JPH021500A - コンアルブミン及びその金属複合体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は純度の高いコンアルブミン及びその金属複合体
を製造する方法に関するものである。

〔従来の技術〕

卵白中に存在し、卵白タンパク質のほぼ１３％を占める
コンアルブミン（別名オボトランスフェリン）は、その
−特性として鉄、銅、マンガン、亜鉛等の金属イオンと
結合する能力を有することから、例えばこれら金属要求
性の微生物の成長を阻止するための培地用試薬として、
またエビダーマルグロースファクターとのノ（存の下血
清代替成分として作用しうることから動物細胞用培地試
薬（特開昭５８−１１１６８２号公報）として従来より
利用されている。

近年のバイオテクノロジーの目覚ましい発展に伴い上記
したような従来の利用分野に限らず今後の利用拡大にお
いてもコンアルブミンは増々高純度のものが要求されて
きているのが現状である。

〔発明が解決しようとする課題〕

コンアルブミンの製造方法として従来、有機溶媒分画法
（特公昭４６−３８５４４号公報）、硫安分画法（Ｎｅ
ｗ　Ｆｏｏｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｖｏｌ、２４．Ｎｏ
、１．ｐ８８−８９（１９８２））等がよく知られてい
る。

有機溶媒分画法は、卵白に無機塩と共に３価の鉄イオン
を供給しうる物質の溶液を加えてコンアルブミン・鉄塩
合体を形成させ、次いで典型的にはアセトンでまずコン
アルブミン以外の蛋白性物質を沈澱、除去したのち再び
アセトンでコンアルブミン・鉄塩合体を沈澱させ、コン
アルブミンをこのようなｉ重合体の形態で分取する方法
である。

この方法ではアセトンのような有機溶媒を使用するため
に取扱上細心の注意が必要とされるだけではなく、アセ
トンでのコンアルブミン回収後の卵白は食品分野は無論
のこと他分野への利用も図り難いという問題がある。

また、硫安分画法は、卵白に等量の硫酸アンモニウムを
加えてまずアルブミン（炉液）とグロブリン（沈澱物）
とを分画した後、アルブミン画分に酸を添加してオボア
ルブミンを沈澱除去したのち更に硫酸アンモニウムを加
えてコンアルブミン画分を沈澱させて分取し、こうして
得られた両分を透析−エタノール沈澱させた後クエン酸
第二鉄を加えてコンアルブミン・鉄塩合体を形成させ、
再び透析−エタノール沈澱させてコンアルブミンを複合
体の形態で分取する方法である。このような塩析法では
大まかな分画はなし得ても卵白中に存在する多数のタン
パク質から選択的にコンアルブミンのみを沈澱させるこ
とはできず、高純度化には限度があるという問題が指摘
されている。

これら従来法において一層高純度の最終製品（コンアル
ブミン・鉄塩合体）を目的とする場合には、例えば有機
溶媒分画法では通常前述の操作を繰返し実施しているが
、得られる純度は精々７５％程度であり、また硫安分画
法では前述の操作を繰返し実施するか、あるいはゲル濾
過法、イオン交換クロマトグラフィー等の他の精製手段
を併用しているのが一般的であるが、得られる純度は精
々８０％程度である。しかもいずれも純度を上げるにつ
れ最終収率はかなり低下するという問題があった。

このような状況下にあって、本発明は、上記したような
従来法による諸問題を伴うことなく、工業的規模で簡易
に、しかも従来法に比べて一段と純度の高いコンアルブ
ミンを製造しつる方法を提供することを目的とする。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、上記の目的に即して鋭意研究を重ねたと
ころ、陽イオン交換樹脂により卵白からコンアルブミン
を吸着抽出した後その溶出液中のコンアルブミンを一畦
金属凌合体化し、次いでこの金属複合体の溶解液を再度
陽イオン交換樹脂を用いて精製するならば、従来法に比
べて簡易な操作でしかも極めて純度の高いコンアルブミ
ン・金属複合体、延いてはコンアルブミンが得られるこ
とを見出した。

