JPH0216995A - Ｂｍｙ―４０８００抗腫瘍抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明け、新知な抗腫瘍抗生物質及びその生産及び回収
に関する。

（従来の技術） 本発明の抗腫瘍抗生物質ＢＭＹ−４０８００の構造はま
だ解明されていかいっしかし、この化合物の特性を基に
して、ＢＭＹ−４０８００は新規な化合物であると考え
られる。

（発明の開示） 本発明の１面によれば、試験管内及び生体内で共に抗腫
瘍活性を示す抗生物質ＢＭＹ−４０８００が提供される
。

本発明の他の１面によれば、液内通気条件下同化性の炭
素及び窒素源を含有する水性栄養培地中、ストレプトマ
イ±４−ヒグロスコピクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓ
　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｇ）＋７）ＢＭＹ−４０８
００生産菌株、好適には菌株Ｃ３９１０８−Ｐ２１０−
５１　（ＡＴＣＣ５３６５３）又はそのＢＭＹ−４０８
００住産変異体（ｖａｒｉａｎｔ）又は変異株（ｍｕｔ
ａｎｔ）を、該培地中該菌によって実質的なｆ゛のＲＭ
Ｙ−４０８００が生産されるまで培養し、次に該培地か
らＢＭＹ−４０８００を回収することを特徴とするＢＭ
Ｙ−４０８００の製法が提供される。

本発明の他の１面によれば、医薬用担体又は希釈剤と絹
み合わせて有効腫瘍抑制量のＢＭＹ−４０８００を含有
する医薬用組成物が提供される。

本発明の尚仙、の１面においては、悪性腫瘍に侵された
補乳類宿主に有効腫瘍抑制量のＢＭＹ−４０８００又は
その医薬用組成物を投与することを特徴とする該宿主の
治療処置法が提供される。

図１は、ＢＭＹ−４０８００の赤外吸収スペクトル（Ｋ
Ｂｒはレット）を表わす。

図２は、ＣＤＣｌ３中ＢＭＹ−４０８００の３６０ＭＨ
ｚプロトン磁気共鳴スはク共鳴音表わすっ図３は、ＣＤ
Ｃｌ３中ＢＭＹ−４０８００の９０．５ＭＨｚ１３Ｃ磁
気共鳴スは磁気共鳴光わす。

本発明のＢＭＹ−４０８００抗生物質は、ストレプトマ
イセスのＢＭＹ−４０８００生産菌株の醗酵によって生
産される。好適な生産菌は、ここでストレプトマイセス
・ヒグロスコピクス菌株Ｃ３９１０８−Ｐ２１０−５１
と称されるストレプトマイセス・ヒグロスコピクスの新
規な菌株である。この菌株は、インドのヒマチャル・プ
ラデツシュ州において集められた土壌試料から単離され
た。菌株Ｃ３９１０８−Ｐ２１０−５１の生物学的に純
粋な培養物は、メリーランド州ロックビルのり・アメリ
カン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されて
おり、ＡＴＣＣ５３６３３としてその微生物永久コレク
ションに加えられている。この培参物は、Ｃ３９１０８
と称され、コネチカット州０６４９２ウォリンフォード
、リサーチ・ノζ−クウェイ５のブリストルーマイヤー
ズーファーマンーチカル・リサーチ・アンド・デばロツ
プメント・デイビジョン・カルチャー・コレクションに
おいて凍結乾燥管及び低温バイヤル中休眠培養物として
も保存されている。

菌株Ｃ３９１０８−Ｐ２１０−５１について行なわれた
分類学的研究の結果は、この菌株がストレプトマイセス
・ヒグロスコピクスの新規な菌株であると七を示す。

菌株Ｃ３９１０８は、シャーリング及びゴツトリーブ（
Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　１
６　：　３１３〜３４０．１９６６；同誌封：６９〜１
８９．１９６８；同誌２２：２６５〜３９４．１９７２
）、スタネツク及びロパーツ（Ａｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ、２８　：　２２６〜３１．１９７４、）、Ｋ、
Ｐ、シャル（Ｍ、　　グツドフェロ−及びり、　Ｅ。

マニキン編、Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｉ
ｎ　ＢａｃｔｅｒｉａｌＳｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ、　　
アカデミツク・プレス社、３５９〜３８１ぼ、１９８５
）によって記載された材料及び操作により決定して次の
諸性質を有する。

形態 下層及び気中菌糸が共に形成され、それらは長い、よく
枝分れし、短かいフィラメントに区分されていない。分
節胞子の連鎖が気菌系の上に生れる。胞子の連鎖及び胞
子の形態は次のとおりである＝１）２〜８回転をもつら
せん状胞子連鎖、２）単軸分枝単胞子体、３）胞子、卵
形又はたる形（０，５〜０．７　Ｘ　０．５〜１．２μ
ｍ）、並びに４）胞子装飾（ｏｒｎａｍｅｎｔａｔｉｏ
ｎ　）、しわがあるか又は平滑っ胞子のり、運動性胞子
及び菌核は観察されない。

