JPH0216994A - 細胞増殖阻害因子及びその製造方法 - Google Patents
細胞増殖阻害因子及びその製造方法Info
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- JPH0216994A JPH0216994A JP63165820A JP16582088A JPH0216994A JP H0216994 A JPH0216994 A JP H0216994A JP 63165820 A JP63165820 A JP 63165820A JP 16582088 A JP16582088 A JP 16582088A JP H0216994 A JPH0216994 A JP H0216994A
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- Japan
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- cell growth
- cells
- growth inhibitory
- growth inhibiting
- inhibiting factor
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、動物の腫瘍性形質転換細胞株を培養した培養
液中から分離される新規な細胞増殖阻害因子に関する。
液中から分離される新規な細胞増殖阻害因子に関する。
本発明の細胞増殖阻害因子は、ヒト癌細胞にたいして増
殖阻害活性を示し、制癌剤として有用である６ 〔従来技術〕 一般に、生体内の細胞増殖制御機構においては、増殖因
子（Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）と増殖阻害因子（Ｇ
ｒｏｗｔｈＩｎｈｊ ｂｊ ｔｏｒ）が重要な役割を担
っていると考えられている。
殖阻害活性を示し、制癌剤として有用である６ 〔従来技術〕 一般に、生体内の細胞増殖制御機構においては、増殖因
子（Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）と増殖阻害因子（Ｇ
ｒｏｗｔｈＩｎｈｊ ｂｊ ｔｏｒ）が重要な役割を担
っていると考えられている。
最近、種々の組織に増殖阻害因子が存在することが知ら
れ、その生物学的な意義が認められるようになってきた
。このような増殖阻害因子の一つとして、β型トランス
フォーミング増殖因子（ＴＧＦβ）が知られている。
れ、その生物学的な意義が認められるようになってきた
。このような増殖阻害因子の一つとして、β型トランス
フォーミング増殖因子（ＴＧＦβ）が知られている。
また、本発明者は、先に、ラットおよびヒトの血液にお
ける細胞増殖阻害因子の研究中に、ヒトの血小板中に分
子量約２７，０００で、還元により失活し、２個のサブ
ユニットからなる上皮細胞増殖阻害因子が存在すること
を見出した（特開昭６３−３５５２３号公報）。
ける細胞増殖阻害因子の研究中に、ヒトの血小板中に分
子量約２７，０００で、還元により失活し、２個のサブ
ユニットからなる上皮細胞増殖阻害因子が存在すること
を見出した（特開昭６３−３５５２３号公報）。
本発明者らは、上記研究をさらに進めた結果、正常ウソ
１−由来の肝細胞株をラウス肉腫ウィルス（Ｒｏｕｓ
ｓａｒｃｏｍａ ｖｉｒｕｓ）で形質転換した腫瘍性形
質転換細胞（Ｒ５Ｖ−ＵＲＬ）自身が、培養液中に２種
の増殖阻害因子を分泌することを見出した。このうちの
一種は、ＴＧＦ−〇様阻害因子である可能性が高いが、
他の一種は、明らかに新規な細胞増殖阻害因子であるこ
とを見出した。
１−由来の肝細胞株をラウス肉腫ウィルス（Ｒｏｕｓ
ｓａｒｃｏｍａ ｖｉｒｕｓ）で形質転換した腫瘍性形
質転換細胞（Ｒ５Ｖ−ＵＲＬ）自身が、培養液中に２種
の増殖阻害因子を分泌することを見出した。このうちの
一種は、ＴＧＦ−〇様阻害因子である可能性が高いが、
他の一種は、明らかに新規な細胞増殖阻害因子であるこ
とを見出した。
本発明は、この知見に基づきなされたもので、本発明の
新規な細胞増殖β■害因子は有用な制癌剤として期待さ
れるものである。
