JPH02109996A - アルコール分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は体液中に含有されるに到ったアルコールを検知
し、かつその含有量を表示する分析素子に関し、更に具
体的には血液、尿、特に唾液等の体液中に含有されるア
ルコールの分析素子に関する。

〔従来技術〕

臨床化学分析に供する試料としては、各種体液を用いる
ことが圧倒的に多い。中でも血液、特に血清は、通常恒
常性が維持されていること、全身の代謝動態、あるいは
各種臓器情報を得やすいこと、採取に比較的侵襲が少な
いことなど数多くの利点から一般的な試料として用いら
れている。尿も比較的よく用いられる検体であり簡易な
検査手法でリアルタイムの情報が得られるため基本的な
診察法の一つと高く評価され、スクリーニング検査に繁
用されている。

また唾液の分泌生理については比較的よく観察されてい
るが、臨床医学領域では最近まで全く無視されていた分
析試料であって、臨床化学検査の領域では僅かに尿素濃
度の血液−唾液相関に関する研究があるのみである（奥
田清、唾液、講談社、１９７２）。しかし唾液は患者に
もっとも負担をかけず随時に採取しうる試料であり、特
殊な場合を除けば量的にも十分得られ、特別な前処理を
必要とせず、臨床化学用試料として数多くの長所を持っ
ていて今後研究の発展に伴い利用の機会も多くなること
と考えられる。

更に、血漿中濃度と唾液中濃度とがよく相関するものが
あり、尿素、エタノール、ステロイドホルモン、ある種
の薬剤などが報告されている。

唾液の比重は１．００３〜１．００８、ｐｎは６．２〜
７．６で分泌が増加するとアルカリに傾き血液のｐ旧；
近づく傾向がみられる。粘度は与えた刺激の性質により
異なり、その由来、唾液腺のムチン含量に左右される。

通常得られる安静時混合唾液でその粘度は水の約１．９
倍と言われ、唾液を試料とするときにはピペット操作に
十分留意する必要があり、分析誤差の介入する操作段階
である。

前記エタノールの血流中濃度の簡単、迅速でかつ正確で
再現性ある測定法は、医療或は社会生活の安寧秩序特に
交通法規保持、交通安全・を保つ上で重要である。

エタノールの測定については既に多くの方法があり各種
の機器分析、一般化学分析或は特異性反応を利用する簡
便な酵素分析法がある。更に酵素分析法にはアルコール
を対応アルデヒドに導く酵素、アルコールデヒドロゲナ
ーゼ（ＡＤＨ）またはアルコールオキシダーゼ（ＡＯＤ
）を用いる方法がある。その特異性反応は下記の通りで
ある。

生成した還元生成物ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ，Ｈｏｏｔがチエツ
クされる。

前記酵素酸化（脱水素）反応に於て、反応系に還元性物
質があると検出反応で誤差が生じる。特に検体が唾液の
場合には、飲料、菓子に含まれている還元性を有するビ
タミンＣ（アスコルビン酸）による障害に遭うことがあ
り、飲酒運転取締りの正鵠を逸することがある。

従来の飲酒運転取締では、日本薬学会編「毒劇物化学試
験法注解」　（第３版南山堂１９８５年）に記載されて
いる方法で、飲酒検知管を用いて呼気中アルコール濃度
を測定しており、呼気中アルコール濃度で０．２５ｍｇ
／４未満、０．２５ｍｇ／４以上、０．５ｍｇ＃１以上
の３段階が測定でき、判定に使用されている。

血中および呼気中アルコール濃度については、溝井泰彦
ら、「臨床検゛査」往、　ｐ１９〜２６　（１９８５年
）および上野左ら「臨床検査」坦、ｐ３３〜３９　（１
９８５年）の総説に記載されており、呼気（肺胞）中ア
ルコール濃度と血中アルコール濃度の比は、ｌ：約２０
００である。また血中と唾液中アルコール濃度について
はＡ、　Ｗ、　Ｊｏｎｅｓ；　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ。

垣、　ｐ１３９４〜１３９８　（１９７９年）に報告が
あり、唾液中アルコール濃度は血中アルコール濃度と良
い相関をもち、ｌ：ｌのアルコール濃度比を示す。

従って、唾液を検体とする場合には、唾液中アルコール
濃度５０〜１００ｍｇ／ｄｆｆが判定に重要な濃度とな
り、特にこの領域付近の唾液中アルコール濃度の正確な
定量性が希まれる。

