JPH0160036B2 - - Google Patents
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- JPH0160036B2 JPH0160036B2 JP56047840A JP4784081A JPH0160036B2 JP H0160036 B2 JPH0160036 B2 JP H0160036B2 JP 56047840 A JP56047840 A JP 56047840A JP 4784081 A JP4784081 A JP 4784081A JP H0160036 B2 JPH0160036 B2 JP H0160036B2
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本発明は新規なβ型インターフエロンのＮ末端
ペプチドに関する。 本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護
基、活性基、その他に関し略号で表示する場合
IUPAC、IUBの規定或いは当該分野における慣
用記号に従うものとし、その例を次に挙げる。ま
たアミノ酸などに関し光学異性体がありうる場合
は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。 Arg：アルギニン Asn：アスパラギン Ser：セリン Gln：グルタミン Met：メチオニン Leu：ロイシン Phe：フエニルアラニン Tyr：チロシン Gly：グリシン Ｚ：カルボベンゾキシ基 Su：コハク酸イミド基 Tos：ｐ―トルエンスルホニル基 Boc：第３級ブトキシカルボニル基 インターフエロンは生体細胞がウイルス感染を
受けた時に産生する抗ウイルス性（糖）蛋白質で
あり、これを利用してウイルス性疾患を予防乃至
治療することが注目されつつある。而してヒトの
インターフエロンはα型インターフエロン
（Leucocytes Interferon，Lympho blastoid
Interferon），β型インターフエロン
（Fibroblast Interferon）及びγ型インターフエ
ロン（Immune Interferon）の混合物であること
が今日までに解明されている。しかしながら斯か
るヒトのインターフエロンを単一な型の糖蛋白質
にまで精製する技術は未だ開発されていない。 本発明の究極の目的はβ型インターフエロンに
対して特異的に反応する抗体を用いてヒトのイン
ターフエロンよりβ型インターフエロンを単離精
製することにある。 従来ヒトβ型インターフエロンに対して反応す
る抗体は数多く知られているが、これらの抗体は
いずれもヒトβ型インターフエロンに対して特異
的反応性を有するものではない。本発明者らは、
感度よくヒトβ型インターフエロンを選択し、ヒ
トβ型インターフエロンに対して特異的反応性を
示す抗体を得る方法について鋭意研究を進めてき
た。その結果、一般式 Ｒ―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH (1) 〔式中Ｒは水素原子、Ｈ―Phe―基、Ｈ―Leu
―Gly―Phe―基、Ｈ―Tyr―Asn―Leu―Leu―
Gly―Phe―基又はＨ―Met―Ser―Tyr―Asn―
Leu―Leu―Gly―Phe―基を示す。〕で表わされ
るペプチドを合成し、該ペプチドをハプテンとす
る抗原の合成に成功し、引き続き該抗原から目的
とするヒトβ型インターフエロンに対して特異性
の高い抗体を作成することに成功し、ここに本発
明を完成するに至つた。 本発明の上記一般式(1)で表わされるペプチドを
ハプテンとして用いることにより、ハプテン―担
体結合試薬の存在下に担体と反応させてペプチド
―担体複合体からなるヒトβ型インターフエロン
抗原を製造し得る。またこのヒトβ型インターフ
エロン抗原よりヒトβ型インターフエロンに対し
て特異的反応性を有するヒトβ型インターフエロ
ン抗体を製造し得る。さらにこのヒトβ型インタ
ーフエロン抗体は、これをアフイニテイ―クロマ
トグラフイーの担体に含有させることにより、ヒ
トβ型インターフエロンの精製に利用できる。 本発明で用いられる一般式(1)のペプチドは新規
化合物であり、斯かるペプチドは以下の方法によ
つて製造できる。 一般式(1)のペプチドは、ペプチド合成の常套手
段で製造し得る。固相合成法、液相合成法のいず
れによつてもよいが、液相合成法が有利な場合が
多い。そのようなペプチド合成の手段は、たとえ
ば“The Peptides”、第１巻（1966）、Schrｏ¨der
and Luhke著，Academic Press，New York，
U.S.A.あるいは“ペプチド合成”、泉屋ら著、丸
善株式会社（1975年）に記載されており、たとえ
ばアジド法、クロライド法、酸無水物法、混酸無
水物法、DCC法、活性エステル法、例えばｐ―
ニトロフエニルエステル法、Ｎ―ヒドロキシコハ
ク酸イミドエステル法、シアノメチルエステル法
等、ウツドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボジ
イミダゾール法、酸化還元法、DCC／アデイテ
イブ（例 HONB，HOBt，HOSu）法などがあ
げられる。 一般式(1)のペプチドは、一般のポリペプチドの
合成法、例えば末端アミノ酸に順次１個づつアミ
ノ酸を縮合させる所謂ステツプワイズ法、数個の
フラグメントに分けてカツプリングさせていく方
法等に従い容易に製造できる。より詳細には上記
ペプチドは、その結合の任意の位置で２分される
２種のフラグメントの一方に相当する反応性カル
ボキシル基を有する原料と、他方のフラグメント
に相当する反応性アミノ基を有する原料をペプチ
ド合成の常套手段で縮合させ、生成する縮合物が
保護基を有する場合、その保護基を常套手段で脱
離させることにより製造し得る。 一般式(1)のペプチドを製造する反応工程でアル
ギニンは通常保護しておくのが望ましい場合が多
く、最終工程としてはペプチドの構成アミノ酸残
基の少なくとも一つが保護された保護ペプチドか
ら保護基をすべて脱離することにより製造しうる
場合が多い。 原料の反応に関与すべきでない官能基の保護及
び保護基、並びにその保護基の脱離、反応に関与
する官能基の活性化などもまた公知のものあるい
は手段から適宜選択し得る。 原料のアミノ基の保護基としては、例えばカル
ボベンゾキシ、tert―ブチルオキシカルボニル、
tert―アミルオキシカルボニル、イソボルニルオ
キシカルボニル、ｐ―メトキシベンジルオキシカ
ルボニル、２―クロル―ベンジルオキシカルボニ
ル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオ
ロアセチル、フタリル、ホルミル、ｏ―ニトロフ
エニルスルフエニル、ジフエニルホスフイノチオ
イルなどが挙げられる。カルボキシル基の保護基
としては、例えばアルキルエステル（例メチル、
エチル、プロピル、ブチル、tert―ブチルなどの
エステル基）、ベンジルエステル基、ｐ―ニトロ
ベンジルエステル基、ｐ―メトキシベンジルエス
テル基、ｐ―クロルベンジルエステル基、ベンズ
ヒドリルエステル基、カルボベンゾキシヒドラジ
ド基、tert―ブチルオキシカルボニルヒドラジド
基、トリチルヒドラジド基等が挙げられる。 アルギニンのグアニジノ基の保護基としては、
例えばニトロ基、トシル基、ｐ―メトキシベンゼ
ンスルホニル基、カルボベンゾキシ、イソボルニ
ルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボ
ニル等が挙げられる。また、そのグアニジノ基は
酸（例、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン
酸、塩酸、硫酸など）塩の形で保護してもよい。 メチオニンはスルホキサイドの形で保護してお
いてもよい。原料のカルボキシル基の活性化され
たものとしては、例えば対応する酸クロライド、
酸無水物又は混合酸無水物、アジド、活性エステ
ル（メチルアルコール、エチルアルコール、ベン
ジルアルコール、ペンタクロロフエノール、ｐ―
ニトロフエノール、Ｎ―ヒドロキシサクシンイミ
ド、Ｎ―ヒドロキシベンズトリアゾール、Ｎ―ヒ
ドロキシ―５―ノルボルネン―２，３―ジカルボ
キシイミド等とのエステル）等が挙げられる。ペ
プチド結合形成反応は縮合剤（例：ジシクロヘキ
シルカルボジイミド、カルボジイミダゾール等の
カルボジイミド試薬、テトラエチルピロホスフイ
ト）の存在下に実施し得る場合がある。 上記一般式(1)で表わされるペプチドはより具体
的には以下に示す方法に従い製造される。即ち一
般式(1)のペプチドのうち、Ｒが水素原子を示すペ
プチドは下記（）に従い製造され、ＲがＨ―
Phe―基を示すペプチドは下記（）に従い製造
され、ＲがＨ―Leu―Gly―Phe―基を示すペプ
チドは下記（）に従い製造され、ＲがＨ―Tyr
―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―基を示すペプチ
ドは下記（）に従い製造され、またＲがＨ―
Met―Ser―Tyr―Asn―Len―Len―Gly―Phe―
基を示すペプチドは下記（）に従い製造され
る。 〔上記（）〜（）において、Ａはアミノ基
の保護基、Ｂは水酸基又はカルボキシル基の活性
基、Ｃはアルギニンのグアニジノ基の保護基をそ
れぞれ示す。〕 ペプチド(2)とペプチド(3)との反応は、溶媒の存
在下に行なうことができる。溶媒としては、ペプ
チド縮合反応に使用し得ることが知られているも
のから適宜選択でき、例えば無水または含水のジ
メチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ピ
リジン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロルメ
タン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ―メ
チルピロリドン、ヘキサメチルリン酸トリアミド
或いはこれらの混合溶媒等が挙げられる。ペプチ
ド(3)とペプチド(2)との使用割合としては特に限定
されず広い範囲内で適宜選択することができる
が、通常前者に対して後者を等量〜５倍量、好ま
しくは等量〜1.5倍量使用するのがよい。反応温
度はペプチド結合形成反応に使用され得ることが
知られている範囲から適宜選択され、通常約−40
〜約60℃、好ましくは約−20〜約40℃の範囲から
適宜選択される。反応時間は一般に数分〜30時間
程度である。 ペプチド(5)とアミノ酸(6)との反応、ペプチド(8)
とペプチド(9)との反応、ペプチド(11)とペプチド(12)
との反応及びペプチド（14）とペプチド（15）と
の反応はいずれもペプチド(2)とペプチド(3)との反
応と同様にして行なうことができる。 上記縮合反応終了後、得られるペプチド(4)のＡ
及びＣの保護基は常法により離脱できる。斯かる
方法としては例えば液体アンモニア中での金属ナ
トリウムによる還元方法を挙げることができる。
金属ナトリウムは、反応溶液がパーマネントブル
ーに30秒〜10分間程度呈色しているような量で用
いられる。この還元は通常−40〜−70℃程度にて
行なわれる。 ペプチド(7)、ペプチド(10)、ペプチド（13）又は
ペプチド（16）からの保護基Ａ及びＣの除去は、
ペプチド(4)から保護基Ａ及びＣを除去する方法と
同様にして行なわれる。 上記（）において用いられるペプチド(3)は例
えば下記に示す方法により製造される。 〔上記においてR1は低級アルキル基を示す。
Ａ，Ｂ及びＣは前記に同じ。〕 アミノ酸（17）とアミノ酸（18）との反応は前
記ペプチド(2)とペプチド(3)との反応と同様にして
行なうことができる。 ペプチド（19）のＡの保護基は常法により離脱
できる。斯かる方法としては、例えば還元的方法
（例パラジウム、パラジウム黒等の触媒を用いる
水素添加、液体アンモニア中金属ナトリウムによ
る還元）、アシドリシス（例トリフルオロ酢酸、
弗化水素、メタンスルホン酸、臭化水素酸等の強
酸によるアシドリシス）等が挙げられる。例えば
触媒を用いる水素添加の場合には、水素圧１気
圧、０〜40℃にて行なうことができる。触媒の使
用量は通常100mg〜１ｇ程度でよく、一般に１〜
48時間程度で反応は終了する。またアシドリシス
の場合には無溶媒下通常０〜30℃程度、好ましく
は０〜20℃にて行なわれ、一般に15分〜１時間程
度で反応は終了する。酸の使用量としては原料化
合物に対し通常５〜10倍量程度とするのがよい。
また液体アンモニア中金属ナトリウムによる還元
については既に上記で述べた条件を採用できる。 ペプチド（20）とアミノ酸（21）との反応は前
記ペプチド(2)とペプチド(3)との反応と同様にして
行なうことができる。 ペプチド（22）を加水分解してペプチド（23）
を得る反応は例えば塩酸、硫酸等の鉱酸、水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリの存在
下水、メタノール、エタノール、ジオキサン等の
溶媒中にて行なわれる。該反応は通常20〜50℃に
て30分〜３時間程度で行なわれる。 ペプチド（23）から保護基Ａを除去する方法と
しては、例えばパラジウム、パラジウム黒等の触
媒を用いる水素添加、アシドリシス等の方法を挙
げることができる。これらの方法の条件としては
既に上述した条件をいずれも採用できる。 上記（）において用いられるペプチド(5)はペ
プチド(4)から保護基Ａを除去することにより製造
される。また同様にして上記（）において用い
られるペプチド(8)はペプチド(7)から保護基Ａを除
去することにより製造され、上記（）において
用いられるペプチド(11)はペプチド(10)から保護基Ａ
を除去することにより製造され、上記（）にお
いて用いられるペプチド（14）はペプチド（13）
から保護基Ａを除去することにより製造される。
ペプチド(4)、ペプチド(7)、ペプチド(10)及びペプチ
ド（13）から保護基Ａを除去する方法としては例
えばパラジウム、パラジウム黒等の触媒を用いる
水素添加、アシドリシス等を挙げることができ
る。これらの方法の条件としては既に上述した条
件をいずれも採用できる。 上記（）において用いられるペプチド(12)は例
えば下記に示す方法により製造される。 Ａ―Asn―Ｂ （24）Ｈ―Leu―OR1 （25） ―――――――→ Ａ―Asn―Leu―OR1 （26） ――――→ Ｈ―Asn―Leu―OR1 （27） ｜ ｜ ↓ Ａ―Tyr―Ｂ （28） Ａ―Tyr―Asn―Leu―OR1 （29） ↓ Ａ―Tyr―Asn―Leu―OH （30） ↓ Ａ―Tyr―Asn―Leu―Ｂ （12） 〔上記においてR1，Ａ，Ｂ及びＣは前記に同
じ。〕アミノ酸（24）とアミノ酸（25）との反応
及びペプチド（27）とアミノ酸（28）との反応は
いずれも前記ペプチド(2)とペプチド(3)との反応と
同様にして行なうことができる。ペプチド（26）
から保護基Ａを除去するには前記ペプチド（19）
から保護基Ａを除去する方法をいずれも適用でき
る。またペプチド（29）を加水分解してペプチド
（30）を得る反応は前記ペプチド（22）を加水分
解してペプチド（23）を得る反応と同様の条件下
に行なうことができる。 ペプチド（30）からペプチド(12)を得る好ましい
方法として例えば混合酸無水物法、アジド法等を
挙げることができる。 混合酸無水物法では、適当な溶媒中塩基性化合
物の存在下アルキルハロカルボン酸を用いて行な
われる。使用されるアルキルハロカルボン酸とし
ては例えばクロロ蟻酸メチル、ブロモ蟻酸メチ
ル、クロロ蟻酸エチル、ブロモ蟻酸エチル、クロ
ロ蟻酸イソブチル等が挙げられる。また塩基性化
合物としては例えばトリエチルアミン、トリメチ
ルアミン、ピリジン、ジメチルアニリン、Ｎ―メ
チルモルホリン、１，５―ジアザビシクロ〔４，
３，０〕ノネン―５（DBN）、１，５―ジアザビ
シクロ〔５，４，０〕ウンデセン―５（DBU）、
１，４―ジアザビシクロ〔２，２，２〕オクタン
（DABCO）等の有機塩基、炭酸カリウム、炭酸
ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリ
ウム等の無機塩基が挙げられる。用いられる溶媒
は混合酸無水物法に慣用の溶媒がいずれも使用可
能であり、具体的には塩化メチレン、クロロホル
ム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、
ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水
素類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、
ジメトキシエタン等のエーテル類、酢酸メチル、
酢酸エチル等のエステル類、Ｎ，Ｎ―ジメチルホ
ルムアミド、ジメチルスルホキシド、ヘキサメチ
ルリン酸トリアミド等の非プロトン性極性溶媒な
どが挙げられる。該反応は−20〜100℃好ましく
は−20〜50℃において行なわれ、反応時間は一般
に５分〜10時間好ましくは５分〜２時間である。 アジド化法では、まず活性化されたカルボキシ
ル基、例えばメチルアルコール、エチルアルコー
ル、ベンジルアルコール等のアルコールで活性化
されたカルボキシル基にヒドラジン水和物を適当
な溶媒中にて反応させればよい。用いられる溶媒
としては例えばジオキサン、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシド又はこれらの混合溶媒
等を挙げることができる。ヒドラジン水和物の使
用量としては活性化されたカルボキシル基に対し
て通常５〜20倍モル量、好ましくは５〜10倍モル
量とするのがよい。該反応は通常−10℃以下、好
ましくは−20〜−10℃にて行なわれる。斯くして
末端アミノ酸のカルボキシル基部分がヒドラジン
で置換された化合物（ヒドラジン誘導体）を製造
し得る。末端アミノ酸のカルボキシル基部分がア
ジドで置換された化合物は酸の存在下適当な溶媒
中上記で得られるヒドラジン誘導体と亜硝酸化合
物を反応させることにより製造される。酸として
は通常塩酸が用いられる。溶媒としては例えばジ
オキサン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスル
ホキシド又はこれらの混合溶媒等が挙げられる。
また亜硝酸化合物としては例えば亜硝酸ナトリウ
ム、亜硝酸イソアミル、塩化ニトロシル等を挙げ
ることができ、斯かる亜硝酸化合物をヒドラジン
誘導体に対して通常等モル〜２倍モル量、好まし
くは等モル〜1.5倍モル量用いるのがよい。該反
応は通常−20〜０℃、好ましくは−20〜−10℃に
て行なわれ、一般に５〜10分程度で反応は終了す
る。 上記のようにして製造された一般式(1)のペプチ
ドは反応混合物からペプチドの分離手段例えば抽
出、分配、カラムクロマトグラフイー等により単
離精製される。 RIA法において用いられる標識抗原の製造原料
である標識ペプチドは上記で製造されるペプチド
にI125、I131等の放射性ヨードを導入することに
より製造される。該放射性ヨードの導入は通常の
ヨード化法、例えばクロラミンＴを用いる酸化的
ヨード化法〔W.M.Hunter and F.C.
