JPH02152999A - 免疫学的測定法における非特異的反応の除去・抑制に用いるモノクローナル抗体由来物質、その製造方法及びその使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は免疫学的測定法に閏するちのであって、詳しく
は、モノクローナル抗体を用いた免疫学的、１１＋１定
法における非特異的な反応を除去又は抑制する方法及び
それに用い（ｑるべく処理されたモノクローナル抗体由
来物質に関Ｖるものである。

（従来の技術） 免疫反応を利用した測定法は、種々の臨床検査に応用さ
れているが、近年特に、モノクローナル抗体の高い特異
性を利用することによって、従来のポリクローナル抗体
では不可能であるか又は国ｆｌ　Ｔ−あったところの、
微聞物質の特異的な又はそれに準じた検出・定理が可能
となり、その結果、従来より高度な検査診断に関する有
益な情報が得られるようになってきた。

例えば、癌細胞でマウスを免疫し、細胞融合の技術を用
いて種々のモノクローナル抗体が作られ、それらが認識
する抗原決定基の性質が検討された。

イの結果、これらのモノクローナル抗体がしばしば糖鎖
を認識していることが明らかになり、さらにこの糖鎖が
細胞の癌化に伴って変化することが見出され、この変化
した糖鎖を認識するモノクロ−犬ル抗体を得れば、逆に
糖鎖の癌性変化を検出する有力な手段となり得ることが
判明してきた。

従って、この様なモノクローナル抗体を用いて検出され
る糖鎖は、細胞の癌化、ずなわら腫瘍を発見１ろための
マーカー（腫）ロマーカー）として利用づることが可能
である。

実際に糖鎖を認Ｊｇる種々の七ツクローナル抗（木が作
られ、腫瘍マーカー・の測定に応用されている。たとえ
ば１つの例どして、ヒト人賜癌由来培３　ＩＩ　ｌ１３
１Ｓ　Ｗ−１１１６から見出された糖鎖抗原Ｃａｒｂｏ
−ｂｙｄｒａｔｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　１９−９　（ＣＡ
１９−９）が膵・胆道系癌の腫瘍マーカーとして有用で
あることが判り、この抗原に対するモノクローナル抗体
１１１６−　Ｎ５１９−９がＣＡ　１９−９を特異的に
認識することが報告された（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ、Ｉｌ
、、　ｅｔ　ａｌ、　　：　Ｃｏ１ｏｒｅｃｔａｌＣａ
ｒＣｉｎ０１１１ａ　　ａｎｔｉ（］ｅｎＳ　　ｄｅｔ
ｅＣｔ（３ｄ　ｂｙ　ｈｙｂｒｉｄｏＩ！１ａａｎｔｉ
　ｂｏｄｉｅｓ、　　Ｓｏｍａ（ｉｃ　Ｃｅ１ｌ　Ｇｅ
ｎｅｔｉｃｓ　　５：９５７１９７９）。特に、この様
な抗原が血清等の体液中に存在し、これを測定できるな
らば、臨床的な癌の診断法として非常に有用なものであ
り得る。実際に前述のＣＡ　１９−９は膵・胆道系癌を
中心としだ挿瘍マーカーとして評（萌されている。

しかしながら、この様な抗原は、血清等の体液中に掻く
低ｉ１１度でしか７７在しないため、その検出に（よ非
常に高感度の測定法が必要とされる。その要求を満たす
ものとして、放射免疫測定法（［ＩＡ）、酵素免疫測定
法（Ｅ　ＩＡ）　、蛍光免疫澗定法（ＦＩＡ）等が挙げ
られ、さらには、化学発光法の応用や、ラテックス凝集
法の応用等も考えられる。これらの測定法においては、
その検出手段は夫々異なるが、いずれも免疫学的反応を
基本とし、各々免疫反応を定量的に反映する放射ｍ［Ｆ
］や先組を測定するものである。これらの測定法のうち
、高感度測定法として実際の臨床検査レベルで使われて
いる方法としては、ＲＩＡが最も多く、次いでＥＩＡで
あるが、最近では、ＦＩＡも一部可能になってきている
。これらの測定法を更に細かく分類することも可能であ
る。

