JPH0160040B2 - - Google Patents
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- JPH0160040B2 JPH0160040B2 JP56133125A JP13312581A JPH0160040B2 JP H0160040 B2 JPH0160040 B2 JP H0160040B2 JP 56133125 A JP56133125 A JP 56133125A JP 13312581 A JP13312581 A JP 13312581A JP H0160040 B2 JPH0160040 B2 JP H0160040B2
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はヒトリムホブラストイドインターフエ
ロン抗原の製造方法に関する。 本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護
基、活性基、その他に関し略号で表示する場合
IUPAC，IUBの規定或いは当該分野における慣
用記号に従うものとし、その例を次に挙げる。ま
たアミノ酸などに関し光学異性体がありうる場合
は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。 Leu：ロイシン Ile：イソロイシン Ala：アラニン Gln：グルタミン Thr：トレオニン His：ヒスチジン Ser：セリン Gly：グリシン Asn：アスパラギン Arg：アルギニン Asp：アスパラギン酸 Pro：プロリン Ｚ：カルボベンゾキシ基 Su：コハク酸イミド基 Tos：ｐ―トルエンスルホニル基 Boc：第３級ブトキシカルボニル基 インターフエロンは、生体の細胞がウイルス感
染を受けた時に産生する抗ウイルス性の糖蛋白質
乃至は蛋白質であり、その利用によつてウイルス
性疾患の予防乃至治療が可能であるとされ、近年
注目を集めつつある。現在解明されているヒトの
インターフエロンはα型インターフエロン
（Leucocytes Interferon、Lympho blastoid
Interferon）、β型インターフエロン
（Fibroblast Interferon）及びγ型インターフエ
ロン（Immune Interferon）に分類されるが、之
等のインターフエロンを単一な糖蛋白質乃至蛋白
質にまで精製する技術は未だ開発されていない。 本発明は、ヒトのα型インターフエロン特にリ
ムホブラストイドインターフエロンを単離精製す
る技術を提供するための新しい抗体、該抗体製造
のための抗原及び該抗原の製造に適したハプテン
並びにこれらを収得する技術を提供することを目
的とするものである。 本発明者らは、上記目的より鋭意研究を重ねた
結果、本発明者らが新たに合成した特定のヒトリ
ムホブラストイドインターフエロンのＮ―末端ペ
プチドを利用する時には、新規なヒトリムホブラ
ストイドインターフエロン抗原が製造でき、該抗
原の利用によればヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロンに対して特異性を有する新規な抗体が
製造でき、該抗体をアフイニテイークロマトグラ
フイーに利用することによつて、目的とするヒト
α型インターフエロンの精製が可能となることを
見い出した。本発明は上記の新しい知見に基づい
て完成されたものであり、本発明によれば、容易
に且つ大量に製造できる合成ペプチドから簡便な
操作でヒトリムホブラストイドインターフエロン
の精製に有用な、特異反応性を示す抗体が工業的
に有利に製造できるものであり、かくしてヒトリ
ムホブラストイドインターフエロンの精製技術を
確立するものである。 本発明に係る新しい合成ペプチドは、下記一般
式(1)で表わされる。 Ｒ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH (1) 〔式中Ｒは水素原子、Ｈ―Thr―His―Ser―
Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala基、Ｈ―Ser
―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr―His―Ser―Leu
―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala基、又はＨ―Tyr
―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr―His―Ser
―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala基を示す。〕 上記一般式(1)で表わされる新規な四種の合成ペ
プチドは、ヒトリンホブラストイドインターフエ
ロンのＮ末端ペプチド鎖に相当するペプチドであ
る。之等はペプチド合成に通常用いられる方法、
具体的には、「ザ ペプチド（The Peptides）」
第１巻（1966年）〔Schro¨der and Luhke著、
Academic Press，New York，U.S.A.〕あるい
は「ペプチド合成」〔泉屋ら著、丸善株式会社
（1975年）〕に記載される如き方法に従い、たとえ
ばアジド法、クロライド法、酸無水物法、混酸無
水物法、DCC法、活性エステル法（ｐ―ニトロ
フエニルエステル法、Ｎ―ヒドロキシコハク酸イ
ミドエステル法、シアノメチルエステル法等）、
ウツドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボジイミ
ダゾール法、酸化還元法、DCC／アデイテイブ
（HONB，HOBt，HOSu）法などにより製造で
きる。上記方法においては、固相合成法及び液相
合成法のいずれをも適用できるが、液相合成法が
好ましい。 通常一般式(1)のペプチドは、上記した一般のポ
リペプチドの合成法に従い、例えば末端アミノ酸
に順次１個づつアミノ酸を縮合させる所謂ステツ
プワイズ法によつて、又は数個のフラグメントに
分けてカツプリングさせていく方法によつて製造
される。より詳細には上記ペプチドは、その結合
の任意の位置で２分される２種のフラグメントの
一方に相当する反応性カルボキシル基を有する原
料と、他方のフラグメントに相当する反応性アミ
ノ基を有する原料をペプチド合成の常套手段で縮
合させ、生成する縮合物が保護基を有する場合、
その保護基を常套手段で脱離させることにより製
造し得る。尚一般式(1)のペプチドを製造する反応
工程でアスパラギン酸を用いる場合、これは通常
保護しておくのが望ましい場合が多く、最終工程
では、通常ペプチドの構成アミノ酸残基の少なく
とも一つが保護された保護ペプチドからすべての
保護基を脱離する。 また上記一般式(1)のペプチドの合成反応工程で
は、反応に関与すべきでない官能基は、通常の保
護基により保護され、反応終了後該保護基は脱離
される。更に反応に関与する官能基は通常活性化
される。之等各反応方法は公知であり、それに用
いられる試薬等も公知のものから適宜選択し得
る。 アミノ基の保護基としては、例えばカルボベン
ゾキシ、tert―ブチルオキシカルボニル、tert―
アミルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカ
ルボニル、ｐ―メトキシベンジルオキシカルボニ
ル、２―クロル―ベンジルオキシカルボニル、ア
ダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセ
チル、フタリル、ホルミル、ｏ―ニトロフエニル
スルフエニル、ジフエニルホスフイノチオイルな
どが挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は、例えばアルキルエステル（例メチル、エチ
ル、プロピル、ブチル、tert―ブチルなどのエス
テル基）、ベンジルエステル、ｐ―ニトロベンジ
ルエステル、ｐ―メトキシベンジルエステル、ｐ
―クロルベンジルエステル、ベンズヒドリルエス
テル、カルボベンゾキシヒドラジド、tert―ブチ
ルオキシカルボニルヒドラジド、トリチルヒドラ
ジド等が挙げられる。 アルギニンのグアニジノ基保護基としては、例
えばニトロ、トシル、ｐ―メトキシベンゼンスル
ホニル、カルボベンゾキシ、イソボルニルオキシ
カルボニル、アダマンチルオキシカルボニル等が
挙げられる。また、そのグアニジノ基は適当な酸
例えばベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン
酸、塩酸、硫酸などの塩の形で保護してもよい。 スレオニンの水酸基は、例えばエステル化また
はエーテル化によつて保護することができるが必
ずしも保護する必要はない。このエステル化に適
する基としては例えばアセチル等の低級アルカノ
イル、ベンゾイル等のアロイル、ベンゾイルオキ
シカルボニル、エチルオキシカルボニル等の炭酸
から誘導される基等が挙げられる。またエーテル
化に適する基としては、例えばベンジル、テトラ
ヒドロピラニル、tert―ブチル等である。 カルボキシル基の活性化されたものとしては、
例えば対応する酸クロライド、酸無水物又は混合
酸無水物、アジド、活性エステル（メチルアルコ
ール、エチルアルコール、ベンジルアルコール、
ペンタクロロフエノール、ｐ―ニトロフエノー
ル、Ｎ―ヒドロキシサクシンイミド、Ｎ―ヒドロ
キシベンズトリアゾール、Ｎ―ヒドロキシ―５―
ノルボルネン―２，３―ジカルボキシイミド等と
のエステル）等が挙げられる。尚ペプチド結合形
成反応は、縮合剤例えばジシクロヘキシルカルボ
ジイミド、カルボジイミダゾール等のカルボジイ
ミド試薬やテトラエチルピロホスフイト等の存在
下に実施し得る場合もある。 上記一般式(1)で表わされるペプチドは、Ｒで示
される基の種類に応じて、より具体的には以下に
示す（）〜（）の方法に従い製造される。 （） Ｒが水素原子を示す場合 Ａ―Ala―Ｂ(2) ↓Ｈ―Gln―OH(3) Ａ―Ala―Gln―OH(4) ↓ Ｈ―Ala―Gln―OH(5) ↓ Ａ―Leu―Ｂ(6) Ａ―Leu―Ala―Gln―OH(7) ↓ Ｈ―Leu―Ala―Gln―OH(8) ↓Ａ―Leu―Ｂ(6) Ａ―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(9) ↓ Ｈ―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(10) ↓Ａ―Ile―Ｂ(11) Ａ―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(12) ↓ Ｈ―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(13) ↓Ａ―Leu―Ｂ(6) Ａ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(14) ↓ Ｈ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(15) 【表】 ↓
【表】 【表】 【表】 【表】 〔上記方法（）〜（）において、Ａはアミ
ノ基の保護基、Ｂは水酸基又はカルボキシル基の
活性基、Ｃはアルギニンのグアニジノ基保護基及
びＤはアスパラギン酸の保護基をそれぞれ示す。〕 上記においてＡとしては好ましくはBoc，Ｚ，
ｐ―メトキシベンジルオキシカルボニル基等を、
Ｂに示すカルボキシル基の活性基としては好まし
くはＮ―ヒドロキシサクシンイミド等の活性エス
テル、イソブチルオキシカルボニル等の混合酸無
水物残基、アジド等を、Ｃとしては好ましくはニ
トロ、トシル等を、またＤとしては好ましくはベ
ンジルオキシ基等を例示できる。 上記方法（）においてアミノ酸(2)とアミノ酸
(3)との反応は、溶媒の存在下に行なうことができ
る。溶媒としては、ペプチド縮合反応に使用し得
ることが知られている各種のもの例えば無水また
は含水のジメチルホルムアミド、ジメチルスルホ
キシド、ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、
ジクロルメタン、テトラヒドロフラン、酢酸エチ
ル、Ｎ―メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸
トリアミド或いはこれらの混合溶媒等を用い得
る。アミノ酸(3)とアミノ酸(2)との使用割合として
は特に限定されず広い範囲内で適宜選択すること
ができるが、通常前者に対して後者を等量〜５倍
量、好ましくは等量〜1.5倍量使用するのがよい。
反応温度はペプチド結合形成反応に使用され得る
ことが知られている範囲、通常約−40〜約60℃、
好ましくは約−20〜約40℃の範囲から適宜選択さ
れる。反応時間は一般に数分〜30時間程度であ
る。 方法（）におけるペプチド(5)とアミノ酸(6)と
の反応、ペプチド(8)とアミノ酸(6)との反応、ペプ
チド(10)とアミノ酸(11)との反応、及びペプチド(13)
とアミノ酸(6)との反応は上記アミノ酸(2)とアミノ
酸(3)との反応と同様にして行なうことができる。
また方法（）におけるアミノ酸(16)とアミノ酸
（１７）との反応、ペプチド(19)とアミノ酸(16)との反
応、ペプチド(21)とアミノ酸(22)との反応、ペプ
チド(24)とペプチド(15)との反応、ペプチド(26)と
ペプチド(36)との反応、アミノ酸(6)とアミノ酸(2
９）との反応、ペプチド(31)とアミノ酸(32)との反
応及びペプチド(34)とペプチド(35)との反応も同
様にして実施できる。更に方法（）におけるア
ミノ酸(37)とアミノ酸(38)との反応、ペプチド(40)
とアミノ酸(6)との反応、ペプチド(42)とアミノ酸
（４３）との反応、ペプチド(46)とアミノ酸(32)との反
応及びペプチド(47)とペプチド(28)との反応、並
びに方法（）におけるペプチド(50)とアミノ酸
（５１）との反応及びペプチド(52)とペプチド(28)との
反応も亦上記と同様にして行ない得る。 上記各反応により得られるペプチド(4)、(7)、
(9)、(12)、(14)、(18)、(20)、(25)、(27)、(30)、(33
)、
(39)、(41)、(45)、(47)、(48)及び(53)の有する保護
基Ａの離脱反応は、常法により行なわれる。該方
法としては、例えば還元的方法（例パラジウム、
パラジウム黒等の触媒を用いる水素添加、液体ア
ンモニア中金属ナトリウムによる還元）、アシド
リシス（例トリフルオロ酢酸、弗化水素、メタン
スルホン酸、臭化水素酸等の強酸によるアシドリ
シス）等が挙げられる。 上記触媒を用いる水素添加は、例えば水素圧１
気圧、０〜40℃にて行なうことができる。触媒の
使用量は通常100mg〜１ｇ程度でよく、一般に１
〜48時間程度で反応は終了する。また上記アシド
リシスは無溶媒下、通常０〜30℃程度、好ましく
は０〜20℃にて行なわれ、一般に15分〜１時間程
度で反応は終了する。酸の使用量としては原料化
合物に対し通常50〜10倍量程度とするのがよい。
また液体アンモニア中金属ナトリウムによる還元
において、金属ナトリウムは、反応溶液がパーマ
ネントブルーに30秒〜10分間程度呈色しているよ
うな量で用いられる。この還元は通常−40〜−70
℃程度にて行なわれる。 またペプチド(23)の保護基(C)及びペプチド(45)
の保護基(D)は、上記還元的方法によつて、同様に
脱保護することができる。 上記方法（）乃至（）に利用されるアミノ
酸(2)、(6)、(11)、(16)、(22)、(32)、(37)、(43)及び
（５１）は公知の市販品でよく、またペプチド(18)、
（２３）、(35)、(36)、(44)、(47)、及び(52)は公知の
市
販品又は混合酸無水物法、アジド化法等により得
られるものが利用できる。該混合酸無水物法は、
適当な溶媒中塩基性化合物の存在下、アルキルハ
ロカルボン酸を用いて行なわれる。使用されるア
ルキルハロカルボン酸としては例えばクロロ蟻酸
メチル、ブロモ蟻酸メチル、クロロ蟻酸エチル、
ブロモ蟻酸エチル、クロロ蟻酸イソブチル等が挙
げられる。また塩基性化合物としては例えばトリ
エチルアミン、トリメチルアミン、ピリジン、ジ
メチルアニリン、Ｎ―メチルモルホリン、１，５
―ジアザビシクロ〔４，３，０〕ノネン―５
（DBN）、１，５―ジアザビシクロ〔５，４，０〕
ウンデセン―５（DBU）、１，４―ジアザビシク
ロ〔２，２，２〕オクタン（DABCO）等の有機
塩基、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素
カリウム、炭酸水素ナトリウム等の無機塩基が挙
げられる。用いられる溶媒としては混合酸無水物
法に慣用の各種溶媒、具体的には塩化メチレン、
クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭
化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳
香族炭化水素類、ジエチルエーテル、テトラヒド
ロフラン、ジメトキシエタン等のエーテル類、酢
酸メチル、酢酸エチル等のエステル類、Ｎ，Ｎ―
ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、
ヘキサメチルリン酸トリアミド等の非プロトン性
極性溶媒などが挙げられる。該反応は−20〜100
℃好ましくは−20〜50℃において行なわれ、反応
時間は一般に５分〜10時間好ましくは５分〜２時
間である。 またアジド化法は、まず活性化されたカルボキ
シル基、例えばメチルアルコール、エチルアルコ
ール、ベンジルアルコール等のアルコールで活性
化されたカルボキシル基にヒドラジン水和物を適
当な溶媒中にて反応させることにより行なわれ
る。用いられる溶媒としては例えばジオキサン、
ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド又
はこれらの混合溶媒等を挙げることができる。ヒ
ドラジン水和物の使用量は、活性化されたカルボ
キシル基に対して通常５〜20倍モル量、好ましく
は５〜10倍モル量とするのがよい。該反応は通常
50℃以下、好ましくは−20〜30℃にて行なわれ
る。斯くして末端アミノ酸のカルボキシル基部分
がヒドラジンで置換された化合物（ヒドラジン誘
導体）を製造し得る。末端アミノ酸のカルボキシ
ル基部分がアジドで置換された化合物は、酸の存
在下適当な溶媒中上記で得られるヒドラジン誘導
体と亜硝酸化合物を反応させることにより製造さ
れる。酸としては通常塩酸が用いられる。溶媒と
しては例えばジオキサン、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシド又はこれらの混合溶媒
等を使用できる。また亜硝酸化合物としては例え
ば亜硝酸ナトリウム、亜硝酸イソアミル、塩化ニ
トロシル等を使用することができる。斯かる亜硝
酸化合物はヒドラジン誘導体に対して通常等モル
〜２倍モル量、好ましくは等モル〜1.5倍モル量
用いられる。該反応は通常−20〜０℃、好ましく
は−20〜−10℃にて行なわれ、一般に５〜10分程
度で反応は終了する。 上記のようにして製造された一般式(1)のペプチ
ドは反応混合物からペプチドの分離手段例えば抽
出、分配、カラムクロマトグラフイー等により単
離精製される。 かくして前記一般式(1)で表わされる合成ペプチ
ド即ちヒトリンホブラストイドインターフエロン
のＮ末端ペプチドを得る。 かくして得られる合成ペプチドは、これに
I125，I131等の放射性ヨードを導入することによ
り、ラジオイムのアツセイ法（RIA法）において
用いられる標識抗原の製造用原料である標識ペプ
チドとして利用できる。上記放射性ヨードの導入
は、通常のヨード化法、例えばクロラミンＴを用
いる酸化的ヨード化法〔W.M.Hunter and F.C.
