JPH01500513A - 特異的興奮性アミノ酸神経伝達物質受容体の拮抗物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明の背景 産業上の利用分野 本発明は、特異的興奮性アミノ酸（ＥＥＡ）神経伝達物質受容体に対する拮抗作 用を通じて活性を発揮する新規で強力な抗痙れん薬、抗てんかん薬、鎮痛薬及び 感覚促進薬に関連するものである。特に本発明はω−［２−（ホスホノアルキレ ニル）フェニルヨー２−アミノアルカノイン酸、薬剤学的に可能なその塩と誘導 体、及びこれらの合成方法に関するものである。

従来技術 Ｌ−グルタミン酸塩及びＬ−アルバラギン酸塩は当初、脳代謝に関与するとはほ とんど考えられてぃなかったが、現在では分子薬理学、生化学、電気生理学面の 十分な証拠によってこれらのアミノ酸は神経興奮性伝達物質であると考えられて いる。

［Ｄ、Ｒ，Ｃｕｒｔｉｓ、　Ａ１．Ｄｕｇｇａｒ、　Ｄ、Ｆｅ１ｉｘ、　Ｃ，＾ 、Ｒｊｏｈｎｓｔｏｎ、＾、Ｋ。

Ｔｅｂｅｃｉｓ、Ｊ、Ｃ，Ｗａｔｋｉｎｓ、Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ、４１：２８３ −３０１（１９７２）コアミノ酸の神経興奮性作用について最初に解析されて以 来長い間、この型の化合物はすべて（作動薬としても拮抗薬としてゲＩ″］　（ １）　９８　Ｋ　ｌ：　ｆ’“′″ｔ　６０）　Ｔ：は゛が“ＷＩ　Ｗ　（Ｄ　 ’ｌ引°Ｉ′されていた。ＦＡＡの異なる作用、あるいは異なるＦＡＡ化合物の 作用に対する比較的選択的な拮抗薬が発見されたことによってこの推測はくつが えされ、現在ではを椎動物神経系には複数のＦＡＡ認識部位が存在すると考えら れている。［Ｊ、Ｃ，Ｗａｔｋｉｎｓ。

Ｒ，Ｈ，Ｅｖａｎｓ、Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、Ｔｏｘｉｃｏｌ、 ２１：１６５−２０４　（１９８１）］　これらを基本作動薬または拮抗薬によ り分類すると、１、Ｌ−グルタミン酸塩（Ｇｌｕ）、立体配座の限定されたＧｌ ｕ類似体、キスカル酸（Ｑｕｉｓ）によって活性化され、グルタミン酸ジエチル エステルによって選択的に拮抗される受容体。

２、Ｌ−アスパラギン酸塩（Ａｓｐ）の合成類似体、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラ ギン酸（ＮＭＤＡ）　、イソキサゾール神経毒、イボテン酸（Ｉｂｏ）、ビリノ ンジカルボキシル酸神経毒、キノリン酸（Ｑｕｉｎ）、及びおそら（Ａ、　ｓ　 ｐ自身に対して反応性をもつ受容体。これらの受容体はＤ（−）−２−アミノ− ５−ホスホノベンクン酸（ＡＰ　５　）　、Ｄ　（−）−２−アミノ−７−ホス ホノへブタン酸（ＡＰ？）、２価の陽イオンＭ　ｇ′＋によって拮抗される。

３、ピロリジン神経興奮性前、カイニン酸（ＫＡ）によって活性化されるが、特 異的拮抗薬はまだ同定されていない受容体。

４　、　ｔ、−（＋）−２−アミノ−４−ホスホノブチル酸（ＬＡＰ４　）によ り拮抗される受容体。電気生理学的手段によって元来ＦＡＡの拮抗薬として同定 されたもので、ＬＡＰ４は海馬の側方貫通経路シナプスにおける未知の内因性興 奮性物質に対する反応を阻害する。この神経伝達物質がＧｌｕである可能性はほ とんどなく、最近の証拠によればＮ−阻害ジペプチド、Ｎ−アセチルアスパルチ ル−し−グルタミン酸がこの機能を果たしていると考えられている。［Ｊ、Ｍ、 Ｈ，ｆｆ−Ｆｒｅｎｃｈ−ｍｕｌｌｅｎ、　Ｋ、Ｊ、Ｋｏｌｌｅｒ、Ｒ。

Ｚａｃｚｅｋ、Ｌｉ　Ｈｏｒｉ、Ｊ、Ｔ、Ｃｏｙｌｅ、Ｄ、Ｏ，Ｃａｒｐｅｎｔ ｅｒ、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、＾ｃａｄ。

Ｓｃｉ、１ｊＳＡ、８２．　３８９７−４００１（１９８５）］ＥＡＡ類はこの ような受容体の１つまたはそれ以上を通じて作用する可能性があり、ＣＮＳに影 響を及ぼす各種の病理学的状態の病因に関連するとされている。このためＫ　Ａ 　［Ｋ、Ｂｉｚｉｅｒｅ。

Ｊ、Ｔ、Ｓ］ｅｖｉｎ、　Ｒ，Ｚａｃｚｅｋ、　Ｊ、Ｃ，Ｃｏ１１ｉｎｓ、　Ｊ 、Ｔ、Ｃｏｙｌｅ　Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ 　Ｔｂｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ　（Ｈ，Ｙｏｓｈｉｄａ、　Ｙ、Ｈａｇｉｈａｒａ 、　Ｓ。

Ｅｂａｓｈｈｉ編）中、Ｐｅｒｇａｍｏｎ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ｐｐ、２７ １−２７６（１，９ｇ２）］　、　ＮＭＤＡ　［Ｒ，Ｚａｃｚｅｋ、　Ｊ、Ｃｏ １１ｉｎｓ、　Ｊ、Ｔ、Ｃｏｙｌｅ、　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、　Ｌｅｔｔｓ２４： １８１−１８６（＋９８’ｌ）：ｌ及び内因性興奮性アミノ酸Ｑ　ｕ　ｉ　ｎ　 ［Ｒ，Ｓｃｈｗａｒｃｚ、　Ｗ、０．Ｗｈｅｔｓｅｌｌ、　Ｒ，Ｍ、Ｍａｎｇｏ 、　５ｃｉｅｎｃｅ　２１９：：０６−３１８（１９８３）コが実験動物系にお いてヒトのてんかんやその他の痙れん性疾患に類似した症状を作り出すのに使用 されており、これらの化合物によって動物において起きた解剖学的及び神経化学 的病変、欠損症はＨｕｎｔ　ｉｎｇｔｏｎ病［−Ｊ、Ｃｏｙｌｅ、　Ｒ，５ｃｈ ｖａｒｃｚ。

Ｎａｔｕｒｅ　２６３：２４４−２４６（１９７６）］やてんかんで死亡した患 者の脳中で死後に見られる特徴と同様のものである。カイニン酸の投与によって 、側頭葉てんかんにおいて頻繁に見られる異常であるＡ　ｍ　ｍ　ｏ　ｎの内硬 化症に似た線構造の病変を作り出すことができる。この側頭葉てんかん実験系で の研究から、内因性のＥＡＡ類がこの疾患に関与しており特に既存の抗てんかん 薬に対して耐性であることが示されている。［ＪＪ、Ｎａｄｌｅｒ、　Ｂ、Ｙ、 Ｐｅｒｒｙ。

Ｃ，Ｗ、Ｃｏｔｍａｎ、　Ｎａｔｕｒｅ　２７１：６７６−６７７（１９７ｇ） コ　ＥＡＡ類はＨｕｎｔｉｎｇｔｏｎ病とてんかんだけでなく、Ａｌｚｈｅｉｍ ｅｒ病［＾、Ｃ，Ｆｏｓｔｅｒ、　Ｊ、Ｆ、Ｃｏ１１ｉｎｓ、　Ｒ，Ｓｅｔ＋ｖ ａｒｃｚ、　ＮｅｕｒｏｐｈａｒｌＩａｃ、　２Ｃｒｏｏｋ、　Ｌ、Ｇｅｒｓｈ ｏｎ編）中　Ｍａｒｋ　Ｐｏｗｅｒ　Ａｓ５ｏｃ、　Ｎｅｗ　Ｃａｍａｒｉｎ、 　Ｃ。