新規な細胞増殖β■害因子は有用な制癌剤として期待さ
れるものである。
本発明の新規細胞増殖阻害因子を生産する腫瘍性形質転
換細胞は、Ｒ５Ｖ−ＲＲＩ、としテＦＰ、ＲＭ ｎＰ−
１９０７で微工研に寄託されている。
換細胞は、Ｒ５Ｖ−ＲＲＩ、としテＦＰ、ＲＭ ｎＰ−
１９０７で微工研に寄託されている。
本発明は、分子景約４５，０００、等重点（ｐＩ）約４
．７で、かつ、酸に不安定で還元剤に安定な一本鎖のポ
リペプチドからなる新規細胞増殖阻害因子に関するもの
である。
．７で、かつ、酸に不安定で還元剤に安定な一本鎖のポ
リペプチドからなる新規細胞増殖阻害因子に関するもの
である。
また、本発明は動物の腫瘍性形質転換細胞株を培養し、
培養液中から分離精製することを特徴とする新規な上記
細胞増殖阻害因子の製造方法に関する。
培養液中から分離精製することを特徴とする新規な上記
細胞増殖阻害因子の製造方法に関する。
本発明の新規細胞増殖阻害因子を生産する腫瘍性形質転
換細胞（Ｒ５Ｖ−ＢＲＬ細胞）は、正常ラット由来の肝
細胞株にラウス肉腫ウィルスを加え、常法により形質転
換し、得られた多くの腫瘍性形質転換細胞株から選別し
て、取得することができる。
換細胞（Ｒ５Ｖ−ＢＲＬ細胞）は、正常ラット由来の肝
細胞株にラウス肉腫ウィルスを加え、常法により形質転
換し、得られた多くの腫瘍性形質転換細胞株から選別し
て、取得することができる。
本発明においては、新規細胞増殖阻害因子をよく生産す
る細胞株トＬ テＲ５Ｖ−ＢＲＬ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１
９０７）を代表細胞株として示すことができる。
る細胞株トＬ テＲ５Ｖ−ＢＲＬ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１
９０７）を代表細胞株として示すことができる。
−に北本発明の細胞増殖阻害因子は、例えば、次の方法
で得ることができる。
で得ることができる。
前述したＲ３Ｖ−ＢＲＩ、細胞を無血清培地で培養した
培地を集め、遠心分離等の手段で細胞を除き、硫酸アン
モニウム等により塩析し、培地中に含まれるタンパク質
を回収する。次いで、このタンパク質を燐酸緩衝生理食
塩水（ＰＢＳ）に懸濁して透析を行い、遠心分離して］
１清を菓め、これを５種のカラムクロマトグラフィーで
分離精製することにより、本発明の細胞増殖阻害因子を
得ることができる。
培地を集め、遠心分離等の手段で細胞を除き、硫酸アン
モニウム等により塩析し、培地中に含まれるタンパク質
を回収する。次いで、このタンパク質を燐酸緩衝生理食
塩水（ＰＢＳ）に懸濁して透析を行い、遠心分離して］
１清を菓め、これを５種のカラムクロマトグラフィーで
分離精製することにより、本発明の細胞増殖阻害因子を
得ることができる。
本発明の細胞増殖阻害因子は分子量約４５，０００であ
るが、この分子量はＳＯ５（ドデシル硫酸ナトリウム）
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により測定された
ものである。また、本発明の細胞増殖阻害因子は、０．
ＩＭの酢酸に２４時間接触させたり、１００℃で５分間
或いは６０℃で３０分間熱処理することにより失活する
が、 ５０ｍＭのジチオスレイトールなどの還元剤に対
しては安定であり、−水銀のポリペプチドからなるもの
である。
るが、この分子量はＳＯ５（ドデシル硫酸ナトリウム）
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により測定された
ものである。また、本発明の細胞増殖阻害因子は、０．
ＩＭの酢酸に２４時間接触させたり、１００℃で５分間
或いは６０℃で３０分間熱処理することにより失活する
が、 ５０ｍＭのジチオスレイトールなどの還元剤に対
しては安定であり、−水銀のポリペプチドからなるもの
である。
コンデイションメディウムの調製
Ｒ５Ｖ−ＢＲＬ−１細胞（ＦＩＥＲＭ ＢＰ−１９０７
）ヲＤＭＩＥＨ！＝Ｆ］２（７１等量混合培地（ＤＭＥ
／ＦＩ２）にさらに牛胎児血清を最終濃度１０％になる
ように添加した培地２５ｍ１を含む直径１５０ｍｍのシ
