc. In vitro preparation of tubular tissue structures by stromal cell culture on a three-dimensional framework
US5160490A (en) * 1986-04-18 1992-11-03 Marrow-Tech Incorporated Three-dimensional cell and tissue culture apparatus
US5510254A (en) * 1986-04-18 1996-04-23 Advanced Tissue Sciences, Inc. Three dimensional cell and tissue culture system
US5032508A (en) * 1988-09-08 1991-07-16 Marrow-Tech, Inc. Three-dimensional cell and tissue culture system
US4963489A (en) * 1987-04-14 1990-10-16 Marrow-Tech, Inc. Three-dimensional cell and tissue culture system
US5266480A (en) * 1986-04-18 1993-11-30 Advanced Tissue Sciences, Inc. Three-dimensional skin culture system
ZA872705B (en) * 1986-04-22 1987-10-05 Immunex Corporation Human g-csf protein expression
GR871067B (en) * 1986-07-18 1987-11-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Process for producing stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony stimulating factor
JP2583770B2 (ja) * 1986-09-17 1997-02-19 大塚製薬株式会社 遺伝子
JPH0725689B2 (ja) * 1986-10-07 1995-03-22 中外製薬株式会社 顆粒球コロニ−刺激因子を含有する徐放性製剤
JPH0618781B2 (ja) * 1986-10-18 1994-03-16 中外製薬株式会社 感染症治療剤
US5194592A (en) * 1986-12-23 1993-03-16 Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. Monoclonal antibodies to novel polypeptide derivatives of human granulocyte colony stimulating factor
NO176799C (no) * 1986-12-23 1995-05-31 Kyowa Hakko Kogyo Kk DNA som koder for et polypeptid, rekombinant plasmid som koder for og kan uttrykke et polypeptid og fremgangsmåte for fremstilling av dette polypeptid
US5214132A (en) * 1986-12-23 1993-05-25 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Polypeptide derivatives of human granulocyte colony stimulating factor
US20030232010A2 (en) * 1988-03-29 2003-12-18 Immunomedics, Inc. Improved cytotoxic therapy
CA1329119C (en) * 1988-03-29 1994-05-03 Milton David Goldenberg Cytotoxic therapy
CA1339071C (en) * 1988-08-24 1997-07-29 Koichiro Tsuji Thrombus control agent
US5104651A (en) * 1988-12-16 1992-04-14 Amgen Inc. Stabilized hydrophobic protein formulations of g-csf
US20020177688A1 (en) * 1988-12-22 2002-11-28 Kirin-Amgen, Inc., Chemically-modified G-CSF
US6166183A (en) * 1992-11-30 2000-12-26 Kirin-Amgen, Inc. Chemically-modified G-CSF
EP0401384B1 (en) * 1988-12-22 1996-03-13 Kirin-Amgen, Inc. Chemically modified granulocyte colony stimulating factor
JPH0322973A (ja) * 1989-01-19 1991-01-31 Wan Shen-Yuan ヒトヘパトーム細胞系によるコロニー形成促進因子（ＣＳＦｓ）の構成性産生
JPH04502164A (ja) * 1989-10-10 1992-04-16 アムジエン・インコーポレーテツド 犬科・猫科動物における感染の治療または予防のための化学組成物及び方法
US5147799A (en) * 1990-04-25 1992-09-15 Isia Bursuker Repopulation of macrophages and granulocytes using transforming growth factor-beta
DE69233336T2 (de) * 1991-02-26 2005-03-31 Astrazeneca Ab Vektor
JP3507486B2 (ja) * 1991-03-15 2004-03-15 アムジエン・インコーポレーテツド 顆粒球コロニー刺激因子の肺内投与
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US20030053982A1 (en) * 1994-09-26 2003-03-20 Kinstler Olaf B. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US6979442B1 (en) 1998-08-17 2005-12-27 Pfizer Inc. Stabilized protein compositions
AU770131B2 (en) 1999-01-06 2004-02-12 Xencor, Inc. Nucleic acids and proteins corresponding to mutants of G-CSF with granulopoietic activity
US7208473B2 (en) * 1999-01-06 2007-04-24 Xencor, Inc. Nucleic acids and protein variants of hG-CSF with granulopoietic activity
WO2000044785A1 (en) * 1999-01-29 2000-08-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Gcsf conjugates
US6555660B2 (en) * 2000-01-10 2003-04-29 Maxygen Holdings Ltd. G-CSF conjugates
US6646110B2 (en) * 2000-01-10 2003-11-11 Maxygen Holdings Ltd. G-CSF polypeptides and conjugates
US6831158B2 (en) * 2000-01-10 2004-12-14 Maxygen Holdings Ltd. G-CSF conjugates
US6926898B2 (en) 2000-04-12 2005-08-09 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US8435939B2 (en) 2000-09-05 2013-05-07 Biokine Therapeutics Ltd. Polypeptide anti-HIV agent containing the same
US7118737B2 (en) * 2000-09-08 2006-10-10 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Polymer-modified synthetic proteins
FR2820979B1 (fr) 2001-02-22 2004-03-12 Didier Pourquier Nouvelle application therapeutique du g-csf
KR100961859B1 (ko) * 2001-07-11 2010-06-09 맥시겐 홀딩스 엘티디 지-씨에스에프 접합체
SI21102A (sl) 2001-12-19 2003-06-30 LEK, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov, d.d. Postopek za izolacijo biološko aktivnega granulocitne kolonije stimulirajočega dejavnika
WO2005003296A2 (en) 2003-01-22 2005-01-13 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
CA2841097A1 (en) 2001-12-21 2003-07-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin and g-csf fusion proteins
EP2426139B1 (en) 2002-08-27 2014-10-01 Biokine Therapeutics Ltd. CXCR4 antagonist and use thereof
KR20080027291A (ko) * 2005-06-01 2008-03-26 맥시겐 홀딩스 엘티디 피이지화된 지-씨에스에프 폴리펩타이드 및 그 제조방법
EP3011961B1 (en) 2006-12-21 2020-11-11 Biokine Therapeutics LTD. 4f-benzoyl-tn14003 for the mobilisation of hematopoietic progenitor cells in view of transplantation
EP2396023A2 (en) 2009-02-11 2011-12-21 Yeda Research and Development Co. Ltd. Short beta-defensin-derived peptides
US9427456B2 (en) 2009-06-14 2016-08-30 Biokine Therapeutics Ltd. Peptide therapy for increasing platelet levels
HUP1200171A1 (hu) 2012-03-19 2013-09-30 Richter Gedeon Nyrt Módszerek polipeptidek elõállítására
WO2013160895A1 (en) 2012-04-24 2013-10-31 Biokine Therapeutics Ltd. Peptides and use thereof in the treatment of large cell lung cancer
MX2017016844A (es) 2015-07-16 2018-08-15 Biokine Therapeutics Ltd Composiciones y procedimientos para tratar cancer.
CA3014530A1 (en) 2016-02-23 2017-08-31 Biolinerx Ltd. Methods of treating acute myeloid leukemia
KR102256542B1 (ko) * 2019-07-12 2021-05-25 차원방 호안보강 및 확장을 위한 호안의 확장매립 시공방법

