JPS6210048A - 新規生理活性物質ｍｈ４３５ - Google Patents
新規生理活性物質ｍｈ４３５Info
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- JPS6210048A JPS6210048A JP60147039A JP14703985A JPS6210048A JP S6210048 A JPS6210048 A JP S6210048A JP 60147039 A JP60147039 A JP 60147039A JP 14703985 A JP14703985 A JP 14703985A JP S6210048 A JPS6210048 A JP S6210048A
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
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- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は新規物質に関し、より具体的には抗腫瘍活性並
びに抗菌活性を有する新規生理活性物質ＭＨ４３５に関
する。
びに抗菌活性を有する新規生理活性物質ＭＨ４３５に関
する。
抗腫瘍性物質並びに抗菌性物質に関しては既に多数のも
のが医薬として実用化されているが、これらは薬効およ
び（または）副作用の点で必らずしも満足できるもので
はなく、より優れた新規な抗腫瘍性物質並びに抗菌性物
質に関しては不断の希求があるのが現状である。
のが医薬として実用化されているが、これらは薬効およ
び（または）副作用の点で必らずしも満足できるもので
はなく、より優れた新規な抗腫瘍性物質並びに抗菌性物
質に関しては不断の希求があるのが現状である。
ビショップ（Ｂｉｓｈｏｐ、 Ｊ、Ｈ，）は、ある種の
ガン遺伝子産物がチロシン特異的プロティンキナーゼ活
性を有することを報告している〔アンニュアル・レビュ
ー・オブ・バイオケミストリー（Ａ。
ガン遺伝子産物がチロシン特異的プロティンキナーゼ活
性を有することを報告している〔アンニュアル・レビュ
ー・オブ・バイオケミストリー（Ａ。
Ｒｅｖ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ５２３０１〜３５４
（１９８３） ） ） 。またコーエン（ｃｏｈｅｎ、
ｓ、 ）らは、チロシン特異的プロティンキナーゼが
多くの細胞増殖因子による細胞増殖の過程にシグナル物
質として関与していると報告している（ジャーナル・オ
ブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｗ ） ２５７１５２３１５３１（１９８２）
）。本発明者らは、これらの事実に着目して、チロシン
特異的プロティンキナーゼ活性の阻害物質を広く自然界
からスクリーニングし、これらが抗ｌｔ！瘍活性並びに
抗菌活性を有することを見い出して、本発明を完成した
。
（１９８３） ） ） 。またコーエン（ｃｏｈｅｎ、
ｓ、 ）らは、チロシン特異的プロティンキナーゼが
多くの細胞増殖因子による細胞増殖の過程にシグナル物
質として関与していると報告している（ジャーナル・オ
ブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｗ ） ２５７１５２３１５３１（１９８２）
）。本発明者らは、これらの事実に着目して、チロシン
特異的プロティンキナーゼ活性の阻害物質を広く自然界
からスクリーニングし、これらが抗ｌｔ！瘍活性並びに
抗菌活性を有することを見い出して、本発明を完成した
。
発明の概要
本発明による新規生理活性物質Ｍ Ｉ−１４３５は、次
式（Ｉ）で示されるものである。
式（Ｉ）で示されるものである。
式中Ｒは、次のＡ又はＢのいずれかを示す。
Ａ ニーＣＨ＝ＣＨ−ＮＨＣＨＯ
Ｂ ニーＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ１−１ｃＨＯ１） 化学構
造 本発明化合物のＭ Ｉ−１４３５は、上記式（Ｉ）で示
される化学構造を有する。
造 本発明化合物のＭ Ｉ−１４３５は、上記式（Ｉ）で示
される化学構造を有する。
２） 理化学的性質
ＭＨ４３５の製造
１ ） 概 要
ＭＨ４３５は現在のところ微生物の培養（ＭＨ４３５−
Ａ）と培養生産物の合成化学的修飾（ＭＨ４３５−８）
によってのみしか得られていないが、その他の方法、例
えば全合成化学的方法により製造することもできよう。
Ａ）と培養生産物の合成化学的修飾（ＭＨ４３５−８）
によってのみしか得られていないが、その他の方法、例
えば全合成化学的方法により製造することもできよう。
微生物の培養による場合の菌株としては、ストレプトミ
セス属に属するＭ Ｈ４３５−Ａ生産能を有するものが
使用される。具体的には、本発明者らの分離したＭＨ４
３５−ｈＦａ株がＭ Ｈ４３５−Ａを生産することが本
発明者らによって明らかにされているが、その他の菌株
については抗生物質生産菌単離の常法によって適当なも
のを自然界より分離することが可能である。また、Ｍ
Ｈ４３５−ｈＦａ株を含めてＭＨ４３５−Ａ生産菌を変
異処理（放射線処理等）に付して、Ｍ Ｈ４３５−Ａ生
産能を高める余地も残されている。
セス属に属するＭ Ｈ４３５−Ａ生産能を有するものが
使用される。具体的には、本発明者らの分離したＭＨ４
３５−ｈＦａ株がＭ Ｈ４３５−Ａを生産することが本
発明者らによって明らかにされているが、その他の菌株
については抗生物質生産菌単離の常法によって適当なも
のを自然界より分離することが可能である。また、Ｍ
Ｈ４３５−ｈＦａ株を含めてＭＨ４３５−Ａ生産菌を変
異処理（放射線処理等）に付して、Ｍ Ｈ４３５−Ａ生
産能を高める余地も残されている。
さらにまた、この微生物のＭＨ４３５−Ａ産生に関する
遺伝情報を担う遺伝子ＤＮＡを形質転換、細胞融合その
他の遺伝子操作的手法によってＭＨ−４３５Ａ生産性の
微生物を誘導することもできる。
遺伝情報を担う遺伝子ＤＮＡを形質転換、細胞融合その
他の遺伝子操作的手法によってＭＨ−４３５Ａ生産性の
微生物を誘導することもできる。
２） ＭＨ４３５−ｈＦ３株
ＭＨ４３５−Ａ生産能を有するストレプトミセス属の菌
株として本発明者らの見出しているＭＨ４３５−ｈＦ３
株は、下記の内容のものである。
株として本発明者らの見出しているＭＨ４３５−ｈＦ３
株は、下記の内容のものである。
Ａ、 由来および寄託番号
ＭＨ４３５−ｈＦａ株は昭和５９年１１月に微生物化学
研究所において構内の土壌より分離された放線菌であっ
て、昭和６０年５月２１日に工業技術院微生物工業技術
研究所に寄託されて、「微工研菌寄第８２４６号」の番
号を得ている。
研究所において構内の土壌より分離された放線菌であっ
て、昭和６０年５月２１日に工業技術院微生物工業技術