本発明はこのような知見に基づいて完成されたものであ
って、本発明は第一に、コンアルブミンを吸着せる陽イ
オン交換樹脂に中性塩水溶液を接触させてコンアルブミ
ンを溶出させ、得られたコンアルブミン溶出液に２価あ
るいは３価の金属イオンを供給しうる物質を添加してコ
ンアルブミンの金属複合体を沈澱させ、次いて分取した
沈澱物を塩基性水溶液に溶解させたのちこの溶解液に陽
イオン交換樹脂を添加して夾雑タンパク質を吸着除去す
ることを特徴とするコンアルブミン−金属複合体の製造
方法を提（ｊｌ、するものである。

更に、本発明は第二に、上記の方法により夾雑タンパク
質を吸着除去後得られた溶液に酸を加え、コンアルブミ
ン・金属複合体から金属イオンを切離したのち溶液中の
金属塩を除去することを特徴とするコンアルブミンの製
造方法を提供するものである。

以下、本発明の詳細な説明する。

本発明の方法において、コンアルブミンを吸着せる陽イ
オン交換樹脂の作成は、卵白から陽イオン交換樹脂によ
ってコンアルブミンを吸着抽出することにより行えばよ
く、この実際の操作は任意である。一般的には、クエン
酸、塩酸等の酸添加によりｐＨを４．５〜５，５、好ま
しくは５．１〜５．２、に調整しくｐＨが４．５より低
いと卵白タンパク質は沈澱し易くなって好ましくない）
かつ充分にホモジナイズした卵白液にその液量の約１／
３倍容量の陽イオン交換樹脂を添加し、ゆっくりと数時
間（約１〜２時間）撹拌して卵白中のコンアルブミンを
上記陽イオン交換樹脂に吸着させ、次いで通常充分に水
洗してコンアルブミン吸着樹脂を作成する。ここにおい
て原料の卵白としては生卵白に限られず、冷凍卵白、乾
燥卵白あるいは公知の方法でリゾチーム、アビジン等を
抽出した後の卵白なども用いうる。尚、冷凍卵白は解凍
したものを、また乾燥卵白は卵白液に再調整したものを
用いることはいうまでもない。また、ここにおいて陽イ
オン交換樹脂としては市販されている、例えば下記のよ
うなものが好ましく用いうる。

ロームアンドバースト社製の、アンバーライトＩＲＣ−
５０，ＩＲＣ−８４、ＣＧ−５０、ダイヤモンド・ジャ
ムロックケミカル社製の、デニオライ１−Ｃ５−１０１
、ＣＣ−３、ＥＳ−８０、Ｃ−４６４Ｖ、ダウケミカル
社製のダウエックスＣＣＲ−２、バイエル社製の、レバ
チットＧＮＰ。

ＣＮＰ−８０、三菱化成工業（株）製の、ダイヤイオン
ＷＫ−１０、ＷＫ−１１、ＷＫ−２０等。

尚、実際の使用に際してこれら陽イオン交換樹脂は、卵
白液に添加する前にカセイソーダその他のアルカリ剤で
処理して約０．８〜１．１ミリ当量／ｍ！（樹脂）の陽
イオン（Ｈを除いたＮａ５Ｋ。

ＮＨ４等の陽イオン）置換形として用いると、ｐＨを調
整した卵白液に添加した際卵白液のｐＨがほとんど変化
しないので管理上都合がよい。

本発明の方法によれば、上記のようにして得られたコン
アルブミン吸着樹脂に中性塩水溶液を接触させてコンア
ルブミンを溶出させる。溶出に用いる中性塩水溶液とし
ては、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化アン
モニウム、硫酸ナトリウム等の水溶液でｐＨが中性付近
のものが好ましく、通常４．０〜８．０部程度の塩濃度
で用いる。；濃度が４．０９６より低いと溶出効率は低
下してくるが上記範囲内であると吸亡コンアルブミンを
ほぼ完全に溶出させることができるのであえて８、　　
ＩＪ％より高い濃度とする必要はない。溶出の操作は成
否樹脂からコンアルブミンを溶出させうる限り任意であ
る。一般的には容量比で眼前樹脂１部に対して中性塩水
溶液を１〜２部程度の割合で加えて３０〜６０分間程度
撹拌に付せばよい。