ｎｎ、ｐｐ、　２４７−２３０（１９８１）］　、大脳虚血の原因となる発作後 のニューロン死やその他の要素、［Ｒ，Ｐ、Ｓｉｍｏｎ、　Ｊ、Ｈ，Ｓｗａｎ、 Ｔ、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、Ｂ、Ｓ、Ｍｅｌｄｒｕｍ、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２２ ６．８５０−８５２．　（１９８４）；　Ｓ、Ｒｏｔｈｍａｎ、　Ｊ、Ｎｅｕｒ ｏｓｃｉｅｎｃｅ　４：１ｇ８４−１８９１（１８９４）コ及び遺伝性オリーブ 橋小脳萎縮症の原因にもなっているらしいことが示唆されている。

ｉｎ　ｖｉｔｒｏ及びｉｎνｉｖｏでの特異的脳受容体におけるＥＡＡの活性、 動物においてＦＡＡにより引き起こされる興奮性毒性病変、前述の神経変性疾患 の病因との間には概念上関連があるので、薬理学的手段を用いて内因性興奮性及 び興奮性毒性の神経伝達物質を拮抗しようと試みるのは論理にかなっている。脳 のＫＡ受容体に作用する特異的内因性物質でまだ発見されていないものがあると 考えられるので、ＫＡのような外因性興奮毒性物質に対する拮抗薬を開発するこ とも妥当である。α−アミノ−ω−ホスホノアルキレニルカルボキシル酸類（最 も強力で選択的なり　（−）−２−アミノ−７−ホスホノへブタン酸、Ｄ（−） ＡＰ７等）によって例証される強力で選択的なＥＡＡ類の拮抗薬の出現によって 、ＦＡＡの受容体における作用の薬理学的介入に向けて発展するきっかけとなっ た。

外因性興奮毒性物質、ＩＢＯ１内因性興奮毒性物質Ｑｕｉｎ（ＫＡは違う）［＾ 、Ｃ，Ｆｏｓｔｅｒ、　Ｇ、Ｅ、Ｆａｇｇ、　Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ、　Ｒｅｖ、 　７：１０３−１８４（１９８４）；　Ａ、Ｃ，Ｆｏｓｔｅｒ、Ｊ、Ｆ、Ｃｏ１ １ｉｎｓ、Ｒ，Ｓｃｂｗａｒｃｚ、Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃ、２２：１３３１ −１３４１（１９８３）；　Ｒ，Ｓｃｂｗａｒｃｚ、Ｊ、Ｆ、Ｃｏ１１ｉｎｓ、 　Ｄ。

Ａ、Ｐａｒｋｓ、　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、　Ｌｅｔｔｓ　３３：８５−９０（１９ ８２）］及びＡＰ７（ｉ、ｃ。

ν、及びｉ、ｖ、）は、ＮＭＤＡの神経毒性、痙れん性作用を阻害するだけでな く、遺伝的に感受性の高いマウスにおいて誘発した聴覚原性の発作を防御する活 性もらっている。［Ｍ、Ｊ、Ｃｒｏｕｃｈｅｒ、　Ｊ、Ｆ、Ｃｏ１１ｉｎｓ、　 Ｂ、Ｓ、Ｍｅｌｄｒｕｍ、　５ｃｉｅｎｃｅ幻６＋８９９−９０１（１９８２） ］１、ｖ、ＡＰ７はヒヒにおける光原性の筋間代を抑制し［Ｂ、Ｓ、Ｍｅｌｄｒ ｕｍ、　Ｍ、Ｊ、Ｃｒｏｕｃｈｅｒ、　Ｇ、Ｂａｄｍａｎ、　Ｊ、Ｆ、Ｃｏ１１ ｉｎｓ、　Ｎｅｕｒｏｓｉ、　Ｌｅｔｔｓ　３９：１０１−１０４（１９８３） ］　、？ウスにおける電気的ショックによる発作の電流閾値を上昇させ、げっ歯 頚における化学的誘発の発作を阻止する。［Ｓ、Ｊ、Ｃｚｕｃｚｖａｒ、　Ｇ、 Ｍｅｌｄｒｕｍ、　Ｅｕｒ、Ｊ、Ｐｈａｒ＋＋ａｃ。

旺：３３５−３３８（１９８２）　：］　ごく最近ＡＰ７（海馬内）が、げっ歯 頚における発作の頚動脈閉塞モデルの虚血性脳損傷を著しく減少させ、また消失 させることが報告され［Ｒ，Ｐ、Ｓｉｍｏｎ、　Ｊ、）１．Ｓｗａｎ。

Ｔ、Ｇｒｉｒｒｉｔｈｓ、　Ｂ、Ｓ、ＩＩＩｅｌｄｒｕｍ、　５ｃｉｅｎｃｅ　 ２２６＋８５０−８５２（１９８４）］、もう１つの強力さでは劣るＦＡＡの拮 抗薬σ−Ｄ−グルタミルグリシンが酸素枯渇の条件下で外因的に投与したＧｌｕ 及びＡｓｐの毒性を阻害しながらラットの培養海馬ニューロンの変性を防御する ことが示されている。［Ｓ、Ｒｏｔｂｍａｎ、　Ｊ、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ±：１８８４−１８９１　（１９８４）　３　最近ではカイニン酸及びキスカル 酸の受容体拮抗薬も抗痙れん活性をもっことが示されている。［Ｍ、Ｊ。

Ｃｒｏｕｃｈｅｒ、　Ｂ、Ｓ、Ｍｅｌｄｒｕｍ、＾、Ｙ、Ｊｏｎｅｓ、　Ｊ、Ｃ ，Ｙａｔｋｉｎｓ、　Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ。

３７７：１１１−１１４（１９８４）］　最後に、しかも重要なことに、興奮性 アミノ酸、特にグルタミン酸塩Ａ　Ｉ　ｚ　ｈ　ｅ　ｔ　ｍ　ｅ　ｒ病［Ｊ、Ｔ 、Ｇｒｅｅｎａｍｙｒｅ、Ｊ、Ｂ、Ｐｅｎｎｙ、八　Ｂ、Ｙｏｕｎｇ、Ｃ，Ｄ” 人ｍａｔｏ、Ｓ、Ｐ、Ｈ４ｃｋｓ、ｌ。

５ｃｈｏｕｌｓｏｎ、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２７：１４９６−１４９８（１９８ ５）］等の加齢による神経変性疾患の開始や、晩期運動異常症［Ｊ、Ｙ、０１ｎ ｅｙ、　Ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｎｓ（ｌｆ、Ｆｕｘｅ、　Ｒ，Ｒｏｂｅｒｔｓ、 Ｒ，Ｓｃｂｗａｒｃｚ編）中］に関与しているという状況証拠がいくつか挙げら れている。

本発明の要約 本発明は以下の一般構造式をもつ強力で選択的な興奮性アミノ酸神経伝達物質受 容体拮抗薬である。

Ｒ３とＲ１は同じ基でも違う基でもよく、水素、低アルキル、ハロゲン、−ＣＨ ＝ＣＨ−ＣＨまＣＨ−、アミノ、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ基から成 る群の中から選ばれる。ｎ及びｍは０．Ｉ、２．３のどれかであり、薬剤学的に 可能なこの物質の塩と誘導体を含む。

本発明の詳細な説明 本発明における新規化合物の構造及び化学式は、各種興奮性アミノ酸神経伝達物 質受容体に対する拮抗作用に関して詳細な研究調査を行った結果得られたもので ある。

これら受容体を基本作動薬または拮抗薬により分類すると次のようになる。

！、Ｌ−グルタミン酸塩（Ｇｌｕ）、立体配座の限定されたＧｌｕ類似体、キス カル酸（Ｑｕｉｓ）によって活性化され、グルタミン酸ジエチルエステルによっ て選択的に拮抗される受容体。

２、Ｌ−アスパラギン酸塩（Ａｓｐ）の合成類似体、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラ ギン酸（ＮＭＤＡ）、イソキサゾール神経毒、イボテン酸（Ｉｂｏ）、ピリジン ジカルボキシル酸神経毒、キノリン酸（Ｑｕｉｎ）、及びおそら＜Ａｓｐ自身に 対して反応性をもつ受容体。これらの受容体はＤ（−）−２−アミノ−５−ホス ホノペンクン酸（ＡＰ５）、Ｄ　（−）−２−アミノ−７−ホスホノへブタン酸 （Ａ　Ｐ　７　）、２価の陽イオンＭｇ！＋によって拮抗される。

