JPS6080768A - 塩基性胎児蛋白の測定方法および試薬 - Google Patents
塩基性胎児蛋白の測定方法および試薬Info
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- JPS6080768A JPS6080768A JP58189223A JP18922383A JPS6080768A JP S6080768 A JPS6080768 A JP S6080768A JP 58189223 A JP58189223 A JP 58189223A JP 18922383 A JP18922383 A JP 18922383A JP S6080768 A JPS6080768 A JP S6080768A
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- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は塩基性胎児蛋白の測定方法および測定試薬に関
する。
する。
塩基性胎児蛋白（Ｂａｖｌｃ Ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ
： ＢＦＰと略記）は本発明者の中の一人がヒト胎児
の血清、腸および脳組織中に見出した分子量７３，００
０ 、電気泳動においてγ−グロブリン領域に易動する
等電点９．３の塩基性蛋白である。既知の胎児蛋白が酸
性蛋白であるのと対照的に、この蛋白は塩基性であると
ころから、特に塩基性胎児蛋白と呼称される。さらに本
発明者の中の一人は当該蛋白についてのラジオイムノア
ッセイを確立し、血清中における当該蛋白の測定が癌の
診断およびその病状経過、治療効果の判定に役立つこと
を知った。とりわけ当該蛋白はα−フ二トプロテインの
ように特定臓器の癌診断に役立つのではなく、非癌と癌
との鑑別診断、すなわち担癌の有無の診断に役立つこと
を知った。
： ＢＦＰと略記）は本発明者の中の一人がヒト胎児
の血清、腸および脳組織中に見出した分子量７３，００
０ 、電気泳動においてγ−グロブリン領域に易動する
等電点９．３の塩基性蛋白である。既知の胎児蛋白が酸
性蛋白であるのと対照的に、この蛋白は塩基性であると
ころから、特に塩基性胎児蛋白と呼称される。さらに本
発明者の中の一人は当該蛋白についてのラジオイムノア
ッセイを確立し、血清中における当該蛋白の測定が癌の
診断およびその病状経過、治療効果の判定に役立つこと
を知った。とりわけ当該蛋白はα−フ二トプロテインの
ように特定臓器の癌診断に役立つのではなく、非癌と癌
との鑑別診断、すなわち担癌の有無の診断に役立つこと
を知った。
下記に列挙Ｊる文献（１）〜（７）は上記従来知見につ
いて記述しており、その記述は本発明のための参青情報
として引用される。
いて記述しており、その記述は本発明のための参青情報
として引用される。
（１）方弁 勝ほか： Ｆｅｔｏ−Ｎｅｏｐｌａｓｔｉ
ｃ Ａｎｔｉｇｅｎに関する研究、第３４回Ｂ本癌学会
総会記事、ｐ、１７３（１９７５）。
ｃ Ａｎｔｉｇｅｎに関する研究、第３４回Ｂ本癌学会
総会記事、ｐ、１７３（１９７５）。
（２）方弁 勝：諸種悪性腫瘍に存在する新胎児蛋白ｂ
ａｓｉｃ ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎに関する研究、１欠
字のあゆみ、 １００（３）、 ３４４−３４６（１９
７７）。
ａｓｉｃ ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎに関する研究、１欠
字のあゆみ、 １００（３）、 ３４４−３４６（１９
７７）。
（３）方弁 勝：ペイシックフェトプロティン（塩基性
胎児蛋白）、医学のあゆみ、 １０６（５）、 ２７３
−２８１（１９７８）。
胎児蛋白）、医学のあゆみ、 １０６（５）、 ２７３
−２８１（１９７８）。
（４） ｌ５ｈｉｉ、 Ｍ、 ： Ａ ｎｅｗ ｃａｒ
ｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｈａ
−ｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｐ
ｅｒｔｙ、 ５ｃａｎｄｉｎａｖ、 Ｊ。
ｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｈａ
−ｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｐ
ｅｒｔｙ、 ５ｃａｎｄｉｎａｖ、 Ｊ。
Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 ８ （Ｓｕｐｐｌ、 ８）、 ６
１１−６２０ （１９７Ｂ）。
１１−６２０ （１９７Ｂ）。
（５１ｌ５ｈｉｉ、 Ｍ、 ： Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ
ｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｓｉｃ ｆｅｔｏｐｒｏｔｅ
ｉｎＶｏｌ、 １． Ｌｅｈｍａｎｎ、 Ｆ、−Ｇ、
（ｅｄ、）、 Ｅｌｉｓｅｖｉｅｒ／Ｎｏｒｔｈ−Ｈｏ
ｌｌａｎｄ Ｂｉｏｍｅ山ｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、 Ａｍ
ｓｔｅｒｄａｍ、 ３３３−３４０（１９７９）。
ｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｓｉｃ ｆｅｔｏｐｒｏｔｅ
ｉｎＶｏｌ、 １． Ｌｅｈｍａｎｎ、 Ｆ、−Ｇ、
（ｅｄ、）、 Ｅｌｉｓｅｖｉｅｒ／Ｎｏｒｔｈ−Ｈｏ
ｌｌａｎｄ Ｂｉｏｍｅ山ｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、 Ａｍ
ｓｔｅｒｄａｍ、 ３３３−３４０（１９７９）。
（６） ｌ５ｈｉｉ、 Ｍ、、 ＮｉｓｈＮ１５ｈｉ、
Ｋ、、 Ｈａｔｔｏｒｉ、 Ｍ、、 Ｋａｎｄａ。
Ｋ、、 Ｈａｔｔｏｒｉ、 Ｍ、、 Ｋａｎｄａ。
Ｙ、 ａｎｄ ｌ５ｈｉｈａｒａ、 Ａ、 ： Ｐｏ５
ｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ５ｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅｉｎ
ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａ
ｎｃｅｒ ａｎｄ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｏｆ ｉｍｍ
ｕｎｏ−ａｎｄ ｐｏｌｙｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ
ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈ ｌｅｕｋｅｍｉａ
ｂｙ ｂａｓｉｃ ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ、 Ｃａｒ
ｃｉｎｏ−Ｅｍ−ｂｒｙｏｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、 Ｂｉｏｌｏｇｙ、 Ｃｌｎ１
ｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ、 Ｖｏｌ、 ２ Ｌｅ
ｈｍａｎｎ、 Ｆ、 −Ｇ、 （ｅｄ、）、 Ｅｌｉ−
ｓｅｖｉｅｒ／Ｎｏｒｔｈ −Ｈｏｌｌａｎｄ Ｂｉｏ
ｒｎｅｄｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、 Ａｍｓｔｅｒ−ｄａ
ｍ、 ６０３−６０６ （１９７９）。
ｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ５ｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅｉｎ
ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａ
ｎｃｅｒ ａｎｄ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｏｆ ｉｍｍ
ｕｎｏ−ａｎｄ ｐｏｌｙｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ
ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈ ｌｅｕｋｅｍｉａ
ｂｙ ｂａｓｉｃ ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ、 Ｃａｒ
ｃｉｎｏ−Ｅｍ−ｂｒｙｏｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、 Ｂｉｏｌｏｇｙ、 Ｃｌｎ１
ｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ、 Ｖｏｌ、 ２ Ｌｅ
ｈｍａｎｎ、 Ｆ、 −Ｇ、 （ｅｄ、）、 Ｅｌｉ−
ｓｅｖｉｅｒ／Ｎｏｒｔｈ −Ｈｏｌｌａｎｄ Ｂｉｏ
ｒｎｅｄｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、 Ａｍｓｔｅｒ−ｄａ
ｍ、 ６０３−６０６ （１９７９）。
（力 ｌ５ｈｉｉ、 Ｍ、 ： Ｃ１１ｎｉｃａｌ ｕ
ｓｅｆｕｌｎｅｓｓ ｏｆ ｂａｓｉｃ ｆｅｔｏｐｒ
ｏ−Ｒｅｓｅａｒｃｈ、 Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ、 Ｒ，
Ｂ、 （ｅｄ、）、 Ｖｏｌ、 １゜Ｅｌｉｓｅｖｉｅ
ｒ／Ｎｏｒｔｈ−Ｈｏｕａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ
Ｐｒｅｓｓ、 ＮｅｗＹｏｒｋ、 ４５−５０ （１
９７９）。
ｓｅｆｕｌｎｅｓｓ ｏｆ ｂａｓｉｃ ｆｅｔｏｐｒ
ｏ−Ｒｅｓｅａｒｃｈ、 Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ、 Ｒ，
Ｂ、 （ｅｄ、）、 Ｖｏｌ、 １゜Ｅｌｉｓｅｖｉｅ
ｒ／Ｎｏｒｔｈ−Ｈｏｕａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ
Ｐｒｅｓｓ、 ＮｅｗＹｏｒｋ、 ４５−５０ （１
９７９）。
さて、塩基性胎児蛋白は癌患者血清中においてもその存
在量が微量であるために、その定量のためには高感度測
定法の確立が必要であり、主としてＲＩＡ法およびＥＩ
Ａ法が開発されてきた。ＲＩＡ法の詳細については上記
文献（３）〜（５）における記述が参考情報として引用
される。またＥＩＡ法の詳細については下記文献（８）
〜（９）における記述が同様に参考情報として引用され
る。
在量が微量であるために、その定量のためには高感度測
定法の確立が必要であり、主としてＲＩＡ法およびＥＩ
Ａ法が開発されてきた。ＲＩＡ法の詳細については上記
文献（３）〜（５）における記述が参考情報として引用
される。またＥＩＡ法の詳細については下記文献（８）
〜（９）における記述が同様に参考情報として引用され
る。
（８）方弁 勝、ほか： Ｂａ５ｉｃ Ｆｅｔｏｐｒｏ
ｔｅｉｎ、現代臨床機能検査−その実際と解釈１日本臨
床３７：１５３６〜１５３９．１９７９゜ （９）方弁 勝：塩基性フェトプロティン（Ｂａ５ｉｃ
Ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ）、臨床検査２４ （８） ：
９３１〜９３６゜１９８０゜ その後９本発明者は使用する抗体が量産化され。
ｔｅｉｎ、現代臨床機能検査−その実際と解釈１日本臨
床３７：１５３６〜１５３９．１９７９゜ （９）方弁 勝：塩基性フェトプロティン（Ｂａ５ｉｃ
Ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ）、臨床検査２４ （８） ：
９３１〜９３６゜１９８０゜ その後９本発明者は使用する抗体が量産化され。
外
かつその抗体によって上記ＲＩＡ＋＋−，ＥＩＡ法にお
ける精度がさらに高められることを目的として、モノク
ロナール抗塩基性胎児蛋白坑体を用意した。
ける精度がさらに高められることを目的として、モノク
ロナール抗塩基性胎児蛋白坑体を用意した。
当該モノクロナール抗体の作製並びに成績については下
記文献（１０）の記述が引用される。
記文献（１０）の記述が引用される。
（１■第１０回日本臨床免疫学会（大阪）講演要旨ｐ、
１９３ （１９８１）、塩基性胎児蛋白に対するモノ
クロナール抗体の作製 さて、ここに得られたモノクロナール抗体の塩基性胎児
蛋白に対する反応特異性についてＥＩＡ法およびＭＯ法
を用いて検討した。その結果、塩基性胎児蛋白の分子上
には少くとも３種のそれぞれ異なる抗原決定基が存在し