Greenwood；Nature，194，P495（1962）、
Biochem.J.89，P114（1963）参照〕により行なわ
れる。例えば上記ヨード化法は、適当な溶媒例え
ば0.2Mリン酸緩衝液（PH＝7.4）等の溶媒中、ク
ロラミンＴの存在下室温付近にて10〜30秒程度で
行なわれる。用いられるペプチド、放射性ヨード
及びクロラミンＴの使用割合としては、例えばチ
ロシンに放射性ヨードを１個導入する場合には、
ペプチド中に含まれるチロシン分子１ナノモルに
対して放射性ヨードを１ミリキユーリー程度、ク
ロラミンＴを10〜100ナノモル程度用いるのがよ
く、またチロシンに放射性ヨードを２個導入する
場合には、ペプチド中に含まれるチロシン分子１
ナノモルに対して放射性ヨードを２ミリキユーリ
ー程度、クロラミンＴを10〜100ナノモル程度用
いるのがよい。斯くして製造される放射性ヨード
により標識化されたペプチドは通常の分離手段例
えば抽出、分配、カラムクロマトグラフイー、透
析等により単離精製される。このようにして得ら
れるペプチドは必要ならば凍結乾燥させて保存し
ておくこともできる。 また上記一般式(1)で表わされる合成ペプチド
は、ヒトリムホブラストイドインターフエロン抗
原の製造用ハプテンとして利用できる。 以下上記ヒトリムホブラストイドインターフエ
ロン抗原の製造方法につき詳述する。 ヒトリムホブラストイドインターフエロン抗原
は、上記一般式(1)で表わされる合成ペプチドの少
なくとも１種をハプテンとし、これをハプテン―
担体結合試薬の存在下に担体と反応させることに
より製造される。 上記方法においてハプテンに結合される担体と
しては、通常抗原の作成に当り慣用される高分子
の天然若しくは合成蛋白質を広く使用できる。該
担体としては、例えば馬血清アルブミン、牛血清
アルブミン、ウサギ血清アルブミン、人血清アル
ブミン、ヒツジ血清アルブミン等の動物の血清ア
ルブミン類、馬血清グロブリン、牛血清グロブリ
ン、ウサギ血清グロブリン、人血清グロブリン、
ヒツジ血清グロブリン等の動物の血清グロブリン
類、馬チログロブリン、牛チログロブリン、ウサ
ギチログロブリン、人チログロブリン、ヒツジチ
ログロブリン等の動物のチログロブリン類、馬ヘ
モグロビン、牛ヘモグロブリン、ウサギヘモグロ
ブリン、人ヘモグロブリン、ヒツジヘモグロブリ
ン等の動物のヘモグロブリン類、動物のヘモシア
ニン類、回虫より抽出された蛋白質（アスカーリ
ス抽出物、特開昭56−16414号参照）、ポリリジ
ン、ポリグルタミン酸、リジン―グルタミン酸共
重合体、リジン又はオルニチンを含む共重合体等
を挙げることができる。 アスカーリス抽出物につき以下に詳述する。 アスカーリス抽出物は、ブタ回虫
（Ascarissuum）の粉砕物より通常の蛋白抽出法
に従い抽出される。抽出溶媒としては例えば水、
生理食塩水、50％メタノールまたはエタノール水
溶液、中性付近の緩衝液等の公知の各種蛋白抽出
溶媒を使用でき、特に生理食塩水を用いるのが好
ましい。上記抽出物は、より具体的には、例えば
次の如くして製造される。即ちブタ回虫の内容物
を除去し、生理食塩水で洗浄後、抽出を容易とす
るため好ましくは細断し、該細断物を例えば生理
食塩水等の蛋白抽出溶媒中に添加し、ホモジネー
トしながら抽出する。この抽出は通常低温下にお
いて行なわれ、好ましくは約２〜10℃で有利に行
なわれる。かくして得られる抽出液を次いで遠心
分離し、上清を採取し透析後透析液を凍結乾燥す
るか又は更に上記透析液を再度遠心分離し、上清
を採取し、浮遊物を除去後凍結乾燥することによ
つて、目的とするアスカーリス抽出物が製造され
る。これは更に必要に応じて通常の蛋白精製手段
例えば透析法、ゲル過法、吸着法、クロマトグ
ラフ法等により精製後、本発明に利用することが
できる。また上記アスカーリス抽出物は、例えば
J.Immun.，111，260〜268（1973）、J.Immun.，
122，302〜308（1979）、J.Immun.，98，893〜900
（1967）及びAm.J.Physiol.，199，575〜578
（1960）に記載されたものまたはこれらを更に精
製したものであつてもよい。 ハプテン―担体結合試薬としては通常抗原の作
成に当り慣用されているものを広く使用でき、具
体的にはアミノ基とアミノ基とを架橋結合させ
る、例えばグリオキサール、マロンジアルデヒ
ド、グルタールアルデヒド、スクシンアルデヒ
ド、アジポアルデヒド等の脂肪族ジアルデヒド
類、チオール基とチオール基とを架橋結合させ
る、例えばＮ，N′―ｏ―フエニレンジマレイミ
ド、Ｎ，N′―ｍ―フエニレンジマレイミド等の
ジマレイミド化合物、アミノ基とチオール基とを
架橋結合させる、例えばメタマレイミドベンゾイ
ル―Ｎ―ヒドロキシスクシンイミドエステル、４
―（マレイミドメチル）―シクロヘキサン―１―
カルボキシル―N′―ヒドロキシスクシンイミド
エステル等のマレイミドカルボキシル―Ｎ―ヒド
ロキシスクシンイミドエステル化合物、アミノ基
とカルボキシル基とをアミド結合させる通常のペ
プチド結合形成反応に用いられる試薬、例えば
Ｎ，Ｎ―ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ―
エチル―N′―ジメチルアミノカルボジイミド、
１―エチル―３―ジイソプロピルアミノカルボジ
イミド、１―シクロヘキシル―３―（２―モルホ
リニル―４―エチル）カルボシイミド等のカルボ
ジイミド類等の脱水縮合剤を挙げることができる
が、さらにはｐ―ジアゾニウムフエニル酢酸等の
ジアゾニウムアリールカルボン酸類と通常のペプ
チド結合形成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤と
を組み合わせたものも使用可能である。 本発明抗原の製造反応は、例えば水溶液もしく
はPH７〜10の通常の緩衝液中好ましくはPH８〜９
の緩衝液中で、０〜40℃好ましくは室温付近で行
なわれる。該反応は通常約１〜24時間、好ましく
は３〜５時間で完結する。上記において用いられ
る代表的緩衝液としては、次のようなものを例示
できる。 0.2N水酸化ナトリウム―0.2Mホウ酸―0.2M塩
化カリウム緩衝液、 0.2M炭酸ナトリウム―0.2Mホウ酸、0.2M塩化
カリウム緩衝液、 0.05M四ホウ酸ナトリウム―0.2Mホウ酸―
0.05M塩化ナトリウム緩衝液、 0.1Mリン酸二水素カリウム―0.05M四ホウ酸
ナトリウム緩衝液 上記においてハプテン、ハプテン―担体結合試
薬及び担体の使用割合は、適宜に決定できるが、
通常ハプテンに対して担体を２〜６倍重量好まし
くは３〜５倍重量、及びハプテン―担体結合試薬
を５〜10倍モル程度用いるのがよい。上記反応に
よりハプテン―担体結合試薬を仲介させて担体と
ハプテンとが結合したペプチド―担体複合体から
成るヒトリムホブラストイドインターフエロン抗
原が収得される。 反応終了後得られる抗原は常法に従い、例えば
透析法、ゲル過法、分別沈殿法等により容易に
単離精製できる。また該抗原は通常の凍結乾燥法
により保存できる。 かくして前記一般式(1)で表わされるヒトリンホ
ブラストイドインターフエロンのＮ末端ペプチド
の少なくとも１種と担体との複合体から成るヒト
リンホブラストイドインターフエロン抗原を得
る。該抗原は通常蛋白質１モルに対しペプチドが
平均５〜20モル結合したものであり、いずれも引
き続き再現性よく、ヒトリムホブラストイドイン
ターフエロンに対する特異性の高い抗体の作成を
可能とするものである。特に上記蛋白質に対する
ペプチドの結合モル比が１：８〜15のものは、特
異性が一層高く高力価、高感度の抗体を作成し得
るものであり好ましい。 上記で得られる抗原による抗体の作成は、以下
の如くして行なわれる。即ち上記抗原を哺乳動物
に投与し、生体内に産生される抗体を採取するこ
とにより行なわれる。 抗体の製造に供せられる哺乳動物としては、特
に制限はないが、通常兎やモルモツトを用いるの
が望ましい。抗体の産生に当つては、上記により
得られる抗原の所定量を生理食塩水で適当濃度に
希釈し、フロインドの補助液（Complete
Freund′s Adjuvant）と混合して懸濁液を調整
し、之を哺乳動物体に投与すればよい。例えば兎
に上記懸濁液を皮内注射（抗原の量として0.5〜
５mg／回）し、以後２週間毎に２〜10ケ月好まし
くは４〜６ケ月間投与し免疫化させればよい。抗
体の採取は、上記懸濁液の最終投与後抗体が多量
産出される時期、通常上記最終投与１〜２週間経
過後、免疫化された動物から採血し、之を遠心分
離後血清を分離採取することにより行なわれる。
殊に本発明方法によれば、用いる抗原の特殊性に
基づいて、ヒトリムホブラストイドインターフエ
ロンは対して非常に優れた特異性を有し、高力
価、高感度の抗体を収得できる利点がある。 かくして得られるヒトリンホブラストイドイン
ターフエロン抗体は、上記の通り殊に優れたヒト
リンホブラストイドインターフエロン特異性を有
するものであり、斯界で要望されているRIA法に
よるヒトリンホブラストイドインターフエロンの
定量を高精度をもつて可能とする有用なものであ
る。また該抗体は、これに酵素または螢光物質で
標識することによつてエンザイムイムノアツセイ
（EIA）法、フローレツセンスイムノアツセイ
（FIA）法等に使用できる。さらに該抗体は公知
の不溶化させる物質と反応させて不溶化抗体とす
ることもできる。 以下本発明を更に詳しく説明するため、本発明
ペプチド、これを利用した抗原及び該抗原からの
抗体の製造例を挙げるが、本発明はこれに限定さ
れるものではない。 尚各製造例におけるR値はシリカゲル上の薄
層クロマトグラフイーにて下記混合溶媒を用いて
測定したものである。 R〓…１―ブタノール―酢酸―水（４：１：
５） R〓…１―ブタノール―ピリジン―酢酸―水 （15：10：３：12） ＜ペプチドの合成＞ 製造例 １ １ Ｚ―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Ala―OSu4.80ｇのテトラヒドロフラン60
ml溶液にＨ―Gln―OH2.19ｇの水40ml溶液とト
リエチルアミン2.10mlを加え、室温で20時間撹拌
する。テトラヒドロフラン及び水を留去し、残渣
をｎ―ブタノールで抽出する。抽出液を２％酢酸
で洗浄し、ブタノールを留去する。析出物質を
取し、メタノール―酢酸エチルで再沈殿して、Ｚ
―Ala―Gln―OH3.87ｇを得る。 R〓：0.41 R〓：0.56 元素分析値（C16H21N3O6として） 計算値（％） C54.69 H6.02 N11.96 実測値（％） C54.50 H6.31 N11.62 ２(a) Ｈ―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Ala―Gln―OH3.50ｇを水50ml及びメタノ
ール30mlに溶かし、パラジウムを触媒として接触
還元して、Ｈ―Ala―Gln―OHを得る。 R〓：0.04 ２(b) Ｚ―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Leu―OSu3.97ｇ、上記(a)で得たＨ―Ala
―Gln―OH及びトリエチルアミン1.39mlをジメ
チルホルムアミド50mlに溶解し、室温で20時間撹
拌する。ジメチルホルムアミドを留去し、残渣を
酢酸エチルで抽出する。抽出液を1N―クエン酸
で３回及び水で５回洗浄する。酢酸エチルを留去
し、残渣にエーテルを加え、析出する沈殿物を
取乾燥し、メタノール―酢酸エチルより再沈殿さ
せて、Ｚ―Leu―Ala―Gln―OH2.15ｇを得る。 R〓：0.49 R〓：0.62 元素分析値（C22H32N4O7として） 計算値（％） C56.88 H6.94 N12.06 実測値（％） C56.41 H6.80 N12.18 ３(a) Ｈ―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Leu―Ala―Gln―OH2.10ｇに25％臭化水
素含有酢酸溶液20ml加え、室温で１時間放置す
る。反応液に乾燥エーテルを加えて、Ｈ―Leu―
Ala―Gln―OHを得る。 R〓：0.10 ３(b) Ｈ―Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Leu―OSu1.96ｇ、トリエチルアミン0.63
ml及びＨ―Leu―Ala―Gln―OHをジメチルホル
ムアミド50mlに溶かし、室温で20時間撹拌する。
ジメチルホルムアミドを留去して、残渣に1Mク
エン酸を加え、析出する結晶を取し結晶を液
が中性になるまで水洗し乾燥する。メタノール―
酢酸エチルで洗浄して、Ｚ―Leu―Leu―Ala―
Gln―OH1.63ｇを得る。 R〓：0.58 R〓：0.64 元素分析値（C28H43N5O8として） 計算値（％） C58.22 H7.50 N12.12 実測値（％） C57.85 H7.90 N11.96 ４(a) Ｈ―Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Leu―Leu―Ala―Gln―OH1.50ｇに25％
臭化水素含有酢酸溶液20mlを加え、室温で１時間
撹拌する。反応液に乾燥エーテルを加えて、析出
する固体を取して、Ｈ―Leu―Leu―Ala―Gln
―OHを得る。 R〓：0.19 ４(b) Ｚ―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製
造 Ｚ―Ile―OSu1.41ｇ、上記で得られたＨ―Leu
―Leu―Ala―Gln―OH及びトリエチルアミン
0.36mlをジメチルホルムアミド50mlに溶かし、室
温で20時間撹拌する。ジメチルホルムアミドを留
去して、残渣に1Nクエン酸を加え、析出する結
晶を取し、熱メタノールで洗浄して、Ｚ―Ile
―Leu―Leu―Ala―Gln―OH1.17ｇを得る。 R〓：0.61 R〓：0.71 元素分析値（C34H54N6O9として） 計算値（％） C59.11 H7.87 N12.16 実測値（％） C59.23 H7.80 N12.02 ５(a) Ｈ―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製
造 Ｚ―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH1.10ｇに
25％臭化水素含有酢酸15mlを加え、室温で１時間
撹拌する。反応液に乾燥エーテルを加えて、析出
する固体を取してＨ―Ile―Leu―Leu―Ala―
Gln―OHを得る。 R〓：0.25 ５(b) Ｚ―Leu―Ile―Leu―LeuAla―Gln―OH
の製造 Ｚ―Leu―OSu0.69ｇ、上記で得られたＨ―Ile
―Leu―Leu―Ala―Gln―OH及びトリエチルア
ミン0.22mlをジメチルホルムアミド50mlにとか
し、室温で20時間撹拌する。ジメチルホルムアミ
ドを留去して、残渣に1Nコハク酸を加え、析出
物質を取し、液が中性になるまで水で洗浄乾
燥する。熱メタノールで洗浄して、Ｚ―Leu―Ile
―Leu―Leu―Ala―Gln―OH1.10ｇを得る。 R〓：0.58 R〓：0.71 元素分析値（C40H65N7O10として） 計算値（％） C59.75 H8.15 N12.19 実測値（％） C59.60 H8.02 N11.92 ６ Ｈ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH
の製造 Ｚ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―
OH0.50ｇをメタノール50ml及び10％酢酸10mlに
溶かし、パラジウムを触媒として接触還元して、
Ｈ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHを得
る。以下これを「ペプチドＡ」と呼ぶ。 R〓：0.23 R〓：0.61 元素分析値（C32H59N7O8・2H2Oとして） 計算値（％） C54.45 H8.99 N13.89 実測値（％） C54.30 H8.81 N13.98 製造例 ２ １ Boc―Ala―NHNHZの製造 Boc―Ala―OH4.99ｇ、NH2―NH―Z4.36ｇ
及びジシクロヘキシルカルボジイミド5.44ｇをテ
トラヒドロフラン150mlに溶解し、４℃で20時間
撹拌する。析出する固体を去し、液を留去
し、エーテルを加えて沈殿を取し、エーテルと
石油エーテルから再沈殿させて、Boc―Ala―
NHNHZ7.03ｇを得る。 R〓：0.79 R〓：0.81 元素分析値（C16H23N3O5として） 計算値（％） C59.96 H6.87 N12.45 実測値（％） C56.81 H6.49 N12.34 ２(a) Ｈ―Ala―NHNHZの製造 Boc―Ala―NHNHZ3.00ｇをトリフルオロ酢
酸10mlに溶解、15分間室温放置後、トリフルオロ
酢酸を留去し乾燥してＨ―Ala―NHNHZを得
る。 R〓：0.51 ２(b) Boc―Arg（NO2）―Ala―NHNHZの製造 Boc―Arg（NO2）―OH2.84ｇをテトラヒドロ
フラン40mlおよびＮ―メチルモルホリン0.91ml溶
液に解かし、−15℃に冷却後イソブチルクロロホ
ルメイト1.17mlを加え30秒間激しく撹拌する。こ
れにＨ―Ala―NHNHZのジメチルホルムアミド
20ml溶液及びトリエチルアミン1.24ml溶液を加
え、１分間撹拌する。０℃で５分間次いで40℃２
分間温めた後、室温で15分間撹拌する。テトラヒ
ドロフラン及びジメチルホルムアミドを留去後、
酢酸エチルで抽出する。抽出液を1Nクエン酸つ
づいて飽和炭酸水素ナトリウム次いで飽和食塩水
で洗浄後、酢酸エチルを留去、酢酸エチル―エー
テルで再沈殿してBoc―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZ3.70ｇを得る。 R〓：0.68 R〓：0.79 元素分析値（C22H34N8O8として） 計算値（％） C49.06 H6.36 N20.80 実測値（％） C49.40 H6.72 N20.43 ３(a) Ｈ―Arg（NO2）―Ala―NHNHZの製造 Boc―Arg（NO2）―Ala―NHNHZ3.67ｇをト
リフルオロ酢酸15mlに溶解し、15分間室温に放置
後、乾燥エーテルを加え結晶化し、結晶を取し
てＨ―Arg（NO2）―Ala―NHNHZを得る。 R〓：0.20 ３(b) Boc―Arg（NO2）―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZの製造 Boc―Arg（NO2）―OH2.17ｇをテトラヒドロ
フラン50mlとＮ―メチルモルホリン0.69ml溶液に
溶かし、−15℃に冷却後イソブチルクロロホルメ
イト0.89mlを加え30秒間激しく撹拌する。これに
上記(a)で得られたＨ―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZのジメチルホルムアミド30mlおよびト