Greenwood；Nature，194，P495（1962）、
Biochem.J.89，P114（1963）参照〕により行なわ
れる。例えば上記ヨード化法は、適当な溶媒例え
ば0.2Mリン酸緩衝液（PH＝7.4）等の溶媒中、ク
ロラミンＴの存在下室温付近にて10〜30秒程度で
行なわれる。用いられるペプチド、放射性ヨード
及びクロラミンＴの使用割合としては、例えばチ
ロシンに放射性ヨードを１個導入する場合には、
ペプチド中に含まれるチロシン分子１ナノモルに
対して放射性ヨードを１ミリキユーリー程度、ク
ロラミンＴを10〜100ナノモル程度用いるのがよ
く、またチロシンに放射性ヨードを２個導入する
場合には、ペプチド中に含まれるチロシン分子１
ナノモルに対して放射性ヨードを２ミリキユーリ
ー程度、クロラミンＴを10〜100ナノモル程度用
いるのがよい。斯くして製造される放射性ヨード
により標識化されたペプチドは通常の分離手段例
えば抽出、分配、カラムクロマトグラフイー、透
析等により単離精製される。このようにして得ら
れるペプチドは必要ならば凍結乾燥させて保存し
ておくこともできる。 本発明方法においては、ハプテンとして上記一
般式(1)で表わされるペプチドを使用する。 ハプテンに結合される担体としては、通常抗原
の作成に当り慣用される高分子の天然若しくは合
成の蛋白質を広く使用でき、例えば馬血清アルブ
ミン、牛血清アルブミン、ウサギ血清アルブミ
ン、人血清アルブミン、ヒツジ血清アルブミン等
の動物の血清アルブミン類、馬血清グロブリン、
牛血清グロブリン、ウサギ血清グロブリン、人血
清グロブリン、ヒツジ血清グロブリン等の動物の
血清グロブリン類、馬チログロブリン、牛チログ
ロブリン、ウサギチログロブリン、人チログロブ
リン、ヒツジチログロブリン等の動物のチログロ
ブリン類、馬ヘモグロビン、牛ヘモグロブリン、
ウサギヘモグロブリン、人ヘモグロブリン、ヒツ
ジヘモグロブリン等の動物のヘモグロブリン類、
動物のヘモシアニン類、回虫より抽出された蛋白
質（アスカーリス抽出物、特願昭54―92781号参
照）、ポリリジン、ポリグルタミン酸、リジン―
グルタミン酸共重合体、リジン又はオルニチンを
含む共重合体等を挙げることができる。 アスカーリス抽出物について以下に詳述する。 アスカーリス抽出物は、ブタ回虫（Ascaris
suum）の粉砕物より通常の蛋白抽出法に従い抽
出される。抽出溶媒としては例えば水、生理食塩
水、50％メタノールまたはエタノール水溶液、中
性付近の緩衝液等の公知の各種蛋白抽出溶媒を使
用でき、特に生理食塩水を用いるのが好ましい。
上記抽出物は、より具体的には、例えば次の如く
して製造される。即ちブタ回虫の内容物を除去
し、生理食塩水で洗浄後、抽出を容易とするため
好ましくは細断し、該細断物を例えば生理食塩水
等の蛋白抽出溶媒中に添加し、ホモジネートしな
がら抽出する。この抽出は通常低温下において行
なわれ、好ましくは約２〜10℃で有利に行なわれ
る。かくして得られる抽出液を次いで遠心分離
し、上清を採取し透析後透析液を凍結乾燥するか
又は更に上記透析液を再度遠心分離し、上清を採
取し、浮遊物を除去後凍結乾燥することによつ
て、目的とするアスカーリス抽出物が製造され
る。これは更に必要に応じて通常の蛋白精製手段
例えば透析法、ゲル過法、吸着法、クロマトグ
ラフ法等により精製後、本発明に利用することが
できる。また本発明に用いるアスカーリス抽出物
は、例えばJ.Immun.，111，260〜268（1973）、J.
Immun.，122，302〜308（1979）、J.Immun.，98，
893〜900（1967）及びAm.J.Physiol.，199，575〜
578（1960）に記載されたものまたはこれらを更に
精製したものであつてもよい。 ハプテン―担体結合試薬としては通常抗原の作
成に当り慣用されているものを広く使用でき、具
体的にはアミノ基とアミノ基とを架橋結合させ
る、例えばグルオキサール、マロンジアルデヒ
ド、グルタールアルデヒド、スクシンアルデヒ
ド、アジポアルデヒド等の脂肪族ジアルデヒド
類、チオール基とチオール基とを架橋結合させ
る、例えばＮ，N′―ｏ―フエニレンジマレイミ
ド、Ｎ，N′―ｍ―フエニレンジマレイミド等の
ジマレイミド化合物、アミノ基とチオール基とを
架橋結合させる、例えばメタマレイミドベンゾイ
ル―Ｎ―ヒドロキシスクシンイミドエステル、４
―（マレイミドメチル）―シクロヘキサン―１―
カルボキシル―N′―ヒドロキシスクシンイミド
エステル等のマレイミドカルボキシル―Ｎ―ヒド
ロキシスクシンイミドエステル化合物、アミノ基
とカルボキシル基とをアミド結合させる通常のペ
プチド結合形成反応に用いられる試薬、例えば
Ｎ，Ｎ―ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ―
エチル―N′―ジメチルアミノカルボジイミド、
１―エチル―３―ジイソプロピルアミノカルボジ
イミド、１―シクロヘキシル―３―（２―モルホ
リニル―４―エチル）カルボジイミド等のカルボ
ジイミド類等の脱水縮合剤を挙げることができる
が、さらにはｐ―ジアゾニウムフエニル酢酸等の
ジアゾニウムアリールカルボン酸類と通常のペプ
チド結合形成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤と
を組み合わせたものも使用可能である。 本発明の抗原は上記ハプテンと担体とをハプテ
ン―担体結合試薬の存在下に反応させることによ
り製造される。上記反応は、水溶液もしくはPH７
〜10の通常の緩衝液中好ましくはPH８〜９の緩衝
液中で０〜40℃好ましくは室温付近で行なわれ、
約１〜24時間、好ましくは３〜５時間で反応は完
結する。上記において用いられる代表的緩衝液と
しては、次のようなものを例示できる。 0.2N水酸化ナトリウム―0.2Mホウ酸―0.2M塩
化カリウム緩衝液、 0.2M炭酸ナトリウム―0.2Mホウ酸―0.2M塩化
カリウム緩衝液、 0.05M四ホウ酸ナトリウム―0.2Mホウ酸―
0.05M塩化ナトリウム緩衝液、 0.1Mリン酸二水素カリウム―0.05M四ホウ酸
ナトリウム緩衝液 上記においてハプテン、ハプテン―担体結合試
薬及び担体の使用割合は適宜に決定できるが、通
常ハプテンに対して担体を２〜６倍重量好ましく
は３〜５倍重量、及びハプテン―担体結合試薬５
〜10倍モルとするのがよい。上記反応によりハプ
テン―担体結合試薬を仲介させて担体とハプテン
とが結合した本発明のペプチド―担体複合体から
成るヒトβ型インターフエロンの抗原が収得され
る。反応終了後得られる抗原は常法に従い、例え
ば透析法、ゲル過法、分別沈殿法等により容易
に単離精製できる。また該抗原は通常の凍結乾燥
法により保存できる。かくして得られる本発明の
抗原は、通常蛋白質１モルに対しペプチドが平均
５〜20モル結合したものであり、いずれも引き続
き再現性よく、ヒトβ型インターフエロンに対す
る特異性の高い抗体の作成を可能とするものであ
るが、特に上記蛋白質に対するペプチドの結合モ
ル比が１：８〜15のものは、特異性が一層高く高
力価、高感度の抗体を作成し得るものであり好ま
しい。 上記で得られる抗原による抗体の作成に当つて
は、常法に従い抗原を哺乳動物に投与し、生体内
に産生される抗体を採取する方法を採用できる。
抗体の製造に供せられる哺乳動物としては特に制
限はないが、通常兎やモルモツトを用いるのが望
ましい。抗体の産生に当つては、上記により得ら
れる抗原の所定量を生理食塩水で適当濃度に希釈
し、フロインドの補助液（Complete Freund′s
Adjuvant）と混合して懸濁液を調整し、之を哺
乳動物体に投与すればよい。例えば兎に上記懸濁
液を皮内注射（抗原の量として0.5〜５mg／回）
し、以後２週間毎に２〜10ケ月好ましくは４〜６
ケ月間投与し免疫化させればよい。抗体の採取
は、上記懸濁液の最終投与後抗体が多量産出され
る時期、通常上記最終投与１〜２週間経過後、免
疫化された動物から採血し、之を遠心分離後血清
を分離採取することにより行なわれる。殊に本発
明方法によれば、用いる抗原の特殊性に基づい
て、常に安定してヒトのβ型インターフエロンに
対して非常に優れた特異性を有し、高力価、高感
度の抗体を再現性よく収得できる利点がある。 かくして得られる抗体は、上記の通り殊に優れ
たヒトのβ型インターフエロン特異性を有するも
のであり、斯界で要望されているRIA法によるヒ
トのβ型インターフエロンの定量を高精度をもつ
て可能とする有用なものである。また該抗体は、
これに酵素または螢光物質で標識することによつ
てエンザイムイムノアツセイ（EIA）法、フロー
レツセンスイムアツセイ（FIA）法等に使用でき
る。さらに該抗体は公知の不溶化させる物質と反
応させて不溶化抗体とすることもできる。 以下本発明を更に詳しく説明するための参考例
及び実施例を挙げるが、本発明はこれに限定され
るものではない。 尚参考例におけるRf値はシリカゲル上の簿層
クロマトグラフイーにて下記混合溶媒を用いて測
定したものである。 Rf〓…１―ブタノール―酢酸―水（４：１：
５） Rf〓…１―ブタノール―ピリジン―酢酸―水
（15：10：３：12） 〈ペプチドの合成〉 参考例 １ Ｚ―Ser―Ser―OMeの製造 Ｚ―Ser―NHNH25.06ｇを50mlのジメチルホ
ルムアミドおよび6.66mlの6N―HCl／ジオキサ
ンに溶解し、−15℃に冷却後イソアミルナイトラ
イト2.68mlを加え、５分間撹拌する。次いで5.60
mlをトリエチルアミンを加えて中和する。この溶
液をＨ―Ser・OMe・HCl3.11ｇとトリエチルア
ミン2.80mlを含有する30mlのジメチルホルムアミ
ド溶液に加え、４℃で20時間撹拌する。ジメチル
ホルムアミドを留去し、得られた残留物を酢酸エ
チルで抽出し、水洗後芒硝で乾燥する。酢酸エチ
ルを留去後、エーテルを加え結晶化し、再沈殿を
酢酸エチル―エーテルで行ない、Ｚ―Ser―Ser
―OMe3.75ｇを得る。 Rf〓値：0.64、Rf〓値：0.77 元素分析値（C15H20N2O7として） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 52.94 5.92 8.23 実測値（％） 52.67 5.89 8.35 参考例 ２ Ｚ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OMeの製造 Ｚ―Ser―Ser―OMe 2.5ｇを50mlのメタノー
ル及び7.34mlの1N―HClに溶解し、500mgのパラ
ジウム黒の存在下20℃、水素圧１気圧で接触還元
を行ない、Ｈ―Ser―Ser―OMe・HClを得る。 Rf〓値：0.08 Ｚ―Arg（Tos）―OH 3.39ｇを40mlのテトラ
ヒドロフラン及び0.75mlのＮ―メチルモルホリン
に加え、−15℃に冷却後0.97mlのイソブチルクロ
ロホルメイトを加え30秒間激しく撹拌する。 上記で得られるＨ―Ser―Ser―OMe・HCl、
ジメチルホルムアミド20ml及びトリエチルアミン
1.03mlを加えて１分間撹拌し、次いで０℃で５分
間、40℃で２分間、室温で15分間それぞれ撹拌す
る。テトラヒドロフラン及びジメチルホルムアミ
ドを留去後酢酸エチルで抽出し、1N―クエン酸
で３回、次いで水で５回洗浄後芒硝で乾燥する。
溶媒を留去し、メタノール―酢酸エチル、エーテ
ルで再沈殿を行ない、Ｚ―Arg（Tos）―Ser―
Ser―OMe 3.65ｇを得る。 Rf〓値：0.51、Rf〓値：0.73 元素分析値（C28H38N6O10Sとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 51.68 5.88 12.91 実測値（％） 51.62 5.82 12.73 参考例 ３ Ｚ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OHの製造 Ｚ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OMe 3.5ｇをメ
タノール50ml及び水10mlに溶解し、1N―
NaOH8.06mlを加え、室温下に45分間撹拌し、次
いで1N―HCl7.24mlを加えて中和し、メタノー
ルを留去後ｎ―ブタノールで抽出する。水洗後ｎ
―ブタノール及び水を留去し、残渣にエーテルを
加え結晶化し、メタノール―酢酸エチルより再沈
殿を行ない、Ｚ―Arg（Tos）―Ser―Ser―
OH2.60ｇを得る。 Rf〓値：0.28、Rf〓値：0.57 元素分析値（C27H36N6O10S・1/2H2Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 50.22 5.77 13.02 実測値（％） 50.24 5.62 13.20 参考例 ４ Ｈ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OHの製造 Ｚ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OH 1.35ｇをメ
タノール50ml及び10％酢酸10mlに溶解し、500mg
のPd存在下20℃、常圧にて接触還元してＨ―
Arg（Tos）―Ser―Ser―OHを得る。 Rf〓値：0.034 参考例 ５ Ｚ―Asn―Leu―OEtの製造 Ｚ―Asn―OH 5.32ｇをテトラヒドロフラン60
ml、ジメチルホルムアミド10ml及びＮ―メチルモ
ルホリン2.04mlに溶解し、イソブチルクロロホル
メイト2.64ml、Ｈ―Leu―OEt・HCl 3.91ｇ及び
トリエチルアミン2.80mlを含む40mlのジメチルホ
ルムアミド溶液を用い、参考例２の方法に準じて
反応を行なう。溶媒を留去後１モルクエン酸水溶
液を加え、沈殿物を取、水洗、減圧乾燥して、
酢酸エチルにて再結晶してＺ―Asn―Leu―OEt
6.1ｇを得る。 Rf〓値：0.71、Rf〓値：0.80 元素分析値（C20H29N3O6として） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 58.95 7.17 10.31 実測値（％） 58.99 7.23 10.26 参考例 ６ Ｚ―Tyr―Asn―Leu―OEtの製造 Ｚ―Asn―Leu―OEt 3.01ｇをメタノール50ml
及び1N―HCl7.4mlに溶解し、パラジウム黒500
mgの存在下室温、常圧にて接触還元を行ない、Ｈ
―Asn―Leu―OEt・HClを得る。 Rf〓値：0.26 上記で得られるＨ―Asn―Leu―OEt・HClを
ジメチルホルムアミド50ml及びトリエチルアミン
1.03mlに溶解し、次にＺ―Tyr―ONHS 3.35ｇを
加え、室温下に20時間放置する。ジメチルホルム
アミドを留去後１モルクエン酸水溶液を加え、沈
殿物を取し、水洗後メタノール―酢酸エチルに
て再沈殿してＺ―Tyr―Asn―Leu―OEt 3.58ｇ
を得る。 Rf〓値：0.73、Rf〓値：0.82 元素分析値（C29H38N4O8として） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 61.04 6.71 9.82 実測値（％） 60.84 6.70 9.39 参考例 ７ Ｚ―Tyr―Asn―Leu―NHNH2の製造 Ｚ―Tyr―Asn―Leu―OEt2.78ｇをメタノール
30mlに溶解し、ヒドラジン水和物1.21mlを加えて
一夜放置し、生じた結晶を取、少量のメタノー
ルにて洗浄してＺ―Try―Asn―Leu―NHNH2
3.10ｇを得る。 Rf〓値：0.56、Rf〓値：0.75 元素分析値（C27H36N6O7として） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 58.26 6.52 15.10 実測値（％） 57.91 6.56 15.12 実施例 １ (a) Boc―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―