培養及び生理特性 菌株は、大部分の記述培地（ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ　
ｍｅｄｉａ　）中よく生育する。気菌枝は、ＩＳＰ　２
．４及び７号及びベネットの寒天中胞子形成後灰色がか
った色を示し、黒味がかった湿らす／！！ソチ（吸湿変
化）として生じる。下層菌糸は無色、灰黄色又はオリー
ブ褐色である。ペプトン−イーストエキス−鉄及びチロ
シン寒天及びトリプトン−イーストエキスプロス中黒ず
んだ色素の産生は負であった。菌株Ｃ３９１０８−Ｐ２
１０−５１の炭素利用ノミターンは、シャーリング及び
ゴツトリーブの方法（Ｉｎ５ｔ、Ｊ−８ｙｓｔ。

Ｂａｅｔｅｒｉａｌ　、　１６　：　３１３〜３４０．
１９６０）によって決定されたが、ただし収穫（ｈａｒ
ｖｅｓｔｉｎｇ　）及び接種工程の間に３時間の飢餓期
（＋Ａｔｇｒａｔｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ）を包含させた
。炭素源を含まないＩＳＰ培地９号の液体バージョン（
１ｉｑｕｉｄ　ｖｅｒｓｉｏｎ）中回転式振とう機上２
５０　ｒｐｍで洗浄した増殖期細胞を振とうした。表１
中要約されるとおり、それらのうち、ラムノース、フラ
クトース、グリセロール、キシロース、ラクトース、ガ
ラクトース、クルコース、並びにシュクロースの正の利
用が観察された。

菌株Ｃ３９１０Ｂ−Ｐ２１０−５１の培養及び生理特性
が表２及び３中要約される。

表　　１ 炭素利用、菌株Ｃ３９１０８−Ｐ２１０−５１最上の利
用：ラムノース 可溶デンプン Ｄ−７ラクトース 中程度の利用　：　グリセロール Ｄ−キシロース ラクトース Ｄ−ガラクトース Ｄ−グルコース シュクロース トレハロース Ｄ−マンニトール ラフィノース Ｌ−アラビノース 疑わしい利用　： 負の利用： ｉ−イノシトール メリビオース マルトース ソルボース デュルシトール サリシン Ｄ−マンノース 表　　２ メレジトース Ｄ−リボース Ｄ−アラビノース セロビオース ぼプトンーイースト エキス　プロス （ＩＳＰＩ） イーストエキス− モルトエキス寒天 （ＩＳＰ２） Ｇ　：　中程度、にごらない Ｒ： Ａ：なし Ｐ：なし Ｇ　：　中程度 Ｒ：からし褐色、〔５：Ｅ６〕 Ａ　：黒色 オートミール寒天 （ＩＳＰ３） 蕪機塩− デンプン寒天 （ＩＳＰ４） グリセロール− アスパラギン寒天 （ＩＳＰ５） ペプトン−イースト エキス−鉄寒天 Ｐ　：褐色、［６：Ｅ５］ Ｇ　：わずか Ｒ：　クリーム色、［４；Ａ３］ 〜灰色 Ａ　：黒色 Ｐ　：なし Ｇ　：わずか Ｒ：　クリーム色、［４；Ａ３］ 〜灰色 Ａ　：黒色 Ｐ　：なし Ｇ　：やや〜中程度 Ｒ：わずか、［４；Ｂ３’Ｊ Ａ　：わずか、灰色及び白色 Ｐ：なし Ｇ　：乏しい、平ら Ｒ：パター黄色、［４；Ａ５］ （ＩＳＰ６） チロシン寒天 （ＩＳＰ７） ツエはツクシュクロ ースーナイトレート 寒天 グルコース− アスパラギン寒天 スキムミルク寒天 Ａ　：なし Ｐ　：なし Ｇ　：わずか Ｒ：　クリーム色、［４：Ａ３］ Ａ：なし Ｐ　：あんず色（黄色）、 ｆ：５；Ｂ６） Ｇ　：やや Ｒ：　象牙色〜シャンパン色 （４；Ｂ（３〜４）〕 Ａ　：わずか、灰色及び白色 Ｐ　：灰橙色〔５；Ｂ３） Ｇ　：やや〜中程囲 Ｒ：　シャンノξ７色［５；Ｂ４］ Ａ　：わずか、灰色及び白色 Ｐ　：少し、天然［４；Ａ３］ Ｇ　：やや、浮出し、巻き込み マルトース− トリプトン 寒天 栄養寒天 トマトジュース 寒天 カゼインーデンプン 寒天 Ｒ：　クリーム色、［４；Ａ３］ Ａ：なし Ｐ　：なし Ｇ　：中程度、浮出し Ｒ：黄白色［４：Ａ２］ Ａ　：なし Ｐ　：なし Ｇ　：やや Ｒ：　くすんだ黄色［３；Ｂ３］ Ａ　：わずか、灰色及び白色 Ｐ：なし Ｇ　：　良好、浮出し Ｒ：　褐橙色〔Ｃ；Ｃ８〕 Ａ：なし Ｐ　：少し、淡褐色［：６；Ｄ８］ Ｇ　：わずか、象牙色、平ら Ｒ：黄白色［４：Ａ２］ Ａ：なし Ｐ　：なし 散穿　　　　　　　　　Ｇ　：中８度、浮出しはネット
　　　　　　　　Ｒ：　クリーム合、［：４；Ａ３］寒
天　　　　　　　　　Ａ　：なし Ｐ　：淡黄色Ｃ４；Ａ４］ ０２８℃において２週間装置の後観察 ＯＯ略号二Ｇ−生育 Ｒ＝裏面の色 Ａ＝気中菌糸 Ｐ＝拡散性色素 ０００　Ａ、コーンラップ及びＪ、Ｈ，ワンシャー、ラ
インボールド・ノモブリッシング社−Ｒｅｉｎｈｏｌｄ
　Ｃｏ１ｏｒ　Ａｔ１ａｓ１９６１１．ｔｌＪティケン
ス・フォルラーク、コスンハーゲン、デンマークからの
色の名称及び番号（カッコ内）っ 表　　３ 菌株Ｃ３９１０８−Ｐ２１０−５１の生胛特性加水分解
：ゼラチン デンプン：可溶デンプン ポテトデンプン ミルク凝固 ＋ 十 産 耐 ズブトン化 生：ナイトレートレタクターゼ トリプシナーゼ 容：リゾチーム０．０１％（ｗ／ｖ） ０．００１％（ｗ／ｖ） ＮａＣ１１チル８％ １０％（Ｗ／ｖ） ｐＨ５，０〜１１．０ ４．５及び１２ ＋ −又は＋＊１ ＋ ＋ 温 度：生育範囲 生育なし １８℃〜３９℃ １５℃及び４１℃ 角、ばプトンーナイトレートプロス中正。