リエチルアミン0.95ml溶液を加え１分間撹拌す
る。０℃で５分間、次いで40℃で２分間温めた
後、室温で15分間撹拌する、テトラヒドロフラン
及びジメチルホルムアミドを留去し、残渣を酢酸
エチルで抽出する。抽出液を1N―クエン酸及び
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で順次洗浄後、酢
酸エチルを留去する。酢酸エチル―エーテルによ
り再沈殿させてBoc―Arg（NO2）―Arg（NO2）
―Ala―NHNHZ3.70ｇを得る。 R〓：0.58 R〓：0.75 元素分析値（C28H45N13O11として） 計算値（％） C45.46 H6.13 N24.61 実測値（％） C45.13 H5.71 N24.51 ４(a) Ｈ―Arg（NO2）―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZの製造 Boc―Arg（NO2）―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZ3.00ｇをトリフルオロ酢酸20mlに溶解
し、15分間室温で放置後、乾燥エーテルを加えて
結晶化する。結晶を取して、Ｈ―Arg（NO2）
―Arg（NO2）―Ala―NHNHZを得る。 R〓：0.11 ４(b) Boc―Asn―Arg（NO2）―Arg（NO2）―
Ala―NHNHZの製造 Ｈ―Arg（NO2）―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZをDMF50mlにとかし、それにトリエチ
ルアミン0.56mlとBoc―Asn―ONHS2.17ｇとを
加え、20時間室温で放置する。ジメチルホルムア
ミドを留去し、残渣をブタノールで抽出する。抽
出液を２％酢酸で洗浄後、エーテルを加えて結晶
化し、結晶を取して、メタノール―酢酸より再
沈殿してBoc―Asn―Arg（NO2）―Arg（NO2）
―Ala―NHNHZ2.64ｇを得る。 R〓：0.40 R〓：0.72 元素分析値（C32H51N15O13として） 計算値（％） C45.01 H6.02 N24.60 実測値（％） C44.80 H5.85 N24.12 ４(c) Boc―Asn―Arg―Arg―Ala―NHNH2の
製造 Boc―Asn―Arg（NO2）―Arg（NO2）―Ala
―NHNHZ2.50ｇをメタノール30mlと30％酢酸と
の混液に溶かし、パラジウムを触媒として接触還
元してBoc―Asn―Arg―Arg―Ala―
NHNH22.20ｇを得る。 R〓：0.06 R〓：0.40 元素分析値（C24H47N13O7・2CH3CO2H・H2O
として） 計算値（％） C43.80 H7.48 N23.71 実測値（％） C43.51 H7.62 N23.45 ５ Ｚ―Leu―Gly―OC2H5の製造 Ｎ―メチルモルホリン1.86mlをテトラヒドロフ
ラン60mlにとかし、それにＺ―Leu―OH4.85ｇ
を加える。−15℃に冷却して、イソブチルクロロ
ホルメイト2.41mlを加ええ30秒間激しく撹拌す
る。これにＨ―Gly―OC2H5・HCl2.54ｇのジメ
チルホルムアミド40ml溶液及びトリエチルアミン
2.56mlを加え、１分間撹拌する。０℃で５分間、
次いで40℃で２分間温めた後、室温で15分間撹拌
する。テトラヒドロフラン及びジメチルホルムア
ミドを留去し、残渣に1Mクエン酸を加え、析出
する結晶を取する。液が中性になるまで水洗
し、析出した結晶を取乾燥し、酢酸エチル―エ
ーテルで再沈殿してＺ―Leu―Gly―OC2H54.68
ｇを得る。 R〓：0.80 R〓：0.77 元素分析値（C18H26N2O5として） 計算値（％） C61.70 H7.48 N7.99 実測値（％） C61.51 H7.32 N7.80 ６(a) Ｈ―Leu―Gly―OC2H5の製造 Ｚ―Leu―Gly―OC2H53.12ｇをメタノール50
mlと1N塩酸8.90mlとに溶かし、パラジウムを触
媒として接触還元して、Ｈ―Leu―Gly―OC2H5
を得る。 R〓：0.41 ６(b) Ｚ―Ser―Leu―Gly―OC2H5の製造 Ｚ―Ser―NHNH22.48ｇをジメチルホルムア
ミド20ml及び6N塩酸／ジオキサン4.89mlに溶解
し、−15℃に冷却後、亜硝酸イソアミル1.31mlを
加え、５分間撹拌する。次いでトリエチルアミン
4.11mlを加えて中和する。上記(a)で得られたＨ―
Leu―Gly―OC2H5・1HClとトリエチルアミン
1.24mlのジメチルホルムアミド10ml溶液に、上記
の反応液を加え、４℃で20時間撹拌する。ジメチ
ルホルムアミドを留去後、残留物を酢酸エチルで
抽出し、抽出液を1N―クエン酸及び飽和食塩水
で順次洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。酢
酸エチルを留去後、酢酸エチルより再沈殿してＺ
―Ser―Leu―Gly―OC2H52.64ｇを得る。 R〓：0.78 R〓：0.85 元素分析値（C21H31N3O7として） 計算値（％） C57.65 H7.14 N9.60 実測値（％） C57.60 H6.88 N9.63 ７(a) Ｈ―Ser―Leu―Gly―OC2H5の製造 Ｚ―Ser―Leu―Gly―OC2H52.50ｇを10％酢酸
10ml及びメタノール50mlに溶かし、パラジウムを
触媒として接触還元して、Ｈ―Ser―Leu―Gly―
OC2H5を得る。 R〓：0.31 ７(b) Ｚ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―OC2H5
の製造 Ｚ―Thr―His―NHNH22.54ｇをジメチルホ
ルムアミド20ml及び6N―塩酸／ジオキサン4.19
mlに溶解し、−15℃に冷却後、亜硝酸イソアミル
0.84mlを加え、５分間撹拌する。次いでトリエチ
ルアミン3.51mlを加え中和する。上記(a)で得られ
たＨ―Ser―Leu―Gly―OC2H5とトリエチルア
ミン0.79mlのジメチルホルムアミド20ml溶液に、
上記の反応液を加え、４℃で20時間撹拌する。ジ
メチルホルムアミドを留去後、残渣をブタノール
で抽出し、抽出液を水洗する。溶媒を留去して、
メタノール―酢酸エチルで再結晶して、Ｚ―Thr
―His―Ser―Leu―Gly―OC2H54.31ｇを得る。 R〓：0.35 R〓：0.71 元素分析値（C31H45N7O3・H2oとして） 計算値（％） C64.00 H8.14 N16.85 実測値（％） C64.48 H8.10 N16.54 ８(a) Ｚ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―
NHNH2の製造 Ｚ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―OC2H54.30
ｇをメタノール20mlに溶かし、ヒドラジン・１水
和物3.18mlを加え、室温で20時間放置する。反応
液にエーテルを加えて析出する結晶を取し、乾
燥する。熱メタノールで洗浄してＺ―Thr―His
―Ser―Leu―Gly―NHNH22.55ｇを得る。 R〓：0.17 R〓：0.57 元素分析値（C29H43N9O9として） 計算値（％） C52.64 H6.55 N19.05 実測値（％） C52.55 H6.44 N19.09 ８(b) Ｈ―Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―
Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Boc―Asn―Arg―Arg―Ala―NHNH20.78ｇ
をジメチルホルムアミド８ml及び6N―塩酸／ジ
オキサン1.03mlに溶解し、−15℃に冷却後、亜硝
酸イソアミル0.16mlを加え、５分間撹拌する。次
いでトリエチルアミン0.87mlを加え中和する。ペ
プチドＡ即ちＨ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―
Gln―OH、トリエチルアミン0.87ml、ジメチル
ホルムアミド20ml及びヘキサメチルリン酸トリア
ミド10mlの混合液に、上記の反応液を加え、４℃
で24時間撹拌し、さらにBoc―Asn―Arg―Arg
―Ala―NHNH20.39ｇをアジドに変換したもの
を加えて48時間撹拌する。ジメチルホルムアミド
を留去し、残渣をブタノールで抽出する。抽出液
を水洗して、ブタノールを留去する。残渣にエー
テルを加えて結晶化させ、析出結晶を取する。
水洗し、５酸化リンで乾燥する。得られたBoc―
Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―
Ala―Gln―OHをトリフルオロ酢酸３mlに溶解
し、15分間室温で放置後、乾燥エーテルを加えて
沈殿を析出させ、これを取乾燥後セフアデツク
スＧ―25（溶出液50％酢酸）で精製して、Ｈ―
Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―
Ala―Gln―OH120mgを得る。 R〓：0.01 R〓：0.35 元素分析値（C51H94N18O13・2CH3COOH・
5H2Oとして） 計算値（％） C47.95 H8.19 N18.30 実測値（％） C47.66 H8.41 N18.62 〔α〕25 D：−185.44（Ｃ＝0.57，1M酢酸） ９ Ｈ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn―
Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala
―Gln―OHの製造 Ｚ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―NHNH2125
mgをジメチルホルムアミド10ml及び6N―塩酸／
ジオキサン0.125mlに溶かし、−15℃に冷却後亜硝
酸イソアミル0.025mlを加え５分間撹拌する。次
いでトリエチルアミン0.105mlを加え中和する。
Ｈ―Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―
Leu―Ala―Gln―OH110mgとトリエチルアミン
0.013mlとのジメチルホルムアミド10ml及びヘキ
サメチルリン酸トリアミド６mlの溶液に、上記反
応液を加え、４℃で24時間撹拌する。さらにＺ―
Thr―His―Ser―Leu―Gly―NHNH2125mgのア
ジド化したものを加え48時間撹拌する。ジメチル
ホルムアミドを留去し、残渣をブタノールで抽出
する。抽出液を水洗する。ブタノールを留去し、
メタノール―酢酸エチルで再沈殿する。得られた
Ｚ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―
Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―
OHをメタノール50ml及び10％酢酸10mlに溶か
し、パラジウムを触媒として接触還元する。触媒
を去つづいてメタノールを留去し、得られた残
渣をセフアデツクスＧ―25（溶出液50％酢酸）で
精製して、Ｈ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―
Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―
Ala―Gln―OH125mgを得る。以下これを「ペプ
チドＢ」と呼ぶ。 R〓：0.01 R〓：0.38 元素分析値（C72H127N25O20・2CH3COOH・
4H2Oとして） 計算値（％） C49.21 H7.77 N18.87 実測値（％） C49.60 H7.92 N18.54 〔α〕25 D：−66.76（Ｃ＝0.42，1M酢酸） 製造例 ３ １(a) Ｈ―Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Gln―NHNNHBoc7.00ｇをメタノール50
mlに溶かし、パラジウムを触媒として接触還元し
てＨ―Gln―NHNHBocを得る。 R〓：0.37 １(b) Ｚ―Pro―Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Pro―OH4.41ｇをテトラヒドロフラワン
50ml及びＮ―メチルモルホリン1.80mlに溶かし、
−15℃に冷却後、イソブチルクロロホルメイト
2.34mlを加え、30秒間激しく撹拌する。これに上
記(a)で得られたＨ―Gln―NHNHBocのジメチル
ホルムアミド30ml溶液を加え、１分間撹拌する。
０℃で５分間、次いで40℃で２分間温めた後、室
温で15分間撹拌する。テトラヒドロフラン及びジ
メチルホルムアミドを留去して、残渣を少量のブ
タノール含有酢酸エチルで抽出する。抽出液を
1N―クエン酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
及び飽和食塩水で順次洗浄後熱酢酸エチルで洗浄
して、Ｚ―Pro―Gln―NHNHBoc5.67ｇを得る。 R〓：0.60 R〓：0.76 元素分析値（C23H33N5O7として） 計算値（％） C56.20 H6.77 N14.25 実測値（％） C55.97 H6.68 N14.15 ２(a) Ｈ―Pro―Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Pro―Gln―NHNHBoc5.50ｇをメタノー
ル50mlに溶かし、パラジウムを触媒として接触還
元して、Ｈ―Pro―Gln―NHNHBocを得る。 R〓：0.09 ２(b) Ｚ―Leu―Pro―Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Leu―ONHS4.05ｇを上記(a)で得たＨ―
Pro―Gln―NHNHBocのジメチルホルムアミド
100ml及びトリエチルアミン1.56ml溶液に加え、
20時間室温にて放置する。ジメチルホルムアミド
を留去後、残渣を酢酸エチルで抽出する。抽出液
を1N―クエン酸及び飽和食塩水で順次洗浄する。
酢酸エチル―エーテルで再沈殿させてＺ―Leu―
Pro―Gln―NHNHBoc3.72ｇを得る。 R〓：0.68 R〓：0.80 元素分析値（C29H44N6O8として） 計算値（％） C57.60 H7.33 N13.90 実測値（％） C57.21 H7.08 N13.58 ３(a) Ｈ―Leu―Pro―Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Leu―Pro―Gln―NHNHBoc3.50ｇをメ
タノール50mlに溶かし、パラジウムを触媒として
接触還元してＨ―Leu―Pro―Gln―NHNHBoc
を得る。 R〓：0.14 ３(b) Ｚ―Asp（OCH2―C6H5）―Leu―Pro―
Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Asp（OCH2―C6H5）―OH2.27ｇをテトラ
ヒドロフラン30ml及びＮ―メチルモルホリン0.65
mlに溶かし、−15℃に冷却後イソブチルクロロホ
ルメイト0.84mlを加え30秒間激しく撹拌する。こ
れに上記(a)で得られたＨ―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocのジメチルホルムアミド20ml及びト
リエチルアミン0.81ml溶液を加え、１分間撹拌す
る。０℃で５分間次いで40℃で２分間温めた後、
室温で15分間撹拌する。テトラヒドロフラン及び
ジメチルホルムアミドを留去して、残渣を酢酸エ
チルで抽出する。抽出液を1N―クエン酸、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次
洗浄し、抽出液を留去する。酢酸エチル―エーテ
ル―石油エーテルで再沈殿してＺ―Asp（OCH2
―C6H5）―Leu―Pro―Gln―NHNHBoc4.00ｇ
を得る。 R〓：0.68 R〓：0.77 元素分析値（C40H55N7O11として） 計算値（％） C59.32 H6.84 N12.11 実測値（％） C58.88 H6.65 N11.72 ４(a) Ｈ―Asp―Leu―Pro―Gln―NHNHBoc
の製造 Ｚ―Asp（OCH2―C6H5）―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc2.00ｇをメタノール50ml及び10％酢
酸10mlに溶かし、パラジウム黒を触媒として接触
還元してＨ―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocを得る。 R〓：0.08 ４(b) Ｚ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocの製造 Ｚ―Ser―NHNH20.75ｇをジメチルホルムア
ミド15ml及び6N―塩酸／ジオキサン1.48mlに溶
かし、−15℃に冷却後、亜硝酸イソアミル0.39ml
を加え５分間撹拌する。次いでトリエチルアミン
1.24ml加え中和する。上記(a)で得られたＨ―Asp
―Leu―Pro―Gln―NHNHBocのジメチルホル
ムアミド10ml及びトリエチルアミン0.34ml溶液
に、上記の反応液を加え、４℃で20時間撹拌す
る。ジメチルホルムアミドを留去し、残渣をブタ
ノールで抽出する。抽出液を水洗し、ブタノール
を留去する。メタノール―酢酸エチルより再結晶
して、Ｚ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc1.52ｇを得る。 R〓：0.45 R〓：0.67 ５ Ｈ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr―His
―Ser―Leu―Gln―Asn―Arg―Arg―Ala―
Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc116mgをTFA2mlにより脱Boc化無水
エーテルを加えて得られる沈殿を取乾燥しジメ
チルホルムアミド５ml及び6N―塩酸／ジオキサ
ン0.072mlに溶解し、−15℃に冷却後亜硝酸イソア
ミル0.019mlを加え５分間撹拌する。次いでトリ
エチルアミン0.081mlを加え中和する。 ペプチドＢ即ちＨ―Thr―His―Ser―Leu―
Gly―Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―
Leu―Ala―Gln―OH80mgのジメチルホルムアミ
ド５ml及びヘキサメチルリン酸トリアミド６ml溶
液に、上記反応液を加え、４℃で20時間撹拌す
