JPH02104263A

JPH02104263A - 蛋白質クルクリン及びその用途

Info

Publication number: JPH02104263A
Application number: JP63277717A
Authority: JP
Inventors: Yoshie Kurihara; 栗原　良枝
Original assignee: Asahi Denka Kogyo KK
Current assignee: Adeka Corp
Priority date: 1988-06-21
Filing date: 1988-11-02
Publication date: 1990-04-17
Anticipated expiration: 2011-06-26
Also published as: JP2509989B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野］本発明は、新規な蛋白質クルクリン及びその味覚修飾剤
としての用途に関するものである。

（従来の技術）舌の受容膜に作用して、食品の味覚を変える吻’ｆｆ（
味覚修飾物質）としては、従来、日中に含んだ後、甘味
物質を食した時、または甘味物質とともに食した時、甘
味を惑じさせなくするものとしてギムネマ　シルベスタ
（Ｇｙｍｎｅｎ＋ａ　５ｙｌｖｅｓｔｒｅ）の葉に含ま
れるギムネマ酸、及びなつめ（Ｚｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊ
ｕｂａ）の葉に含まれるジジフィンが知られており、ま
た上記と同様にして酸味物質を食した時、甘味を惑しさ
せるものとして、ミラクルフルーツ（Ｓｙｎｓｅｐｕｌ
ｍ　ｄｕｌｃｉｆｉｃｕ＋ｇ）の実に含まれるミラクリ
ンが知られている。

また、クルクリゴ・ラチフォリア（Ｃｕｒｃｕｌｉｇ。

１ａｔｉｆｏｌｉａ）は、西マレーシアやタイ南部等に
自生するひがんばな科きんばいざさ属の植物であり、そ
の果実は食用に適し、食欲増進効果があることは知られ
ている。

〔発明が解決しようとする課題〕

上記のミラクリンは、上述の如き機能を有するものであ
るが、安定性上の問題があり、味覚修飾物質として実用
化されていない。

また、クルクリゴ・ラチフォリアの果実は上述以外の性
質については知られていない。

従って、本発明の目的は、安定化度の高い新規な味覚修
飾物質を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明”Ｆｆらは、クルクリゴ・ラチフォリアの果実を
食した後、酸味物質または水を食すると、甘味が感じら
れることを見いだし、その誘因物質が何であるか鋭意研
究した結果、クルクリゴ・ラチフォリアの実（Ｆｒｕｉ
ｔ）に含まれる特定の蛋白質（クルクリンと命名）が甘
味を惑しさせる誘因物質であり、前記目的を達成するも
のであることを知見した。

本発明は、上記知見に基づきなされたもので、クルクリ
ゴ・ラチフォリアの果実またはその乾燥物からＯ，０１
Ｍ以上の濃度の塩の水溶液で抽出することによって得ら
れる蛋白質クルクリン、クルクリンからなる味覚修飾剤
、クルクリンからなる味覚修飾剤を含有する食品、飲料
または薬剤、及び蛋白質クルクリンの抽出方法を提供す
るものである。

以下、本発明の蛋白質クルクリンについて詳述する。

本発明のクルクリンは、クルクリゴ・ラチフオリア（Ｃ
ｕｒｃｕｌｔｇｏ　１ａｔｉｆｏｌｉａ）の果実または
その乾燥物から０．０１Ｍ以上の濃度の塩の水溶液で抽
出することによって得られる。

上記の塩どしては、ナトリウム、カリウム、カルシウム
、マグネシウム若しくはアンモニウムの塩酸塩、ナトリ
ウム、カリウム、マグネシウム若しくはアンモニウムの
リン酸塩、ナトリウム、カリウム、マグネシウム若しく
はアンモニウムの炭酸塩、ナトリウム、マグネシウム、
カルシウム若しくはアンモニウムの硫酸塩又は亜硫酸塩
、ナトリウム若しくはカリウムの硝酸塩又は亜硝酸塩、
ナトリウム若しくはカルシウムの乳酸塩、ミョウバン、
焼ミョウバン、酢酸ナトリウム、ナトリウム若しくはカ
リウムのビロリン酸塩、ナトリウム若しくはカルシウム
のプロピオン酸塩、安息香酸ナトリウム、フマル酸−ナ
トリウム、ポリアクリル酸ナトリウム等が用いられる。