ャーレに播き、細胞が敷石状（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）に
なるまで培養した。次に、培養液を捨て、細胞が剥がれ
ないようにしてＰＢＳで２回洗浄した。
）ヲＤＭＩＥＨ！＝Ｆ］２（７１等量混合培地（ＤＭＥ
／ＦＩ２）にさらに牛胎児血清を最終濃度１０％になる
ように添加した培地２５ｍ１を含む直径１５０ｍｍのシ
ャーレに播き、細胞が敷石状（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）に
なるまで培養した。次に、培養液を捨て、細胞が剥がれ
ないようにしてＰＢＳで２回洗浄した。
次いで、無血清培地（ＤＭＥ／Ｆ１２）を２５ｍ１入れ
、５時間インキュベートした後、当該液を捨ててシャー
レ及び細胞表面に血清が残らないようにした。これに、
前記と同様の新しい無血清培地２５ｍ１を入れ２日ハ１
１培養し、この培養液を集め、また、新しい前述の培地
に変え、２日間培養を行い培養液を集めた。この操作を
細胞が弱って浮き始めるまで（５〜６回）行った。
、５時間インキュベートした後、当該液を捨ててシャー
レ及び細胞表面に血清が残らないようにした。これに、
前記と同様の新しい無血清培地２５ｍ１を入れ２日ハ１
１培養し、この培養液を集め、また、新しい前述の培地
に変え、２日間培養を行い培養液を集めた。この操作を
細胞が弱って浮き始めるまで（５〜６回）行った。
」１記のようにして集めた培養液を遠心分離して細胞を
除いた後、８５％飽和濃度の硫酸アンモニウムで塩析し
、Ｒ５Ｖ−ＢＲＬ細胞が培養液中に分泌したタンパク質
を回収した。このタンパク質を少量のｐｎｓに再Ｉ１１
１１ｍｔ、、ｐｎｓに対して、４℃で２４時間透析を行
った。透析後、遠心分離を行い、上清を集めた。
除いた後、８５％飽和濃度の硫酸アンモニウムで塩析し
、Ｒ５Ｖ−ＢＲＬ細胞が培養液中に分泌したタンパク質
を回収した。このタンパク質を少量のｐｎｓに再Ｉ１１
１１ｍｔ、、ｐｎｓに対して、４℃で２４時間透析を行
った。透析後、遠心分離を行い、上清を集めた。
一精一聚
（１）」−記で得られた上清を、セルロファイン（Ｃｅ
１１ｕｌｏｆｊｎｃ）ＧＣＬ−２０００ｍ（ヂッソ（株
）社製）を用い、第１表に記載した条件でゲル濾過を行
った。
１１ｕｌｏｆｊｎｃ）ＧＣＬ−２０００ｍ（ヂッソ（株
）社製）を用い、第１表に記載した条件でゲル濾過を行
った。
第１表
カラムのサイズ： ２．６Ｘ９０ｃｍ
ゲル充填量： ４８０ｍ１
流 速： ２４ｍ１／時間
両分ｊｔ：各６ｍｌ
溶出液：１０ｍＭトリス塩酸液（ｐＨ７，５） ＋０．
５Ｍ食塩 得られた各両分について、２８０ｎｍの吸光度及び増殖
阻害活性を測定した。この結果を第１図に示した。この
図がら明らかなように、増′Ｆａ阻害因子は５２〜５７
画分（分子量約４５，０００）に含まれていることが分
かる。
５Ｍ食塩 得られた各両分について、２８０ｎｍの吸光度及び増殖
阻害活性を測定した。この結果を第１図に示した。この
図がら明らかなように、増′Ｆａ阻害因子は５２〜５７
画分（分子量約４５，０００）に含まれていることが分
かる。
尚、ｔｇＩ殖阻害活性は、次の方法により測定した。
正常ラットの肝臓由来の上皮性細胞（１３ＲＬ ）を。
牛胎児血清１０％を添加したＤＭＥ／Ｆ１２培地を０．
５ｍ］含む２４穴マイクロプレートに２．５ Ｘ １０
３個／ウェルの濃度で播き、約４時間後（ｍ胞がウェル
の底にくっついた後）試料を２０μｍ加えて、４日間培
養する。この場合、試料の代わりにｌ３ＲＳを加えたも
のを対照とした。培養後、自動細胞数測定装置で細胞数
を計測し、対照を１００として、これに対する細胞数で
細胞増Ｍ咀害活性を求めた。
５ｍ］含む２４穴マイクロプレートに２．５ Ｘ １０
３個／ウェルの濃度で播き、約４時間後（ｍ胞がウェル
の底にくっついた後）試料を２０μｍ加えて、４日間培
養する。この場合、試料の代わりにｌ３ＲＳを加えたも
のを対照とした。培養後、自動細胞数測定装置で細胞数
を計測し、対照を１００として、これに対する細胞数で
細胞増Ｍ咀害活性を求めた。
（２）上記で得られた５２〜５７両分をプールし、これ
をｌ０ｍＭ ）−リス塩酸（ｐＨ７，５）に対して透析
