JPH02212763A - アフイニティークロマトグラフィー用充填剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は架橋されたグルコマンナン球状粒子にアフィニ
ティーリガンドを導入したアフィニティークロマトグラ
フィー用充填剤に関する。

〔従来の技術〕

現在市販されているアフィニティークロマトグラフィー
用充填剤としては、ファルマシア（株）製のリジン−セ
ファローズ４Ｂ、アルギニン−セファローズ４Ｂなどが
ある。これらは、天然多糖類を素材としたアフィニティ
ークロマトグラフィー用充填剤であり、タンパク質、多
糖類、核酸、膜成分およびその他の高分子物質の分離に
用いられている。

しかし、これらの従来の充填剤はゲル母体が柔らかいた
め、高速で通液すると、通液圧力で充填剤の粒子が変形
し、それにともなって分離効率が大幅に低下する。そし
てさらに通液速度を高めると、カラム全体の圧力損失が
急激に上昇し１通液が不能に陥る場合が多い。また塩濃
度により充填剤の膨潤容積が変化するので、カラムにボ
イドが発生しやすいなどの問題点がある。

タンパク質、多糖類、核酸、膜成分およびその他の高分
子物質の分離に用いたアフィニティークロマトグラフィ
ー用充填剤を再使用する場合、通常吸着されている物質
をすべて除去して、次の分離工程に備える必要がある。

通常、脂質やタンパク質などの不純物は、０．ＩＭ程度
の水酸化ナトリウム水溶液による洗浄で除去した後、蒸
留水、緩衝液あるいは塩溶液でアルカリを完全に除く操
作を行ってい・、・。この操作は試料の吸着操作に比へ
て繁雑で長時間を要するため、１サイクル（吸着→脱着
（溶出）→洗浄・再生）の処理時間が長くなる大きな要
因どなっている。このため分離対象物質の吸着工程の時
間を短くするよりも、洗浄・再生工程での時間を短くす
る方が、実用−を−望まれている。このような要望に対
応するためには、高流速での通液が可能なｉｔ圧強度の
大きいアフィニティークロマ１−グラフィー用充填剤が
必要となる。。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明の目的は、上記のような問題点を解決し、。

さらに上記のような要望に応えるため、塩濃度ｔこより
膨潤容積が変化せず、かつ耐圧強度が大きく高流速での
通液が可能なアフィニティークロマトグラフィー用充填
剤を提供することである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明は以下のアフィニティークロマトグラフィー用充
填剤である。

（１）架橋されたグルコマンナン球状粒子にアフィニテ
ィーリガンドを導入したことを特徴とするアフィニティ
ークロマ１−クラフィー用充填剤。

（２）アフィニティーリガンドがタンパク質、ペプチド
およびアミノ酸から選ばれる一種以上のものである上記
（］）記載のアフィニティークロマ１−グラフィー用充
填剤。

本発明で使用する架橋されたグルコマンナン球状粒子（
以下の文中では甲、にグルコマンナン球状粒子と略する
場合がある）は、；）−グルコースとＤ−マンノースを
主要構成成分とするグルコマンナンが架橋剤により架橋
された親水性のゲル粒子である。グルコマンナンとして
は、コンニャクマンナンが代表的であるが、これに限定
されない。

本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤は
、上記のようなグルコマンナン球状粒子にアフィニティ
ーリガンドを導入したものである。

本発明で導入されるアフィニティーリガンドは、分離し
ようとする目的物質と特異的な相互作用（親和性）のあ
る物質であれば特に制限されず、例えば目的酵素に対す
る基質、拮抗阻害剤、補市素、目的抗体に対する抗原、
目的物質に対する抗体、］１的物質に対する強い親和力
を有する物質、あるいはこれらと分子構造が類似した物
質などをあげることができる。このようなアフィニティ
ーリガンドとして、具体的には大豆１−リプシンインヒ
ビター、ヘモグロビン、コラーゲン、血液凝固因子等の
タンパク質またはペプチド；リジン等のアミノ酸などを
あげることができる。

これらのアフィニティーリガンドは活性化剤によりグル
コマンナン球状粒子に導入されているのが好ましい。こ
の活性化剤は、グルコマンナン球状粒子と反応し、かつ
導入しようとするアフィニティーリガンドの持つアミノ
基やカルボキシル基などと反応するものであって、分離
しようとする物質との非特異的吸着が起らない有機化合
物が使用できる。このような活性化剤としては、例えば
グルコマンナン球状粒子中のある部位をトレシル化、ホ
ルミル化、エポキシ化またはブロムシアン化することに
より活性化し、アフィニティーリガンドを導入するもの
が好ましい。