また、上記のクルクリゴ・ラチフオリアの果実の乾燥物
としては、その乾燥手段に特に制限されるものではなく
、天日乾燥物、熱風乾燥物、及び凍結乾燥バルブ等の凍
結乾燥物等が用いられる。

そして、上記塩の水溶液によるクルクリンの抽出方法の
代表的な一例を挙げると次の通りである。

クルクリゴ・ラチフオリアの果実またはその乾燥物に上
記の塩の水溶液を力Ｓえてホモジナイズした後、濾過、
遠心分離等を行って抽出できるが、クルクリンはクルク
リゴ・ラチフオリアの果実の果肉中の水不溶部分に含ま
れるため、上記果実またはその乾燥物に水を加えてホモ
ジナイズし、充分水洗いして水可溶部を除去した後、そ
の残香から上記の塩の水溶液で抽出する方がクルクリン
を高純度で得られるので好ましい。

抽出に用いられる塩の水溶液が０００１Ｍ未満の濃度の
ものではクルクリンを充分に抽出することができないの
で、０．０１Ｍ以上の濃度の塩の水溶液が必要である。

一方、あまり高濃度では、抽出後の脱塩に手間がかかる
ので、抽出効率と抽出以後の精製の手間のかね合いから
０．１〜１．０Ｍの濃度の塩の水溶液が好ましい。

上記塩の水溶液による抽出液を脱塩、乾燥することによ
り、充分実用に供するクルクリン含有物質が得られるが
、抽出液をさらにＣＭ−セファローズによるイオン交換
、ゲルカラム使用のＨＰ　ＬＣにかけて精・製すること
により、純度を上げることができ、その後、脱塩、乾燥
して純クルクリンが得られる。もちろん、上記の精製法
の他、抽出液を塩析、溶剤沈殿その他の公知の蛋白精製
法により分画することによっても、クルクリン純度を上
げることができる。

このようにして得られる本発明のクルクリンの具体例と
しては、分子量約１２５００ダル１−ン（ｄａｌＬｏｎ
）　、アミノ酸残基数９７、等電点７．１の蛋白質が挙
げられ、この蛋白質は分子量約２６０００ダルトン（ｄ
ａｌｔｏｎ）のダイマー（ｄｉｍｅｒ）として存在する
。また、上記蛋白質のアミノ酸組成は下記の第１表の通
りであり、上記蛋白質は比較的多量のアスパラギン酸、
ロイシン及びグリシンを第１表　アミノ酸組成上記の本発明の蛋白質クルクリンは、味覚修飾剤として
好適に用いられる。

上記クルクリンからなる本発明の味覚修飾剤は、そのま
ま摂取してもよいが、食品、飲料または薬剤等に適宜配
合して用いることができる０食品等に対する配合量は、
後述するクルクリンの甘味発現活性を参考にして、目的
及び用途に応じ定めることができる。

また、クルクリンからなる味覚修飾剤を含有する食品等
は、その食品等の性状に応じて、粉末状、溶液状、シー
ト状、スプレー状または乳化物状等に加工することがで
きる。

〔作用〕

本発明のクルクリンは、日中に含んだ後、酸味物質、無
味物質または水等を食した時、または酸味物質、無味物
質または水等とともに食した時、舌の受容膜に作用して
甘味を惑じさせる効果を有しており、本発明のクルクリ
ンあるいは該クルクリンを含む製剤または食品等を事前
に食しておけば、３０分後までは、酸味物質、無味物質
または水を食した時に甘味を感しさせることができる。

各種水溶液に対する純クルクリン（クルクリン４Ｘ１０
−’Ｍ濃度）の甘味発現活性は下記第２表に示す通りで
あり、酸味物質に対し、特に活性が高い。

また、本発明のクルクリンは、ミラクルフルーツの実に
含まれるミラクリンと異なり、水溶液中でも安定である
ので、クルクリン及びクルクリンを含む製剤または食品
等を粉末状、錠剤状、シート状の他、溶液状、乳化物状
、スプレー状とすることが容易である。

