JPH02218620A - 口腔内疾患予防用有効成分の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、口腔用組成物９食品等に配合されて、口腔内
疾患を予防するために用いられる有効成分の製造方法に
関し、更に詳述すると口腔内細菌の全菌体又は菌体成分
を抗原として免疫した家禽の卵の卵黄画分から活性画分
を効率良く分画して、歯周疾患やう蝕等の口腔内疾患を
予防する有効成分を得る方法に関する。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕歯周炎
、歯槽膿漏等の歯周病どう蝕とは口腔の２大疾患といわ
れているが、これら口腔疾患の原因としては、例えば前
者の場合はバクテロイデス・ジンジバリス等、後者の場
合はストレプトコッカス・ミュータンス等の細菌が口腔
内に定着し、増殖していくことによるところが大きいと
されており、このため口腔疾患の予防にはこれら細菌の
口腔内への定着を抑制するのが有効である。

従来、かかる観点から、バクテロイデス・ジンジバリス
等の歯周病原因菌やストレプトコッカス・ミュータンス
の全菌体又は菌体成分で哺乳動物を免疫することによっ
て得られる血中抗体又は乳中抗体を口腔用組成物中に配
合し、上記細菌の口腔内への定着を抑制して口腔疾患を
予防することは知られている（特開昭６０−１４２９１
５．特開昭６０−３８３２７．特開昭６０−３８３２９
゜特開昭６１−１１２０２８．特開昭６１−１１２０２
９゜特開昭６１−１１２０３０．特開昭６１−２８９０
２４゜特開昭６２−４１７．特開昭６１−２７７６３２
号公報）。

また、口腔用組成物への配合性等の点から更に口腔内細
菌の定着を有効に抑制し、歯周病やう蝕を防止し得る有
効成分として、口腔内細菌の全菌体又は菌体成分を抗原
とし、これで免疫した家禽の卵を用いることも先に提案
されている（特願昭６３−２０５１０９号、２０５１１
０号）。

しかし、この卵由来の有効成分は、その卵黄中に抗体が
蓄積、存在しているものであるが、卵黄中にはかなりの
脂質が含有され、脂質は抗体の安定化に必要となる成分
１例えばタンパク質、ペプチド、糖類の安定作用の阻害
因子となるため、そのまま口腔用組成物等に配合するこ
とは望ましくなく、このためかかる脂質を除去する必要
があることが見い出された。この場合、脂質の除去はカ
ラムグロマトグラフイー等によってなされ得るが、工業
的製造に適した簡便な精製、分画法が望まれる。

〔課題を解決するための手段及び作用〕本発明者は、上
記要望に応えるべく種々検討を行なった結果１口腔内細
菌、特にバクテロイデス・ジンジバリス、バクテロイデ
ス・インテルメディウス、アクチノマイセス・ビスコ−
サス、ヘモフィルス・アクチノミセテムコミタンス、フ
シバクテリウム・ヌクレイタム、アイコネラ・コロ−デ
ンス、ストレプトコッカス　ミニ−タンス、ストレプト
コッカス・サンギス等の１種もしくは２種以上の全菌体
又は菌体成分を抗原とし、これで家禽を免疫した場合、
得られる卵の卵黄中には抗体が蓄積、存在し、この抗体
は口腔疾患を予防するための有効成分として優れた効果
を有するが、上述したようにこの卵黄画分中にはかなり
の脂質が存在し、これが口腔用組成物等に抗体含有卵黄
を配合した場合に抗体の安定配合性を阻害することを知
見すると共に、脂質は該抗体を含有する有効成分中５％
（重量％、以下同じ）以下であれば抗体の安定配合性を
阻害しないことを知見した。このため、脂質を５％以下
に減らす簡便な方法について検討を行なったところ、卵
黄画分に多糖類を添加することにより、卵黄中の脂質が
凝集し、この凝集した脂質を除去すると、脂質が５％以
下の抗体が濃縮した精製画分が得られること、この精製
画分が抗原に対して高い凝集活性を有し、このため口腔
内細菌の定着を抑制する効果に優れていると共に１口腔
用組成物等に安定に配合され、長期保存後にもその効果
を有効に発揮することを見い出したものである。