上記の測定法のうち、上市されているＲＩＡ。

ＥＩＡ等による測定キットの大部分で採用されている固
相ナンドインチ法について説明すると、サンドインチＲ
ＩＡ法によって抗原の測定を行う場合、先ず、ガラス、
プラスチック等により成る不活性な担体に被測定物質と
特異的に反応するモノクローナル抗体を吸着・同相化し
ておき、次に、これに試料中の抗原を接触させ、免疫反
応によって抗原と抗体を結合させる。さらにこの結合抗
原に対し、放射性同位元素を結合させた抗体くラジオア
イソトープ標識抗体）を反応させると、抗原をはさんで
サンドインチ状の抗原抗体複合物が固相に結合した形で
形成される。しかる後に抗原抗体複合物に結合している
放射性同位元素の放射能量を測定し、目的とする抗原量
を求める。ＥＩＡやＦＩＡにおいては、抗体を標識する
物質として、放射性同位元素の代りに酵素又は蛍光物質
を用い、抗原抗体複合物に結合している酵素の活性量又
は蛍光強度を測定して、目的とする抗原量を求める。

いずれにしても、標識抗体を用いる点は共通であり、求
めるべき抗原量が標識物質の陽に反映されることを利用
した測定法である。

この様に、各測定法は免疫反応を利用して目的とする物
質を検出しようとするものであるが、免疫反応には、一
般に本来の抗原抗体反応に依らない非特異的な反応が伴
うことがしばしば認められ、そのために測定値の信頼性
が損なわれてしょうことがよくある。従来よりこの様な
非特異的反応を除去・抑制して、正しい測定値を得るた
めに、測定系に界面活性剤、ゼラチン又は各種動物の血
清、腹水もしくは免疫グロブリン画分、あるいは測定系
に使用するものとは反応特異性が異なり、かつ測定に係
わる反応を阻害しないモノクローナル抗体等を添加する
方法が提案されている。

（ｆｆ明が解決しようとする課題） 非特異的な反応を除去・抑制するために界面活性剤や各
種動物血清等を添加する上記の方法は、種々の免疫測定
系に利用し得る浸れた方法ではあるが、非特異的反応の
除去・抑制が不十分であったり、又、目的とする抗原抗
体反応も一部阻害することもあり、実用上必ずしも満足
できるものではない。ただし、目的とする特異的な抗原
抗体反応が多少抑制されたとしても、結果として非特異
的反応が完全にもしくは無視できる程度に除去・抑制さ
れ、その結果、測定に十分な感度が依然として保持され
た状態であるならば、測定系としては成り立ち得るもの
である。

しかしながら、モノクローナル抗体を用いた測定系にお
いては、上記の物質を添加するのみでは、非特異的反応
を十分に除去又は抑制することができず、せっかく優れ
た特性を持つモノクローナル抗体を得ることができても
、それを実際に使用する段階で大きな制約を受け、その
利用価値が失われてしまうという大きな問題があった。

この非特異的反応を除く他の方法として、測定すべき検
体の方を前処理する方法もある。これは、測定に供する
試料を、酸性緩衝液に混合し、例えば、６０〜７０℃で
加熱処理したり、又は過塩素酸によって処理することに
よって、非特異的反応の原因となる物質又は部位を除去
しようとする方法である。主な抗原決定基である糖鎖が
熱や酸に強いことを利用した方法であるが、この方法で
は、免疫反応前の検体処理や変性した蛋白を除くための
遠心分離操作といったような繁雑な工程を実施する必要
がある。特に多検体を測定する場合は、前処理に多くの
時間を要することとなり好ましいものではない。更には
、検体によっては抗原抗体反応にあずかる抗原決定部位
も上記の処理によって一部失活又は活性低下し、その結
果測定値が小さくなってしまう恐れがある。特にＩｌｌ
　１ｔＡマーカーのようにカットオフ値を設定するもの
については、測定値がカットオフ値より低くなって、結
果として陰性となってしまう可能性がある。従って検体
の熱処理等による非特異的反応の除去方法も、その操作
面においてのみならず、測定値の面からも満足できる方
法とは言い難い。

（課題を解決するための手段） そこで、本発明者らは、この様な非特異的反応を操作上
の繁雑さを伴うことなく除去・抑制する方法を種々検討
した結末、以下の知見を得た。