また、本発明のクルクリンは、それ自体弱い甘味を有す
る。

〔実施例〕

次に実施例を示し、本発明を具体的に説明する。

実施例１クルクリゴ・ラチフオリア（Ｃｕｒｃｕｌｉｇｏ　Ｉａ
ｔｉｆ。

１　ｉａ）の果実の凍結乾燥バルブ３０ｇに６００ｍの
水を加え、ミキサーで２分間ホモジナイズした後、１０
０００　ｒ、ｐ、ｍ、で３０分間遠心分離シタ、上澄（
着色している）を除去後、残香に６００　ｍｆｌの水を
加え、ホモジナイズ、遠心分離、上澄除去を、上澄が着
色しなくなるまで４回くりかえし、残香を得た。

次に、この残香に０．５　ＭＮａＣＩ水溶液２５０ｄを
加え、ミキサーで２分間ホモジナイズした後、吸引濾過
した。濾液分取後、残香にさらに０．５ＭＮａＣ１水溶
液２５０ｄを加え、ホモジナイズ及び吸引濾過を行い、
濾液を分取した。

次に、濾液を合わせた後、３００００ｒ、ｐ、ｍ、で１
時間遠心分離し、上澄（クルクリン粗抽出液）を得た。

この粗抽出液から脱塩、凍結乾燥して、クルクリン含有
物賞（粗りルクリン）を得た。

実施例２実施例１で得られたクルクリン粗抽出液５００ｍ１を限
外濾過により、３０ｄまで濃縮した後、この濃縮液に０
．０１Ｍリン酸バッファー（ｐｌ＋６．８）１０ｍｆｔ
を加え、１００　ｒｔｄｌとしたものを試料液として、
ＣＭ−セファローズカラムクロマトグラフィーを行った
（ＣＭ−セファローズＣＬ−６Ｂ、０゜０１Ｍリン酸バ
ッファー（ｐｌ＋６．８）で平ｉ鮒化したもの、］。べ
・ツドボリューム１３０ｍｆｆ１及びベンド高さ１７ｃ
ｍ０カラムに試料液を流下し、０．０１Ｍリン酸バッフ
ァー（ｐＨ６、８）で洗浄した後、〇−１、ＯＭＮａＣ
Ｉ／　０．０１　Ｍリン酸バッフｙ　−（ｐＨ６、８）
のグラデイエンドで溶出し、活性画分を集めた。

この活性画分から、脱塩、凍結乾燥して、クルクリン含
有物質（粗精製クルクリン）を得た。

実施例３実施例２で得られた活性画分を限外濾過で濃縮した後、
ゲルカラム（東洋ソーダ製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷ）
を用いたＨＰＬＣにかけ、０．０１Ｍリン酸バッファー
（ｐＨ６，８）で溶出した。

クルクリンは、強い活性を持つシャープな１ビークとし
て溶出された。

この活性画分を脱塩、凍結乾燥して、精製クルクリンを
得た。

なお、この精製クルクリンを８．０Ｍ尿素の存在下で５
ＤＳ−ＰＡＧＥにかけたところ、分子ｆｆ１１２５００
ダルトン（ｄａｌＬｏｎ）の所に単一バンドを示し、ク
ルクリン純品であることが確認された。

クルクリゴ・ラチフォリアの果実の凍結乾燥バルブ３０
ｇあたりの、各実施例で得られたクルクリンの蛋白量、
活性収率及び比活性は下記第３表に示す通りであった。

実施例４実施例１でｔ％られた粗クルクリン１０ｍｇと食塩１ｍ
ｇを水２０ｍ１に溶解し、０．０５％水溶液とした。

この水溶液は室温（２５℃前後）に１ケ月放置した後も
安定であった。この水溶液１　ａｆｔを日中に１分間含
み吐き出した後、０．０２　Ｍクエン酸、水、紅茶（ブ
ラック）をそれぞれ飲食した。その時の甘味の感じ方は
下記第４表に示す通りであった。

第４表紅茶（ブラック）の場合は普通の砂糖添加の紅茶と同様
の味を感じた。

実施例５下記第５表に示す配合にて、ブラックのコーヒーゼリー
（Ａ）及び砂糖入りのコーヒーゼリー（Ｂ）を作成した
。

第５表一方、市販の生クリーム（Ｃ）に実施例１で得られた粗
りルクリン０．００５％を加え、クルクリン含有生クリ
ーム（Ｄ）を作成した。

コーヒーゼリー（Ａ）を溶解後、カップに注ぎ、冷却し
てゼリー状に固めたものの上に、生クリーム（Ｄ）に砂
糖１０％を加えてホイップしたものを約１０ｇ絞って、
クリームコーヒーゼリーを得た。また、コーヒーゼリー
（Ｂ）の上に、生クリーム（Ｃ）に砂糖ｌＯ％を加えて
ホイップしたものをのせたクリームコーヒーゼリーを、
上記と同様にして得た。