細胞壁の化学 全細胞壁加水分解物に、ＬＬ−ジアミノピメリン酸及び
リボースの存在を示す。燐脂質は、ホスファチジルエタ
ノールアミン、ホスファチジルグリセロール及びホスフ
ァチジルイノシトールを含有し、従って型Ｐ−■に属す
る。

菌株Ｃ３９１０８の形態、培養及び生理特性は、この菌
株が種ストレプトマイセス・ヒグロスコピクスに属ｆる
ことを示す。この菌株の主要な特性は次のとおり要約さ
れる＝１）灰色の気中気系、２）胞子連鎖、らせん形、
３）非色素産生性（メラニン負）、４）平滑胞子壁装飾
、及び５）胞子形成気中菌糸の吸湿変化。

ストレプトマイセスは容易に天然にか又は人工的に変異
されるので、本発明は、ストレプトマイセス・ヒグロス
コく冬乙菌株Ｃ３９１０８−Ｐ２１０−５１　（ＡＴＣ
Ｃ５３６５３）及びＵＶ照射、Ｘ線、ナイトロジエンマ
スタ−ド油等のような常用の手段及び遺伝子工学の手段
によって上記の菌から得ることができる、すべてのＲＭ
Ｙ−４０８００生産天然変異体又は変異株をその範囲内
に包含する。

抗生物質生産 本発明のＢＭＹ−４０８００抗・生物質は、ストレプト
マイセス・ヒグロスコピクスのＲＭＹ−４０８００生産
菌株、好適には菌株Ｃ３９１０８−Ｐ２１０−５１　（
ＡＴＣＣ５３６５３）の同定特性を有するストレプトマ
イセス・ヒグロスコピクスの菌株、或いはその変異株又
は変異体を、常用の水性栄養培地中で培養することによ
って製造されるうこの菌は、放射菌に対する既知の栄養
源、即ち同化性の炭素及び窒素源プラス随意の無機塩及
び他の既知の生長因子を含有する栄養培地中で生育する
。限定された量の生産の場合には、表面培養又はびんを
使用してもよいが、大量の抗生物質の生産の場合には好
適には液内通気培養が用いられる。他の放線菌の培養の
ために使用される一般操作を本発明に応用することがで
きる。

栄養培地は、シュクロース、ラクトース、グルコース、
ラムノース、フラクトース、グリセロール又は可溶デン
プンのような適尚な炭素源を含有すべきである。魚ミー
ル、ぼプトンピーナツツミール、綿実ミール又はコーン
ステイープリカーのような同化性の窒素源も用いられる
べきである。ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カ
ルシウム、燐酸、硫酸、塩化物、臭化物、硝酸、炭酸等
のイオンを提供するように栄養無機塩も培地中に配合す
ることができる。