OHの製造 Boc―Leu―Gln―OH0.84ｇをテトラヒドロフ
ラン30ml及びＮ―メチルモルホリン0.24mlに溶解
し、イソブチルクロロホルメイト0.31ml及び参考
例４で得られたＨ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OH
を用い、参考例２の方法に準じて行なう。テトラ
ヒドロフラン及びジメチルホルムアミドを留去後
残留物をブタノールで抽出する。ブタノール層を
２％酢酸で洗浄後ブタノールを留去し、メタノー
ル―酢酸エチルで再沈殿してBoc―Leu―Gln―
Arg（Tos）―Ser―Ser―OH 1.54ｇを得る。 Rf〓値：0.18、Rf〓値：0.57 元素分析値（C35H57N9O13S・H2Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 48.77 6.90 14.62 実測値（％） 48.76 6.61 14.78 (b) Ｈ―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OHの製造 Boc―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―
OH 1.50ｇを10mlのトリフルオロ酢酸中15分間室
温で放置して脱Boc化し、乾燥エーテルを加えて
結晶化し、Ｈ―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―
Ser―OHを得る。 Rf〓値：0.04 上記で得られるＨ―Leu―Gln―Arg（Tos）―
Ser―Ser―OHを液体アンモニア25mlに溶解し、
金属ナトリウムの少片を加える。反応液が青色を
呈したとき、乾燥塩化アンモニウム１ｇを添加
し、次いでアンモニアを留去する。残渣を50％酢
酸に溶解し、セフアデツクスＧ―10（2.2×85cm、
溶出液50％酢酸）、さらにLH―20（2.2×80cm、溶
出液0.001N―HCl）にてゲル過し、精製して
Ｈ―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OHを得る。 Rf〓値：0.01、Rf〓値：0.34 〔α〕20 D：−42.5゜（C0.230、0.001N―HCl） 元素分析値（C23H43N9O9・4H2O・
CH3COOHとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 41.60 7.68 17.46 実測値（％） 41.20 7.93 17.91 実施例 ２ (a) Ｚ―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―
Ser―OHの製造 実施例１(b)で得られるＨ―Leu―Gln―Arg
（Tos）―Ser―Ser―OHをジメチルホルムアミ
ド30ml及びトリエチルアミン0.24mlに溶解し、次
いでＺ―Phe―ONHS 0.77ｇを加え、室温で20
時間放置する。ジメチルホルムアミドを留去後残
渣をブタノールにて抽出し、２％酢酸で洗浄す
る。ブタノール層を濃縮し、エーテルを加えて結
晶化し、得られた結晶を取し、熱エタノールよ
り結晶を洗浄してＺ―Phe―Leu―Gln―Arg
（Tos）―Ser―Ser―OH 1.40ｇを得る。 Rf〓値：0.22、Rf〓値：0.59 元素分析値（C47H64N10O14S・H2Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 54.12 6.28 13.43 実測値（％） 54.42 6.38 13.84 (b) Ｈ―Phe―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH
の製造 Ｚ―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser
―OH20mgを液体アンモニア中金属ナトリウム片
にて実施例１(b)と同様の方法で脱Ｚ化、脱Tos化
し、セフアデツクスＧ―10（2.2×85cm、溶出液10
％酢酸）、さらにLH―20（2.2×80cm、溶出液
0.001N―HCl）によるゲル過で精製してＨ―
Phe―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH 12mgを
得る。 Rf〓値：0.01、Rf〓値：0.35 〔α〕20 D：−37.3゜（C0.249、0.001N―HCl） 元素分析値（C32H52N10O10・7H2O・
CH3COOHとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 44.24 7.64 15.17 実測値（％） 44.27 7.10 15.60 実施例 ３ (a) Ｚ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg
（Tos）―Ser―Ser―OHの製造 Ｚ―Leu―Gly―NHNH2 0.39ｇをジメチルホ
ルムアミド５ml及び6N―HCl／ジオキサン0.58
mlに溶解し、イソアミルナイトライト0.15ml、ト
リエチルアミン0.49ml及びＨ―Phe―Leu―Gln―
Arg（Tos）―Ser―Ser―OH 1.00ｇのジメチル
ホルムアミド10ml溶液を用いて参考例１と同様に
反応を行ない、さらにＺ―Leu―Gly N3を当量
加えて４℃にて20時間反応を行なう。ブタノール
で抽出し、２％酢酸で洗浄後ブタノール及び酢酸
を留去し、エーテルを加えて結晶化する。結晶を
取して熱メタノールにて結晶を洗浄し、Ｚ―
Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser
―Ser―OH 0.65ｇを得る。 Rf〓値：0.19、Rf〓値：0.60 元素分析値（C55H78N12O16S・H2Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 54.44 6.64 13.85 実測値（％） 54.74 6.66 13.98 (b) Ｈ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg―Ser
―Ser―OHの製造 Ｚ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）
―Ser―Ser―OH 20mgを実施例１(b)と同様の方
法で脱Ｚ化、脱Tos化し、セフアデツクスＧ―10
（2.2×85cm、溶出液10％酢酸）、さらにLH―20
（2.2×80cm、溶出液0.001N―HCl）によるゲル
過で精製してＨ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―
Arg―Ser―Ser―OH 11mgを得る。 Rf〓値：0.01、Rf〓値：0.40 〔α〕20 D：−27.6゜（C0.228、0.001N―HCl） 元素分析値（C40H66N12O12・6H2O・
CH3COOHとして） Ｃ Ｈ Ｈ 計算値（％） 46.92 7.68 15.63 実測値（％） 46.89 7.25 15.51 実施例 ４ (a) Ｈ―Tyr―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―
Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―OHの製
造 Ｚ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）
―Ser―Ser―OH 600mgをメタノール50ml及び10
％酢酸10mlに溶解しパラジウム500mgの存在下室
温常圧下にて接触還元を行ないＨ―Leu―Gly―
Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―OH
を得る。 Rf〓値：0.18 Ｚ―Tyr―Asn―Leu―NHNH2 420mgをジメ
チルホルムアミド５ml及び6N―HCl／ジオキサ
ン0.37mlに溶解し、イソアミルナイトライト
0.10ml及びトリエチルアミン0.31mlを用い、参考
例１の方法に準じてアジド体を生成させ、この溶
液をＨ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg
（Tos）―Ser―Ser―OHのヘキサメチルリン酸
トリアミド10mlとジメチルホルムアミド10mlの混
合溶液に加え、４℃にて20時間撹拌する。ジメチ
ルホルムアミドを留去して、残渣をブタノールで
抽出し、２％酢酸で洗浄後ブタノールを留去し、
残渣にエーテルを加えて結晶化し、次いで得られ
るＺ―Tyr―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―Leu
―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―OHをメタノー
ル30ml及び10％酢酸10mlに溶解し、室温、常圧に
てパラジウムの存在下に接触還元した後セフアデ
ツクスＧ―25（３×120cm、溶出液50％酢酸）にて
ゲル過してＨ―Tyr―Asn―Leu―Leu―Gly―
Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―OH
650mgを得る。 Rf〓値：0.05、Rf〓値：0.53 元素分析値（C66H98N16O19S・2H2Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 53.28 6.91 15.06 実測値（％） 53.10 6.43 14.84 (b) Ｈ―Tyr―Asn―Leu―Gly―Phe―Leu―
Gln―Arg―Ser―Ser―OHの製造 上記(a)で得られるＨ―Tyr―Asn―Leu―Leu
―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―
Ser―OHを実施例１(b)と同様の方法で脱Tos化
し、セフアデツクスＧ―10（2.2×85cm、溶出液10
％酢酸）、さらにLH―20（2.2×80cm、0.001N―
HCl）によるゲル過で精製してＨ―Tyr―Asn
―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser
―OH ９mgを得る。 Rf〓値：0.01、Rf〓値：0.42 〔α〕20 D：−24.3゜（C0.078、0.001N―HCl） 元素分析値（C59H92N10O17・15H2O・
CH3COOHとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 45.01 7.80 13.77 実測値（％） 45.21 7.31 14.22 実施例 ５ (a) Ｚ―Met―Ser―Tyr―Asn―Leu―Leu―
Gly―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―
Ser―OHの製造 Ｚ―Met―Ser―NHNH2 159mgをジメチルホ
ルムアミド５ml及び6N―HCl／ジオキサン0.21
mlに溶解し、イソアミルナイトライト0.055ml及
びトリエチルアミン0.17mlを用いて参考例１の方
法に準じてアジド体を生成させ、次いでこの溶液
をＨ―Tyr―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―Leu
―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―OH300mg、ジ
メチルホルムアミド５ml及びヘキサメチルリン酸
トリアミド５mlの混合溶液に加え、４℃にて24時
間撹拌する。さらにＺ―Met―Ser―NHNH2を
318mg加え、４℃にて72時間撹拌する。実施例４
ａと同様にして精製を行ない、Ｚ―Met―Ser―
Tyr―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―
Arg（Tos）―Ser―Ser―OHを得る。 (b) Ｈ―Met―Ser―Tyr―Asn―Leu―Leu―
Gly―Phe―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH
の製造上記(a)で得られるＺ―Met―Ser―Tyr
―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―
Arg（Tos）―Ser―Ser―OHを実施例１(b)と同
様の方法で脱Ｚ化、脱Tos化を行ない、セフア
デツクスＧ―25（３×120cm、溶出液50％酢酸）、
さらにLH―20（２×85cm、溶出液0.001N―
HCl）にて精製し、Ｈ―Met―Ser―Tyr―Asn
―Leu―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg―
Ser―Ser―OH 119mgを得る。 Rf〓値：0.01、Rf〓値：0.45 〔α〕20 D：−15.7°（C0.254，0.001N−HCl） 元素分析値（C67H106N18O20S・5H2O・
CH3COOHとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 49.75 7.26 15.13 実測値（％） 49.80 6.92 14.91 アミノ酸分析値 Asp：0.95、Ser：3.15、Gln：1.03、 Met：0.92、Gly：1.05、Leu：3.08、 Tyr：1.00、Phe：0.98、Arg：0.96 〈抗原の製造〉 実施例 ６ 上記実施例１(b)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＡ」と略記する）10mg及び牛血清アルブミ
ン（以下「BSA」と略記する）50mgを酢酸アン
モニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlにとか
す。この溶液に0.1モルのグルタールアルデヒド
溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。その
後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析す
る。透析中５回水を交換する。その後、ペプチド
―蛋白質複合体を含有する溶液を凍結乾燥してヒ
トβ型インターフエロン抗原（以下「抗原」と
略記する）45mgを得る。 実施例 ７ 上記実施例２(b)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＢ」と略記する）５mg及びBSA20mgを酢
酸アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlに
とかす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデ
ヒド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。
その後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析
する。透析中５回水を交換する。その後、ペプチ
ド―蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒト
β型インターフエロン抗原（以下「抗原」と略
記する）23mgを得る。 実施例 ８ 上記実施例３(b)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＣ」と略記する）４mg及びBSA15mgを酢
