JPH02160800A - ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｅｎｖ‐コードペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ）感染症お
よび疾患の予防またはワクチンとして有用なＨＩＶｅｎ
ｖコード蛋白の断片に相当する化学合成ペプチド、およ
び、ＨＩＶの８ｎＶコ一ド断片に対するモノクローナル
抗体に関する。

ヒト免疫不全ウィルス−１（ＨＩＶ−１）即ち後天性免
疫不全症候群（ＡＩＤＳ）起因因子に対する特異的抗体
は、ＨＩＶ感染個体の血清中に認められる（Ｓａｒｎｇ
ａｄｈａｒａｎ等（１９８４）、　　ｒｓｃｌｅｎｃｅ
Ｊ。

２２４、５０８−５０８；　５ｃｈｕｐｂａｃｈ等（１
９８４）、ｒＳｃｉｅｎｃｅＪ　。

２２４、５０３−５０５；　Ｃｈａｎｇ等（１９８５）
、　　ｒＢｌｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＪ　。

３　、９０５−９１１；　Ｋｅｎｅａｌｙ等（１９８７
）ＪＡＩＤＳ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈａｎｄ　　Ｈｕｍａｎ
　　ＲｅｔｒｏｖｌｒｕｓｅｓＪ　　、　　　３　　、
　９５−１０５）　　、　　ＨＩ　　Ｖ　　−１増殖を
ブロックする血清抗体（ＨＩ　Ｖ−中和抗体）または培
養細胞中のＨＩＶ−感染細胞と未感染細胞の融合をブロ
ックする血清抗体（融合ブロック抗体）の量は、ウィル
スに対する全体的な体液応答（即ち、ＨＩＶ−特異的抗
体の総量）と比べた場合、比較的に低い値である（Ｗｅ
ｌｓｓ等（１９８５）　　、　　ｒＮａｔｕｒｅＪ　　
、　　３１８．　６９−７４；　　Ｒｏｂｅｒｔ−Ｇｕ
ｒｏＲ等（１９８５）　、　　ｒＮａｔｕｒｅＪ　、　
３４６．７２〜７４；Ｗｅｌｓｓ等（１９８Ｂ）、　　
ｒＮａｔｕｒｅＪ　、　３２４．５７２−５７５）。

ＨＩＶ−１感染症の病原性におけるＨＩＶ−中和抗体お
よび融合ブロック抗体の役割、およびこの生物学的活性
に寄与しているエピトープ（抗原決定基）の構造はまだ
明らかにされていない。

ＨＩＶ−１の外部表面膜糖蛋白（ｇｐ１２０）はヒト中
和抗体と結合することが知られており、動物におけるＨ
ＩＶ−中和抗体を誘導する能力のある免疫原として使用
されている（Ｌａｓｋｙ等（１９８１３）。

ｒｓｃｌｅｎｃｅＪ　、　２３３．２０９−２１２：　
Ｍａｔｔｈｅｗｓ等（１９８Ｂ）。

ｒＰｒｏｅ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ１．　Ｕ
ＳＡＪ　、　８３．　９７０９−９７１３；Ｒｏｂｅｙ
等（１９８８）　、　ｒＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃ
ａｄ、　Ｓｃｌ。

ＵＳＡＪ　、　８４．７０２３−７９２７）。特に、こ
れらの中和抗体は型特異的であると報告されており、即
ち、抗体はＨＩＶ−１サブタイプまたは免疫原の由来す
る単離法の増殖のみをブロックするのである。

動物において中和抗体を誘導するような多くのＨＩＶ−
１ペプチドおよび蛋白が同定されている。

これらには、迅−コード蛋白、生−コード膜内外蛋白（
ｇｐ４１）に由来する配列に相当する合成ペプチド、お
よびＱｎＶ−コードｇｐ１２０蛋白の保守（ｃｏｎｓｅ
ｒｖｅｄ）領域に相当するいくつかのペプチドが包含さ
れる（ｐｕｔｎｅｙ等（１９８Ｂ）、　　ｒｓｅｊｅｎ
ｃｅＪ。

２３４、１３９２−１ｇ９５；　５ａｒｊｎ等（１９８
６）、　　ｒｓｃｌｅｎｃｅＪ２３２、１１３５−１１
３７；　Ｋｅｎｎｅｄｙ等（１９８７）、　　ｒＪ　、
Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、Ｊ　、　２８２．５７６９−５７７４；　Ｔ
ａｙｌｏｒ等（１９８７）　。

ｒＰｒｏｅ、　Ｎａ１１．　Ａｃａｄ、　Ｓｌｃ、　Ｕ
ＳＡＪ　、　８４．　２９５１−２９５５；Ｃｈａｎｈ
等（１９８１３）、　　　ｒＥＭＢＯＪＪ　　、　　　
５．　３０８５−３０７１；ＨＯ等（１９８７）、ｒＪ
、　ｏｒ　ＶＩｒｏｌ、Ｊ　、　８１．２０２４−２０
２８）。

特に大量の中和抗体および融合ブロック抗体が２つの組
換え蛋白により動物において誘導されることが示されて
いる。これらの１つは昆虫細胞表現系を用いて産生きれ
るグリコジル化仝長ｅｎｖ−コード蛋白でｇｐ１３０と
称されるものであり（Ｒｕ５ｃｈｅ等（１９８７）、　
　ｒＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｌ。

ＵＳＡＪ　、　８４．６９２４−６９２８）、２番目の
ものは、非グリコジル化Ｅｓｃｈｅｒ１ｃｈ１ａ　ｃｏ
ｉｌ産生蛋白でＦＢＩと記されｇｐ１２０のある領域（
ＨＩＶ−１ＩＩＩＢのアミノ酸番号２８８〜４７２）を
示すものである（Ｐｕｔｎｅｙ等（１９８Ｂ）、　　ｒ
ｓｅｉｅｎｃｅ　Ｊ　、　２８４．１９３２−１３９５
）、免疫原としてこれらの蛋白を用いた強力な抗体応答
にもかかわらず、中和活性はＨＩ　Ｖ　−１サブタイプ
または免疫原の由来する単離株、即ちｍＢに対してのみ
に制限されてお広これらに特異的であった。

組換え蛋白ＰＥ３（ｅｎｖ−コードｇｐ１２０のアミノ
末端に相当）およびＥ　Ｎ　Ｖ　９　（ｇｐＬ２０のカ
ルボキシ末端およびｇｐ４１のほとんどに相当）は測定
可能な水準の中和活性を示さなかった（Ｐｔ＋ｔｎｅｙ
等。

（１９８Ｂ）、　　ｒｓｃｉｅｎｃｅＪ　、　　２３４
．１３９２−１３９５）のに対し、ＦＢＩは、組換えｇ
ｐｉｅｏを用いた場合と同等またはそれ以上の中和抗体
および融合ブロック抗体の量を誘導できた（　Ｒｕ５ｃ
ｈｅ等（１９８Ｂ）、　　ｒＰｒｏｃ。

Ｎａｔ　ｌ　、Ａｃａｄ、　Ｓｃ１．　ＵＳＡＪ　、　
８４．８９２４−８９２８）。

Ｅ、　ｃｏｌｔ表現ＨＩＶ−１ｅｎｖ−由来蛋白ＰＢ１
は、免疫原として用いた場合に、動物において、高水準
の中和抗体および融合ブロック抗体を誘導することが知
られている（　ｐｕｔｎｅｙ等（１９ｇＢ）。

ｒｓｃｌｅｎｃｅＪ　、　　２３４．１３９２−１３９
５）。動物におけるこのような免疫応答は、ＨＩＶｅｎ
ｖのこの領域がＨＩＶ感染症と疾患の治療または予防に
有用であることを示唆している。我々は、中和活性およ
び融合ブロック活性に関与するとみられるｇｐ１２０の
ＰＢＩ領域内の断片をさらに特定するための系統的分析
を行なった。全ＰＢＩ領域（ＨＩ　Ｖ　−１ｍ　Ｂ　ｅ
ｎｖ−コード蛋白ｇｐ１２０のアミノ酸番号２８８〜４
７２）を表わす一連の重複化学合成ペプチドを用いた系
統的分析を行なった。ペプチドの長さは１５〜１Ｇアミ
ノ酸であり、５アミノ酸で相互に重複していた。これら
の合成ペプチドを用いて実験動物（モルモット）を免疫
化し、その結果実験動物中で生産された抗ペプチド抗体
のＨＩＶ中和活性および細胞融合ブロック活性を含む生
物学的活性について分析した。

分析したＨＩＶ−１ｅｎｖコードＰＢＩ領域に広がる合
成ペプチドを表１に示す。試験した１６ペプチドのうち
、１−８９と示されている１つのペプチドのみが、免疫
原として使用した場合に培養細胞中のＨＩＶ増殖および
培養細胞中のＨＩＶ感染細胞と未感染細胞の融合の両方
をブロックする抗体を誘導した。この観察結果は、ペプ
チド１〜６９、または、ペプチド１−６９の配列のほと
んどを包含するほぼ同じ長さのペプチド（１０〜３０ア
ミノ酸、好ましくは１５〜２５アミノ酸）が、ＨＩＶ感
染症の予防またはワクチンとして、あるいは、ＨＩＶ感
染症の予防またはワクチンの１要素として有用であるこ
とを示している。ペプチド１−８９の配列の一部を包含
する５〜１０アミノ酸よりなるより小さなペプチドは、
哺乳類におけるＨＩＶ抑制抗体の誘導のために使用でき
ると予想される。

有用なはプチドには、ＱＲＧＰＧＲＡ、　ＲＩＱＲＧＰ
ＧＲ＾。

ＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧ、　ＧＰＧＲＡＦＶおよびＧＰＧ
ＲＡが包含される。

約３６アミノ酸長、ＨＩ　Ｖ　−１ｍＢｅｎｖ：ｌ−ド
Ｃｙｓ２９Ｂ＝　Ｃｙｓ３３１の範囲（表４参照）に延
び、そして、ペプチド１−６９を包含するようなある程
度長いペプチドも、同様に、動物においてＨＩＶ抑制抗
体を誘導すると期待される。

ＨＩＶ増殖を抑制しＨＩＶ媒介細胞融合をブロックする
抗体は、ＨＩＶ感染への抵抗性を増加すると考えられる
。本明細書においては、ｒＨＩ　Ｖ抑制抗体」という用
語は中和抗体および融合ブロック抗体の両方を包含する
。対象におけるこのようなＨＩＶ抑制抗体の有無を検知
する能力は重要な予後価値を有する。このような抗体を
含有する薬学的製剤は、ＨＩＶに曝露された固体の受動
免疫化に用いることができる。さらに、このような抗体
はＡＩＤＳ患者の滞在的治療能力を有すると同時に、Ｈ
ＩＶ感染個体におけるＡＩＤＳへの疾患進行速度を低下
させると考えられる。本発明のモノクローナルＨＩＶ抑
制抗体は特に有用であると期待される。

抗ペプチド１−６９抗体のＨＩＶ中和活性および融合ブ
ロック活性は、ＨＩＶ−１ｍＢは抑制されるがＨＩＶ−
ＩＲＦは抑制されないことから、ペプチド鎖の由来する
ＨＩＶ単離単離内にほとんど制限される。しかしながら
、他の単離株に由来するＨＩＶ−ＩＩ［ＩＢペプチド１
−６９に相同なｅｎｖコード領域はアミノ酸配列比較に
より容易に同定でき（表４）、そして相当するペプチド
は、ペプチド１−６９に関して記載された方法により合
成でき、そして免疫原として使用できる。さらに、ｇｐ
ｔ２ｏのアミノ酸番号２９６〜３３１の領域に類縁性の
高い配列を有するＨＩＶ−１サブタイプまたは単離株の
抑制も期待できる。実際にＭ　Ａ　ｂ　＃　５０２５゜
２９．１，１．１　　（ＡＴＣＣ＃ＨＢ１００４１）ｊ
：！多（（７）ＨＩ　Ｖ　−１単離株、例えばＤＩＢや
ＭＮに対して融合ブック活性を示す。