ＢＭＹ−４０８００の生産は、生産菌の十分な生育を行
なわせることができるいずれの温度においてでも、例え
ば、１８°〜３９℃において行なうことができ、便宜に
はおよそ２８℃の温度において実施される。

醗酵は、フラスコ中、又は種々の容量の実験室又は工業
用醗酵器中実施することができる。タンク醗酵が使用さ
れる場合には、歩容の培地に生産菌の斜面又は凍結乾燥
培養物を接種することによって栄養ブロス中増殖期接種
物な得ることが望ましいっこのようにして生育力がある
活性の接種物を得て後、ＢＭＹ−４０８００の大規模生
産のための醗酵タンク培地に無菌的に移す。増殖期接種
物が生産される培地は、生産菌の良好な生育が得られる
かぎり、タンク中で用いられるものと同じであるか、或
いは異なっていることができる。抗生物質の生産は、高
速液体クロマトグラフィーアッセイによるか又は常用の
生物学的アッセイによってモニターすることができる。

一般に、ＢＭＹ−４０８００の至適生産は、およそ５日
の装置の後に達成される。

単離及び精製 ＢＭＹ−４０８００け、醗酵の主要生成物であり、下の
例２に記秒されている操作に従って培地から回収し、実
質的に純粋な形態で単離することができる。図式１は、
好適な単離操作を例示する。

記述：白色結晶性固体 分子式：　Ｃ７２Ｈ１０４Ｎ１４０２０元素分析：　Ｃ
，５Ｂ、１６；　　Ｔ（、６，９４；　　Ｎ、　１２．
８４分子！：１４８４ 質量スぼクトル：Ｖ、Ｇ、７０８Ｅ２重焦点質量スはク
トロメーター ＲＭＹ−４０８００の物理化学的性質は次のとおりであ
る： ＣＭ＋Ｋ）”　１５２３ 赤外スペクトル：バーキンエルマー　１８００　フーリ
エ変換 ＩＲスはクトロメーター ＫＢｒはレット 主要ＩＲバンド（ＩＭ−’）： ３３９３．３３３５．２９６５．２９３２．２８７６．
１７３１．１６７５．１６３０ｇｈ、１５３２．１４８
４．１４６９．１４５４．１４２２．１３９２．１３７
２．１３３０．１３０８．１２５０．１１８７．１１５
４．１１０１．１０１９．９１８．８９８．８１７．７
５７　及び　６０９紫外スペクトル：ヒユーレット−パ
ラカード８４５２人ダイオードアレイ吸光光度計 濃度０．０１５３８ｆ／メタノールｔ ２８６ｎｍ　（：　０．２８９１（ａｌ〕１ｏｇε＝４
．４５分析用Ｔ（ＰＬＣ：　Ｋ’＝　８．９ カラム二ワツトマンパーシジル１．０ＯＤＳ−３（ＩＰ
４７１２） 溶離液ニアセトニトリル　　　４部 テトラヒドロフラン　１部 水　　　　　　　　　　５部 流れ＝２ｍｅ１分 デテクター：２９３ｎｍ 滞留時間：１５分 試料濃度：１μ９／ＤＭＳＯｐ１ ３６０　ＭＨｚ、　’ＨＮＭＲニブル−カーモデルＷＭ
−３６０ス×クトロメーター 溶媒；　ＣＤＣｌ３ 観察化学シフト（対クロロホルムシグナル７．２４０３
）　：０．８３（ｔ、３Ｈ）、　０．８３（ｔ、３Ｈ）
、　０．８８（ｄ、３Ｈ）、　０．９６　（ｄ、３Ｔ（
）、　０．９６　（ｄ、　３Ｔ（）、１．０８　（ｄ、
　３）Ｔ）、　１．１１　（ｄ、　３Ｈ）、　１．３５
（ｍ。