」−記の活性化剤としては、例えばトレシルクロリド（
２，２，２−トリフルオロエタンスルホニルクロリド）
、１，４−ブタンジオールグリシジルエーテル、グルタ
ルアルデヒド、ヘキサメチレンジイソシアネート、臭化
シアン、ビスオキシラン、１，４−ビス（２，３−エポ
キシプロポキシ）ブタンなどをあげることができる。

本発明において、アフィニティーリガンドを導入する前
の架橋さ九たグルコマンナン球状粒子は、グルコマンナ
ンを架橋して製造することができる。

製造方法の具体的な例を示せば、次のような方法があげ
られる。

まず市販のグルコマンナンをアルコール等で精製したグ
ルコマンナン精製物をホルムアミドまたはジメチルホル
ムアミド等の溶媒に溶解し、触媒としてピリジンを用い
、酢酸、無水酢酸、プロピオン酸、酪酸、硝酸等の酸を
加えてグルコマンナンのエステルを生成する。

次に、グルコマンナンのエステルを溶媒にｍＭする。溶
媒としては、後記の水性媒質より沸点が低く、かつ水性
媒質に全く溶解しないか、または僅かしか溶解しないも
のであることが好ましい。

このような溶媒として具体的には、ジクロロメタン、ク
ロロホルム、四塩化炭素および１〜リクロロエチレン等
の塩素化炭化水素が使用され、これらを単独または混合
して用いることができる。

グルコマンナンのエステルの溶解濃度としては、前記溶
媒が蒸発除去された後、粒子が球状を保ち、充填剤とし
ての強度を持っておればよいのであって、通常０．１〜
２０重量％、好ましくは２〜１０重量％である。

なお、グルコマンナンのエステルを前記溶媒に溶解する
際、グルコマンナントリアセテ−１・を単独で溶解して
もよいが、適当な多孔化剤をさらに加えることができる
。

多孔化剤は球状粒子を作った後、除去されて球状粒子を
多孔化するために使用されるもので、具体的には、テト
ラヒドロナフタレン、デカヒドロナフタレン、エチルベ
ンゼン、ジエチルベンゼン、ドデカン酸メチル、トルエ
ン、ヘキシルアルコール、ヘプチルアルコールおよびオ
クチルアルコール等が使用される。

多孔化剤の濃度としては使用するグルコマンナンのエス
テルに対して１０〜５００重量％、好ましくは５０〜４
００重量％である。

次に、上記のようにして得たグルコマンナンのエステル
の溶液を水性媒質中に懸濁させ、グルコマンナンのエス
テルの球状粒子を得る。

水性媒質としては親水性保護コロイド、例えばポリビニ
ルアルコール、カルボキシメチルセルロ−ス 溶性澱粉ならびにゼラチン等が使用できる。

これらは０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％
水溶液として使用するのがよい。また、水性媒質の使用
量はグルコマンナンのエステルの溶液の少なくとも２倍
以上、好ましくは１０〜５０倍容量とするのがよい。

水性媒質中に前記グルコマンナンのエステルの溶液を懸
濁させる方法としては、水性媒質中にグルコマンナンの
エステルの溶液を全量加え、撹拌して分散，懸濁する方
法や、水性媒質を撹拌状態とし、これにグルコマンナン
のエステルの溶液を一度にまたは滴下状に添加する方法
等があげられる。

液滴中の有機溶媒を蒸発除去する時の温度としては，水
性媒質の氷点以上で有機溶媒の沸点以下の温度が用いら
れるが、蒸発除去を促進させ、かつ粒子形状を良好に保
つためには有機溶媒の沸点より１〜５℃低い温度が好ま
しい。

次に、グルコマンナンのエステルの球状粒子をけん化す
る。この場合、球状粒子の形状をこわさずにその形状を
保ちつつ、けん化するようなげん化浴を用いることが必
要である。けん化浴の例としては水酸化ナトリウムまた
は水酸化カリウムのメタノール溶液や、水酸化ナトリウ
ムまたは水酸化カリウムを硫酸ナトリウム等の塩類水溶
液に溶解させた溶液があげられる。