酸アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlに
とかす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデ
ヒド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。
その後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析
する。透析中５回水を交換する。その後、ペプチ
ド―蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒト
β型インターフエロン抗原（以下「抗原」と略
記する）17mgを得る。 実施例 ９ 上記実施例４(b)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＤ」と略記する）４mg及びBSA12mgを酢
酸アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlに
溶かす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデ
ヒド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。
その後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析
する。透析中５回水を交換する。その後、ペプチ
ド―蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒト
β型インターフエロン抗原（以下「抗原」と略
記する）14mgを得る。 実施例 10 上記実施例５(b)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＥ」と略記する）８mg及びBSA25mgを酢
酸アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlに
溶かす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデ
ヒド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。
その後、反応混合物を48時間、４℃で水１で透
析する。透析中５回水を交換する。その後、ペプ
チド―蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒ
トβ型インターフエロン抗原（以下「抗原」と
略記する）31mgを得る。 実施例 11 ペプチドE8mg及びBSA25mgを水４mlに溶解す
る。この溶液にジシクロヘキシルカーボジイミド
（DCC）を加え、室温で５時間撹拌する。次に反
応混合物を水２用い４℃にて48時間要して透析
する。透析中５回水を交換する。その後ペプチド
―蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトβ
型インターフエロン抗原（以下「抗原」と略記
する）29mgを得る。 〈抗体の製造〉 実施例 12 実施例６で得られる抗原 250μgを1.5mlの生
理食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5ml
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量
と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち
試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を採取
し、本発明のヒトβ型インターフエロン抗体（以
下「抗体」と略記する）を得る。 実施例 13 実施例７で得られる抗原 250μgを1.5mlの生
理食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5ml
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量
と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち
試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を採取
し、本発明のヒトβ型インターフエロン抗体（以
下「抗体」と略記する）を得る。 実施例 14 実施例８で得られる抗原 25μgを1.5mlの生
理食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5ml
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量
と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち
試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を採取
し、本発明のヒトβ型インターフエロン抗体（以
下「抗体」と略記する）を得る。 実施例 15 実施例９で得られる抗原 25μgを1.5mlの生
理食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5ml
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量
と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち
試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を採取
し、本発明のヒトβ型インターフエロン抗体（以
下「抗体」と略記する）を得る。 実施例 16 実施例10で得られる抗原 25μgを1.5mlの生
理食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5ml
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量
と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち
試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を採取
し、本発明のヒトβ型インターフエロン抗体（以
下「抗体」と略記する）を得る。 実施例 17 実施例11で得られる抗原を用い、上記実施例
12と同様に処理すると、高力価にヒトβ型インタ
ーフエロンに特異性を有する抗体（以下「抗体
」と略記する）が得られる。 参考例 Γ 標識ペプチドの製造 (1) Ｈ―Met―Ser―Tyr―Asn―Leu―Leu―
Gly―Phe―Leu―Gln―Aug―Ser―Ser―OH
をクロラミンＴを用いる方法で標識化する。 即ち上記ペプチド5μgの0.2モルのリン酸塩緩
衝液（PH7.4）20μlに〔125〕Na（MEN）１マ
イクロキユーリーの0.2モルリン酸塩緩衝液を
加え、次にクロラミンT3.5mg／mlの0.2モルリ
ン酸塩緩衝液20μlを加える。室温で20秒間放置
して2.4mg／mlの0.2Mリン酸塩緩衝液のソジウ
ムメタジサルフエートの50μl 0.2Mリン酸塩緩
衝液を加えることで反応を終わらせる。反応混
合物をデイーン（DEAE）―セフアデツクスＡ
―25のカラム（1.0×30cm）にかける（溶出液
0.1％BSA及び0.01％NaN3を含む0.1モルトリ
ス―塩酸緩衝液、PH8.6）。第１フラクシヨンを
イオン交換クロマトグラフイーで精製して125
で標識された上記ペプチドを得る。 (2) Ｈ―Met―Ser―Tyr―Asn―Leu―Leu―
Gly―Phe―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH
をクロラミンＴを用いる方法で標識化する。 即ち上記ペプチド5μgの0.2モルのリン酸塩緩
衝液（PH7.4）20μlに〔125〕Na（MEN）１マ
イクロキユリーの0.2モルリン酸塩緩衝液を加
え、次にクロラミンT3.5mg／mlの0.2モルリン
酸塩緩衝液20μlを加える。室温で20秒間放置し
て、2.4mg／mlの0.2Mリン酸塩緩衝液のソジウ
ムメタジサルフエートの50μl 0.2Mリン酸塩緩
衝液を加えることで反応を終わらせる。反応混
合物をSP―セフアデツクスＣ―25のカラム
（1.0×30cm）にかける（溶出液50ミリモルリン
酸塩緩衝液）。第４フラクシヨンが125で標識
された上記ペプチドのフラクシヨンである。 Γ 力価の測定 上記で得られる抗体の力価を次の通り測定す
る。即ち抗体をそれぞれ生理食塩水で10，102，
103，104，105……倍に希釈（イニシヤル）し、
これらの夫々100μlに、125標識ペプチド（上記
で得られる標識ペプチドを約１万cpmになるよう
に希釈したもの）0.1ml及び0.1モルリン酸塩緩衝
液（PH＝7.4）〔0.1％BSA、0.15モル塩化ナトリウ
ム及び0.01％NaN3を含む〕0.2mlを加え、４℃で
24時間インキユベートし、生成した抗体と125
標識抗原との結合体を、デキストラン―活性炭法
及び遠心分離法（４℃、15分間、3000rpm）によ
り未反応（結合しない）125標識ペプチドから
分離し、その放射線をカウントし、各希釈濃度に
おける抗体の125標識ペプチドとの結合率（％）
を測定する。縦軸に抗体の125標識ペプチドと
の結合率（％）及び横軸に抗体の希釈倍率（イニ
シヤル濃度）をとり、各々の濃度において結合率
をプロツトする。結合率が50％となる抗体の希釈
倍率即ち抗体の力価を求めると各々次の通りであ
る。抗体 力価 抗体 52000 抗体 100000以上 Γ 抗体のヒトβ型インターフエロン特異性試験 供試試料として各種濃度のヒトβ型インターフ
エロン（東京都総合臨床研究所製、比活性３×
106U／mgプロテイン）、ヒトβ型インターフエロ
ンの第１〜13番のペプチド鎖及びヒトα型インタ
ーフエロン（林原研究所製、Lympho blastoid
Interferon、Lot.No.800928）を使用する。また標
準希釈剤として0.1％BSA、0.15モルNaCl及び
0.01％のNaN3を含む0.1モルリン酸ナトリウム緩
衝液（PH7.4）を使用する。 各々の試験管に、標準希釈剤0.2ml、供試試料
0.1ml、実施例16で得られる抗体V0.1ml（力価
52000）及び125標識ペプチド（上記で得られる
標識ペプチドを約１万cpmになるように希釈した
もの）0.1mlを入れ、４℃で48時間インキユベー
トした後、ノーマルヒツジ血清（normal sheep
serum）を0.1ml加え、次いでデキストランで被
膜した活性炭の懸濁液0.5mlを加え、４℃で30分
間放置し、次に４℃、3000rpmの条件下に30分間
遠心分離を行ない、抗体と125標識ペプチドと
の結合体及び未反応（結合しない）I125標識ペプ
チドを分離し、その放射線をカウントし、用いた
抗体の力価に相当する結合率（Bo）を100％とし
て、各供試試料の濃度及び希釈率における抗体と
125標識ペプチドとの結合体(B)の百分率を求め
る。得られる結果を第１図に示す。第１図中縦軸
は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸は供試試料
（ヒトβ型インターフエロン第１〜第13番ペプチ
ド鎖、ヒトβ型インターフエロン及びヒトα型イ
ンターフエロン）の濃度を示す。また該図におい
て曲線イはヒトβ型インターフエロンの第１〜13
番のペプチド鎖を、曲線ロはヒトβ型インターフ
エロンを、曲線ハはヒトα型インターフエロンを
夫々示す。第１図より抗体は、ヒトα型インタ
ーフエロンに対する反応性とヒトβ型インターフ
エロンに対する反応性において明確に区別される
曲線を示し、このことよりヒトα型インターフエ
ロンとは3.7×106ユニツト／mlまで交叉しない特
異性の高い抗体であることが判る。 また上記と同様にして抗体についてもヒトβ
型インターフエロン特異性試験を行なう。得られ
る結果を第２図に示す。 第２図は抗体の特異性を示すグラフである。
第２図中縦軸は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸
は供試試料（ヒトβ型インターフエロン第１〜13
番ペプチド鎖、ヒトβ型インターフエロン及びヒ
トα型インターフエロン）の濃度を示し、また曲
線ニはヒトβ型インターフエロンの第１〜13番の
ペプチド鎖を、曲線ホはヒトβ型インターフエロ
ンを、曲線ヘはヒトα型インターフエロンを夫々
示す。 また抗体、及びについても特異性試験を
行なう。即ち各々の試験管に前記で述べた標準希
釈剤0.2ml、前記で述べた供試試料0.1ml、抗体
、又は0.1ml及び125標識ペプチド0.1mlを
入れ、前記と同じ条件で反応させる。ヒトβ型イ
ンターフエロン第１〜13番のペプチド鎖から得ら
れた抗体又はとヒトβ型インターフエロン第
１〜13番のペプチドとの結合反応性を100％とし
たときの、それぞれの抗体の結合％を第１表に示
す。
ペプチドに関する。 本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護
基、活性基、その他に関し略号で表示する場合
IUPAC、IUBの規定或いは当該分野における慣
用記号に従うものとし、その例を次に挙げる。ま
たアミノ酸などに関し光学異性体がありうる場合
は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。 Arg：アルギニン Asn：アスパラギン Ser：セリン Gln：グルタミン Met：メチオニン Leu：ロイシン Phe：フエニルアラニン Tyr：チロシン Gly：グリシン Ｚ：カルボベンゾキシ基 Su：コハク酸イミド基 Tos：ｐ―トルエンスルホニル基 Boc：第３級ブトキシカルボニル基 インターフエロンは生体細胞がウイルス感染を
受けた時に産生する抗ウイルス性（糖）蛋白質で
あり、これを利用してウイルス性疾患を予防乃至
治療することが注目されつつある。而してヒトの
インターフエロンはα型インターフエロン
（Leucocytes Interferon，Lympho blastoid
Interferon），β型インターフエロン
（Fibroblast Interferon）及びγ型インターフエ
ロン（Immune Interferon）の混合物であること
が今日までに解明されている。しかしながら斯か
るヒトのインターフエロンを単一な型の糖蛋白質
にまで精製する技術は未だ開発されていない。 本発明の究極の目的はβ型インターフエロンに
対して特異的に反応する抗体を用いてヒトのイン
ターフエロンよりβ型インターフエロンを単離精
製することにある。 従来ヒトβ型インターフエロンに対して反応す
る抗体は数多く知られているが、これらの抗体は
いずれもヒトβ型インターフエロンに対して特異
的反応性を有するものではない。本発明者らは、
感度よくヒトβ型インターフエロンを選択し、ヒ
トβ型インターフエロンに対して特異的反応性を
示す抗体を得る方法について鋭意研究を進めてき
た。その結果、一般式 Ｒ―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH (1) 〔式中Ｒは水素原子、Ｈ―Phe―基、Ｈ―Leu
―Gly―Phe―基、Ｈ―Tyr―Asn―Leu―Leu―
Gly―Phe―基又はＨ―Met―Ser―Tyr―Asn―
Leu―Leu―Gly―Phe―基を示す。〕で表わされ
るペプチドを合成し、該ペプチドをハプテンとす