した後、ヘパリン−アガロースＣＩｌｅｐａＣｌ１ｅｐ
ａｒｊｎ−ａ。
をｌ０ｍＭ ）−リス塩酸（ｐＨ７，５）に対して透析
した後、ヘパリン−アガロースＣＩｌｅｐａＣｌ１ｅｐ
ａｒｊｎ−ａ。
バイオラッド（１３ｉｏ−ｒａｄ）社製〕を用い、第２
表に記載した条件でアフィニティクロマ１−グラフィー
を行った。
表に記載した条件でアフィニティクロマ１−グラフィー
を行った。
第２表
カラムのサイズ：ｉ、５Ｘ６ｃｍ
ゲル充填量＝９耐
流 速： １５ｍ１／時間
画分＃、：各６ｍｌ
溶出液：１０ｎＩＭトリス塩酸液（ＰＩ＋７．５） ＋
０−０．１Ｍ食塩濃度ゲラジェント 得られた各両分について、上記と同様に２８０ｎｍの吸
光度及び増殖阻害活性を測定した。この結果を第２図に
示した。この図がら明らかなように、増殖阻害因子は５
０ｍＭ食塩水溶出液画分（４１〜４６両分）に含まれて
いることが分がる。
０−０．１Ｍ食塩濃度ゲラジェント 得られた各両分について、上記と同様に２８０ｎｍの吸
光度及び増殖阻害活性を測定した。この結果を第２図に
示した。この図がら明らかなように、増殖阻害因子は５
０ｍＭ食塩水溶出液画分（４１〜４６両分）に含まれて
いることが分がる。
（３） −１−記で得られた５０鱈食塩水溶出液画分を
プールし、ブルーーセルロファイン（Ｂｌｕｅ−Ｃｅｌ
ｌｕｌｏ−ｆｉｎｅ、チッソ（株）製）を用い、第３表
に記載した条件でカラムクロマトグラフィーを行った。
プールし、ブルーーセルロファイン（Ｂｌｕｅ−Ｃｅｌ
ｌｕｌｏ−ｆｉｎｅ、チッソ（株）製）を用い、第３表
に記載した条件でカラムクロマトグラフィーを行った。
第３表
カラムのサイズ：２．６Ｘ８ｃｍ
ゲル充填量：４２ｍ１
流 速： １５ｍ１／時間
両分量：各６ｍｌ
溶出液＝１０１１ＩＭトリス塩酸液（ｐＨ７，５） ；
１０１１１Ｍトリス塩酸液（ｐｌ＋７．５） ＋ １に
食塩；１０１１１Ｍトリス塩酸液（ρ１１７．５） ＋
ＩＭＭ塩＋６Ｍ尿素 得られた各両分について、上記と同様に２８０ｎｍの吸
光度及び増殖阻害活性を測定した。吸光度の結果を第３
図に示した。増殖阻害因子は４〜１４画分に含まれてい
ることが分かった。
１０１１１Ｍトリス塩酸液（ｐｌ＋７．５） ＋ １に
食塩；１０１１１Ｍトリス塩酸液（ρ１１７．５） ＋
ＩＭＭ塩＋６Ｍ尿素 得られた各両分について、上記と同様に２８０ｎｍの吸
光度及び増殖阻害活性を測定した。吸光度の結果を第３
図に示した。増殖阻害因子は４〜１４画分に含まれてい
ることが分かった。
（４） ｌ記で得られた４〜１４両分をプールし、２Ｍ
の硫酸アンモニウム液とした後、２５ｍＭ トリス塩酸
液（ｐＨ７，５） ＋２Ｍ硫酸アンモニウムで平衡化し
たセファロースＣＬ−６８（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃ１
、−６８、ファルマシア社製）を用い、第４表に記載し
た条件で水素結合クロマトグラフィーを行った。
の硫酸アンモニウム液とした後、２５ｍＭ トリス塩酸
液（ｐＨ７，５） ＋２Ｍ硫酸アンモニウムで平衡化し
たセファロースＣＬ−６８（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃ１
、−６８、ファルマシア社製）を用い、第４表に記載し
た条件で水素結合クロマトグラフィーを行った。
第４表
カラムのサイズ：２．６Ｘ７ｃｍ
ゲル充填量： ３７ｍ１
流 速： １０ｍ１／時間
両分址：各５ｍｌ
溶出液： ２５ｍＭ トリス塩酸液（ｐＨ７，５） ＋
２−０．５Ｍ硫硫酸アンモニウム塵下降グラジ エンド 得られた各両分について、上記と同様に２８０ｎｍの吸
光度及び増殖阻害活性を測定した。この結果を第４図に
示した。この図から明らかなように、増殖阻害因子は１
、２＋ｎＭ硫酸アンモニウム溶出液画分（６４〜６６
画分）に含まれていることが分かる。
２−０．５Ｍ硫硫酸アンモニウム塵下降グラジ エンド 得られた各両分について、上記と同様に２８０ｎｍの吸
光度及び増殖阻害活性を測定した。この結果を第４図に
示した。この図から明らかなように、増殖阻害因子は１
、２＋ｎＭ硫酸アンモニウム溶出液画分（６４〜６６
画分）に含まれていることが分かる。
（５）−１＝、記で得られた６４〜６６画分をプールし