ホイップクリーム（Ｄ）を食した後コーヒーゼリー（Ａ
）を食したところ、ホイップクリーム（Ｃ）を食した後
コーヒーゼリー（Ｂ）を食した場合と同様の風味を惑し
た。

実施例６実施例５で用いたホイップクリーム（Ｄ）の代りに、実
施例１で得られた粗クルクリンを０．２％加えて作成し
た可食性フィルム０．２ｇを乾燥防止をかねて、実施例
５のコーヒーゼリー（Ａ）の表面に薄膜状においた。こ
の可食性フィルムを食した後コーヒーゼリー（Ａ）を食
したところ、実施例５のコーヒーゼリー（Ｂ）を食した
場合と同様の風味を感じた。

実施例７クルクリゴ・ラチフォリア（Ｃｕｒｃｕｌｉｇｏ　１ａ
ｔｉｆ。

１ｉａ）の果実の乾燥物３０ｇに６００　ｍｌの水を加
え、ミキサーで２分間ホモジナイズした後、１００００
　ｒ、ｐ、ｍ、で３０分間遠心分離した。上澄（着色し
ている）を除去後、残金に６００　ｍｆｔの水を加え、
ホモジナイズ、遠心分離、上澄除去を、上澄が着色しな
くなるまで４回（りかえし、残金を得た。

次に、この残金に０．５　ＭＮａＣ１水溶液２５０　ｙ
ｎ’ｌを加え、ミキサーで２分間ホモジナイズした後、
吸引濾過した。濾液分取後、残金にさらに０．５ＭＮａ
Ｃ１水溶液２５０＃１１！を加え、ホモジナイズ及び吸
引濾過を行い、ｉＩｔ液を分取した。

次に、濾液を合わせた後、３００００　ｒ、ｐ、＋ａ、
で１時間遠心分離し、上澄（クルクリン粗抽出液）を得
た。

この粗抽出液から脱塩、乾燥して、クルクリン含有物質
（粗りルクリン）を得た。

実施例８実施例７で得られたクルクリン粗抽出液５００−を限外
濾過により、３０ｍまで濃縮した後、この濃縮液に０．
０１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ６，８”）７０ｄを加え
、１００ｄとしたものを試料液として、ＣＭ−セファロ
ーズカラムクロマトグラフィーを行った（ＣＭ−セファ
ローズＣＬ−６Ｂ、０゜０１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ
６，８）で平衡化したもの、〕、ベツドボリューム１３
０ｄ及びベツド高さ１７ＣＴｌのカラムに試料液を流下
し、０．０１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ６，＋３）で洗
浄した後、０−１、０　ＭＮａＣ１／　０．　ＯＩ　Ｍ
リン酸バッフｙ　　　（ｐＨ６，８）のグラデイエンド
で溶出し、活性画分を集めた。

この活性画分から、脱塩、乾燥して、クルクリン含有物
質（粗精製クルクリン）を得た。

実施例９実施例８で得られた活性画分を限外濾過で濃縮した後、
ゲルカラム（東洋ソーダ製ＴＳＫゲルＧ３０００　ＳＷ
）を用いたＨＰＬＣにかけ、０．ＯＩＭリン酸バッ・フ
ァー（ｐＨ６，８）で溶出した。

クルクリンは、強い活性番持つシャープな１ピークとし
て溶出された。

この活性画分を脱塩、乾燥して、精製クルクリンを得た
。

なお、この精製クルクリンを８．０　Ｍ尿素の存在下で
５ＤＳ−ＰＡＧＥにかけたところ、分子量１２５００ダ
ルトン（ｄａｌｔｏｎ）の所に単一バンドを示し、クル
クリン純品であることが確認された。