る。さらにＺ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocをアジド化したものの116mgを加え、
28時間攪拌する。ジメチルホルムアミドを留去
し、残渣をブタノールで抽出する。抽出液を水洗
し、ブタノールを留去し、残渣に石油エーテルを
加えて結晶化し、析出結晶を取し、メタノール
―酢酸エチルで再沈殿させる。 得られたＺ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―
Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHを
メタノール30mlと10％酢酸30mlに溶かし、パラジ
ウムで接触還元する。触媒を去し、溶媒を留去
して、得られた残渣をセフアデツクスＧ―25次い
でLH―20（溶出液1/1000夫々Ｎ塩酸）で精製し
て58mgのＨ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr
―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala
―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHを得る。
以下これを「ペプチドＣ」と呼ぶ。 R〓：0.01 R〓：0.37 元素分析値（C95H163N31O29・2CH3COOH・
7H2Oとして） 計算値（％） C48.54 H7.61 N17.72 実測値（％） C48.14 H7.50 N17.48 〔α〕25 D：−85.70（Ｃ＝0.23，1M酢酸） 製造例 ４ １(a) Ｈ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocの製造 Ｚ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc1.03ｇをメタノール50mlに溶かし、
パラジウムを触媒として接触還元して、Ｈ―Ser
―Asp―Leu―Pro―Gln―NHNHBocを得る。 R〓：0.06 １(b) Ｚ―Tyr―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocの製造 Ｚ―Tyr―ONHS0.79ｇを上記(a)で得られたＨ
―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―NHNHBocのジ
メチルホルムアミド20ml溶液に加え20時間室温で
放置する。ジメチルホルムアミドを留去後、残渣
を酢酸エチルで抽出する。抽出液を1N―クエン
酸及び飽和食塩水で順次洗浄して、酢酸エチルを
留去する。メタノール―酢酸エチルで再沈殿して
Ｚ―Try―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc588mgを得る。 R〓：0.51 R〓：0.69 元素分析値（C52H69N9O15として） 計算値（％） C58.91 H6.56 N11.89 実測値（％） C58.53 H6.22 N12.28 ２ Ｈ―Try―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg
―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―
OHの製造 Ｚ―Tyr―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc44mgをジメチルホルムアミド３ml及
び6N―塩酸／ジオキサン0.0225mlに溶解し、−15
℃に冷却後亜硝酸イソアミル0.0060mlを加え、５
分間撹拌する。次いでトリエチルアミン0.0252ml
を加え中和する。 ペプチドＢ即ちＨ―Thr―His―Ser―Leu―
Gly―Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―
Leu―Ala―Gln―OH、25mgのジメチルホルムア
ミド５ml及びヘキサメチルリン酸トリアミド２ml
溶液に、上記反応液を加え、４℃で20時間撹拌す
る。さらにこれにＺ―Try―Ser―Asp―Leu―
Pro―Gln―NHNHBoc44mgをアジド化したもの
を加え、24時時間撹拌する。溶媒を留去して、残
渣をブタノール―水で抽出し、エーテルを加え、
析出する結晶を取する。 得られたＺ―Tyr―Ser―Asp―Leu―Pro―
Gln―Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―
Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―
OHをメタノール30mlに溶かし、パラジウムを触
媒として接触還元する。触媒を去、メタノール
を留去して得られた残渣をセフアデツクスＧ―25
（溶出液50％酢酸）続いてLH―20（溶出液1/1000
Ｎ塩酸）で精製して、Ｈ―Tyr―Ser―Asp―Leu
―Pro―Gln―Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn
―rg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―
Gln―OH18mgを得る。以下これを「ペプチドＤ」
と呼ぶ。 R〓：0.01 R〓：0.38 元素分析値（C104H169N32O31・2CH3COOH・
5H2Oとして） 計算値（％） C50.40 H7.32 N17.41 実測値（％） C50.72 H7.67 N17.03 〔α〕25 D：−77.88（Ｃ＝0.22，1M塩酸） ＜抗原の製造＞ 製造例 １ ペプチドの合成製造例１で得たペプチドＡの５
mg及び牛血清アルブミン（以下「BSA」と略記
する）の15mgを酢酸アンモニウム緩衝液（0.1モ
ル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液に0.1モルの
グルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、室温で
５時間撹拌する。その後反応混合物を48時間、４
℃で水１で透析する。透析中５回水を交換す
る。その後、ペプチド―蛋白質複合体を含有する
溶液を凍結乾燥してヒトリムホブラストイドイン
ターフエロン抗原（以下「抗原」と呼ぶ）18mg
を得る。 この抗原は、BSA1モルに対してペプチドＡ
が平均12モル結合したものである。 製造例 ２ ペプチド合成製造例２で得たペプチドＢの５mg
及びBSAの20mgを酢酸アンモニウム緩衝液（0.1
モル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液に0.1モル
のグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、室温
で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時間、
４℃で水１で透析する。透析中５回水を交換す
る。その後、ペプチド―蛋白質複合体を含む溶液
を凍結乾燥してヒトリムホブラストイドインター
フエロン抗原（以下「抗原」と呼ぶ）23mgを得
る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＢが平均９モル結合したものである。 製造例 ３ ペプチド合成製造例３で得たペプチドＣの4.5
mg及びBSAの25mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液1.0mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時
間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を交
換する。その後、ペプチド―蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾してヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗原（以下「抗原」と呼ぶ））27mg
を得る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＣが平均10モル結合したものである。 製造例 ４ ペプチド合成製造例４で得たペプチドＤの５mg
及びBSAの25mgを酢酸アンモニウム緩衝液（0.1
モル、PH7.0）２mlに溶かす。この溶液に0.1モル
のグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、室温
で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時間、
４℃で水１で透析する。透析中５回水を交換す
る。その後、ペプチド―蛋白質複合体を含む溶液
を凍結乾燥してヒトリムホブラストイドインター
フエロン抗原（以下「抗原」と呼ぶ）28mgを得
る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＤが平均９モル結合したものである。 製造例 ５ ペプチド合成製造例３で得たペプチドＣの4.5
mg及びBSA25mgを水４mlに溶解する。この溶液
にジシクロヘキシルカーボジイミド（DCC）200
mgを加え、室温で５時間撹拌する。次に反応混合
物を水２用い４℃にて48時間要して透析する。
透析中５回水を交換する。その後ペプチド―蛋白
質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトリムホブ
ラストイドインターフエロン抗原（以下「抗原
」と呼ぶ）27.5mgを得る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＣが平均12モル結合したものである。 製造例 ６ ペプチド合成製造例４で得たペプチドＤの4.5
mg及びBSA25mgを水４mlに溶解する。この溶液
にジシクロヘキシルカーボジイミド（DCC）200
mgを加え、室温で５時間撹拌する。次に反応混合
物を水２用い４℃にて48時間要して透析する。
透析中５回水を交換する。その後ペプチド―蛋白
質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトリムホブ
ラストイドインターフエロン抗原（以下「抗原
」と呼ぶ）29mgを得る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＤが平均９モル結合したものである。 ＜抗体の製造＞ 製造例 １ 抗原の製造例１で得た抗原の100μｇを1.5ml
の生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ２ 抗原の製造例２で得た抗原の20μｇを1.5mlの
生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、７羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ３ 抗原の製造例３で得た抗原の20μｇを1.5mlの
生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、７羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ４ 抗原の製造例３で得た抗原の100μｇを1.5ml
の生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ５ 抗原の製造例４で得た抗原の20μｇを1.5mlの
生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、７羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ６ 抗原の製造例４で得た抗原の100μｇを1.5ml
の生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ７ 抗原の製造例５で得た抗原の20μｇを用い上
記製造例３と同様にして、ヒトリムホブラストイ
ドインターフエロン抗体（以下「抗体」と呼
ぶ）を得る。 製造例 ８ 抗原の製造例５で得た抗原の100μｇを用い、
上記製造例４と同様にして、ヒトリムホブラスト
イドインターフエロン抗体（以下「抗体」と呼
ぶ）を得る。 製造例 ９ 抗原の製造例６で得た抗原の20μｇを用い、
上記製造例３と同様にして、ヒトリムホブラスト
イドインターフエロン抗体（以下「抗体」と呼
ぶ）を得る。 製造例 10 抗原の製造例６で得た抗原の100μｇを用い、
上記製造例４と同様にして、３羽の兎を免疫化せ
しめてのち試験物から採血し、遠心分離して抗血
清を採取し、本発明のヒトリムホブラストイドイ
ンターフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を
得る。 Γ 標識ペプチドの製造 Ｈ―Tyr―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr
―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala
―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH即ちペ
プチドＤをクロラミンＴを用いる方法で以下の通
り標識化する。 即ち上記ペプチド5μｇの0.5モルのリン酸塩緩
衝液（PH7.0）20μにNa〔125I〕（carrier free N.
E.N.）１ミリキユーリーの0.5モルリン酸塩緩衝
液を加え、次にクロラミンT70mg／mlの0.5モル
リン酸塩緩衝液20μを加える。室温で30秒間撹
拌して60mg／mlのメタ重亜硫酸ナトリウム
（Na2S2O5）の0.5Mリン酸塩緩衝液50μを加え
ることで反応を終わらせる。次いで反応液に１％
の冷沃化ナトリウム水溶液100μを加え、反応
混合物をセフアデツクスＧ―25のカラム（1.0×
30cm）にかける（溶出液0.25％BSA、10mM
EDTA及び0.02％NaN3を含む0.05モルリン酸塩
緩衝液、PH7.4）。第13及び14フラクシヨンが125I
で標識された上記ペプチドである。 Γ 力価の測定 上記で得られる抗体の力価を次に通り測定す
る。即ち抗体をそれぞれ生理食塩水で10，102，
103，104，105…倍に希釈（イニシヤル）し、こ
れらの夫々100μに、I125標識ペプチド（上記で
得られる標識ペプチドを約9500cpmになるように
希釈したもの）0.1ml及び0.05モルリン酸塩緩衝
液（PH＝7.4）〔0.25％BSA、10mM EDTA及び
0.02％NaN3を含む〕0.2mlを加え、４℃で24時間
インキユーベートし、生成した抗体とI125標識抗
原との結合体を、デキストラン―活性炭法及び遠
心分離法（４℃、30分間、3000rpm）により未反
応（結合しない）I125標識ペプチドから分離し、
その放射線をカウントし、各希釈濃度における抗
体のI125標識ペプチドとの結合率（％）を測定す
る。縦軸に抗体のI125標識ペプチドとの結合率
（％）及び横軸に抗体の希釈倍率（イニシヤル濃
度）をとり、各々の濃度において結合率をプロツ
トする。結合率が50％となる抗体の希釈倍率即ち
抗体の力価を求める。結果を下記第１表に示す。 【表】 Γ 抗体のヒトリムホブラストイドインターフエ
ロン特異性試験 供試試料として各種濃度のヒトβ型インターフ
エロン（東京都総合臨床研究所製、比活性３×
106U／mgプロテイン）、ペプチドの合成製造例３
で得たペプチドＣ即ちヒトリムホブラストイドイ
ンターフエロンのペプチド鎖及びヒトα型インタ
ーフエロン〔林原研究所製、リムホブラストイド
インターフエロンLot.No.800928及びカンテル
（Cantel社製）〕を使用する。また標準希釈剤とし
て0.25％SA、5mM EDTA及び0.02％のNaN3を
含む0.05モルリン酸塩緩衝液（PH7.4）を使用す
る。 各々の試験管に、標準希釈剤0.2ml、供試試料
0.1ml、抗体の製造例４で得た抗体の0.1ml（力
価20万）及びI125標識ペプチド（上記で得られる
標識ペプチドを約2800cpmになるように希釈した
もの）0.1mlを入れ、４℃で72時間インキユベー
トした後、ノーマルブタ血清（normal porcine
serum）を0.1ml加え、次いでデキストランで被
膜した活性炭の懸濁液0.5mlを加え、４℃で30分
間放置し、次に４℃、3000rpmの条件下に30分間
遠心分離を行ない、抗体とI125標識ペプチドとの
結合体及び未反応（結合しない）I125標識ペプチ
ドを分離し、その放射線をカウントし、用いた抗
体の力価に相当する結合率（Bo）を100％とし
て、各供試試料の濃度及び希釈率における抗体と
I125標識ペプチドとの結合体(B)の百分率を求め
る。得られる結果を第１図に示す。第１図中縦軸
は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸は供試試料
（前記ペプチドの合成製造例３で得たペプチドＣ
即ちヒトリムホブラストイドのペプチド鎖、ヒト
β型インターフエロン及びヒトα型インターフエ
ロン）の濃度を示す。また該図において曲線イは
ペプチドＣ即ちヒトリムホブラストイドインター
フエロンのペプチド鎖を、曲線ロはヒトα型イン
ターフエロン（カンテル社製）を、曲線ハはヒト
α型インターフエロン（林原研究所製）を、また
曲線ニはヒトβ型インターフエロンを夫々示す。
第１図より抗体は、ヒトα型インターフエロン
に対する反応性とヒトβ型インターフエロンに対
する反応性において明確に区別される曲線を示
し、このことによりヒトβ型インターフエロンと
は3.0×106ユニツト／mlまで交叉しない特異性の
高い抗体であることが判る。また抗体，及び
についても同様の試験を行つた結果、抗体と
同様にヒトα型インターフエロンに対し特異性を
示し、ヒトβ型インターフエロンに対しては3.0
×106ユニツト／mlまで交叉しない特異性の高い
抗体であつた。 尚上記抗原の製造例１乃至６で得られる抗原
乃至におけるペプチドとBSAとの結合率は、
得られる各抗原を更にセフアデツクスＧ―50（溶
出液：生理食塩水、検出：OD280nm、流出速
度：３ml／時間、分取量：１mlずつ）でゲル過
した際、未反応BSA及びペプチド存在は認めら
れないことより、該ゲル過によつてBSAに結
合したペプチドのフラクシヨンと他の生成体（ペ
プチドの２量体）のフラクシヨンとを分離し、ペ
プチド２量体の標準濃度の検量線を作成して、上
記２量体の量を求め、これを出発原料として用い
たペプチドの量から差し引いた値がすべてBSA
に結合しているとして求めたものである。