体液中のエタノールの測定法、測定試験具については特
開昭６０−２６２５９８号に紹介されている。該方法に
は濾紙のような支持体マトリックスに試薬を含浸させた
ものが用いられる。これらは定性または半定量的であり
、更に自動酸化に由来する擬陽性をもたらし、体液中の
アルコール濃度を正確に測定することが困難である。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、検出障害がなく、定量性に優れ、信憑
性の高いアルコール（エタノール）分析素子を提供する
ことにある。

〔発明の構成〕

前記本発明の目的は、支持体上に少なくとも試薬層、展
開′層を順次積層し体液の含有物質の検索の用に供する
分析素子において、前記試薬層にアルコールを酸化して
、対応アルデヒド及び還元生成物を生成する酵素及び前
記還元生成物の検出組成物並びにアスコルビン酸オキシ
ダーゼを含有することを特徴とするアルコール分析素子
によって達成される。

尚本発明のアルコール分析素子はエタノールを対象にす
るものである。

本発明において、アルコールオキシダーゼを用いる場合
、その活性によって生成した過酸化水素は本発明に係る
過酸化水素検出組成物によって定量的に表示される。　
また、本発明における定量的表示は、発色反応により比
色一定量することが有利であり、エタノールを基質とし
て、アルコールオキシダーゼにより生成する過酸化水素
をペルオキシダーゼを触媒として検出可能な色素を形成
させて検出する方法としてもよい。

発色反応試薬としては、トリンダー試薬の変法として知
られる４−アミノアンチピリン又はその塩、１．７−シ
ヒドロキシナフタレン；３−Ｎ−スルホプロピルアニリ
ン誘導体、例えばＮ−エチル−Ｎ−スルホプロピルアニ
リン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３゜５−ジメ
トキシアニリンスルホン酸及びその塩、Ｎ−スルホプロ
ピルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホブノ ロビルー３．５−ジメチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−
スルホプロビルーーートルイジン；Ｎ−２−ヒドロキシ
−３−スルホプロピルアニリン誘導体、例えばＮ−エチ
ル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピルン、Ｎ
−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル
）アニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−
スルホプロピル）−３．５−ジメトキシアニリンスルホ
ン酸及びその塩、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプ
ロピル）−３．５−ジメトキシアニリン、Ｎ−エチル−
Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３．５
−ジメチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキ
シ−３−スルホプロピル）−１１−　トルイジン等との
組合せ等が挙げられる。

更に化学発光する化合物、例えばルミノール（５−アミ
ノ−２．３−ジヒドロ−１．４−７タラジンジオン）、
イソルミノール（６−アミノ−２，３−ジヒドロ−１．
４フタラジンジオン）、ＡＢＥＩ−Ｈ（Ｎ−（４−アミ
ノブチル）−Ｎ−エチルイソルミノール （Ｎ−（６−アミノヘキシル）−Ｎ−エチルイソルミノ
ール）ＡＢＥＩ（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−エチ
ルイソルミノール）等があげられる。

更に特開昭５７−９４６５３号、同５７−９４６５４号
、同５７−９４６５５号、同５７−９４６５６号に記載
された芳香族第一級アミン化合物とカップリング反応に
よって発色する拡散性フェノール化合物、耐拡散性ナフ
トール化合物或はピラゾロン化合物その他の発色試薬が
用いられる。