クルクリゴ・ラチフォリアの果実の乾燥物３０ｇあたり
の、各実施例で得られたクルクリンの蛋白量、活性収率
及び比活性は下記第６表に示す通りであった。

実施例１０実施例７で得られた粗タルクリン１００１１ｇと食塩１
ｍｇを水２０ｍ１に溶解し、０．５％水溶液とした。

この水溶液は室温（２５°Ｃ前後）に１ケ月放置した後
も安定であった。この水溶液１　ｍｌを口中に１分間含
み吐き出した後、０．０２　Ｍクエン酸、水、紅茶（ブ
ラック）をそれぞれ飲食した。その時の↑［味の感じ方
は下記第７表に示す通りであった。

茶と同様の味を感じた。

実施例１１下記第８表に示す配合にて、ブラックのコーヒーゼリー
（Ａ）及び砂糖入りのコーヒーゼリー（Ｂ）を作成した
。

一方、市販の生クリーム（Ｃ）に実施例７で得られた租
りルクリン０．０５％を加え、クルクリン含有生クリー
ム（Ｄ）を作成した。

コーヒーゼリー（Ａ）を溶解後、カップに注ぎ、冷却し
てゼリー状に固めたものの上に、生クリーム（Ｄ）に砂
糖１０％を加えてホイップしたものを約１０ｇ絞って、
クリームコーヒーゼリーヲ得た。また、コーヒーゼリー
（Ｂ）の上に、生クリーム（Ｃ）に砂ＩＪ！１０％を加
えてホイップしたものをのせたクリームコーヒーゼリー
を、上記と同様にして得た。

ホイップクリーム（Ｄ）を食した後コーヒーゼリー（Ａ
）を食したところ、ホイップクリーム（Ｃ）を食した後
コーヒーゼリー（Ｂ）を食した場合と同様の風味を感じ
た。

実施例１２実施例１１で用いたホイップクリーム（Ｄ）の代りに、
実施例７で得られた粗りルクリンを０．５％加えて作成
した可食性フィルム０．２ｇを乾燥防止をかねて、実施
例１工のコーヒーゼリー（Ａ）の表面にｒｉｌ膜状にお
いた。この可食性フィル１、を食した後コーヒーゼリー
（Ａ）を食したところ、実施例１１のコーヒーゼリー（
Ｂ）を食した場合と同様の風味を惑した。

実施例１３〜１８実施例７で用いた０、５ＭＮａＣ１水溶液に代えて、０
．５ＭＫＣｌ水溶液（実施例１３）、０．５ＭＣａＣＩ
ｚ水溶液（実施例１４）　、０．５ＭＮａ１ｌＣＯ８水
溶液（実施例１５Ｌ、０．５ＭＭｇＣ０，水溶液（実施
例１６）　、０．２ＭＫＨ，ＰＯ，水溶ン夜（実施例１
７　）　、・０．２　ＭＮ　ａ　ＨｔＰ　Ｏ−水溶液（
実施例Ｌ８）をそれぞれ用いた以外は、実施例７と同様
にして、クルクリン含有物質（粗クルクリン）をそれぞ
れ得た。

〔発明の効果）本発明の新規物質クルクリンは、安定化度が高く、味覚
修飾物質として好適に用いられ、例えば、本発明のクル
クリンまたはその含有物を事前に食しておけば、酸味物
質または水等を飲食した時に甘味を惑しさせることがで
き、保存性等の理由から酸性にセざるを得ない食品、ま
たは健康や栄養上の理由から砂糖を含有しない食品等を
食する際に好ましい甘味を惑じさせることができるので
、広範な用途に利用可能である。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）クルクリゴ・ラチフォリアの果実またはその乾燥
物から０．０１Ｍ以上の濃度の塩の水溶液で抽出するこ
とによって得られる蛋白質クルクリン。
（２）クルクリンからなる味覚修飾剤。
（３）クルクリンからなる味覚修飾剤を含有する食品、
飲料または薬剤。
（４）食品、飲料または薬剤が、粉末状、溶液状、シー
ト状、錠剤状、スプレー状または乳化物状に加工されて
いる請求項（３）記載の食品、飲料または薬剤。
（５）クルクリゴ・ラチフォリアの果実またはその乾燥
物から０．０１Ｍ以上の濃度の塩の水溶液で抽出するこ
とを特徴とする蛋白質クルクリンの抽出方法。