アミノ酸（ａａ）配列に関して本明細書中で使用する「
相当する」という用語は、例えばＩｎｔｅｌｌｌｃｅｎ
ｅｔｉｃｓ社（Ｍｏｕｎｔａｌｎ　Ｖｌｅｗ、　（Ａ）
またはＧｅｎｅｔ　’１ｃｓＣｏｓｐｕｔｃｒ　Ｇｒｏ
ｕｐ　（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆν１ｓｃｏｎｓｉ
ｎＢ１ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｅｎｔｅｒ＋　Ｍａ
ｄｌｓｏｎ、　Ｍｌ）より市販されている標準的なコン
ピュータープログラムを用いて２つ以上のａａ配列を比
較して相同性の順に並べた時に互いに並べられたａａ間
の関係（類縁性）を指すものである。

ＨＩＶ−１ｍＢペプチド１−６９と相同する領域に相当
する、異なるＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２単離株に対す
るｅｎｖコードペプチドの配列を表４に示す。ＨＩＶ−
１ｍＢペプチド１−６９に相当するｅｎｖコード領域は
表４の説明文に記載された方法を用いて同定できる。異
なるＨＩＶ単離株に由来する表面膜蛋白は、ａａ配列に
おいてかなり異なる領域を有するが、例えばＣｙｓ残基
（表４参照）の相対的位置を含めて、蛋白の全体的構造
はかなり維持されている。異なるＨＩＶ単離株に由来す
るｅｎＶ蛋白の全体的構造および官能基特性（例えばＣ
Ｄ４結合）がかなり維持されているため、他のＨＩＶ−
１およびＨＩＶ−２単離株に由来するペプチド１−６９
に相当するｅｎｖコード領域は、ペプチドで免疫化され
た動物においてＨＩＶ−中和抗体および細胞融合ブロッ
ク抗体を同様に誘導すると期待できる。ＨＩＶ感染に対
する有効なワクチンまたは予防薬は、ＨＩＶ−１ｍＢペ
プチド１−６９に相当する領域を含むペプチドの混合物
または「カクテル」を含有する。好ましくは、このよう
な混合物はペプチド１−６９に相当するペプチド、また
は、種々のＨＩＶ−１単離株に由来するいく分長めまた
は短かめの等価なペプチドを含む。

このような混合物または「カクテル」は多くの異なるＨ
ＩＶ単離単離内する広範囲の抵抗性を与える能力を有す
る。

本発明はまた、ＨＩＶ−１表面膜由来ペプチド１、−８
９に対するＨＩＶ抑制モノクローナル抗体にも関する。

特に、一連のネズミモノクローナル抗体を、合成ＨＩＶ
表面膜由来ペプチド１−Ｂ９番に対して形成した。これ
らのネズミモノクローナル抗体の１つは、そのハイブリ
ドーマクローン＃　５０２３．２４．４．１．１　（Ａ
　Ｔ　ＣＣ＃　ＨＢ　１００４３）により知られており
、ＩＩＩＢ単離株に対する特に強力なＨＩＶ−１ウイル
ス中和活性を有し、そして、ＨＩＶ−ＩＩ［ＩＢ感染細
胞の未感染標的細胞との融合をブロックすることがわか
った。これらのＭＡｂのうちの他のものである＃５０２
５．２９．１．１．１（Ａ　Ｔ　ＣＣ＃　ＨＢ　１００
４１）ハ、多（（７）ＨＩＶ−１単離株に対する融合ブ
ロック活性を有することがわかった。

ＨＩＶ−１ｍＢｅｎｖ−コードアミノ酸番号　２８８〜
４７２を包含するＥ、　ｃｏｌｔ産生蛋白Ｐ８１番は、
免疫化された動物においてＨＩＶ中和活性および融合ブ
ロック活性を有する抗体を誘導することが以前より知ら
れている（Ｐｕｔｎｅｙ等（１９８Ｂ）、　　ｒｓｃｌ
ｅｎｃｅＪ　。

２３４、１３９２−１３９５）。我々ハ、ＨＩＶ中和活
性オヨび細胞融合ブロック活性を有する抗体を誘導する
と考えられる抗原決定基を特定する試みとして、全ＦＢ
Ｉ領域を完全に包含する一連の１８重複合成ペプチド（
表１）の抗原性と免疫原性を系統的に分析した。

ペプチドは、これらがヒトＨＩＶ−１血清陽性血清試料
から得た抗体により認識されるか否かを測定するために
抗原として分析した（表１）。この分析によれば、力価
測定用マイクロプレート（ｍｌｃｒｏｔｉｔｅｒ　ｐｌ
ａｔｅ）への抗体の非特異的結合と比較した際に多くの
ＨＩＶ−１血清陽性血清試料と反応するような２つのペ
プチド、１−６９および１−７３が観察できた。ＨＩＶ
−１血清陽性血清試料中ヒト抗体といくつかのｅｎＶ−
コードペプチドとの反応性をさらに分析し、対照群ＨＩ
Ｖ−１血清陰性血清試料の場合と比較した（表２）。ペ
プチド１−６９は試験したＨＩＶ−１血清陽性血清試料
の３７検体中１２検体に対して高い反応性を示したのに
対し、試験した４７の対照群ＨＩＶ−１血清陰性血清試
料は全て、０．２の限界値を超えたＥＬＩＳＡ吸光度を
有していた。ＨＩＶ−血清陰性血清試料のペプチド１−
３０および１−７３との反応開度および反応強度は、ペ
プチド１−６９の場合より低かった。対照群血清のペプ
チド１−７３との反応性はある程度観察された（血清試
料４７検体中３検体）。ペプチド１−６９および１−３
０との血清試料反応性とＨｌｖ−１血清陽性度との間に
は明らかな相関があり、即ち、ペプチド１−６９または
ペプチド１−３０を用いたＥＬＩＳＡでｌ；！ＨＩＶ特
異的抗体の特異性が示された。ペプチド１−６９および
１−３０、および他のＨＩＶ単離株由来の相当するペプ
チドは、診断目的および予後目的として行うヒト血清試
料中のＨＩＶ特異的抗体の検知において有用である。ペ
プチド１−３０はＨＩＶ−１ｍ　Ｂ　ｅｎｖコード蛋白
のａａ番号４１８〜４３２を有する。ペプチド１−６９
はＨＩＶ−１１１１６ｅｎｖ＝］−ド蛋白のａａ番号３
０８〜３２２を有する。表２における条件下では、ペプ
チド１−８８．　１−７４．　１−７７．１−８１およ
び１−８４は、きわめて少ないＨＩＶ−１血清陽性試料
で検知された（３７検体中１つ以下）。表１および２に
示した所定のペプチド（例えばペプチド１−８１．　１
−８４．　１−７３）に対するＥＬ　Ｉ　ＳＡ吸光度値
および陽性反応血清試料率における差は、表１および２
の条件の差を反映したものと考えられる。

ペプチドの免疫原性を調べたところ（表３）、ペプチド
５つ（１−６７、１−７５，１−７７、１−３０および
１−８３）はモルモットにおいて高い抗ペプチド抗体力
価を示すことが不可能であることが解った。かなり高濃
度の抗ペプチド抗体を有するモルモット血清試料のうち
、ペプチド１−６９に対して活性を示したもののみが以
下の検知可能な活性、即ち＝１）免疫プロット上でｅｎ
ｖコードｇｐ１２０と反応する（表３　）　　；　２）
ｇｐ１２０を免疫沈降できる（データは示さず）；３）
培養細胞中でＨＩＶ−１ｍＢ増殖を中和できる（表３）
；４）培養細胞中でＨＩＶ−１ＩＩＩＢ感染細胞と未感
染細胞の細胞融合をブロックできる（表３）という活性
を有した。

ウィルス中和試験を用いた場合、抗ペプチド１−６９血
清は、１　：　３００希釈で５０％抑制を示した。

この水準の中和活性は、ＨＩＶ−感染細胞から精製され
たｇｐ１２０または組換えｅｎｖ由来蛋白または他の化
学合成ＨＩＶ由来ペプチドに対する抗体に関して以前報
告されたものと同等かそれ以上である　（Ｌａｓｋｙ等
（１９８８）、　　ｒｓｅｌｅｎｃｅＪ　、　　２３３
．２０９−２１２；　Ｍａｔｔｈｅｖｓ等（１９８Ｂ）
、　　ｒＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃ１．　ＵＳＡＪ　、　８Ｌ　９７０９−９７１３；
　Ｔａｙｌｏｒ等（１９８７）。

ｒＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ
ＳＡＪ　、　８４．２９５１−２９５５；　Ｃｈａｎｈ
等（１９８Ｂ）、　　ｒＥＭＢＯＪ、Ｊ　５．３０Ｂ５
−３０７１；　Ｈｏ等（１９８７）　、　　ｒＪ、　ｏ
ｒ　Ｖｉｒｏｌ、Ｊ　、　６１゜２０２４−２０２８）
。ｇｐ１２Ｇのような複雑な高度にグリコジル化された
蛋白から得られた短い化学合成ペプチド配列が天然の蛋
白より明らかに強い中和応答を示すことが可能であると
いうことは、特筆すべきことであり、興味深いことであ
る。不適切な免疫応答を防御応答と称しているようにも
感じられる。ペプチド１−６９領域外の他のｅｎｖ領域
に特異的な抗体がｅｎｖのペプチド１−６９領域に対し
て特異的な中和抗体の結合を妨害することも可能である
。また、ペプチド１−６９領域外の他のｅｎｖコード抗
原決定基が、ｅｎｖのペプチド１−６９領域に対して特
異的な強い免疫応答を妨害することも可能である。遊離
のウィルスと結合した抗体はマクロファージとより結合
し品くなるためマクロファージの感染し易さを増大させ
ることも知られている。

これらの考察することにより、ペプチド１−６９が、動
物におけるＨＩＶ抑制抗体誘導能力の面でｅｎｖ蛋白の
より大きな断片よりも良好な免疫原である理由が説明で
きるであろう。即ち、適切なペプチド免疫原の使用によ
り、防御機能のない、動物のＨＩＶ特異的抗体の誘導を
回避できる。

さらに、抗ペプチド１−６９血清は細胞融合をブロック
する能力を有し、これは、ＨＩＶ感染細胞より精製した
ｇｐｔｚｏ特異性ヤギ抗体（Ｍａｔｔｈｅｗｓ等（１９
８Ｂ）、　　ｒＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　
Ｓｃ１．　ＵＳＡＪ　、　８３゜９７０９−９７１３）
では示すことのできなかった特性である。抗ペプチド１
−６９血清中の融合ブロック抗体の濃度は、ＨＩＶ−１
血清陽性血清中に検出される最も高い濃度（Ｍａｔｔｈ
ｅｗｓ等（１９８７）、　　ｒＰｒｏｃ。

Ｎａ１１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡＪ　、　８
４．４２４−５４２８）に匹敵するものである。

抗ペプチド１−６９血清はＨＩＶ−ＩＩＩ［Ｂのみを中
和し、ＨＩＶ−１１１ＩＢ感染細胞の融合をブロックし
、ＨＩＶ−ＩＲＦに対する作用は示さなかった。

Ｈａｈｎ等およびその他（Ｈａｈｎ等（１９８５）、　
　ｒＰｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡＪ　、　８
２．４８１３−１８１７；　　５ｔａｒｃ１ｃｈ等（１
９８６）、　　ｒｃｅｌｌＪ　、　４５．６３７−６４
８；　Ｈａｈｎ等（１９８［１）。

ｒｓｃｌｅｎｃｅＪ　、　　２３２．１５４８−１５５
３）は、ｇｐ１２０蛋白内の予想されたアミノ酸変動の
領域を確認し、抗ウイルス抗体の型または単離味の特異
性がこれらの変動性過剰領域の認識によるものであると
予測した。我々の結果は、予測された変動性過剰領域の
１つの範回内の１５アミノ酸を有する強力な中和・融合
ブロック領域を確認し、型または単離味に制限された中
和におけるアミノ酸変動の役割を裏付けるものである。