次に、けん化されたグルコマンナンのエステルの粒子を
架橋する。架橋剤としては、例えばエビクロロヒドリン
、ジェポキシブタン、トリレンジイソシアナート、ヘキ
サメチレンジイソシアナート等の２官能性化合物をあげ
ることができる。これらの架橋剤は有機性媒体液中に溶
解させて使用される。

架橋剤の媒体液としては灯油または流動パラフィンまた
はその混合物（例えば容量比７：３）に界面活性剤（非
イオン界面活性剤例えばソルビタン脂肪酸エステル）を
１〜２重量％混合したものが用いられる。また別の架橋
剤の媒体液としてはアセトンとジメチルスルホキシドか
らなる混合液（例えば容量比６：４）が用いられる。架
橋剤の濃度は上記架橋剤の媒体液に対して０．０１〜１
５ｍｏｌ／Ｑの範囲である。

架橋剤溶液１００容量部に対し、グルコマンナンのエス
テルの球状粒子を１〜５重量部加え、室温〜７０°Ｃで
２４〜３６時間撹拌を続けることによりグルコマンナン
のエステルの球状粒子は架橋される。

架橋反応粒子をろ別し、アセトン次いで中性洗剤で洗浄
し、次に水洗することによって架橋されたグルコマンナ
ンのエステルの球状粒子が得られる。

Ｌ記のようにして得られたグルコマンナン球状粒子にア
フィニティ−リガントを導入するには、次のような方法
により行うことができる。

まず、グルコマンナン球状粒子を反応溶媒に１″分接触
させて膨潤させるとともに気泡を脱気する。

ここで使用する反応溶媒は次の工程のグルコマンナン球
状粒子と活性化剤とを反応させるのに好適な溶媒となる
溶液を用いるのが好まし１く、例えばアセトンとピ１．
Ｊジンとの混合溶液、水酸化ナトリウムのホウ酸水素子
トリウ１１水溶液などをあげることができる。

次に、前記活性化剤を加え、活性化剤と湿潤したグルコ
マンナン球状粒子を１・分混合し２て反応させ、グルコ
マンナン球状粒子を活性化する。活性化は、グルコマン
ナン球状粒　・□・・）ある部位をトレシル化、ホルミ
ル化、エポキシ化、ブロムシアン化するなどして、導入
しようとするアフィニティーリガンドをこの活性化した
部位に結合させるためのものである、 活性化剤の使用割合は、使用する活性化剤の種類にもよ
るが１通常グルコマンナン球状粒子１００重量部に対し
て２〜２００重量部の割合で使用する。

活性化の反応条件は、通常反応温度が０〜５０℃、反応
時間が５分〜３時間である。

次に、活性化したグルコマンナン球状粒子をろ過等によ
り分取した後、十分洗浄し活性化剤を除去する。洗浄液
は適宜選択できるが、例えばアセトンとピリジンの混合
溶液を反応溶媒として、Ｉ・レシルクロリドを活性化剤
として使用し、た場合は、アセ１−ンと低濃度の塩酸と
の混合溶液を使用するのがり了ましい、。

次に、アフィニティーリガンド含有液と活性化グルコマ
ンナン球状粒子を接触させ、十分混合してグルコマンナ
ン球状粒子にアフィニティーリガントを導入する。この
場合の反応条件は１通常反応温度が０〜４０℃、反応時
間が１〜２４時間である。

アフィニティーリガンド含有液は、アフィニティーリガ
ンドを適当な緩衝液等に溶解させる方法などにより調製
する。アフィニティーリガンドの使用紙は、通常グルコ
マンナン球状粒子中の活性化部位との反応当量以上とす
るのが好ましい。

次に、アフィニティーリガンドを導入したグルコマンナ
ン球状粒子をろ過等により分取した後、１・分洗浄する
。洗浄液は適宜選択できるが、例えば食塩水、食塩含有
酢酸緩衝液、食塩含有重炭酸緩衝液、純水および有機溶
媒などをあげることができる。

次に、グルコマンナン球状粒子中の未反応の活性化部位
にブロッキングする。ブロッキングは未ブロックのグル
コマンナン球状粒子を適当なブロッキング剤（溶液）に
０〜４０℃で０．５〜２４時間浸漬して行うことができ
る。ブロッキング剤（溶液）としては、例えば食塩含有
トリス−塩酸緩衝液、モノエタノールアミンなどをあげ
ることができる。