また本発明において、アルコールデヒドロゲナーゼを用
いる場合、その活性によって生成した還元型補酵素のＮ
ＡＤＨあるいはＮＡＤＰＨの定量は、ＮＡＤＨあるいは
ＮＡＤＰＨを直接３４０ｎｍで比色定量してもよいし、
又は、適当な物質を用いてＮＡＤＨあるイ）はＮＡＤＰ
Ｈを発色色原体、蛍光前駆体、発光体等と作用させ、比
色、蛍光、蛍光等で・定量してもよい。ここでの適当な
物質とはＮＡＤＨあるいはＮＡＤＰＩを酸化し、発色色
原体、蛍光前体躯体、発光体等を還元する反応を触媒す
る物質をさし、具体的には、５−メチルツェナジニウム
メチルサルフェート、（１−メトキシ）−５−メチル７
エナジニウムメチルサルフエート（以下Ｍｅｎ−ＰＭＳ
と略記する）、メルトラブル−（すなわち、９−ジメチ
ルアミノベンゾ−ａ−７エナゾキソニウムクロライド）
などの化合物や、ジヒドロリポアミドレダクターゼ（Ｎ
ＡＤつ（別名ジアホラーゼ）、ＮＡＤＨデヒドロゲナー
ゼ、ＮＡＤＩ（デヒドロゲナーゼ（キノン）、ＮＡＤＰ
Ｈデヒドロゲナーゼ（キノン）などの酵素を用いること
ができる。

この場合、好ましい発色色原体の例として３−（ｐ−ヨ
ードフェニル）−２−（ｐ−二トロフェニル）−５−フ
ェニル−２水素テトラゾリウムクロライド、３−２水素
テトラゾリウムブロマイド、３．３’　−（４．４’−
ビフェニレン）−ビス（２．５−ジフェニル−２水素テ
トラゾリウムクロライドＸＮｅｏ−ＴＢ）、３．３’　
−（３．３’−ジメトキシ−４，４′−ビフエニリレン
）−ビス（２−（ｐニトロフェニル）−５−７エニルー
２水素テトラゾリウムクロライド）　（Ｎｉｔｒｏ−Ｔ
Ｂ）、３．３’　−（３．３’　−ジメトキシ−４．４
′−ビフエニリレン）−ビス（２．５−ジフェニル−２
水素テトラゾリウムクロライド）（ＴＢ）、３．３’−
（３．３’−ジメトキシ−４．４７−ビフエニリレン）
−ビス（　２．５−ビス（ｐ−ニトロフェニル）−２水
素テトラゾリウムクロライド）　（ＴＮＴＢ）等が挙げ
られる。

次に本発明に用いられるアスコルビン酸オキシダーゼの
含有量には制限はないが、実用上１０”〜ｌＯ“Ｕ／ｍ
’が有用であり、１０”〜ｌＯ’Ｕ／　ｔａ”テは１１
’　ＩＩ害を断つことができる。

更に特異的結合反応、酵素反応、発色反応等に適したｐ
Ｈにするために緩衝剤を含有させることが好ましい。具
体的には体液試料適用時にｐＨ−する事が好ましい。用
いることができる緩衝剤としては日本化学会ＩＩ「化学
便覧基礎編」（東京、丸善（株）１９６６）ｐ１３１２
〜１３２０、Ｎ　、　Ｅ　、　Ｇｏｏｄ等；バイオケミ
ストリ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、　ｖｏｆｆ　５
．ｐ４６７（１９６６）、今村、斎藤：化学の領域、ｖ
ｏｇ３０（２）１７９（１９７６）、Ｗ、Ｊファーギュ
ソン（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ）等、Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅ
＊、、ｖ。

ａ１０４．ｐ３００（１９８０）等の文献に記載されテ
ィるものを挙げることができる。具体的な例としては、
くえん酸塩、硼酸塩、燐酸塩、炭酸塩、トリス、バルビ
ッール、グリシン、グツド緩衝剤等があげられる。これ
らの緩衝剤は必要に応じて試薬層以外の層に含有させて
もよい。

更に本発明では試薬の保存性、定量再現性の向上のため
保恒剤として多価アルコール、非還元糖の少なくとも１
つを試薬層に含有させることが好ましい。これら保恒剤
の添加量は試薬層重量に対し０．５〜３０ｗｔ％、好ま
しくはｌ　”　１５ｗｔ％である。

多価アルコールとしては糖アルコール、非還元糖として
は還元基が消尽された多糖類が好ましい。

次にそれらの具体例を挙げる。

（糖アルコール） エリトリトール、トレイトール、アラビニトール、リビ
トール、キシリトール、ソルビトール、ガラクチトール
、マンニトール、アリトール、ボレミトール、プレセイ
トール、−ｙｏ−イノシトール、ｃｈｉｒｏ−イノシト
ール、５ｃｙｌｌｏ−イノシトール、クエルシトール、
ビブニトール、シクロヘキサンテトロール、コンズリト
ール （多糖類） トレハロース、蔗糖、イソトレハロース、ラフィノース
、ゲンチアノース、メンチトース、ブランチオース、ス
タキオース、ベルバスコース、リフノース、ａ−デキス
トリン、β−デキストリン、γ−デキストリン これら発色反応試薬保恒剤、緩衝剤は、水あるいは有機
溶媒に溶解し後述の試薬層に含有させるこ、とができる
。また必要に応じて発色反応試薬および形成された色素
の安定化に特開昭５８−８７４６１号に記載されている
ようなカルボキシル基を有するポリマーを含有させても
よい。