ており、各抗原決定基に対応してモノクロナール抗体は
３種類に分類されることが知られるに至った。３種の抗
原決定基をＡ、 Ｂ、 Ｃとし、各抗原決定基に対応す
るモノクロナール抗体を列記すれば９例えば以下のごと
くなる。
１９３ （１９８１）、塩基性胎児蛋白に対するモノ
クロナール抗体の作製 さて、ここに得られたモノクロナール抗体の塩基性胎児
蛋白に対する反応特異性についてＥＩＡ法およびＭＯ法
を用いて検討した。その結果、塩基性胎児蛋白の分子上
には少くとも３種のそれぞれ異なる抗原決定基が存在し
ており、各抗原決定基に対応してモノクロナール抗体は
３種類に分類されることが知られるに至った。３種の抗
原決定基をＡ、 Ｂ、 Ｃとし、各抗原決定基に対応す
るモノクロナール抗体を列記すれば９例えば以下のごと
くなる。
抗原決定基 モノクロナール抗体
Ａ ５Ｃ，４，５Ｃ５，５Ｃ６，７ＤＩ、 Ｋｌｆ２．
５Ｂ２．５Ｂ３．５０２ そこで９本発明者は、これらモノクロナール抗体を使用
してサンドイツチ法により塩基性胎児蛋白を精度よ（測
定する方法について種々検討をおこなった。その結果、
サンドイツチ法において使用される二抗体としては、そ
れぞれ、異なる抗原決定基に反応するモノクロナール抗
体の組合せを選択すべきことを知った。すなわち９例え
ば上記例示のモノクロナール抗体の中から選択するなら
ば、５Ｃ４および５Ｃ２の組合せあるいはに１および５
Ｂ３の組合せといった態様をあげることができる。
５Ｂ２．５Ｂ３．５０２ そこで９本発明者は、これらモノクロナール抗体を使用
してサンドイツチ法により塩基性胎児蛋白を精度よ（測
定する方法について種々検討をおこなった。その結果、
サンドイツチ法において使用される二抗体としては、そ
れぞれ、異なる抗原決定基に反応するモノクロナール抗
体の組合せを選択すべきことを知った。すなわち９例え
ば上記例示のモノクロナール抗体の中から選択するなら
ば、５Ｃ４および５Ｃ２の組合せあるいはに１および５
Ｂ３の組合せといった態様をあげることができる。
本発明はかかる知見に基づいて塩基性胎児蛋白の測定の
ために完成された。
ために完成された。
すなわち９本発明の目的はサンドイツチ法における塩基
性胎児蛋白の精度のよい測定を可能にすることであり９
本発明は該目的の達成のためにサンドイツチ法における
二抗体として異なる抗原決定基にそれぞれ反応する抗塩
基性胎児蛋白モノクロナール抗体を選択する技術を開示
するものである。
性胎児蛋白の精度のよい測定を可能にすることであり９
本発明は該目的の達成のためにサンドイツチ法における
二抗体として異なる抗原決定基にそれぞれ反応する抗塩
基性胎児蛋白モノクロナール抗体を選択する技術を開示
するものである。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明によって測定される塩基性胎児蛋白は分子量が７
３，０００であり、電気泳動においてγ−グロブリン領
域に易動され９等電点が９．３の塩基性蛋白であって、
臓器特異性の低い腫瘍マーカーであることは前記したご
と（である。
３，０００であり、電気泳動においてγ−グロブリン領
域に易動され９等電点が９．３の塩基性蛋白であって、
臓器特異性の低い腫瘍マーカーであることは前記したご
と（である。
本発明に係る抗塩基性胎児蛋白モノクロナール抗体は例
えば次のようにして作製すればよい。まず塩基性胎児蛋
白を感作せしめたＢＡＬＢ／Ｃマウスから抗体産生細胞
を用意し、ミエローマ細胞としてＰ３−Ｘ６３−Ａｇ８
−Ｕｌを用いて、これとの間にＨｅｒｚｅｎｂｅｒｇら
の変法により細胞融合する。次にＨＡＴ培地により選択
した融合細胞からの抗体価を１２５■標識した塩基性胎
児蛋白を用いるプレートバインディングアッセイにより
測定する。高抗体価を示し、かつ細胞増殖のよい融合細
胞をリミティングダイリューションによりクローニング
し、高抗体価を産生ずる細胞株を数種類収得する。最後
に各細胞株をマウス腹腔内に移植し、得られた腹水を硫
安塩析し、透析後、 ＤＢＡＥ−ｃｅｌｌｕｌｏｓｅに
かけてＩｇＧ成分を集めれば２本発明に係る数種類のモ
ノクロナール抗体を収得することができる。得られたモ
ノクロナール抗体を塩基性胎児蛋白の異なる抗原決定基
に対応して分類するためには下記に示すＭＯ法およびＥ
ＩＡ法を実施すればよい。
えば次のようにして作製すればよい。まず塩基性胎児蛋
白を感作せしめたＢＡＬＢ／Ｃマウスから抗体産生細胞
を用意し、ミエローマ細胞としてＰ３−Ｘ６３−Ａｇ８
−Ｕｌを用いて、これとの間にＨｅｒｚｅｎｂｅｒｇら
の変法により細胞融合する。次にＨＡＴ培地により選択
した融合細胞からの抗体価を１２５■標識した塩基性胎
児蛋白を用いるプレートバインディングアッセイにより
測定する。高抗体価を示し、かつ細胞増殖のよい融合細
胞をリミティングダイリューションによりクローニング
し、高抗体価を産生ずる細胞株を数種類収得する。最後
に各細胞株をマウス腹腔内に移植し、得られた腹水を硫
安塩析し、透析後、 ＤＢＡＥ−ｃｅｌｌｕｌｏｓｅに
かけてＩｇＧ成分を集めれば２本発明に係る数種類のモ
ノクロナール抗体を収得することができる。得られたモ
ノクロナール抗体を塩基性胎児蛋白の異なる抗原決定基
に対応して分類するためには下記に示すＭＯ法およびＥ
ＩＡ法を実施すればよい。
ＭＯ法
二種類のモノクロナール抗体を１：１の比率をもちで混
合したものを全てのモノクロナール抗体の組合せについ
て用意し、ＭＯ法によりこれら混合物と塩基性胎児蛋白
との間における沈降線の生成並びに融合の有無を観察す
る。明瞭な沈降線が観察される場合は組合せに係るモノ
クロナール抗体はそれぞれ異なる抗原決定基に反応する
グループに属し９反対に沈降線がまったく観察されない
場合は同じ抗原決定基に反応するグループに属する。
合したものを全てのモノクロナール抗体の組合せについ
て用意し、ＭＯ法によりこれら混合物と塩基性胎児蛋白
との間における沈降線の生成並びに融合の有無を観察す
る。明瞭な沈降線が観察される場合は組合せに係るモノ
クロナール抗体はそれぞれ異なる抗原決定基に反応する
グループに属し９反対に沈降線がまったく観察されない
場合は同じ抗原決定基に反応するグループに属する。
また沈降線の生成が不明瞭であり２判定が不確実である
ときは９次のＥＩＡ法によって判定する。
ときは９次のＥＩＡ法によって判定する。
ＥＩＡ法
実施例１記戦に てに１および５Ｃ２の代わりに任意に
選択したＬ性項のモノクロナール抗体を使用する点を除
いて実施例１と同様に実施して調製した測定試薬を全て