３、　ピロリジン神経興奮性毒、カイニン酸（ＫＡ）によって活性化されるが、 特異的拮抗薬はまだ同定されていない受容体。

４、Ｌ（＋）−２−アミノ−４−ホスホノブチル酸（ＬＡＰ４）により拮抗され る受容体。電気生理学的手段によって元来ＦＡＡの拮抗薬として同定されたもの で、ＬＡＰ４は海馬の側方貫通経路シナプスにおける未知の内因性興奮性物質に 対する反応を阻害する。この神経伝達物質がＧｌｕである可能性はほとんどなく 、最近の証拠によればＮ−１１ｆｌ害ジペプチド、Ｎ−アセチルアスパルチル− し−グルタミン酸がこの機能を果たしていると考えられている。［Ｊ、Ｍ、Ｈ， ｆｆ−Ｆｒｅｎｃｈ−ｍｕｌｌｅｎ、　Ｋｊ、Ｋｏｌｌｅｒ、　Ｒ，Ｚａｃｚｅ ｋ、Ｌｉ　Ｈｏｒｉ、Ｊ、Ｔ、Ｃｏｙｌｅ、Ｄ、Ｏ，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ、Ｐｒ ｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、（ｔｌｓＡ）肚、　３８９７−４００１（１ ９８５）］新規化合物の構造は、受容体の中の１つに対し高い親和性をもちまた その中のいくつかに対しては全く親和性をもたず、化合物を選択的にしており、 強力な拮抗薬とするものである。すなわちこれによって複数のＥＡＡ受容体をも つ組織において１つのＥ　Ａ、　Ａ受容体だけを選択的に拮抗することが可能と なる。

本発明は親和性、選択性がより高いため、新規化合物による副作用はより少なく なっている。

例えば３−［２−（２−ホスホノエチル）フェニル）−２−アミノプロパン酸や ３−［２−（２−ホスホノメチル）フェニルコー２−アミノプロパン酸のような 化合物が高い親和性及び選択性をもっことは、受容体結合実験、マウスにおける ペンチレンチトラゾル（ＰＴＺ）誘発の発作を防御する能力によって示されてい る。

本発明における新規化合物は、次の合成経路によって容易に調製できる。

経路１ 経路１において、実施例！及び４の化合物を導くために密封試験管中の臭化水素 酸と酢酸の溶液によるインクロマン反応を用いることにより、必要な中間体ｏ− （２−ブロモエチル）−ベンジルプロミドが高収率で得られる。（＾ｎｄｅｒｓ ｏｎ、　Ｅ、Ｌ、；　Ｈ。

１１ｉｍａｎ、　Ｆ、Ｇ、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　１９５０．１０３ ７）　この化合物をトリエチル亜リン酸と反応させることにより、実施例１の化 合物が７０％の収率で得られる。実施例２の化合物、エチル４−［２−（ジエチ ルホスホノ−メチル）−フェニル］〜２−アセタミドー２−カルボエトキシ−ブ タネートは、実施例１で述べたブロモホスホネートをジエチルアセタミドマロネ ートのナトリウム塩と反応さけることにより製造した。６Ｎ　）ＩＣＩ２中で加 水分解を行うことによって実施例３の化合物が得られる。中間体ｏ　−（２−ブ ロモエチル）ベンジルプロミドを上記とは別にジエチルアセタミドマロネート′ のナトリウム塩と反応させることにより実施例４の化合物が得られる。この化合 物をトリエチル亜リン酸と反応させると実施例５の化合物が７５％の収率で得ら れる。６Ｎ　ＨＣ（！中で加水分解を行うことによって実施例６の化合物が得ら れる。

経路２ 経路２において、市販のα、α゛−ジブロモー〇−キシレントリエチル亜リン酸 と反応させることにより実施例７の化合物が得られる。この中間体をジエチルア セタミドマロネートのナトリウム塩と反応させると実施例８の化合物が得られる 。ＧＮ　ＨＣＱ中で加水分解を行うことによって実施例９の化合物が得られる。

経路３ 実施例１２　実施例１５ 経路３においては中間体０−＜３−ブロモプロピル）ベンジルプロミドを合成す る必要がある。［Ｒｉｅｃｈｅ、人、；　Ｇｒｏｓｓ、　Ｈ，Ｃｈｅｗ−ること によりクロロメチル３−ブエニルフ口ビルエーテルが高収率で得られる。ＣＳ　 ２中でのＡＱＣｂを用いたＦｒ１ｅｄｅｌ−Ｃｒａｆｔｓの環化反応により２− ペンゾキセビンが得られる。

この化合物を密封試験管中で臭化水素酸−酢酸の溶液と反応させると必要な共通 中間体０−（３−ブロモプロピル）ベンジルプロミドが得られる。この化合物を ジエチルアセタミドマロネートのナトリウム塩と反応させることにより実施例Ｉ Ｏの化合物が得られる。この化合物をトリエチル亜リン酸と反応させることによ り実施例１．１のホスホノマロネート化合物が得られる。ｅＮ　ＨＣＱ中で加水 分解を行うことによって実施例１２の化合物が得られる。中間体〇−（３−ブロ モプロピル）ベンジルプロミドを上記とは別にトリエチル亜リン酸と反応させる と実施例１３の化合物が得られる。この化合物をジエチルアセタミドマロネ−１ ・のナトリウム塩と反応させることにより実施例１４の化合物が得られる。ＧＮ 　ＨＣＱ中で加水分解を行うことによって実施例１４の化合物が得られる。

化合物を薬剤学的製剤として投与用に調製する方法は、薬学技術の専門家たちの 間でよく知られている方法として多数あると思われる。本新規化合物は特に酸塩 、すなわちＨＣｌ２塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、メタスルホン酸塩、酒石酸 塩、または塩基塩やその他薬剤学的に可能な塩及び合成物として製剤化されるこ とになろう。

本新規化合物及び本発明の合成物の非経口投与においては、抗酸化薬、緩衝剤、 静菌薬等を含む水溶性注射用溶液として製剤化されることになろう。即席注射用 溶液は、希釈薬、分散界面活性剤、結合剤、滑沢剤等を含む滅菌丸剤、顆粒剤、 錠剤から調製することになろう。

経口投与の場合には、本化合物の細粉末または顆粒を希釈薬と分散界面活性剤と 共に製剤化し、１回分ずつ水またはシロップ中に、あるいは乾燥状態でカプセル またはカシェ剤中に、あるいは懸濁化剤が含まれる時は非水溶性の懸濁液中に調 製することになろう。また本化合物は随意選択の結合剤及び滑沢剤をつけた錠剤 として、あるいは水、ノロツブ、油、水／油孔剤中の懸濁液として投与される可 能性もあるし、矯味矯臭薬、防腐剤、懸濁化剤、濃厚剤、乳化剤を含むこともあ る。経口投与用の顆粒剤または錠剤はコーティングを行う可能性があり、薬学技 術の専門家たちの間でよく知られているその他の薬剤学的に可能な薬剤や剤形が 使われるかもしれない。

以下の実施例は本発明における化合物の実例を示すものであるが、本発明がそれ に限定されるという意味ではない。

実施例 製造実施例 実施例！ ジエチル　２−（２−ブロモエチル）ペンジルホスホネイト蒸留用丸底フラスコ 中、２−（２−ブロモエチル）ベンノルブロマイド（１５，ＯＬ　５４ｍ　ｍｏ ｌ）とトリエチルホスファイト（９，Ｏｙ、　５４ｍｊ０１）を油浴上９０〜１ ００℃で撹拌しながら加熱した。

エチルブロマイドが蒸留し終って（１時間）、残渣の揮発性副成物およびトリエ チルホスファイトを減圧蒸留で除去した。残留した粘稠液を溶出液としてヘキサ ン−醋酸エチル（＋　＋　１）を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフで精製 した。

留分をあっめて減圧下に濃縮して黄色の油状物（１２，５ｇ、収率７０％）を得 た。

Ｉ　Ｒ（ｎｅａｔ）　： ２９８７、１２４９．１１７０．１０６４．９６４．８０２　ｃｍ”’ＨＮ　Ｍ 　Ｒ（ＣＤ　ＣＩｈ＞δ： １．２　（ｔ、　６Ｂ） ３．０−４．３５　（ｍ、　１０ｔＤ ７．２　（ｓ、　４Ｂ） 実施例２− エチル　４−［２−（ジエチルホスホノメチル）フェニルツー２−アセトアミド −２−カルボエトキンブタノエイトナトリウム（１，０３ｙ。４４．８ｍ　ｍｏ ｌ）を溶解したエタノール（５０川１）に、固体のジエチル　アセトアミドマロ ン酸（９，７２Ｌ　４４゜８ｍｍｏｌ）を少量宛加えた。この溶液をちっ素気流 中２時間撹拌ｌ、なから還流した。室温に冷却後、溶媒を減圧下に除去し黄褐色 の固体を得た。この固体を減圧下約２時間乾燥した。