ロン抗原の製造方法に関する。 本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護
基、活性基、その他に関し略号で表示する場合
IUPAC，IUBの規定或いは当該分野における慣
用記号に従うものとし、その例を次に挙げる。ま
たアミノ酸などに関し光学異性体がありうる場合
は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。 Leu：ロイシン Ile：イソロイシン Ala：アラニン Gln：グルタミン Thr：トレオニン His：ヒスチジン Ser：セリン Gly：グリシン Asn：アスパラギン Arg：アルギニン Asp：アスパラギン酸 Pro：プロリン Ｚ：カルボベンゾキシ基 Su：コハク酸イミド基 Tos：ｐ―トルエンスルホニル基 Boc：第３級ブトキシカルボニル基 インターフエロンは、生体の細胞がウイルス感
染を受けた時に産生する抗ウイルス性の糖蛋白質
乃至は蛋白質であり、その利用によつてウイルス
性疾患の予防乃至治療が可能であるとされ、近年
注目を集めつつある。現在解明されているヒトの
インターフエロンはα型インターフエロン
（Leucocytes Interferon、Lympho blastoid
Interferon）、β型インターフエロン
（Fibroblast Interferon）及びγ型インターフエ
ロン（Immune Interferon）に分類されるが、之
等のインターフエロンを単一な糖蛋白質乃至蛋白
質にまで精製する技術は未だ開発されていない。 本発明は、ヒトのα型インターフエロン特にリ
ムホブラストイドインターフエロンを単離精製す
る技術を提供するための新しい抗体、該抗体製造
のための抗原及び該抗原の製造に適したハプテン
並びにこれらを収得する技術を提供することを目
的とするものである。 本発明者らは、上記目的より鋭意研究を重ねた
結果、本発明者らが新たに合成した特定のヒトリ
ムホブラストイドインターフエロンのＮ―末端ペ
プチドを利用する時には、新規なヒトリムホブラ
ストイドインターフエロン抗原が製造でき、該抗
原の利用によればヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロンに対して特異性を有する新規な抗体が
製造でき、該抗体をアフイニテイークロマトグラ
フイーに利用することによつて、目的とするヒト
α型インターフエロンの精製が可能となることを
見い出した。本発明は上記の新しい知見に基づい
て完成されたものであり、本発明によれば、容易
に且つ大量に製造できる合成ペプチドから簡便な
操作でヒトリムホブラストイドインターフエロン
の精製に有用な、特異反応性を示す抗体が工業的
に有利に製造できるものであり、かくしてヒトリ
ムホブラストイドインターフエロンの精製技術を
確立するものである。 本発明に係る新しい合成ペプチドは、下記一般
式(1)で表わされる。 Ｒ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH (1) 〔式中Ｒは水素原子、Ｈ―Thr―His―Ser―
Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala基、Ｈ―Ser
―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr―His―Ser―Leu
―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala基、又はＨ―Tyr
―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr―His―Ser
―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala基を示す。〕 上記一般式(1)で表わされる新規な四種の合成ペ
プチドは、ヒトリンホブラストイドインターフエ
ロンのＮ末端ペプチド鎖に相当するペプチドであ
る。之等はペプチド合成に通常用いられる方法、
具体的には、「ザ ペプチド（The Peptides）」
第１巻（1966年）〔Schro¨der and Luhke著、
Academic Press，New York，U.S.A.〕あるい
は「ペプチド合成」〔泉屋ら著、丸善株式会社
（1975年）〕に記載される如き方法に従い、たとえ
ばアジド法、クロライド法、酸無水物法、混酸無
水物法、DCC法、活性エステル法（ｐ―ニトロ
フエニルエステル法、Ｎ―ヒドロキシコハク酸イ
ミドエステル法、シアノメチルエステル法等）、
ウツドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボジイミ
ダゾール法、酸化還元法、DCC／アデイテイブ
（HONB，HOBt，HOSu）法などにより製造で
きる。上記方法においては、固相合成法及び液相
合成法のいずれをも適用できるが、液相合成法が
好ましい。 通常一般式(1)のペプチドは、上記した一般のポ
リペプチドの合成法に従い、例えば末端アミノ酸
に順次１個づつアミノ酸を縮合させる所謂ステツ
プワイズ法によつて、又は数個のフラグメントに
分けてカツプリングさせていく方法によつて製造
される。より詳細には上記ペプチドは、その結合
の任意の位置で２分される２種のフラグメントの
一方に相当する反応性カルボキシル基を有する原
料と、他方のフラグメントに相当する反応性アミ
ノ基を有する原料をペプチド合成の常套手段で縮
合させ、生成する縮合物が保護基を有する場合、
その保護基を常套手段で脱離させることにより製
造し得る。尚一般式(1)のペプチドを製造する反応
工程でアスパラギン酸を用いる場合、これは通常
保護しておくのが望ましい場合が多く、最終工程
では、通常ペプチドの構成アミノ酸残基の少なく
とも一つが保護された保護ペプチドからすべての
保護基を脱離する。 また上記一般式(1)のペプチドの合成反応工程で
は、反応に関与すべきでない官能基は、通常の保
護基により保護され、反応終了後該保護基は脱離
される。更に反応に関与する官能基は通常活性化
される。之等各反応方法は公知であり、それに用
いられる試薬等も公知のものから適宜選択し得
る。 アミノ基の保護基としては、例えばカルボベン
ゾキシ、tert―ブチルオキシカルボニル、tert―
アミルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカ
ルボニル、ｐ―メトキシベンジルオキシカルボニ
ル、２―クロル―ベンジルオキシカルボニル、ア
ダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセ
チル、フタリル、ホルミル、ｏ―ニトロフエニル
スルフエニル、ジフエニルホスフイノチオイルな
どが挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は、例えばアルキルエステル（例メチル、エチ
ル、プロピル、ブチル、tert―ブチルなどのエス
テル基）、ベンジルエステル、ｐ―ニトロベンジ
ルエステル、ｐ―メトキシベンジルエステル、ｐ
―クロルベンジルエステル、ベンズヒドリルエス
テル、カルボベンゾキシヒドラジド、tert―ブチ
ルオキシカルボニルヒドラジド、トリチルヒドラ
ジド等が挙げられる。 アルギニンのグアニジノ基保護基としては、例
えばニトロ、トシル、ｐ―メトキシベンゼンスル
ホニル、カルボベンゾキシ、イソボルニルオキシ
カルボニル、アダマンチルオキシカルボニル等が
挙げられる。また、そのグアニジノ基は適当な酸
例えばベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン
酸、塩酸、硫酸などの塩の形で保護してもよい。 スレオニンの水酸基は、例えばエステル化また
はエーテル化によつて保護することができるが必
ずしも保護する必要はない。このエステル化に適
する基としては例えばアセチル等の低級アルカノ
イル、ベンゾイル等のアロイル、ベンゾイルオキ
シカルボニル、エチルオキシカルボニル等の炭酸
から誘導される基等が挙げられる。またエーテル
化に適する基としては、例えばベンジル、テトラ
ヒドロピラニル、tert―ブチル等である。 カルボキシル基の活性化されたものとしては、
例えば対応する酸クロライド、酸無水物又は混合
酸無水物、アジド、活性エステル（メチルアルコ
ール、エチルアルコール、ベンジルアルコール、
ペンタクロロフエノール、ｐ―ニトロフエノー
ル、Ｎ―ヒドロキシサクシンイミド、Ｎ―ヒドロ
キシベンズトリアゾール、Ｎ―ヒドロキシ―５―
ノルボルネン―２，３―ジカルボキシイミド等と
のエステル）等が挙げられる。尚ペプチド結合形
成反応は、縮合剤例えばジシクロヘキシルカルボ
ジイミド、カルボジイミダゾール等のカルボジイ
ミド試薬やテトラエチルピロホスフイト等の存在
下に実施し得る場合もある。 上記一般式(1)で表わされるペプチドは、Ｒで示
される基の種類に応じて、より具体的には以下に
示す（）〜（）の方法に従い製造される。 （） Ｒが水素原子を示す場合 Ａ―Ala―Ｂ(2) ↓Ｈ―Gln―OH(3) Ａ―Ala―Gln―OH(4) ↓ Ｈ―Ala―Gln―OH(5) ↓ Ａ―Leu―Ｂ(6) Ａ―Leu―Ala―Gln―OH(7) ↓ Ｈ―Leu―Ala―Gln―OH(8) ↓Ａ―Leu―Ｂ(6) Ａ―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(9) ↓ Ｈ―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(10) ↓Ａ―Ile―Ｂ(11) Ａ―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(12) ↓ Ｈ―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(13) ↓Ａ―Leu―Ｂ(6) Ａ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(14) ↓ Ｈ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH(15) 【表】 ↓
【表】 【表】 【表】 【表】 〔上記方法（）〜（）において、Ａはアミ
ノ基の保護基、Ｂは水酸基又はカルボキシル基の
活性基、Ｃはアルギニンのグアニジノ基保護基及
びＤはアスパラギン酸の保護基をそれぞれ示す。〕 上記においてＡとしては好ましくはBoc，Ｚ，
ｐ―メトキシベンジルオキシカルボニル基等を、
Ｂに示すカルボキシル基の活性基としては好まし
くはＮ―ヒドロキシサクシンイミド等の活性エス
テル、イソブチルオキシカルボニル等の混合酸無
水物残基、アジド等を、Ｃとしては好ましくはニ
トロ、トシル等を、またＤとしては好ましくはベ
ンジルオキシ基等を例示できる。 上記方法（）においてアミノ酸(2)とアミノ酸
(3)との反応は、溶媒の存在下に行なうことができ
る。溶媒としては、ペプチド縮合反応に使用し得
ることが知られている各種のもの例えば無水また
は含水のジメチルホルムアミド、ジメチルスルホ
キシド、ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、
ジクロルメタン、テトラヒドロフラン、酢酸エチ
ル、Ｎ―メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸
トリアミド或いはこれらの混合溶媒等を用い得
る。アミノ酸(3)とアミノ酸(2)との使用割合として
は特に限定されず広い範囲内で適宜選択すること
ができるが、通常前者に対して後者を等量〜５倍
量、好ましくは等量〜1.5倍量使用するのがよい。
反応温度はペプチド結合形成反応に使用され得る
ことが知られている範囲、通常約−40〜約60℃、
好ましくは約−20〜約40℃の範囲から適宜選択さ
れる。反応時間は一般に数分〜30時間程度であ
る。 方法（）におけるペプチド(5)とアミノ酸(6)と
の反応、ペプチド(8)とアミノ酸(6)との反応、ペプ
チド(10)とアミノ酸(11)との反応、及びペプチド(13)
とアミノ酸(6)との反応は上記アミノ酸(2)とアミノ
酸(3)との反応と同様にして行なうことができる。
また方法（）におけるアミノ酸(16)とアミノ酸
（１７）との反応、ペプチド(19)とアミノ酸(16)との反
応、ペプチド(21)とアミノ酸(22)との反応、ペプ
チド(24)とペプチド(15)との反応、ペプチド(26)と
ペプチド(36)との反応、アミノ酸(6)とアミノ酸(2
９）との反応、ペプチド(31)とアミノ酸(32)との反
応及びペプチド(34)とペプチド(35)との反応も同
様にして実施できる。更に方法（）におけるア
ミノ酸(37)とアミノ酸(38)との反応、ペプチド(40)
とアミノ酸(6)との反応、ペプチド(42)とアミノ酸
（４３）との反応、ペプチド(46)とアミノ酸(32)との反
応及びペプチド(47)とペプチド(28)との反応、並
びに方法（）におけるペプチド(50)とアミノ酸
（５１）との反応及びペプチド(52)とペプチド(28)との
反応も亦上記と同様にして行ない得る。 上記各反応により得られるペプチド(4)、(7)、
(9)、(12)、(14)、(18)、(20)、(25)、(27)、(30)、(33
)、
(39)、(41)、(45)、(47)、(48)及び(53)の有する保護
基Ａの離脱反応は、常法により行なわれる。該方
法としては、例えば還元的方法（例パラジウム、
パラジウム黒等の触媒を用いる水素添加、液体ア
ンモニア中金属ナトリウムによる還元）、アシド
リシス（例トリフルオロ酢酸、弗化水素、メタン
スルホン酸、臭化水素酸等の強酸によるアシドリ
シス）等が挙げられる。 上記触媒を用いる水素添加は、例えば水素圧１
気圧、０〜40℃にて行なうことができる。触媒の
使用量は通常100mg〜１ｇ程度でよく、一般に１
〜48時間程度で反応は終了する。また上記アシド
リシスは無溶媒下、通常０〜30℃程度、好ましく
は０〜20℃にて行なわれ、一般に15分〜１時間程
度で反応は終了する。酸の使用量としては原料化
合物に対し通常50〜10倍量程度とするのがよい。
また液体アンモニア中金属ナトリウムによる還元
において、金属ナトリウムは、反応溶液がパーマ
ネントブルーに30秒〜10分間程度呈色しているよ
うな量で用いられる。この還元は通常−40〜−70
℃程度にて行なわれる。 またペプチド(23)の保護基(C)及びペプチド(45)
の保護基(D)は、上記還元的方法によつて、同様に
脱保護することができる。 上記方法（）乃至（）に利用されるアミノ
酸(2)、(6)、(11)、(16)、(22)、(32)、(37)、(43)及び
（５１）は公知の市販品でよく、またペプチド(18)、
（２３）、(35)、(36)、(44)、(47)、及び(52)は公知の
市
販品又は混合酸無水物法、アジド化法等により得
られるものが利用できる。該混合酸無水物法は、
適当な溶媒中塩基性化合物の存在下、アルキルハ
ロカルボン酸を用いて行なわれる。使用されるア
ルキルハロカルボン酸としては例えばクロロ蟻酸
メチル、ブロモ蟻酸メチル、クロロ蟻酸エチル、
ブロモ蟻酸エチル、クロロ蟻酸イソブチル等が挙
げられる。また塩基性化合物としては例えばトリ
エチルアミン、トリメチルアミン、ピリジン、ジ
メチルアニリン、Ｎ―メチルモルホリン、１，５
―ジアザビシクロ〔４，３，０〕ノネン―５
（DBN）、１，５―ジアザビシクロ〔５，４，０〕
ウンデセン―５（DBU）、１，４―ジアザビシク
ロ〔２，２，２〕オクタン（DABCO）等の有機
塩基、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素
カリウム、炭酸水素ナトリウム等の無機塩基が挙
げられる。用いられる溶媒としては混合酸無水物
法に慣用の各種溶媒、具体的には塩化メチレン、
クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭
化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳
香族炭化水素類、ジエチルエーテル、テトラヒド
ロフラン、ジメトキシエタン等のエーテル類、酢
酸メチル、酢酸エチル等のエステル類、Ｎ，Ｎ―
ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、
ヘキサメチルリン酸トリアミド等の非プロトン性
極性溶媒などが挙げられる。該反応は−20〜100
℃好ましくは−20〜50℃において行なわれ、反応
時間は一般に５分〜10時間好ましくは５分〜２時
間である。 またアジド化法は、まず活性化されたカルボキ
シル基、例えばメチルアルコール、エチルアルコ
ール、ベンジルアルコール等のアルコールで活性
化されたカルボキシル基にヒドラジン水和物を適
当な溶媒中にて反応させることにより行なわれ
る。用いられる溶媒としては例えばジオキサン、
ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド又
はこれらの混合溶媒等を挙げることができる。ヒ
ドラジン水和物の使用量は、活性化されたカルボ
キシル基に対して通常５〜20倍モル量、好ましく
は５〜10倍モル量とするのがよい。該反応は通常
50℃以下、好ましくは−20〜30℃にて行なわれ
る。斯くして末端アミノ酸のカルボキシル基部分
がヒドラジンで置換された化合物（ヒドラジン誘
導体）を製造し得る。末端アミノ酸のカルボキシ
ル基部分がアジドで置換された化合物は、酸の存
在下適当な溶媒中上記で得られるヒドラジン誘導
体と亜硝酸化合物を反応させることにより製造さ
れる。酸としては通常塩酸が用いられる。溶媒と
しては例えばジオキサン、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシド又はこれらの混合溶媒
等を使用できる。また亜硝酸化合物としては例え
ば亜硝酸ナトリウム、亜硝酸イソアミル、塩化ニ
トロシル等を使用することができる。斯かる亜硝
酸化合物はヒドラジン誘導体に対して通常等モル
〜２倍モル量、好ましくは等モル〜1.5倍モル量
用いられる。該反応は通常−20〜０℃、好ましく
は−20〜−10℃にて行なわれ、一般に５〜10分程
度で反応は終了する。 上記のようにして製造された一般式(1)のペプチ
ドは反応混合物からペプチドの分離手段例えば抽
出、分配、カラムクロマトグラフイー等により単
離精製される。 かくして前記一般式(1)で表わされる合成ペプチ
ド即ちヒトリンホブラストイドインターフエロン
のＮ末端ペプチドを得る。 かくして得られる合成ペプチドは、これに
I125，I131等の放射性ヨードを導入することによ
り、ラジオイムのアツセイ法（RIA法）において
用いられる標識抗原の製造用原料である標識ペプ
チドとして利用できる。上記放射性ヨードの導入
は、通常のヨード化法、例えばクロラミンＴを用
いる酸化的ヨード化法〔W.M.Hunter and F.C.