前記発色もしくは発光試薬による発色、発光（信号）は
、吸光度法（比色法）、蛍光法または、発光法で検出す
ることができ、測定法としては信号の経時的変化を測定
するレート測定法または一定時間後の信号を測定するエ
ンドポイント測定法で測定することができる。好ましく
は吸光度法であり、吸光度法（比色法）では、紫外光、
可視光、近赤外光を利用することができ、例えば体液試
料として血清および血漿を用いる場合には、血清および
血漿による吸光の影響オ小さくするために緑色光、赤色
光または、近赤外光を利用するのが好ましい。

本発明に係るエタノールに作用し還元生成物を生成する
アルコールに関るデヒドロゲナーゼ或はオキシダーゼの
量は広範に選ぶことが可能であるが、１００〜１．００
０．０００Ｕ／ｍ”、好ましくは１．０００〜１００゜
００００／ｍ”の範囲で用いることができる。

本発明に係る発色、発光試薬の含有量は広範に選ぶこと
が可能であるが、０．１−１００■醜ｏｆｆ／ｍ”、好
ましくは０．５〜５０飄■ｏＱ／ｓ”の範囲である。

本発明の分析素子においてデヒドロゲナーゼ、オキシダ
ーゼの作用により生成した還元生成物は、本発明に係る
発色、発光試薬を酸化し、色素もしくは色光を生起する
が、この反応は極めて高感度で再現性よく安定である。

従って、°本発明の分析素子は、血清中等の微量のアル
コールに対して鋭敏に反応し、微量の定量に特に有用で
ある。

本発明の分析素子を用いて、体液中のアルコールを定量
するにあたっては、分析素子を検体である体液試料中に
浸漬するか、体液試料を分析素子上に点着し、或は採取
片に吸取ってこれを分析素子に移し、反射スペクトロフ
ォトメトリ等により初速変法又は反応終点法に従って測
定することができる。このようにして得られた測定値は
、予め作成しておいた検量線または基準発色コードに照
合することでアルコールの量を決定することができる。

本発明の分析素子として、好ましくは、不透液性透明支
持体上に少なくともｌ・つの試薬層及び多孔性展開層を
有する一体型多層分析素子（特公昭５３−２１６７７号
、特開昭５５−１６４３５９号、同５５−９０８５９号
、同５７−１９７４６６号、同５７−１０１７６０号、
同５７−１０１７６１号、同５８・９０１６７号等）が
挙げられる。

上記試薬層は水溶性ポリマー又は親水性かつ有機溶媒可
溶性のポリマーをバインダとして支持体上に塗布するこ
とによって層として設けることができる。水溶性ポリマ
ーバインダとしてはゼラチン、フタル化ゼラチン等のゼ
ラチン誘導体、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム塩等の水溶性セルロース
誘導体、ポリビニルアルコール、ポリ　（Ｎ−ビニルピ
ロリドン）、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミ
ド、アクリルアミＶとアクリル酸エステルの共重合体、
ポリ　（モノ又はジアルキル置換）アクリルアミド、ポ
リ　（モノ又はジアルキル置換）メタクリルアミド及び
これらの水溶性共重合体等が挙げられ、好ましくはゼラ
チン、ポリアクリルアミド及びアクリルアミドとアクリ
ル酸エステルの共重合体が用いられる。親水性かつ有機
溶媒可溶性ポリマーバインダとしては、ポリ　（Ｎ−ビ
ニルピロリドン）、ポリ　（Ｎ−ビニルイミダゾール）
、ポリ　（Ｎ−ビニルトリアゾール）及びこれらの誘導
体又はそれらの共重合体、エチルセルロース、メチルセ
ルロース等のセルロース誘導体等が挙げられる。