ＨＩＶ−１陽性血清のこの同じペプチドとの反応性は、
この蛋白領域がＨＩＶ−１感染の間に認識され抗体を誘
導するということを示している。

ｇｐ１２０の抗原性領域のコンピューターによる予測に
ついて、Ｎｏｄ　ｒｏｗ等が報告している（　Ｎｏｄ　
ｒｏｗ等（１９８７）、　　ｒＪ、　ｏｆ　Ｖｌｒｏｌ
、Ｊ　、　６１．５７０−５７８）。ペプチド１−６９
の包含する領域はＨＩＶ−ＩＩＩ［Ｂ単離味に対して抗
原性を有すると予想される領域の１つに含まれている。

ペプチド１−７３の一部分も抗原性を有すると予想され
るが、ＨＩＶ−１陽性血清に対して反応性を有する他の
ペプチド、１−３０は抗原性を有さなかった。ペプチド
１−３０に対する反応性がさらに調査する際に有益であ
る理由は、このペプチドがｇｐ１２０の保守された領域
に由来するためである。即ち、ペプチド１−３０は、保
守された領域内に含まれない領域の配列が異なるような
ｅｎｖコード蛋白を有する多くの異なるＨＩＶ単離株に
応答して誘導されたヒト抗体の検知において有用である
と考えられる。

抗ペプチド１−６９血清のＨＩＶ−抑制活性はＩＩ［Ｂ
単離味に特異的であると考えられるが、中和を媒介し、
細胞融合をブロックする抗体が単一の短い（１５アミノ
酸）ペプチド鎖に応答して形成されるという点は興味深
い。この結果は、ｅｎｖの同じ１５ａａ領域がウィルス
中和と細胞融合抑制の両方の過程にとって重要であると
いう理由から、この２つの過程には共通の作用機構が存
在することを示唆している。ＨＩＶ表面膜蛋白はウィル
ス感染性と感染細胞の融合の両方においである役割を果
たすことが知られており、ｅｎｖ由来蛋白に特異的なヒ
トおよび動物のある抗体はウィルス感染性と融合の両方
をブロックする（Ｐｕｔｎｅｙ等（１９８６）　。

ｒｓｃｉｅｎｃｅＪ　、　２３４．１３９２−１３９５
；　Ｒｕ５ｃｈｅ等（１９８７）。

ｒＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ１．　Ｕ
ＳＡＪ　、　８４．６９２４−１３９２８）。

我々の結果は両方の活性を与える抗体はｇｐ１２０の単
一の１５アミノ酸領域内に結合することを示している。

意外にも、本発明のモノクローナル抗体はＨＩＶ中和お
よび融合ブロックの両方の活性を示すことがわかった。

抗ペプチド１−６９によるＨＩＶ抑制の他の機構も考え
られるが、抗ペプチド１−６９抗体のこの領域への結合
はｇｐ１２０およびｇｐ４１の相互作用も妨害すること
ができる。

ウィルスを中和し、感染細胞と未感染細胞の融合をブロ
ックするモノクローナル抗体は、不適切で潜在的に有害
な免疫応答を生じることなく、ＨＩＶ−１感染に対する
抵抗力を増大させる。

ペプチド１−６９または他のＨＩＶ−１単離株に由来す
る表面膜蛋白の相当する断片に対するモノクローナル抗
体は研究用試薬として、または抗イデオタイブ抗体の開
発用試薬として、エイズウィルスに曝露された、または
感染した対象に受動免疫または治療効果を付与するため
に用いることができる。抗イデオタイブ抗体は、元の抗
体Ａｂｌを形成した相手の抗原に対する免疫を発生させ
るための免疫原として使用できる。ＨＩＶ感染の場合は
、抗イデオタイブ抗体を用いた免疫化は、全ウィルスま
たはウィルス成分を用いた免疫化に替わる安全な手段と
なり得る。

合成ペプチド１−６９に対する一連のネズミモノクロー
ナル抗体を開発した。そのノーイブリド−マクローン＃
　５０２３．２４．４．１．１（Ａ　Ｔ　ＣＣ＃　ＨＢ
　１００４３）により知られるこれらのモノクローナル
抗体の１つはＩＩ［Ｂ単離株に対する特に強力なＨＩＶ
−１ウイルス中和活性を有し、ＨＩＶ−ＩＩ［ＩＢ感染
細胞と未感染標的細胞の融合をブロックすることがわか
った。従って、これはＨＩＶ−１ｍＢ単離株に曝露され
た対象の受動免疫形成、または、ウィルスに感染した対
象の病状進行を遅延させる治療薬として、有用であると
期待される。

ＭＡ　ｂ　＃　５０２３．　２４．４．１．１はｅｎＶ
ｇｐ１２０に対する強いウェスタンプロット活性も示し
、これは、診断目的の用途の可能性も示唆している。こ
れらのモノクローナル抗体はワクチン生産のための抗イ
デオタイブ抗体の開発に使用する優れた試薬でもあり得
る。この同じペプチドに対して形成した他のＭＡｂはよ
り低い中和活性を有しており、これらも後述する。

表１および４は、ＬｅｈｎｉｎｇｅｒのｒＢｌｏｃｈｅ
ｓｉｓｔｒｙＪ　＊第２版、　り７２（Ｗｏｒｔｈ　Ｐ
ｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、　Ｉｎｃ、　（１９７５））に記
載のアミノ酸（ａａ）残基を示す１文字記号を用いて、
ペプチドのアミノ酸配列を列挙したものである。従って
、ペプチド１−６９のａａ配列はＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦ
ＶＴＩＧＫまたはＡｒｇ−Ｉ　ｌｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｖ
ａｌ　−Ｔｈｒ−Ｉ　Ｉｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓで示されて
いる。

種々の薬学的処方および投与形態に関する価値ある情報
源としては、ｒＲｅｍｌｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａ
ｃｅｕｔｌｃａｌＳｃｌｅｎｃｅＪ　、　１７版、　　
（１９８５）　（Ｍａｅｋ　ＰｕｂｌｌｓｈｌｎｇＣｏ
ｇｇｐａｎｙ、　Ｅａｓｔｏｎ、　ＰＡ　１３０４２）
が挙げられる。

図面の説明 第１図は重複合成ペプチドに含まれるＨＩＶ−１ｅｎｖ
コード配列の地図である。黒部針は保守蛋白領域を示し
、斜線部分は変動過剰領域を示す（Ｐｕｔｎｅｙ等（１
９８Ｂ）、　　ｒｓｃｌｅｎｃｅ、２３４．　１３９２
−１３９５；５ａｒｌｎ等（１９８Ｂ）　、　ｒｓｃｉ
ｅｎｃｅ　Ｊ　、　２３２．１１３５−１１３７）。

第２図は種々のＭＡｂのペプチド１−８９（免疫化ペプ
チド）、　　１−１７８．　１−１７７、　５．　１−
ｅｌｌおよび１−７０との固相ＥＬ　Ｉ　ＳＡにおける
免疫反応性を示す。これらのペプチドの配列は表６に示
す。

重複ペプチドを高速マルチペプチド合成システム（Ｒａ
ＭＰＳ、　　Ｅ、　１．　ｄｕＰｏｎｔ　ｄｅ　Ｎｅｍ
ｏｕｒｓ　ａｎｄ　Ｃｏｌ１ｐａｎｙ。

１１１１ｓ１ｎｇｔｏｎ、　ＤＨ）を用いて作成した。

このシステムはマニュアルフォーマットの固相ＦＭＯＣ
化学を用いている。固相担体はＢａｃｈｅｍ　Ｉｎｃ、
社（Ｔｏｒｒａｎｃｅ、　ＣＡ）より入手したｐ−アル
コキシベンジルアルコール樹脂を用いた。樹脂のアミン
置換は約０．２５〜０．６５■ｔａｏ１／　ｇの範囲で
あった。

保護アミノ酸のペンタフルオロフェニルエステル（Ｍｌ
ｌｌｌｇｅｎ、　Ｂｅｄｆｏｒｄ、　ＨＡ）を−次活性
化剤として用い、代替用としてはヒドロキシベンゾトリ
アゾール媒介または予備形成による対称無水物を用いた
。結合効率はニンヒドリンを用いて（Ｋａｉｓｅｒ試験
）定性的にモニターするか、またはイサチンを用いてプ
ロリンに付加した残基を調べた。両方の試験で未反応の
アミン基が検知された。陰性のカイザー試験結果または
イサチン試験結果が得るまで結合を繰り返すことにより
、結合効率〉９９％とした。酸加水分解によりペプチジ
ル樹脂を分解し、Ｃ末端に遊離カルボキシル基を有する
ペプチドを得た。これらのペプチドに対し、２０〜３０
％濃度勾配アセトニトリル：水を用いながらＰｈａｒｍ
ａｃｌａ　　ＦＰＬＣＰｅｐＲＰＣＨＲ５１５カラム上
で逆相クロマトグラフィーを行なうことにより、まずバ
ッチ特性を得た。全てのペプチドをさらに高速原子衝撃
質量分析により分析した。特定のペプチドの意図した配
列はＭ＋Ｈ理論値の主イオンが明らかな場合に存在する
と推定した。

ＦＰＬＣによりはっきりした主ピークが現れなかったり
、質量分析でＭ＋Ｈの分子イオンが無かったペプチドは
、除外して再合成した。

合成ペプチドを、グルタルアルデヒドを用いてＩｓ＋ａ
＋ｕｌｏｎ■−■力価測定用マイクロプレート上に直接
固定化した。プレートを、室温で２時間２％グルグルア
ルデヒド、または３０分間０．１％グルタルアルデヒド
で活性化し、脱イオン水で洗浄した。

グルタルアルデヒド処理には２つの条件を通常使用し、
２％グルタルアルデヒドはペプチドのプレートへの結合
が十分に行なわれるように使用するものであり、そして
、０．１％グルタルアルデヒドは結合部位の変性を防ぐ
ためのものである。

３０５Ｍ重炭酸塩緩衝液中ｔｏＲ／　ｍｌのペプチド溶
液１００μｍ！　（ｐＨ９，８）を各ウェルに分注し、
４℃で一夜インキユベートした。プレートを洗浄し、　
　ＰＢＳＴ（リン酸塩緩衝食塩水＋〇、０５％Ｔｗｅｅ
ｎ（９ＬＯ）を用いて３７℃１時間ブロックし、４℃で
乾燥保存した。

上記したグルタルアルデヒド処理を用いてマイクロプレ
ートのウェルに直接結合させた場合、ＨＩＶ血清陽性血
清と反応しなかったペプチドも、下記するヒト血清アル
ブミン（Ｉ　Ｓ　Ａ）にコンジュゲートされた。この操
作はマイクロプレートへのペプチドの固定化を確認する
ために用いた。

グルタルアルデヒドが反応に関与しなかったことを除き
、前記した操作により、ペプチド−Ｈ９Ａコンジュゲー
トはマイクロプレートのウェルに固定化された。

指示されている場合は用時直前に、３７℃で３０〜６０
分間、プレートを希釈液（ＰＢＳＴ＋５％ウシ血清アル
ブミ血清アルブミン＋２侘 ル）１００μｑで再度ブロックした。希釈液（１００μ
Ｉ２）で１＝２０に希釈したヒト血清試料を各ウェルに
加え、室温で２時間インキュベートした。アルカリホス
ファターゼ　コンジュゲート　ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａ
ｃｋｓｏｎ　ｌ５ｉｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｌｅｓ．Ａｖｏｎｄａｌｅ。

ＰＡ）とともに室温で１時間インキユベートシ、基質と
してリン酸−Ｏ−ニトロフェノールを用いて室温で１時
間発色させた。反応液の光学密度または吸光度をマイク
ロプレートリーダーで測定した。