のモノクロナール抗体の組合せについて用意する。ＥＩ
Ａ操作をおこない発色値０Ｄ４ｎ、ａｆｆｉを読む。発
色がある場合は組合せに係るモ＋ ｈ−上−、＋＋！−
７Ｊ−＋Ｊ ｙ ＪＭ ｆｆＪ−＋ ｍ ＪＰ ２ Ｆ
＃Ｉｉ！ｆンｈつ１１：＋ｒ反応スるグループに属し９
反対に発色がない場合は同じ抗原決定基に反応するグル
ープに属する。
選択したＬ性項のモノクロナール抗体を使用する点を除
いて実施例１と同様に実施して調製した測定試薬を全て
のモノクロナール抗体の組合せについて用意する。ＥＩ
Ａ操作をおこない発色値０Ｄ４ｎ、ａｆｆｉを読む。発
色がある場合は組合せに係るモ＋ ｈ−上−、＋＋！−
７Ｊ−＋Ｊ ｙ ＪＭ ｆｆＪ−＋ ｍ ＪＰ ２ Ｆ
＃Ｉｉ！ｆンｈつ１１：＋ｒ反応スるグループに属し９
反対に発色がない場合は同じ抗原決定基に反応するグル
ープに属する。
以上のどと＜ＭＯ法およびＥＩＡ法によりグループ分け
をおこなうと前記したごとく塩基性胎児蛋白には三種の
異なる抗原決定基があり、モノクロナール抗体はそれぞ
れに反応する三つのグループに分類される。
をおこなうと前記したごとく塩基性胎児蛋白には三種の
異なる抗原決定基があり、モノクロナール抗体はそれぞ
れに反応する三つのグループに分類される。
次に本発明測定方法について説明する。
本発明測定方法は二抗体を使用するサンドイツチ法であ
り、酵素免疫測定法および放射免疫測定法のいずれかを
利用するものである。これらの方法における通常の手順
自体はすでに一般に公知である。従って９例えば酵素免
疫測定法を利用する場合について本発明測定方法を説明
すれば以下のごとくである。
り、酵素免疫測定法および放射免疫測定法のいずれかを
利用するものである。これらの方法における通常の手順
自体はすでに一般に公知である。従って９例えば酵素免
疫測定法を利用する場合について本発明測定方法を説明
すれば以下のごとくである。
測定系全体の構成要素は固相、固相コート用抗体（第一
抗体）、塩基性胎児蛋白（標準抗原および被検血清）、
標識用抗体（第二抗体）、酵素および基質である。固相
としてはエンザイムイムノアッセイ用のマイクロタイタ
ープレートのウェルを用いればよい。測定に先立ち固相
コート用抗体（第一抗体）として本発明に係るモノクロ
ナール抗体の一種を任意に選択し、蛋白濃度としてのＯ
Ｄ、、、。
抗体）、塩基性胎児蛋白（標準抗原および被検血清）、
標識用抗体（第二抗体）、酵素および基質である。固相
としてはエンザイムイムノアッセイ用のマイクロタイタ
ープレートのウェルを用いればよい。測定に先立ち固相
コート用抗体（第一抗体）として本発明に係るモノクロ
ナール抗体の一種を任意に選択し、蛋白濃度としてのＯ
Ｄ、、、。
が０．０５０となるように０．１Ｍ！Ｊン酸緩衝生理食
塩液（ｐＨ７，２）に溶解し２例えばポリスチロール製
エンザイムイムノアッセイ用ウェルに入れ、４°Ｇで一
夜放置すれば、固相表面は第一抗体によってコートされ
る。標準抗原は肝癌患者から得た腹水を精製処理して精
製塩基性胎児蛋白を用意し、標準抗原希釈液を用いて所
定の濃度に調製したものを使用した。
塩液（ｐＨ７，２）に溶解し２例えばポリスチロール製
エンザイムイムノアッセイ用ウェルに入れ、４°Ｇで一
夜放置すれば、固相表面は第一抗体によってコートされ
る。標準抗原は肝癌患者から得た腹水を精製処理して精
製塩基性胎児蛋白を用意し、標準抗原希釈液を用いて所
定の濃度に調製したものを使用した。
標識用抗体（第二抗体）としては第一抗体が反応する抗
原決定基と異なる抗原決定基と反応する本発明に係るモ
ノクロナール抗体を選択する。また酵素としては例えば
アルカリフォスファターゼ。
原決定基と異なる抗原決定基と反応する本発明に係るモ
ノクロナール抗体を選択する。また酵素としては例えば
アルカリフォスファターゼ。
グルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、ベータガ
ラクトシダーゼ等を使用することができる。
ラクトシダーゼ等を使用することができる。
測定に先立ちゲルタールアルデヒドのごとき結合剤をも
って標識用抗体に酵素を結合せしめてコンデ。ゲートと
し２本発明測定方法の実施のための試薬の一部としてあ
らかじめ準備しておくことができる。基質は選択した酵
素に応じて適宜使用すればよい。例えば酵素としてアル
カリフォスファターゼを選択した場合においてはｐ−ニ
トロフェニルフォスフェート等を使用すればよい。
って標識用抗体に酵素を結合せしめてコンデ。ゲートと
し２本発明測定方法の実施のための試薬の一部としてあ
らかじめ準備しておくことができる。基質は選択した酵
素に応じて適宜使用すればよい。例えば酵素としてアル
カリフォスファターゼを選択した場合においてはｐ−ニ
トロフェニルフォスフェート等を使用すればよい。
測定は酵素免疫測定法における通常の手順に従っておこ
なえばよい。従って後記実施例において示されるごとく
、第一抗体をコートしたカップに標準抗原または被検血
清を加えてインキュベートし、続いて酵素標識抗体１例
えば第二抗体−−−アルカリフォスファターゼコンジュ
ゲートを加えてインキュベートし、最後に基質２例えば
ｐ−ニトロフェニルフォスフェートを加えてインキュベ
ートし、基質の分解量を分光光度計を用いて測定すれば
よい。
なえばよい。従って後記実施例において示されるごとく
、第一抗体をコートしたカップに標準抗原または被検血
清を加えてインキュベートし、続いて酵素標識抗体１例
えば第二抗体−−−アルカリフォスファターゼコンジュ
ゲートを加えてインキュベートし、最後に基質２例えば
ｐ−ニトロフェニルフォスフェートを加えてインキュベ
ートし、基質の分解量を分光光度計を用いて測定すれば
よい。
なお、固相にコー【・ずべき第−抗１ドは単一種のモノ
クロナール抗体であってもよいが、複数種のモノクロナ
ール抗体を混合した物であってもよい。
クロナール抗体であってもよいが、複数種のモノクロナ
ール抗体を混合した物であってもよい。
要は第一抗体と第二抗体とがそれぞれ別個の抗原決定基
と反応する物であればよく、各抗体が単一種のモノクロ
ナール抗体より構成されるか、あるいは複数種のモノク
ロナール抗体より（ト！成されるかは本発明において特
に限定すべき要件ではない。
と反応する物であればよく、各抗体が単一種のモノクロ
ナール抗体より構成されるか、あるいは複数種のモノク
ロナール抗体より（ト！成されるかは本発明において特
に限定すべき要件ではない。
本発明測定方法は後記実験例によって示されるごと（標
準抗原の発色値および正常人血清中の塩基性胎児蛋白値