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4135975A (en) * 1977-12-14 1979-01-23 Lichtman Marshall A Obtaining human cell lines that elaborate colony stimulating activity for marrow cells of man and other species and methods of preparing same
JPS54140789A (en) * 1978-04-22 1979-11-01 Jitsuken Doubutsu Chuo Kenkiyu Culturing of colony stimulating factor producing tumor cell
US4230697A (en) * 1978-07-03 1980-10-28 Morinaga Milk Industry Co. Ltd. Virus-inactivated HGI-glycoprotein capable of stimulating proliferation and differentiation of human granulocyte, process for preparing same and leukopenia curative containing same
US4342828A (en) * 1979-07-20 1982-08-03 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. Method for producing substance capable of stimulating differentiation and proliferation of human granulopoietic stem cells
JPS6030654B2 (ja) * 1980-12-31 1985-07-17 株式会社林原生物化学研究所 ヒトコロニ−刺激因子の製造方法
US4438032A (en) * 1981-01-30 1984-03-20 The Regents Of The University Of California Unique T-lymphocyte line and products derived therefrom
JPS5978122A (ja) * 1982-10-27 1984-05-04 Ajinomoto Co Inc コロニ−刺激因子の製造法
JPS59169489A (ja) * 1983-03-15 1984-09-25 Otsuka Pharmaceut Co Ltd ヒト培養株化細胞
AU594014B2 (en) * 1984-03-21 1990-03-01 Research Corporation Technologies, Inc. Recombinant DNA molecules
ES8701226A1 (es) * 1984-07-06 1986-11-16 Sandoz Ag Procedimiento de obtencion de una proteina de factor estimu-lante de colonias (csf) en primates
JPS61227526A (ja) * 1984-07-25 1986-10-09 Chugai Pharmaceut Co Ltd 新規なコロニー刺激因子
AU588819B2 (en) * 1984-10-29 1989-09-28 Immunex Corporation Cloning of human granulocyte-macrophage colony stimulating factor gene
EP0215126B1 (en) * 1985-02-08 1991-07-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Human granulocyte colony stimulating factor
JPS62129298A (ja) * 1985-12-02 1987-06-11 Chugai Pharmaceut Co Ltd 新規ポリペプチド

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010131382A1 (ja) 2009-05-14 2010-11-18 Fukuda Keiichi 筋肉修復促進剤

Also Published As

Publication number Publication date
HK50491A (en) 1991-07-12
FI83881B (fi) 1991-05-31
KR860001185A (ko) 1986-02-24
NL930141I2 (nl) 1997-03-03
EP0169566B1 (en) 1988-06-22
CA1312569C (en) 1993-01-12
DK337885A (da) 1986-01-26
FI852903L (fi) 1986-01-26
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SG41591G (en) 1993-02-19
ZA855478B (en) 1986-03-26
DK337885D0 (da) 1985-07-24
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DK166731B1 (da) 1993-07-05
NO852915L (no) 1986-01-27
BG61494B2 (bg) 1997-09-30
ATE35271T1 (de) 1988-07-15
FI83881C (fi) 1991-09-10
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NL930141I1 (nl) 1994-01-03
AR242835A1 (es) 1993-05-31
FI852903A0 (fi) 1985-07-25
US4833127A (en) 1989-05-23
KR920009496B1 (ko) 1992-10-17
NO168952C (no) 1992-04-22
AU4513185A (en) 1986-01-30
EP0169566A1 (en) 1986-01-29
EP0169566B2 (en) 2000-07-12
JPS61227526A (ja) 1986-10-09

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