JPH0212059A - γ−アミノ酪酸分析法 - Google Patents
γ−アミノ酪酸分析法Info
- Publication number
- JPH0212059A JPH0212059A JP16364088A JP16364088A JPH0212059A JP H0212059 A JPH0212059 A JP H0212059A JP 16364088 A JP16364088 A JP 16364088A JP 16364088 A JP16364088 A JP 16364088A JP H0212059 A JPH0212059 A JP H0212059A
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- JP
- Japan
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- gaba
- aminobutyric acid
- column
- mmol
- analysis
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（技術分野）
本発明は、液体クロマトグラフィによりｒ−アミノ酪酸
を分析する方法に関する。
を分析する方法に関する。
（従来技術）
γ−アミノ酪酸（以下ＧＡＢＡという）は血液・尿等の
体液や臓詣中あるいは動・植物食品中に含まれている。
体液や臓詣中あるいは動・植物食品中に含まれている。
従来、ＧＡＢＡはメーアミノ酸類と同様に陽イオン交換
クロマトグラフィによる分離とＯＰＡあるいはニンヒド
リン発色による検出を組合せて分析を行っていた。
クロマトグラフィによる分離とＯＰＡあるいはニンヒド
リン発色による検出を組合せて分析を行っていた。
第５図は、従来法の陽イオン交換カラムを用いたＧＡＢ
Ａの分析結ＩＬを示すクロマトグラムである。本例のよ
うに、他のアミノ酸類の分離を無視して、ＧＡＢＡだけ
の測定条件を設定しても測定には約１５分間を必要とす
る。また、この条件で他の塩基性アミノ酸が遅れて溶出
するのでこれらの溶出金持って次の分析をするか、ある
いはカラムの洗浄、初期化を行った後に次の分析をする
ので連続した分析には更に長時間を必要とする。第５図
の分析条件は、カラムが内径４ ｍｍ 、長さ１５０ｍ
ｍの陽イオン交換カラム（Ｓｈｉｍ ｐａｃｋ ｌ５Ｃ
−０７／８１５０４）であって５５℃に温度制御されて
おり。
Ａの分析結ＩＬを示すクロマトグラムである。本例のよ
うに、他のアミノ酸類の分離を無視して、ＧＡＢＡだけ
の測定条件を設定しても測定には約１５分間を必要とす
る。また、この条件で他の塩基性アミノ酸が遅れて溶出
するのでこれらの溶出金持って次の分析をするか、ある
いはカラムの洗浄、初期化を行った後に次の分析をする
ので連続した分析には更に長時間を必要とする。第５図
の分析条件は、カラムが内径４ ｍｍ 、長さ１５０ｍ
ｍの陽イオン交換カラム（Ｓｈｉｍ ｐａｃｋ ｌ５Ｃ
−０７／８１５０４）であって５５℃に温度制御されて
おり。
移動相は０２規定くえん酸リチウム緩衝液（ｐＨ５，０
）で、その流量は０．３ ｍｅＡｎｉｒ＋である。検出
は０ＰＡ（オルトフタルアルデヒド）ｆｔ用いたボスト
カラム誘導体化法を用いた。
）で、その流量は０．３ ｍｅＡｎｉｒ＋である。検出
は０ＰＡ（オルトフタルアルデヒド）ｆｔ用いたボスト
カラム誘導体化法を用いた。
（目的）
本発明はこのような問題点に鑑みてなされたものであっ
て、その目的とするところはＧＡＢＡ’ｉ単一の移動相
によυ確実に分離させ、もって分析時間の短縮化を図る
ことができる液体クロマトグラフィによる分析方法を提
案することにある。
て、その目的とするところはＧＡＢＡ’ｉ単一の移動相
によυ確実に分離させ、もって分析時間の短縮化を図る
ことができる液体クロマトグラフィによる分析方法を提
案することにある。
（発明の概要）
すなわち０本発明が特徴とするところは液体クロマトグ
ラフィ分析法であって、シリカゲル担体に官能基として
炭化水素を化学結合して成るカラムを固定相に、５乃至
２０ミリモル／ｌｔのリン酸緩衝液にオクタンスルホン
酸ナトリウムを５乃至２０ミリ七〜／ｌ溶解し、かつそ
の水素イオン濃度をｐＨ４乃至５に調整した水溶液を移
動相に使用し、ＧＡＢＡｌに確実・迅速に分離させるよ
うにした点にある。
ラフィ分析法であって、シリカゲル担体に官能基として
炭化水素を化学結合して成るカラムを固定相に、５乃至
２０ミリモル／ｌｔのリン酸緩衝液にオクタンスルホン
酸ナトリウムを５乃至２０ミリ七〜／ｌ溶解し、かつそ
の水素イオン濃度をｐＨ４乃至５に調整した水溶液を移
動相に使用し、ＧＡＢＡｌに確実・迅速に分離させるよ
うにした点にある。
（実施例）
そこで以下に本発明の詳細を図示した実施例に基づいて
説明する。