次いで樹脂を常法に弗じて、例えば濾過してコンアルブ
ミン溶出液を得る。

本発明の方法によれば、こうして得られたコンアルブミ
ン溶出液に２１ｉｌｆあるいは３ｇ６の金属イオンを供
給しうる物質を添加してコンアルブミンの金属複合体を
沈澱させる。ここにおいて２価あるいは３価の金属イオ
ンを供給しうる物質とは、例３＋　　　　　２＋ えばＦｅ　　、Ｃｕ　　％Ｍｎ２”、Ｚｎ２＋等コンア
ルフミンと結合して複合体を形成しうる金属イオンを供
給しうる無機あるいは有機の金属塩を意味する。このよ
うな物質として例えば、コンアルブミンと特に結合性の
強いＦｅ３＋を供給しうる金属塩、具体的には硝酸第二
鉄、塩化第二鉄、硫酸第二鉄、クエン酸第二鉄、コハク
酸第二鉄等が好ましく用いられる。実際の使用に際して
これら金属塩は１〜１０部程度の塩濃度の水溶液として
、一般的には容量比で溶出液１部に対して１１５０〜１
／７０部程度の割合で用いるのが好ましい。卵白タンパ
ク質中コンアルブミンのみが上記金属イオン、特にＦｅ
”ｈ結合して複合体を形成する性質をＨすることから、
このような操作によって溶出液中に存在していると思わ
れるリゾチーム、アビジン等の等電点がフンアルブミン
よりアルカリ側にある卵白タンパク質をこの段階で分離
除去することが可能となる。尚、卵白の原料として、既
にリゾチーム、アビジン等を抽出した後の卵白を用いた
場合であっても、リゾチームやアビジン等の卵白タンパ
ク質は溶出液中に依然極く住か残存していると思われる
ところから、上記の操作は必要である。

本発明の方法によれば、生じたコンアルブミン・金属複
合体の沈澱物を次いで分取したのち塩基性水溶液に溶解
させ、この溶解液に陽イオン交換樹脂を添加してその他
の夾雑タンパク質を更に吸着除去する。ここにおいて沈
澱物の分取は常法に準じて、例えば濾過によって行えば
よい。本発明者らは、こうして分取した沈澱物を直ちに
目的とするコンアルブミンや金属複合体とせずに、この
ものを塩基性水溶液に溶解させたのち百度陽イオン交換
樹脂で処理したところ意外にもその他の夾雑タンパク質
（等電点がアルカリ側にある夾雑タンパク質）が吸着除
去し得ることを見出した。尚、ここにおける「溶解」に
は、一部溶解、および分散あるいは一部分散状態にある
ものも含まれるものとする。

この廃用いる塩基性水溶液は、水に溶かしたとき塩基性
を呈しうる例えば通常の水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム等のアルカリ剤の水溶液でよい。尚、実際の操作に
際しては最終的に塩基性の水溶液中に溶解させた状態と
なし得る限りその手段はｆｆ−意であり、例えば沈澱物
を水に溶解させたのち水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ム等を添加して中性付近から塩基性、好ましくはｐＨ６
，５〜６．８、としてもよい。

また、この廃用いる陽イオン交換樹脂は卵白からコンア
ルブミンを吸着抽出する廃用いるものと何ら異ならない
。尚、使用に際して陽イオン交換樹脂は、これを中性付
近から塩基性水溶液中、好ましくはｐＨ６，５〜６．８
、で用いることからｒ・めカセイソーダその他のアルカ
リ剤で処理して約１．０〜１．４ミリ当量／ｍ１（樹脂
）の陽イオン置換形としておくとｐＨの管理上都合がよ
い。