ジエチル　アセトアミドマロン酸ドのナトリウム塩を乾燥トルエン（５０ｍｌ） に懸濁し、トルエン（２５ｍ１）に溶解したジェ°チル　２−（２−ブロモエチ ル）ベンジルホスホネイト（ｉｓ、ｏｇ、　４４．８ｉ　ｍｏｌ）を滴加した。

この溶液をぢっ素気流中３６時間撹拌しながら還流した。溶液を室温に冷却した 後、固体沈澱物をろ過により除去し、トルエン（２０ｍ１　）で洗浄した。トル エン溶液をあつめて、減圧下に濃縮し粘稠な油状物を得た。この油状物を溶出液 として醋酸エチルを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフで精製した。留分を あつめて減圧下に濃縮し、透明・粘稠の油状物（７，，２ｇ、収率３４％）を得 た。

Ｉ　Ｒ（ｎｅａｔ）　： １７４５．１６７５（Ｃ＝Ｏ）ａｍ　−’’ＨＮＭＲ（ＣＤＣρ、）δ： ＋、ｏ　−６（ｍ、　１２Ｈ） １．８−３．２　（ｃｏｍｐｌｅｘ　ｔｎ、　９Ｂ）３．７−４．６　（ｍ、　 ８Ｈ） ６４−７．４　（＋ｎ、５）１） Ｃ□ｌ−［、、ＮＯ，Ｐ・０．５８！Ｏとしての元素分析理論値：　Ｃ１５４， ９９：　Ｈ，７，３４＋　Ｎ、　２．９２実験値：　Ｃ，５４，７５：　Ｈ，７ ，３７；　Ｎ、　２．９７実施例３ ４−［２−ホスホノメチルフェニル］−２−アミノ酪酸エチル　４−Ｃ２−Ｃジ エチルホスホツメデル）−フェニル］−２−アセトアミド−２−カルボエトキン 酪酸（２，５ｉＦ、　５．３ｍ　ｎ＋ｏｌ）を６Ｎ塩酸（５０ｎ＋１　）中１２ 時間はげしく撹拌還流した。室温に冷却後、反応混合物を減圧下に濃縮し油状物 を得た。この油状物を水（５０ｍｌ）で３回洗浄し、９５％エタノールに溶解し 、小過剰量のプロピレンオキサイドを加えた。沈澱した酸をろ取し、含水エタノ ールから再結晶して白色固体（１，２６ｉＪ、収率７７％）を得た。融点　２４ ７〜２４９℃。

、ＩＲ（ＫＢｒ）： １７２５．１６２０　ｃｍ　−’ ’ＨＮＭＲ（Ｄ＊Ｏ）δ： ２．０−３．４　（６Ｈ，ｕｎｒｅｓｏｌｖｅｄ）３．９−４．３　（ｍ、　ｌ ［＋） ７．４　（ｓ、　４８） Ｃｒ　＋　Ｈ＋　ａ　Ｎ　Ｏｓ　Ｐ・０．５ＨｔＯとしての元素分析理論値：　 Ｃ，４６，６２，Ｈ，６，Ｑ５．　Ｎ、　４．９４実験値：　Ｃ，４６，７３， Ｈ，６，０４，Ｎ、　４．７９実施例４ エチル　３−［２−（２−ブロモエチル）フェニルツー２−アセ）・アミド−２ −カルボエトキンプロピオン酸ナトリウム（０，４１ｙ、　＋８ｍ　ｍｏｌ）を 溶解した乾燥エタノール（１００ｍＣ）に、固体ジエチルアセトアミドマロン酸 （３，９９，１８ｍｍｏｌ）を少量宛加えた。この混合溶液を２時間ちっ素気流 中２時間撹拌還流し、それから、０−１０℃に冷却した。それから、２−（２− ブロモエチル）ベンジルブロマイドを一度に加えた。

反応液を０−１０℃で２時間撹拌し、さらに、室温で２４時間撹拌した。沈澱し た無機塩をろ別し棄てた。溶媒を減圧下に除去し、黄金色の油状物を得た。

この油状物を逆相カラム（Ｃ−１８）クロマトグラフζ二力）ｌす、メタノール −水（１：　１）で溶出した。留分をあつめ、減圧下で濃縮して白色固体（５， ６９、収率７５％）を得た。

融点８６．０−８６．５℃。

Ｔ　Ｒ（ｎｕｊｏ＋）　： １７８５、１６３７　ｃｍ　”　（Ｃ＝　０　）’ＨＮＭＲＣＣＤＣＱ３＞δ： １．２（ｔ、６Ｈ） １．９　（ｓ、３Ｈ） ２．８−３．５　Ｃｍ、　４Ｈ） ３Ｊ　（５，２８） ４．２　（ｑ、　４Ｈ） ６．８　（ｓ、　ＩＨ） ７．２　（ｍ、　４Ｈ） Ｃ＋ｓＨ＊−Ｎ　ＯｓＢ　ｒとしての元素分析理論値、Ｃ，５２，１ｇ、旧５． ８４　、Ｎ、３．３８実験値；ｃ、５２．２６　、Ｈ，５，８６、Ｎ、３．３４ 実施例５ エチル　３−［２−（２−ジエチルホスホノエチル）フェニルトコ−２−アセト アミド−２−カルボエトキシ−プロピオン酸３−［２−（２−ジエチルホスホノ エチル）フェニル］−２−アセトアミド−２−カルボエトキシプロピオン酸（０ ，５９，１，２ｔｏ　ｍｏｌ）を　トリエチルホスファイＩ・（ＩＯｍＱ）中、 ４時間撹拌還流した。

過剰のトリエチルホスファイトと揮発性副生物を減圧下に除去した。残存した粘 稠油状物をカラムクロマトグラフ（Ｃ−１８゜メタノール：水（４：　ｌ）溶出 ）で精製し、その後、調製用１４ＰＬＣ（Ｃ−１８，メタノール：水（７：３） で精製して透明粘稠油状物（０，４８Ｌ収率８６％）を得た。

Ｉ　Ｒ（Ｎｕｊｏｌ）　： ＋７４５．９，１６７６．５　ｃｍ−Ｉ　（Ｃ＝０）’ＨＮＭＲ（ＣＤ　Ｃｌ２ ３）δ： １．１−１．５　（ｍ、Ｉ　２８） ｔ、８−３．１　（ｃｏｍｐｌｅｘ　ｍ、　？Ｈ）３．７　（ｓ、２Ｈ） ３．８−４．４　（ｍ、８Ｈ） ６．６　（ｓ、１Ｍ） ７．０−７．３　（ｍ、４Ｈ） ＣｔｔＨ，ｓ４Ｎ　ＯｓＦとしての元素分析理論値；ｃ、５６．０４　、Ｈ，７ ，２７、Ｎ、２．９７実験値；ｃ、５５．９１　、Ｈ，７，３１、Ｎ、２．８４ 実施例６ ３−［２−（２−ホスホノエチル）フェニルコーク−アミノプロピオン酸 エチル　３−［２−（２−（ジエチルホスホノエチル）−フェニル］−２−アセ トアミドー２−カルボエエトキシプロビオン酸（７゜９ｇ、１６．８ｍ　ｍｏｌ ）を６Ｎ塩酸（４（１ｍ１２）中１４時間はげしく撹拌還流した。室温に冷却し た後、反応混合物を減圧濃縮し油状物を得た。この油状物を水（２５ＩＩＩＱ） で４回洗浄し、９５％エタノール（２０ａＱ＞に溶解して、プロピレンオキサイ ドを滴下した。

沈澱した不純な酸をろ別し、含水エタノールから再結晶して白色固体（４、１ｙ 、収率９０％）を得た。融点２４１−２４３℃。

Ｉ　Ｒ（Ｎｕｊｏｌ）　： １７１５ｃｍ−’（Ｃ＝０） ’ｌ−Ｉ　ＮＭＲ（Ｄ、Ｏ）δ： １．５−２．２　（ｍ、２Ｈ） ２．６−３．３　（ｍ、４Ｈ） ３．９−４．２　（ｔ、ＩＨ） ７．２　（ｍ、４Ｈ） ＣｚＨ＋ａＮ　ＯｓＰとしての元素分析理論値：Ｃ，４８，３５；　Ｈ，５，９ ０；　Ｎ、５．１３実験値：Ｃ，，４８，６９、Ｈ，６，＋６　；　Ｎ、４．９ ５実施例７ 蒸留用丸底フラスコ中、α、α−ノブロモーＯ−キシ１ノン（２０゜Ｑ９．７５ ．８ｍ　ｍｏｆ）とトリエチルホスファイト（１２，６ｇ。