る抗原の合成に成功し、引き続き該抗原から目的
とするヒトβ型インターフエロンに対して特異性
の高い抗体を作成することに成功し、ここに本発
明を完成するに至つた。 本発明の上記一般式(1)で表わされるペプチドを
ハプテンとして用いることにより、ハプテン―担
体結合試薬の存在下に担体と反応させてペプチド
―担体複合体からなるヒトβ型インターフエロン
抗原を製造し得る。またこのヒトβ型インターフ
エロン抗原よりヒトβ型インターフエロンに対し
て特異的反応性を有するヒトβ型インターフエロ
ン抗体を製造し得る。さらにこのヒトβ型インタ
ーフエロン抗体は、これをアフイニテイ―クロマ
トグラフイーの担体に含有させることにより、ヒ
トβ型インターフエロンの精製に利用できる。 本発明で用いられる一般式(1)のペプチドは新規
化合物であり、斯かるペプチドは以下の方法によ
つて製造できる。 一般式(1)のペプチドは、ペプチド合成の常套手
段で製造し得る。固相合成法、液相合成法のいず
れによつてもよいが、液相合成法が有利な場合が
多い。そのようなペプチド合成の手段は、たとえ
ば“The Peptides”、第１巻（1966）、Schrｏ¨der
and Luhke著，Academic Press，New York，
U.S.A.あるいは“ペプチド合成”、泉屋ら著、丸
善株式会社（1975年）に記載されており、たとえ
ばアジド法、クロライド法、酸無水物法、混酸無
水物法、DCC法、活性エステル法、例えばｐ―
ニトロフエニルエステル法、Ｎ―ヒドロキシコハ
ク酸イミドエステル法、シアノメチルエステル法
等、ウツドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボジ
イミダゾール法、酸化還元法、DCC／アデイテ
イブ（例 HONB，HOBt，HOSu）法などがあ
げられる。 一般式(1)のペプチドは、一般のポリペプチドの
合成法、例えば末端アミノ酸に順次１個づつアミ
ノ酸を縮合させる所謂ステツプワイズ法、数個の
フラグメントに分けてカツプリングさせていく方
法等に従い容易に製造できる。より詳細には上記
ペプチドは、その結合の任意の位置で２分される
２種のフラグメントの一方に相当する反応性カル
ボキシル基を有する原料と、他方のフラグメント
に相当する反応性アミノ基を有する原料をペプチ
ド合成の常套手段で縮合させ、生成する縮合物が
保護基を有する場合、その保護基を常套手段で脱
離させることにより製造し得る。 一般式(1)のペプチドを製造する反応工程でアル
ギニンは通常保護しておくのが望ましい場合が多
く、最終工程としてはペプチドの構成アミノ酸残
基の少なくとも一つが保護された保護ペプチドか
ら保護基をすべて脱離することにより製造しうる
場合が多い。 原料の反応に関与すべきでない官能基の保護及
び保護基、並びにその保護基の脱離、反応に関与
する官能基の活性化などもまた公知のものあるい
は手段から適宜選択し得る。 原料のアミノ基の保護基としては、例えばカル
ボベンゾキシ、tert―ブチルオキシカルボニル、
tert―アミルオキシカルボニル、イソボルニルオ
キシカルボニル、ｐ―メトキシベンジルオキシカ
ルボニル、２―クロル―ベンジルオキシカルボニ
ル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオ
ロアセチル、フタリル、ホルミル、ｏ―ニトロフ
エニルスルフエニル、ジフエニルホスフイノチオ
イルなどが挙げられる。カルボキシル基の保護基
としては、例えばアルキルエステル（例メチル、
エチル、プロピル、ブチル、tert―ブチルなどの
エステル基）、ベンジルエステル基、ｐ―ニトロ
ベンジルエステル基、ｐ―メトキシベンジルエス
テル基、ｐ―クロルベンジルエステル基、ベンズ
ヒドリルエステル基、カルボベンゾキシヒドラジ
ド基、tert―ブチルオキシカルボニルヒドラジド
基、トリチルヒドラジド基等が挙げられる。 アルギニンのグアニジノ基の保護基としては、
例えばニトロ基、トシル基、ｐ―メトキシベンゼ
ンスルホニル基、カルボベンゾキシ、イソボルニ
ルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボ
ニル等が挙げられる。また、そのグアニジノ基は
酸（例、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン
酸、塩酸、硫酸など）塩の形で保護してもよい。 メチオニンはスルホキサイドの形で保護してお
いてもよい。原料のカルボキシル基の活性化され
たものとしては、例えば対応する酸クロライド、
酸無水物又は混合酸無水物、アジド、活性エステ
ル（メチルアルコール、エチルアルコール、ベン
ジルアルコール、ペンタクロロフエノール、ｐ―
ニトロフエノール、Ｎ―ヒドロキシサクシンイミ
ド、Ｎ―ヒドロキシベンズトリアゾール、Ｎ―ヒ
ドロキシ―５―ノルボルネン―２，３―ジカルボ
キシイミド等とのエステル）等が挙げられる。ペ
プチド結合形成反応は縮合剤（例：ジシクロヘキ
シルカルボジイミド、カルボジイミダゾール等の
カルボジイミド試薬、テトラエチルピロホスフイ
ト）の存在下に実施し得る場合がある。 上記一般式(1)で表わされるペプチドはより具体
的には以下に示す方法に従い製造される。即ち一
般式(1)のペプチドのうち、Ｒが水素原子を示すペ
プチドは下記（）に従い製造され、ＲがＨ―
Phe―基を示すペプチドは下記（）に従い製造
され、ＲがＨ―Leu―Gly―Phe―基を示すペプ
チドは下記（）に従い製造され、ＲがＨ―Tyr
―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―基を示すペプチ
ドは下記（）に従い製造され、またＲがＨ―
Met―Ser―Tyr―Asn―Len―Len―Gly―Phe―
基を示すペプチドは下記（）に従い製造され
る。 〔上記（）〜（）において、Ａはアミノ基
の保護基、Ｂは水酸基又はカルボキシル基の活性
基、Ｃはアルギニンのグアニジノ基の保護基をそ
れぞれ示す。〕 ペプチド(2)とペプチド(3)との反応は、溶媒の存
在下に行なうことができる。溶媒としては、ペプ
チド縮合反応に使用し得ることが知られているも
のから適宜選択でき、例えば無水または含水のジ
メチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ピ
リジン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロルメ
タン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ―メ
チルピロリドン、ヘキサメチルリン酸トリアミド
或いはこれらの混合溶媒等が挙げられる。ペプチ
ド(3)とペプチド(2)との使用割合としては特に限定
されず広い範囲内で適宜選択することができる
が、通常前者に対して後者を等量〜５倍量、好ま
しくは等量〜1.5倍量使用するのがよい。反応温
度はペプチド結合形成反応に使用され得ることが
知られている範囲から適宜選択され、通常約−40
〜約60℃、好ましくは約−20〜約40℃の範囲から
適宜選択される。反応時間は一般に数分〜30時間
程度である。 ペプチド(5)とアミノ酸(6)との反応、ペプチド(8)
とペプチド(9)との反応、ペプチド(11)とペプチド(12)
との反応及びペプチド（14）とペプチド（15）と
の反応はいずれもペプチド(2)とペプチド(3)との反
応と同様にして行なうことができる。 上記縮合反応終了後、得られるペプチド(4)のＡ
及びＣの保護基は常法により離脱できる。斯かる
方法としては例えば液体アンモニア中での金属ナ
トリウムによる還元方法を挙げることができる。
金属ナトリウムは、反応溶液がパーマネントブル
ーに30秒〜10分間程度呈色しているような量で用
いられる。この還元は通常−40〜−70℃程度にて
行なわれる。 ペプチド(7)、ペプチド(10)、ペプチド（13）又は
ペプチド（16）からの保護基Ａ及びＣの除去は、
ペプチド(4)から保護基Ａ及びＣを除去する方法と
同様にして行なわれる。 上記（）において用いられるペプチド(3)は例
えば下記に示す方法により製造される。 〔上記においてR1は低級アルキル基を示す。
Ａ，Ｂ及びＣは前記に同じ。〕 アミノ酸（17）とアミノ酸（18）との反応は前
記ペプチド(2)とペプチド(3)との反応と同様にして
行なうことができる。 ペプチド（19）のＡの保護基は常法により離脱
できる。斯かる方法としては、例えば還元的方法
（例パラジウム、パラジウム黒等の触媒を用いる
水素添加、液体アンモニア中金属ナトリウムによ
る還元）、アシドリシス（例トリフルオロ酢酸、
弗化水素、メタンスルホン酸、臭化水素酸等の強
酸によるアシドリシス）等が挙げられる。例えば
触媒を用いる水素添加の場合には、水素圧１気
圧、０〜40℃にて行なうことができる。触媒の使
用量は通常100mg〜１ｇ程度でよく、一般に１〜
48時間程度で反応は終了する。またアシドリシス
の場合には無溶媒下通常０〜30℃程度、好ましく
は０〜20℃にて行なわれ、一般に15分〜１時間程
度で反応は終了する。酸の使用量としては原料化
合物に対し通常５〜10倍量程度とするのがよい。
また液体アンモニア中金属ナトリウムによる還元
については既に上記で述べた条件を採用できる。 ペプチド（20）とアミノ酸（21）との反応は前
記ペプチド(2)とペプチド(3)との反応と同様にして
行なうことができる。 ペプチド（22）を加水分解してペプチド（23）
を得る反応は例えば塩酸、硫酸等の鉱酸、水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリの存在
下水、メタノール、エタノール、ジオキサン等の
溶媒中にて行なわれる。該反応は通常20〜50℃に
て30分〜３時間程度で行なわれる。 ペプチド（23）から保護基Ａを除去する方法と
しては、例えばパラジウム、パラジウム黒等の触
媒を用いる水素添加、アシドリシス等の方法を挙
げることができる。これらの方法の条件としては
既に上述した条件をいずれも採用できる。 上記（）において用いられるペプチド(5)はペ
プチド(4)から保護基Ａを除去することにより製造
される。また同様にして上記（）において用い
られるペプチド(8)はペプチド(7)から保護基Ａを除
去することにより製造され、上記（）において
用いられるペプチド(11)はペプチド(10)から保護基Ａ
を除去することにより製造され、上記（）にお
いて用いられるペプチド（14）はペプチド（13）
から保護基Ａを除去することにより製造される。
ペプチド(4)、ペプチド(7)、ペプチド(10)及びペプチ
ド（13）から保護基Ａを除去する方法としては例
えばパラジウム、パラジウム黒等の触媒を用いる
水素添加、アシドリシス等を挙げることができ
る。これらの方法の条件としては既に上述した条
件をいずれも採用できる。 上記（）において用いられるペプチド(12)は例
えば下記に示す方法により製造される。 Ａ―Asn―Ｂ （24）Ｈ―Leu―OR1 （25） ―――――――→ Ａ―Asn―Leu―OR1 （26） ――――→ Ｈ―Asn―Leu―OR1 （27） ｜ ｜ ↓ Ａ―Tyr―Ｂ （28） Ａ―Tyr―Asn―Leu―OR1 （29） ↓ Ａ―Tyr―Asn―Leu―OH （30） ↓ Ａ―Tyr―Asn―Leu―Ｂ （12） 〔上記においてR1，Ａ，Ｂ及びＣは前記に同
じ。〕アミノ酸（24）とアミノ酸（25）との反応
及びペプチド（27）とアミノ酸（28）との反応は
いずれも前記ペプチド(2)とペプチド(3)との反応と
同様にして行なうことができる。ペプチド（26）
から保護基Ａを除去するには前記ペプチド（19）
から保護基Ａを除去する方法をいずれも適用でき
る。またペプチド（29）を加水分解してペプチド
（30）を得る反応は前記ペプチド（22）を加水分
解してペプチド（23）を得る反応と同様の条件下
に行なうことができる。 ペプチド（30）からペプチド(12)を得る好ましい
方法として例えば混合酸無水物法、アジド法等を
挙げることができる。 混合酸無水物法では、適当な溶媒中塩基性化合
物の存在下アルキルハロカルボン酸を用いて行な
われる。使用されるアルキルハロカルボン酸とし
ては例えばクロロ蟻酸メチル、ブロモ蟻酸メチ
ル、クロロ蟻酸エチル、ブロモ蟻酸エチル、クロ
ロ蟻酸イソブチル等が挙げられる。また塩基性化
合物としては例えばトリエチルアミン、トリメチ
ルアミン、ピリジン、ジメチルアニリン、Ｎ―メ
チルモルホリン、１，５―ジアザビシクロ〔４，
３，０〕ノネン―５（DBN）、１，５―ジアザビ
シクロ〔５，４，０〕ウンデセン―５（DBU）、
１，４―ジアザビシクロ〔２，２，２〕オクタン
（DABCO）等の有機塩基、炭酸カリウム、炭酸
ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリ
ウム等の無機塩基が挙げられる。用いられる溶媒
は混合酸無水物法に慣用の溶媒がいずれも使用可
能であり、具体的には塩化メチレン、クロロホル
ム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、
ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水
素類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、
ジメトキシエタン等のエーテル類、酢酸メチル、
酢酸エチル等のエステル類、Ｎ，Ｎ―ジメチルホ
ルムアミド、ジメチルスルホキシド、ヘキサメチ
ルリン酸トリアミド等の非プロトン性極性溶媒な
どが挙げられる。該反応は−20〜100℃好ましく
は−20〜50℃において行なわれ、反応時間は一般
に５分〜10時間好ましくは５分〜２時間である。 アジド化法では、まず活性化されたカルボキシ
ル基、例えばメチルアルコール、エチルアルコー
ル、ベンジルアルコール等のアルコールで活性化
されたカルボキシル基にヒドラジン水和物を適当
な溶媒中にて反応させればよい。用いられる溶媒
としては例えばジオキサン、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシド又はこれらの混合溶媒
等を挙げることができる。ヒドラジン水和物の使
用量としては活性化されたカルボキシル基に対し
て通常５〜20倍モル量、好ましくは５〜10倍モル
量とするのがよい。該反応は通常−10℃以下、好
ましくは−20〜−10℃にて行なわれる。斯くして
末端アミノ酸のカルボキシル基部分がヒドラジン
で置換された化合物（ヒドラジン誘導体）を製造
し得る。末端アミノ酸のカルボキシル基部分がア
ジドで置換された化合物は酸の存在下適当な溶媒
中上記で得られるヒドラジン誘導体と亜硝酸化合
物を反応させることにより製造される。酸として
は通常塩酸が用いられる。溶媒としては例えばジ
オキサン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスル
ホキシド又はこれらの混合溶媒等が挙げられる。
また亜硝酸化合物としては例えば亜硝酸ナトリウ
ム、亜硝酸イソアミル、塩化ニトロシル等を挙げ
ることができ、斯かる亜硝酸化合物をヒドラジン
誘導体に対して通常等モル〜２倍モル量、好まし
くは等モル〜1.5倍モル量用いるのがよい。該反
応は通常−20〜０℃、好ましくは−20〜−10℃に
て行なわれ、一般に５〜10分程度で反応は終了す
る。 上記のようにして製造された一般式(1)のペプチ
ドは反応混合物からペプチドの分離手段例えば抽
出、分配、カラムクロマトグラフイー等により単
離精製される。 RIA法において用いられる標識抗原の製造原料
である標識ペプチドは上記で製造されるペプチド
にI125、I131等の放射性ヨードを導入することに
より製造される。該放射性ヨードの導入は通常の
ヨード化法、例えばクロラミンＴを用いる酸化的
ヨード化法〔W.M.Hunter and F.C.