蛋白担体へのペプチドのコンジュゲート免疫化の前に、
卵アルブミンまたは錠穴吸着（キーホールリンペット）
ヘモシアニンのいずれかにペプチドをコンジュゲートし
た。ＥＬＩＳＡ試験には、担体蛋白としてヒト血清アル
ブミンＣＨ　Ｓ　Ａ）を用いた。担体蛋白（２ｒａｇ／
ｍｌ）を室温で３０〜６０分間０．５％グルタルアルデ
ヒドで活性化し、次に等量のペプチド溶液（ジメチルス
ルホキシド中２ｍｇ／ｍｌ）を添加した。反応を４℃で
一夜行ない、次に、反応混合物を脱イオン水、または、
ヒト血清アルブミンの場合は０．１Ｍグリシン（ｐ）１
７．０）で−夜透析した。

免疫化処理 標準的な免疫化方法に従ってモルモットとウサギを免疫
化した。モルモットおよびウサギを、まず、フロイント
完全アジュバント中のペプチド−担体蛋白コンジュゲー
ト１００〜２００趨で免疫化し、その後、２週間毎に、
フロイント完全アジュバシト中ペプチド−担体蛋白コン
ジュゲート半量を用いて抗原追加投与を行なった。血清
試料は追加投与１回おきに採取した。

ＨＩＶ中和および細胞融合の検定 ２５μρ中約５００　ＴＣ　Ｉ　Ｄ５ｏ感染単位のＨＩ
Ｖ−１１１１６またはＨＩＶ−ＩＲＦを血清希釈液（２
５ｔｄ）と混合し３７℃で３０分間インキュベートした
。

Ｍｏ１ｔ４細胞（４ＸＩＯ’）をｌｏＯμ１２の容量に
して添加し、３７℃で６日間インキュベーションを継続
した。血清試料の最終希釈度は１：２０とした。各培養
液の総容量は、毎日新しい培地ＣＲＰＭ１＋２Ｄ％ウシ
胎児血清）を添加して２倍とした。６日目に試料１００
μ交を上澄みから採取し、抗原捕獲検定（ＤｕＰｏｎｔ
、　Ｗｌｌｓｆｎｇｔｏｎ、　ＤＢ）を用いてウィルス
ｇａｇ−コードｐ２４抗原の量を測定した。

細胞融合検定は文献記載のものである（Ｍａｔｔｈｅｗ
ｓ等（１９８７）　、　ｒＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａ
ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡＪ　。

８４、４２４−５４２８）　、簡単に説明すると、ＨＩ
Ｖ−ＩＩＩ［ＢまたはＨＩＶ−ＩＲＦで慢性感染させた
５０００ＣＥ　Ｍ細胞を１００μｇの容量中７５．００
０のＭｏ１ｔ４細胞と、９Ｂ穴半面積プレート中で混合
した。検定における血清の最終希釈率は１：２０とした
。２４時間後、巨大細胞を倍率４０で、目視的に計数し
た。

放射線免疫沈降試験（ラジオ免疫沈降）各々５００μｃ
ｔのメチオニン（３５Ｓ、　６００μＣＩ／ｍ５ｏＮ　
）およびシスティン（３５Ｓ、　６００　ｕ　Ｃ１／　
ｍｍｏＩ）で４時間標識した細胞ｓ　ｘ　ｔｏ６個の培
養基を用いて検定した。培養基を健常ヒト血清および蛋
白Ａ−セファロースに前吸着した。ヒトＨＩＶ−１陽性
血清またはモルモット血清試料および蛋白Ａ−セファロ
ースを用いて蛋白を免疫沈降させた。

蛋白はＮａＤｏｄＳＯ４−ＰＡＧＥ　（１０％）で分離
し、ゲルをオートラジオグラフで分析した。

実施例 実施例　１ 「材料および方法」で記載したとおり、ペプチドを合成
した。この方法により、ヒト抗体反応性および動物の免
疫化についてスクリーニングできる程十分な量のペプチ
ドを合成できた。ペプチドに含まれる領域を第１図に示
すが、これは、ＰＢＩＪｆｌ換え蛋白の配列も含んでい
る（Ｐｕｔｎｅｙ等（１９８８）　、　ｒｓｅｉｅｎｃ
ｅＪ　、　２３４．１３９２−１３９５）。ペプチドは
、５アミノ酸重複で作成されているため、６連続アミノ
酸配列があればどれでも表わすことができる。

表１に示す全てのペプチドのヒトＨＩＶ−１血清陽性血
清１２検体に対する反応性、即ち、ヒトＨＩＶ−特異的
抗体によるペプチドの認識について、検定した。表１は
、ペプチドを含まないグルタルアルデヒド処理ブランク
ウェルを用いて血清試料について得られたバックグラウ
ンド吸光度より５倍大きいＥＬ　Ｉ　ＳＡ吸光度平均値
を有するような、あるペプチドに対する血清試料数を示
したものである。表１は結合段階で２％グルタルアルデ
ヒドを用いて得た結果を示している。ＥＬＩＳＡ吸光度
はペプチド１−６９および１−７３に対して最も高（、
これらのペプチドは、やはり、これらと反応する血清試
料の比率においても最も高かった。以下のペプチドは、
ペプチドを含まない対照群ウェルを用いて得られたバッ
クグラウンド吸光度より１０倍大きいＥＬＩＳＡ吸光度
限界値を用いて反応性有りと評価された。（ペプチド番
号／陽性血清検体数）　：　１−６９１５．　１−７２
／１．　１−７３／３．　１−７４／２．　１−’Ｉ’
ｌ／１．　１−７８／１゜１−８１／２．　１−８３／
１および１−８４／１゜ペプチド連結操作に０．１％グ
ルタルアルデヒドを用いた場合には、バックグラウンド
ＥＬＩＳＡ吸光度は低下した。本分析では、バックグラ
ウンドより５倍大きい吸光度を示した唯一のペプチドは
ペプチド１−６９であった。血清試料１２検体中９検体
は平均吸光度１．０６±０．４７で、ペプチド１−６９
と反応性を有した。バックグラウンドより１０倍大きい
ＥＬ　Ｉ　ＳＡ吸光度限界値を用いた場合には、ペプチ
ド連結操作に０．１％グルタルアルデヒドを使用すると
血清試料１２検体中６検体がペプチド１−６９に対して
陽性であると評価された。

また、表１の実験でヒト抗体に結合すると観られなかっ
たペプチド１−６７、　１−７０．　１−７１゜１−７
５．　１−７６および１−７９をマイクロプレート上へ
のペプチド固定化のための第３の方法を用いて試験した
。これらのペプチドを、まず、ヒト血清アルブミン（Ｈ
Ｓ　Ａ）にコンジュゲートし、次にペプチド−Ｈ５Ａコ
ンジュゲートをマイクロプレートに固定化し、ＥＬＩＳ
ＡによりＨＩＶ−１陽性ヒト血清試料との反応性を試験
した。これらのペプチドコンジュゲートはなお、対照血
清より有意に高いＥＬ　Ｉ　ＳＡ吸光度を示さなかった
。

ＨＩＶ−１血清陽性血清試料３７検体および、正常なＨ
ＩＶ−１血清陰性血清試料４９検体を選択ペプチドＥＬ
　Ｉ　ＳＡを用いて分析し、その結果を表２に示す。正
常な血清試料３検体はペプチド１−７３を用いた場合、
限界値より高いＥＬ　Ｉ　ＳＡ吸光度を示した。正常な
ＨＩＶ−１血清陰性血清試料はどれも、ＥＬＩＳＡにお
いてペプチド１−６９または１−３０を用いた場合に陽
性ではなかった。試験したＨＩＶ・１血清陽性血清試料
３７検体のうち、１２検体はペプチド１−６９を用いた
ＥＬ　Ｉ　ＳＡで陽性であり、ＩＱ検体はペプチド１−
７３を用いたＥＬ　Ｉ　ＳＡで陽性であり、そして、１
４検体はペプチド１−３０を用いたＥＬ　Ｉ　ＳＡで陽
性であった。

ＨＩＶ−１陽性血清試料は、平均ＥＬ　Ｉ　ＳＡ吸光度
値に基づけば、ペプチド１−７３および１−３０と比較
して、ペプチド１−６９とより大きな反応性を示した。

ペプチド１−７３に対して標準偏差が大きく平均値が低
い点は、ＨＩＶ−１陽性血清試料の多くが、いくつかの
正常血清試料と同様にこのペプチドに対して反応性を有
していないことを示しており、一方、１−６９および１
−３０の標準偏差が高いことは、血清の反応性が広範囲
にわたることを示している。

ペプチド１−６９は、ｅｎｖ−コードｇｐ１２０蛋白の
変動過剰領域の１つに由来するが（Ｎｏｄ　ｒｏｗ等（
１９８７）　、　　ｒＪ、　ｏｒ　Ｖｌｒｏｌ、Ｊ　、
　８１．５７０−５７８）　（表４）、ペプチド１−７
３および１−３０はウィルスの異なる単離味の間で配列
がある程度未変化のまま保守されているような変動性の
小さい領域に由来する（Ｍｏｄｒｏｖ等（１９８７）　
、　　ｒＪ、　ｏｆ　Ｖｌｒｏｌ、Ｊ、６１゜５７０−
５７８）。ペプチド１−６９が変動過剰領域に由来する
とすれば、ペプチド１−８９ＥＬＩＳＡにおいて、ＨＩ
Ｖ−１血清陽性血清試料の比較的高い割合が陽性結果を
示したことは意外である。免疫反応性の大部分がペプチ
ド１−６９内の高度に保守されたＧｌｙ−Ｐｒｏ−ＣＩ
Ｎ’配列に対して特異的である可能性がある。ペプチド
１−６９とＨＩＶ−１陽性血清を用いて得られたＥＬＩ
ＳＡ吸光度値は平均して１−７３および１−３０よりも
高かったが、これらのペプチドを用いた検定は至適化さ
れていない。

表１と比較して表２に示されているペプチド１−７３を
用いた際の血清試料に対するＥＬ　Ｉ　ＳＡ吸光度が低
い値であることは、血清曝露前に希釈液でプレートをイ
ンキュベーションした結果である。

実施例　２ 免疫原としてのＨＩ　Ｖ　−１ＩＩＩＢｅｎｖに相当す
る合成ペプチド 表１に示す全てのペプチドを担体蛋白（錠穴吸着ヘモシ
アニンまたは卵アルブミン）にコンジュゲートし、各ペ
プチドー担体蛋白コンジュゲートを用いて２匹のモルモ
ットを免疫化した。モルモットは好都合な実験動物系と
して選択した。形成されたモルモット抗血清試料の抗ペ
プチド反応性をＥＬ　Ｉ　ＳＡ法でモニターした。ペプ
チド１−７６をまずモルモットに注射したが、この動物
は最初の注射の直後に死亡した。次にペプチドをウサギ
に注射したが、これでは抗ペプチド抗体は副作用なく誘
導された。６ケ月目をモルモット抗血清の抗ウィルス（
即ちＨＩＶ中和および細胞融合ブロック）特性の試験時
期として選択した。

表３に示す結果はほとんどのペプチドが最初の免疫化の
後、６ケ月目までにペプチド特異的抗体の生産を誘導し
たことを示している。異なる量の抗体が生産されている
が一対のうちの１方のみが抗体を生産した例はなかった
。ペプチド１−６７゜１−７５．　１−７７、　１−３
０および１−８３は、コンジュゲーシヨンおよび免疫化
に用いた条件下では極めて少量の抗ペプチド抗体しか誘
導できなかった。大量の抗ペプチド抗体を生産した動物
は、通常、３ケ月目までには反応性を示しており、そし
て量は次の２〜３ケ月の間増加している。

免疫プロットストリップ上でｇｐ１２０に結合した唯一
の抗ペプチド血清試料は抗ペプチド１−６９であり、コ
レラバＨＩ　Ｖ　−１ｍＢ（７）１２０／１３０バンド
にのみ明らかな反応性を示した（データは示さず）。抗
ペプチド１−６９血清試料はまた、これらの実験におい
て、ＨＩＶ−ＩＩＩＩＢ株に由来するｇｐ１２０を放射
線免疫沈降させることのできた唯一の血清試料でもあっ
た（データは示さず）。組換えＥ、　ｃｏｉｌ生産蛋白
ＥＮＶ−１４（ＥＮＶ−１４はＨＩ　Ｖ　−１ＩＩＩＢ
（７）７ミノ酸４０〜５１１を包含する）はペプチドの
由来するｇｐ１２０領域を包含するが、これを用いて免
疫プロットにより検定を行なったところ、ペプチド１−
８８．　１−８９．　　ｉ　−７６および１−８２に特
異的な抗血清に対してのみ反応性が検知された。１−６
９を除いて全てこれらのペプチドは潜在的なグリコジル
化部位を有している。哺乳類細胞におけるｇｐ１２０の
グリコジル化は（未グリコジル化）ペプチド１−８８．
　１−７８および１−８２に特異的な抗体の結合を妨害
することも考えられる。