、これを１０ｍＭリン酸緩衝液（ρ１１７．５）に対し
て透析し、この液について前記緩衝液で平衡化した強陰
イオン交換カラム（ＯＡ−８２４、昭和電工（株）社！
！１）を用い、第５表に記載した条件で高速液体クロマ
トグラフィーを行った。
、これを１０ｍＭリン酸緩衝液（ρ１１７．５）に対し
て透析し、この液について前記緩衝液で平衡化した強陰
イオン交換カラム（ＯＡ−８２４、昭和電工（株）社！
！１）を用い、第５表に記載した条件で高速液体クロマ
トグラフィーを行った。
第５表
カラムのサイズ： ８ Ｘ７５ｍｍ
流 速：１．Ｏｍｌ、７分
画分旦：各１ｍｌ
溶出液：１０ｍにリン酸カリウム緩衝液（ｐ）１６．５
）十０．１％ＣＩＩＡＰＳ ＋０〜１に食塩濃度グラジェント 得られた各両分について、上記と同様に２８０ｎｍの吸
光度及び増殖阻害活性を測定した。この結果を第５図に
示した。この結果から１１１Ｉ殖咀害因子は４５両分に
含まれていることが分かった。
）十０．１％ＣＩＩＡＰＳ ＋０〜１に食塩濃度グラジェント 得られた各両分について、上記と同様に２８０ｎｍの吸
光度及び増殖阻害活性を測定した。この結果を第５図に
示した。この結果から１１１Ｉ殖咀害因子は４５両分に
含まれていることが分かった。
物性
上記（５）で単離した物質（増殖阻害因子）の分子量を
５Ｏ５−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により測定
した結果、約４５，０００であった。また、等重点電気
泳動法により等重点を測定した結果、約４．７であった
。さらに、上記物質を０．１Ｍ濃度の酢酸水溶液に入れ
、室温で、２４時間保持し、上述した方法により増殖阻
害活性を測定した結果、失活していた。また、この物質
を１００℃で、５分ｕｌｆｆ加熱し、或いは６０℃で、
３０分間加熱した後、同様に増殖阻害活性を測定した結
果、活性が５０％以下に低下した。一方、この物質を５
０ｍＭのジチオスレイト−ルを還元剤として、還元処理
を行い、ＳＯＳポリアクリルアミドゲル電気泳動法によ
り、分子量を測定した結果、約４５，０００であり、ま
た、還元処理後の物質を」二記同様に増殖阻害活性を測
定した結果、活性には変化がなかった。
５Ｏ５−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により測定
した結果、約４５，０００であった。また、等重点電気
泳動法により等重点を測定した結果、約４．７であった
。さらに、上記物質を０．１Ｍ濃度の酢酸水溶液に入れ
、室温で、２４時間保持し、上述した方法により増殖阻
害活性を測定した結果、失活していた。また、この物質
を１００℃で、５分ｕｌｆｆ加熱し、或いは６０℃で、
３０分間加熱した後、同様に増殖阻害活性を測定した結
果、活性が５０％以下に低下した。一方、この物質を５
０ｍＭのジチオスレイト−ルを還元剤として、還元処理
を行い、ＳＯＳポリアクリルアミドゲル電気泳動法によ
り、分子量を測定した結果、約４５，０００であり、ま
た、還元処理後の物質を」二記同様に増殖阻害活性を測
定した結果、活性には変化がなかった。
試験例
上記物質（増殖阻害因子）を０．５ｍｌの培地中に２ｎ
ｇまたは４Ｂ添加し第５表に掲げた細胞に対して用い、
−上述したのと同様の方法により細胞増殖阻害活性を４
１ｑ定した。この結果を第５表に示した。
ｇまたは４Ｂ添加し第５表に掲げた細胞に対して用い、
−上述したのと同様の方法により細胞増殖阻害活性を４
１ｑ定した。この結果を第５表に示した。
この結果から明らかなように、この増殖阻害因子は種々
の細胞に対し増殖阻害活性を有し、制癌剤として有用で
あることが分かる。
の細胞に対し増殖阻害活性を有し、制癌剤として有用で
あることが分かる。
第１図はセルロファインＧＣＬ−２０００ｍのゲル濾過
カラムにおける溶出曲線を示す図、第２図はヘパリン−
アガロースカラムにおける溶出曲線を示す図、第３図は
プルーーセルロファイン力ラムにおける溶出曲線を示す
図、第４図はセファロースＣＬ−６Ｂカラムにおける溶
出曲線を示す図、および第５図はＱＡ−８２４カラムを
用いた高速液体クロマトグラフィーにおける溶出曲線を
示す図である。