また、試薬層に含ませる試薬類が２種以上にわたる場合
、この試薬類を同一試薬層内に一緒に混合して含有させ
ても、また、２種以上の試薬類を２つ又はそれ以上の別
々の試薬層に別々に或は組合せて含有させてもよい。こ
れらは分析反応自体の作用機構、反応安定化、再現性向
上効果によって決定されることであり、好ましくない影
響を及ぼさない限りにおいて、その構成は任意である。

上記試薬層の膜厚は所望に応じて任意に選択することが
可能であるが、好ましくは１〜２００μ−１更に好まし
くは５〜１００μ麿である。

前記多孔性展開層は、（１）一定容量の体液試料を単位
面積当り試薬層に均一に流延する機能を有するものであ
る。その上、更に、特公昭５３−２１６７７号に記載さ
れた性能、すなわち（２）体液試料中の反応を阻害する
物質又は要因を除去する機能及び／又は（３）分光光度
分析を行うときに支持体を経て透過する測定光を反射す
るバックグランド作用を行う機能を有するものであれば
更に好ましい。従って、本発明に係る展開層は、上記（
１）の機能のみを有する層、（１）に加えて（２）及び
／又は（３）の機能を併せて有する層のいずれかとする
ことができ、あるいは（１）を包含する複数の機能を適
宜分離し、各機能ごとに別の層を使用することも可能で
ある。更に（１）、（２）及び（３）の機能のうち、２
つの機能を有する層と、残りの１つの機能を有する層を
組合せて使用することもできる。例え１ｆ、前述の特公
昭５３−２１６７７号に記載された二酸化チタン及び二
酢酸セルロースから成るプラッシュポリマと呼称される
非繊維多孔質媒体の展開層、特開昭５５−１６４３５６
号に記載された親水化処理した織布の展開層、特開昭５
７−９４６５８号、同５７−１２８４７号、同５７−１
９７４６６号及び同５ｇ−７０１６１号等に記載された
繊維構造展開層、特開昭５８・９０１６７号に記載され
た粒子結合体構造展開層が挙げられる。特に、上記繊維
構造展開層及び粒子結合体構造展開層は、血球部分も速
やかに移送することが可能な素材として特に有用である
。

本発明の分析素子における展開層の膜厚は、その空隙率
によって決定されるべきであるが、好ましくは約１００
〜６００Ｐｍ、更に好ましくは約１５０〜４００μ−で
ある。また、空隙率は好ましくは約２０〜８５％である
。

上記多孔性展開層には、前述の試薬層の場合と同様、体
液試料中のエタノールと直接的又は間接的に関与する試
薬を含有することができる。

また他の付加的な添加剤として、例えば保恒剤、界面活
性剤等、種々の添加剤も所望に応じて添加することもで
きる。

特に界面活性剤は、体液試料を本発明の分析素子に適用
した際の浸透速度の調節等有効に用いることができる。

使用可能な界面活性剤としては、イオン性（アニオン性
又はカチオン性）、非イオン性を問わず使用することが
可能であるが、非イオン性界面活性剤が有効である。非
イオン性界面活性剤の例としては、例えば２．５−ジ−
ｔ−ブチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−オ
クチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−゛イソ
ノニルフェノキシポリエチレングリコール等のアルキル
置換フェノールのポリアルキレングリコール誘導体、高
級脂肪酸のポリアルキレングリコールエステルなどが挙
げられる。これらの界面活性剤は体液試料の試薬層への
浸透速度を調節し、同時に好ましからざる　「クロマト
グラフィ現、象」の発生を抑制する効果を有する。

上記界面活性剤の量は広範に選ぶことが可能であるが、
塗布液の重量に対して０．００５〜２５ｗｔ％、好まし
くは０．０５〜１５ｗｔ％用いることができる。

上記の不透液性の透明性支持体（以下、本発明に係る支
持体と略す）は、不透液性で、かつ透明であればその種
類を問わないが、例えば酢酸セルロース、ポリエチレン
テレフタレート、ポリカーボネート又はポリスチレンの
ような種々の重合体材料のみならず、ガラスのごとき無
機材料も用いることが可能である。本発明に係る支持体
の厚さは任意であるが、好ましくは５〜２５０μ−であ
る。