研究所に寄託されて、「微工研菌寄第８２４６号」の番
号を得ている。
Ｂ、 ＭＨ４３５−ｈＦ３株の菌学的性状（１）
形 態 ＭＨ４３５−ｈＦ３株は、顕微鏡下で、分枝した基中菌
糸よりらせん形成を有する気菌糸を伸長し、輪生技はみ
とめられない。成熟した胞子鎖は、１０個以上の胞子の
連鎖がみとめられ、胞子の大きさは０．６〜０．８Ｘ１
．Ｏ〜１．２ミクロン位である。なお、胞子の表面には
比較的長いとげ状の突起を有する。
形 態 ＭＨ４３５−ｈＦ３株は、顕微鏡下で、分枝した基中菌
糸よりらせん形成を有する気菌糸を伸長し、輪生技はみ
とめられない。成熟した胞子鎖は、１０個以上の胞子の
連鎖がみとめられ、胞子の大きさは０．６〜０．８Ｘ１
．Ｏ〜１．２ミクロン位である。なお、胞子の表面には
比較的長いとげ状の突起を有する。
（２） 各種の培地における生育状態
色の記載について〔〕内に示す標準は、コンテイナー・
コーポレーション・オブ・アメリカのカラー◆ハーモニ
イ・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ ｏｆ’ ＡｍｅｒｉＣａのＣｏ１ｏｒ ｈａｒ
ｍｏｎｙ ｍａｎｕａｌ）を用いた。
コーポレーション・オブ・アメリカのカラー◆ハーモニ
イ・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ ｏｆ’ ＡｍｅｒｉＣａのＣｏ１ｏｒ ｈａｒ
ｍｏｎｙ ｍａｎｕａｌ）を用いた。
（イ） シュクロース硝酸塩寒天培地
（２７℃培養）
無色の発育上に、黄茶（２ｎｉ、 Ｍｕｓｔａｒｄ Ｂ
ｒｏｗｎ ）〜茶灰（２１ｉ Ｃｏｖｅｒｔ Ｂｒｏｗ
ｎ ）の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられない
。
ｒｏｗｎ ）〜茶灰（２１ｉ Ｃｏｖｅｒｔ Ｂｒｏｗ
ｎ ）の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられない
。
（ロ） グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培
養） うす黄の発育上に、明るいオリーブ灰〜オリーブ灰（１
１／２ｉ（］ 、０ｌｉｖｅ Ｇｒａｙ 〜１１／２１
ｉ Ｌｔ ０ｌｉｖｅＤｒａｂ 〜２ ＋ｉ ｃｏｖｅ
ｒｔ Ｂｒ０Ｗｎ ）の気菌糸を着生し、溶解性色素は
みとめられない。
養） うす黄の発育上に、明るいオリーブ灰〜オリーブ灰（１
１／２ｉ（］ 、０ｌｉｖｅ Ｇｒａｙ 〜１１／２１
ｉ Ｌｔ ０ｌｉｖｅＤｒａｂ 〜２ ＋ｉ ｃｏｖｅ
ｒｔ Ｂｒ０Ｗｎ ）の気菌糸を着生し、溶解性色素は
みとめられない。
（ハ） グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−
培地５．２７℃培養） うす黄茶（２１ｅ１Ｈｕｓｔａｒｄ 〜３ ＨｌＧｏｌ
ｄｅｎＢｒＯＷｎ ）の発育上に、明るい灰〜明るいオ
リーブ灰〔１ｒＯ１Ｇｒｉｃｏｅ〜１１／２ｇｅ 、
Ｌｔ ０ｌｉｖｅ Ｇｒａｙ ）の気菌糸を着生する。
培地５．２７℃培養） うす黄茶（２１ｅ１Ｈｕｓｔａｒｄ 〜３ ＨｌＧｏｌ
ｄｅｎＢｒＯＷｎ ）の発育上に、明るい灰〜明るいオ
リーブ灰〔１ｒＯ１Ｇｒｉｃｏｅ〜１１／２ｇｅ 、
Ｌｔ ０ｌｉｖｅ Ｇｒａｙ ）の気菌糸を着生する。
溶解性色素は、黄茶をおびる。
（ニ） スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４．
２７℃培養） 無色の発育上に、灰味オリーブ（２ｎｉ。
２７℃培養） 無色の発育上に、灰味オリーブ（２ｎｉ。
Ｍｕｓｔａｒｄ Ｂｒｏｗｎ ）の気菌糸を着生する。
溶解性色素はわずかに茶色味をおびる程度である。
（ボ） チロシン寒天培地（Ｉ Ｓ Ｐ−培地７．２７
℃培養） うす黄茶（２ｏｃ、 Ｂａｍｂｏｏ 〜２ Ｉｅ、 Ｍ
ｕｓｔａｒｄ ） 〜黄茶（３ｎｇｌＹｅｌｌｏｗ Ｍ
ａｐｌｅ）の発育上に、余白〜明るいオリーブ灰（１ａ
ｅ、 Ｃ１ｔｒｏｎ Ｇｒａｙ 〜１１／２ｇｅ １Ｌ
ｔ ０１ｉｖｅ Ｇｒａｙ 〜１１／２ｉ（Ｊ 、 ０
１ｉｖｅＧｒａｙ）の気菌糸を着生する。溶解性色素は
、黄茶をおびる。
℃培養） うす黄茶（２ｏｃ、 Ｂａｍｂｏｏ 〜２ Ｉｅ、 Ｍ
ｕｓｔａｒｄ ） 〜黄茶（３ｎｇｌＹｅｌｌｏｗ Ｍ
ａｐｌｅ）の発育上に、余白〜明るいオリーブ灰（１ａ
ｅ、 Ｃ１ｔｒｏｎ Ｇｒａｙ 〜１１／２ｇｅ １Ｌ
ｔ ０１ｉｖｅ Ｇｒａｙ 〜１１／２ｉ（Ｊ 、 ０
１ｉｖｅＧｒａｙ）の気菌糸を着生する。溶解性色素は
、黄茶をおびる。
（へ） 栄養寒天培地（２７℃培養）
発育はうす黄茶（２ｇｃ、 Ｂａｍｂｏｏ） 、気菌糸
は着生せず、溶解性色素もみとめられない。
は着生せず、溶解性色素もみとめられない。
（ト） イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２．
２７℃培養） うす黄茶（３Ｉｅ、 Ｃｉｎｎａｍｏｎ 〜３ ｐｃ＋
、ＧＯＩｄｅｎＢｒＯＷｎ ）の発育上に、明るいオリ
ーブ灰（１１／２１ｇ、Ｇｏｌｄｅｎ ０１ｉｖｅ）
〜オリーブ灰（１１／２ｎｉ 。
２７℃培養） うす黄茶（３Ｉｅ、 Ｃｉｎｎａｍｏｎ 〜３ ｐｃ＋
、ＧＯＩｄｅｎＢｒＯＷｎ ）の発育上に、明るいオリ
ーブ灰（１１／２１ｇ、Ｇｏｌｄｅｎ ０１ｉｖｅ）
〜オリーブ灰（１１／２ｎｉ 。
０１ｉＶｅ ）の気菌糸を着生し、溶解性色素はわずか
に茶色味をおびる程度である。
に茶色味をおびる程度である。
（チ） オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３．２７
℃培養） 無色からうす黄の発育上に、白〜オリーブ灰の気菌糸を
着生し、溶解性色素はわずかに茶色味をおびる程度であ
る。
℃培養） 無色からうす黄の発育上に、白〜オリーブ灰の気菌糸を
着生し、溶解性色素はわずかに茶色味をおびる程度であ
る。
（す） グリセリン・硝酸塩寒天培地
（２７℃培養）
発育はうす黄（２ｇｃ、 Ｂａｍｂｏｏ）。気菌糸は着
生しないか、あるいは白の気菌糸をわずかに着生する。
生しないか、あるいは白の気菌糸をわずかに着生する。
溶解性色素は、わずかに茶色味をおびる。
（ヌ） スターチ寒天培地（２７℃培養）無色の発育上
に黄茶の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられない
。
に黄茶の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられない
。
（ル） リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）発育はう
す黄茶（２ａｅ、 Ｂａｍｂｏｏ）。気菌糸は着生しな
いか、あるいはごくわずかな明るいオリーブ灰の気菌糸
を着生し、溶解性色素はみとめられない。