以上のようにして得られたアフィニティークロマトグラ
フィー用充填剤は、１〜リプシン、プラスミノーゲン等
の酵素やその他のタンパク質などの各種生体物質の分離
に使用することができる。

〔発明の効果〕

本発明によれば、架橋されたグルコマンナン球状粒子に
アフィニティーリガンドを導入したので、塩濃度により
膨潤容積が変化せず、かつ耐圧強度が大きく、高流速で
通液が可能なアフィニティークロマトグラフィー用充填
剤を得ることができる。

したがって、このようなアフィニティークロマトグラフ
ィー用充填剤を用いることにより、目的物質の分離を短
時間でしかも効率よく行うことができる。

〔実施例〕

以下、本発明の実施例について説明する。

実施例Ｊ （架橋されたグルコマンナン球状粒子の製造）コンニャ
クマンナン粉４０ｇを６０〜７０℃のイオン交換水４Ｑ
に加え撹拌溶解した。これを６Ｑのエタノール中に少し
づつ滴下し、沈澱させ、ろ別、風乾、　２０℃で真空乾
燥させた。この乾燥グルコマンナン３０ｇをポル１１ア
ミド１ｆｌ中に入れ、２日間膨潤させた後、ピリジン３
００ｄ、無水酢酸３００ｍ１Ｑを加え、５０℃で５日間
反応させた。この反応混合物を７Ｑの水中に撹拌しなが
ら加えた。生じた沈澱をろ刑した後水洗した。これを風
乾、真空乾燥した後、その３ｇをデカヒドロナフタリン
ｌｏ、５ｍＤを含むクロロホルム３００ｍ１１に溶解し
た。５７℃の９０％ケン化ポリビニルアルコールの２重
量％水溶液３Ｑ中に上記溶液を撹拌しながら滴下して、
粒径４４〜１０５μｍの粒子を形成させた。２４時聞役
徐冷し、球状粒子をろ別した後水洗した。これをメタノ
ール２７Ｏｎ＋ｆｌとＩＯＮ水酸化ナトリウム３０ｔＱ
の混合溶液中に加え、撹拌下、２４時間放置してケン化
した。

その後ケン化球状粒子をろ別し、アセトンとジメチルス
ルホキシド１：１の混合溶液３０ＯｍＱ中にエビクロロ
ヒドリン３５ｇを加えた架橋洛中に球状粒子を投入し、
６０℃で２４時間処理して架橋されたグルコマンナン球
状粒子を得た。このようにして得られたグルコマンナン
球状粒子は乾燥して保存した。

（アフィニティーリガンドの導入） 乾燥した架橋されたグルコマンナン球状粒子０．４ｇを
アセトン３ｎＪおよびピリジン１５０μＱの混合溶液中
に入れた。この反応液の入ったサンプルびんを軽く振と
うした後、活性化剤としてのトレシルクロリド１００μ
ρを加えサンプルびんを振とうさせながら１０分間反応
させた。反応後吸引ろ過してトレシル−グルコマンナン
ゲルを得た。次に、アセトン７０　：　５ｍＭ塩酸３０
、アセトン３０：５鱈塩酸７０および１ｍＭ塩酸の溶液
で順次洗浄した。得られたトレシル−グルコマンナンゲ
ルは１ｍＭ塩酸中で４℃で保存した。

１０ｍＱメスシリンダーで秤り取った２社のトレシル−
グルコマンナンゲルを２０ｍｇの大豆トリプシンインヒ
ビターを溶解した０、５Ｍ食塩含有０．１Ｍ重炭酸ナト
リウム溶液（ｐＨ８，０）　４　ｒｌｌｆｌの溶液中に
入れて２時間振とうして反応させた。得られた大豆トリ
プシンインヒビター−グルコマンナンゲル（ＳＴＩ−グ
ルコマンナンゲル）はろ過して１Ｍ食塩水で洗浄した。

５ＴＩ−グルコマンナンゲル中の残存活性基は０．５Ｍ
食塩含有０．１Ｍ　トリス塩酸緩衝液ＣｐＨ８，０）　
４．　ｍＱ中に１時間浸漬してブロッキングした。上記
と同様の方法で、さらに５ＴＩ−グルコマンナンゲルを
製造した。