モルモット血清試料のＨＩＶ増殖抑制能力、即ち、ＨＩ
Ｖ中和能力、およびＨＩＶ感染細胞と未感染細胞の細胞
融合ブロック能力を、培養細胞において試験した（表３
）。ＨＩＶ−１１１ｒＢを中和し、融合をブロックする
ことのできた唯一の血清試料は、ペプチド１−６９に対
して形成されたものであった。ＨＩＶ−１ｍＢは抗ペプ
チド１−６９抗体により中和されるのに対し、ＨＩＶ−
ＲＦはそうではないことから、中和活性と融合ブロック
活性は両方とも型特異的とされる。同様のことが細胞融
合ブロックについても言える。

表５に示すようにペプチド１−６９で免疫化された動物
における検知可能なＨＩＶ細胞融合ブロック抗体の発生
は、免疫化開始後５ケ月までは起こらず、この活性に対
する最大抗体力価は免疫化開始後６ケ月目に得られた。

（以下余白） 表 ＨＩＶ−１ｍＢｅｎｖ−コードアミノ酸８１に相当する
ペプチドに対するＨＩＶ−１血清陽性血清試料のＥＬＩ
ＳＡ反応性一８２ ＬＮＱＳＶＧ　Ｉ　ＮＣＴＲＰＮＮＮＴＲＰＮＮＮＴＲ
ＫＳＩＲＩＱＲＧ １？ＩＱＲｃｐＨ７１？ＡＦＶＴｆＧＫＶＴＩＧＫＩＧ
ＮＭＲＱＡＨＣＮＩ ＱＡＨＣＮＩＳＲＡＫｗＮＮＴＬ ＶＮＩＫ０１ＤＳＫＬＪ？ＥＱＦ ＫＬＲＥＱＦＧＮＮ訂１１ＰＫ ＴＩ　ＩＰＫＭＤＰＥＩＶ ＤＰＥＩＶＴＨＳＦＮα凌ＥＦ 工部ＦＦＹＣＮＳＴＱＬＦＮＳ Ｔ′ＱＩ，ｎｓ’ｒｗｍｓ’ｒ 訂四πＧＳＮ！ｎおり １μｓＡＴＩＴＩ，ＰＣＲＩＫＱＩ ＣＲＩＫＱＩ　ＩＮＭ′ｌｌｌＱＥＶＣＫＱＥＶＧＫＡ
Ｊ４ＹＡＰＰＩ３０ＱＩ ＰＩＳＧＱＩＦ？ＣＳＳＮＩＴＧＬ ＮＩＴ（旧１ＴＲＤＧＧＮｓＮＥ ＧＧＮＳＮＮＥＳＥＩＰＲ貨刀 ０、２３±０．００ ０、７９±０．４０ ０、２９±０．　１０ ０、８５±０．４４ ０６３４±０．１０ ０、３６±０．１３ ０、３０±０，１２ ０、２２±０．０６ ０、３７±０．１０ ０、ｚｌ±０．０２ ０、２９±０６０６ ０、３１±０．０Ｂ ＥＬ　Ｉ　ＳＡは、「材料および方法」の記載に従い、
プレートへの結合のために２％グルタルアルデヒド処理
を用いて行なった。ペプチドを含まないグルタルアルデ
ヒド処理対照群ウェルより５倍大きいペプチド検定ＥＬ
ＩＳＡ吸光度を示した場合に血清を陽性と評価した。平
均吸光度と標準偏差は反応性の血清の全測定値（ウェル
は各血清に対して２連で使用）を用いて計算した。ＨＩ
Ｖ−１血清陽性血清試料１２検体を試験した。

（以下余白） ＥＬＩＳＡは、マイクロプレートウェルを使用前１時間
希釈剤でブロックしたほかは表１と同様にして行なった
。血清試料は、０．２より大きいＥＬＩＳＡ吸光度を示
した場合に陽性と判断した。

ＨＩＶ−１陽性血清試料３７検体および正常な血清試料
４７検体を試験した。

（以下余白） 表 ペプチドにより誘導された抗体の抗ウィルス活性の特性
および評価１−７５＋ ＜２０ ＜２０ ４００ロ ア０ ００ａ ＜２０ ＜２０ ５９、　ＮＤ ６９、　６５ ７０、　７８ ８８、　６０ ３、Ｏ Ｏ，Ｏ ＢＢ，　７１ ６８、　５８ ８３、　４８ ７２、　７２ ６８、　６５ ６４、　４８ ８８、　８２ 恥，冊 ８１、　８３ ６８、　５５ ＢＢ，　７０ ５３、　８４ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〈１．５ 〈１．５ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 表 （続き） ペプチドにより誘導された抗体の抗ウィルス活性の特性
および評価ペプチド”　制限希釈１ １−７７＋ １−３０＋ １−８２＋ １−８３＋ ＜２０ ＜２０ ＜２０ ＜２０ ＜２０ ＃ｉ剣−” ８８、　７１ ６５、　８８ ＮＤ，　ＮＤ ５３、　５７ ５３、　ＮＤ ５８、　８５ ５５、　４９ ６１、　　５６ ｅａ，　ｅｅ ５４、　５３ ８９、　６２ ５５、　５８ ４９、　５５ ４７、　４８ ６５、　５２ ５８、　１３４ ５５、　５１ ６５、　４９ 中□活性＃　免疫プロット ｇｐ１２０　　ｅｎｖ１４ ＞３００　　　　　−　　　　＋ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ 〉３００ ＋ ＋ ＋ 表３の説明 ★　ウサギに注射した７６を除き全てのペプチドについ
てモルモットを用いた。これらは最初の注射後２〜５ケ
月に採血したものであり、その他は全て６ケ月目に採血
した。

＋　制限希釈は、吸光度０．１が得られるような希釈度
として希釈曲線から計算した。

★★融合検定数値は、１：１０血清希釈で形成した巨大
細胞の数を示す。添加した対照血清は５０．　８５の巨
大細胞を有していた。ＮＤ−実施せず ＃　中和活性は「方法ｊに記載したようにして測定し、
これは、上澄み中に存在するｐ２４の量をｎｇ／ｍｌで
示している。

（以下余白） 表４の説明 ＨＩ　Ｖｅｎｖ　　ａａ配列はｒＨｕｍａｎ　Ｒｅｔｒ
ｏｖｉｒｕｓｅｓａｎｄ　ＡＩＤＳＪ　、　　（１９８
７）　　（Ｌｏｓ　ＡＩａｓ＋ｏｓ　Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｌｏｓ　Ａｌａｍｏｓ、　Ｎ
Ｍ）より引用し、この文献に全て記載されている。ＨＩ
　Ｖｅｎｖコードアミノ酸配列は市販の標準的なコンピ
ュータプログラムを用いて相同性の順に並べた（プログ
ラム入手元の例：　Ｉｎｔｅｌｌｌ　Ｇｅｎｅｔｌｃｓ
、　Ｉｎｃ、、　ＭｏｕｎｔａｌｎＶｌｅｖ、　　ＣＡ
またはＧｅｎｅｔＩｅｓ　Ｃｏｍｐｕｔｅｒ　Ｇｒｏｕ
ｐ。

Ｕｎｌｖｅｒｓｌｔｙ　ｏｒ　Ｖｌｓｃｏｎｓｌｎ　Ｂ
ｌｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｅｎｔｅｒ。

Ｍａｄｉｓｏｎ、　ｗｌ）。

記号（−）はその位置のａａが、ＢＨＩＯ配列において
相当するａａ、即ち、それと並んでいるａａと同じであ
ることを示している。点（・）はそこにギャップがあり
ａａが存在しないことを示している。ギャップは配列を
照合し易く並べるために用いた。

ＨＩＶ−１ＩＩＩＢ由来ｅｎｖコードペプチド１−６９
の配列はａａ番号３０８〜３２２である（番号付けはｒ
Ｈｕｍａｎ　　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　　ａｎｄ　
　ＡＩＤＳＪ　　、　　　　（１９８７）　　。

Ｌｏｓ　Ａｌａｍｏｓ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙに従った）０他（７）ＨＩ　Ｖ単離株（７）
ＨＩＶｍＢ　（ＢＨＩＯ，ＨＸＢ２゜ＢＩ３．ＨＸＢ３
．ＰＶ２２）ペプチド１−８９１：相当する領域は２つ
の高度に保守されたＣｙｓ残基（０で囲）の間の中間部
分に位置する１５〜２２ａａ配列内に発見されており、
これは、ＨＩＶ−ＩＩＩＩＢ単離株におけるａａ番号２
９６〜３３１に相当する。

Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌ）’　（Ｏで囲）の配列は異なる
ＨＩＶ単離株に由来するペプチド１−６９に相当するｅ
ｎｖコード領域のほとんどで発見されている。ＨＩＶ−
ＩＩ［ＩＢペプチド１−６９に相当するＨＩＶ単離株中
のｅｎｖコード領域は、上記したコンピュータプログラ
ムを用いると、ＨＩＶ−ＩＩＩ［Ｂのアミノ酸の３０４
〜３２６と大概並んでいるａａ部分の範囲内に含まれて
いる。

（以下余白） 表　　　５ ペプチド１−６９により誘導された融合ブロック抗体の
全実施例　３ ペプチド１−６９に対するモノクローナル抗体の調製 Ｐ８９Ｂ ＜２０ ＜１０ ＜１０ ＜１０ ＜１０ ＜２０ ＜２０ Ｇ ＜１０ ＜１０ ＜１０ ＜１０ アミノ酸配列ＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫを有する
ペプチド１−８９を純度７４％の材料としてＰｅｎ１ｎ
ｓｕｌａＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　（Ｂｅｌｍｏｎｔ
、　ＣＡ、　９４００２）より入手した。これをグルタ
ルアルデヒドを介してニワトリ卵白の卵アルブミンにコ
ンジュゲートした（Ｒｅ１ｃｈｌｌｎ、　Ｍ、、　　ｒ
Ｍｅｔｈ、　１ｎ　Ｅｎｚｙｗｏｌ、Ｊ　、　７０：１
５９−１６５　　（１９３０））。このペプチドコンジ
ュゲートを略してｏｖａｔ　−ｇｌｕｔ　−６９と称す
ることにする（他のペプチド蛋白コンジュゲートも同様
に略称にして本実施例中で用いる。）。ペプチド１−８
９は水溶性カルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＣＤＩ）を
用いてウシチログロブリン（ＢＴＧ）にも結合させた（
　Ｇｏｏｄｆ’ｒｌｅｎｄ等。

ｒｓｃｉｅｎｅｅＪ　、　１４４；　１３４４−１３４
８（１９８４））。結合後、コンジュゲートをリン酸塩
緩衝食塩水（ＰＢＳ）で透析し、遊離のペプチドおよび
過剰な結合試薬を除去した。

ペプチド１−８９の他に、ＨＩＶ−１表面膜由来合成ペ
プチド（ペプチド＃５と記す）、配列ＭＲＤＮＷＲ８Ｅ
ＬＹＫＹ、　７　ミノ酸番号４７５〜４８Ｂを対照ペプ
チドとして使用した。ＨＩ　Ｖ　−１ｇｐ１２０とも反
応するペプチド＃５に対するＭＡｂは文献記載のもので
ある（Ｄｕｒｄａ等、　　ｒＡＩＤｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃ
ｈ　ａｎｄｌｌｕｓａｎ　ＲｅｔｒｏｖｌｒｕｓｅｓＪ
　、　　４　；　８３１−３４２（１９８８））。