即ち、既知の方法では除去・抑制が不可能であった、あ
る種の非特異的反応が、その測定系に用いるモノクロー
ナル抗体の本来の抗原抗体反応部位とは異なる部位に依
るものであること、そして、このモノクローナル抗体に
対し、例えば、加熱処理、分解処理又は両方の処理の組
合Ｉ！等を含む一定の処理を施すことによって、本来の
抗体活性を完全にもしくは実質的に失わせると共に非特
異的な反応の活性（以下、「非特異的活性」という。）
は実質的に保持させ得ること、しかもこのように処理さ
れたモノクローナル抗体（以下、［モノクローナル抗体
由来物質］という。）で検体を特異的な免疫反応前に予
め処理すれば、前述のような非特異的反応がそれによっ
て吸収されて、測定系における非特異的反応を完全にも
しくは実質的に無視できる程度に除去又は抑制できるこ
とである。

本発明は以上の知見に基づくものである。即ち、特異的
な免疫反応の前に、測定すべき検体を上記モノクローナ
ル抗体由来物質と予め接触させれば、検体中の非特異的
反応物質又はその反応部位と非特異的活性のみ残ったモ
ノクローナル抗体由来物′ζＪどが反応する。その結果
、検体中の非特異的反応物質又はその反応部位はモノク
ローナル抗体由来１！７Ｉ質と非特異的反応したことに
よって、もはやこれ以トモツクローナル抗体との間で非
特異的反応を１起し１ｑない状態、すなわら、非特異的
反応が吸収された状態になるので、それ以降、非特異的
反応の影響を排除でき、しかも、このモノクロ−１ル抗
体由来物質は本来の特異的な抗体活性を喪失しているた
め、この本来の特異的な抗原抗体反応には何ら影響を与
えることなく、正確な測定（直を（ｑることができるの
である。

従って、本発明は、免疫学的測定法に使用するモノクロ
ーナル抗体本来の特異的な抗体活性は完全にもしくは実
質的に喪失しているが、その非特異的活性は実質的に保
持されている該モノクローナル抗体由来物質を提供する
ことを目的とする。

更に、本発明は、該モノクローナル抗体由来物質の製造
方法及びそれを用いる非特異的反応の除去・抑制方法を
Ｉ、？供するものである。

ここで、「実質的」とは、測定の感度・信頼性等の観点
から判断して支障のない程度という意味である。

ところで、一般に使われている測定用キラ１〜に最も多
く採用されているところのサンドインチ法、特に２ステ
ップサンドイッチ法を使用して検体中の抗原を測定する
場合には、上記の目的のために、固相化抗体と検体中の
抗原とを反応さＵる第１免疫反応前に、予め検体とモノ
クローナル抗体由来物質を混合し、一定時闇インキユベ
ートする等の吸収反応を行わせる為の特別な操作は必要
ない。

単に、第１ステップ反応用緩衝液中にモノクローナル抗
体由来物質を添加すること等によって、モノクローナル
抗体由来物質を同相化抗体及び検体と同一の免疫反応中
に共存させるだけで、それ以外は何等特別な操作は必要
とせずに、特に煩雑さが」［りす等の問題もなしに所望
の効果を得ることかできるのである。何故ならば、同相
化抗体と検体との間の固・液間の反応に較べて、同じ免
疫反応用緩衝液中に存在するモノクローナル抗体由来物
質と検体との間の非特異的反応は液・液間反応であるた
めその進行速度は著しく速く、特異的免疫反応が起こる
前にモノクローナル抗体由来物質による吸収反応が実質
的に生起し得るからである。

更に、第１免疫反応のみならず第２免疫反応の際にもモ
ノクローナル抗体由来物質を該反応中に共存させること
によって測定の信頼性をより一層高めることも可能であ
る。

さらに１ステップサンドイッチ法においても、免疫反応
に先立ってモノクローナル抗体由来物質を検体と混合し
一定時間吸収反応を行うか、あるいは又、単に反応用緩
衝液中にモノクローナル抗体由来物質を添加する等して
同一免疫反応中にそれらを共存せしめるだけで、操作ｍ
を実質的に増やすことなく、非特異的反応の影響を除い
て正確な値を容易に得ることができる。