このようにして得られた５ＴＩ−グルコマンナンゲ＝１
５ ル登純水に浸漬した状態で内径５１、長さ３００　ｍ　
ｍのガラスカラムに充填した後、高圧ポンプを用いて通
液し圧力ゲージの目盛りを読み取る方法で、通液流速と
圧力損失との関係を測定した。結果を第１図に示す。

また、上記のようにして調製した５ＴＩ−グルコマンナ
ンゲルを用いて、アフイニテイーグロマトグラフィー用
カラムを作成し、下記条件でトリプシンの分離実験を行
った。結果を第２図に示す。

カラム：　０．３ｃｍ　Ｘ　４ｃｍ 流　速：　０．３６ｎ＋Ｑ／ｍｊｎ 試　料：２ｍｇ／ｍＱのトリプシン溶液２０　μＱ吸着
液（Ａ液）　：　０．５Ｍ食塩および１０ｍＭ塩化カル
シウムを含む２０ｍＭ　トリス塩酸緩衝液（ＰＩ４７．
５） 溶出液（Ｂ液）　：　０．５Ｍ食塩含有１．０ｍＭ塩酸
溶液溶出後、トリプシンの酵素活性を測定したところ、
溶出前に比べて８０〜９０％と高い活性の保持を示した
。

なお、第２図の第１番目のピークはトリプシンの酵素活
性が０．２％と低いため、製品中に含まれていた不純物
であると推定される。

比較例１ 市販のトレシル−セファローズ４Ｂから大豆トリプシン
インヒビターを導入した大豆トリプシンインヒビター−
セファローズ４Ｂ（ＳＴＩ−セファローズ４Ｂ）を調製
し，これを用いて実施例１と同様にして通液流速と圧力
損失との関係を測定した。結果を第１図に示す。

第１図に示した結果から、ＳＴ’ｆ−グルコマンナンゲ
ルはＳＴＩ−セファローズ４Ｂに比べて著しく耐圧強度
が大きく、すなわち高流速の通液条件下でも流速と圧力
損失との関係が直線関係を示しており。

急激な圧力上昇が起らないことがわかる。

実施例２ 実施例１と同じグルコマンナン球状粒子０．５ｇおよび
ホウ酸水素ナトリウム２ｍｇを０．３Ｎの水酸化ナトリ
ウム溶液４ｍＱに入れ、これに１，４−ブタンジオール
グリシジルエーテル２．５ｍρを入れて室温で８時間振
とうして反応させた。反応後ろ過して固液分離し５たエ
ポキシ−グルコマンナンゲルを１阿の食塩水で洗浄し、
１Ｍ食塩水中で４°Ｃで保存［、また。

上シ己のようにして調製したエポキシ−グルコマンナン
ゲル］ＩＩＩＱをメスシリンダーで秤り取り、リジン１
０ｍｇを溶解した０、５Ｍ食塩含有０．１Ｍ重炭酸す１
ヘリウム溶液（ｐＨ８，５）　２　ｍＱに入れて振どう
させながら室温で１７時間反応させてリジン−グルコマ
ンテンゲルを得た。リジン−グルコマンナンゲル中の残
存活性基は１Ｍのモノエタノールアミン４．ｍＱに室温
にて一晩装置してブロッキング〔１、た８」１記のよう
にして調製したリジン−グルコ」マンナンゲルを用いて
アフィニティークロマトグラフィー用カラムを作成し、
ド記条件でプラスミノーゲンの分離実験を行った。

カラム：　０．３ｃｍ　Ｘ　４ｃ＋ｎ 試　料：２ｍｇ／ｍＱのプラスミノーゲン溶液１０μＱ
吸着液：０．１Ｍ食塩含有５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７，４）洗浄液：０．５Ｍ食塩含有５０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ７，４）溶出液：洗浄液に０．２ハε−７ミノ
カブロン酸溶液を加えた緩衝液（ｐｌ＋７．４） 流　速：吸着時は０．０５ｍＱ／　１ｉｉｎ、洗浄およ
び溶出時は０．２ｍ（１／ｍｉｎ 吸着時の結果を第３図（ａ）に、溶出時の結果を第３３
図（ｂ）に示す。これらの結果から、リジン−ゲルコマ
シナンゲルにプラスミノーゲンが吸着し、溶出液により
プラスミノーゲンが溶出したことがわかる。