Greenwood；Nature，194，P495（1962）、
Biochem.J.89，P114（1963）参照〕により行なわ
れる。例えば上記ヨード化法は、適当な溶媒例え
ば0.2Mリン酸緩衝液（PH＝7.4）等の溶媒中、ク
ロラミンＴの存在下室温付近にて10〜30秒程度で
行なわれる。用いられるペプチド、放射性ヨード
及びクロラミンＴの使用割合としては、例えばチ
ロシンに放射性ヨードを１個導入する場合には、
ペプチド中に含まれるチロシン分子１ナノモルに
対して放射性ヨードを１ミリキユーリー程度、ク
ロラミンＴを10〜100ナノモル程度用いるのがよ
く、またチロシンに放射性ヨードを２個導入する
場合には、ペプチド中に含まれるチロシン分子１
ナノモルに対して放射性ヨードを２ミリキユーリ
ー程度、クロラミンＴを10〜100ナノモル程度用
いるのがよい。斯くして製造される放射性ヨード
により標識化されたペプチドは通常の分離手段例
えば抽出、分配、カラムクロマトグラフイー、透
析等により単離精製される。このようにして得ら
れるペプチドは必要ならば凍結乾燥させて保存し
ておくこともできる。 また上記一般式(1)で表わされる合成ペプチド
は、ヒトリムホブラストイドインターフエロン抗
原の製造用ハプテンとして利用できる。 以下上記ヒトリムホブラストイドインターフエ
ロン抗原の製造方法につき詳述する。 ヒトリムホブラストイドインターフエロン抗原
は、上記一般式(1)で表わされる合成ペプチドの少
なくとも１種をハプテンとし、これをハプテン―
担体結合試薬の存在下に担体と反応させることに
より製造される。 上記方法においてハプテンに結合される担体と
しては、通常抗原の作成に当り慣用される高分子
の天然若しくは合成蛋白質を広く使用できる。該
担体としては、例えば馬血清アルブミン、牛血清
アルブミン、ウサギ血清アルブミン、人血清アル
ブミン、ヒツジ血清アルブミン等の動物の血清ア
ルブミン類、馬血清グロブリン、牛血清グロブリ
ン、ウサギ血清グロブリン、人血清グロブリン、
ヒツジ血清グロブリン等の動物の血清グロブリン
類、馬チログロブリン、牛チログロブリン、ウサ
ギチログロブリン、人チログロブリン、ヒツジチ
ログロブリン等の動物のチログロブリン類、馬ヘ
モグロビン、牛ヘモグロブリン、ウサギヘモグロ
ブリン、人ヘモグロブリン、ヒツジヘモグロブリ
ン等の動物のヘモグロブリン類、動物のヘモシア
ニン類、回虫より抽出された蛋白質（アスカーリ
ス抽出物、特開昭56−16414号参照）、ポリリジ
ン、ポリグルタミン酸、リジン―グルタミン酸共
重合体、リジン又はオルニチンを含む共重合体等
を挙げることができる。 アスカーリス抽出物につき以下に詳述する。 アスカーリス抽出物は、ブタ回虫
（Ascarissuum）の粉砕物より通常の蛋白抽出法
に従い抽出される。抽出溶媒としては例えば水、
生理食塩水、50％メタノールまたはエタノール水
溶液、中性付近の緩衝液等の公知の各種蛋白抽出
溶媒を使用でき、特に生理食塩水を用いるのが好
ましい。上記抽出物は、より具体的には、例えば
次の如くして製造される。即ちブタ回虫の内容物
を除去し、生理食塩水で洗浄後、抽出を容易とす
るため好ましくは細断し、該細断物を例えば生理
食塩水等の蛋白抽出溶媒中に添加し、ホモジネー
トしながら抽出する。この抽出は通常低温下にお
いて行なわれ、好ましくは約２〜10℃で有利に行
なわれる。かくして得られる抽出液を次いで遠心
分離し、上清を採取し透析後透析液を凍結乾燥す
るか又は更に上記透析液を再度遠心分離し、上清
を採取し、浮遊物を除去後凍結乾燥することによ
つて、目的とするアスカーリス抽出物が製造され
る。これは更に必要に応じて通常の蛋白精製手段
例えば透析法、ゲル過法、吸着法、クロマトグ
ラフ法等により精製後、本発明に利用することが
できる。また上記アスカーリス抽出物は、例えば
J.Immun.，111，260〜268（1973）、J.Immun.，
122，302〜308（1979）、J.Immun.，98，893〜900
（1967）及びAm.J.Physiol.，199，575〜578
（1960）に記載されたものまたはこれらを更に精
製したものであつてもよい。 ハプテン―担体結合試薬としては通常抗原の作
成に当り慣用されているものを広く使用でき、具
体的にはアミノ基とアミノ基とを架橋結合させ
る、例えばグリオキサール、マロンジアルデヒ
ド、グルタールアルデヒド、スクシンアルデヒ
ド、アジポアルデヒド等の脂肪族ジアルデヒド
類、チオール基とチオール基とを架橋結合させ
る、例えばＮ，N′―ｏ―フエニレンジマレイミ
ド、Ｎ，N′―ｍ―フエニレンジマレイミド等の
ジマレイミド化合物、アミノ基とチオール基とを
架橋結合させる、例えばメタマレイミドベンゾイ
ル―Ｎ―ヒドロキシスクシンイミドエステル、４
―（マレイミドメチル）―シクロヘキサン―１―
カルボキシル―N′―ヒドロキシスクシンイミド
エステル等のマレイミドカルボキシル―Ｎ―ヒド
ロキシスクシンイミドエステル化合物、アミノ基
とカルボキシル基とをアミド結合させる通常のペ
プチド結合形成反応に用いられる試薬、例えば
Ｎ，Ｎ―ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ―
エチル―N′―ジメチルアミノカルボジイミド、
１―エチル―３―ジイソプロピルアミノカルボジ
イミド、１―シクロヘキシル―３―（２―モルホ
リニル―４―エチル）カルボシイミド等のカルボ
ジイミド類等の脱水縮合剤を挙げることができる
が、さらにはｐ―ジアゾニウムフエニル酢酸等の
ジアゾニウムアリールカルボン酸類と通常のペプ
チド結合形成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤と
を組み合わせたものも使用可能である。 本発明抗原の製造反応は、例えば水溶液もしく
はPH７〜10の通常の緩衝液中好ましくはPH８〜９
の緩衝液中で、０〜40℃好ましくは室温付近で行
なわれる。該反応は通常約１〜24時間、好ましく
は３〜５時間で完結する。上記において用いられ
る代表的緩衝液としては、次のようなものを例示
できる。 0.2N水酸化ナトリウム―0.2Mホウ酸―0.2M塩
化カリウム緩衝液、 0.2M炭酸ナトリウム―0.2Mホウ酸、0.2M塩化
カリウム緩衝液、 0.05M四ホウ酸ナトリウム―0.2Mホウ酸―
0.05M塩化ナトリウム緩衝液、 0.1Mリン酸二水素カリウム―0.05M四ホウ酸
ナトリウム緩衝液 上記においてハプテン、ハプテン―担体結合試
薬及び担体の使用割合は、適宜に決定できるが、
通常ハプテンに対して担体を２〜６倍重量好まし
くは３〜５倍重量、及びハプテン―担体結合試薬
を５〜10倍モル程度用いるのがよい。上記反応に
よりハプテン―担体結合試薬を仲介させて担体と
ハプテンとが結合したペプチド―担体複合体から
成るヒトリムホブラストイドインターフエロン抗
原が収得される。 反応終了後得られる抗原は常法に従い、例えば
透析法、ゲル過法、分別沈殿法等により容易に
単離精製できる。また該抗原は通常の凍結乾燥法
により保存できる。 かくして前記一般式(1)で表わされるヒトリンホ
ブラストイドインターフエロンのＮ末端ペプチド
の少なくとも１種と担体との複合体から成るヒト
リンホブラストイドインターフエロン抗原を得
る。該抗原は通常蛋白質１モルに対しペプチドが
平均５〜20モル結合したものであり、いずれも引
き続き再現性よく、ヒトリムホブラストイドイン
ターフエロンに対する特異性の高い抗体の作成を
可能とするものである。特に上記蛋白質に対する
ペプチドの結合モル比が１：８〜15のものは、特
異性が一層高く高力価、高感度の抗体を作成し得
るものであり好ましい。 上記で得られる抗原による抗体の作成は、以下
の如くして行なわれる。即ち上記抗原を哺乳動物
に投与し、生体内に産生される抗体を採取するこ
とにより行なわれる。 抗体の製造に供せられる哺乳動物としては、特
に制限はないが、通常兎やモルモツトを用いるの
が望ましい。抗体の産生に当つては、上記により
得られる抗原の所定量を生理食塩水で適当濃度に
希釈し、フロインドの補助液（Complete
Freund′s Adjuvant）と混合して懸濁液を調整
し、之を哺乳動物体に投与すればよい。例えば兎
に上記懸濁液を皮内注射（抗原の量として0.5〜
５mg／回）し、以後２週間毎に２〜10ケ月好まし
くは４〜６ケ月間投与し免疫化させればよい。抗
体の採取は、上記懸濁液の最終投与後抗体が多量
産出される時期、通常上記最終投与１〜２週間経
過後、免疫化された動物から採血し、之を遠心分
離後血清を分離採取することにより行なわれる。
殊に本発明方法によれば、用いる抗原の特殊性に
基づいて、ヒトリムホブラストイドインターフエ
ロンは対して非常に優れた特異性を有し、高力
価、高感度の抗体を収得できる利点がある。 かくして得られるヒトリンホブラストイドイン
ターフエロン抗体は、上記の通り殊に優れたヒト
リンホブラストイドインターフエロン特異性を有
するものであり、斯界で要望されているRIA法に
よるヒトリンホブラストイドインターフエロンの
定量を高精度をもつて可能とする有用なものであ
る。また該抗体は、これに酵素または螢光物質で
標識することによつてエンザイムイムノアツセイ
（EIA）法、フローレツセンスイムノアツセイ
（FIA）法等に使用できる。さらに該抗体は公知
の不溶化させる物質と反応させて不溶化抗体とす
ることもできる。 以下本発明を更に詳しく説明するため、本発明
ペプチド、これを利用した抗原及び該抗原からの
抗体の製造例を挙げるが、本発明はこれに限定さ
れるものではない。 尚各製造例におけるR値はシリカゲル上の薄
層クロマトグラフイーにて下記混合溶媒を用いて
測定したものである。 R〓…１―ブタノール―酢酸―水（４：１：
５） R〓…１―ブタノール―ピリジン―酢酸―水 （15：10：３：12） ＜ペプチドの合成＞ 製造例 １ １ Ｚ―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Ala―OSu4.80ｇのテトラヒドロフラン60
ml溶液にＨ―Gln―OH2.19ｇの水40ml溶液とト
リエチルアミン2.10mlを加え、室温で20時間撹拌
する。テトラヒドロフラン及び水を留去し、残渣
をｎ―ブタノールで抽出する。抽出液を２％酢酸
で洗浄し、ブタノールを留去する。析出物質を
取し、メタノール―酢酸エチルで再沈殿して、Ｚ
―Ala―Gln―OH3.87ｇを得る。 R〓：0.41 R〓：0.56 元素分析値（C16H21N3O6として） 計算値（％） C54.69 H6.02 N11.96 実測値（％） C54.50 H6.31 N11.62 ２(a) Ｈ―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Ala―Gln―OH3.50ｇを水50ml及びメタノ
ール30mlに溶かし、パラジウムを触媒として接触
還元して、Ｈ―Ala―Gln―OHを得る。 R〓：0.04 ２(b) Ｚ―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Leu―OSu3.97ｇ、上記(a)で得たＨ―Ala
―Gln―OH及びトリエチルアミン1.39mlをジメ
チルホルムアミド50mlに溶解し、室温で20時間撹
拌する。ジメチルホルムアミドを留去し、残渣を
酢酸エチルで抽出する。抽出液を1N―クエン酸
で３回及び水で５回洗浄する。酢酸エチルを留去
し、残渣にエーテルを加え、析出する沈殿物を
取乾燥し、メタノール―酢酸エチルより再沈殿さ
せて、Ｚ―Leu―Ala―Gln―OH2.15ｇを得る。 R〓：0.49 R〓：0.62 元素分析値（C22H32N4O7として） 計算値（％） C56.88 H6.94 N12.06 実測値（％） C56.41 H6.80 N12.18 ３(a) Ｈ―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Leu―Ala―Gln―OH2.10ｇに25％臭化水
素含有酢酸溶液20ml加え、室温で１時間放置す
る。反応液に乾燥エーテルを加えて、Ｈ―Leu―
Ala―Gln―OHを得る。 R〓：0.10 ３(b) Ｈ―Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Leu―OSu1.96ｇ、トリエチルアミン0.63
ml及びＨ―Leu―Ala―Gln―OHをジメチルホル
ムアミド50mlに溶かし、室温で20時間撹拌する。
ジメチルホルムアミドを留去して、残渣に1Mク
エン酸を加え、析出する結晶を取し結晶を液
が中性になるまで水洗し乾燥する。メタノール―
酢酸エチルで洗浄して、Ｚ―Leu―Leu―Ala―
Gln―OH1.63ｇを得る。 R〓：0.58 R〓：0.64 元素分析値（C28H43N5O8として） 計算値（％） C58.22 H7.50 N12.12 実測値（％） C57.85 H7.90 N11.96 ４(a) Ｈ―Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Leu―Leu―Ala―Gln―OH1.50ｇに25％
臭化水素含有酢酸溶液20mlを加え、室温で１時間
撹拌する。反応液に乾燥エーテルを加えて、析出
する固体を取して、Ｈ―Leu―Leu―Ala―Gln
―OHを得る。 R〓：0.19 ４(b) Ｚ―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製
造 Ｚ―Ile―OSu1.41ｇ、上記で得られたＨ―Leu
―Leu―Ala―Gln―OH及びトリエチルアミン
0.36mlをジメチルホルムアミド50mlに溶かし、室
温で20時間撹拌する。ジメチルホルムアミドを留
去して、残渣に1Nクエン酸を加え、析出する結
晶を取し、熱メタノールで洗浄して、Ｚ―Ile
―Leu―Leu―Ala―Gln―OH1.17ｇを得る。 R〓：0.61 R〓：0.71 元素分析値（C34H54N6O9として） 計算値（％） C59.11 H7.87 N12.16 実測値（％） C59.23 H7.80 N12.02 ５(a) Ｈ―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製
造 Ｚ―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH1.10ｇに
25％臭化水素含有酢酸15mlを加え、室温で１時間
撹拌する。反応液に乾燥エーテルを加えて、析出
する固体を取してＨ―Ile―Leu―Leu―Ala―
Gln―OHを得る。 R〓：0.25 ５(b) Ｚ―Leu―Ile―Leu―LeuAla―Gln―OH
の製造 Ｚ―Leu―OSu0.69ｇ、上記で得られたＨ―Ile
―Leu―Leu―Ala―Gln―OH及びトリエチルア
ミン0.22mlをジメチルホルムアミド50mlにとか
し、室温で20時間撹拌する。ジメチルホルムアミ
ドを留去して、残渣に1Nコハク酸を加え、析出
物質を取し、液が中性になるまで水で洗浄乾
燥する。熱メタノールで洗浄して、Ｚ―Leu―Ile
―Leu―Leu―Ala―Gln―OH1.10ｇを得る。 R〓：0.58 R〓：0.71 元素分析値（C40H65N7O10として） 計算値（％） C59.75 H8.15 N12.19 実測値（％） C59.60 H8.02 N11.92 ６ Ｈ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH
の製造 Ｚ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―
OH0.50ｇをメタノール50ml及び10％酢酸10mlに
溶かし、パラジウムを触媒として接触還元して、
Ｈ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHを得
る。以下これを「ペプチドＡ」と呼ぶ。 R〓：0.23 R〓：0.61 元素分析値（C32H59N7O8・2H2Oとして） 計算値（％） C54.45 H8.99 N13.89 実測値（％） C54.30 H8.81 N13.98 製造例 ２ １ Boc―Ala―NHNHZの製造 Boc―Ala―OH4.99ｇ、NH2―NH―Z4.36ｇ
及びジシクロヘキシルカルボジイミド5.44ｇをテ
トラヒドロフラン150mlに溶解し、４℃で20時間
撹拌する。析出する固体を去し、液を留去
し、エーテルを加えて沈殿を取し、エーテルと
石油エーテルから再沈殿させて、Boc―Ala―
NHNHZ7.03ｇを得る。 R〓：0.79 R〓：0.81 元素分析値（C16H23N3O5として） 計算値（％） C59.96 H6.87 N12.45 実測値（％） C56.81 H6.49 N12.34 ２(a) Ｈ―Ala―NHNHZの製造 Boc―Ala―NHNHZ3.00ｇをトリフルオロ酢
酸10mlに溶解、15分間室温放置後、トリフルオロ
酢酸を留去し乾燥してＨ―Ala―NHNHZを得
る。 R〓：0.51 ２(b) Boc―Arg（NO2）―Ala―NHNHZの製造 Boc―Arg（NO2）―OH2.84ｇをテトラヒドロ
フラン40mlおよびＮ―メチルモルホリン0.91ml溶
液に解かし、−15℃に冷却後イソブチルクロロホ
ルメイト1.17mlを加え30秒間激しく撹拌する。こ
れにＨ―Ala―NHNHZのジメチルホルムアミド
20ml溶液及びトリエチルアミン1.24ml溶液を加
え、１分間撹拌する。０℃で５分間次いで40℃２
分間温めた後、室温で15分間撹拌する。テトラヒ
ドロフラン及びジメチルホルムアミドを留去後、
酢酸エチルで抽出する。抽出液を1Nクエン酸つ
づいて飽和炭酸水素ナトリウム次いで飽和食塩水
で洗浄後、酢酸エチルを留去、酢酸エチル―エー
テルで再沈殿してBoc―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZ3.70ｇを得る。 R〓：0.68 R〓：0.79 元素分析値（C22H34N8O8として） 計算値（％） C49.06 H6.36 N20.80 実測値（％） C49.40 H6.72 N20.43 ３(a) Ｈ―Arg（NO2）―Ala―NHNHZの製造 Boc―Arg（NO2）―Ala―NHNHZ3.67ｇをト
リフルオロ酢酸15mlに溶解し、15分間室温に放置
後、乾燥エーテルを加え結晶化し、結晶を取し
てＨ―Arg（NO2）―Ala―NHNHZを得る。 R〓：0.20 ３(b) Boc―Arg（NO2）―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZの製造 Boc―Arg（NO2）―OH2.17ｇをテトラヒドロ
フラン50mlとＮ―メチルモルホリン0.69ml溶液に
溶かし、−15℃に冷却後イソブチルクロロホルメ
イト0.89mlを加え30秒間激しく撹拌する。これに
上記(a)で得られたＨ―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZのジメチルホルムアミド30mlおよびト
リエチルアミン0.95ml溶液を加え１分間撹拌す
る。０℃で５分間、次いで40℃で２分間温めた
後、室温で15分間撹拌する、テトラヒドロフラン
及びジメチルホルムアミドを留去し、残渣を酢酸
エチルで抽出する。抽出液を1N―クエン酸及び
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で順次洗浄後、酢
酸エチルを留去する。酢酸エチル―エーテルによ
り再沈殿させてBoc―Arg（NO2）―Arg（NO2）
―Ala―NHNHZ3.70ｇを得る。 R〓：0.58 R〓：0.75 元素分析値（C28H45N13O11として） 計算値（％） C45.46 H6.13 N24.61 実測値（％） C45.13 H5.71 N24.51 ４(a) Ｈ―Arg（NO2）―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZの製造 Boc―Arg（NO2）―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZ3.00ｇをトリフルオロ酢酸20mlに溶解