す黄茶（２ａｅ、 Ｂａｍｂｏｏ）。気菌糸は着生しな
いか、あるいはごくわずかな明るいオリーブ灰の気菌糸
を着生し、溶解性色素はみとめられない。
（ヲ） セルロース（２７℃培養）
発育は無色。明るいオリーブ灰の気菌糸をごくわずかに
着生し、溶解性色素はみとめられない。
着生し、溶解性色素はみとめられない。
（ワ） ゼラチンの穿刺培養
単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、発育は無色〜う
す黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素はみとめられない
。グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）
では、発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も
みとめられない。
す黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素はみとめられない
。グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）
では、発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も
みとめられない。
（力） 脱脂牛乳（２７℃および３７℃培養）２７℃の
場合、うす黄の発育上にうつすらと白の気菌糸を着生し
、溶解性色素はみとめられない。
場合、うす黄の発育上にうつすらと白の気菌糸を着生し
、溶解性色素はみとめられない。
３７℃培養の時は、生育がやや悪く、発育はうす黄、気
菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめられない。
菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめられない。
（３） 生理的性質
（イ） 生育温度範囲
スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ〜培地４）を用い、
２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各
温度で試験の結果、５０℃を除いていずれの温度でも生
育するが、最適温度は３０℃付近と思われる。
２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各
温度で試験の結果、５０℃を除いていずれの温度でも生
育するが、最適温度は３０℃付近と思われる。
（ロ） ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン、２０℃
培養およびグルコース・ペプトン・ゼラチン、２７℃培
養） 単純ゼラチン培地においては、培養後４日目頃、またグ
ルコース・ペプトン・ゼラチン培地においては、培養後
３日目頃から液化がはじまる。その作用は、中等度〜強
い方である。
培養およびグルコース・ペプトン・ゼラチン、２７℃培
養） 単純ゼラチン培地においては、培養後４日目頃、またグ
ルコース・ペプトン・ゼラチン培地においては、培養後
３日目頃から液化がはじまる。その作用は、中等度〜強
い方である。
（ハ） スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培
地およびスターチ寒天培地） いずれの培地においても、みとめられない。
地およびスターチ寒天培地） いずれの培地においても、みとめられない。
（ニ） 脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、２７
℃および３７℃培養） ２７℃の場合は、凝固なしに培養後１０日目頃よりペプ
トン化がはじまり、その作用は中等度〜強い方である。
℃および３７℃培養） ２７℃の場合は、凝固なしに培養後１０日目頃よりペプ
トン化がはじまり、その作用は中等度〜強い方である。
なお、生育のやや悪い３７℃の時も、培養後１４日目頃
よりペプトン化がはじまるが、その作用は中等度〜弱い
方である。
よりペプトン化がはじまるが、その作用は中等度〜弱い
方である。
（ホ） メラニン様色素の生成（トリ１トン・イースト
・ブロス、ｌ５Ｐ−培地１：ペプトン・イースト・鉄寒
天、ｌ５Ｐ−培地６：チロシン寒天、ｌ５Ｐ−培地７、
いずれも２７℃培養） いずれの培地においても、みとめられない。
・ブロス、ｌ５Ｐ−培地１：ペプトン・イースト・鉄寒
天、ｌ５Ｐ−培地６：チロシン寒天、ｌ５Ｐ−培地７、
いずれも２７℃培養） いずれの培地においても、みとめられない。
（へ） 炭素源の利用性（ブリドハム・ゴトリーブ寒天
培地、ｌ５Ｐ−培地９．２７℃培養）グルコース、ラフ
ィノース、Ｄ−マンニトールを利用して発育し、Ｌ−ア
ラビノースはおそらく利用すると思われ、シュクロース
、ラムノースは利用しない。Ｄ−キシロース、Ｄ−７ラ
クトース、イノシトールの利用性については、利用する
か、否かはっきりしない。
培地、ｌ５Ｐ−培地９．２７℃培養）グルコース、ラフ
ィノース、Ｄ−マンニトールを利用して発育し、Ｌ−ア
ラビノースはおそらく利用すると思われ、シュクロース
、ラムノースは利用しない。Ｄ−キシロース、Ｄ−７ラ
クトース、イノシトールの利用性については、利用する
か、否かはっきりしない。
（ト） リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天、２７
℃培養） 培養後７日目頃から、発育周辺のリンゴ酸石灰を溶解す
る。その作用は、中等度乃至強い方である。
℃培養） 培養後７日目頃から、発育周辺のリンゴ酸石灰を溶解す
る。その作用は、中等度乃至強い方である。
（チ） 硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリ含有ペプ
トン水、ｌ５Ｐ−培地８．２７℃培養） くり返しの試験で陰性の場合と陽性の場合とがある。
トン水、ｌ５Ｐ−培地８．２７℃培養） くり返しの試験で陰性の場合と陽性の場合とがある。
以上の性状を要約すると、ＭＨ４３５−ｈＦａ株は、そ
の形態上胞子のうをみとめず、気菌糸はらせん形成を有
し、輪生技はみとめられない。また、胞子の表面は、と
げ状である。種々の培地で、発育は無色〜うす黄あるい
はうす黄茶、気菌糸は明るいオリーブ灰〜オリーブ灰、
あるいは黄茶を呈する。溶解性色素は、わずかに茶〜黄
茶なおびる。メラニン様色素の生成は陰性、また澱粉氷
解性はみとめられない。蛋白分解力は、中等度〜強い方
である。
の形態上胞子のうをみとめず、気菌糸はらせん形成を有
し、輪生技はみとめられない。また、胞子の表面は、と
げ状である。種々の培地で、発育は無色〜うす黄あるい
はうす黄茶、気菌糸は明るいオリーブ灰〜オリーブ灰、
あるいは黄茶を呈する。溶解性色素は、わずかに茶〜黄