比較例２ 実施例１−で得たグルコマンナン球状粒子を用いて、実
施例２と同様の条件でプラスミノーゲン試料を注入した
。第３図（＋〕）　４こ示した結果かられかるように、
プラスミノーゲンはグルコマンナンゲルに吸着すること
なくそのまま溶出した。

実施例３ ６ＩＩ１ｇの／＼モグロビンをファルコン（株）製サン
プル管に入れて、０．３ｍｎ、の重炭酸すトリウム（ｐ
Ｈ１８，５）で溶解させた。実施例１で得た１〜レジル
ーグルコマンナンゲルｉｄを前記ヘモグロビン溶解液に
入れて２５°（゛て３時間水平方向に振とうしてヘモグ
ロビン−グルコマンノーンゲルを得た。

吸引ろ通接、ろ液を回収して測定した波長４１１＋ｌｌ
１ｌの吸光度（ＡＢＳ４１．ｉｎ、、、）より、グルコ
マンナンゲルに恋人されたヘモグロビンの凧は３１１Ｉ
ｇと算出された。

実施例４ モルモット血しょうより血液凝固第■囚イを精製し、そ
の２Ｉｌ１ｇを：３ｖａｎの１へレシルークルコマンナ
ンゲルに０．５Ｍ食塩含有０．１Ｍ重炭酸ナトリウム溶
液（ρＩ（８，０）中で結合させた。結合率は約８０型
破％であった。この第刈因Ｔ−グルコマンナンゲルの２
ｍＱをシリコン処理し、たガラスカラム（０，５ｃｍφ
Ｘ　１０ｃｍ）　　に充填し２、抗原カラ１１とし、た
。モルモット第■因Ｉ−で免疫したヤギより抗血清を採
取し、１匹分画を調製し、た後ペプシンで限定分解して
Ｆ（ａｂ’）、フランメンｉ−を得た。ごの１・”（ａ
ｂ’）２フランメンｈ２０ｍｇ／岬のリン酸緩衝化４ト
理的食塩水（ｐＨ７，４）を調製し、そのｌＯ岬を高速
液体クロマ１〜グラフイーシステムを用いて定温にて流
速０．２５ｍＱ／ｍｉｎで」−記抗原力ラムに注入し７
た。流速を１．ｍｆ＞／ｍｉｎ　１．、：　ｈげて２倍
量の上記溶媒でカラ１１を洗浄Ｉ、５た後、特異抗体を
５Ｍ塩酸グアニジン−６７鱈リン酸緩衝液で流速０．５
ｍ１ｌ／ｍｉｎで溶出した。特異抗体を含む溶出液をリ
ン酸緩衝化生理的食塩水で４　”Ｃで−・晩透析して塩
酸グアニジンを除去し、抗体活性を回復させた。第刈因
子欠損ヒト血しようを用いた凝固時間測定法を応用して
特異抗体活性を定量すると、少なくとも９０％以上の特
異抗体が抗原カラ１１に結合し、その人）Ｉ−が塩酸グ
アニジンにて溶出回収された４、このクロマトグラフィ
ーでの流速は、抗体注入時！、コ、通常の抗原抗体アフ
ィニティークロマトク゛ラフイー（４ｎ＋Ｑ／ｈｒ・ｃ
ｒａ　）の１０倍、溶出時は２０倍、洗浄時は実に４０
倍の速度であ・った。

このカラムを使って回収された干ルモッ１〜第刈因子に
対するＡ７ギの特異抗体は３．４１１ＩＰｌて；あ１、
た。

ずカ・わちヤギの［ｇＧ中にＲ：１．７重量％のモル干
ツト第店因子に幻する特異抗体が作られていたごと１．
こなる、

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１　ｔ：よび比較例１の結果を示すグラ
フ、第２図は実施例１の結果を示すクラブ、第３図（ａ
）および（ｂ）は実施例２の結果を示すグラフ、 第３図（Ｃ） は比較例２の結果を示すグラフで ある。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）架橋されたグルコマンナン球状粒子にアフィニテ
   ィーリガンドを導入したことを特徴とするアフィニティ
   ークロマトグラフィー用充填剤。
2. （２）アフィニティーリガンドがタンパク質、ペプチド
   およびアミノ酸から選ばれる一種以上のものである請求
   項（１）記載のアフィニティークロマトグラフィー用充
   填剤。