また、本発明に係る支持°体の観測側の一側面は、その
目的に応じて任意に加工することが可能である。更に試
薬層を積層する側の支持体面に、場合によっては邊明な
下塗り層を使用して試薬と支持体との接着性を改良する
ことができる。

上記の一体塁多層分析素子は必要に応じて、例えば米国
特許３，９９２．１５８号記載の反射層、下塗り層、米
国特許４，０４２．３３５号記載の放射線ブロッキング
層、米国特許４，０６６．４０３号記載のバリヤ層、米
国特許４．１６６．０９３号記載のマイグレーシ望ン阻
止層、特開昭５５−９０８５９号記載のスカベンジャ層
、及び米国特許４，１１０，０７９号記載の破壊性ボッ
ド状部材等を任意に組合せて本発明の目的に合せた任意
の構成とすることができる。

これら分析素子の種々の層は、本発明に係る支持体上に
所望の構成に従い、従来写真工業において用いられてい
るスライドホッパ塗布法、押出し塗布法、浸漬塗布法等
を適宜選択して用い、順次積層することで任意の厚みの
層を塗設することができる。

本発明の発色、発光試薬類を、試薬層塗布液に添加する
方法は、上記試薬類の化学構造等に応じて、適宜選択す
ることができる。ｆｌえば、水、緩衝剤水溶液、有機溶
媒等に溶解して添加する方法、固体分散法、ラテックス
分散法、水中油滴を乳化分散法等種々の方法を用いるこ
とができる。

次に本発明の分析素子及びその使用についてその態様例
を用いて説明する。

第１図において、ｌは臨床化学用分析装置本体、２は分
析素子である。分析素子２は第２図に示すように測光窓
２１ａを有するマウントベース２１と、体液点着孔２２
ａを有するマウントカバー２２との間に一定の試薬を含
浸した試薬層に展開層を積層した検出子（フィルム）２
３を介装してなり、該マウントカバー２２の表面には試
薬データを判別するための基準発色コード２４が５ビツ
トで判別できるように表示されている。該分析素子２は
前記本体ｌの前面１ａに設けた素子挿入口１１より挿入
することにより本体ｌ内に設置した１対の素子搬入用の
ローラによって挟持され、インキュベーション手段の中
に搬入される。インキュベーション手段は分析素子２を
設定温度に保持すると共に、液体を点着した分析素子２
を設定時間後に測光部に移送するようにしたものである
。

次に簡便に体液、特に唾液を採取し特別な分析機器を必
要としない分析素子の態様例を第３図に示す。

上記例は透明な支持体上に試薬層を設け、その上に各種
体液成分の夫々に不活性で唾液を均一に延展しうる透液
性の展開層を設けた形態である。

唾液採取部材（採取部材と略称）は唾液の所定量の採取
が可能で且つ採取された唾液を含蓄し更に少なくとも試
薬層、展開層からなる検水部材に容易に必要唾液量を放
出供与できる柔軟な多孔質の素材が選ばれる。

前記検水部材と採取部材は連結されており、検水部材の
展開層に採取部材が接面するようにそれらのホールダ間
を可視性または折曲げ自在とじた連結部材で連結し前記
両部材面を離接自在としている。

更に分析素子の性能補完成は保全、測定操作の利便のた
め各種の補助部材、補助構成層を付帯させることができ
る。例えば分析素子未使用・時のカバー、検水及び採取
部材圧接維持のためのホック、両部材を保持するマウン
ト等を備えることが好ましい。

第３図に於て、ｌは検水部材であって、支持体１１上に
試薬を含有する試薬層１２、璽にその上に展開層１３を
積層した構成をもち、唾液点着孔４１．観測窓４２を有
するマウント４に挟着されている。

２は採取部材であって、検水部材１と採取部材２を連結
する連結部材３に接着層２３によって接着されており、
唾液点着孔４１を蔽って展開層１３に対面している。

連結部材３は展開層１３に対して開閉自在にその一端が
マウント４に固定され、他端に設けたホック３１によっ
てマウント４に嵌着されている。尚該連結部材は分析素
子未使用時閉じて検水部材ｌ及び採取部材２のカバーと
なり、開いて唾液を採取する時の“猟み“となり、再び
閉じてホック３１を嵌着すれば採取部材２と展開層１３
の間の圧接を維持することができる。