ここで用いた陽イオン交換樹脂は使用後多少着色される
が、通常の酸、アルカリ処理あるいは加熱処理等により
脱色した後再使用に供することができる。尚、卵白から
コンアルブミンを吸着抽出する廃用いた樹脂も適宜陽イ
オン置換形に再生したのちユニにおいて再使用に供し得
ることはいうまでもない。

このような陽イオン交換樹脂での実際の吸着除去操作は
、特に限定的でないが、−膜内には沈澱物溶解液にその
液量と等容量の樹脂を添加し、ゆつくりと０．５〜１時
間撹拌して行えばよい。

上記操作によって吸着除去される夾雑タンパク質は、電
気泳動法で調べたところ分子量’）０．　００（１〜６
（’）、０００の卵白タンパク質であることがわかった
が、今だそれらが何であるか特定されていない。多分、
オボアルブミンあるいはコンアルブミンの変性物質では
ないかと考えられる。

本発明の方法によれば、夾雑タンパク質を吸着させた陽
イオン交換樹脂は次いで常法により分離、例えば炉別し
、こうして得られるか液を、所望する場合はそのまま、
あるいは更に乾燥処理に付し、例えば凍結乾燥に付して
コンアルブミン・金属複合体として製品とすることがで
きるが、通常、この炉液に酸を加えてコンアルブミン・
金属複合体から金属イオンを切離したのち生じた金属塩
を溶液から除去し、コンアルブミンを製造する。

夾雑タンパク質を除去した後のコンアルブミン・金属複
合体溶液に加える酸としては、無機あるいは白°機のい
ずれの酸も用いうるが、−膜内にはクエン酸、硝酸、塩
酸等が好ましく用いられる。

これらの酸は通常５〜２０％程度の水溶液として一般的
には容量比で上記溶液１部に対して１／２０〜１／３５
部程度の割合で用いるのが好ましい。この操作は酸溶液
を添加後通常０．５〜１時間程撹拌を続けて行う。

上記操作によって複合体から切離された金属イオンは添
加酸によって直ちに金属塩とされるが、こうして形成さ
れた金属塩を次いで溶液から除去する。この除去操作は
特に限定的でなく、例えば、陰イオン交換樹脂を用いる
吸む除去法、あるいは限外ン濾過法等いずれの方法によ
ってもよい。陰イオン交換樹脂による吸む除去法が操作
が容易でかつ効率も良いことから好ましい。陰イオン交
換樹脂としては市販の、例えばアンバーライトＩＲＡ−
４５、ＩＲＡ−４１０；デュオライトＡ−５６１、Ａ−
３６８；ダウエックスＭＷＡ−１、ＷＧＲ，ダイヤイオ
ンＷＡＩＯ１ＷＡ２０、ＷＡ３０等が好ましく用いられ
る。このような樹脂を用いた吸着除去操作は、−膜内に
は容量比で対象溶液１部に対して吸着樹脂を１／３〜１
１５部程度の割合で加えて２０〜４０分間程撹拌に付せ
ばよい。尚この際吸着効率を上げるために、例えばＩ　
ＮＭＣＩを用いて溶液のｐＨを４．０〜４．５に維持す
るとよい。

金属塩を吸着させた陰イオン交換樹脂は次いで常法によ
り分離、例えばか別し、こうして得られるン戸液はその
まま、あるいは更に他の脱塩操作、例えば電気透析、モ
ザイク荷電膜脱塩、メンプラン？濾過等との組合せ操作
を実施したのち乾燥処理に付し、例えば凍結乾燥に付し
て粉末状物としてコンアルブミンの製品とすることがで
きる。