免疫化および抗体形成 りａｆＪｂ／ｃＸＣ５７Ｂ　１／６　Ｆｌｖウス（８週
齢）、動物＃　５０２０〜５０２９をｐｒｅｎｃｈ等の
方法で免疫化した（　ｒ　Ｉ＋ｕｕｎｏｌｏｇｙ　Ｔｏ
ｄａｙＪ　、　　７　；　３４４−３４８（１９８Ｂ）
）。フロイント完全アジュバントと１：１に混合した。

ｖａｌ　−ｇｌｕｔ　−６９コンジユゲート１００４を
単回腹腔内接種した。４週間後、マウスから採血し、ペ
プチド特異的抗体応答を評価した。Ａｂ力価の低下が観
察されるまでマウスを放置し、観察された時点でフロイ
ント完全アジュバント中のｏｖａｌ　−ｇｌｕｔ　−８
９コンジユゲート１００４で追加抗原投与した。同様の
方法で動物＃　５０４０〜５０４９もＢＴＧ−ＥＣＤＩ
−６９で免疫化し、抗原追加投与した。コンジュゲート
追加投与量を与えた４日後に、マウスを殺して、その牌
細胞と５ｐ２１０−Ａ　ｇ１４　ミエローマ細胞（ＡＴ
ＣＣ＃ＣＡＬ１５８１）を、典型的なハイブリドーマ融
合方法により融合させた（Ｇａｌｆｒｅ等、　　ｒＮａ
ｔｕｒｅＪ　、　２７’ｌ；　１３１−１３３（１９７
９））。他の適当な融合相手は、Ｐ３／ＮＳ１／１−Ａ
ｇ４−１　（ＡＴＣＣ＃ＴｌＢ１８）；Ｐ３Ｘ６３Ａｇ
　８Ｕ、１　（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１５９７）およびＰ３
Ｘ８３Ａｇ　８，８５３　　（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１５３
０）を包含する。

固相ＥＬＩＳＡおよびウェスタンプロット法を用いて有
用な雑種細胞を選択した後、ノ１イブリドーマを制限希
釈により２回クローニングした（１細胞／３ウエル）　
、　Ｂａ、Ｑ　ｂ／ｃＸＣ５７Ｂ１／６Ｆ１マウスの腹
水中で抗体を大量生産した。

腹水は硫酸アンモニウム沈殿および蛋白Ａアフイニイテ
ィークロマトグラフイーにより精製した（Ｂｙ等、　　
ｒｌ＋ｎｕｎｏｃｈｅｍｌｓｔｒｙＪ　、　　１５；　
　４２９−４３８（１９７８））。免疫グロブリンのタ
イプはＭＡｂ＃５０２５、２９．　１．１．１と＃　５
０２３．２４．５がＩ　ｇＧ２ｂであった他は全てＩｇ
Ｇ１であった。

固相酵素結合免疫吸着検定（固相ＥＬＩＳＡ）前記した
ような蛋白ペプチドコンジュゲート（例えばＢＴＧ　−
Ｅ　ＣＤ　Ｉ　−６９）　　（１００ｎｇ　／ウェル）
を、１８時間４℃で、Ｏ，１Ｍ　　ＮａＣ０ａ緩衝液（
ｐＨ９，６）中で、Ｉｍｗｕｌｏｎ■Ｉ［フィクロプレ
ート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｌｏｓ、
Ｉｎｃ、、Ｃｈａｎｔｌｌｌｙ。

Ｖａ、　２２０２１）に吸着させた（Ｖｏｌｌｏｒ等、
　　ｒＭａｎｕａｌｏｆ　Ｃ１１ｎ、　Ｉ＊ｓｕｎ、Ｊ
　、　８９．５０８−５１０（１９７８））、次にプレ
ートをＰＢＳ　（リン酸塩緩衝食塩水）中０．０５％Ｔ
ｗｅｅｎ■２０で洗浄した。Ｄｕｒｄａ等のｒＡＩＤｓ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ　　ａｎｄ　　Ｈｕｍａｎ　　Ｒｅｔ
ｒｏｖｌｒｕｓｅｓＪ　　、　　　４　＊　　３３１−
８４２（１９８８）に記載の方法でペプチドコンジュゲ
ートプレートに結合する抗体の形成についてハイブリド
ーマを試験した（この文献は参考のため本明細書に組み
込まれる）。

電気泳動およびウェスタン免疫プロットＨＴＬＶ−Ｉ［
ＩＢ　（１％Ｔｒｌｔｏｎ’　Ｘ−１００中の分解物と
して）を、蛋白３００ｇ／ｍｌの濃度でＥ、Ｉ。

ｄｕＰｏｎｔ　ｄｅＮｅｍｏｕｒｓ　（Ｗｉｌｍｌｎｇ
ｔｏｎ、　ＤＢ）より入手した。この分解物を５分間１
００℃で５％、２−メルカプトエタノールを含有する試
料緩衝液で解離させ（Ｌａｅｓｍｌｌ、　　ｒＮａｔｕ
ｒｅＪ　、　２７７、８３０−６８５（１９７０））、
５〜１５％濃度勾配アクリルアミドゲル（１０ｃｍｘ１
２ｃｍＸ０．１５ｃａ）上で電気泳動した。　　■標識
蛋白分子量マーカー（Ｄｕ　Ｐｏｎｔ　／　ＮＯＮ　Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔｓ）を試料に含有させた
。’ｒｓａｎｇ等（ｒＭｅｔｈ、　ｉｎ　Ｅｎｚｙｓｏ
ｌ、Ｊ　９２；　３７７−３９１（１９８３））の方法
と本質的に同様にして、ウィルス蛋白をニトロセルロー
スに電気トランスプロットしてウェスタンプロットを行
なった。免疫プロットの希釈緩衝剤としてＰＢＳ中４％
正常ヤギ血清含有５％脱脂乾燥乳を用いた。

ウェスタンプロット活性の抑制 前記したペプチド１−６９および＃５を精製ＭＡｂと同
様にウェスタンプロット希釈剤でｌｏｇ／ｍｌに希釈し
た。抗体とペプチドを１：１で合わせ、２２℃で１時間
インキュベートした。次にこれらを前記したウェスタン
プロットにより検定した。

免疫蛍光検定 Ｒａｙ　Ｂｙｌｎｇｔｏｎ　（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　
Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ。

Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏ５
ｐｉｔａｌ）より入手したＨＴＬＶ−ＩＩ［Ｂ感染およ
び未感染のＨ９細胞を、１時間２２℃で、１％ウシ血清
アルブミン含有ＰＢＳ　（ＰＢＳ　　ＢＳＡ）中で再含
水させた。次にスライドを希釈腹水またはハイブリドー
マ上澄の形態の一次抗体とともに、２２℃で２時間イン
キュベートした。十分に洗浄した後、フルオレセイン化
ＧＡＭ　　Ｆ　（ａｂ’）　２　（ＤｕＰｏｎＬ／ＮＥ
Ｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔｓ）を用いてマウ
ス抗体の有無を測定した。

室温で１時間接触させた後、フルオレセイン化Ａｂを除
いた。次に細胞を洗浄し、５０％グリセロール：　Ｐ　
Ｂ　Ｓ　（ｖ／ｖ）に浸漬した。スライドは蛍光顕微鏡
で観察した。

中和検定 り、　Ｈｏ等（ｒＪ、　ＶｉｒｏｌＪ　、　８１．２０
２４−２０２８　（１９８７）、参考のため本明細書中
に組み込む）の方法に本質的に従って、抗体のｉｎ　ｖ
ｌｔｒｏ　ＨＩ　Ｖ　−１感染性中和能力を調べた。ハ
イブリドーマ細胞上澄み（３ｂｇ／　ｍｌ　　Ｉ　ｇ　
Ｇ　１　）を２０％ウシ胎児血清含有ＲＰＭ　Ｉ　−１
８４０培地で予備希釈した（２倍連続希釈）。希釈抗体
１００ｍ１を、５０ＴＣＩＤ−５０単位に相当する等量
の精製ウィルスに添加し、３７℃で１時間インキュベー
トし、１．５〜２．ＯＸ　１０６個のＨ９細胞に加えた
。培養液は３７℃で７日間インキュベートし、培養基を
再供給し、さらに７日間インキュベートした。この時点
で、合胞体形成を伴う細胞変性作用、存在するｐ　２４
ＨＩ　Ｖｇａｇ抗原の量について、対照群培養と比較し
ながらフラスコ中の培養液を検査した。抗体が中和活性
有りとみなすためには、ｔ）２４の量の９０％より大き
い減少が必要である。

細胞融合の抑制 細胞融合検定については、Ｍａｔｔｈｅｖｓ等（ｒＰｒ
ｏｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃ１．　ＵＳ＾Ｊ　、　　８
４．　５４２４−５４２８（１９８７）、本文献は参考
のため本明細書に組み込まれる）により記載されている
。即ち、３０Ｈｇ中４．０００個の感染細胞（ＨＩＶ−
１１１ＩＢはＣＥＭ細胞中、ＨＩＶ−ＩＨＡＴ３はＨ９
細胞中）をマイクロプレートウェル中に入れた。希釈抗
体（前記したもの）３０Ｈｇを加えた。３０分間３７℃
に保った後、ＲＰＭＩ培地中５８．（１００個の５ｕｐ
Ｔ−１細胞を含有する液３０μすをつエルに加えた。プ
レートを３７℃で一夜インキユベートし、合胞体形成（
細部融合）を朝方に評価した。抗体を含まないウェルは
、ウェル当たり５０〜７０合胞体を有していた。

結　　果 ＭＡｂ精密特異性 ペプチド１−６９（ＨＩＶ−ＩＩｆｆＢ表面Ｈａａ＃３
０８〜３２２）に対するＭＡｂの免疫化ペプチド１−６
９に対する免疫反応性を試験し、また、アミノ酸２９６
〜３３２領域由来の他の重複ペプチド、および種々の３
０８〜３２２領域内由来の小さいペプチドについても同
様に試験した。用いたペプチドの配列およびその相対位
置を表６に示す。第２図かられかるとおり、ＭＡｂは免
疫化ペプチドに対して特異的であった。第２図について
は、＃５０２３゜２４．５を除（ＭＡｂのいずれもペプ
チド＃５即ち、ＨＩＶ−１表面膜アミノ酸４７５〜４８
６を示す対照ペプチドとは反応しておらず、また、それ
ぞれアミノ末端およびカルボキシ末端でペプチド１−６
９と重複しているペプチド＃１−８８および１−７０と
も有意に反応しなかった。ペプチド１−１７７および１
−１７８はペプチド１−６９よりも短いｃｎｖ　ａａ３
０８〜３２２部分を含んでいるが、これらについては、
さまざまな程度の反応性が観察されている。

実験に用いた固相ＥＬ　Ｉ　ＳＡはＥＬＩＳＡマイクロ
プレート上にコーティングされた遊離ペプチドを使用し
ている。第２図および表７ではクローン番号を略して記
載した。略する前の番号は以下のとおりである。５０２
１．２２．２讃５０２１．２２．２．１．ｌ　。

５０２３、２４．４−５０２３．２４．４．１．１．５
０２５．２９．１■５０２５゜２９．１．１．ｌ　、　
５０２５．２９．２調５０２５．２９．２．１．１およ
び５０４２、４３．８−５０４２．４Ｌ３．２．１．後
者の番号の方をＡＴＣＣ寄託に用いている。

ざらに液相抑制でＭＡｂの特異性を検査した。

これらの実験では、ＭＡｂを遊離ペプチドで前インキュ
ベートした後に、ペプチド１−８９コートプレートを用
いてＥＬＩＳＡで分析した。これらの実験結果をまとめ
て表７に示す。