ＩＩ（）、　１．６４　（ｍ、　２）Ｉ）、　１．９２
　（ｍ、Ｉ　Ｔ（）、２．１２（ｍ、２Ｈ）、　２．４
４（ｄ、ＩＨ）、　２．５２（ｍ、ＬＨ）、　２．７０
　（ｄ、　ＩＨ）、　２．７９　（ｔ、　ＬＨ）、３．
０２　（ｄ、　Ｉ　Ｈ）、　３．４０（ｓ、１１■）、
　３．５９（ｓ、ＩＨ）、　３．７７　（ｓ、　ＩＨ）
、　４．１８（ｍ、ＩＨ）、４．４０（ｑ、ＩＨ）、　
４．８４（ｄ、ＩＨ）、　４．９４（ｄｌｌＨ）、　５
．０８　（ｍ、　ＩＨ）、　５．１１（ｍ、ＩＨ）、５
．１６（ｍ、ＩＨ）、　５．３７　（ｄ、　ＩＨ）、　
５．６２（ｄ、ＩＨ）、　５．７８（ｍ、１）Ｔ）、　
５．８９（ｓ、ＩＨ）、６．７４　（ｄ、　１）Ｉ）、
　７．０８　（ｄ、　ＩＴ（）、　７．２５（ｍ、ＩＨ
）、　７．３１　（ｄ、　ＩＨ）、　７．３８　（ｄ、
　ＩＨ）、７．５２　（ｄ、　ＩＨ）、 ＋３ｃ　ＮＭＲ：　ブルーカーモデルＷＭ−３６０スズ
クトロメーター溶＃：：ＣＤＣｈ 観１化学シフト（対クロロホルムシグナルδ７６．５５
．７６９０、７７．２５）： シグナル　　　　　　ＰＰＭ　　　　　　　多重度１　
　　　　　　　１６．３３　　　　　　　　ｑ２　　　
　　　　　　］、７．２６　　　　　　　　ｑ３１８．
１８　　　　　　　　ｑ ４　　　　　　　　１８．７９　　　　　　　　ｑ５　
　　　　　　１９．２５　　　　　　　　ｑ６　　　　
　　　　２０．９０　　　　　　　　ｑ７　　　　　　
　　２２．８６　　　　　　　　ｑ８２５．２１　　　
　　　　　ｄ ９　　　　　　　　２Ｆ１．５４　　　　　　　　ｔｌ
ｏ　　　　　　　　　２９．８１　　　　　　　　ｄｌ
ｌ　　　　　　　　　２９．８９　　　　　　　　ｄ１
２　　　　　　　　３９．３７　　　　　　　　ｔ１３
　　　　　　　　４０．８６　　　　　　　　ｔ１４　
　　　　　　　４９．８３　　　　　　　　ｄ１５　　
　　　　　　５２．５５　　　　　　　　ｔ１６　　　
　　　　　５３．７２　　　　　　　　ｄ１７　　　　
　　　　５４．１９　　　　　　　　ｄ１８　　　　　
　　　５７．１０　　　　　　　　ｄ１９　　　　　　
　　５８．５９　　　　　　　　ｄ２０　　　　　　　
　６０．７０　　　　　　　　ｄ２２　　　　　　　　
　　７７．１１　　　　　　　　　　ｄ２３　　　　　
　　　　　８６．１０　　　　　　　　　　ａ２４　　
　　　　　　　　９０．７６　　　　　　　　　　ｇ２
５　　　　　　　　　１１２．４８　　　　　　　　　
　ａ２６　　　　　　　　　１２１．２９　　　　　　
　　　　ｄ２７　　　　　　　　　１２８．３０　　　
　　　　　　　ｄ２８　　　　　　　　　１３２．２０ ２９　　　　　　　　　１３４．３１ ３０　　　　　　　　　１４６．５６ ３１　　　　　　　　　１７２．２３ ３２　　　　　　　　　１７２．９０　　　　　　　　
　　ｓ３３　　　　　　　　１７３．１４　　　　　　
　　　ｓ３４　　　　　　　　　１７３．３４　　　　
　　　　　　ｓ３５　　　　　　　　１７３．７８　　
　　　　　　　ｓ３６　　　　　　　　１７３．９６　
　　　　　　　　ｓ薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ　Ｏ
，３５プレート：ユニプレート　シリカゲルＧＨＬＦ、
厚さ０．２５ｍ（アナルテク） 可動相：クロロホルムーメタノール（９５：５ｖ／’ｖ
）検出：空気中放置すると黄色になる、室温において硫
酸第二セリウム噴霧試薬によシ橙色になる。

組成 化合物は、アミノ醗バリン、ロイシン及びスレオニンを
等モル量で含有する。又α−ヒドロキシイソバレリン酸
が存在する。

ＢＭＹ−４０８００の生物活性 生体内抗胛瘍活性を決定するためにＲＭＹ−４０８００
を移植マウス白血病Ｐ−３８８に対して試験した。用い
られた操作及び結果を下に示す。

操作 移植可能なＰ−３８８ネズミ白血病を持つＤＢＡ／コド
ナーマウスから得られた１０６の白血病細胞’１ｃＤＦ
１マウスに腹腔内（ｉｐ）移植した。このＣＤＦ、白血
病マウスは、腫瘍後１日から始めて連続５日間毎日１回
食塩水（対照マウス）又けＢＭＹ−４０８００の語用量
でｉｐ処装された。これらの動物を毎日観察し、それら
の死を記録した。

薬の毒性を反映させる手段としてすべての群について平
均体重の変化（白血病移植の日から最後の処置の日まで
）を決定した。腫瘍移植後５日目に各群中生存している
マウスの例数を、薬の毒性の追加評価手段として記録し
た。５日目寸でに処置群あたり１匹を超えるマウスが死
亡した場合には、治療の結果は意味がないと考えた。処
置群は、４か又Ｆｉ６匹のマウスよりなっていた；対照
群Ｊ−ｊｌＯ匹のマウスを含んでいた。３００日目実験
の最後の日）才で生存しているマウスがあれば、その数
を記録した。