上記したような本発明の方法により得られるコンアルブ
ミンは通常純度９４〜９５％あるいはそれ以上の製品で
あり、また原料卵白からの収率は通常０．７９６〜０．
８９６程度である。これらの値は、後述の試験例の結果
から明らかなように、従来の白゛機溶媒分画法ではその
純度および収率がそれぞれ高々７５％および０．６％で
あり、硫安分画法ではそれぞれ高々８０％および０．５
％であることから、極めて高いことがわかる。

〔実施例〕

以下、本発明を実施例でもって更に詳しく説明する。尚
、本発明において％は重量％を意味する。

実施例Ｉ Ａ、コンアルブミン吸着樹脂の作成： ｌＮＨＣｌの添加でｐＨを５．２にし、かつ充分にホモ
ジナイズした卵白液（リゾチームおよびアビジン抽出後
の卵白液）５０００ｍｌに対して、予めアルカリ処理し
て１．Ｏミリ当ｆｆｉ／ｍｌ　（樹脂）のＮａ−形とし
た陽イオン交換樹脂（ダイヤイオンＷＫ　−１０）　１
５００ｍｌを添加し、ゆるやかに撹拌しつつ２時間保持
した。次いで卵白液を傾斜、濾過により除去したのち清
水で充分に洗浄してコンアルブミン吸着樹脂を得た。

Ｂ、コンアルブミンの溶出： 上記のようにして得られたコンアルブミン吸着樹脂１５
ＱＯｍｌに５５食塩水３０００ｍＩを添加し、３０分間
ゆるやかに撹拌しつつコンアルブミンを液中に溶出させ
た。次いで溶出液を炉別した樹脂にもう一度同一濃度の
食塩水５００ｍ１を添加して押出しを行ない、この液と
先の溶出液とを合わせた。

Ｃ，コンアルブミン・金属複合体の製造：こうして得ら
れたコンアルブミン溶出液３５０（’１ｍ＋に５％の硝
酸第二鉄水溶液６０ｍ１を加え、コンアルブミン・鉄塩
合体を沈澱させた。次いで濾過してこの沈澱物を分取し
たのち清水１０１００Ｏに溶解させ、ＩＮの水酸化ナト
リウム水溶液でｐＨを６．５とした。この塩基性溶解成
約１０１００Ｏに予めアルカリ処理して１．２ミリ当量
／ｍｌ（樹脂）のＮａ−形とした陽イオン交換樹脂（ダ
イヤイオンＷＫ−１０）１０００ｍｌを添加し、ゆるや
かに撹拌しつつ３０分間保持した。

次いで夾雑タンパク質を吸着させた樹脂をン戸別し、コ
ンアルブミン・鉄塩合体を含むン戸液を得た。

Ｄ、コンアルブミンの製造： 夾雑タンパク質を除去した後のコンアルブミン・鉄塩合
体溶液に２０％クエン酸水溶液３０ｍ１を加え、１時間
撹拌を行なった。次いで陰イオン交換樹脂（ダイヤイオ
ンＷＡ−１０）３００ｍｌを添加し、３０分間ゆるやか
に撹拌を続けた。尚、この際ｌＮＨＣｌを用いて溶液の
ｐＨを４．０〜４．５に維持した。

金属塩を吸着させた陰イオン交換樹脂を炉別し、得られ
たか液は更に電気透析、メンブラン濾過（（’１．４５
μｍ）に付し１次いで常法に準じて凍結乾燥させて粉末
状物（純度９５％）３８Ｋ　（原料卵白液からの収率０
，７６％）を得た。尚、純度は電気泳動法により測定し
た。

実施例２ Ａ、コンアルブミン吸着樹脂の作成： ＩＮＨＣｌでｐＨを５．２に調整し、かつ充分にホモジ
ナイズした卵白液（割卵後卵黄を分離して得た卵白液）
５４００ｍｌに対して、予めアルカリ処理して０．９ミ
リ当量／ｍｌ（樹脂）のＮａ−形とした陽イオン交換樹
脂（ダイヤイオンＷＫ−１０）２０００ｍｌを添加し、
ゆるやかに撹拌しつつ２時間保持した。次いで卵白液を
傾斜、濾過により除去したのち清水で充分に洗浄してコ
ンアルブミン吸着樹脂を得た。