（以下ＢＦＰ値と呼ぶ）においてポリクロナール抗体を
使用した場合におけると同等の結果を与えることができ
る点に特徴がある。
準抗原の発色値および正常人血清中の塩基性胎児蛋白値
（以下ＢＦＰ値と呼ぶ）においてポリクロナール抗体を
使用した場合におけると同等の結果を与えることができ
る点に特徴がある。
次に本発明測定試薬は前記本発明測定方法の実施に直接
使用する試薬であり、測定方法におけると同一の目的を
達成するものである。従って、二抗体を使用するサンド
イツチ法に基づき、酵素免疫測定法および放射免疫測定
法のいずれかを利用するものである。従って２例えば酵
素免疫測定法を利用する場合について本発明測定試薬の
具体的態様を示せば次のごとくである。すなわち２本発
明測定試薬は相互に異なる抗原決定基と反応する同相コ
ート用抗体（第一抗体）および標識用抗体（第二抗体）
を必須の構成成分とし、これ用独またはこれに固相、標
準抗原、酵素および基質よりなる群から任意に選択した
−乃至四を組合せたもののセットである。ここにおいて
、セット中に固相が含まれる場合に当該固相が第一抗体
によってコートされた状態で提供されることあるいはセ
ット中に酵素が含まれる場合に当該酵素が第二抗体とコ
ンジュゲ−１・された状態で提供されることは自由であ
り、これらも同様に本発明測定試薬の態様に含まれる。
使用する試薬であり、測定方法におけると同一の目的を
達成するものである。従って、二抗体を使用するサンド
イツチ法に基づき、酵素免疫測定法および放射免疫測定
法のいずれかを利用するものである。従って２例えば酵
素免疫測定法を利用する場合について本発明測定試薬の
具体的態様を示せば次のごとくである。すなわち２本発
明測定試薬は相互に異なる抗原決定基と反応する同相コ
ート用抗体（第一抗体）および標識用抗体（第二抗体）
を必須の構成成分とし、これ用独またはこれに固相、標
準抗原、酵素および基質よりなる群から任意に選択した
−乃至四を組合せたもののセットである。ここにおいて
、セット中に固相が含まれる場合に当該固相が第一抗体
によってコートされた状態で提供されることあるいはセ
ット中に酵素が含まれる場合に当該酵素が第二抗体とコ
ンジュゲ−１・された状態で提供されることは自由であ
り、これらも同様に本発明測定試薬の態様に含まれる。
また測定の便益のために適当なる抗原希釈液９反応希釈
液９反応停止液、基質液解法。
液９反応停止液、基質液解法。
緩衝液等をセット中に添付することも自由であり。
これらは本発明を限定するものではない。
以下に記載する実験例をもって本発明の詳細な説明する
。
。
実験例１
試料
モノクロナール抗塩基性胎児蛋白抗体を使用する固相化
第一抗体および酵素標識抗体として後記実施例１記載に
おけると同様にして調製したものを用意した。
第一抗体および酵素標識抗体として後記実施例１記載に
おけると同様にして調製したものを用意した。
またポリクロナール抗塩基性胎児蛋白抗体を使用する固
相化第一抗体および酵素標識抗体として以下のごとくに
して調製したものを用意した。
相化第一抗体および酵素標識抗体として以下のごとくに
して調製したものを用意した。
すなわち、まず塩基性胎児蛋白をウサギに３回免疫し採
血し、血清分離し、塩伍後、塩基性胎児蛋白によるアフ
ィニティーカラムクロマトグラフィーによって精製して
ポリクロナール抗塩基性胎児蛋白を得た。次にその一部
を０．１ＭＰＢ （ｐＨ７，２）に蛋白濃度としての０
Ｄ２８ｏｆｉ、が０．０５となるように溶解し、エンザ
イムイムノアッセイ用マイクロタイタープレートのウェ
ルに注入し、−夜放ｆ４後、排液し脱イオン水で洗浄し
、カップ乾燥機にて乾燥し、固相化第一抗体とした。ま
たポリクロナール抗塩基性胎児蛋白の他の一部とアルカ
リフォスファターゼが約１π９／ｌｒｄになるように混
ａし、２％グリタールアルデヒドを最終濃度が０，２％
となるようにゆっくり加え、室温３０分間反応させた後
。
血し、血清分離し、塩伍後、塩基性胎児蛋白によるアフ
ィニティーカラムクロマトグラフィーによって精製して
ポリクロナール抗塩基性胎児蛋白を得た。次にその一部
を０．１ＭＰＢ （ｐＨ７，２）に蛋白濃度としての０
Ｄ２８ｏｆｉ、が０．０５となるように溶解し、エンザ
イムイムノアッセイ用マイクロタイタープレートのウェ
ルに注入し、−夜放ｆ４後、排液し脱イオン水で洗浄し
、カップ乾燥機にて乾燥し、固相化第一抗体とした。ま
たポリクロナール抗塩基性胎児蛋白の他の一部とアルカ
リフォスファターゼが約１π９／ｌｒｄになるように混
ａし、２％グリタールアルデヒドを最終濃度が０，２％
となるようにゆっくり加え、室温３０分間反応させた後
。
０．０５Ｍ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で透析し
、１００％ＮＲ８を最終濃度が２５％になるように加え
。
、１００％ＮＲ８を最終濃度が２５％になるように加え
。
０．０５Ｍ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０，１０％Ｎ
Ｒ８，１ｍＭＭｇＣＩ２．０．９％ＮａＣ１含有）によ
って至適濃度に調整し、酵素標識抗体とした。
Ｒ８，１ｍＭＭｇＣＩ２．０．９％ＮａＣ１含有）によ
って至適濃度に調整し、酵素標識抗体とした。
反応希釈液としては、モノクロナール抗塩基性胎児蛋白
抗体を使用する系においては実施例１記載におけると同
様にして調製したものを用意し。
抗体を使用する系においては実施例１記載におけると同
様にして調製したものを用意し。
またポリクロナール抗塩基性胎児蛋白抗体を使用する系
においては以下のごとくにして調製したものを用意した
。すなわち正常家兎血清、 ＥＤＴＡ３Ｎａ、塩化ナト
リウムを０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９，０）中に各々１
２％（ただし標準抗原を希釈する場合は２０％）、 １
０ｍＭ、 ０．９％となるように含有せしめて用意した
。基質液２反応停止液は実施例１記戦におけると同様の
ものを用意した。検体としては正常人血清１８０例、癌
患者血清１９例を７７１意した。
においては以下のごとくにして調製したものを用意した
。すなわち正常家兎血清、 ＥＤＴＡ３Ｎａ、塩化ナト
リウムを０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９，０）中に各々１
２％（ただし標準抗原を希釈する場合は２０％）、 １