従って、本発明において、最も予想外であって、かつ本
質的な特徴とする点は、本来の特異的な抗体活性と共に
非特異反応の活性を有するモノクローナル抗体に対し、
本来の抗体活性を喪失させるような一定の処理を施して
も、非特異的活性は失なわれないこと、この非特異的活
性のみ残っているモノクローナル抗体由来物質によって
検体の非特異的反応部位を予め吸収しておけば、免疫学
的測定法における非特異的反応を除去・抑制して正確な
測定値を得ることができることである。本発明の特徴は
、簡潔にいうならば、抗体蛋白の性質の一部分を取出し
て、問題の解決に利用したことである。

次に、非特異的反応吸収のための本発明のモノクローナ
ル抗体由来物質を製造する方法を述べる。

出発物質として用いるモノクローナル抗体は、夫々の反
応段階に用いるモノクローナル抗体と同一のものである
。すなわち、同相化担体に吸着・固相化させる抗体及び
／又はラジオアイソトープ、酵素、蛍光物質などで標識
する抗体と同一のモノクローナル抗体である。これらの
モノクローナル抗体は、本来の特異的な抗体活性に基づ
く反応の池に、個々の検体によって認められたり認めら
れなかったりし、かつその程度に差のある非特異的反応
を行う性質を持ち、しかも、これらの反応活性のうちの
本来の抗体活性は、モノクローナル抗体を一定の条件下
で処理することによって失活するのに対し、非特異的活
性の方は、失活することなく保持される特性を持つ。こ
の特性を利用して、非特異的反応吸収用のモノクローナ
ル抗体由来物質を製造する。

すなわち、本発明のモノクローナル抗体由来物質を得る
ためには、該測定系に用いる抗体と同一の抗体に対して
、加熱又は分解等の処理を含む一定の処理を単独もしく
は組合せて施し、抗体の持つ本来の抗体活性が完全にも
しくは実質的に消失し、かつ非特異的活性は実質的に保
持されるよう調製するものである。本発明に用い得るそ
の他の一定の処理としては、超音波処理、有機溶媒処理
、酸・アルカリ処理等を挙げることができる。

処理されるモノクローナル抗体は、特に精製したものを
使用する必要はなく、該モノクローナル抗体が含まれる
マウス等の腹水をそのまま用いても十分な効果を得るこ
とができる。従って、Ｌツク【？−ノール抗体を含む腹
水又はその希釈した状態のｂのを直接一定の処理にかけ
るのが最も簡単でかつ経済的にも有利である。たとえば
、加熱処理によって非特？４的反応吸収用ｔツクロープ
ル抗体由来物質を得ようどザる場合、モノクローナル抗
体を含む腹水を原液のまま、ｂｔ、＜は適当なｐＨ−＋
、例えばｐＨ７，０〜７５に調製した緩肖液で希釈した
侵、一定時間加熱する。加熱処理条件は当業省が適官決
めることができるが、−殻内には腹水の希釈倍数は原液
〜１（１０）倍、好ましくは５〜２０倍で、加熱温度は
４０℃以上、好ましくは５０〜７５℃である。

また加熱時間は、抗体活性の熱に対する強さまたは温度
によって異なり、−殻内には温度が高い場合は短時間、
低い場合ｔま長時間とし、たとえば、６０℃では１５〜
２４０分間、好ましくは６０〜１５０分間、７０℃では
２〜６０分間、好ましくは５〜２０分間とするのが適当
である。らちるん、必要以上に加熱温度を高くしたり加
熱時間を良くすれば、抗体活性のみならず非特異的反応
も損われ、ひいては完全に失活してしまうので注意を要
する。この様にして得られたモノクローナル抗体由来物
質はそのアミノ酸−次配列が、出発物質である七ツクロ
ープル抗体のそれと同一の構造を右する。これ１よ、そ
のまま所定の濃度になるように、例えば、反応用ｌｉ函
液に添加して直ちに使用することができるし、また保存
する場合は、そのまま２〜８℃の冷蔵庫中に置くか、−
８０℃に凍結しておくか、または−般に知られた方法で
凍結乾燥すればよい。