ＢＭＹ−４０８００処置マウスの中央平均時間（ＭＳＤ
）を決定し、それを平行の対照マウスのＭＳＤと比較す
ることによって治療効果を評価した。この比較は、前者
のＭＳＤを後者で割り、１００を掛けてＴＣ値パーセン
トと称されるパラメーターを導くことによって行なわれ
た。≧１２５チのＴ／Ｃパーセントを寿命の有意義な増
加を表わすと考えた。

結果：ＢＭＹ−４０８００を２つの実験において評価し
、そのデータを表４に示す。第１の実験（÷８０１６）
においては、試、験された最高用量、１■／梅／ｉｐ注
射毎日連続５日間の注射に、Ｔ／Ｃ１３５チを生じた。

５日目寸での死亡、３００日目での生存は認められなか
った。

第２の研究（す８０２３）においては、評価されｆＣ最
高用量、３．２■／助１５回の注射の注射は、５日目ま
でに２匹のマウスの死亡（６匹中）ｆ生じ、その故に高
すぎる毒性の用量水草と考えられた。０．８■／ｋｑ／
注射において最良の結果が達成され、Ｔ／Ｃ１４０チよ
りなっていた。

かくして、Ｐ３８８白血病に対する２つの実験において
、ＢＭＹ−４０８００は、耐容投薬量において活性の結
果を反映する寿命の増加を達成した。

上に与えられたデータによって示されるとおり、ＢＭＹ
−４０８００け、Ｐ−３８８白血病のような哺乳類の面
性＃瘍の抑制のための抗腫瘍剤として有用でを〕る。

本発明は、不活性な医薬として使用可能な担体又は希釈
剤と組み合わせて有効腫瘍抑制量のＢＭＹ−４０８００
を含有する医薬用組成物をその範囲内に包含する。前記
の組成物は、他の活性抗腫瘍剤を含有していてよく、所
望の投与径路のため適当ないずれの医薬用形態でつくら
れていてもよい。このような組成物の例は、錠剤、カプ
セル、ピル、粉末及び顆粒のような経口投与のための固
体組成物、溶液、懸濁液、シロップ又はエレキシルのよ
うな経口投与のだめの液体組成物及び無菌の溶液、懸濁
液又は乳濁液のような非経口投与のための製剤を包含す
る。それらは又、無菌の固体組成物の形態で製造してよ
く、それは使用直前に無菌の水、生理食塩水又は他の無
菌の注射用培質に溶解するととができる。

抗腫瘍剤として使用する場合、ある哺乳類宿主に対する
ＢＭＹ−４０８００の至適の投薬量及び用法は、当該技
術熟練者によって容易に確かめられることができる。勿
論、使用されるＴ３ＭＹ−４０８００の実際の用ｔは、
処方される特定の組成物、適用の様態及び処置される特
定の原位置、宿主及び疾病に従って変動することが望め
られる。年令、体重、性、食事、投与の時間、投与の径
路、排泄の速度、患者の条件、薬の組合せ、反応感受性
及び疾病の重篤度を含む、薬の作用を修飾する多くの因
子が考慮に入れられる。

次の実施例は、当該技術熟練者が本発明を実施すること
ができるように力えられる。それらは、本発明の範囲を
限定すると解されるべきでない。別示しないかぎり、示
された百分率は、重量百分率であり、液体の比は容ヤ°
／容量である。

例１ 菌株Ｃ３９１０Ｂ−Ｐ２１０−５１　（ＡＴＣＣ５３６
５３）をイースト−モルトエキス寒天の寒天斜面上試験
管内に保存し、転移した。この媒地は、蒸留水中モルト
エキス（１，０チ）、イーストエキス（０，４チ）、デ
キストロース（０，４チ）、寒天（１，５チ）及び炭酸
カルシウム（０１５チ）よりなる。各転移ごとに、寒天
斜面を２８℃において２週間装置した。生産相のための
接釉物を調製するために、斜面培養物からの表面生育物
を、グリセロール（２％）、角ミール（１チ）及び炭酸
カルシウム（Ｏ，ＳＳ）よりなる無菌培’４１００　ｍ
ｌを含有する５００−の三角フラスコに転移した。この
増殖期培養物は、２５０　ｒｐｍにセットキれた回転式
振とり機上２８℃において７２時間温ｔｔされた。この
増殖期培養物５−を、同じ栄養培地（グリセロール２チ
、魚ミール１チ、炭酸カルシウム０．５％）よりなる１
００−を含有する５００−の三角フラスコに転移した。