以下、本発明につき更に詳しく説明する。

本発明に係る口腔内疾患予防用有効成分の製造方法は、
バクテロイデス・ジンジバリス、バクテロイデス・イン
テルメディウス、アクチノマイセス・ビスコ−サス、ヘ
モフィルス・アクチノミセテムコミタンス、フシバクテ
リウム・ヌクレイタム、アイコネラ・コロ−デンス、ス
トレプトコッカス・ミュータンス、ストレプトコッカス
・サンギス等の口腔内細菌の１種もしくは２種以上の全
菌体又は菌体成分を抗原とし、これで免疫した家禽から
得られる卵の卵黄画分に多糖類を添加して該卵黄画分中
の脂質を凝集させて、この凝集物を分離除去した脂質含
量が５重量％以下の画分を採取するものである。

ここで、バクテロイデス・ジンジバリス、バクテロイデ
ス・インテルメディウス、アクチノマイセス・ビスコ−
サス、ヘモフィルス・アクチノミセテムコミタンス、フ
シバクテリウム・ヌクレイタム、アイコネラ・コロ−デ
ンス等の全菌体は、バクテロイデス・ジンジバリス、バ
クテロイデス・インテルメディウスにおいては、例えば
ヘミン及びメナジオンを加えたトツドヘピットブロース
を培地として使用し、その他の細菌はトリプティケース
ソイブロースを培地として使用し、生育した菌を洗浄し
た後、ホルマリン処理するなど、公知の方法に準じて培
養、前処理を行なったものが抗原として使用し得る。ま
た、これらの細菌の菌体成分としては、その線毛や莢膜
が使用されるが、これら線毛抗原、莢膜抗原は、公知の
方法に準じて菌体から分断２分離したものを用いること
ができる。

なお、これら細菌の菌株としては、いずれも公知のもの
を使用することができ１例えば微工研、アメリカン・タ
イプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）　、ボス
トンのフォーサイス・デンタル・センターなどから分与
される菌株や、歯周病の病巣局所から分離した菌株など
が使用され得る。

一方、ストレプトコッカス・ミュータンス菌、ストレプ
トコッカス・サンギス菌等は、例えばＢＨＩ培地の透析
外液を培地として使用し、生育した菌を洗浄後ホルマリ
ン処理するなど、公知の培養、前処理を行なったものが
使用し得る。この場合、ストレプトコッカス・ミュータ
ンス菌としては人の口腔内に多く存在する血清型分類Ｃ
に属するものが好ましい。このようなストレプトコッカ
ス・ミュータンス菌としてはＮＣＴＣ１０４４９゜Ｉｎ
ｇｂｒｉｔｔ、　ＯＭＺ７０．　ＪＣ−２等が挙げられ
る。

また、ストレプトコッカス・サンギス菌としてはＮＣＴ
Ｃ１０５５６，ＮＣＴＣ１０５５８及び５ＳＨ−８３，
ＫＩＨ−Ｔ等が挙げられる。

これらストレプトコッカス・ミュータンス、ストレプト
コッカス・サンイス等の菌体成分としては、該菌の細胞
壁画分、該菌の線維状構造物画分。

該菌のグルコシルトランスフエレース（ＧＴＦ）画分及
び該菌のプロティン抗原画分が挙げられる。

この場合、ストレプトコッカス・ミュータンス菌、スト
レプトコッカス・サンギス菌の細胞壁画分はブライワイ
ス（Ｂｌｅｉｗｅｉｇ）らの方法（Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌ、ｔ８８、　１１９８−１２００．１９６４）に
従い、ブラウンの細胞破砕機を使用し、直径０．１７〜
０．１８閣のガラスピーズを用いて破砕処理を行ない、
得られた細胞壁をトリプシンで処理して細胞壁に混在す
るタンパク質を除去し、蒸留水で洗浄後凍結乾燥を行な
うという方法等により調製したものなどが使用できる。