本発明のモノクローナル抗体由来物質の製造方法として
、モノクローナル抗体をペプシン、トリプシン又はパパ
イン等のタンパク分解酵素で分解し、例えば、Ｆａｂ部
分を除去し、又はＦ（ａｌ＋’）２部分を除去する方法
、さらには、分解、加熱という両方の処理を施すことも
可能である。たとえば、あらかじめ公知の硫安沈澱法及
びゲル濾過法にて精製したモノクローナル抗体５０ＩＩ
ｆｊを４Ｍ尿素を含ム０．１Ｍ　ｌ−１，１ス塩ｖｉ［
ｌ！水（１）ＩＩ　８．０）　５ｄ１．：加え、２５℃
、１６時間イン４：ユベヒトし、次に１．５■のＴＰＣ
Ｋ−Ｔｒｙｐｓｉｎ　（Ｗｏｒｔ旧ｎｇｔｏｎ社％ｊ　
）　、０．０５Ｍ塩化カルシウムを加え２５℃、８時間
分解する。この分解物を常法に従ってゲル濾過により分
画し、Ｆｃ部分を得ることができる。ただし、簡便さと
いう点からは、加熱処理により特異的抗体活性を失活ざ
Ｕる方法が最す好適と言える。

非特異的反応を除去・抑制するために必要とされる七ツ
クローナル抗体由来物質の吊は、当業考ににり適宜求め
ることができる。この邑は測定系、検体等の種類によっ
ても異なるが、反応用緩衝液中に予め添加して用いる場
合は、その使用量は腹水原液としての濃度に換算して、
−殻内にｏ、　ｏｏｓ〜５　ｖ／ｖ％、好ましくは０．
０５〜１■ハ％の濃度ぐ使用するのが好適である。反応
用緩衝液中のモノクローナル抗体由来物質のタンパク濃
度としては０．（１０）５〜０．１１１？９／ｒｄが好
適である。

本発明の方法を利用して非特異的反応を除去又は抑υ１
し、検体中の微ｍ物質を信頼性良＜　１ｌｌｌｌ定し得
るＲ［ＡやＥＲＡ等の免疫学的測定法は、一般に知られ
た測定法であり、広く臨床検査等に利用されているもの
である。（たとえば免疫測定法間ｆｌ仙究会（企画）：
免疫測定法の活用事例と詮所試薬・治療Ｊｉｌ？？！発
への応用、経営教育出版、昭和６０年）。

（発明の効果） モノクロ−フル抗体を用いた免疫学的測定法において、
非特異的反応を吸収して除去するモノクローナル抗体由
来物質を該測定系で用いることにより、非特異的反応の
影響を排除して本来の抗原抗体反応を正確に反映した信
頼性の高い測定値を得ることができる。

以下、実施例を挙げて説明するが、本発明技術的範囲は
、これらのものに限定されるｂのではない。

実験例 （１）モノクローナル抗体含有マウス腹水の入手ヒト低
分化型腺癌で免疫したＢａ１ｂ／ｃマウス牌細胞とマウ
スミエローマ細胞（Ｐ３−Ｘ６３−八ｇ８−０１）を常
法に従って細胞融合した後、免疫組織染色にょるスクリ
ーニングによって正常組織に反応せず、癌組織に反応す
る抗体を産生ずるハイブリドーマを選択した。このハイ
ブリドーマをＢａ１ｂ／ｃマウスの腹腔内に投与し、増
殖させ、モノクローナル抗体（ＩａＭ）含有マウス腹水
を（けた。

（２）精製モノクローナル抗体の調製 （１）で得られたモノクローナル抗体含有マウス腹水よ
り、公知の硫安沈澱法及びゲル濾過法にて精製モノクロ
ーナル抗体を得た。

（３）酵素免疫測定法による測定 （２）で（昇られた精製モノクローナル抗体を用いた酵
素免疫測定法（ＥＩＡ）、すなわら、ポリスチレンビー
ズを用いた２ステップサンドイッチ法により、表１に示
した試料を測定した。まず試験管に試料５０ｇを採取し
、反応用ａｍ液として牛血清アルブミン（［３ＳＡ）０
．５％を含むリン酸＊ｉｉｒ食塩水（ｐＨ７，４）　　
２（１０）ｍを加えた。次に常法により、上記モノクロ
ーナル抗体を不溶化させたポリスチレンビーズ１個を加
え、３７℃で２時間反応させた（第１免疫反応）。次に
、ビーズを生理的食塩水で３回洗ｒｐ後、西洋ワサビペ
ルオキシダーゼ（＋−Ｉ　ＲＰ　＞で標識した該モノク
ローナル抗体溶液２（１０）ｐを加え、室４　（２５℃
）で２時間反応させた（第２免疫反応）。再びビーズを
生理的食塩水で洗浄した後、別の試験管へビーズを移し
替え、３０％過酸化水素水０．２Ｍ及びＡＢＴＳ’　（
ベーリンガーマンハイム社製）を０．４５１１５Ｆ含む
０．１Ｍクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ４，０）　３（１
０）　ＩＪｌを加え、３７℃で３０分間反応させた（呈
色反応）。５％シュウ！２戒を加えて反応を停止させた
後、波長４０５　ｎ１ｌｌにおける吸光度を求めた。結
果を表１に示す。