茶なおびる。メラニン様色素の生成は陰性、また澱粉氷
解性はみとめられない。蛋白分解力は、中等度〜強い方
である。
なお、この菌株の全菌体中に含まれる２、６−ジアミノ
ピメリン酸はＬＬ−型であり、上記の性状と考えあわせ
ると、ＭＨ４３５−ｈＦａ株がストレプトミセス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属することは明らかである
。
ピメリン酸はＬＬ−型であり、上記の性状と考えあわせ
ると、ＭＨ４３５−ｈＦａ株がストレプトミセス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属することは明らかである
。
これらの性状より、ＭＨ４３５−ｈＦ３株に類似の既知
菌種を検索すると、次の３種があげられる。すなわち、
ストレプトミセス・ヴイリドスポルス（ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ＶｉｒｉｄＯ３ｌ）ＯｒＬＩＳ ） （文
献：インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマ
チック・バクテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏａｙ） ２２巻、３７１頁、１９７２
年（文献１）、英国特許第７１２．５４７号明細書く文
献２）〕スストアブ１〜ミセスヴイリドディアスタティ
クス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｉｄｏｄｉａｓｔ
ａｔｉｃｕｓ） （文献：同誌１９巻、５００頁、１９
６９年、同誌、３０巻、４０５頁、１９８０年〕および
ストレプトミセス・ミタカエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ ｍ１ｔａｋａｅｎｓｉｓ）（文献：ザ・ジセ
ーナル・オプ・アンチビオチフス（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）シリーズＡ１１
１巻、１４頁、１９５８年〕である。
菌種を検索すると、次の３種があげられる。すなわち、
ストレプトミセス・ヴイリドスポルス（ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ＶｉｒｉｄＯ３ｌ）ＯｒＬＩＳ ） （文
献：インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマ
チック・バクテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏａｙ） ２２巻、３７１頁、１９７２
年（文献１）、英国特許第７１２．５４７号明細書く文
献２）〕スストアブ１〜ミセスヴイリドディアスタティ
クス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｉｄｏｄｉａｓｔ
ａｔｉｃｕｓ） （文献：同誌１９巻、５００頁、１９
６９年、同誌、３０巻、４０５頁、１９８０年〕および
ストレプトミセス・ミタカエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ ｍ１ｔａｋａｅｎｓｉｓ）（文献：ザ・ジセ
ーナル・オプ・アンチビオチフス（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）シリーズＡ１１
１巻、１４頁、１９５８年〕である。
ストレプトミセス・ヴイリドディアスタティクス（ＩＭ
ＣＳ−０３５０（ＩＳＰ５２４９）およびストレプトミ
セス・ミタカエンシス（１ＭＣ８−０５０８（Ｎｌト（
Ｊ７７））は、極めて類似した菌種であるが、この２種
とＭＨ４３５−ｈＦａ株とは、比較試験により明らかに
区別された。すなわち、顕微鏡所見、特に気菌糸形成お
よびその先端のらせん形成、気菌糸の色、牛乳のペプト
ン化等に関してである。残るストレプトミセス・ヴイリ
ドスボルスとの比較試験結果は、下表に示す通りである
。
ＣＳ−０３５０（ＩＳＰ５２４９）およびストレプトミ
セス・ミタカエンシス（１ＭＣ８−０５０８（Ｎｌト（
Ｊ７７））は、極めて類似した菌種であるが、この２種
とＭＨ４３５−ｈＦａ株とは、比較試験により明らかに
区別された。すなわち、顕微鏡所見、特に気菌糸形成お
よびその先端のらせん形成、気菌糸の色、牛乳のペプト
ン化等に関してである。残るストレプトミセス・ヴイリ
ドスボルスとの比較試験結果は、下表に示す通りである
。
表から明らかなように、ＭＨ４３５−ｈＦａ株とストレ
プトミセス・ヴイリドスポルスとは、スターチの氷解性
、炭素源（ラフィノース及びラムノース）の利用性が異
なっている。また、文献記載によると、胞子の表面構造
に差異がみとめられる。しかし、これら２種の菌株の表
面構造を観察すると、ストレプトミセス・ヴイリドスボ
ルスの胞子表面の突起は、基部が太く、毛髪状よりや）
長いとげ状と表現した方が適当と考えられ、一方ＭＨ４
３５−ｈＦ３株もや）長いとげ状の突起を有し相違点と
は考えにくい。なお、上記以外の性状は両者でよく類似
しており、特に顕微鏡所見、気菌糸が明るいオリーブ灰
〜オリーブ灰を呈すること、および脱脂牛乳を凝固なし
にペプトン化する点で、一致している。
プトミセス・ヴイリドスポルスとは、スターチの氷解性
、炭素源（ラフィノース及びラムノース）の利用性が異
なっている。また、文献記載によると、胞子の表面構造
に差異がみとめられる。しかし、これら２種の菌株の表
面構造を観察すると、ストレプトミセス・ヴイリドスボ
ルスの胞子表面の突起は、基部が太く、毛髪状よりや）
長いとげ状と表現した方が適当と考えられ、一方ＭＨ４
３５−ｈＦ３株もや）長いとげ状の突起を有し相違点と
は考えにくい。なお、上記以外の性状は両者でよく類似
しており、特に顕微鏡所見、気菌糸が明るいオリーブ灰
〜オリーブ灰を呈すること、および脱脂牛乳を凝固なし
にペプトン化する点で、一致している。
以上のことから、ＭＨ４３５−ｈＦａ株は、ストレプト
ミセス・ヴイリドスボルス （５ｔｒｅｐｔ＋ｎｙｃｅｓ ｖｉｒｉｄｏｓｐｏｒｕ
ｓ）に最も類縁の種であるが、同種とは考えられない。
ミセス・ヴイリドスボルス （５ｔｒｅｐｔ＋ｎｙｃｅｓ ｖｉｒｉｄｏｓｐｏｒｕ
ｓ）に最も類縁の種であるが、同種とは考えられない。
そこでＭＨ４３５−ｈＦ３株を、ストレプトミセス・エ
スピー （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ３ｐ、 ） Ｍ
）ｌ ４３５− ｈ Ｆ ３とする。
スピー （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ３ｐ、 ） Ｍ
）ｌ ４３５− ｈ Ｆ ３とする。
３） 培養／ＭＨ４３５−Ａの生産