７５．８ｍｍｏｌ）を撹拌しながら７０−７５℃で加熱した。エチルブロマイド が蒸留し終って（約２−３時間）、残存する揮発性の副生物とトリエチルホスフ ァイトを減圧蒸留により除去した。残存した油状物をシリカゲルクロマトグラフ により醋酸エチルを溶出剤として精製した。留分をあっめ、減圧下に濃縮して黄 色油状物を得た。

ＩＲ（そのまま）： １２４９；　１１６４．８．　１０３８．８；　９６６．８；７９４．５ｃｍ− ’ ’ＨＮ　ＭＲ（ＣＤ　Ｃ１２３）δ： １．０−１．４　（ｍ、６Ｈ） ３．６−４．２　（ｍ、４Ｈ） 実施例８ エチル３−［２−（ジエチルホスホノメチル）フェニルコー２−アセトアミドー ２−カルボエトキシーブロピオン酸ナトリウム（０，４３９，１８，８ｍ　ｍｏ ｌ）を乾燥エタノール（５０ｍｌ）に溶解し、固体のジエチル　アセトアミドマ ロン酸（４，０９ｇ、１．８．８ｍ　ｍｏｌ）を少量宛加えた。この混合液をち っ素気流中２時間撹拌しながら還流し、その後、室温に冷却した。

その後エタノール（４０ｍｌ）に溶解した２−（ジエチルホスホノメチル）ベン ジルブ（７？イド（６，０５ｇ、１８．８ｍ　ｍｏｌ）を滴下し、混合物を２４ 時間撹拌した。

沈澱した塩をろ過によって除去し、溶媒を減圧下で濃縮し、粘稠な油状物を得た 。この油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフにより醋酸エチルを溶出剤とし て精製した。

留分をあつめて、減圧下で濃縮して透明な油状物の生成物（６゜６７９、収率７ ９％）を得た。

Ｉ　Ｒ（ｎｅａｔ）　： １７４５．９，１６７６．５，１５０１．６．１３７５．６゜１２４７．１，１ ６４９．１，９６９．４　ａｍ−’’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１２３）δ： ■、０−１．４　（ｍ、１２Ｈ） ２．０　（ｓ、３Ｈ） ２．９　（ｓ、ＩＨ） ３．３（ｓ。ＩＨ） ３．８−４．４　（ｍ、ｌ０Ｈ） ５．８−７．４　（ｍ、５Ｈ） Ｃ２＋Ｈ３ｔＮ　Ｐ　Ｏｓ・０．５　ＨｔＯとしての元素分析理論値：Ｃ，５４ ，０６：８．６．９２：Ｎ、３．００実験値：Ｃ，５３，７３：Ｈ，７，１１： Ｎ、３．２７実施例９ ３−［２−ホスホノメチルフェニルツー２−アミノプロピオン酸エチル３−「２ −（ジエチルホスホノメチル）−フェニル〕−２−アセ）・アミド−２−カルボ エトキシプロピオン酸（４，５ｇ、９゜８＠ｍｏｌ）を６Ｎ塩酸（５０ｍｌ）中 １２時間撹拌しながらはげしく還流した。室温に冷却後、反応混合物を減圧下に 濃縮し、油状物を得た。この油状物を水（５０ｍｌ）で３回洗浄し、９５％含水 エタノールに溶解し、過剰量のプロピレンオキサイドを添加した。沈澱した酸を ろ別し、含水エタノールから再結晶して白色固体の生成物（１，６ｇ、収率６３ ％）を得た。融点２５９−２６１”Ｃ０ Ｉ　Ｒ（Ｎｕｊｏｌ）　： １７２２；１６２５；１１２８；１０４９　ｃｍ−’’ＨＮＭＲ（ＤｔＯ）δ： ２．８−３．７　（ｕｎｒｅｓｏｌｖｅｄ、４Ｈ）４．２　（ｍ、ＩＨ） ７．７３　（ｓ、４Ｈ） Ｃ１ｅＨ＋４ＮＯｓＰ−０，２５ＨｔＯとしての元素分析値理論値：Ｃ，４５， ５５；Ｈ，５，５４；Ｎ、５．３２実験値：Ｃ，４５，５７，Ｈ２Ｓ、５５．Ｎ 、５．３８実施例１０ エチル　３−［２−（３−ブロモプロピル）フェニルツー２−アセトアミド−２ −カルボエトキシ−３−プロピオン酸ナトリウム（０，６１ｇ、２７ｍ　＋５ｏ ｌ）を溶解した乾燥エタノ８６ｇ、２７　ｓ　ｍｏｌ）を少量宛加えた。この混 合物をちっ素気流中２時間撹拌しながら還流した。その後、氷水浴中で０−１Ｈ ℃に冷却した。その後、乾燥エタノール（４０ｍｌ）に溶解した２−（３−ブロ モプロピル）ベンジルブロマイド（８，０ｇ、２７ｎ　ｍｏｌ）を急速に添加し た。反応混合物を０−１０℃で２時間、その後、室温で２４時間撹拌した。沈澱 した無機塩をろ過し、エタノール（２０ｍｌ）で洗浄し、棄てた。溶媒をあっめ て減圧下に除去し、橙色油状物を得た。

この油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフにより溶出剤をヘキサン−醋酸エ チル（３：Ｉ）を用いて精製した。留分をあつぬて減圧下に濃縮し、油状物を得 た。放置すると固化しく９゜５ｇ、収率８２％）、融点７３−７４．５℃。

ｉ　Ｒ（Ｎｕｊｏｌ）　： １７４５．１６４８　ｃｍ−’　（Ｃ＝Ｏ）’ＨＮＭＲ（Ｄ、Ｏ）δ： １．３　（ｔ、６Ｈ） １．９−２．４　（ｍ、５Ｈ） ２．７（ｔ、２Ｈ） ３．４　（ｔ、２Ｈ） ６．６　（ｓ、ＩＨ） ７．０−７．３　（ｍ、４Ｈ） Ｃ＋ｓＨｔａＮ　ＯｓＢ　ｒとしての元素分析値理論値：　Ｃ，５３，２８；Ｈ ，６，１２；Ｎ、３．２７　；Ｂｒ。

１８．６６ 実測値：Ｃ，５３，３３；Ｈ２Ｓ、１３　；Ｎ、３．２３　：Ｂｒ。

１８．６７ 実施例１１ エチル３−　ｒ、　２−　（３−ジエチルホスホノプロピル）フェニルクー２− アセトアミド−２−カルボエトキシ−プロピオン酸エチル３−［２−（３−ブロ モプロピル）フェニルクー２−アセトアミド−２−カルボエトキシプロピオン酸 （７，５ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）を蒸留直後のトリエチルホスファイト（２０ｍ ｌ）中６時間撹拌しながら還流した。過剰のトリエチルホスファイトと揮発性の 副生物を減圧蒸留によって除去した。残存する粘凋な油状物を、溶出剤として醋 酸エチルを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフにより精製した。留分をあつ めて減圧下に濃縮し、粘凋な黄色油状の生成物（４，２ｇ、収率４９％）を得た 。

Ｉ　Ｒ（Ｎｅａｔ）　： １７４６、＋　６８０　ｃ＋ｎ−’　（Ｃ＝Ｏ）’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１２３）δ ： １．１−２．１　（ｃｏｍｐｌｅｘ　ｍ、１９Ｈ）２．４−２．７　（ｔ、２Ｈ ） ３．６（５，２Ｈ） ３．８−４．３　（ｍ、８Ｈ） ６．５５　（ｓ、ＩＨ） ６．９−７．２　（ｍ、　４ｌ−１） 実施例１２ ３−［２−（３−ホスホノプロピル）フェニルヨー２−アミノプロピオン酸 エチル　３−［２−（ジエチルホスホノプロピル）フェニルクー２−アセトアミ ド−２−カルボエトキンプロピオン酸（３，６ｇ。