又、用いる体液試料の量は、体液試料が十分含浸される
量以上であれば任意であるが、１ｃｍ”当たり好ましく
は約５０μａ〜約５μａであり、更に好ましくは約２０
μａ〜約５μａである。通常的１ＯｐＱの体液試料を適
用することが好ましい。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明する。

実施例−１ 厚さ１８０μ嘗の透明な下塗り済ポリエチレンテレフタ
レート支持体上に、下記組成の塗布液を２５０μｍのギ
ャップを有するドクタブレードを用いて塗布を行った・
。

（試薬層） オセインゼラチン　　　　　　　　　　１５．０ｇ蒸留
水　　　　　　　　　　　　　　１２０．０ｇトリトン
Ｘ　−１００（ノニオン界面活性剤）ＨＥＰＥＳ＊’ １．７−シヒドロキシナフタレン ジメドン ４−アミノアンチピリン塩酸塩 サツカロ−ス ペルオキシダーゼ アルコールオキシダーゼ アルコルビン酸オキシダーゼ １．２−ビス（ビニルスルホニル） メタン １．５ｇ ３．６ｇ ０．４０ｇ ０．１４ｇ ０．６１ｇ １．５ｇ ０００Ｈ １０００［１ ｔｏｏｏｏ■ ０．０５ｇ ”ＨＥＰＥＳ；Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−
Ｎ’−２−エタンスルホン酸 ３０％水酸化カリウム水溶液を加えてｐＨを７．２に調
整した後、蒸留水を加えて、重量を１５０ｇとする。

更にこの上層にＮ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重
合体（共重合比４：ｌ）の５％−テトラヒドロフラン溶
液を１２５μ園のギャップを有するドクタブレードを用
い塗布乾燥し、接着層とした。

次いで、下記組成の分散液を、６２５μ■のギャップを
有するドクタブレードを用い、塗布、乾燥シ、展開層と
した。

（展開層） ト　　リ　　ト　　ン　Ｘ−１００７，３ｇキシレン　
　　　　　　　　　　　　　２２４ｇスチレン−グリシ
ジルメタアクリレート１８．３ｇ 濾紙原材料粉末Ｄ　　　　　　　　　　７２．８ｇこの
ようにして作成した検出子フィルムを１．５０ｍＸ１．
５ｃｍに所載し、プラスチック・マウントに封入して本
発明のアルコール分析素子−１とした。

更に上記試薬層からアスコルビン酸オキシダーゼを除い
た比較アルコール分析素子（１）を作成した。

ヒト唾液にエチルアルコールを添加し、０〜３００ｔａ
ｇ／ｄｌｌの範囲で、種々のアルコール濃度の唾液を用
意した。これらはＴＤＸ　（登録商標、アボット社製）
を用いてアルコール濃度を測定した。

次に、この唾液を用い、前記本発明のアルコール分析素
子−１及び比較アルコール分析素子−（１）に、上記唾
液を１ＯＰａ点着し、３７℃で密閉状態で、７分間イン
キュベージジンした後、５４６ｎ＠のフィルターを用い
て、反射濃度（Ｄ　ｒ）を測定し、アルコール濃度に対
してプロットし、検量線とした。

更に％　５０ｍｇ／ｄΩのアルコールを含有するヒト唾
液に、アスコルビン酸を添加し、アスコルビン酸濃度が
０．１．５．３．６．１０．２０■ｇ／ｄ１２になるよ
うにした。

これらの検体を用い、同様に測定を行い、前述の検量線
と照合し、アルコール濃度を算出した。

結果を下記の表−１に示す。

上段は、アルコール濃度（単位ｍｇ／ｄＱ）下段は、ア
スコルビン酸０■ｇ／ｄｆｆを１００としたときの変動
率表−１から明らかなように、本発明の分析素子−１は
、比較の分析素子−（１）に比較して、アスコルビン酸
の影響を受けに＜＜、正確な測定ができるものであった
。

実施例−２ 厚さ１８０μ■の透明な下塗り済ポリエチレンテレフタ
レート支持体上に、下記の組成の塗布液を２５０μ−の
ギャップを有するドクタブレードを用いて、塗布を行っ
た。