表　　　　６ ペプチド＃ 配　　列 １？ＰＮＮＮＴＩ？ＫＳｒＲＩＱＲＧ ＲＩＱＲＧＰＣＩ？ＡＦＶＴＩＧＫ ＶＴＩＧＫＩＧＮＭＩ？ＱＡｌｌＣＮＩＧＰＧＩｒＡＰ
ＶＴＩＧ ＱＲＧＰＧＲＡＦＶ ＭＲＤ）ＪｗＲ８ＥＬＹＫＹ　（上記のペプチドのセッ
トの部分ではない） （以下余白） 表　　　７ ペプチド番号と配列 １−Ｂｉｌｌ　ＲＰＮＮＹｒＲＫＳＩＲＩＱｌ？Ｇ１−
６９　　　　Ｒ１卿ＰＧＲＡ渭ＩＧＫ１−７０　　　　
　　　ＶＴＩＧＫＩＣＩＩＪＭＲＱＡＩＩＣＮｌｌ　−
１６９ＴＫＧＰＧＲＶＩＹＡ側ＪＩＣ１１７０ＨＩＧＰ
ＧＲＡＦＹＴｒＫＮ１１Ｇ’、　−１７１ｎｙ＋ｔｏｃ
ｐｃＲＡ「１−１７５　　　　ＲＩＱＢＣＪにＲＡｌ　
−１７８ＡＦＶＴＩＧＫ ｌ　−１７７ＧＰＣＩＲＡＦＹｒｌＧ ＨＩＶ−１単離株 ＨＩＯ ＨＩＯ ＨＩＯ Ｆ Ｎ Ｎ ＨＩＯ ＨＩＯ ＨＩＯ ４４０７，２ ５０２１、２２，２ ５０２３、２４，４ ５０２５、２９，１ ５０２５、２９，２ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ 局 ＮＤ　　　ＮＤ ＋／−＋／−← ＋ｌ−＋ ←　　＋ノー 十／−→　　＋　　← 恥 ＮＤ プラス（ト）は抑制の大きさを示す；＋／−は遊離可溶
ペプチド１■／　ｍｌで＞２０％の抑制を示し、＋は１
００４　／　ｍｌで＞９０％の抑制を示し、＋＋はｔｏ
　ｚ　／　ｍｌで〉９０％、そして＋＋＋はｌｘ／ｍｌ
で＞９０％を示す。

抗体濃度はさまざまであったが！ＯＯｎｇ／ｍｌのオー
ダーであった。ＰＢＳ　：　ＢＳＡ　（１：　１）Ｊｉ
／ｒの濃度のペプチドと抗体を混合した。約１時間２３
℃で保つた後、ＰＢＳ　：　ＢＳＡでブロックして２５
％ｇ１５０μＱ／ウェルで１−６８または１−６９でコ
ートした１膳ｍｕｌｏｎ■プレートに、混合物ｉｏｏμ
ｇを添加した。プレートＩ　　ＭＡｂとともに２３℃で
約６ｏ分インキュベートした。全ＭＡｂは１−１７６お
よび１−７０に対して非反応性であった。ＭＡｂ４４０
７．２はペプチド１−６８に対して形成した。

ウィルス成分とのＭＡｂの反応性を測定するために、種
々の条件下でウェスタンプロットを行なつた。ウィルス
分解物（ゲル当たり蛋白２０ｈｇ）を、２−メルカプト
エタノールの存在下または非存在下で解離させ、５ＤＳ
−ＰＡＧＥで分離した。

Ｄｕｒｄａ等の方法（前記）に従い、第２図に示したＭ
Ａｂと、還元ウィルス成分かまたは擬似ウィルス分解物
（ウィルスと同じく処理した未感染のＨ９細胞）の成分
とのウェスタンプロット反応性を測定した。＃５０２０
．１　、５０２３．２４．５　、５０４２．４３．ｉ　
。

および５０４２．４３．２を除く全てのＭＡｂが還元条
件下および非還元条件下で、〜１２０ｋＤのＨＩＶ−１
ウィルス成分と反応することがわかった。擬似ウィルス
分解物由来の蛋白成分で試験した際には、ＭＡｂは反応
性を示さなかった。抗体の特異性対照としては、どのウ
ィルス成分も認識しないＩ　ｇ　Ｇ　Ｉ　ＭＡ　ｂ　＃
２０８５．１を用いた。この対照ＭＡｂはどのＨＩＶ−
１ウィルス成分とも反応しなかった。

これらのＭＡｂのうち最も強力なものであるＭＡｂ５０
２８．２４．４．１．１により発生されたウェスタンプ
ロット信号がアミノ酸配列１？ＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴ
ＩＧＫによるものであることを確認するために、ＭＡｂ
を１−６９の存在下または非存在下で試験した。同起源
のペプチドである１−６９に対してはプロット信号の抑
制が見られたが、対照ペプチド＃５については見られな
かった。

スライドガラスに固定した細胞の免疫蛍光におイテハ、
ＭＡｂ５０２３．２４．４．１．１はＭ　Ａ　ｂ　５０
２１゜２２．２．１．１．５０２５．２９．１．１．１
および５０４２．４３４．２．１と同様に、ＨＩＶ−１
のｍＢ単離株に感染したＨ９細胞上で陽性の反応性を示
した。次に蛍光活性化細胞ソーターを用いて、ＨＩＶ−
１ＩＩＩＢ感染ＯＥＭ／ＮＫＲ生細胞上でＭＡｂを試験
した。

ＭＡ　ｂ　５０２３．２４．４．１．１ハ、ＨＩＶ−１
ｍＢ感染細胞の４７％と反応したが、ＨＩＶ−ＩＭＮ単
離株感染細胞はわずか５％のみしか、５０２３．２４．
４．１．１Ｅよる染色が観察されなかった。ＨＩＶ−Ｉ
ＲＦ単離株感染細胞または未感染ＣＥＭ／ＮＫＲ細胞に
対しては反応性は観察されなかった。Ｍ　Ａ　ｂ　５０
２５゜２９．１．１．１は同様の反応性パターンを示し
たが、ＨＩＶ−１ｍＢ感染細胞の染色率は低く（２７％
）、ＨＩＶ−１ＭＮ細胞の染色率は高かった（１８％）
。

一方、対照クラスと組み合わせた抗体（よ（ミエローマ
蛋白）、感染および未感染の両方の生細胞に対して有意
な結合を示さなかった。これは、ｍＢではない他のＨＩ
Ｖ株との交差反応がある程度あり得るが未感染細胞との
有意な反応性は無いということを示している。

ウィルス中和 中和活性を試験し、他のＭＡｂおよび抗血清と比較した
結果を表８に示す。Ｍ　Ａ　ｂ　５０２３゜２４．４．
１．１ハ最も強いＨＩＶ−１中和活性を示し、これは、
この特定の検定様式においてはほとんどのヒト中和血清
で見られるのと同じ程度に強力であった。ＭＡｂ５０２
１．２２．２．１．１もまた、表８に示すとおり、ＨＩ
Ｖ−１３６中和活性を示した。

（以下余白） 表　　　　８ ペプチド１−６９に対するＭＡｂ によるＨＴＬＶ−３６の中和 抗　体　　　中和力価 ５０２３、２４．４．１．１　　　　　Ｂ４５０２１、
２２．２．１．１　　　　１８〜３２陰性血清　　　　
　〈４ ＣＢ−４＋ＣＰＥ　１：４希釈度で） 陽性血清　　　　　〉４ （ＯＣＰ！！　１：４希釈度で） 注：血清試料は明らかなヒト血清であり、陽性血清は１
つの力価測定様式において試験した際に１７３２〜１／
６４の中和力価を有する。

ＣＰＥはＨＩＶ−１複製により寄生細胞中で誘発された
細胞変性作用（例えば合胞体形成および細胞死）を指す
。これは目視により評価し、３−４＋を活性ＨＩＶ−１
による最重度の細胞破壊とした。

細胞融合ブロック ＨＩＶ−１感染細胞と標的細胞、５ｕｐＴ−１（Ｄ、　
Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ、　Ｄｕｋｅ　Ｕｒ＋１ｖｃｒｓｉ
ｔｙより入手）との融合の、ＭＡｂ５０２１．２２．２
．１．ｌ、　５０２１゜２４．４．１．ｌ、　５０２５
．２９．１．１．１および５Ｇ４２．４３４．２．１に
よる抑制を示す実験結果を表９に示す。５ｕｐＴ−１は
Ｔ細胞上のＨＩＶ−１のレセプターであるＣＤ４抗原の
高度な発現寄生（エキスブレッサー）であ６゜ＨＩＶ−
ＩＩＩＩＢおよびＨＩＶ−ＩＭＮに感染した細胞に対す
る活性を評価した。ＭＡｂ５０２５、２９．１．１．ｌ
は抗原の由来するＨＩＶ−ＩＩＩＩＢ単離株の単一株ず
、ＨＩＶ−ＩＭＮ単離単離対しても融合ブロック活性を
示したことは注目すべきである。過去の報告によれば、
このようなＨＩＶ抑制抗体は型または単離株に特異的で
あるとされている。

（以下余白） 表 ペプチド１−８９に対するＭＡｂ による合胞体形成（融合）の抑制 ＭＡｂ＃ ４４０７．２ ５０２１、　２２．２．１．１ ５０２３．２４．４．１．１ ５０２５．２９．１．１．１ ５０４２．４Ｌ３．２．１ ２０８５．１　（ＩｇＧＩ対照試料） ３５１−５８　（２ｂ対照試料） ＃合胞体／ウェル ＨＩＶ−１３６　　　ＨＩＶ−ＩＭＮ 注：全ＭＡｂは腹水によるものであり、！１５Ｇ希釈で
試験した。Ｍ　Ａ　ｂ　４４０７．２はペプチド１−６
８に対して形成させ、ＭＡｂ　３５１−５６は抗−Ｈｒ
ａｓＭＡｂであり、ＭＡ　ｂ　２０８５．１はＨＩＶ−
１（３６）表面膜蛋白のａ８７４０〜７５０に対して形
成した。ＭＡ　ｂ　２０８５．１は表面膜または他のウ
ィルス成分に対して反応性を示さなかった。他のＩｇＧ
１およびＩｇＧ２ｂ対照群も同様の結果を示すと考えら
れる。

ＭＡｂ５０２１．２２．２．１．１はペプチド１−１７
８（第２図）と反応し、ペプチド１−１７５（表７）に
よりブロックされるという事実は、５０２１．２２．２
．１．１により認識される抗原決定基がペプチド１−１
７８と１−１７５の両方に共通する配列ＱＲＣＰＧＲＡ
内に含まれることを示している。

ＭＡｂ５０２５．２９．１．１．１がペプチド１−１７
７および１−１７８（第２図および表７）と反応すると
いう事実は５０２５．２９．１．１．１により認識され
る抗原決定基が両方のペプチドに共通する配列ＧＰＧＲ
ＡＦＶに含まれていることを示している。

ＭＡｂ５０４２．４３．３．２．１がペプチド１−１７
５（表７）でブロックされたという結果はＭ　Ａ　ｂ　
５０４２゜４３．３．２．１により認識される抗原決定
基が配列ＲＩ　ＱｌｉＧＰＧＲＡ内に含まれることを示
している。

ＭＡｂ５０２３．２４．４．１．１がペプチド１−１７
７（表７）によりブロックされるという結果は、このＭ
Ａｂが配列ＧＰＧＲＡＦＴＩＧにより形成された抗原決
定基を認識することを示している。

結果をまとめると、ウィルス抑制活性を有する抗体によ
り認識される重要な抗原決定基は残基ＧＰＧＲＡにより
形成されることが示される。

興味深いことに、ＭＡｂ５０２５．２９．１．１．１は
ＨＩＶ−ＩＭＮと同様１：ＨＩ　Ｖ　−１３６を抑制す
る（表９）。即ち、５０２５．２９．１．１．１は前述
したように配列ＧＰＧＲＡＦＶにより形成される抗原決
定基を認識するが、ＧＰＧＩ？ＡＦＹ　テあるＨＩＶ−
１ＭＮ由来の相当する配列についても同様である（表４
）。ペプチド゛１−６９領域の配列に基づけば、ＭＡ　
ｂ　５０２５゜２９．１．１．１ハＨＩ　Ｖ　−１株Ｓ
Ｆ２およびＮＭＪ２も抑制すると期待される（表４）。