カラムにおける溶出曲線を示す図、第２図はヘパリン−
アガロースカラムにおける溶出曲線を示す図、第３図は
プルーーセルロファイン力ラムにおける溶出曲線を示す
図、第４図はセファロースＣＬ−６Ｂカラムにおける溶
出曲線を示す図、および第５図はＱＡ−８２４カラムを
用いた高速液体クロマトグラフィーにおける溶出曲線を
示す図である。
代理人 弁理士 戸 １）親 男
〔発明の効果〕
以上のような本発明の細胞増殖阻害因子は、細胞増殖阻
害機能を有するので新しい制癌剤として極めて有望なも
のである。
害機能を有するので新しい制癌剤として極めて有望なも
のである。
第
図
Claims (2)
- （１）分子量約４５，０００、等電点（ｐＩ）約４．７
で、かつ酸に不安定で還元剤に安定な一本鎖のポリペプ
チドからなる新規細胞増殖阻害因子。 - （２）動物の腫瘍性形質転換細胞株を培養し、培養液か
ら分離精製することを特徴とする新規な請求項（１）の
細胞増殖阻害因子の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63165820A JPH0216994A (ja) | 1988-07-05 | 1988-07-05 | 細胞増殖阻害因子及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63165820A JPH0216994A (ja) | 1988-07-05 | 1988-07-05 | 細胞増殖阻害因子及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0216994A true JPH0216994A (ja) | 1990-01-19 |
Family
ID=15819618
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63165820A Pending JPH0216994A (ja) | 1988-07-05 | 1988-07-05 | 細胞増殖阻害因子及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0216994A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7041504B2 (en) | 1996-04-03 | 2006-05-09 | The Rogosin Institute | Cancer cell-inhibiting culture medium produced by culturing restricted entrapped cancer cells |
| US7297331B2 (en) | 1996-04-03 | 2007-11-20 | The Rogosin Institute | Beads containing restricted cancer cells producing material suppressing cancer cell proliferation |
-
1988
- 1988-07-05 JP JP63165820A patent/JPH0216994A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7041504B2 (en) | 1996-04-03 | 2006-05-09 | The Rogosin Institute | Cancer cell-inhibiting culture medium produced by culturing restricted entrapped cancer cells |
| US7297331B2 (en) | 1996-04-03 | 2007-11-20 | The Rogosin Institute | Beads containing restricted cancer cells producing material suppressing cancer cell proliferation |
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