０ｍＭ、 ０．９％となるように含有せしめて用意した
。基質液２反応停止液は実施例１記戦におけると同様の
ものを用意した。検体としては正常人血清１８０例、癌
患者血清１９例を７７１意した。
方法
全検体について、モノクロナール抗塩基性胎児蛋白抗体
を使用する測定およびポリクロナール抗塩基性胎児蛋白
抗体を使用する測定を以下の要領によっておこないＢＦ
Ｐ値（ｎｇ／ｍＬ）をめた。
を使用する測定およびポリクロナール抗塩基性胎児蛋白
抗体を使用する測定を以下の要領によっておこないＢＦ
Ｐ値（ｎｇ／ｍＬ）をめた。
まず検体および既知濃度の標準抗原を反応希釈液によっ
て１３倍希釈し、あらかじめ洗浄したウェルに１００μ
ｔずつ注入し、３７℃で１時間インキュベーションした
。精製水で洗浄し２次に至適濃度の酵素標識抗体１００
μｔを加え、３７℃で１時間インキュベーションした。
て１３倍希釈し、あらかじめ洗浄したウェルに１００μ
ｔずつ注入し、３７℃で１時間インキュベーションした
。精製水で洗浄し２次に至適濃度の酵素標識抗体１００
μｔを加え、３７℃で１時間インキュベーションした。
再び精製水で洗浄し、基質液１００μＬを加え、３７６
Ｃで１時間インキュベーションした。ｌＮ−ＮａＯＨ１
００ｒｎｌを加えて反応を停止させ０Ｄ４ｏ、ｆｉ□吸
光値を測定し、 ＢＦＰ値を算出した。
Ｃで１時間インキュベーションした。ｌＮ−ＮａＯＨ１
００ｒｎｌを加えて反応を停止させ０Ｄ４ｏ、ｆｉ□吸
光値を測定し、 ＢＦＰ値を算出した。
結果
結果を図１に示す。図１において横軸はモノクロナール
抗塩基性胎児蛋白抗体を使用する測定によって得られた
ＢＦＰ値を示し、縦軸はポリクロナール抗塩基性胎児蛋
白抗体を使用する測定によって得られたＢＦＰ値を示し
９図１は両ＢＦＰ値の間における相関性を示すグラフで
ある。図の回帰直線の式はｙ−１，０１６ｘ −ｔ−０
，０６であり、相関係数すは０．９８１である。すなわ
ち両ＢＦＰ値は良好な相関性を有しており、従って本発
明はポリクロナール抗体を使用した場合におけると同等
の結果を与えることができることが判明する。
抗塩基性胎児蛋白抗体を使用する測定によって得られた
ＢＦＰ値を示し、縦軸はポリクロナール抗塩基性胎児蛋
白抗体を使用する測定によって得られたＢＦＰ値を示し
９図１は両ＢＦＰ値の間における相関性を示すグラフで
ある。図の回帰直線の式はｙ−１，０１６ｘ −ｔ−０
，０６であり、相関係数すは０．９８１である。すなわ
ち両ＢＦＰ値は良好な相関性を有しており、従って本発
明はポリクロナール抗体を使用した場合におけると同等
の結果を与えることができることが判明する。
以下に記載する実施例をもって本発明をさらに具体的に
説明する。
説明する。
実施例１
塩基性胎児蛋白の異なる抗原決定基にそれぞれ反応する
二種類のモノクロナール抗体に１および５Ｃ２を含有す
るマウス腹水各５ＴＬＬに飽和硫安（４，０５Ｍ）を最
終濃度１．８Ｍになるように加え、室温で２時間撹拌す
る。内容物を１２．ＯＯＯｒｐｍで２０分間遠心して沈
渣と］二清を分離する。沈渣を０．０１ Ｍ ＰＢＳ（
ｐＴ４８．０） ３ ｍｌに溶解し、沈渣を溶解した緩
衝液で透析する。次にＤＥＡＥ−ｃｅｌｌｕｌｏｓｅカ
ラムにかけ、０．１Ｍ ＰＢ （ｐ＋４８．０）でＩｇ
Ｇ成分を溶出させる。溶出ＩｇＧ成分をコロジオンパッ
ク（ＭＷ ７５０００）で濃縮し。
二種類のモノクロナール抗体に１および５Ｃ２を含有す
るマウス腹水各５ＴＬＬに飽和硫安（４，０５Ｍ）を最
終濃度１．８Ｍになるように加え、室温で２時間撹拌す
る。内容物を１２．ＯＯＯｒｐｍで２０分間遠心して沈
渣と］二清を分離する。沈渣を０．０１ Ｍ ＰＢＳ（
ｐＴ４８．０） ３ ｍｌに溶解し、沈渣を溶解した緩
衝液で透析する。次にＤＥＡＥ−ｃｅｌｌｕｌｏｓｅカ
ラムにかけ、０．１Ｍ ＰＢ （ｐ＋４８．０）でＩｇ
Ｇ成分を溶出させる。溶出ＩｇＧ成分をコロジオンパッ
ク（ＭＷ ７５０００）で濃縮し。
Ｋ１お工び５Ｃ２を用意する。Ｋ１を０．１ＭＰＨ（ｐ
Ｈ７，２）に蛋白濃度としての０Ｄ２１１Ｑわが０．０
５となるように溶解し、エンザイムイムノアッ七イ用マ
イクロタイタープレートのウェルに注入し、−夜放置後
排液し、脱イオン水で洗浄し、カップ乾燥１場にて乾燥
し、固相化第一抗体を用意する。
Ｈ７，２）に蛋白濃度としての０Ｄ２１１Ｑわが０．０
５となるように溶解し、エンザイムイムノアッ七イ用マ
イクロタイタープレートのウェルに注入し、−夜放置後
排液し、脱イオン水で洗浄し、カップ乾燥１場にて乾燥
し、固相化第一抗体を用意する。
他方、５Ｃ２およびアルカリフォスファターゼ（５００
０Ｕ／ｒｎＬ ）をそれぞれ０．０７５ Ｍ ＰＢＳで
透析する。
０Ｕ／ｒｎＬ ）をそれぞれ０．０７５ Ｍ ＰＢＳで
透析する。
ＩｇＧ成分とアルカリフォスファターゼが約１ ｙ？９
７ｍ１になるように混合し、さらにマイクロシリンジで
２％ゲルタールアルデヒドを最終濃度が０．２％になる
ようにゆっくり加える。室温で３０分間反応させた後、
０．０５Ｍ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で透析し、
１００％ＮＲ８を最終濃度が２５９６になるように加え
検定後凍結乾燥して酵素標識抗体を用意する。
７ｍ１になるように混合し、さらにマイクロシリンジで
２％ゲルタールアルデヒドを最終濃度が０．２％になる
ようにゆっくり加える。室温で３０分間反応させた後、
０．０５Ｍ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で透析し、
１００％ＮＲ８を最終濃度が２５９６になるように加え
検定後凍結乾燥して酵素標識抗体を用意する。
別に反応希釈液、基質液２反応停止液および標準抗原希
釈液を以下のように用意する。
釈液を以下のように用意する。
反応希釈液は正常家兎血清、正常マウス血清（非働化処
理り６℃、３０分間）、 ＥＤＴＡ３Ｎａ、塩化すトリ
ウム、ソジウムトリアザイドを０．０５Ｍ トリス塩酸
緩衝液（ｐＨ８，０）中に各々１１．８％、２％、１０
ｍＭ、 ０．１５Ｍ、 ０．１％となるように含有せし
めて用意する。
理り６℃、３０分間）、 ＥＤＴＡ３Ｎａ、塩化すトリ
ウム、ソジウムトリアザイドを０．０５Ｍ トリス塩酸
緩衝液（ｐＨ８，０）中に各々１１．８％、２％、１０
ｍＭ、 ０．１５Ｍ、 ０．１％となるように含有せし
めて用意する。
基質液はｐ−ニトロフェニルフ引スフエートヲ０．０５
Ｍ炭酸緩衝液（ｐＩ−１９，４，ＩｖｉｇＣｌ、、 ２
ｍＭ含存）中に４■ムＬとなるように含有せしめて用意
する。