抗原決定基ＱＲＣＰＧＲＡ、　ＲＩＱｌ？ＣＰＣＩ？Ａ
、　ＣＰＣＩ？ＡＦＶＴＩＧ。

ＧＰＧＲＡＦＶ　オよびＧＰＧＲＡを含む５〜１０７ミ
ノ酸ペプチドは、免疫学的に許容される担体にコンジュ
ゲートした場合に、哺乳類におけるＨＩＶ抑制抗体の生
産の誘導のための有用な免疫原となり得る。

同様に、他のＨＩＶ単離株由来の相当するペプチドも、
哺乳類におけるＨＩＶ抑制抗体生産の誘導のための有用
な免疫原となることが期待できる。

ペプチド１−６９に対する単一のＭＡｂが強力なＨＩＶ
−１抑制活性および融合ブロック活性を示すことが観察
されたことは興味深く、予想できなかったことである。

このようなＭＡｂは顕著な治療用途を有することが期待
される。

ハイブリドーマ細胞系統、番号＃　５０２１゜２２．２
．１．ｌ、　５０２３．２４．４．１．ｌ、　５０２５
．２９．１．１．１゜５０２５、２９．２．１．１およ
び５０４２．４３．３．２．１は、ＭＰＥＰ６０８．０
１　（ｐ）　（Ｃ）　（１）　（２）および（３）およ
びブダペスト条約に基づきＡｓｅｒｌｅａｎ　Ｔｙｐｅ
　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，
Ｒｏｃｋｖｌｌｌｅ、　ＭＤ）に１９８９年３月１日に
寄託した。これらのハイブリドーマ細胞系統のＡＴＣＣ
受託番号は各々、ＨＢ１００４０　、　ＨＢ１００４３
　、　ＨＢ１００４１　、　ＨＢ１００４２およびＨＢ
１００４４である。３フＣＦＲ１，１４および３５ｔＪ
　Ｓ　Ｃ１２２の下に長官が権利を認めた者に対し、特
許出願係争中の間、培養細胞の入手は可能となる。特許
認定後は、一般の培養物の入手に関する全ての制限は不
可逆的に撤廃される。

本明細書中において、「本質的になる」とは、その慣用
的な意味を有するものであり、即ち、全ての特定した物
質および条件は本発明を実施する際には極めて重要であ
るが、付加的な不特定の物質および条件は、他の治療薬
または成分を含め、本発明の利益の実現を妨げない限り
、除外されないものであることを意味するものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は重複合成ペプチドに含まれるＨＩＶ−１ｅｎｖ
コ一ド配列の地図である。黒部分は保守蛋白領域を示し
、斜線部分は変動過剰領域を示す。 第２図は種々のＭＡｂのペプチド１−８９（免疫化ペプ
チド）　、１−１７８．　１−１７７、　５．　１−６
８および１−７０との固相ＥＬＩＳＡにおける免疫反応
性を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ＨＩＶ−１IIIＢの表面膜（エンベロープ）蛋白の
   アミノ酸番号２９６〜３３１に相当するアミノ酸配列か
   ら選択され、ＨＩＶ−１IIIＢのアミノ酸番号３０８〜
   ３２２に相当するアミノ酸を有するヒト免疫不全ウィル
   ス（ＨＩＶ）表面膜蛋白の１５〜３６アミノ酸の化学合
   成ペプチド。 ２）ＨＩＶ−１IIIＢの表面膜蛋白のアミノ酸３０８〜
   ３２２を含む請求項１記載のペプチド。 ３）アミノ酸配列：ＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫを
   有する請求項１記載のペプチド。 ４）アミノ酸配列：ＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫを
   有する請求項３記載のペプチド。 ５）１５〜２５アミノ酸の長さの請求項１記載のペプチ
   ド。 ６）アミノ酸配列：ＫＬＲＥＱＦＧＮＮＫＴＩＩＦＫを
   有する、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の表面膜蛋白
   の１５〜３０アミノ酸の化学合成ペプチド。 ７）アミノ酸配列：ＣＲＩＫＱＩＩＮＭＷＱＥＶＧＫを
   有する、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の表面膜蛋白
   の１５〜３０アミノ酸の化学合成ペプチド。 ８）免疫学的に許容される担体にコンジュゲートした請
   求項１のペプチドを免疫学的に適切な用量用法で哺乳類
   に投与することを包含する、哺乳類のＨＩＶ−抑制抗体
   の生産を誘導する方法。 ９）免疫学的に許容される担体にコンジュゲートした請
   求項２のペプチドを免疫学的に適切な用量用法で哺乳類
   に投与することを包含する、哺乳類のＨＩＶ−抑制抗体
   の生産を誘導する方法。 １０）異なるＨＩＶ単離株に由来する配列に各々相当す
   る少なくとも２つの異なるペプチドを哺乳類に投与する
   請求項８記載の方法。 １１）少なくとも１つのペプチドがアミノ酸配列：ＲＩ
   ＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫを有する請求項１０記載の
   方法。 １２）生物学的試料を請求項１のペプチドと接触させる
   こと、および、免疫反応性を検知することを包含する、
   ＨＩＶ−陽性生物学的試料におけるＨＩＶ−特異的抗体
   の検知方法。 １３）生物学的試料を請求項２のペプチドに接触させる
   こと、および、免疫反応性を検知することを包含する、
   ＨＩＶ−陽性生物学的試料におけるＨＩＶ−特異的抗体
   の検知方法。 １４）生物学的試料を請求項６のペプチドに接触させる
   こと、および、免疫反応性を検知することを包含する、
   ＨＩＶ−陽性生物学的試料におけるＨＩＶ−特異的抗体
   の検知方法。 １５）生物学的試料を請求項７のペプチドに接触させる
   こと、および、免疫反応性を検知することを包含する、
   ＨＩＶ−陽性生物学的試料におけるＨＩＶ−特異的抗体
   の検知方法。 １６）各ペプチドが異なるＨＩＶ単離株に由来する配列
   に相当するような請求項１のペプチド少なくとも２つに
   生物学的試料を接触させること、および、免疫反応性を
   検知することを包含する、ＨＩＶ−陽性生物学的試料に
   おけるＨＩＶ−特異的抗体の検知方法。 １７）ＨＩＶ−特異的抗体がＨＩＶ−抑制抗体である請
   求項１２記載の方法。 １８）免疫学的に許容される担体にコンジュゲートした
   請求項１のペプチドの有効予防量を含有する、ＨＩＶに
   対する予防ワクチン。 １９）免疫学的に許容される担体にコンジュゲートした
   請求項２のペプチドの有効予防量を含有する、ＨＩＶに
   対する予防ワクチン。 ２０）各ペプチドが異なるＨＩＶ単離株に由来する配列
   に相当し、その各ペプチドを免疫学的に許容される担体
   にコンジュゲートした請求項１の異なるペプチド少なく
   とも２つの有効予防量を含有する、ＨＩＶに対する予防
   ワクチン。 ２１）ＨＩＶ−１IIIＢの表面膜蛋白のアミノ酸番号２
   ９６〜３３１に相当するアミノ酸配列から選択され、Ｈ
   ＩＶ−１IIIＢのアミノ酸番号３０８〜３２２に相当す
   るアミノ酸を有する、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）
   の表面膜蛋白の１５〜３６アミノ酸のペプチドに対する
   、ＨＩＶ−抑制モノクローナル抗体。 ２２）ペプチドが、ＨＩＶ−１IIIＢの表面膜蛋白のア
   ミノ酸３０８〜３２２を有する請求項２１記載のＨＩＶ
   −抑制モノクローナル抗体。 ２３）ペプチドがアミノ酸配列：ＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦ
   ＶＴＩＧＫを有する請求項２１記載のＨＩＶ−抑制モノ
   クローナル抗体。 ２４）ペプチドが１５〜２５アミノ酸の長さである請求
   項２３記載のＨＩＶ−抑制モノクローナル抗体。 ２５）ペプチドがアミノ酸配列：ＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦ
   ＶＴＩＧＫを有する請求項２４記載のＨＩＶ−抑制モノ
   クローナル抗体。 ２８）ＭＡｂ５０２１，２２．２．１．１（ＡＴＣＣ番
   号ＨＢ１００４０）、５０２３，２４．４．１．１（Ａ
   ＴＣＣ番号ＨＢ１００４３）、５０２５，２９．１．１
   ．１（ＡＴＣＣ番号ＨＢ１００４１）、５０２５，２９
   ．２．１．１（ＡＴＣＣ番号ＨＢ１００４２）、および
   、５０４２，４３．３．２．１（ＡＴＣＣ番号ＨＢ１０
   ０４４）よりなる群から選択されるクローン番号により
   同定される請求項２５記載のネズミモノクローナル抗体
   。 ２７）ＭＡｂＮｏ．５０２３，２４．４．１．１（ＡＴ
   ＣＣ番号ＨＢ１００４３）と記されるクローン番号によ
   り同定される請求項２６記載のネズミモノクローナル抗
   体。 ２８）ＭＡｂＮｏ．５０２５，２９．１．１．１（ＡＴ
   ＣＣ番号ＨＢ１００４１）と記されるクローン番号によ
   り同定される請求項２６記載のネズミモノクローナル抗
   体。 ２９）請求項２１のモノクローナル抗体の治療的用量お
   よび薬学的に許容される担体より本質的になる薬学的組
   成物。 ３０）請求項２２のモノクローナル抗体の治療的用量お
   よび薬学的に許容される担体より本質的になる薬学的組
   成物。 ３１）請求項２３のモノクローナル抗体の治療的用量お
   よび薬学的に許容される担体より本質的になる薬学的組
   成物。 ３２）請求項２４のモノクローナル抗体の治療的用量お
   よび薬学的に許容される担体より本質的になる薬学的組
   成物。 ３３）請求項２５のモノクローナル抗体の治療的用量お
   よび薬学的に許容される担体より本質的になる薬学的組
   成物。 ３４）請求項２６のモノクローナル抗体の治療的用量お
   よび薬学的に許容される担体より本質的になる薬学的組
   成物。 ３５）請求項４４のモノクローナル抗体の治療的用量お
   よび薬学的に許容される担体より本質的になる薬学的組
   成物。 ３６）請求項４５のモノクローナル抗体の治療的用量お
   よび薬学的に許容される担体より本質的になる薬学的組
   成物。 ３７）生物学的試料を請求項２２のモノクローナル抗体
   と接触させること、および、免疫反応性を検知すること
   を包含する、ＨＩＶ−１IIIＢ表面膜ｇｐ１２０をこの
   蛋白を含有する生物学的試料において検知する方法。 ３８）請求項２９の薬学的組成物を治療有効用量用法で
   哺乳類の投与することを包含する哺乳類におけるＨＩＶ
   −１の抑制方法。 ３９）請求項３０の薬学的組成物を治療有効用量用法で
   哺乳類に投与することを包含する哺乳類におけるＨＩＶ
   −１の抑制方法。 ４０）請求項３３の薬学的組成物を治療有効用量用法で
   哺乳類に投与することを包含する哺乳類におけるＨＩＶ
   −１の抑制方法。 ４１）請求項３４の薬学的組成物を治療有効用量用法で
   哺乳類に投与することを包含する哺乳類におけるＨＩＶ
   −１の抑制方法。 ４２）ＱＲＧＰＧＲＡ、ＲＩＱＲＧＰＧＲＡ、ＧＰＧＲ
   ＡＦＶＴＩＧ、ＧＰＧＲＡＦＶおよびＧＰＧＲＡよりな
   る群から選択される配列を有する、５〜１０アミノ酸の
   化学合成ペプチド。 ４３）免疫学的に許容される担体にコンジュゲートした
   請求項４２のペプチドを哺乳類に投与することを包含す
   る、哺乳類におけるＨＩＶ−抑制抗体生産を誘導する方
   法。 ４４）請求項４２のペプチドに対して免疫反応性を有す
   るＨＩＶ−抑制モノクローナル抗体。 ４５）請求項１のペプチドに対して免疫反応性を有する
   ＨＩＶ−抑制モノクローナル抗体。 ４６）請求項２のペプチドに対して免疫反応性を有する
   ＨＩＶ−抑制モノクローナル抗体。