Ｂ、　　コンアルブミンの溶出二 上記のようにして得られたコンアルブミン吸着樹脂２０
００　ｍｌ　Ｌ　５９６食塩水２０００ｍ１を添加し、
３０分間ゆるやかに撹拌しつつコンアルブミンを液中に
溶出させた。

Ｃ，コンアルブミン・金属複合体の製造：樹脂を炉別し
て得られたコンアルブミン溶出液２０００ｍ１ｌ：１％
の硝酸第二鉄水溶液３００ｍ１を加え、コンアルブミン
・鉄塩合体を沈澱させた。

次いで濾過してこの沈澱物を分取したのち清水１０１０
０Ｏに溶解させ、ＩＮの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ
を６．４とした。この塩基性溶解成約１０１００Ｏに予
めアルカリ処理して１．２ミリ当量／ｍｌ（樹脂）のＮ
ａ−形とした陽イオン交換樹脂（ダイヤイオンＷＫ　−
１０）　１０００ｍｌを添加し、ゆるやかに撹拌しつつ
３０分間保持した。

次いで夾雑タンパク質を吸着させた樹脂を炉別し、コン
アルブミン・鉄塩合体を含むン戸液を得た。

Ｄ、コンアルブミンの製造： 夾雑タンパク質を除去した後のコンアルブミン・鉄塩合
体溶液に２０％クエン酸水溶液４０ｍ１を加え、３０分
間撹拌を行なった。次いで陰イオン交換樹脂（ダイヤイ
オンＷＡ　−１０）　３００ｍｌを添加し、３０分間ゆ
るやかに撹拌を続けた。尚この際ｌＮＨＣｌを用いて溶
液のｐＨを４，５に維持した。

金属塩を吸着させた陰イオン交換樹脂をン戸別し、得ら
れたン戸液は更にモザイクＱＴ＆膜脱塩処理に付し、次
いで常法に準じて凍結乾燥させて粉末状物（純度９５％
）３７ｇ　（原料卵白液からの収率０、７％）を得た。

純度測定は上記実施例１の場合と同様に電気泳動法によ
り行なった。

〔発明の効果〕

本発明の方法によれば従来法に比べて一段と純度の高い
コンアルブミン・金属複合体および／あるいはコンアル
ブミンが得られることを、従来の有機溶媒分画法あるい
は硫安分画法による場合と比較試験を行なった結果でも
って実証する。

比較試験 ■６本発明法 上記実施例２のＡ−Ｃの工程を実施して得たコンアルブ
ミン・鉄塩合体溶液を、常法に準じて凍結乾燥に付し、
コンアルブミン・鉄塩合体粉末を得た。この製品の純度
を電気泳動法により測定したところ９４２６であった。

・また、原料卵白液からの収率は０．８９６であった。

次いで、このコンアルブミン・鉄塩合体粉末の２０％水
溶液を調整し、上記実施例２のＤ工程と同一条件の下で
この溶液からコンアルブミンを粉末状物として製造した
ところ、この製品の純度は９５％で、原料卵白液からの
収率は０．　７％であった。

■、白°機溶媒分画法 この従来法は、特公昭４６−３８５４４号公報で開示せ
る実施例２の方法に準じて以下の通りに実施した。

上記実施例２で用いた卵白液と同じように、割卵後卵黄
を分離して得た卵白液５０００ｍｌに食塩１６０ｇを加
え、次いでクエン酸第二鉄水溶液１２５ｍ１を徐々に添
加して撹拌した。この溶液をｐＨ８，５に調整後、アセ
トン２．５１）ヲ徐々に加え、生じた沈澱を除去後、得
られた炉液をｐＨ８，０に調整した後更にアセトン２．
　５ｊ？を撹拌しながら加え、コンアルブミン・鉄塩合
体を沈澱させた。この沈澱物を炉底し、セライトを用い
た成心、溶出方法で精製したのち凍結乾燥して赤色の乾
燥粉末８５ｇを得た。