表　１　　実験例の結果 試　　　料 健常者血清Δ＊１ 健常者血清Ｂ８１ 膵炎患者血清 膵癌患者血清 乳癌患者血清 抗原溶液“２ １％　ＢＳＡ含有ＰＢＳ＊３（７７＞　り）測定吸光度 ０、０３０ １．２３２ ０、０３５ １．０６８ ０、６１４ Ｑ、１３８１ ０、０２３ 傘１　定期健康診断における各種測定項目において異常
を認めないもの 傘２　ヒト胃癌細胞をヌードマウスに移植し、増殖させ
て得られた組織より抽出積装した溶液を１％　８３Ａ含
有０．０５Ｍ　ＰＢＳ　（Ｉ）１１７．４１テ１（１０
）倍希釈したもの ＄３１ＸＢＳＡ含有０．０５Ｍ　ＰＢＳ（ｐＨ７゜４）
上記結果のうち、試料２は健常者血清であるにもかかわ
らず、異常に高値の吸光度が１作られ、非特異的反応に
よるものと准測された。

実施例　１ （１）加熱処理による非特異的反応吸収用モノクローナ
ル抗体由来物質の製造 実験例１−（１）で１９られたモノクローナル抗体含有
マウス腹水を０．０５ＭリンＲＢ＊食塩水（ｐｌ＋　７
．４）で１０倍希釈し、６０”Ｃ１１２０分間加熱処理
して、非特異的反応吸収用のモノクローナル抗体由来物
質を得た。

（２）モノクローナル抗体由来物質を用いた酵素免疫測
定法による測定 実験例１−（３）に示した測定操作のうち、第１免疫反
応の反応用緩衝液に（１）で（９られた非特異的反応吸
収用Ｌツクローナル抗体由来物質をマウス腹水原液換算
で０．２Ｖ／Ｖ％添加した以外はすべて実験例１−（３
）と同じ操作を行って実験例１と同じ試料を測定した。

結果を表２に示す。

表　２　　実施例１の結果 試　　料　　　　　　　　　測定吸光度１　健常者血清
　　　　　　　　　　０．０３１２　健常者血清　　　
　　　　　　　　０．０３６３　膵炎患者面ｌ　　　　
　　　　　　Ｏ，０３３４膵癌患者血清　　　　　　　
　　　１０５３５　乳癌患者血清　　　　　　　　　０
４２２６　抗原溶液　　　　　　　　　　　　０．８９
６１１％ＢＳＡ含有ＰＢＳ（ブランク）　　　　　０．
０２４この結果を実験例の結果と比較すると、試料２に
おいて実験例で認められた高い値の吸光度は、実施例１
では認められず、大幅に吸光度が減少した。このことよ
り、実施例１での試料２の高吸光度は、非特異的反応に
依るものであり、モノクローナル抗体由来物質の添加で
非特異的反応が除去されたことが示されている。また、
試料５においても、試料２よりも弱いが非特異的反応が
あり、モノクローナル抗体由来物質の添加により、吸光
度が減少している。

一方、抗原溶液については、モノクローナル抗体由来物
質添加の有無による吸光度の差異は認めれらす、モノク
ローナル抗体由来物質が本来の特異的な免疫反応に影響
を及ぼすことはないことが判る。

比較例 実施例１−（２）において、モノクローナル抗体由来物
質の代りにマウス血清、マウス腹水、ラット血清、ウサ
ギ血清、ブタ血清を用いる以外は、すべて向−の条件及
び操作によって非特異的反応の認められた試料２，５及
び７について測定を行った。表３に示す結果の通り、い
ずれも非特異的反応を実施例１はと十分に除去−４るこ
とはできなかった。