ＭＨ４３５−Ａは、ストレプトミセス属に属するＭ Ｈ
４３５−Ａ生産菌を適当な培地で好気的に培養し、培養
物から目的物を採取することによって製造することがで
きる。
４３５−Ａ生産菌を適当な培地で好気的に培養し、培養
物から目的物を採取することによって製造することがで
きる。
培地は、ＭＨ４３５−Ａ物質生産菌が利用しうる任意の
栄養源を含有するものであ−りうる。具体的には、たと
えば、炭素源としてグリセリン、グルコース、シュクロ
ース、マルトース、デキストリン、スターチ、油脂類な
どが使用でき、窒素源として大豆粉、綿実粕、肉エキス
、ペプトン、乾燥酵母、酵母エキスおよびコーンスチー
ブリカーなどの有機物並びにアンモニウム塩または硝酸
塩、たとえば、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウムおよ
び塩化アンモニウム等の無機物が使用できる。
栄養源を含有するものであ−りうる。具体的には、たと
えば、炭素源としてグリセリン、グルコース、シュクロ
ース、マルトース、デキストリン、スターチ、油脂類な
どが使用でき、窒素源として大豆粉、綿実粕、肉エキス
、ペプトン、乾燥酵母、酵母エキスおよびコーンスチー
ブリカーなどの有機物並びにアンモニウム塩または硝酸
塩、たとえば、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウムおよ
び塩化アンモニウム等の無機物が使用できる。
また、必要に応じて、食塩、塩化カリウム、りん酸塩、
重金属塩などの無ｔａ塩類を添加することができる。発
酵中の発泡を抑制するために、常法に従って適当な消泡
剤、たとえばシリコーン、大豆油等を適宜添加すること
もできる。
重金属塩などの無ｔａ塩類を添加することができる。発
酵中の発泡を抑制するために、常法に従って適当な消泡
剤、たとえばシリコーン、大豆油等を適宜添加すること
もできる。
培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培Ｎ＠度は２０〜３５℃が適当であるが、２５〜３
０℃が好ましい。この方法でＭＨ４３５−Ａ物質の生産
量は、振盪培養、通気撹拌培養共に２〜４日で最高に達
する。
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培Ｎ＠度は２０〜３５℃が適当であるが、２５〜３
０℃が好ましい。この方法でＭＨ４３５−Ａ物質の生産
量は、振盪培養、通気撹拌培養共に２〜４日で最高に達
する。
このようにして、ＭＨ４３５−Ａ物質の蓄積された培養
物が得られる。培養物中ではＭＨ４３５−Ａ物質はその
一部は菌体中にも存在するが、その大部分は培養上滑中
に存在する。
物が得られる。培養物中ではＭＨ４３５−Ａ物質はその
一部は菌体中にも存在するが、その大部分は培養上滑中
に存在する。
このような培養物からＭＨ４３５−Ａ物質を採取するに
は、合目的的な任意の方法が利用可能である。その一つ
の方法は、抽出の原理に基くものであって、具体的には
、たとえば、培養上滑中のＭＨ４３５−Ａ物質について
はこれを水不混和性のＭＨ４３５−Ａ物質用溶媒、たと
えば酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム、等で抽出
する方法あるいは菌体内のＭＨ４３５−Ａ物質について
はン濾過、遠心分離等で得た菌体集体を酢酸エチル、ク
ロロホルム、メタノール、エタノール、ブタノール、ア
セトン、メチルエチルケトン、などで処理して回収する
ことができる。菌体を分離せずに培養物をそのまま上記
抽出操作に付すこともできる。菌体を破壊してから抽出
に付すこともできる。
は、合目的的な任意の方法が利用可能である。その一つ
の方法は、抽出の原理に基くものであって、具体的には
、たとえば、培養上滑中のＭＨ４３５−Ａ物質について
はこれを水不混和性のＭＨ４３５−Ａ物質用溶媒、たと
えば酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム、等で抽出
する方法あるいは菌体内のＭＨ４３５−Ａ物質について
はン濾過、遠心分離等で得た菌体集体を酢酸エチル、ク
ロロホルム、メタノール、エタノール、ブタノール、ア
セトン、メチルエチルケトン、などで処理して回収する
ことができる。菌体を分離せずに培養物をそのまま上記
抽出操作に付すこともできる。菌体を破壊してから抽出
に付すこともできる。
向流分配法も抽出の範哨に入れることができる。
培養物からＭＨ４３５−Ａ物質を採取する他の方法の一
つは、吸着の原理に基くものであって、既に液状となっ
ているＭＨ４３５−Ａ物質含有物、たとえば培養ン戸液
あるいは上記のようにして抽出操作を行なうことによっ
て得られる抽出液を対照として、適当な吸着剤、たとえ
ば活性炭、アルミナ、シリカゲル、［ダイヤイオンＨＰ
２０Ｊ （三菱化成製）等、を用いたカラムクロマト
グラフィー、液体クロマトグラフィーその他によって目
的ＭＨ４３５−Ａ物質を吸着させ、その後溶離させるこ
とによって、ＭＨ４３５−Ａ物質を得ることができる。
つは、吸着の原理に基くものであって、既に液状となっ
ているＭＨ４３５−Ａ物質含有物、たとえば培養ン戸液
あるいは上記のようにして抽出操作を行なうことによっ
て得られる抽出液を対照として、適当な吸着剤、たとえ
ば活性炭、アルミナ、シリカゲル、［ダイヤイオンＨＰ
２０Ｊ （三菱化成製）等、を用いたカラムクロマト
グラフィー、液体クロマトグラフィーその他によって目
的ＭＨ４３５−Ａ物質を吸着させ、その後溶離させるこ
とによって、ＭＨ４３５−Ａ物質を得ることができる。
このようにして得られたＭＨ４３５−Ａ物質の溶液を減
圧濃縮乾固すればＭＨ４３５−Ａ物質の粗標本品が白色
粉末として得られる。
圧濃縮乾固すればＭＨ４３５−Ａ物質の粗標本品が白色
粉末として得られる。
こ°のようにして得られるＭＨ４３５−Ａ物質の粗標品
をさらに精製するためには、上記抽出法および吸着法を
必要に応じて組合せて必要回数実施し、必要に応じて再
結品を行なえばよい。たとえば、シリカゲル、［セファ
デックスＬＨ２０Ｊ、「ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ （
三菱化成製）などの吸着剤や、ゲル濾過剤を用いたカラ
ムクロマトグラフィー法、適当な溶媒を用いた液体りＯ
マドグラフィー、向流分配法および薄層クロマトグラフ
ィー法等を組合せて実施することができる。具体的には
、たとえば、ＭＨ４３５−Ａ物質の粗粉末を少量のクロ
ロホルムに溶解し、シリカゲルカラムを用いて適当な溶
媒で展開すると各有効成分が分かれて溶出し、目的の活
性区分をまとめて減圧濃縮後、更に薄層クロマトグラフ
ィーで目的成分をかきとることにより、はぼ単一物質と
して得ることができる。また、更に純化するためには、
高速液体クロマトグラフィーや、適当な溶媒からの晶析