６．９ｍｍｏｌ）を６Ｎ塩酸（２５ｍｌ）中１２時間撹拌しながら激しく還流し た。室温に冷却した後、反応混合物を減圧下に濃縮し、油状物を得た。油状物を 水（２５ｍｌ）で３回洗浄し、９５％含水エタノール（２５ｍｌ）に溶解して、 プロピレンオキサイドを滴加した。沈澱した酸をろ別し、含水エタノールから再 結晶して白色固体（０，，７６ｇ、収率３８％）を得た。融点９５℃以上（分解 点）。

Ｉ　Ｒ（Ｎｕｊｏｌ）　： １７１７．６ｃｍ−’　（Ｃ＝Ｏ） ’ＨＮＭＲ（Ｄ、Ｏ）δ： １．１−２．０　（ｃｏｍｐｌｅｘ　ｍ、　４Ｈ）２．６−３．１　（ｍ、４Ｈ ） ３．３５−３．６５　（ｍ、ＩＨ） ７．３　（ｍ、４Ｈ） Ｃ，ｔＨ，５ＮＯ５Ｐ　−Ｈ，Ｏとしての元素分析理論値・Ｃ，４７，２１：Ｈ ，６，６０：Ｎ、４．５８実験値：Ｃ，４７，４７、Ｈ，６，７２、Ｎ、４．５ ３実施例１３ ジエチル　２−（３−ブロモプロピル）ペンジルホスホネイト蒸留用丸底フラス コ中、２−（３−ブロモプロピル）ベンジルブロマイド（１１，３６ｇ、　３８ ．９ｍ　ｍｏｌ）と蒸留直後のトリエチルホスファイト（６，４６ｇ、　３８． ９ｎ　ｍｏｌ）を油浴上１００−１１０℃で撹拌しながら加熱した。エチルブロ マイドが蒸留し終った時（約２時間）、残存する揮発性副生物とトリエチルホス ファイ）・を減圧蒸留で除去した。残存する油状物を、溶出剤としてヘキサジー 醋酸エチル（＋、　：　Ｉ　）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフをもち いて精製した。留分をあっめて減圧濃縮し、透明油状の生成物（１１，２ｇ、収 率８３％）を得た。

Ｉ　Ｒ（ｎｅａｔ） ２９８５．１４９６．１４５０．１３９１Ｓ　１２５２．１１６２．１１０４． ９６７．８４３．８０２．７５８ｃｍ−’’ＨＮ　Ｍ　Ｒ（ＣＤ　Ｃｌ２ｓ）δ ：１．２　（ｔ、６Ｈ） １．８−２．３　（ｍ、２Ｈ） ２．７−３．５５　（ｍ、４Ｈ） ３　、８−４　、２　（ｍ　、２１−１　）７．１−７．４　（ｍ、４Ｈ） 実施例１４ エチル　５−［２−（ジエチルホスホノメチル）フェニル］−２−アセトアミド −２−カルボエトキシベンクン酸ナトリウム（０，４８ｇ、　２１ｎ　ｍｏｌ） を溶解した乾燥エタノール（５０ｎ＋ｌ）に固体のジエチルアセトアミドマロン 酸（４゜５６ｇ、　２１　Ｉｌｌｍｏｌ）を少量宛添加した。この溶液をちっ素 気流中２時間撹拌しながら還流した。室温に冷却した後、溶媒を減圧下に除去し て黄褐色の固体を得た。この固体を減圧下で約２時間乾燥した。ジエチル　アセ トアミドマロン酸のナトリウム塩を乾燥トルエン（２５ｍｌ）に懸濁し、乾燥ト ルエン（２５ｗｌ）に溶解したジエチル　２−（３−ブロモプロピル）ペンジル ホスホネイト（９，０ｇ、　２１　ｍ　ｍｏｌ）を滴下した。この溶液をちっ素 気流中２０時間撹拌しながら還流した。室温に冷却した後、沈澱した固体をろ過 し、トルエンで洗浄した。トルエン溶液をあつめて、減圧下で濃縮して、暗黒色 の油状物を得た。

この油状物を、溶出剤として醋酸エチルを用いたシリカゲルカラムクロマトグラ フで精製した。留分をあつめ、減圧下で濃縮して黄色粘稠油状物（４，２ｇ、収 率４２％）を得た。放置すると固化し、融点７６−７９℃。

Ｉ　Ｒ（ｎｅａｔ） ＋７４５．９、Ｉ　６８０　ｃｒａ−’　（Ｃ＝Ｏ）’ＨＮＭＲ（ＣＤ　ＣＣ５ ）　６　： １．０−１．４　（ｍ、Ｉ　２８） ２．０　（ｓ、３Ｈ） ２．２−３．３　（ｍ、６Ｈ） ３．７−４．４　（ｍ、８Ｈ） ６．８　（５，ＩＨ） ７．０−７．３　（ｍ、４Ｈ） Ｃｔ３Ｈ３＠Ｎ　ＯｓＰとしての元素分析理論値：Ｃ，５６，９０，Ｈ，７，４ ８：Ｎ、２．８９実験値：Ｃ，５６，２７、Ｈ，７，５１；Ｎ、２．８６実施例 ｌ５ ５−［２−ホスホノメチルフェニルコー２−アミノペンタン酸エチル　５−［２ −ジエチルホスホノメチル）フェニル］−２−アセトアミドー２−カルボエトキ シペンタン酸（３，８ｇ、７．８會ｍｏｌ）を６Ｎ塩酸（２５＋ａ１．）中１２ 時間撹拌しながら激しく還流した。室温に冷却した後、反応混合物を減圧下で濃 縮し、油状物を得た。

この油状物を水（２５ｍｌ）で３回洗浄してから、９５％含水エタノール（２５ ｍ１．）に溶解し、プロピレンオキサイドを滴下した。

沈澱した不純の酸をろ過し、含水エタノールから再結晶して白色固体の生成物（ １，７ｇ、収率７６％）を得た。融点１５２℃以上（分解点）。

Ｉ　Ｒ（ｎｕｊｏ＋） １７１７．６　ｃｖａ−’　（Ｃ＝Ｏ）’ＨＮ　Ｍ　Ｒ（Ｄ　ｔｏ　）δ： １．６−１．９　（ｂｒｏａｄ、４　Ｈ）２．８−３．３　（ｍ、４Ｈ） ３．４　５　（ｍ、Ｉ　Ｈ） ７．３−７．７　（ｍ、　４Ｈ） Ｃ＋ｔ）ｔ　＋ｌｌＮ　ＯＳＰ・０．５ＨｔＯとしての元素分析理論値：Ｃ，４ ８，６５；Ｈ，６，４６：Ｎ、４．７３実験値：Ｃ，４８，５６；Ｈ，６，４６ ；Ｎ、４．７２実施例１６ ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　受容体結合試験実施例標準ｉｎ　ｖｉｔｒｏリガンド結合技 法を用いて、実施例３．５．９．１２．１５に示した化合物が各種興奮性アミノ 酸リガンドのラット脳の膜への特異的結合を阻害する能力について調査した。特 に化合物が［’Ｈ］カイニン酸［’Ｈ］ＫＡ、ＲＳ−α−アミノー３−ヒドロキ シ−５−メチル−４−イソキサゾールプロピオン酸［”Ｈ］ＡＭＰＡ、［”Ｈ］ ＤＬ（＋）２−７４／−７−ホ、２．ホ／ヘプタン酸［’Ｈ］ＡＰ７の特異的結 合を阻害する能力について評価した。

方法は次の通りである。ラット前脳をＥｎｎａと５ｎｙｄｅｒ　（Ｍｏｌ。

Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　１３．４２２−４５３．１９７７）によって報告された 方法で調整し、最終沈渣を試験用に用時調製した緩衝液中にくり返し再懸濁しく 　２０ｖｏｌ；　ｗ／　ｖ　）さらに３回の遠心分離（４５，０００ｇ；１０分 、４℃）を行った。［３ＨコＡＰ４試験用には調製直後の組織を使用した。それ 以外の試験用には組織を使用時まで凍結（−４０℃）保存しておいた。試験はす べて三重培養により行った。

沈渣を１１１のＰｒｏｔｏｓｏｌ　（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ 、　Ｂｏｓｔｏｎ、　ＭＡ）で可溶化し６ｍｌのＥｎｃｏｎｏｆｌｕｏｒ　（Ｎ ｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ、　Ｂｏｓｔｏｎ。