説明する。
ｗｃ１図は０本発明に使用する装置の一例を示す流路図
であって９図中符号１はシリカゲル担体に炭化水素を官
能基として化学結合した固定相金充填してなるカラムで
、これの一端は試料導入口２゜ボンデ３を介して移動相
液槽４に、他端は反応液槽５９反応液ポンプ６よす成る
反応液流路と合流部７で合流し、ｊ応パイプ８（Ｑ、５
ｍｍＩＤで２０００ｍ長の５ＵＳＩＳＩＩパイプ）を介
してけい光検出器９に接続されている。１０はカラム１
と反応パイプ８を恒温に保つ恒温槽である。
であって９図中符号１はシリカゲル担体に炭化水素を官
能基として化学結合した固定相金充填してなるカラムで
、これの一端は試料導入口２゜ボンデ３を介して移動相
液槽４に、他端は反応液槽５９反応液ポンプ６よす成る
反応液流路と合流部７で合流し、ｊ応パイプ８（Ｑ、５
ｍｍＩＤで２０００ｍ長の５ＵＳＩＳＩＩパイプ）を介
してけい光検出器９に接続されている。１０はカラム１
と反応パイプ８を恒温に保つ恒温槽である。
このように構成された装置において、移動相液１２に２
０ｒｎＭリン酸ナトリウム緩衝液であって１０ｍＭのオ
クタンスルホン酸ナトリウムを含みそのｐＨｆｉｒ：４
．５１ｃ調整した水溶液を収容する。カラムｌは内径４
．Ｑｍｍ、長さ１５Ｑｒｎｍ、粒子径５μｍのＯＤ８シ
リカゲル充てんカラム（８ＴＲ−ＯＤＳ’Ｊ−Ｔ））を
使用した。反応液Ｉｍ５にＱ、８ｇ０ＰＡの１４ｍ１ｘ
タノー〜溶液と、０．４ｇポリオキシエチレンラウリｐ
エーテ〃と１ｇのＮ−アセチルシスティンと９８０ ｍ
ｇのアルカリ緩衝液（０，３４８Ｍの炭酸ナトリウム、
０．２１６Ｍのほう酸、０．１０８Ｍの硫酸カリウム水
溶液）を混合したＯＰＡ反応液を収容し０反応液ポンプ
６により流速０．５ ｍｌで送液した。けい光検出１ｉ
Ｓ９の励起波長は３４８ｎｍ、けい光波長は４５０１ｆ
ｆｌに設定した。
０ｒｎＭリン酸ナトリウム緩衝液であって１０ｍＭのオ
クタンスルホン酸ナトリウムを含みそのｐＨｆｉｒ：４
．５１ｃ調整した水溶液を収容する。カラムｌは内径４
．Ｑｍｍ、長さ１５Ｑｒｎｍ、粒子径５μｍのＯＤ８シ
リカゲル充てんカラム（８ＴＲ−ＯＤＳ’Ｊ−Ｔ））を
使用した。反応液Ｉｍ５にＱ、８ｇ０ＰＡの１４ｍ１ｘ
タノー〜溶液と、０．４ｇポリオキシエチレンラウリｐ
エーテ〃と１ｇのＮ−アセチルシスティンと９８０ ｍ
ｇのアルカリ緩衝液（０，３４８Ｍの炭酸ナトリウム、
０．２１６Ｍのほう酸、０．１０８Ｍの硫酸カリウム水
溶液）を混合したＯＰＡ反応液を収容し０反応液ポンプ
６により流速０．５ ｍｌで送液した。けい光検出１ｉ
Ｓ９の励起波長は３４８ｎｍ、けい光波長は４５０１ｆ
ｆｌに設定した。
また恒温Ｗ１１０は５５℃に設定したつこの状態でボン
デ３により移動相を流速１ ｍＪ／ｍｉｎで送液し。
デ３により移動相を流速１ ｍＪ／ｍｉｎで送液し。
試料導入口２より 、ＧＡＢＡの２０ ｕＶｍｌ Ｏ
，１規定塩酸溶液を１りμｌ導入して分析したところ、
第２因のクロマトグラムに示すように４．７分の位置に
ＧＡＢＡの独立したピークが検出された。第３図は第２
図と同一条件で、アミノ酸標準混合液を分析したクロマ
トグラムである。この標準混合液は和光紬薬製のＡＮ型
とＢ型全混合したもので。
，１規定塩酸溶液を１りμｌ導入して分析したところ、
第２因のクロマトグラムに示すように４．７分の位置に
ＧＡＢＡの独立したピークが検出された。第３図は第２
図と同一条件で、アミノ酸標準混合液を分析したクロマ
トグラムである。この標準混合液は和光紬薬製のＡＮ型
とＢ型全混合したもので。
生体液中に含まれるアミノ酸類３７種が含まれており、
ＧＡＢＡの濃度は５μｇ／１１−に調整されている。第
３図のクロマトグラムはこの溶液２０μｇｔ導入した結
果であり、第３図中のＧＡＢＡビークの高さが、第２図
中のＧＡＢＡビークの高さｂｑひい←４ことよ！ＩＧＡ
ＢＡは他の３６種のアミノ酸類から分離されることが明
らかとなった。第４図は第２図と同一条件で緑茶抽出液
中のＧＡＢＡを分析したものである。なお、これら分析
は１５分間隔でくシかえずことができた。
ＧＡＢＡの濃度は５μｇ／１１−に調整されている。第
３図のクロマトグラムはこの溶液２０μｇｔ導入した結
果であり、第３図中のＧＡＢＡビークの高さが、第２図
中のＧＡＢＡビークの高さｂｑひい←４ことよ！ＩＧＡ
ＢＡは他の３６種のアミノ酸類から分離されることが明
らかとなった。第４図は第２図と同一条件で緑茶抽出液
中のＧＡＢＡを分析したものである。なお、これら分析
は１５分間隔でくシかえずことができた。
つぎに、移動相中の上記リン酸緩衝液の濃度を５乃至２
０ｎ１Ｍの範囲内で変更すると共に、オクタンスルホン
酸ナトリウム１ｅ−５乃至２０ ｍＭの範囲内で変更し
、またＭ萌液のｐＨを４乃至５に変更し。
０ｎ１Ｍの範囲内で変更すると共に、オクタンスルホン
酸ナトリウム１ｅ−５乃至２０ ｍＭの範囲内で変更し