Greenwood；Nature，194，P495（1962）、
Biochem.J.89，P114（1963）参照〕により行なわ
れる。例えば上記ヨード化法は、適当な溶媒例え
ば0.2Mリン酸緩衝液（PH＝7.4）等の溶媒中、ク
ロラミンＴの存在下室温付近にて10〜30秒程度で
行なわれる。用いられるペプチド、放射性ヨード
及びクロラミンＴの使用割合としては、例えばチ
ロシンに放射性ヨードを１個導入する場合には、
ペプチド中に含まれるチロシン分子１ナノモルに
対して放射性ヨードを１ミリキユーリー程度、ク
ロラミンＴを10〜100ナノモル程度用いるのがよ
く、またチロシンに放射性ヨードを２個導入する
場合には、ペプチド中に含まれるチロシン分子１
ナノモルに対して放射性ヨードを２ミリキユーリ
ー程度、クロラミンＴを10〜100ナノモル程度用
いるのがよい。斯くして製造される放射性ヨード
により標識化されたペプチドは通常の分離手段例
えば抽出、分配、カラムクロマトグラフイー、透
析等により単離精製される。このようにして得ら
れるペプチドは必要ならば凍結乾燥させて保存し
ておくこともできる。 本発明方法においては、ハプテンとして上記一
般式(1)で表わされるペプチドを使用する。 ハプテンに結合される担体としては、通常抗原
の作成に当り慣用される高分子の天然若しくは合
成の蛋白質を広く使用でき、例えば馬血清アルブ
ミン、牛血清アルブミン、ウサギ血清アルブミ
ン、人血清アルブミン、ヒツジ血清アルブミン等
の動物の血清アルブミン類、馬血清グロブリン、
牛血清グロブリン、ウサギ血清グロブリン、人血
清グロブリン、ヒツジ血清グロブリン等の動物の
血清グロブリン類、馬チログロブリン、牛チログ
ロブリン、ウサギチログロブリン、人チログロブ
リン、ヒツジチログロブリン等の動物のチログロ
ブリン類、馬ヘモグロビン、牛ヘモグロブリン、
ウサギヘモグロブリン、人ヘモグロブリン、ヒツ
ジヘモグロブリン等の動物のヘモグロブリン類、
動物のヘモシアニン類、回虫より抽出された蛋白
質（アスカーリス抽出物、特願昭54―92781号参
照）、ポリリジン、ポリグルタミン酸、リジン―
グルタミン酸共重合体、リジン又はオルニチンを
含む共重合体等を挙げることができる。 アスカーリス抽出物について以下に詳述する。 アスカーリス抽出物は、ブタ回虫（Ascaris
suum）の粉砕物より通常の蛋白抽出法に従い抽
出される。抽出溶媒としては例えば水、生理食塩
水、50％メタノールまたはエタノール水溶液、中
性付近の緩衝液等の公知の各種蛋白抽出溶媒を使
用でき、特に生理食塩水を用いるのが好ましい。
上記抽出物は、より具体的には、例えば次の如く
して製造される。即ちブタ回虫の内容物を除去
し、生理食塩水で洗浄後、抽出を容易とするため
好ましくは細断し、該細断物を例えば生理食塩水
等の蛋白抽出溶媒中に添加し、ホモジネートしな
がら抽出する。この抽出は通常低温下において行
なわれ、好ましくは約２〜10℃で有利に行なわれ
る。かくして得られる抽出液を次いで遠心分離
し、上清を採取し透析後透析液を凍結乾燥するか
又は更に上記透析液を再度遠心分離し、上清を採
取し、浮遊物を除去後凍結乾燥することによつ
て、目的とするアスカーリス抽出物が製造され
る。これは更に必要に応じて通常の蛋白精製手段
例えば透析法、ゲル過法、吸着法、クロマトグ
ラフ法等により精製後、本発明に利用することが
できる。また本発明に用いるアスカーリス抽出物
は、例えばJ.Immun.，111，260〜268（1973）、J.
Immun.，122，302〜308（1979）、J.Immun.，98，
893〜900（1967）及びAm.J.Physiol.，199，575〜
578（1960）に記載されたものまたはこれらを更に
精製したものであつてもよい。 ハプテン―担体結合試薬としては通常抗原の作
成に当り慣用されているものを広く使用でき、具
体的にはアミノ基とアミノ基とを架橋結合させ
る、例えばグルオキサール、マロンジアルデヒ
ド、グルタールアルデヒド、スクシンアルデヒ
ド、アジポアルデヒド等の脂肪族ジアルデヒド
類、チオール基とチオール基とを架橋結合させ
る、例えばＮ，N′―ｏ―フエニレンジマレイミ
ド、Ｎ，N′―ｍ―フエニレンジマレイミド等の
ジマレイミド化合物、アミノ基とチオール基とを
架橋結合させる、例えばメタマレイミドベンゾイ
ル―Ｎ―ヒドロキシスクシンイミドエステル、４
―（マレイミドメチル）―シクロヘキサン―１―
カルボキシル―N′―ヒドロキシスクシンイミド
エステル等のマレイミドカルボキシル―Ｎ―ヒド
ロキシスクシンイミドエステル化合物、アミノ基
とカルボキシル基とをアミド結合させる通常のペ
プチド結合形成反応に用いられる試薬、例えば
Ｎ，Ｎ―ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ―
エチル―N′―ジメチルアミノカルボジイミド、
１―エチル―３―ジイソプロピルアミノカルボジ
イミド、１―シクロヘキシル―３―（２―モルホ
リニル―４―エチル）カルボジイミド等のカルボ
ジイミド類等の脱水縮合剤を挙げることができる
が、さらにはｐ―ジアゾニウムフエニル酢酸等の
ジアゾニウムアリールカルボン酸類と通常のペプ
チド結合形成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤と
を組み合わせたものも使用可能である。 本発明の抗原は上記ハプテンと担体とをハプテ
ン―担体結合試薬の存在下に反応させることによ
り製造される。上記反応は、水溶液もしくはPH７
〜10の通常の緩衝液中好ましくはPH８〜９の緩衝
液中で０〜40℃好ましくは室温付近で行なわれ、
約１〜24時間、好ましくは３〜５時間で反応は完
結する。上記において用いられる代表的緩衝液と
しては、次のようなものを例示できる。 0.2N水酸化ナトリウム―0.2Mホウ酸―0.2M塩
化カリウム緩衝液、 0.2M炭酸ナトリウム―0.2Mホウ酸―0.2M塩化
カリウム緩衝液、 0.05M四ホウ酸ナトリウム―0.2Mホウ酸―
0.05M塩化ナトリウム緩衝液、 0.1Mリン酸二水素カリウム―0.05M四ホウ酸
ナトリウム緩衝液 上記においてハプテン、ハプテン―担体結合試
薬及び担体の使用割合は適宜に決定できるが、通
常ハプテンに対して担体を２〜６倍重量好ましく
は３〜５倍重量、及びハプテン―担体結合試薬５
〜10倍モルとするのがよい。上記反応によりハプ
テン―担体結合試薬を仲介させて担体とハプテン
とが結合した本発明のペプチド―担体複合体から
成るヒトβ型インターフエロンの抗原が収得され
る。反応終了後得られる抗原は常法に従い、例え
ば透析法、ゲル過法、分別沈殿法等により容易
に単離精製できる。また該抗原は通常の凍結乾燥
法により保存できる。かくして得られる本発明の
抗原は、通常蛋白質１モルに対しペプチドが平均
５〜20モル結合したものであり、いずれも引き続
き再現性よく、ヒトβ型インターフエロンに対す
る特異性の高い抗体の作成を可能とするものであ
るが、特に上記蛋白質に対するペプチドの結合モ
ル比が１：８〜15のものは、特異性が一層高く高
力価、高感度の抗体を作成し得るものであり好ま
しい。 上記で得られる抗原による抗体の作成に当つて
は、常法に従い抗原を哺乳動物に投与し、生体内
に産生される抗体を採取する方法を採用できる。
抗体の製造に供せられる哺乳動物としては特に制
限はないが、通常兎やモルモツトを用いるのが望
ましい。抗体の産生に当つては、上記により得ら
れる抗原の所定量を生理食塩水で適当濃度に希釈
し、フロインドの補助液（Complete Freund′s
Adjuvant）と混合して懸濁液を調整し、之を哺
乳動物体に投与すればよい。例えば兎に上記懸濁
液を皮内注射（抗原の量として0.5〜５mg／回）
し、以後２週間毎に２〜10ケ月好ましくは４〜６
ケ月間投与し免疫化させればよい。抗体の採取
は、上記懸濁液の最終投与後抗体が多量産出され
る時期、通常上記最終投与１〜２週間経過後、免
疫化された動物から採血し、之を遠心分離後血清
を分離採取することにより行なわれる。殊に本発
明方法によれば、用いる抗原の特殊性に基づい
て、常に安定してヒトのβ型インターフエロンに
対して非常に優れた特異性を有し、高力価、高感
度の抗体を再現性よく収得できる利点がある。 かくして得られる抗体は、上記の通り殊に優れ
たヒトのβ型インターフエロン特異性を有するも
のであり、斯界で要望されているRIA法によるヒ
トのβ型インターフエロンの定量を高精度をもつ
て可能とする有用なものである。また該抗体は、
これに酵素または螢光物質で標識することによつ
てエンザイムイムノアツセイ（EIA）法、フロー
レツセンスイムアツセイ（FIA）法等に使用でき
る。さらに該抗体は公知の不溶化させる物質と反
応させて不溶化抗体とすることもできる。 以下本発明を更に詳しく説明するための参考例
及び実施例を挙げるが、本発明はこれに限定され
るものではない。 尚参考例におけるRf値はシリカゲル上の簿層
クロマトグラフイーにて下記混合溶媒を用いて測
定したものである。 Rf〓…１―ブタノール―酢酸―水（４：１：
５） Rf〓…１―ブタノール―ピリジン―酢酸―水
（15：10：３：12） 〈ペプチドの合成〉 参考例 １ Ｚ―Ser―Ser―OMeの製造 Ｚ―Ser―NHNH25.06ｇを50mlのジメチルホ
ルムアミドおよび6.66mlの6N―HCl／ジオキサ
ンに溶解し、−15℃に冷却後イソアミルナイトラ
イト2.68mlを加え、５分間撹拌する。次いで5.60
mlをトリエチルアミンを加えて中和する。この溶
液をＨ―Ser・OMe・HCl3.11ｇとトリエチルア
ミン2.80mlを含有する30mlのジメチルホルムアミ
ド溶液に加え、４℃で20時間撹拌する。ジメチル
ホルムアミドを留去し、得られた残留物を酢酸エ
チルで抽出し、水洗後芒硝で乾燥する。酢酸エチ
ルを留去後、エーテルを加え結晶化し、再沈殿を
酢酸エチル―エーテルで行ない、Ｚ―Ser―Ser
―OMe3.75ｇを得る。 Rf〓値：0.64、Rf〓値：0.77 元素分析値（C15H20N2O7として） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 52.94 5.92 8.23 実測値（％） 52.67 5.89 8.35 参考例 ２ Ｚ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OMeの製造 Ｚ―Ser―Ser―OMe 2.5ｇを50mlのメタノー
ル及び7.34mlの1N―HClに溶解し、500mgのパラ
ジウム黒の存在下20℃、水素圧１気圧で接触還元
を行ない、Ｈ―Ser―Ser―OMe・HClを得る。 Rf〓値：0.08 Ｚ―Arg（Tos）―OH 3.39ｇを40mlのテトラ
ヒドロフラン及び0.75mlのＮ―メチルモルホリン
に加え、−15℃に冷却後0.97mlのイソブチルクロ
ロホルメイトを加え30秒間激しく撹拌する。 上記で得られるＨ―Ser―Ser―OMe・HCl、
ジメチルホルムアミド20ml及びトリエチルアミン
1.03mlを加えて１分間撹拌し、次いで０℃で５分
間、40℃で２分間、室温で15分間それぞれ撹拌す
る。テトラヒドロフラン及びジメチルホルムアミ
ドを留去後酢酸エチルで抽出し、1N―クエン酸
で３回、次いで水で５回洗浄後芒硝で乾燥する。
溶媒を留去し、メタノール―酢酸エチル、エーテ
ルで再沈殿を行ない、Ｚ―Arg（Tos）―Ser―
Ser―OMe 3.65ｇを得る。 Rf〓値：0.51、Rf〓値：0.73 元素分析値（C28H38N6O10Sとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 51.68 5.88 12.91 実測値（％） 51.62 5.82 12.73 参考例 ３ Ｚ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OHの製造 Ｚ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OMe 3.5ｇをメ
タノール50ml及び水10mlに溶解し、1N―
NaOH8.06mlを加え、室温下に45分間撹拌し、次
いで1N―HCl7.24mlを加えて中和し、メタノー
ルを留去後ｎ―ブタノールで抽出する。水洗後ｎ
―ブタノール及び水を留去し、残渣にエーテルを
加え結晶化し、メタノール―酢酸エチルより再沈
殿を行ない、Ｚ―Arg（Tos）―Ser―Ser―
OH2.60ｇを得る。 Rf〓値：0.28、Rf〓値：0.57 元素分析値（C27H36N6O10S・1/2H2Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 50.22 5.77 13.02 実測値（％） 50.24 5.62 13.20 参考例 ４ Ｈ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OHの製造 Ｚ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OH 1.35ｇをメ
タノール50ml及び10％酢酸10mlに溶解し、500mg
のPd存在下20℃、常圧にて接触還元してＨ―
Arg（Tos）―Ser―Ser―OHを得る。 Rf〓値：0.034 参考例 ５ Ｚ―Asn―Leu―OEtの製造 Ｚ―Asn―OH 5.32ｇをテトラヒドロフラン60
ml、ジメチルホルムアミド10ml及びＮ―メチルモ
ルホリン2.04mlに溶解し、イソブチルクロロホル
メイト2.64ml、Ｈ―Leu―OEt・HCl 3.91ｇ及び
トリエチルアミン2.80mlを含む40mlのジメチルホ
ルムアミド溶液を用い、参考例２の方法に準じて
反応を行なう。溶媒を留去後１モルクエン酸水溶
液を加え、沈殿物を取、水洗、減圧乾燥して、
酢酸エチルにて再結晶してＺ―Asn―Leu―OEt
6.1ｇを得る。 Rf〓値：0.71、Rf〓値：0.80 元素分析値（C20H29N3O6として） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 58.95 7.17 10.31 実測値（％） 58.99 7.23 10.26 参考例 ６ Ｚ―Tyr―Asn―Leu―OEtの製造 Ｚ―Asn―Leu―OEt 3.01ｇをメタノール50ml
及び1N―HCl7.4mlに溶解し、パラジウム黒500
mgの存在下室温、常圧にて接触還元を行ない、Ｈ
―Asn―Leu―OEt・HClを得る。 Rf〓値：0.26 上記で得られるＨ―Asn―Leu―OEt・HClを
ジメチルホルムアミド50ml及びトリエチルアミン
1.03mlに溶解し、次にＺ―Tyr―ONHS 3.35ｇを
加え、室温下に20時間放置する。ジメチルホルム
アミドを留去後１モルクエン酸水溶液を加え、沈
殿物を取し、水洗後メタノール―酢酸エチルに
て再沈殿してＺ―Tyr―Asn―Leu―OEt 3.58ｇ
を得る。 Rf〓値：0.73、Rf〓値：0.82 元素分析値（C29H38N4O8として） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 61.04 6.71 9.82 実測値（％） 60.84 6.70 9.39 参考例 ７ Ｚ―Tyr―Asn―Leu―NHNH2の製造 Ｚ―Tyr―Asn―Leu―OEt2.78ｇをメタノール
30mlに溶解し、ヒドラジン水和物1.21mlを加えて
一夜放置し、生じた結晶を取、少量のメタノー
ルにて洗浄してＺ―Try―Asn―Leu―NHNH2
3.10ｇを得る。 Rf〓値：0.56、Rf〓値：0.75 元素分析値（C27H36N6O7として） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 58.26 6.52 15.10 実測値（％） 57.91 6.56 15.12 実施例 １ (a) Boc―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―
OHの製造 Boc―Leu―Gln―OH0.84ｇをテトラヒドロフ
ラン30ml及びＮ―メチルモルホリン0.24mlに溶解
し、イソブチルクロロホルメイト0.31ml及び参考
例４で得られたＨ―Arg（Tos）―Ser―Ser―OH
を用い、参考例２の方法に準じて行なう。テトラ
ヒドロフラン及びジメチルホルムアミドを留去後
残留物をブタノールで抽出する。ブタノール層を
２％酢酸で洗浄後ブタノールを留去し、メタノー
ル―酢酸エチルで再沈殿してBoc―Leu―Gln―
Arg（Tos）―Ser―Ser―OH 1.54ｇを得る。 Rf〓値：0.18、Rf〓値：0.57 元素分析値（C35H57N9O13S・H2Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 48.77 6.90 14.62 実測値（％） 48.76 6.61 14.78 (b) Ｈ―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OHの製造 Boc―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―
OH 1.50ｇを10mlのトリフルオロ酢酸中15分間室
温で放置して脱Boc化し、乾燥エーテルを加えて
結晶化し、Ｈ―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―
Ser―OHを得る。 Rf〓値：0.04 上記で得られるＨ―Leu―Gln―Arg（Tos）―
Ser―Ser―OHを液体アンモニア25mlに溶解し、
金属ナトリウムの少片を加える。反応液が青色を
呈したとき、乾燥塩化アンモニウム１ｇを添加