ＭＡ）を加えた後、従来の液体シンチレーション計数によって放射能を測定した 。

［３Ｈ］ＡＰ４（比放射能（Ｓ、Ａ、）　＝２６．Ｉ　Ｃｉ／ｍ　ｍｏｌ。

Ｎｅｗ　Ｅｒ＋ｇＩａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ、　Ｂｏｓｔｏｎ９ＭＡ）の特異的 結合は、ＨＥＰＥＳ　ＫＯ）（緩衝液（０，０５Ｍ：ｐＨ７，１）を用いてＢｕ ｔｃｈｅｒて調査した。３７℃で４５分間培養（２＋ｓｌ）を行い、遠心分離（ ４５，０００ｇ：　Ｉ　０分、４℃）によって反応を終結させた。

上清を捨て、沈渣を水冷緩衝液３．５ｍｌで２回、す早く表面のみを洗浄した。

試験におけるリガンドの最終濃度は５０ｎＭで非特異的結合を明確にするためし 一グルタミン酸塩（１０−Ｍ）を用いた。

［’Ｈ］　ＡＭＰＡ　（Ｓ、Ａ、＝２５．６Ｃｉ／ｓ　ｍｏｌ、　ｌｉｅｗ　Ｅ ｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）の特異的結合は、ｌｏｏｍＭＫｓｃを含むＴｒ ｔｓＨｃＬ緩衝液（０，０５Ｍ、ｐＨ６，９；２３℃）を用いてＭｕｒｐｈｙら の方法（Ｓｏｃ、　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、　Ａｂｓ、旦、　１０９．１９８５）に 従って調査した。組織をＴｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００（０，０５％；Ｖ／Ｖ）と共 に３０分間（３７℃）前培養した後、４℃で６０分間培養（２ＩＩｌ）を行った 。上滑を捨て、沈渣を水冷緩衝液３．５ｍｌで２回、す早く表面のみを洗浄した 。試験におけるすガントの最終濃度は＋６ｎＭで、非特異的結合を明確にするた めし一グルタミン酸塩（１０−Ｍ）を用いた。

［’Ｈ］　ＡＰ７　（Ｓ、Ａ、＝５８．４　Ｃｉ／ｍ　ｍｏｌ、Ｎｅｗ　Ｅｎｇ ｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ）の特異的結合は、Ｔｒｉｓ　クエン酸緩衝液（０，０ ５Ｍ；　ｐＨ７，５：　２３℃）を用いてＦｅｒｋａｎｙとＣｏｙｌｅによって 報告された方法（Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ、　３３．１２９５−１３０５．１９８３） に従い調査した。組織を前培養（３０分、３７℃）した後、３７℃で９０分間培 養（２１１１）を行い、遠心分離（４５，０００ｇ：　Ｉ　０分、４℃）によっ て反応を終結させた。上清を捨て、沈渣を水冷緩衝液３゜５ｍｌで２回、す早く 表面のみを洗浄した。試験におけるリガンドの最終濃度は５００μＭで、非特異 的結合を明確にするためし一グルタミン酸塩（１０−Ｍ）を用いた。

［３Ｈ］　ＫＡ　（Ｓ、Ａ、＝＝　６　０　Ｃｉ　７ｍ　ｍｏｌ、Ｎｅｗ　Ｅｎ ｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）の特異的結合は、Ｔｒｉｓ　ＨＣＬ４１衝液（０ ，０５Ｍ：ｐＨ７，／１．２３℃）を用いてＬｏｎｄｏｎとＣｏｙｌｅの方法（ Ｍｏ１．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　■、　４９２−５０５．１９７９）に従って調 査した。４℃で９０分間培Ｊｌ（２ｍｌ）を行い、遠心分離（４５，０００ｇ； 　ｌ　０分；４℃）によって反応を終結させた。上清を捨て、沈渣を水冷緩衝液 ３．５ｍｌで２回、す早く表面のみを洗浄した。試験におけるリガンドの最終濃 度は５ｎＭで、非特異的結合を明確にするためし一グルタミン酸塩（１０−Ｍ） を用いた。

結果は表１に示す。最終濃度１００μＭで試験をおこなった場合、化合物３．５ ．６．９．１２．１５は［３Ｈ］ＫＡあるいは［”Ｈ］ＡＭＰＡの特異的結合を ２０％以下しか阻害しなかった。化合物９は同様に１００μＭの濃度で［’Ｈ， ＦＡ、Ｐ４と［３Ｈ］ＡＰ７の特異的結合も阻害できなかった。化合物３．６． １２．１５は［３１１コＡＰ４及び［’Ｈ］ＡＰ７の特異的結合を濃度依存的に 阻害し、各試験における強さの順は１５〉３＞１２ン６であった。化合物３．１ ２．１５は［’Ｈ］ＡＰ４と［’ＨｉＡＰ７の両持異的結合を阻害する能力がα −アミノ−ω−ホスホノ酸、ＤＬ（±）ＡＰ７と同程度であったが、化合物６の 方はこの点については３〜１０倍能力が弱かった。また化合物６は２つの試験に おける差がはっきりしており、［’ＨコＡＰ４よりも［Ｈ］ＡＰ７の特異的結合 を阻害する能力の方が強かった。

表１ 実施例の化合物が、［３Ｈ］興奮性アミノ酸のラット脳膜への特異的結合を阻害 する能力［３Ｈ］八Ｐ４　［Ｈ］ＡＰ？　［３１（］Ｋａｉｎａｔｅ　Ｃ’）Ｉ ］ＡＭＰＡＸＶ１．０３　２．２９　＞＞１００　＞＞１００ＩＩＩ　６．８　 ６．１　＞＞１００　＞＞１００Ｘｌｌ　９．５　Ｎ、Ｔ、　＞＞１００　＞＞ １００Ｖｌ　１６，７　５２．５　＞＞１００　＞＞１００ＩＸ　＞＞１００　 ＞＞１００　）＞１００　＞＞１００Ｖ　＞＞ｔｏｏ　＞＞１００　＞＞１００ 　Ｎ、Ｔ。

ＡＰ７　５．１　６．８　＞＞１００　＞＞１００方法は本文中に記載する通り である。表中の値は、８種類の薬剤濃度を用い三重測定によってそれぞれ最低３ 回測定した平均値である。値が＞＞１００μＭとなっている所は、試験に用いた 薬剤の最高濃度においても特異的結合リガンドが２０％以下しか見られなかった ということを示している。

実施例１７ 最大電気ショック発作（ＭＥ　Ｓ　’）の防御化合物３．５．６．９．１２．１ ５、及び対照化合物ＤＬ（土）Ｐ７の最大電気ショックにより誘発された発作に 対する抗痙れん活性について評価した。

試験に当たっては、ＣＦ−１雄マウス（２０−２５９；　Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉ ｖｅｒｓ）の耳に電極を取り付け、０．５ｍＡの電流を０．２秒間流して発作を 引き起こした。抗痙れん活性は発作における伸筋部分が消失することで示され、 後肢の伸長が体平面に対して９０”以上の角度にならない場合と定義した。上記 の後肢伸長が見られなかったマウスの割合を計算しデータとした。

薬剤はプロピレングリコールと蒸留水の溶液（５：９５；Ｖ／Ｖ）中に溶解した 。ｉ　、ｃ　、ｖ投与の場合、薬剤は最終容量５μｇで試験１５分府に投与した 。ｉ、ｐ、投与の場合、薬剤は１２　、５　ｍＱｌｋｇの量で試験３０分前に投 与した。

結果は表２に示す。対照化合物ＡＰ７は予想通りＭＥＳ誘発発作に対して用量依 存的な防御活性を示し、Ｅ　Ｄ　ｂ。計算値はＩＣ，Ｖ、及びｉ、ｐ、注射の場 合でそれぞれ８４μｇ（ｎ　＝　８　）、＋　２７ｒｂ９／ｋｆｌｃｎ　＝　１ ６　）であった。実施例化合物３．５．６．１２．１５を対照化合物のＥ　Ｄ　 ｓ　ｏ値と同量またはその２倍に相当するモル用量で投与したところ、どちらの 投与経路においてもＭＥＳ誘発痙れんに対する効果は見られなかった。実施例９ の化合物はＭＥＳ誘発発作に対しある程度の防御活性を示し、ＥＤｓｏ値はＩ　 ５ｕ９Ｃｉ、ｃ、ｖ、）、Ｅ　Ｄ　ｆ　ｓ値は５００　ｔａ９／ｋｇ　（ｉｐ、 ）と算定された。実施例９化合物は高用量側で動物において顕著な運動失調を起 こす場合があり、試験不能であった。