し、15分間室温で放置後、乾燥エーテルを加えて
結晶化する。結晶を取して、Ｈ―Arg（NO2）
―Arg（NO2）―Ala―NHNHZを得る。 R〓：0.11 ４(b) Boc―Asn―Arg（NO2）―Arg（NO2）―
Ala―NHNHZの製造 Ｈ―Arg（NO2）―Arg（NO2）―Ala―
NHNHZをDMF50mlにとかし、それにトリエチ
ルアミン0.56mlとBoc―Asn―ONHS2.17ｇとを
加え、20時間室温で放置する。ジメチルホルムア
ミドを留去し、残渣をブタノールで抽出する。抽
出液を２％酢酸で洗浄後、エーテルを加えて結晶
化し、結晶を取して、メタノール―酢酸より再
沈殿してBoc―Asn―Arg（NO2）―Arg（NO2）
―Ala―NHNHZ2.64ｇを得る。 R〓：0.40 R〓：0.72 元素分析値（C32H51N15O13として） 計算値（％） C45.01 H6.02 N24.60 実測値（％） C44.80 H5.85 N24.12 ４(c) Boc―Asn―Arg―Arg―Ala―NHNH2の
製造 Boc―Asn―Arg（NO2）―Arg（NO2）―Ala
―NHNHZ2.50ｇをメタノール30mlと30％酢酸と
の混液に溶かし、パラジウムを触媒として接触還
元してBoc―Asn―Arg―Arg―Ala―
NHNH22.20ｇを得る。 R〓：0.06 R〓：0.40 元素分析値（C24H47N13O7・2CH3CO2H・H2O
として） 計算値（％） C43.80 H7.48 N23.71 実測値（％） C43.51 H7.62 N23.45 ５ Ｚ―Leu―Gly―OC2H5の製造 Ｎ―メチルモルホリン1.86mlをテトラヒドロフ
ラン60mlにとかし、それにＺ―Leu―OH4.85ｇ
を加える。−15℃に冷却して、イソブチルクロロ
ホルメイト2.41mlを加ええ30秒間激しく撹拌す
る。これにＨ―Gly―OC2H5・HCl2.54ｇのジメ
チルホルムアミド40ml溶液及びトリエチルアミン
2.56mlを加え、１分間撹拌する。０℃で５分間、
次いで40℃で２分間温めた後、室温で15分間撹拌
する。テトラヒドロフラン及びジメチルホルムア
ミドを留去し、残渣に1Mクエン酸を加え、析出
する結晶を取する。液が中性になるまで水洗
し、析出した結晶を取乾燥し、酢酸エチル―エ
ーテルで再沈殿してＺ―Leu―Gly―OC2H54.68
ｇを得る。 R〓：0.80 R〓：0.77 元素分析値（C18H26N2O5として） 計算値（％） C61.70 H7.48 N7.99 実測値（％） C61.51 H7.32 N7.80 ６(a) Ｈ―Leu―Gly―OC2H5の製造 Ｚ―Leu―Gly―OC2H53.12ｇをメタノール50
mlと1N塩酸8.90mlとに溶かし、パラジウムを触
媒として接触還元して、Ｈ―Leu―Gly―OC2H5
を得る。 R〓：0.41 ６(b) Ｚ―Ser―Leu―Gly―OC2H5の製造 Ｚ―Ser―NHNH22.48ｇをジメチルホルムア
ミド20ml及び6N塩酸／ジオキサン4.89mlに溶解
し、−15℃に冷却後、亜硝酸イソアミル1.31mlを
加え、５分間撹拌する。次いでトリエチルアミン
4.11mlを加えて中和する。上記(a)で得られたＨ―
Leu―Gly―OC2H5・1HClとトリエチルアミン
1.24mlのジメチルホルムアミド10ml溶液に、上記
の反応液を加え、４℃で20時間撹拌する。ジメチ
ルホルムアミドを留去後、残留物を酢酸エチルで
抽出し、抽出液を1N―クエン酸及び飽和食塩水
で順次洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。酢
酸エチルを留去後、酢酸エチルより再沈殿してＺ
―Ser―Leu―Gly―OC2H52.64ｇを得る。 R〓：0.78 R〓：0.85 元素分析値（C21H31N3O7として） 計算値（％） C57.65 H7.14 N9.60 実測値（％） C57.60 H6.88 N9.63 ７(a) Ｈ―Ser―Leu―Gly―OC2H5の製造 Ｚ―Ser―Leu―Gly―OC2H52.50ｇを10％酢酸
10ml及びメタノール50mlに溶かし、パラジウムを
触媒として接触還元して、Ｈ―Ser―Leu―Gly―
OC2H5を得る。 R〓：0.31 ７(b) Ｚ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―OC2H5
の製造 Ｚ―Thr―His―NHNH22.54ｇをジメチルホ
ルムアミド20ml及び6N―塩酸／ジオキサン4.19
mlに溶解し、−15℃に冷却後、亜硝酸イソアミル
0.84mlを加え、５分間撹拌する。次いでトリエチ
ルアミン3.51mlを加え中和する。上記(a)で得られ
たＨ―Ser―Leu―Gly―OC2H5とトリエチルア
ミン0.79mlのジメチルホルムアミド20ml溶液に、
上記の反応液を加え、４℃で20時間撹拌する。ジ
メチルホルムアミドを留去後、残渣をブタノール
で抽出し、抽出液を水洗する。溶媒を留去して、
メタノール―酢酸エチルで再結晶して、Ｚ―Thr
―His―Ser―Leu―Gly―OC2H54.31ｇを得る。 R〓：0.35 R〓：0.71 元素分析値（C31H45N7O3・H2oとして） 計算値（％） C64.00 H8.14 N16.85 実測値（％） C64.48 H8.10 N16.54 ８(a) Ｚ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―
NHNH2の製造 Ｚ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―OC2H54.30
ｇをメタノール20mlに溶かし、ヒドラジン・１水
和物3.18mlを加え、室温で20時間放置する。反応
液にエーテルを加えて析出する結晶を取し、乾
燥する。熱メタノールで洗浄してＺ―Thr―His
―Ser―Leu―Gly―NHNH22.55ｇを得る。 R〓：0.17 R〓：0.57 元素分析値（C29H43N9O9として） 計算値（％） C52.64 H6.55 N19.05 実測値（％） C52.55 H6.44 N19.09 ８(b) Ｈ―Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―
Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Boc―Asn―Arg―Arg―Ala―NHNH20.78ｇ
をジメチルホルムアミド８ml及び6N―塩酸／ジ
オキサン1.03mlに溶解し、−15℃に冷却後、亜硝
酸イソアミル0.16mlを加え、５分間撹拌する。次
いでトリエチルアミン0.87mlを加え中和する。ペ
プチドＡ即ちＨ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―
Gln―OH、トリエチルアミン0.87ml、ジメチル
ホルムアミド20ml及びヘキサメチルリン酸トリア
ミド10mlの混合液に、上記の反応液を加え、４℃
で24時間撹拌し、さらにBoc―Asn―Arg―Arg
―Ala―NHNH20.39ｇをアジドに変換したもの
を加えて48時間撹拌する。ジメチルホルムアミド
を留去し、残渣をブタノールで抽出する。抽出液
を水洗して、ブタノールを留去する。残渣にエー
テルを加えて結晶化させ、析出結晶を取する。
水洗し、５酸化リンで乾燥する。得られたBoc―
Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―
Ala―Gln―OHをトリフルオロ酢酸３mlに溶解
し、15分間室温で放置後、乾燥エーテルを加えて
沈殿を析出させ、これを取乾燥後セフアデツク
スＧ―25（溶出液50％酢酸）で精製して、Ｈ―
Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―
Ala―Gln―OH120mgを得る。 R〓：0.01 R〓：0.35 元素分析値（C51H94N18O13・2CH3COOH・
5H2Oとして） 計算値（％） C47.95 H8.19 N18.30 実測値（％） C47.66 H8.41 N18.62 〔α〕25 D：−185.44（Ｃ＝0.57，1M酢酸） ９ Ｈ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn―
Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala
―Gln―OHの製造 Ｚ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―NHNH2125
mgをジメチルホルムアミド10ml及び6N―塩酸／
ジオキサン0.125mlに溶かし、−15℃に冷却後亜硝
酸イソアミル0.025mlを加え５分間撹拌する。次
いでトリエチルアミン0.105mlを加え中和する。
Ｈ―Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―
Leu―Ala―Gln―OH110mgとトリエチルアミン
0.013mlとのジメチルホルムアミド10ml及びヘキ
サメチルリン酸トリアミド６mlの溶液に、上記反
応液を加え、４℃で24時間撹拌する。さらにＺ―
Thr―His―Ser―Leu―Gly―NHNH2125mgのア
ジド化したものを加え48時間撹拌する。ジメチル
ホルムアミドを留去し、残渣をブタノールで抽出
する。抽出液を水洗する。ブタノールを留去し、
メタノール―酢酸エチルで再沈殿する。得られた
Ｚ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―
Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―
OHをメタノール50ml及び10％酢酸10mlに溶か
し、パラジウムを触媒として接触還元する。触媒
を去つづいてメタノールを留去し、得られた残
渣をセフアデツクスＧ―25（溶出液50％酢酸）で
精製して、Ｈ―Thr―His―Ser―Leu―Gly―
Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―
Ala―Gln―OH125mgを得る。以下これを「ペプ
チドＢ」と呼ぶ。 R〓：0.01 R〓：0.38 元素分析値（C72H127N25O20・2CH3COOH・
4H2Oとして） 計算値（％） C49.21 H7.77 N18.87 実測値（％） C49.60 H7.92 N18.54 〔α〕25 D：−66.76（Ｃ＝0.42，1M酢酸） 製造例 ３ １(a) Ｈ―Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Gln―NHNNHBoc7.00ｇをメタノール50
mlに溶かし、パラジウムを触媒として接触還元し
てＨ―Gln―NHNHBocを得る。 R〓：0.37 １(b) Ｚ―Pro―Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Pro―OH4.41ｇをテトラヒドロフラワン
50ml及びＮ―メチルモルホリン1.80mlに溶かし、
−15℃に冷却後、イソブチルクロロホルメイト
2.34mlを加え、30秒間激しく撹拌する。これに上
記(a)で得られたＨ―Gln―NHNHBocのジメチル
ホルムアミド30ml溶液を加え、１分間撹拌する。
０℃で５分間、次いで40℃で２分間温めた後、室
温で15分間撹拌する。テトラヒドロフラン及びジ
メチルホルムアミドを留去して、残渣を少量のブ
タノール含有酢酸エチルで抽出する。抽出液を
1N―クエン酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
及び飽和食塩水で順次洗浄後熱酢酸エチルで洗浄
して、Ｚ―Pro―Gln―NHNHBoc5.67ｇを得る。 R〓：0.60 R〓：0.76 元素分析値（C23H33N5O7として） 計算値（％） C56.20 H6.77 N14.25 実測値（％） C55.97 H6.68 N14.15 ２(a) Ｈ―Pro―Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Pro―Gln―NHNHBoc5.50ｇをメタノー
ル50mlに溶かし、パラジウムを触媒として接触還
元して、Ｈ―Pro―Gln―NHNHBocを得る。 R〓：0.09 ２(b) Ｚ―Leu―Pro―Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Leu―ONHS4.05ｇを上記(a)で得たＨ―
Pro―Gln―NHNHBocのジメチルホルムアミド
100ml及びトリエチルアミン1.56ml溶液に加え、
20時間室温にて放置する。ジメチルホルムアミド
を留去後、残渣を酢酸エチルで抽出する。抽出液
を1N―クエン酸及び飽和食塩水で順次洗浄する。
酢酸エチル―エーテルで再沈殿させてＺ―Leu―
Pro―Gln―NHNHBoc3.72ｇを得る。 R〓：0.68 R〓：0.80 元素分析値（C29H44N6O8として） 計算値（％） C57.60 H7.33 N13.90 実測値（％） C57.21 H7.08 N13.58 ３(a) Ｈ―Leu―Pro―Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Leu―Pro―Gln―NHNHBoc3.50ｇをメ
タノール50mlに溶かし、パラジウムを触媒として
接触還元してＨ―Leu―Pro―Gln―NHNHBoc
を得る。 R〓：0.14 ３(b) Ｚ―Asp（OCH2―C6H5）―Leu―Pro―
Gln―NHNHBocの製造 Ｚ―Asp（OCH2―C6H5）―OH2.27ｇをテトラ
ヒドロフラン30ml及びＮ―メチルモルホリン0.65
mlに溶かし、−15℃に冷却後イソブチルクロロホ
ルメイト0.84mlを加え30秒間激しく撹拌する。こ
れに上記(a)で得られたＨ―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocのジメチルホルムアミド20ml及びト
リエチルアミン0.81ml溶液を加え、１分間撹拌す
る。０℃で５分間次いで40℃で２分間温めた後、
室温で15分間撹拌する。テトラヒドロフラン及び
ジメチルホルムアミドを留去して、残渣を酢酸エ
チルで抽出する。抽出液を1N―クエン酸、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次
洗浄し、抽出液を留去する。酢酸エチル―エーテ
ル―石油エーテルで再沈殿してＺ―Asp（OCH2
―C6H5）―Leu―Pro―Gln―NHNHBoc4.00ｇ
を得る。 R〓：0.68 R〓：0.77 元素分析値（C40H55N7O11として） 計算値（％） C59.32 H6.84 N12.11 実測値（％） C58.88 H6.65 N11.72 ４(a) Ｈ―Asp―Leu―Pro―Gln―NHNHBoc
の製造 Ｚ―Asp（OCH2―C6H5）―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc2.00ｇをメタノール50ml及び10％酢
酸10mlに溶かし、パラジウム黒を触媒として接触
還元してＨ―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocを得る。 R〓：0.08 ４(b) Ｚ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocの製造 Ｚ―Ser―NHNH20.75ｇをジメチルホルムア
ミド15ml及び6N―塩酸／ジオキサン1.48mlに溶
かし、−15℃に冷却後、亜硝酸イソアミル0.39ml
を加え５分間撹拌する。次いでトリエチルアミン
1.24ml加え中和する。上記(a)で得られたＨ―Asp
―Leu―Pro―Gln―NHNHBocのジメチルホル
ムアミド10ml及びトリエチルアミン0.34ml溶液
に、上記の反応液を加え、４℃で20時間撹拌す
る。ジメチルホルムアミドを留去し、残渣をブタ
ノールで抽出する。抽出液を水洗し、ブタノール
を留去する。メタノール―酢酸エチルより再結晶
して、Ｚ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc1.52ｇを得る。 R〓：0.45 R〓：0.67 ５ Ｈ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr―His
―Ser―Leu―Gln―Asn―Arg―Arg―Ala―
Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHの製造 Ｚ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc116mgをTFA2mlにより脱Boc化無水
エーテルを加えて得られる沈殿を取乾燥しジメ
チルホルムアミド５ml及び6N―塩酸／ジオキサ
ン0.072mlに溶解し、−15℃に冷却後亜硝酸イソア
ミル0.019mlを加え５分間撹拌する。次いでトリ
エチルアミン0.081mlを加え中和する。 ペプチドＢ即ちＨ―Thr―His―Ser―Leu―
Gly―Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―
Leu―Ala―Gln―OH80mgのジメチルホルムアミ
ド５ml及びヘキサメチルリン酸トリアミド６ml溶
液に、上記反応液を加え、４℃で20時間撹拌す
る。さらにＺ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocをアジド化したものの116mgを加え、
28時間攪拌する。ジメチルホルムアミドを留去
し、残渣をブタノールで抽出する。抽出液を水洗
し、ブタノールを留去し、残渣に石油エーテルを
加えて結晶化し、析出結晶を取し、メタノール
―酢酸エチルで再沈殿させる。 得られたＺ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―
Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHを
メタノール30mlと10％酢酸30mlに溶かし、パラジ
ウムで接触還元する。触媒を去し、溶媒を留去
して、得られた残渣をセフアデツクスＧ―25次い
でLH―20（溶出液1/1000夫々Ｎ塩酸）で精製し
て58mgのＨ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr
―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala
―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OHを得る。
以下これを「ペプチドＣ」と呼ぶ。 R〓：0.01 R〓：0.37 元素分析値（C95H163N31O29・2CH3COOH・
7H2Oとして） 計算値（％） C48.54 H7.61 N17.72 実測値（％） C48.14 H7.50 N17.48 〔α〕25 D：−85.70（Ｃ＝0.23，1M酢酸） 製造例 ４ １(a) Ｈ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocの製造 Ｚ―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc1.03ｇをメタノール50mlに溶かし、
パラジウムを触媒として接触還元して、Ｈ―Ser
―Asp―Leu―Pro―Gln―NHNHBocを得る。 R〓：0.06 １(b) Ｚ―Tyr―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBocの製造 Ｚ―Tyr―ONHS0.79ｇを上記(a)で得られたＨ
―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―NHNHBocのジ
メチルホルムアミド20ml溶液に加え20時間室温で