Ｍ炭酸緩衝液（ｐＩ−１９，４，ＩｖｉｇＣｌ、、 ２
ｍＭ含存）中に４■ムＬとなるように含有せしめて用意
する。
反応停止液としてｌＮ−ＮａＯＨを用意する。
標準抗原希釈液は正常マウス血清（非働化処理５６８Ｃ
９３０分間）、 ＥＤＴＡ ３ Ｎａ、塩化ナトリウム
、ソジウムトリアザイドを０．０５Ｍ）リス塩酸緩衝液
（ｐＨ８，０）中に各１８．１％、 １０ｍＭ、 ０．
１５Ｍ、 ０．１’；’６となるように含有せしめて用
意する。
９３０分間）、 ＥＤＴＡ ３ Ｎａ、塩化ナトリウム
、ソジウムトリアザイドを０．０５Ｍ）リス塩酸緩衝液
（ｐＨ８，０）中に各１８．１％、 １０ｍＭ、 ０．
１５Ｍ、 ０．１’；’６となるように含有せしめて用
意する。
以上記載の同相化第一抗体、酵素標識抗体９反応希釈液
、基質液９反応停止液、標準抗原希釈液に標準抗原とし
ての肝癌患者腹水凍結乾燥物を加えてセットとし２本発
明測定試薬とする。
、基質液９反応停止液、標準抗原希釈液に標準抗原とし
ての肝癌患者腹水凍結乾燥物を加えてセットとし２本発
明測定試薬とする。
実施例２
モノクロナール抗体５Ｃ２をｐＨ７，５，０，０５Ｍリ
ン酸緩衝液に溶解し、蛋白質濃度をｌ’ｆ／／ｍ、Ｌに
調製する。この液１０μＬに１ミリキユーリーの１２″
ｌ−Ｎａ５０μｌを加え、さらにクロラミンＴをｎｉｆ
記リン酸緩衝液に１．５”Ｆ／ｍ１（７）割合に溶解し
た液を１０ ｕ、ｌ加えて３０秒間撹拌する。次いでメ
タ重亜硫酸すトリウムを前記リン酸緩衝液に２”ｊｈｒ
ｔｌの割合に溶解した液を１００μｔを加えて反応を停
止させる。ヨウ化カリウムを前記リン酸緩衝液に１０〜
／ｒｒｔｌの割合に溶解しり液１００μｌをこの反応液
に加え、ただちにセファデックスＧ−５０を用いたゲル
ｉ１過により１２５■標識物質と＋２′Ｉとを分離する
。得られた１２′■標識物質の比放射能は約５〜２０１
ｔ Ｃｉ／μｇとなる。
ン酸緩衝液に溶解し、蛋白質濃度をｌ’ｆ／／ｍ、Ｌに
調製する。この液１０μＬに１ミリキユーリーの１２″
ｌ−Ｎａ５０μｌを加え、さらにクロラミンＴをｎｉｆ
記リン酸緩衝液に１．５”Ｆ／ｍ１（７）割合に溶解し
た液を１０ ｕ、ｌ加えて３０秒間撹拌する。次いでメ
タ重亜硫酸すトリウムを前記リン酸緩衝液に２”ｊｈｒ
ｔｌの割合に溶解した液を１００μｔを加えて反応を停
止させる。ヨウ化カリウムを前記リン酸緩衝液に１０〜
／ｒｒｔｌの割合に溶解しり液１００μｌをこの反応液
に加え、ただちにセファデックスＧ−５０を用いたゲル
ｉ１過により１２５■標識物質と＋２′Ｉとを分離する
。得られた１２′■標識物質の比放射能は約５〜２０１
ｔ Ｃｉ／μｇとなる。
この１町標識第二抗体を実施例１における記載のごとく
にして用意する固相化第一抗体と組合わせて放射免疫測
定法を利用する本発明測定試薬とする。
にして用意する固相化第一抗体と組合わせて放射免疫測
定法を利用する本発明測定試薬とする。
図１は実験例１結果の項に記載の図１に相当し。
モノクロナール抗塩基性胎児蛋白抗体を使用する測定に
よって得られるＢＦＰ値およびポリクロナール抗塩基性
胎児蛋白抗体を使用する測定によって得られる１３ＦＰ
値の間における相関性を示すグラフである。 特許出願人 工−ザイ株式会社
よって得られるＢＦＰ値およびポリクロナール抗塩基性
胎児蛋白抗体を使用する測定によって得られる１３ＦＰ
値の間における相関性を示すグラフである。 特許出願人 工−ザイ株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 け）二抗体を使用してサンドイツチ法により塩基性胎児
蛋白を測定するにあたり、該二抗体として塩基性胎児蛋
白の異なる抗原決定基にそれぞれ反応するモノクロナー
ル抗塩基性胎児蛋白抗体を選択することを特徴とする塩
基性胎児蛋白の測定方法 （２）二抗体を使用してサンドイツチ法により塩基性胎
児蛋白を測定する試薬において、該二抗体として塩基性
胎児蛋白の異なる抗原決定基にそれぞれ反応するモノク
ロナール抗塩基性胎児蛋白抗体を選択することを特徴と
する塩基性胎児蛋白の測定試薬
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58189223A JPS6080768A (ja) | 1983-10-12 | 1983-10-12 | 塩基性胎児蛋白の測定方法および試薬 |
| NO844053A NO844053L (no) | 1983-10-12 | 1984-10-10 | Fremgangsmaate for aa bestemme basis-fetoprotein og middel for dette |
| KR1019840006270A KR850003169A (ko) | 1983-10-12 | 1984-10-11 | 염기성 태아단백질의 측정방법 및 시약 |
| EP84112208A EP0140242B1 (en) | 1983-10-12 | 1984-10-11 | Method for assaying basic fetoprotein and reagent therefor |
| DE8484112208T DE3478346D1 (en) | 1983-10-12 | 1984-10-11 | Method for assaying basic fetoprotein and reagent therefor |
| AT84112208T ATE43442T1 (de) | 1983-10-12 | 1984-10-11 | Methode zur bestimmung des basischen fetoproteins und reagens hierfuer. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58189223A JPS6080768A (ja) | 1983-10-12 | 1983-10-12 | 塩基性胎児蛋白の測定方法および試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6080768A true JPS6080768A (ja) | 1985-05-08 |
Family
ID=16237631