表２ 実施例の化合物が、ＣＦ−１雄マウスにおいて最大電気ショックあるいはベンチ レンチトラゾルにより誘発された発作を拮抗する能力 Ｅｘａｍｐｌｅ　Ｅ　Ｄ　ｓ。

（ｕｇ）　（ＩＩ１ｇ／ｋｇ）　（ｕｇ）　（ｍｇ／ｋｇ）ＡＰ７　ｇ、３　１ ２７　１．８　１９９Ｖｌ　＞１００　Ｎ、Ｔ、　３．２　＞＞３５０Ｄ（１６ ５００＊　２４　＞　＞　２５０Ｖ　＞＞１００　Ｎ、Ｔ、　＞＞２８　３５０ Ｈ［Ｉ　Ｎ、Ｔ、　＞＞２５０　＞＞６　＞＞５００判　＞＞２３　＞＞１５５ 　＞＞５　＞＞３００ＸＶ　＞＞２２　＞＞１５０　＞＞ｓ　＞＞３００方法は 本文中に記載する通りである。表中のＥＤ、。値は、各薬剤につき各濃度６−８ 匹の動物を用い最低５′ａ度における用量反応曲線を描くことにより算出した。

ＥＤ、。値が〉〉となっている所は、試験に用いた薬剤の最高濃度においても防 御の見られた動物が２０％以下であったということを示している。

＊試験を行った最高用量；ＥＤ□ ＊＊試験を行った最高用量；発作に対する防御の見られた動物が５０％；７匹の 動物中３匹は観察期間終了前に死亡。

実施例１８ ペンヂレンテトラゾル誘発発作（ＰＴＺ）の防御化合物３．５．６．９．１２、 Ｉ５、及び対照化合物Ｄ　Ｌ、　（出）ＡＰ７の、ペンヂレンテトラゾルにより 誘発された発作（ＰＴＺ）に対する抗痙れん活性について評価した。

試験に当たっては、ＰＴＺを食塩水（０，９％：ｗ／ｖ）中に溶解しＣＦ−１雄 マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒｓ；２０−２５９）に８５　ｍ９７に９の 用量で供試化合物投与の１５分後（ｉ、ｃ、ｖ、）または３０分後（ｉ、ｐ、） に投与した。マウスはＰＴＺ投与投与後方０分間観察発作か起きたか起きないか を記録した。発作の起きた動物の割合をデータとして表わした。

試験に当たって、実施例化合物５．６．１２．１５と対照化合物はプロピレング リコールと蒸留水の溶液（５：９５；Ｖ／Ｖ）中に溶解し、実施例化合物３と９ は０．２Ｍ炭酸水素イオン中に溶解した。薬剤はｉ、ｃ、ｖ、及びｉ、ｐ、用に それぞれ５μＱまたは１．２　、５　ｍＱ／に９の容量で投与した。

結果は表２に示す。実施例化合物３．１２．１５を対照化合物がＰＴＺ誘発発作 を抑制するＥＤ、。値と同量またはその２倍に相当する量でｉ、ｃ、ｖ、または ｉ、ｐ、投与しても活性は見られなかった。実施例６の合成経路における中間体 化合物である実施例５は、３５０　ｔｏ９／に９でのｆ、ｐ、注射後ある程度の 発作防御活性（７動物中４匹）を示した。実施例５を高用量（５００ｍｇ／ｋｇ ）で投与すると試験動物の４０％が死亡したため、発作防御活性は記録できなか った。

実施例６は＋、ｃ、ｖ、投与後のＰＴＺ誘発痙れん抑制効果が対照化合物と同程 度であった。（表２）しかしｉ、ｐ、投与後では３５０　ｍｇ／　ｋｇまでの用 量においてこの発作系では動物を有意に防御することはできなかった。

実施例９も心室内投与を行った時にＰＴＺにより誘発される発作からマウスを防 御する活性をもっており、ＥＤｓｏ値は対照化合物の１．０倍、実施例６の６倍 であった。実施例６の場合と同様実施例９も腹腔内注射時には抗痙れん活性をほ とんどもたなかった。

化合物６及び９はＰＴＺ誘発発作系においてｉ　、ｃ　、ｖ　、投与時に強い抗 痙れん薬であるが、ＭＥＳ誘発発作系ではなくこの発作系においてのみ防御活性 を示すという選択性をもつ点で対照化合物と異なる。

４１束７１τ百− １＝−次℃ｈトう−な一一般式一 興奮性アミノ酸、その誘発体またはその塩。

Ｉ、事件の表示 国際出願番号　ＰＣＴ　ＵＳ／８７１００４４４２、発明の名称 特異的興奮性アミノ酸神経伝達物質受容体の拮抗物質３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　アメリカ合衆国、メリランド州　２１１０８、ミラースヴイル、パックス バー　コート　４０７氏名　レツォタルスキー、ジャヌツ　ワクロウ（ほか２名 ）４、代理人 ６、補正の対象　明細書、請求の範囲の翻訳文、委任状７、補正の内容　明細書 、請求の範囲の翻訳文の浄書国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．次のような一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ１及びＲ２は同一かまたは異なるかの何れかであり、水素原子、低級 アルキル基、ハロゲン原子、ブタジエン−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−基、アミノ 基、ニトロ基、トリフロロメチル基もしくはシアノ基からなる基から選択される 。ｎ及びｍは０、１、２、もしくは３の整数を表す。］で表される神経伝達物質 レセブタ−アンタゴニストである効力のある特異的興奮性アミノ酸、その誘導体 またはその塩。 ２．請求の範囲第１項記載のうち、Ｒ１及びＲ２がブタジエン−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ Ｈ＝ＣＨ−基で、ｎ＝１およびｍ＝２である神経伝達物質レセブタ−アンタゴニ ストである効力のある特異的興奮性アミノ酸、その誘発体またはその塩。 ３．請求の範囲第１項記載のうち、４−［２−ホスホノメチル−フェニル］−２ −アミノ−酪酸である物質。 ４．請求の範囲第１項記載のうち、 ３−［２−（２−ジエチル−ホスホノエチル）−フェニル］−２−アセトアミド −２−カルボエトキシプロピオン酸である物質５．請求の範囲第１項記載のうち 、 ３−［２−（２−ホスホノエチル）−フェニル］−２−アミノプロピオン酸であ る物質 ６．請求の範囲第１項記載のうち、 ３−［２−ホスホノメチルフェニル］−２−アミノ−プロピオン酸である物質 ７．請求の範囲第１項記載のうち、 ３−［２−（３−ホスホノプロピル）−フェニル］−２−アミノプロピオン酸で ある物質 ８．請求の範囲第１項記載のうち、 ５−［２−ホスホノメチルフェニル］−２−アミノ−ペンタン酸である物質 ９．請求の範囲第１項から第７項記載のうち、ピバロイロキシメチルエステルで ある物質 １０．請求の範囲第８項記載のうち、ピバロイロキシメチルカルバメイトである 物質 １１．薬剤学上容認されたキャリア（担体）および／もしくは希釈剤と共存し請 求の範囲第一項記載の疼痛を効果的に緩和する１種またはそれ以上の物質を含有 する疼痛緩和のための製剤組成（物） １２．それを必要としている動物に非経口、経鼻、経口、直腸経由またはこれら の組み合せた方法で請求の範囲第１項から第１０項に記載の上述の物質を投与す ることを包含するそれを必要とする動物での疼痛緩和の処置 １３．薬剤学上容認されたキャリア（担体）および／もしくは稀釈剤と共存し請 求の範囲第１項記載の１種またはそれ以上の物質の効果的な量を含有するけいれ んまたはてんかんの治療に用いる製剤組成（物） １４．それを必要としている動物に非経口、経口、経鼻、直腸経由またはこれら の組み合せた方法で請求の範囲第１項もしくは第１２項記載の上述の物質を投与 することを包含するけいれんまたはてんかんの治療に用いる処置１５．薬剤学上 容認されたキャリア（担体）および／もしくは稀釈剤と共存し請求の範囲第１項 記載の１種またはそれ以上の物質の感覚を促進する量を含有する感覚を促進する 製剤組成（物） １６．それを必要としている動物に非経口、経口、経鼻、直腸経由またはこれら の組み合せた方法で請求の範囲第１項もしくは第１４項記載の上述の物質を投与 することを包含する感覚を促進する処置