この生産培養物は、増殖期培養物の場合に使用されたよ
うな振とう機（２５０ｒｐｍ）上２８℃において４〜５
日間温置された。

ＢＭＹ−４０８００の力価は、９６〜１２０時間におい
て、）ＩＰＬＣ分析により１６５〜１８０μグ／−に達
した５Ｂ、醗酵器醗酵 Ａの部に記載されたとおり増殖期培養物１００−を調製
した。この増殖期培養物を２５−を、同じ栄養培地５０
０ｍ１を含有する２リツトルのビトロびん中に転移し、
接種された培養物は、２８℃において２５０　ｒｐｍの
振とり機上７２時間温置された。得られた培養物は、同
じ栄養培地１０リツトルを含有するニュープランスウイ
ツク・ミクロジエン醗酵器中に無菌的に交さされた。醗
酵は、２８℃、毎分１容の運気及び２５０　ｐｐｍの攪
拌において１２０〜１４４時間実施された。ＢＭＹ−４
０８００の力価は、１２０〜１４４時間において、ＨＰ
ＬＣ分析により１４５〜１５５μｆ／ｍｌに達した。

例２ 単離及び精製 Ａ、粗抽出液Ｈの製造 例１の一般操作によって得られた粕醗酵ブロス（２０Ｌ
）を、ポリエチレンスピゴットを備えた４０Ｌのポリエ
チレンパケット（直径３７ｚ、高さ５０６ｎ）中酢酸エ
チル２０Ｌと混合した。この混合物を、空気駆動攪拌機
を用いて中程度の速度で１時間攪拌した。この混合物に
、均質になる棟でデイカライド（珪藻土）約２Ｌ（０，
８ｋｑ）を添加した。

この混合物を、１２号クりルス・ブヒナー１斗（内径３
３σ、外径３５Ｉ：ｒｎ、深さ１２ｃｒｎ）をイＣ用す
る真空ｒ鍋によってｆＩ過した。酢酸エチル層を分離し
、回転式エバポレーター中真空蒸発乾固して残留物Ｈ３
２，４りを得た。

Ｂ、残留物Ｈの真空液体クロマトグラフィーコンテスの
フリットガラスブヒナーｒ斗（多孔度Ｍ。

１５０−）にシリカゲルＨ４８ｆ（メルク）（乾燥）を
詰め、このベツドをヘキサン−酢酸エチル（１：１）で
平衡化させた。残留物Ｈ４３２，４９を酢酸エチル−メ
タノール（９：１）約３０−に溶解し、この溶液にシリ
カゲルＨ５Ｆを添加した。この混合物を回転式エバポレ
ーター中真空蒸発乾固した。残留物をヘキサン−酢酸エ
チル（１：１）（２００ｍ）中に取り、この溶液をカラ
ム上に注ぎ、ハウス真空を吸引乾燥状態まで適用した。

次の溶媒、酢酸エチル、クロロホルム、クロロホルム中
エチメタノール及び最後にクロロホルム中２チメタノー
ル各２００ｍ１を順次使用した。短波長ＵＶ光及び硫酸
第二セリウム噴霧試薬を使用しＴＬＣによってクロマト
グラムをモニターした。所望の物質は、クロロホルム及
びクロロホルム中１％及び２％メタノールによって溶離
された、これらの両分をプール］（６００ｔｇ）、回転
式エバポレーター上演゛空蒸発乾燥して残留物Ｉ（粗Ｂ
ＭＹ−４０８００）２．７９を得た。

Ｃ，％留物■のシリカゲルカラムクロマトグラフィーテ
フロンストップコックを備えたエース・ガラスカラム（
外径４．５ｍＸ４３ｍ）Ｋクロロホルム中つエールム・
ユニバーサルシリカゲル（６３〜２００）１５（ｌを詰
ぬ六つ残留物Ｔ’にクロロホルム（約１０ｆｎりに溶解
し、ノセスツールピヘットを用いてカラムに適用しｆｒ
、ｏクロロホルム（８７５ｍ／）、次いでクロロホルム
中１チメタノール（１０００ｄ）及びクロロホルム９２
％メタノール（全部で１７５０ｍ／）を用いて溶離を開
始した。このクロマトグラムに短波長ＵＶ光及び硫酸第
二セリウム噴霧試薬を用いＴＬＣが続いたっＢＭＹ−４
０８００（クロロホルム中２チメタノールによって溶離
された）ｆ含有する両分を合しく５００ｍ／）、回転式
エバポレーター中真空蒸発乾固して実質的に純粋なりＭ
Ｙ−４０８００，２，４９を得た一Ｄ２　ニコチンアミ
ド精製 上の工程ＣからのＢＭＹ−４０８００は、鈍黄色の無定
形固体として得られる、このものは、次の操作によって
白色結晶性水和物に変換することができる。