により結晶として得る方法を用いることができる。
をさらに精製するためには、上記抽出法および吸着法を
必要に応じて組合せて必要回数実施し、必要に応じて再
結品を行なえばよい。たとえば、シリカゲル、［セファ
デックスＬＨ２０Ｊ、「ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ （
三菱化成製）などの吸着剤や、ゲル濾過剤を用いたカラ
ムクロマトグラフィー法、適当な溶媒を用いた液体りＯ
マドグラフィー、向流分配法および薄層クロマトグラフ
ィー法等を組合せて実施することができる。具体的には
、たとえば、ＭＨ４３５−Ａ物質の粗粉末を少量のクロ
ロホルムに溶解し、シリカゲルカラムを用いて適当な溶
媒で展開すると各有効成分が分かれて溶出し、目的の活
性区分をまとめて減圧濃縮後、更に薄層クロマトグラフ
ィーで目的成分をかきとることにより、はぼ単一物質と
して得ることができる。また、更に純化するためには、
高速液体クロマトグラフィーや、適当な溶媒からの晶析
により結晶として得る方法を用いることができる。
４） ＭＨ４３５−Ａの合成化学的修飾／ＭＨ４３５
−８の製造 本発明のＭＨ４３５−８は、ＭＨ４３５−Ａに触媒の共
存下で水素を付加させることにより製造することができ
る。この水素付加反応は、有機合成化学の分野で用いら
れている合目的的な任意の方法、例えばＭＨ４３５−Ａ
をメタノールに溶解し、酸化白金を添加した後、水素と
反応させるこ−とにより、実施することができる。この
ようにして得られたＭＨ４３５−Ｂを単離・精製するに
は、前記のＭＨ４３５−Ａに準じて、例えばシリカゲル
等を用いるクロマトグラフィーにより単離することがで
きる。
−８の製造 本発明のＭＨ４３５−８は、ＭＨ４３５−Ａに触媒の共
存下で水素を付加させることにより製造することができ
る。この水素付加反応は、有機合成化学の分野で用いら
れている合目的的な任意の方法、例えばＭＨ４３５−Ａ
をメタノールに溶解し、酸化白金を添加した後、水素と
反応させるこ−とにより、実施することができる。この
ようにして得られたＭＨ４３５−Ｂを単離・精製するに
は、前記のＭＨ４３５−Ａに準じて、例えばシリカゲル
等を用いるクロマトグラフィーにより単離することがで
きる。
なお、前記の培養工程並びに精製工程中、Ｍ４５３の追
跡は、次の方法でチロシン特異的プロティンキナーゼ活
性を測定してその阻害活性に基づいて行ったものである
。
跡は、次の方法でチロシン特異的プロティンキナーゼ活
性を測定してその阻害活性に基づいて行ったものである
。
チロシン特異的プロティンキナーゼ活性は、エビダーマ
ル・グロース・ファクター受容体のもつチロシン特異的
プロティンキナーゼ活性としてヒト上成性カルシノーマ
細ＩｙｉｌＡ−４３１の膜画分を用い、カーペンタ−等
（Ｇ、 Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ）〔（ザ・ジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｔｈ
ｅ Ｊａｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ ） 、２５４ ４８７４〜４８９１
（１９７９） ）記載の酵素活性測定法を改良して行っ
た。すなわら、ＩｍＭ ＭｎＣｌ １１００ｎエ
ビダーマル・２・ グロース・ファクター、４０ｐｇに Ａ−４３１膜両分
、７．５μＱアルブミン、３μｑヒストン及びＭＨ４３
５−ＡもしくはＭ Ｈ４３５−Ｂを含む５０μｍの２０
ｍＭへベス緩衝液（ｐＨ７，４）をＯ℃／１０分間でブ
レインキュベーション後、〔ガンマ−３２Ｐ〕アデノシ
ン三リン酸（０，２５ｍＣｉｌｏ、１２５ｍ１）を１０
μｌ添加し、０℃で３０分間反応を行った。５０μｍを
サンプリングし、ワットマンＮ ｏ ３ Ｍ Ｍ 濾紙
に吸着させ、氷冷したＴＣＡ中に浸漬し、３０分間放置
後、濾紙をとりだし、ＴＣＡ、エタノール、エーテルを
洗浄し、ン戸紙に付着した３２ｐのカウントを測定した
（ａ）。同時に、検体だけを除いて同様に反応・処理し
た時のカウント（ｂ）、またそれぞれ膜画分を除いた測
定値を（ａ′）および（ｂ′ ）として、エビダーマル
ール・グロース・ファクター・レセプターキナーゼの阻
害率を式（（ａ−ａ’）／ （ｂ−ｂ’ ））Ｘｉ ０
０により計算した。
ル・グロース・ファクター受容体のもつチロシン特異的
プロティンキナーゼ活性としてヒト上成性カルシノーマ
細ＩｙｉｌＡ−４３１の膜画分を用い、カーペンタ−等
（Ｇ、 Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ）〔（ザ・ジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｔｈ
ｅ Ｊａｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ ） 、２５４ ４８７４〜４８９１
（１９７９） ）記載の酵素活性測定法を改良して行っ
た。すなわら、ＩｍＭ ＭｎＣｌ １１００ｎエ
ビダーマル・２・ グロース・ファクター、４０ｐｇに Ａ−４３１膜両分
、７．５μＱアルブミン、３μｑヒストン及びＭＨ４３
５−ＡもしくはＭ Ｈ４３５−Ｂを含む５０μｍの２０
ｍＭへベス緩衝液（ｐＨ７，４）をＯ℃／１０分間でブ
レインキュベーション後、〔ガンマ−３２Ｐ〕アデノシ
ン三リン酸（０，２５ｍＣｉｌｏ、１２５ｍ１）を１０
μｌ添加し、０℃で３０分間反応を行った。５０μｍを
サンプリングし、ワットマンＮ ｏ ３ Ｍ Ｍ 濾紙
に吸着させ、氷冷したＴＣＡ中に浸漬し、３０分間放置
後、濾紙をとりだし、ＴＣＡ、エタノール、エーテルを
洗浄し、ン戸紙に付着した３２ｐのカウントを測定した
（ａ）。同時に、検体だけを除いて同様に反応・処理し
た時のカウント（ｂ）、またそれぞれ膜画分を除いた測
定値を（ａ′）および（ｂ′ ）として、エビダーマル
ール・グロース・ファクター・レセプターキナーゼの阻
害率を式（（ａ−ａ’）／ （ｂ−ｂ’ ））Ｘｉ ０
０により計算した。
ＭＨ４３５の生理活性
本発明のＭＨ４３５は、次に示すように抗腫瘍活性並び
に抗菌活性を有しており、医薬として有用な化合物であ
る。
に抗菌活性を有しており、医薬として有用な化合物であ
る。
１） チロシン特異的ブチインキナーゼの阻害活性
前記の測定法に求めたＭＨ４３５−ＡおよびＭｌ−１４
３５−Ｂの５０％阻害濃度は、それぞれ０．５５μｇ／
ＩＩＩおよび６．０μ９／ｍ１１’あった。
３５−Ｂの５０％阻害濃度は、それぞれ０．５５μｇ／
ＩＩＩおよび６．０μ９／ｍ１１’あった。
２） 培養ガン細胞に対する作用
本発明によるＭ Ｈ４３５−△物質は、Ｌ１２１０白血
病細胞、１ＭＣカルシノーマ細胞、Ｋｉ−ＮＲＫ、ｔｓ
５ｒｃ−ＮＲＫ、Ａ−４３１１１１胞の培養細胞の