こうして得られたコンアルブミン・鉄塩合体製品の純度
を電気泳動法によりａｌｌｌ定したところ７０％であっ
た。また原料卵白液からの収率は０．　７９６であった
。

次いで、このコンアルブミン・鉄塩合体製品の２０％水
溶液を調製し、上記実施例２のＤ工程と同一条件の下で
この溶液からコンアルブミンを粉末状物として製造した
ところ、この製品の純度は７５％で、原料卵白液からの
収率は０．　６％であった。

■、硫安分画法 コノ従来法は、Ｎｅｗ　Ｆｏｏｄ　ＩｎｄｕｓＬｒｙ　
Ｖｏｌ、２４．Ｎｏ。

＋　、ｐ８ｇ−８９（１９８２）で開示せる方法に準じ
て以下の通りに実施した。

上記実施例２で用いた卵白卵と同じように、割卵後卵黄
を分離して得た卵白液５４００ｍ１に等量の飽和硫酸ア
ンモニウム溶液を加え、生じた沈澱物を除去し、次いで
０．５Ｍ硫酸溶液でｐＨ４，６に調整後、更に硫酸アン
モニウム８６５ｇを加え、生じた沈澱物を集めて冷所で
透析した。

生じた少量の沈澱物を除去した後ｐＨを６，０とし、ン
戸液に対し濃度が０．０２Ｍとなるように食塩を添加し
、次いで２０ｖ／ｖ％の濃度にエタノールを加え、沈澱
を生じさせた。この沈澱物を分取し、これに５％クエン
酸第二鉄水溶液６０ｍ１を添加後、ｐＨを９．０として
透析し、次いでｐＨを６．０にａ整し、更に濃度が０．
０２Ｍとなるように食塩を添加した。次いで１５ｖ／ｖ
％となるようエタノールを添加し、赤色のコンアルブミ
ン・鉄調合体を得た。

次いで、こうして得られたコンアルブミン・鉄塩合体製
品の２０％水溶液を調製し、上記実施例２のＤ工程と同
一条件の下でこの溶液からコンアルブミンを粉末状物と
して製造したところ、この製品の純度は８０％で、原料
卵白液からの収率は０．５９ｏであった。

上記比較試験例および前記実施例１および２の結果から
、本発明の方法によれば従来法に比べて一段と純度の高
いコンアルブミン・金属複合体、延いてはコンアルブミ
ンを製造しうることが明らかである。しかも本発明の方
法では有機溶媒を全く用いないのでその取扱上の煩雑さ
がないばかりか、原料卵白がそれによって汚染されるこ
ともないのでコンアルブミン回収後の卵白の９効利用が
図れるという利点がある。その上、本発明の方法によれ
ば一回の操作で高純度の製品が得られ、しかもその操作
は簡易であるので工業的規模での実施が可能である。

出願人代理人　　佐　　藤　　−雄

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、コンアルブミンを吸着せる陽イオン交換樹脂に中性
   塩水溶液を接触させてコンアルブミンを溶出させ、得ら
   れたコンアルブミン溶出液に２価あるいは３価の金属イ
   オンを供給しうる物質を添加してコンアルブミンの金属
   複合体を沈澱させ、次いで分取した沈澱物を塩基性水溶
   液に溶解させたのちこの溶解液に陽イオン交換樹脂を添
   加して夾雑タンパク質を吸着除去することを特徴とする
   コンアルミブミン・金属複合体の製造方法。 ２、請求項１の方法により夾雑タンパク質を吸着除去後
   得られた溶液に酸を加え、コンアルブミン・金属複合体
   から金属イオンを切離したのち溶液中の金属塩を除去す
   ることを特徴とするコンアルブミンの製造方法。