工０例２Ｃの操作に従って得られたＢＭＹ−４０８００
を３５チ暫〜ニコチンアミド−水３０〇−中２０〜３０
℃において２〜４時間はげしくスラリにする。

２　連続した迅速スラリ化の下にスラリの温度を４５〜
５０℃に上昇させる。１４５〜５０℃において１〜１．
５時間攪拌する。

３、熱源を除き、迅速に環境下に１６〜２４時間攪拌す
るっ４、　　濾過によって結晶を集める（４ｍ、微細焼
結ガラスＰ斗）っ ５、真空下結晶をつき固めて割れ又はき裂を除去するっ
６、結晶性の割れのないフイ〃ターケーキを水１０−づ
つと８回洗浄してニコチンアミドの完全な除去を確実に
する。

各水沈液は、割れのないフィルターケーキ上にあるべき
である。結晶をつき固めて割れ又はき裂を除去する。

７、すべての遊離の水が除去されたように見えるまでフ
ィルターケーキ上真空を保持する。

８、五酸化燐の存在下２５〜４０℃において１６〜２４
時間結晶を真空乾燥する。生成物の予期される収量＝０
．７〜０．８ｆ、工程Ｃのものより力価（ＨＰＬＣＫよ
り測定）１５〜２０チの上昇。材料は結晶性水和物と思
われる。

【図面の簡単な説明】

図１は、ＢＭＹ−４０８００の赤外吸収スペクトル（Ｋ
Ｂｒはレット）を表わす。 図２け、ＣＤＣｌ３中ＢＭＹ−４０Ｆ１００の３６０Ｍ
Ｈｚプロトン磁気共鳴スズクトルを表わす。 図３Ｆｉ、ＣＤＣｌ３中ＢＭＹ−４０８００の９０．５
ＭＨｚ１３Ｃ磁気共鳴スは磁気共鳴衣わす。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の特性を有する化合物ＲＭＹ−４０８００： （ａ）ほぼ次の百分率で炭素、水素、酸素、並びに窒素
   の元素を含有する白色結晶性固体：Ｃ、５８．１６；Ｈ
   、６．９４；Ｎ、１２．８４；並びにＯ（差による）２
   ２．２６；（ｂ）実質的に図１に示されるとおりの赤外
   吸収スペクトル（ＫＢｒ）； （ｃ）分子式Ｃ＿７＿２Ｈ＿１＿０＿４Ｎ＿１＿４Ｏ＿
   ２＿０； （ｄ）実質的に図２に示されるとおりのＣＤＣｌ＿３中
   ３６０ＭＨｚプロトン磁気共鳴スペクトル； （ｅ）実質的に図３に示されるとおりのＣＤＣｌ＿３中
   ９０．５ＭＨｚ＾１＾３Ｃ磁気共鳴スペクトル； （ｆ）０．０１５３８ｇ／ｌの濃度でメタノールに溶解
   する時紫外吸収極大及び吸光度２８６ｎｍ（ａ＝０．２
   ８９１）を示す； （ｇ）ＦＡＢ質量スペクトロメトリーにより見掛けの分
   子量およそ１４８４； （ｈ）溶媒系クロロホルム：メタノール（９５：５ｖ／
   ｖ）を用いてシリカゲル薄層クロマトグラフィー中Ｒｆ
   値０．３５を示す； （ｉ）Ｃ＿１＿８逆相シリカゲルカラム及び溶媒系アセ
   トニトリル：テトラヒドロフラン：水（４：１：５ｖ／
   ｖ）を用いて高速液体クロマトグラフィー滞留時間１５
   分及び利用率Ｋ′＝８．９を示す；並びに （ｊ）マウスのＰ３８８白血病の成長を抑制するのに有
   効である。 ２、液内通気条件下同化性炭素及び窒素源を含有する水
   性栄養培地中￥ストレプトマイセス￥・￥ヒグロスコピ
   クス￥のＢＭＹ−４０８００生産性菌株を、該培地中該
   菌により実質的な量のＢＭＹ−４０８００が生産される
   まで培養し、次に培地からＢＭＹ−４０８００を回収す
   ることを特徴とする請求項１に定義されたＢＭＹ−４０
   ８００の製法。 ３、生産性菌が￥ストレプトマイセス￥・￥ヒグロスコ
   ピクス￥ＡＴＣＣ　５３６５３の同定特性を有する微生
   物及びそのＢＭＹ−４０８００生産性変異株又は変異体
   から選択される請求項２記載の方法。 ４、請求項１に定義されたＢＭＹ−４０８００を有効成
   分とする抗腫瘍剤。 ５、同化性炭素及び窒素源を含有する水性栄養培地中通
   気培養すると回収可能な量で請求項１に定義された化合
   物ＢＭＹ−４０８００を生産することができる微生物￥
   ストレプトマイセス￥・￥ヒグロスコピクス￥ＡＴＣＣ
   　５３６５３の生物学的に純粋な培養物。