（試薬層） オセインゼラチン　　　　　　　　　　１５．０ｇ蒸留
水　　　　　　　　　　　　　　１２０．０ｇト　！Ｊ
　　ト　７　　Ｘ　　−１００１−５ｇサッカロース　
　　　　　　　　　　　　１，５ｇ塩酸セミカルバジド
　　　　　　　　　０．２０ｇＮｅｏ−ＴＢ本木本　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　０．７５ｇアルコールデヒドロゲナーゼ　　　　１０
００００ジアホラーゼ　　　　　　　　　　　　３００
００アスコルビン酸オキシダーゼ　　　　　５０００■
１．２−ビス（ビニルスルホニル）メタン０．０５ｇ 木本Ｉ　Ｎｅｏ−ＴＢ　；　３．３’−（４１４’−ビ
フェニレン）−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈテトラ
ゾリウムクロライド） １０％水酸化カリウム水溶液を加えて、ｐＨを６．５に
調整した後、蒸留水を加えて、重量を１５０ｇとする。

更に、この上層に下記の組成の塗布液を１２５μｍのギ
ャップを有するドクタブレードを用いて塗布。

乾燥し、緩衝剤を含有した接着層とした。

（接着層） ト　リ　ト　ン　Ｘ　　−１０００，６ｇテトラヒドロ
７ラン　　　　　　　　１１０．０ｇＮ−ビニルピロリ
ドン−酢酸ビニル共重合体（共重合比４：ｌ）　　　　
　　　　　　３．６ｇトリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタン６．８４ｇ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩１．４
６ｇ 次いで、下記の組成の分散液を６２５μ−のギャップを
有するドクタブレードを用い、塗布乾燥し展開層とした
。

（展開層） 、　ト　　リ　　ト　　ン　Ｘ　　−１００７，３ｇキ
シレン　　　　　　　　　　　　　２２４．０ｇスチレ
ン−グリシジルメタアクリレート８１ｇ 濾紙原材料粉末Ｄ７２．８ｇ ＮＡＤ”　　　　　　　　　　　　　　　　　１．８ｇ
このように作成した検出子フィルムを１　、５ｃｍ　ｘ
ｌ、５ｃｍに所載し、プラスチックマウントに封入して
、本発明のアルコール分析素子−２とした。

また更に上記試薬層からアスコルビン酸オキシダーゼを
除いた比較用アルコール分析素子−（２）を作成した。

実施例−１と同様に種々のアルコール濃度のヒト唾液を
用いて、前記の本発明のアルコール分析素子−２及び比
較アルコール分析素子−（２）で、検量線を作成した。

更に実施例−１と同様に、０　、１．５．３．０゜６．
０．１０．２０霞ｇ／ｄｆｆ濃度のアスコルビン酸含有
唾液（このときのアルコール濃度は５０ｍｇ／ｄｆｆ）
で、測定を行い、上記の検量線から、アルコール濃度を
算出した。

結果を下記の表−２に示す。

下段は、アスコルビン酸Ｏａ＋ｇ／ｄｆｆを１００とし
たときの変動率衣−２から明らかなように、本発明の分
析素子−２は、比較の分析素子−（２）に比較して、ア
スコルビン酸の影響を受けにくく、正確な測定ができる
ものであった。

更に注意すべきは比較分析素子では数値が大きく出るこ
とであって無事を罰する慣れがある。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明に係る臨床化学用分析装置である。第２
図は本発明の分析素子の１態様例の分解説明図、第３図
は唾液を用いる簡易測定用分析素子の断面図である。 第２図に於て； ２１・・・マウントペース、２２・・・マウントカバー
２３・・・検出子（フィルム）、 第３図に於て； ｌ・・・検氷部材、　　　　　２・・・唾液採取部材、
３・・・連結部材、　　　　　　４・・・マウント、１
１・・・支持体、　　　　　　　１２・・・試薬層、１
３・・・展開層。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 　支持体上に少なくとも試薬層、展開層を順次積層し体
   液の含有物質の検索の用に供する分析素子において、前
   記試薬層にアルコールを酸化して、対応アルデヒド及び
   還元生成物を生成する酵素及び前記還元生成物の検出組
   成物並びにアスコルビン酸オキシダーゼを含有すること
   を特徴とするアルコール分析素子。