し、次いでアンモニアを留去する。残渣を50％酢
酸に溶解し、セフアデツクスＧ―10（2.2×85cm、
溶出液50％酢酸）、さらにLH―20（2.2×80cm、溶
出液0.001N―HCl）にてゲル過し、精製して
Ｈ―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OHを得る。 Rf〓値：0.01、Rf〓値：0.34 〔α〕20 D：−42.5゜（C0.230、0.001N―HCl） 元素分析値（C23H43N9O9・4H2O・
CH3COOHとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 41.60 7.68 17.46 実測値（％） 41.20 7.93 17.91 実施例 ２ (a) Ｚ―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―
Ser―OHの製造 実施例１(b)で得られるＨ―Leu―Gln―Arg
（Tos）―Ser―Ser―OHをジメチルホルムアミ
ド30ml及びトリエチルアミン0.24mlに溶解し、次
いでＺ―Phe―ONHS 0.77ｇを加え、室温で20
時間放置する。ジメチルホルムアミドを留去後残
渣をブタノールにて抽出し、２％酢酸で洗浄す
る。ブタノール層を濃縮し、エーテルを加えて結
晶化し、得られた結晶を取し、熱エタノールよ
り結晶を洗浄してＺ―Phe―Leu―Gln―Arg
（Tos）―Ser―Ser―OH 1.40ｇを得る。 Rf〓値：0.22、Rf〓値：0.59 元素分析値（C47H64N10O14S・H2Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 54.12 6.28 13.43 実測値（％） 54.42 6.38 13.84 (b) Ｈ―Phe―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH
の製造 Ｚ―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser
―OH20mgを液体アンモニア中金属ナトリウム片
にて実施例１(b)と同様の方法で脱Ｚ化、脱Tos化
し、セフアデツクスＧ―10（2.2×85cm、溶出液10
％酢酸）、さらにLH―20（2.2×80cm、溶出液
0.001N―HCl）によるゲル過で精製してＨ―
Phe―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH 12mgを
得る。 Rf〓値：0.01、Rf〓値：0.35 〔α〕20 D：−37.3゜（C0.249、0.001N―HCl） 元素分析値（C32H52N10O10・7H2O・
CH3COOHとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 44.24 7.64 15.17 実測値（％） 44.27 7.10 15.60 実施例 ３ (a) Ｚ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg
（Tos）―Ser―Ser―OHの製造 Ｚ―Leu―Gly―NHNH2 0.39ｇをジメチルホ
ルムアミド５ml及び6N―HCl／ジオキサン0.58
mlに溶解し、イソアミルナイトライト0.15ml、ト
リエチルアミン0.49ml及びＨ―Phe―Leu―Gln―
Arg（Tos）―Ser―Ser―OH 1.00ｇのジメチル
ホルムアミド10ml溶液を用いて参考例１と同様に
反応を行ない、さらにＺ―Leu―Gly N3を当量
加えて４℃にて20時間反応を行なう。ブタノール
で抽出し、２％酢酸で洗浄後ブタノール及び酢酸
を留去し、エーテルを加えて結晶化する。結晶を
取して熱メタノールにて結晶を洗浄し、Ｚ―
Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser
―Ser―OH 0.65ｇを得る。 Rf〓値：0.19、Rf〓値：0.60 元素分析値（C55H78N12O16S・H2Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 54.44 6.64 13.85 実測値（％） 54.74 6.66 13.98 (b) Ｈ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg―Ser
―Ser―OHの製造 Ｚ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）
―Ser―Ser―OH 20mgを実施例１(b)と同様の方
法で脱Ｚ化、脱Tos化し、セフアデツクスＧ―10
（2.2×85cm、溶出液10％酢酸）、さらにLH―20
（2.2×80cm、溶出液0.001N―HCl）によるゲル
過で精製してＨ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―
Arg―Ser―Ser―OH 11mgを得る。 Rf〓値：0.01、Rf〓値：0.40 〔α〕20 D：−27.6゜（C0.228、0.001N―HCl） 元素分析値（C40H66N12O12・6H2O・
CH3COOHとして） Ｃ Ｈ Ｈ 計算値（％） 46.92 7.68 15.63 実測値（％） 46.89 7.25 15.51 実施例 ４ (a) Ｈ―Tyr―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―
Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―OHの製
造 Ｚ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）
―Ser―Ser―OH 600mgをメタノール50ml及び10
％酢酸10mlに溶解しパラジウム500mgの存在下室
温常圧下にて接触還元を行ないＨ―Leu―Gly―
Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―OH
を得る。 Rf〓値：0.18 Ｚ―Tyr―Asn―Leu―NHNH2 420mgをジメ
チルホルムアミド５ml及び6N―HCl／ジオキサ
ン0.37mlに溶解し、イソアミルナイトライト
0.10ml及びトリエチルアミン0.31mlを用い、参考
例１の方法に準じてアジド体を生成させ、この溶
液をＨ―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg
（Tos）―Ser―Ser―OHのヘキサメチルリン酸
トリアミド10mlとジメチルホルムアミド10mlの混
合溶液に加え、４℃にて20時間撹拌する。ジメチ
ルホルムアミドを留去して、残渣をブタノールで
抽出し、２％酢酸で洗浄後ブタノールを留去し、
残渣にエーテルを加えて結晶化し、次いで得られ
るＺ―Tyr―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―Leu
―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―OHをメタノー
ル30ml及び10％酢酸10mlに溶解し、室温、常圧に
てパラジウムの存在下に接触還元した後セフアデ
ツクスＧ―25（３×120cm、溶出液50％酢酸）にて
ゲル過してＨ―Tyr―Asn―Leu―Leu―Gly―
Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―OH
650mgを得る。 Rf〓値：0.05、Rf〓値：0.53 元素分析値（C66H98N16O19S・2H2Oとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 53.28 6.91 15.06 実測値（％） 53.10 6.43 14.84 (b) Ｈ―Tyr―Asn―Leu―Gly―Phe―Leu―
Gln―Arg―Ser―Ser―OHの製造 上記(a)で得られるＨ―Tyr―Asn―Leu―Leu
―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―
Ser―OHを実施例１(b)と同様の方法で脱Tos化
し、セフアデツクスＧ―10（2.2×85cm、溶出液10
％酢酸）、さらにLH―20（2.2×80cm、0.001N―
HCl）によるゲル過で精製してＨ―Tyr―Asn
―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser
―OH ９mgを得る。 Rf〓値：0.01、Rf〓値：0.42 〔α〕20 D：−24.3゜（C0.078、0.001N―HCl） 元素分析値（C59H92N10O17・15H2O・
CH3COOHとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 45.01 7.80 13.77 実測値（％） 45.21 7.31 14.22 実施例 ５ (a) Ｚ―Met―Ser―Tyr―Asn―Leu―Leu―
Gly―Phe―Leu―Gln―Arg（Tos）―Ser―
Ser―OHの製造 Ｚ―Met―Ser―NHNH2 159mgをジメチルホ
ルムアミド５ml及び6N―HCl／ジオキサン0.21
mlに溶解し、イソアミルナイトライト0.055ml及
びトリエチルアミン0.17mlを用いて参考例１の方
法に準じてアジド体を生成させ、次いでこの溶液
をＨ―Tyr―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―Leu
―Gln―Arg（Tos）―Ser―Ser―OH300mg、ジ
メチルホルムアミド５ml及びヘキサメチルリン酸
トリアミド５mlの混合溶液に加え、４℃にて24時
間撹拌する。さらにＺ―Met―Ser―NHNH2を
318mg加え、４℃にて72時間撹拌する。実施例４
ａと同様にして精製を行ない、Ｚ―Met―Ser―
Tyr―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―
Arg（Tos）―Ser―Ser―OHを得る。 (b) Ｈ―Met―Ser―Tyr―Asn―Leu―Leu―
Gly―Phe―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH
の製造上記(a)で得られるＺ―Met―Ser―Tyr
―Asn―Leu―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―
Arg（Tos）―Ser―Ser―OHを実施例１(b)と同
様の方法で脱Ｚ化、脱Tos化を行ない、セフア
デツクスＧ―25（３×120cm、溶出液50％酢酸）、
さらにLH―20（２×85cm、溶出液0.001N―
HCl）にて精製し、Ｈ―Met―Ser―Tyr―Asn
―Leu―Leu―Gly―Phe―Leu―Gln―Arg―
Ser―Ser―OH 119mgを得る。 Rf〓値：0.01、Rf〓値：0.45 〔α〕20 D：−15.7°（C0.254，0.001N−HCl） 元素分析値（C67H106N18O20S・5H2O・
CH3COOHとして） Ｃ Ｈ Ｎ 計算値（％） 49.75 7.26 15.13 実測値（％） 49.80 6.92 14.91 アミノ酸分析値 Asp：0.95、Ser：3.15、Gln：1.03、 Met：0.92、Gly：1.05、Leu：3.08、 Tyr：1.00、Phe：0.98、Arg：0.96 〈抗原の製造〉 実施例 ６ 上記実施例１(b)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＡ」と略記する）10mg及び牛血清アルブミ
ン（以下「BSA」と略記する）50mgを酢酸アン
モニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlにとか
す。この溶液に0.1モルのグルタールアルデヒド
溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。その
後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析す
る。透析中５回水を交換する。その後、ペプチド
―蛋白質複合体を含有する溶液を凍結乾燥してヒ
トβ型インターフエロン抗原（以下「抗原」と
略記する）45mgを得る。 実施例 ７ 上記実施例２(b)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＢ」と略記する）５mg及びBSA20mgを酢
酸アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlに
とかす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデ
ヒド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。
その後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析
する。透析中５回水を交換する。その後、ペプチ
ド―蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒト
β型インターフエロン抗原（以下「抗原」と略
記する）23mgを得る。 実施例 ８ 上記実施例３(b)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＣ」と略記する）４mg及びBSA15mgを酢
酸アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlに
とかす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデ
ヒド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。
その後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析
する。透析中５回水を交換する。その後、ペプチ
ド―蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒト
β型インターフエロン抗原（以下「抗原」と略
記する）17mgを得る。 実施例 ９ 上記実施例４(b)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＤ」と略記する）４mg及びBSA12mgを酢
酸アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlに
溶かす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデ
ヒド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。
その後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析
する。透析中５回水を交換する。その後、ペプチ
ド―蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒト
β型インターフエロン抗原（以下「抗原」と略
記する）14mgを得る。 実施例 10 上記実施例５(b)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＥ」と略記する）８mg及びBSA25mgを酢
酸アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlに
溶かす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデ
ヒド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。
その後、反応混合物を48時間、４℃で水１で透
析する。透析中５回水を交換する。その後、ペプ
チド―蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒ
トβ型インターフエロン抗原（以下「抗原」と
略記する）31mgを得る。 実施例 11 ペプチドE8mg及びBSA25mgを水４mlに溶解す
る。この溶液にジシクロヘキシルカーボジイミド
（DCC）を加え、室温で５時間撹拌する。次に反
応混合物を水２用い４℃にて48時間要して透析
する。透析中５回水を交換する。その後ペプチド
―蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトβ
型インターフエロン抗原（以下「抗原」と略記
する）29mgを得る。 〈抗体の製造〉 実施例 12 実施例６で得られる抗原 250μgを1.5mlの生
理食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5ml
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量
と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち
試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を採取
し、本発明のヒトβ型インターフエロン抗体（以
下「抗体」と略記する）を得る。 実施例 13 実施例７で得られる抗原 250μgを1.5mlの生