放置する。ジメチルホルムアミドを留去後、残渣
を酢酸エチルで抽出する。抽出液を1N―クエン
酸及び飽和食塩水で順次洗浄して、酢酸エチルを
留去する。メタノール―酢酸エチルで再沈殿して
Ｚ―Try―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc588mgを得る。 R〓：0.51 R〓：0.69 元素分析値（C52H69N9O15として） 計算値（％） C58.91 H6.56 N11.89 実測値（％） C58.53 H6.22 N12.28 ２ Ｈ―Try―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg
―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―
OHの製造 Ｚ―Tyr―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―
NHNHBoc44mgをジメチルホルムアミド３ml及
び6N―塩酸／ジオキサン0.0225mlに溶解し、−15
℃に冷却後亜硝酸イソアミル0.0060mlを加え、５
分間撹拌する。次いでトリエチルアミン0.0252ml
を加え中和する。 ペプチドＢ即ちＨ―Thr―His―Ser―Leu―
Gly―Asn―Arg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―
Leu―Ala―Gln―OH、25mgのジメチルホルムア
ミド５ml及びヘキサメチルリン酸トリアミド２ml
溶液に、上記反応液を加え、４℃で20時間撹拌す
る。さらにこれにＺ―Try―Ser―Asp―Leu―
Pro―Gln―NHNHBoc44mgをアジド化したもの
を加え、24時時間撹拌する。溶媒を留去して、残
渣をブタノール―水で抽出し、エーテルを加え、
析出する結晶を取する。 得られたＺ―Tyr―Ser―Asp―Leu―Pro―
Gln―Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―
Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―
OHをメタノール30mlに溶かし、パラジウムを触
媒として接触還元する。触媒を去、メタノール
を留去して得られた残渣をセフアデツクスＧ―25
（溶出液50％酢酸）続いてLH―20（溶出液1/1000
Ｎ塩酸）で精製して、Ｈ―Tyr―Ser―Asp―Leu
―Pro―Gln―Thr―His―Ser―Leu―Gly―Asn
―rg―Arg―Ala―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―
Gln―OH18mgを得る。以下これを「ペプチドＤ」
と呼ぶ。 R〓：0.01 R〓：0.38 元素分析値（C104H169N32O31・2CH3COOH・
5H2Oとして） 計算値（％） C50.40 H7.32 N17.41 実測値（％） C50.72 H7.67 N17.03 〔α〕25 D：−77.88（Ｃ＝0.22，1M塩酸） ＜抗原の製造＞ 製造例 １ ペプチドの合成製造例１で得たペプチドＡの５
mg及び牛血清アルブミン（以下「BSA」と略記
する）の15mgを酢酸アンモニウム緩衝液（0.1モ
ル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液に0.1モルの
グルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、室温で
５時間撹拌する。その後反応混合物を48時間、４
℃で水１で透析する。透析中５回水を交換す
る。その後、ペプチド―蛋白質複合体を含有する
溶液を凍結乾燥してヒトリムホブラストイドイン
ターフエロン抗原（以下「抗原」と呼ぶ）18mg
を得る。 この抗原は、BSA1モルに対してペプチドＡ
が平均12モル結合したものである。 製造例 ２ ペプチド合成製造例２で得たペプチドＢの５mg
及びBSAの20mgを酢酸アンモニウム緩衝液（0.1
モル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液に0.1モル
のグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、室温
で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時間、
４℃で水１で透析する。透析中５回水を交換す
る。その後、ペプチド―蛋白質複合体を含む溶液
を凍結乾燥してヒトリムホブラストイドインター
フエロン抗原（以下「抗原」と呼ぶ）23mgを得
る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＢが平均９モル結合したものである。 製造例 ３ ペプチド合成製造例３で得たペプチドＣの4.5
mg及びBSAの25mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液1.0mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時
間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を交
換する。その後、ペプチド―蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾してヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗原（以下「抗原」と呼ぶ））27mg
を得る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＣが平均10モル結合したものである。 製造例 ４ ペプチド合成製造例４で得たペプチドＤの５mg
及びBSAの25mgを酢酸アンモニウム緩衝液（0.1
モル、PH7.0）２mlに溶かす。この溶液に0.1モル
のグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、室温
で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時間、
４℃で水１で透析する。透析中５回水を交換す
る。その後、ペプチド―蛋白質複合体を含む溶液
を凍結乾燥してヒトリムホブラストイドインター
フエロン抗原（以下「抗原」と呼ぶ）28mgを得
る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＤが平均９モル結合したものである。 製造例 ５ ペプチド合成製造例３で得たペプチドＣの4.5
mg及びBSA25mgを水４mlに溶解する。この溶液
にジシクロヘキシルカーボジイミド（DCC）200
mgを加え、室温で５時間撹拌する。次に反応混合
物を水２用い４℃にて48時間要して透析する。
透析中５回水を交換する。その後ペプチド―蛋白
質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトリムホブ
ラストイドインターフエロン抗原（以下「抗原
」と呼ぶ）27.5mgを得る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＣが平均12モル結合したものである。 製造例 ６ ペプチド合成製造例４で得たペプチドＤの4.5
mg及びBSA25mgを水４mlに溶解する。この溶液
にジシクロヘキシルカーボジイミド（DCC）200
mgを加え、室温で５時間撹拌する。次に反応混合
物を水２用い４℃にて48時間要して透析する。
透析中５回水を交換する。その後ペプチド―蛋白
質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトリムホブ
ラストイドインターフエロン抗原（以下「抗原
」と呼ぶ）29mgを得る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＤが平均９モル結合したものである。 ＜抗体の製造＞ 製造例 １ 抗原の製造例１で得た抗原の100μｇを1.5ml
の生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ２ 抗原の製造例２で得た抗原の20μｇを1.5mlの
生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、７羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ３ 抗原の製造例３で得た抗原の20μｇを1.5mlの
生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、７羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ４ 抗原の製造例３で得た抗原の100μｇを1.5ml
の生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ５ 抗原の製造例４で得た抗原の20μｇを1.5mlの
生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、７羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ６ 抗原の製造例４で得た抗原の100μｇを1.5ml
の生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明のヒトリムホブラストイドインタ
ーフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を得
る。 製造例 ７ 抗原の製造例５で得た抗原の20μｇを用い上
記製造例３と同様にして、ヒトリムホブラストイ
ドインターフエロン抗体（以下「抗体」と呼
ぶ）を得る。 製造例 ８ 抗原の製造例５で得た抗原の100μｇを用い、
上記製造例４と同様にして、ヒトリムホブラスト
イドインターフエロン抗体（以下「抗体」と呼
ぶ）を得る。 製造例 ９ 抗原の製造例６で得た抗原の20μｇを用い、
上記製造例３と同様にして、ヒトリムホブラスト
イドインターフエロン抗体（以下「抗体」と呼
ぶ）を得る。 製造例 10 抗原の製造例６で得た抗原の100μｇを用い、
上記製造例４と同様にして、３羽の兎を免疫化せ
しめてのち試験物から採血し、遠心分離して抗血
清を採取し、本発明のヒトリムホブラストイドイ
ンターフエロン抗体（以下「抗体」と呼ぶ）を
得る。 Γ 標識ペプチドの製造 Ｈ―Tyr―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr
―His―Ser―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala
―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH即ちペ
プチドＤをクロラミンＴを用いる方法で以下の通
り標識化する。 即ち上記ペプチド5μｇの0.5モルのリン酸塩緩
衝液（PH7.0）20μにNa〔125I〕（carrier free N.
E.N.）１ミリキユーリーの0.5モルリン酸塩緩衝
液を加え、次にクロラミンT70mg／mlの0.5モル
リン酸塩緩衝液20μを加える。室温で30秒間撹
拌して60mg／mlのメタ重亜硫酸ナトリウム
（Na2S2O5）の0.5Mリン酸塩緩衝液50μを加え
ることで反応を終わらせる。次いで反応液に１％
の冷沃化ナトリウム水溶液100μを加え、反応
混合物をセフアデツクスＧ―25のカラム（1.0×
30cm）にかける（溶出液0.25％BSA、10mM
EDTA及び0.02％NaN3を含む0.05モルリン酸塩
緩衝液、PH7.4）。第13及び14フラクシヨンが125I
で標識された上記ペプチドである。 Γ 力価の測定 上記で得られる抗体の力価を次に通り測定す
る。即ち抗体をそれぞれ生理食塩水で10，102，
103，104，105…倍に希釈（イニシヤル）し、こ
れらの夫々100μに、I125標識ペプチド（上記で
得られる標識ペプチドを約9500cpmになるように
希釈したもの）0.1ml及び0.05モルリン酸塩緩衝
液（PH＝7.4）〔0.25％BSA、10mM EDTA及び
0.02％NaN3を含む〕0.2mlを加え、４℃で24時間
インキユーベートし、生成した抗体とI125標識抗
原との結合体を、デキストラン―活性炭法及び遠
心分離法（４℃、30分間、3000rpm）により未反
応（結合しない）I125標識ペプチドから分離し、
その放射線をカウントし、各希釈濃度における抗
体のI125標識ペプチドとの結合率（％）を測定す
る。縦軸に抗体のI125標識ペプチドとの結合率
（％）及び横軸に抗体の希釈倍率（イニシヤル濃
度）をとり、各々の濃度において結合率をプロツ
トする。結合率が50％となる抗体の希釈倍率即ち
抗体の力価を求める。結果を下記第１表に示す。 【表】 Γ 抗体のヒトリムホブラストイドインターフエ
ロン特異性試験 供試試料として各種濃度のヒトβ型インターフ
エロン（東京都総合臨床研究所製、比活性３×
106U／mgプロテイン）、ペプチドの合成製造例３
で得たペプチドＣ即ちヒトリムホブラストイドイ
ンターフエロンのペプチド鎖及びヒトα型インタ
ーフエロン〔林原研究所製、リムホブラストイド
インターフエロンLot.No.800928及びカンテル
（Cantel社製）〕を使用する。また標準希釈剤とし
て0.25％SA、5mM EDTA及び0.02％のNaN3を
含む0.05モルリン酸塩緩衝液（PH7.4）を使用す
る。 各々の試験管に、標準希釈剤0.2ml、供試試料
0.1ml、抗体の製造例４で得た抗体の0.1ml（力
価20万）及びI125標識ペプチド（上記で得られる
標識ペプチドを約2800cpmになるように希釈した
もの）0.1mlを入れ、４℃で72時間インキユベー
トした後、ノーマルブタ血清（normal porcine
serum）を0.1ml加え、次いでデキストランで被
膜した活性炭の懸濁液0.5mlを加え、４℃で30分
間放置し、次に４℃、3000rpmの条件下に30分間
遠心分離を行ない、抗体とI125標識ペプチドとの
結合体及び未反応（結合しない）I125標識ペプチ
ドを分離し、その放射線をカウントし、用いた抗
体の力価に相当する結合率（Bo）を100％とし
て、各供試試料の濃度及び希釈率における抗体と
I125標識ペプチドとの結合体(B)の百分率を求め
る。得られる結果を第１図に示す。第１図中縦軸
は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸は供試試料
（前記ペプチドの合成製造例３で得たペプチドＣ
即ちヒトリムホブラストイドのペプチド鎖、ヒト
β型インターフエロン及びヒトα型インターフエ
ロン）の濃度を示す。また該図において曲線イは
ペプチドＣ即ちヒトリムホブラストイドインター
フエロンのペプチド鎖を、曲線ロはヒトα型イン
ターフエロン（カンテル社製）を、曲線ハはヒト
α型インターフエロン（林原研究所製）を、また
曲線ニはヒトβ型インターフエロンを夫々示す。
第１図より抗体は、ヒトα型インターフエロン
に対する反応性とヒトβ型インターフエロンに対
する反応性において明確に区別される曲線を示
し、このことによりヒトβ型インターフエロンと
は3.0×106ユニツト／mlまで交叉しない特異性の
高い抗体であることが判る。また抗体，及び
についても同様の試験を行つた結果、抗体と
同様にヒトα型インターフエロンに対し特異性を
示し、ヒトβ型インターフエロンに対しては3.0
×106ユニツト／mlまで交叉しない特異性の高い
抗体であつた。 尚上記抗原の製造例１乃至６で得られる抗原
乃至におけるペプチドとBSAとの結合率は、
得られる各抗原を更にセフアデツクスＧ―50（溶
出液：生理食塩水、検出：OD280nm、流出速
度：３ml／時間、分取量：１mlずつ）でゲル過
した際、未反応BSA及びペプチド存在は認めら
れないことより、該ゲル過によつてBSAに結
合したペプチドのフラクシヨンと他の生成体（ペ
プチドの２量体）のフラクシヨンとを分離し、ペ
プチド２量体の標準濃度の検量線を作成して、上
記２量体の量を求め、これを出発原料として用い
たペプチドの量から差し引いた値がすべてBSA
に結合しているとして求めたものである。
第１図は本発明によつて得られるヒトリムホブ
ラストイド抗体の特異性を示すグラフである。
ラストイド抗体の特異性を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一般式 Ｒ―Leu―Ile―Leu―Leu―Ala―Gln―OH 〔式中Ｒは水素原子、Ｈ―Thr―His―Ser―
Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala基、Ｈ―Ser
―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr―His―Ser―Leu
―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala基、又はＨ―Tyr
―Ser―Asp―Leu―Pro―Gln―Thr―His―Ser
―Leu―Gly―Asn―Arg―Arg―Ala基を示す〕 で表わされるヒトリムホブラストイドインターフ
エロンのＮ末端ペプチドの少なくとも１種を、ハ
プテン―担体結合試薬の存在下に担体と反応させ
て、ヒトリムホブラストイドインターフエロン抗
原を得ることを特徴とする抗原の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56133125A JPS5835122A (ja) | 1981-08-24 | 1981-08-24 | 抗原の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56133125A JPS5835122A (ja) | 1981-08-24 | 1981-08-24 | 抗原の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5835122A JPS5835122A (ja) | 1983-03-01 |
| JPH0160040B2 true JPH0160040B2 (ja) | 1989-12-20 |
Family
ID=15097364
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56133125A Granted JPS5835122A (ja) | 1981-08-24 | 1981-08-24 | 抗原の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5835122A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7087726B2 (en) | 2001-02-22 | 2006-08-08 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55113753A (en) * | 1979-02-22 | 1980-09-02 | Toyo Jozo Co Ltd | Parathyroid hormone derivative |
| JPS5657753A (en) * | 1979-10-16 | 1981-05-20 | Toyo Jozo Co Ltd | Novel glucagon fragment, and its use |
-
1981
- 1981-08-24 JP JP56133125A patent/JPS5835122A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5835122A (ja) | 1983-03-01 |
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