表　３　　比較例の結果 実施例　２ 実施例１での第１免疫反応における非特異的反応吸収用
モノクローナル抗体由来物質の添加濃度を変えて測定し
た。ずなわら、非特異的反応が認められた試料２及び試
料５を用い１次免疫反応における反応用Ｍ衝液に表４に
示した濃度の非特異的吸収用モノクローナル抗体由来物
質を添加して実施例１と同じ操作を行った。表４に示し
た結果のようにモノクローナル抗体由来物質の添加量は
試料２ではモノクローナル抗体を含有するマウス腹水の
原液換算の濃度として０．２　Ｖ／Ｖ％あればよく、そ
れ以上の添加によって非特異的反応の除去・抑制の効果
に差は認められなかった。一方、試料５では試料２に比
ベモノクローナル抗体由来物質ωは少量でよく、同じマ
ウス腹水原液換算で０．０５　ｖ／Ｖ％で非特異的反応
は除かれた。

表　　４ 実施例２の結果 実施例　３ 常法によってラジオアイソトープ標識したモノクローナ
ル抗体を用い、放射免疫測定法（ＲＩＡ）により、非特
異的反応の認められた試料２，５及び７を測定した。操
作は、実施例１−（２）でのＥＩＡ法におけるＨＲＰＩ
！識抗体の代りにラジオアイソトープ標識した抗体を用
い酵素活性量を求める代りに放射ＩＤ聞を求める以外は
、実施例１−（２）と同様に行った。寸なわら、第１免
疫反応に実施例１−（１）で１１だモノクローナル抗体
由来物質を０．２Ｖ／Ｖ％添加し、２ステツプサンドイ
ツヂＲＩＡ法により測定した。比較のため、モノクロー
ナル抗体由来物質を用いない場合の測定も行った。結果
４人５に示す通りで、実施例１の場合と同様にモノクロ
ーナル抗体由来物質を用いなければ大きな非特異的反応
の影響が認められた。

表　　５ 実施例３の結果

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. （１）免疫学的測定法に使用するモノクローナル抗体本
   来の特異的な抗体活性は完全にもしくは実質的に喪失し
   ているが、その非特異的活性は実質的に保持されている
   該モノクローナル抗体由来物質。
2. （２）前記モノクローナル抗体の認識する抗原が糖鎖抗
   原であることを特徴とする請求項１に記載のモノクロー
   ナル抗体由来物質。
3. （３）前記モノクローナル抗体のアミノ酸一次配列構造
   は変化を受けていないことを特徴とする請求項１又は２
   に記載のモノクローナル抗体由来物質。
4. （４）実質的にＦａｂ部分が除去されていることを特徴
   とする請求項１又は２に記載のモノクローナル抗体由来
   物質。
5. （５）請求項１に記載のモノクローナル抗体由来物質の
   製造方法であつて、免疫学的測定法に使用するモノクロ
   ーナル抗体に一定の処理を施すことを特徴とする前記製
   造方法。
6. （６）前記一定の処理が加熱処理、分解処理又はそれら
   の組み合せであることを特徴とする請求項５に記載の製
   造方法。
7. （７）加熱処理を施す際のモノクローナル抗体が腹水又
   はその希釈溶液中に存在することを特徴とする請求項６
   記載の製造方法。
8. （８）免疫学的測定法における請求項１に記載のモノク
   ローナル抗体由来物質を用いる非特異的反応の除去・抑
   制方法であって、特異的な免疫反応前に、検体と該モノ
   クローナル抗体由来物質との間で予め非特異的反応を行
   なわせることを特徴とする前記除去・抑制方法。
9. （９）固相化抗体、前記モノクローナル抗体由来物質及
   び検体を同一免疫反応中に共存させることによつて前記
   非特異的反応を行なわせることを特徴とする請求項８記
   載の方法。
10. （１０）反応用緩衝液中に前記モノクローナル抗体を添
    加することにより前記共存を図ることを特徴とする請求
    項８又は９に記載の方法。
11. （１１）前記免疫学的測定法が２ステップサンドイッチ
    法であり、前記非特異的反応を第１免疫反応前に行なわ
    せることを特徴とする請求項８に記載の方法。