増殖を非常に低濃麿で阻なおＩＣ５ｏは、゛多細胞をデ
ィシュにまき（３〜５ Ｘ １０’ ｃｅｌｌｓ ／ｄ
ｉｓｈ） 、１ 日培養（３７℃、ＣＯ２濃度５％）後
、ＭＨ４３５−Ａを添加し、さらに同条件で３日間培養
後、細胞数を計数することにより測定した。
病細胞、１ＭＣカルシノーマ細胞、Ｋｉ−ＮＲＫ、ｔｓ
５ｒｃ−ＮＲＫ、Ａ−４３１１１１胞の培養細胞の
増殖を非常に低濃麿で阻なおＩＣ５ｏは、゛多細胞をデ
ィシュにまき（３〜５ Ｘ １０’ ｃｅｌｌｓ ／ｄ
ｉｓｈ） 、１ 日培養（３７℃、ＣＯ２濃度５％）後
、ＭＨ４３５−Ａを添加し、さらに同条件で３日間培養
後、細胞数を計数することにより測定した。
３） 急性毒性（Ｌ Ｄ ｓｏ＞
本発明のＭＨ４３５−Ａ物質のマウス腹腔１回投与によ
るＬＤｓｏ値は、２００１ｎ９７に９以上であった。
るＬＤｓｏ値は、２００１ｎ９７に９以上であった。
４） 抗菌活性
ミューラーヒントン培地を用いた寒天希釈法による各種
細菌に対する最低発育阻止濃度（ＭＩＣ）を次表に示す
。
細菌に対する最低発育阻止濃度（ＭＩＣ）を次表に示す
。
実 験 例
実施例１
ＭＨ４３５−ｈＦ３Ａ生産菌、Ｍ Ｈ４３５−ｈＦ３株
の斜面培養物から一白菌耳吊をあらかじめ１２０℃ ２
０分間滅菌した培地（５００ｍｌの三角フラスコに１１
０ｍ１ずつ分注した。グリセロール３％、魚粉２％、炭
酸カルシウム０．２％を含むｐＨ７，４の培地）に接種
した。２７℃／毎分１８０回転で好気的に振どう培養し
た。経時的にＭ ｌ−１４３５−Ａ産生量を培養液の抗
エピダーマル・グロース・ファクター・レセプターキナ
ーゼ活性の測定により検討した。その結果、エビダーマ
ル・グロース・ファクター・レセプターキナーゼの阻害
活性により定量したＭト１４３５−△培養液温度を培養
４日後に最高に達し、以１”６日後まで安定に維持され
たが、その後は徐々に低下した。
の斜面培養物から一白菌耳吊をあらかじめ１２０℃ ２
０分間滅菌した培地（５００ｍｌの三角フラスコに１１
０ｍ１ずつ分注した。グリセロール３％、魚粉２％、炭
酸カルシウム０．２％を含むｐＨ７，４の培地）に接種
した。２７℃／毎分１８０回転で好気的に振どう培養し
た。経時的にＭ ｌ−１４３５−Ａ産生量を培養液の抗
エピダーマル・グロース・ファクター・レセプターキナ
ーゼ活性の測定により検討した。その結果、エビダーマ
ル・グロース・ファクター・レセプターキナーゼの阻害
活性により定量したＭト１４３５−△培養液温度を培養
４日後に最高に達し、以１”６日後まで安定に維持され
たが、その後は徐々に低下した。
実施例２
実施例１で示した培養条件で４８時間培養した種培養液
を実施例１と同様の培地に３ｍｌ接種し、同様に９６時
間培養して得られた培養液５リツトルを遠心分離にかけ
て、４．６リツトルの培養ろ液を得た。得られた培養ン
戸液４．６リツトルを等量の酢酸ブチルで抽出し、酢酸
ブチルを減圧下に濃縮乾固して、３６０ｍｏを得た。得
られた粗粉末を２０ｇのシリカゲル（メルク社製［キー
ゼルゲル６０Ｊ、７０〜２３０メツシユ）のカラムに吸
着さけ、クロロホルム・メタノール混液の比率を少しず
つ変化させながら、段階的に溶出させてＭＨ４３５−Ａ
を含む両分を集め、減圧下に濃縮乾固して、１１０ｍ（
］の粗粉末を得た。この粗粉末のエピダーマル・グロー
ス・ファクター・レセプター・キナーゼ阻害活性（ＩＣ
３ｏ）は、１．６μｇ／ｍｌであった。
を実施例１と同様の培地に３ｍｌ接種し、同様に９６時
間培養して得られた培養液５リツトルを遠心分離にかけ
て、４．６リツトルの培養ろ液を得た。得られた培養ン
戸液４．６リツトルを等量の酢酸ブチルで抽出し、酢酸
ブチルを減圧下に濃縮乾固して、３６０ｍｏを得た。得
られた粗粉末を２０ｇのシリカゲル（メルク社製［キー
ゼルゲル６０Ｊ、７０〜２３０メツシユ）のカラムに吸
着さけ、クロロホルム・メタノール混液の比率を少しず
つ変化させながら、段階的に溶出させてＭＨ４３５−Ａ
を含む両分を集め、減圧下に濃縮乾固して、１１０ｍ（
］の粗粉末を得た。この粗粉末のエピダーマル・グロー
ス・ファクター・レセプター・キナーゼ阻害活性（ＩＣ
３ｏ）は、１．６μｇ／ｍｌであった。
この粗粉末をメタノールに溶解し、これを予め２０％メ
タノール水溶液で平衡化した分取用高速液体クロマトグ
ラフ用逆相カラム「ヌクレオシル５Ｃ１８」（Ｍ、ナー
ゲル社製）に吸着させ、カラムから２０％メタノール水
溶液で毎分８ｍｌの流速で溶出させた。溶出液を１０ｍ
１ずつ分画し、活性画分を集めて減圧下に濃縮し、酢酸
ブチルで抽出後、濃縮乾固し、少量の酢酸エチルに溶解
後、クロロホルムで結晶化を試みた結果、６０．３ｍａ
のＭ）−１４３５−Ａの結晶を得た。このＭＨ４３５−
Ａの結晶物のエビダーマル・グロース・ファクター・レ
セプターキナーゼ阻害活性（ＩＣ５０）は０．５５μｇ
７ｍ＋であった。
タノール水溶液で平衡化した分取用高速液体クロマトグ
ラフ用逆相カラム「ヌクレオシル５Ｃ１８」（Ｍ、ナー
ゲル社製）に吸着させ、カラムから２０％メタノール水
溶液で毎分８ｍｌの流速で溶出させた。溶出液を１０ｍ
１ずつ分画し、活性画分を集めて減圧下に濃縮し、酢酸
ブチルで抽出後、濃縮乾固し、少量の酢酸エチルに溶解
後、クロロホルムで結晶化を試みた結果、６０．３ｍａ
のＭ）−１４３５−Ａの結晶を得た。このＭＨ４３５−
Ａの結晶物のエビダーマル・グロース・ファクター・レ
セプターキナーゼ阻害活性（ＩＣ５０）は０．５５μｇ
７ｍ＋であった。
実施例３
実施例２で得られたＭＨ４３５−Ａ２３．４ｍｇを１０
ｍ１のメタノールに溶解し、酸化白金１スパーチル添加
後、水素気流下で２時間遅元処理を行ない、ン濾過後、
ン戸液を減圧下で濃縮し、シリカゲルの薄層（メルク社
「キーゼルゲル６０Ｆ Ｊ）に吸着させ、トルエン
：アセトン−１：１混流にて展開し、分離したＭＨ４３
５−Ｂ両分をかきとり、酢酸エチルで溶出した。このよ
うにし−〇得た両分を濃縮後、メタノールにて平衡化し
たｒ ｔファデックスＬＨ−２ＯＪカラム１．０Ｘ４０
ｃｍを同じ組成の溶媒にて通過させ、減圧乾固後、ＭＨ
４３５−Ｂを１０．１１１１（］得た。このＭ ）ｌ
４３５−Ｂのエピダーマル・グロース・ファクター・レ
セプターキナーゼ阻害活性（ＩＣ５ｏ）は６．０μ９／
ｍｌであった。
ｍ１のメタノールに溶解し、酸化白金１スパーチル添加
後、水素気流下で２時間遅元処理を行ない、ン濾過後、
ン戸液を減圧下で濃縮し、シリカゲルの薄層（メルク社
「キーゼルゲル６０Ｆ Ｊ）に吸着させ、トルエン
：アセトン−１：１混流にて展開し、分離したＭＨ４３
５−Ｂ両分をかきとり、酢酸エチルで溶出した。このよ
うにし−〇得た両分を濃縮後、メタノールにて平衡化し
たｒ ｔファデックスＬＨ−２ＯＪカラム１．０Ｘ４０
ｃｍを同じ組成の溶媒にて通過させ、減圧乾固後、ＭＨ
４３５−Ｂを１０．１１１１（］得た。このＭ ）ｌ
４３５−Ｂのエピダーマル・グロース・ファクター・レ
セプターキナーゼ阻害活性（ＩＣ５ｏ）は６．０μ９／