理食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5ml
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量
と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち
試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を採取
し、本発明のヒトβ型インターフエロン抗体（以
下「抗体」と略記する）を得る。 実施例 14 実施例８で得られる抗原 25μgを1.5mlの生
理食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5ml
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量
と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち
試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を採取
し、本発明のヒトβ型インターフエロン抗体（以
下「抗体」と略記する）を得る。 実施例 15 実施例９で得られる抗原 25μgを1.5mlの生
理食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5ml
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量
と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち
試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を採取
し、本発明のヒトβ型インターフエロン抗体（以
下「抗体」と略記する）を得る。 実施例 16 実施例10で得られる抗原 25μgを1.5mlの生
理食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5ml
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量
と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち
試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を採取
し、本発明のヒトβ型インターフエロン抗体（以
下「抗体」と略記する）を得る。 実施例 17 実施例11で得られる抗原を用い、上記実施例
12と同様に処理すると、高力価にヒトβ型インタ
ーフエロンに特異性を有する抗体（以下「抗体
」と略記する）が得られる。 参考例 Γ 標識ペプチドの製造 (1) Ｈ―Met―Ser―Tyr―Asn―Leu―Leu―
Gly―Phe―Leu―Gln―Aug―Ser―Ser―OH
をクロラミンＴを用いる方法で標識化する。 即ち上記ペプチド5μgの0.2モルのリン酸塩緩
衝液（PH7.4）20μlに〔125〕Na（MEN）１マ
イクロキユーリーの0.2モルリン酸塩緩衝液を
加え、次にクロラミンT3.5mg／mlの0.2モルリ
ン酸塩緩衝液20μlを加える。室温で20秒間放置
して2.4mg／mlの0.2Mリン酸塩緩衝液のソジウ
ムメタジサルフエートの50μl 0.2Mリン酸塩緩
衝液を加えることで反応を終わらせる。反応混
合物をデイーン（DEAE）―セフアデツクスＡ
―25のカラム（1.0×30cm）にかける（溶出液
0.1％BSA及び0.01％NaN3を含む0.1モルトリ
ス―塩酸緩衝液、PH8.6）。第１フラクシヨンを
イオン交換クロマトグラフイーで精製して125
で標識された上記ペプチドを得る。 (2) Ｈ―Met―Ser―Tyr―Asn―Leu―Leu―
Gly―Phe―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH
をクロラミンＴを用いる方法で標識化する。 即ち上記ペプチド5μgの0.2モルのリン酸塩緩
衝液（PH7.4）20μlに〔125〕Na（MEN）１マ
イクロキユリーの0.2モルリン酸塩緩衝液を加
え、次にクロラミンT3.5mg／mlの0.2モルリン
酸塩緩衝液20μlを加える。室温で20秒間放置し
て、2.4mg／mlの0.2Mリン酸塩緩衝液のソジウ
ムメタジサルフエートの50μl 0.2Mリン酸塩緩
衝液を加えることで反応を終わらせる。反応混
合物をSP―セフアデツクスＣ―25のカラム
（1.0×30cm）にかける（溶出液50ミリモルリン
酸塩緩衝液）。第４フラクシヨンが125で標識
された上記ペプチドのフラクシヨンである。 Γ 力価の測定 上記で得られる抗体の力価を次の通り測定す
る。即ち抗体をそれぞれ生理食塩水で10，102，
103，104，105……倍に希釈（イニシヤル）し、
これらの夫々100μlに、125標識ペプチド（上記
で得られる標識ペプチドを約１万cpmになるよう
に希釈したもの）0.1ml及び0.1モルリン酸塩緩衝
液（PH＝7.4）〔0.1％BSA、0.15モル塩化ナトリウ
ム及び0.01％NaN3を含む〕0.2mlを加え、４℃で
24時間インキユベートし、生成した抗体と125
標識抗原との結合体を、デキストラン―活性炭法
及び遠心分離法（４℃、15分間、3000rpm）によ
り未反応（結合しない）125標識ペプチドから
分離し、その放射線をカウントし、各希釈濃度に
おける抗体の125標識ペプチドとの結合率（％）
を測定する。縦軸に抗体の125標識ペプチドと
の結合率（％）及び横軸に抗体の希釈倍率（イニ
シヤル濃度）をとり、各々の濃度において結合率
をプロツトする。結合率が50％となる抗体の希釈
倍率即ち抗体の力価を求めると各々次の通りであ
る。抗体 力価 抗体 52000 抗体 100000以上 Γ 抗体のヒトβ型インターフエロン特異性試験 供試試料として各種濃度のヒトβ型インターフ
エロン（東京都総合臨床研究所製、比活性３×
106U／mgプロテイン）、ヒトβ型インターフエロ
ンの第１〜13番のペプチド鎖及びヒトα型インタ
ーフエロン（林原研究所製、Lympho blastoid
Interferon、Lot.No.800928）を使用する。また標
準希釈剤として0.1％BSA、0.15モルNaCl及び
0.01％のNaN3を含む0.1モルリン酸ナトリウム緩
衝液（PH7.4）を使用する。 各々の試験管に、標準希釈剤0.2ml、供試試料
0.1ml、実施例16で得られる抗体V0.1ml（力価
52000）及び125標識ペプチド（上記で得られる
標識ペプチドを約１万cpmになるように希釈した
もの）0.1mlを入れ、４℃で48時間インキユベー
トした後、ノーマルヒツジ血清（normal sheep
serum）を0.1ml加え、次いでデキストランで被
膜した活性炭の懸濁液0.5mlを加え、４℃で30分
間放置し、次に４℃、3000rpmの条件下に30分間
遠心分離を行ない、抗体と125標識ペプチドと
の結合体及び未反応（結合しない）I125標識ペプ
チドを分離し、その放射線をカウントし、用いた
抗体の力価に相当する結合率（Bo）を100％とし
て、各供試試料の濃度及び希釈率における抗体と
125標識ペプチドとの結合体(B)の百分率を求め
る。得られる結果を第１図に示す。第１図中縦軸
は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸は供試試料
（ヒトβ型インターフエロン第１〜第13番ペプチ
ド鎖、ヒトβ型インターフエロン及びヒトα型イ
ンターフエロン）の濃度を示す。また該図におい
て曲線イはヒトβ型インターフエロンの第１〜13
番のペプチド鎖を、曲線ロはヒトβ型インターフ
エロンを、曲線ハはヒトα型インターフエロンを
夫々示す。第１図より抗体は、ヒトα型インタ
ーフエロンに対する反応性とヒトβ型インターフ
エロンに対する反応性において明確に区別される
曲線を示し、このことよりヒトα型インターフエ
ロンとは3.7×106ユニツト／mlまで交叉しない特
異性の高い抗体であることが判る。 また上記と同様にして抗体についてもヒトβ
型インターフエロン特異性試験を行なう。得られ
る結果を第２図に示す。 第２図は抗体の特異性を示すグラフである。
第２図中縦軸は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸
は供試試料（ヒトβ型インターフエロン第１〜13
番ペプチド鎖、ヒトβ型インターフエロン及びヒ
トα型インターフエロン）の濃度を示し、また曲
線ニはヒトβ型インターフエロンの第１〜13番の
ペプチド鎖を、曲線ホはヒトβ型インターフエロ
ンを、曲線ヘはヒトα型インターフエロンを夫々
示す。 また抗体、及びについても特異性試験を
行なう。即ち各々の試験管に前記で述べた標準希
釈剤0.2ml、前記で述べた供試試料0.1ml、抗体
、又は0.1ml及び125標識ペプチド0.1mlを
入れ、前記と同じ条件で反応させる。ヒトβ型イ
ンターフエロン第１〜13番のペプチド鎖から得ら
れた抗体又はとヒトβ型インターフエロン第
１〜13番のペプチドとの結合反応性を100％とし
たときの、それぞれの抗体の結合％を第１表に示
す。
【表】
またヒトβ型インターフエロンに対する抗体
、及びの特異反応性を調べたところ、各抗
体ともヒトβ型インターフエロンに対し高い特異
性を示した。 Γ 感度測定 各々の試験管に、標準希釈剤0.2ml、ヒトβ型
インターフエロン第１〜13番ペプチド鎖0.1ml、
実施例16で得られる抗体又は実施例17で得られ
る抗体0.1ml及び125標識ペプチド（上記で得
られる標識ペプチドを約１万cpmになるように希
釈したもの）0.1mlを入れ、４℃で48時間インキ
ユベートした後、ノーマルヒツジ血清を0.1ml加
え、次いでデキストランで被膜した活性炭の懸濁
液0.5mlを加え、４℃で30分間放置し、次に４℃、
3000rpmの条件下に30分間遠心分離を行ない、抗
体と125標識ペプチドとの結合体及び未反応
（結合しない）125標識ペプチドを分離し、その
放射線をカウントし、用いた抗体の力価に相当す
る結合率（Bo）を100％として、各供試試料の濃
度及び希釈率における抗体と125標識ペプチド
との結合体Ｂの百分率を求める。得られる結果を
第３図に示す。第３図中縦軸は結合％（Ｂ／Bo
×100）を、横軸はヒトβ型インターフエロン第
１〜13番ペプチド鎖の濃度を示す。該図において
曲線トは抗体を用いたもの、曲線チは抗体を
用いたものである。 第３図より明らかなように最小検出感度は抗体
で13ピコグラム／ml、抗体で５ピコグラム／
mlである。
、及びの特異反応性を調べたところ、各抗
体ともヒトβ型インターフエロンに対し高い特異
性を示した。 Γ 感度測定 各々の試験管に、標準希釈剤0.2ml、ヒトβ型
インターフエロン第１〜13番ペプチド鎖0.1ml、
実施例16で得られる抗体又は実施例17で得られ
る抗体0.1ml及び125標識ペプチド（上記で得
られる標識ペプチドを約１万cpmになるように希
釈したもの）0.1mlを入れ、４℃で48時間インキ
ユベートした後、ノーマルヒツジ血清を0.1ml加
え、次いでデキストランで被膜した活性炭の懸濁
液0.5mlを加え、４℃で30分間放置し、次に４℃、
3000rpmの条件下に30分間遠心分離を行ない、抗
体と125標識ペプチドとの結合体及び未反応
（結合しない）125標識ペプチドを分離し、その
放射線をカウントし、用いた抗体の力価に相当す
る結合率（Bo）を100％として、各供試試料の濃
度及び希釈率における抗体と125標識ペプチド
との結合体Ｂの百分率を求める。得られる結果を
第３図に示す。第３図中縦軸は結合％（Ｂ／Bo
×100）を、横軸はヒトβ型インターフエロン第
１〜13番ペプチド鎖の濃度を示す。該図において
曲線トは抗体を用いたもの、曲線チは抗体を
用いたものである。 第３図より明らかなように最小検出感度は抗体
で13ピコグラム／ml、抗体で５ピコグラム／
mlである。
第１図及び第２図は本発明抗体の特異性を示す
グラフである。第３図は本発明抗体についてのヒ
トβ型インターフエロン第１〜13番のペプチド鎖
の濃度と結合％との関係を示すグラフである。
グラフである。第３図は本発明抗体についてのヒ
トβ型インターフエロン第１〜13番のペプチド鎖
の濃度と結合％との関係を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一般式 Ｒ―Leu―Gln―Arg―Ser―Ser―OH 〔式中Ｒは水素原子、Ｈ―Phe―基、Ｈ―Leu
―Gly―Phe―基又はＨ―Tyr―Asn―Leu―Leu
―Gly―Phe―基を示す。〕 で表わされるヒトβ型インターフエロンのＮ末端
ペプチド。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56047840A JPS57163351A (en) | 1981-03-31 | 1981-03-31 | N-terminal peptide of beta-type interferon |
| DE19823211263 DE3211263A1 (de) | 1981-03-31 | 1982-03-26 | Human-interferon verwandte peptide, antigene und antikoerper, sowie verfahren zu deren herstellung |
| CH1961/82A CH652411A5 (de) | 1981-03-31 | 1982-03-30 | Verfahren zur herstellung eines human-interferon-antikoerpers, danach hergestellte antikoerper und ihre verwendung. |
| SE8202012A SE457352B (sv) | 1981-03-31 | 1982-03-30 | Humaninterferon-beslaektad peptid, humaninterferon-antikropp jaemte framstaellning och anvaendning daerav samt maerkt peptid jaemte framstaellning av denna |
| US06/363,505 US4474754A (en) | 1981-03-31 | 1982-03-30 | Human interferon-related peptides, antigens, antibodies and process for preparing the same |
| FR8205522A FR2503145B1 (fr) | 1981-03-31 | 1982-03-31 | Peptides apparentes aux interferons humains, anticorps obtenus a partir de ces peptides et adsorbants obtenus a partir de ces anticorps |
| GB08209538A GB2102810B (en) | 1981-03-31 | 1982-03-31 | Human interferon-related peptides antigens antibodies and process for preparing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56047840A JPS57163351A (en) | 1981-03-31 | 1981-03-31 | N-terminal peptide of beta-type interferon |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57163351A JPS57163351A (en) | 1982-10-07 |
| JPH0160036B2 true JPH0160036B2 (ja) | 1989-12-20 |
Family
ID=12786558
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56047840A Granted JPS57163351A (en) | 1981-03-31 | 1981-03-31 | N-terminal peptide of beta-type interferon |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS57163351A (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3040825A1 (de) * | 1980-10-30 | 1982-09-09 | Dr. Karl Thomae Gmbh, 7950 Biberach | Neues tridekapeptid, verfahren zu seiner herstellung und verwendung |
-
1981
- 1981-03-31 JP JP56047840A patent/JPS57163351A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS57163351A (en) | 1982-10-07 |
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