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58189223A Pending JPS6080768A (ja) | 1983-10-12 | 1983-10-12 | 塩基性胎児蛋白の測定方法および試薬 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0140242B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6080768A (ja) |
| KR (1) | KR850003169A (ja) |
| AT (1) | ATE43442T1 (ja) |
| DE (1) | DE3478346D1 (ja) |
| NO (1) | NO844053L (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01105163A (ja) * | 1987-07-24 | 1989-04-21 | Nippon Kayaku Co Ltd | 尿中の塩基性胎児蛋白の測定による癌の検出法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5179000A (en) * | 1987-07-24 | 1993-01-12 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Method for assaying basic fetoprotein in urine and assay kit therefor |
| EP0328664B1 (en) * | 1987-07-24 | 1994-01-19 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Method for assaying basic fetal protein in urine and assaying kit therefor |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5716355A (en) * | 1980-04-25 | 1982-01-27 | Hoffmann La Roche | Immunological method |
| JPS5779455A (en) * | 1980-09-12 | 1982-05-18 | Ra Jiyora Kiyansaa Research Fu | Measurement of antigen in liquid state |
| JPS5786051A (en) * | 1980-07-28 | 1982-05-28 | Akzo Nv | Determination of antigen employing two or more monochronal antibodies |
| JPS57136165A (en) * | 1981-02-18 | 1982-08-23 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Immunological measuring reagent |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4376110A (en) * | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
-
1983
- 1983-10-12 JP JP58189223A patent/JPS6080768A/ja active Pending
-
1984
- 1984-10-10 NO NO844053A patent/NO844053L/no unknown
- 1984-10-11 EP EP84112208A patent/EP0140242B1/en not_active Expired
- 1984-10-11 AT AT84112208T patent/ATE43442T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-10-11 KR KR1019840006270A patent/KR850003169A/ko not_active Abandoned
- 1984-10-11 DE DE8484112208T patent/DE3478346D1/de not_active Expired
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5716355A (en) * | 1980-04-25 | 1982-01-27 | Hoffmann La Roche | Immunological method |
| JPS5786051A (en) * | 1980-07-28 | 1982-05-28 | Akzo Nv | Determination of antigen employing two or more monochronal antibodies |
| JPS5779455A (en) * | 1980-09-12 | 1982-05-18 | Ra Jiyora Kiyansaa Research Fu | Measurement of antigen in liquid state |
| JPS57136165A (en) * | 1981-02-18 | 1982-08-23 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Immunological measuring reagent |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01105163A (ja) * | 1987-07-24 | 1989-04-21 | Nippon Kayaku Co Ltd | 尿中の塩基性胎児蛋白の測定による癌の検出法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3478346D1 (en) | 1989-06-29 |
| ATE43442T1 (de) | 1989-06-15 |
| KR850003169A (ko) | 1985-06-13 |
| EP0140242B1 (en) | 1989-05-24 |
| EP0140242A1 (en) | 1985-05-08 |
| NO844053L (no) | 1985-04-15 |
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