ｍｌであった。
出願人代理人 佐 藤 −雄
手続補正書 ８
昭和６１年１月工１日 明
３ 補正をする考 （４
）事件との関係 特許出願人 ［財団
法人 微生物化学研究会 え【Ｊ −１の内容 １ｌＩｌ書を下記の通り補正する。
）事件との関係 特許出願人 ［財団
法人 微生物化学研究会 え【Ｊ −１の内容 １ｌＩｌ書を下記の通り補正する。
特許請求の範囲を別紙の通り補正。
第２頁第７行
アンニュア」を「アニュア」と補正。
同頁下から第５行
１５２３ １５３１Ｊをｒ１５２３〜
３１」と補正。
第５頁第６〜７行
例えば全合成化学的方法により製造」を「例１ヒ学的方
法により全合成で製造」と補正。
法により全合成で製造」と補正。
第１６頁表の最右欄上から第５行
第２３頁第２行
合成」を削除。
第２５頁第３行
エーテルを」を「エーテルで」と補正。
同頁下から第３行
（９） 第２８頁表の最左側下から第８欄「バチルス
・セレウス」を［バチルス・セレウス」と補正。
・セレウス」を［バチルス・セレウス」と補正。
（１０）第２９頁第３行
ｒＭＨ４３５−ｈＦ３ＡＪをｒＭＨ４３５−ＡＪと補正
。
。
（１１）同頁下から第６行
「液濃度を」を「液濃度は」と補正。
（１２）第３１頁第８行
ｒＭＨ４３５−ＡＪとｒ２３．４ＩＲｇＪとの間に「の
結晶」を加入。
結晶」を加入。
（１３）第４頁の表を別紙の通り補正。
特許請求の範囲
次式で示される新規生理活性物質ＭＨ４３５式中、Ｒは
、次のＡ又はＢのいずれかを示す。
、次のＡ又はＢのいずれかを示す。
Ａ ニーＣＨ＝ＣＨ−ＮＨＣＨＯ
ＢニーＣＨ−ＣＨ−ＮＨＣＩ−１゜
受託番号変更届
手続補正書
昭和６１年１０月 ３ 日
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 次式で示される新規生理活性物質ＭＨ４３５▲数式、化
学式、表等があります▼ 式中、Ｒは、次のＡ又はＢのいずれかを示す。 Ａ：−ＣＨ＝ＣＨ−ＮＨＣＨＯ Ｂ：−ＣＨ−ＣＨ＿２−ＮＨＣＨＯ
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60147039A JPS6210048A (ja) | 1985-07-04 | 1985-07-04 | 新規生理活性物質ｍｈ４３５ |
| US06/879,069 US4686308A (en) | 1985-07-04 | 1986-06-26 | Novel physiologically active substance MH435 |
| DE8686109071T DE3660810D1 (en) | 1985-07-04 | 1986-07-03 | Physiologically active formamides |
| EP86109071A EP0213320B1 (en) | 1985-07-04 | 1986-07-03 | Physiologically active formamides |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60147039A JPS6210048A (ja) | 1985-07-04 | 1985-07-04 | 新規生理活性物質ｍｈ４３５ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6210048A true JPS6210048A (ja) | 1987-01-19 |
| JPH0553786B2 JPH0553786B2 (ja) | 1993-08-10 |
Family
ID=15421134
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60147039A Granted JPS6210048A (ja) | 1985-07-04 | 1985-07-04 | 新規生理活性物質ｍｈ４３５ |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4686308A (ja) |
| EP (1) | EP0213320B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6210048A (ja) |
| DE (1) | DE3660810D1 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| GB9000939D0 (en) * | 1990-01-16 | 1990-03-14 | Erba Carlo Spa | Improvement in the total synthesis of erbstatin analogs |
| US5426108A (en) * | 1993-11-10 | 1995-06-20 | American Cyanamid Company | Antibiotic 31F508 ALPHA1, ALPHA2, BETA1 and BETA2 |
Family Cites Families (10)
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| US4588836A (en) * | 1982-09-01 | 1986-05-13 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | Novel synthetic substrate and assay method using the same |
-
1985
- 1985-07-04 JP JP60147039A patent/JPS6210048A/ja active Granted
-
1986
- 1986-06-26 US US06/879,069 patent/US4686308A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-07-03 EP EP86109071A patent/EP0213320B1/en not_active Expired
- 1986-07-03 DE DE8686109071T patent/DE3660810D1/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0213320A1 (en) | 1987-03-11 |
| US4686308A (en) | 1987-08-11 |
| EP0213320B1 (en) | 1988-09-28 |
| JPH0553786B2 (ja) | 1993-08-10 |
| DE3660810D1 (en) | 1988-11-03 |
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