、またＭ萌液のｐＨを４乃至５に変更し。
またカラムをＯＤ８．ＣｓＫ変史してＧＡＢＡを分析し
たところ良好な分離を得た。
たところ良好な分離を得た。
（効果）
本発明の分析法によればＧＡＢＡの分析時間の短縮化を
はかることができる。
はかることができる。
第１図は本発明に使用する装置の一例を示す流路図であ
シ、第２図は本発明方法によるＧＡＢＡ分析のクロマト
グラムであシ、第３因は本発明方法によるＧＡＢＡｉ含
むアミノ酸標準混合液分析のクロマトグラムであり、第
４図は本発明方法による緑茶抽出液分析のクロマトグラ
ムでアリ、第５図は従来例の分析方法によるＧＡＢＡ分
析のりロマトグラムである。 図中 １ カラム ４ 移動相液槽 ５ 反応液槽 ８ 反応フＸφイフ０ ９ けい光検出器 ℃ｌＪ稙士； 寮＋図 寥３・図
シ、第２図は本発明方法によるＧＡＢＡ分析のクロマト
グラムであシ、第３因は本発明方法によるＧＡＢＡｉ含
むアミノ酸標準混合液分析のクロマトグラムであり、第
４図は本発明方法による緑茶抽出液分析のクロマトグラ
ムでアリ、第５図は従来例の分析方法によるＧＡＢＡ分
析のりロマトグラムである。 図中 １ カラム ４ 移動相液槽 ５ 反応液槽 ８ 反応フＸφイフ０ ９ けい光検出器 ℃ｌＪ稙士； 寮＋図 寥３・図
Claims (1)
- シリカゲル担体に官能基として炭化水素を化学結合して
成るカラムを固定相に、５乃至２０ミリモル／ｌのリン
酸緩衝液にオクタンスルホン酸ナトリウムを５乃至２０
ミリモル／ｌ溶解し、かつその水素イオン濃度をｐＨ４
乃至５に調整した水溶液を移動相に使用することを特徴
とする液体クロマトグラフィによるγ−アミノ酪酸分析
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16364088A JPH0212059A (ja) | 1988-06-30 | 1988-06-30 | γ−アミノ酪酸分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16364088A JPH0212059A (ja) | 1988-06-30 | 1988-06-30 | γ−アミノ酪酸分析法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0212059A true JPH0212059A (ja) | 1990-01-17 |
Family
ID=15777785
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16364088A Pending JPH0212059A (ja) | 1988-06-30 | 1988-06-30 | γ−アミノ酪酸分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0212059A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7297244B2 (en) * | 2001-01-19 | 2007-11-20 | Sebia | Capillary electrophoresis systems and additives |
| CN112444573A (zh) * | 2019-09-05 | 2021-03-05 | 广东乐尔康生物科技股份有限公司 | 一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法 |
-
1988
- 1988-06-30 JP JP16364088A patent/JPH0212059A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7297244B2 (en) * | 2001-01-19 | 2007-11-20 | Sebia | Capillary electrophoresis systems and additives |
| EP1229325B1 (fr) * | 2001-01-19 | 2015-10-07 | Sebia | Procédé de séparation de protéines par électrophorèse capillaire et compositions de tampon pour électrophorèse capillaire |
| CN112444573A (zh) * | 2019-09-05 | 2021-03-05 | 广东乐尔康生物科技股份有限公司 | 一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法 |
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