線維状構造物画分はジェイ・ヴアン・ホーテ（Ｊ、　Ｖ
ａｎ　Ｈｏａｔｅ）らの方法（Ａｒｃｈ、　０ｒａ１．
　Ｂｉｏ、、上６．　１１３１−１１４１゜１９７１）
に従い、ＢＨＩ透析培地に５％ショ糖を加え、嫌気的条
件下で培養し、培養液の遠心分離上清に３倍量のエタノ
ールを加えて沈殿を集めるという方法等により調製した
ものなどが使用できる。更に、ＧＴＦ画分は井上らの方
法（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｓｐｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｅ
ｎｔａｌ　ｃａｒｉｅｓ　Ｖｏｌ、　ｍ　。

６　６　５−６　８　２．　１　９　７　６　　［Ｉｎ
ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　　ＲａｔｒｆｅｖａｌＩｎｃ、］
　）に従い、ＢＨＩ透析培地にストレプトコッカス・ミ
ュータンス菌、ストレプトコッカス・サンギス菌等を植
菌し、生育後遠心分離により菌体を除去し、上清に硫酸
アンモニウムを加え、４０％硫酸アンモニウム画分の沈
殿を５０ｍＭのリン酸緩衝液で透析し、濃縮した液を用
いるという方法等により調製したものなどが使用できる
。また。

プロティン抗原画分はレーナー（Ｌａｈｎｅｒ）らの方
法（Ｊ、　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
、　　１２２　、２１７−２２５．１９８１）に従い、
ＢＨＩ透析培地で培養し、遠心して得られた上清を７５
％の硫酸アンモニウムを用いて分画し、沈殿を採取し、
この沈殿を６Ｍ尿素存在下でＤＥ−５２カラムクロマト
グラフイーを行ない、更にプロティン抗原画分を生理食
塩水に溶かし、透析後セファロースＣＬ６Ｂにてゲル濾
過を行なって画分を得るという方法等により調製したも
のなどが使用し得る。

本発明は、前記抗原を用いて家禽に免疫する場合、免疫
される家禽としてはニワトリ、アヒル。

ウズラ等が用いられる。また、家禽に免疫する方法とし
ては抗原単独又は２種以上を組合せて免疫することがで
き、その際アジュバントと共に皮下又は筋肉内へ免疫す
る方法、飼料又は水と共に経口的に免疫する方法等、通
常の方法が採用できる。

而して、本発明は、このようにして免疫された家禽から
得られた卵の卵黄画分に多糖類を加えて脂質の凝集処理
を行なうものである。

ここで、卵黄画分を多糖類で処理するに際しては、その
前処理として、トリス塩酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リ
ン酸緩衝液、酢酸緩衝液等のＰＨ５〜９．濃度５〜１０
０ｍＭの緩衝液を用いて卵黄画分希釈し、卵黄画分をこ
れらの緩衝液に懸濁させた後、遠心分離等の手段でその
溶液部を採取°するという方法を採用することが好まし
く、このようにして得られた溶液部に多糖類を添加する
ことが推奨される。なお、上記緩衝液には防腐剤として
ＮａＮ、を０．００１〜０．１％添加することができる
。また、上記卵黄画分の緩衝液への懸濁は十分撹拌を行
なうことによってなされ得るが、撹拌温度は４〜３０℃
とすることができ、懸濁液から遠心分離により溶液部（
上清）を得る場合、遠心分離は８０００×ｇ〜１６ｏｏ
ｏｘｇとすることができる。しかし勿論、これらの条件
は適宜選定し得、これに限定されるものではない。

上記多糖類としては、デキストランサルフェート、カラ
ギーナン、アラビアゴム、キサンタンガム、各種ペクチ
ン、アルギン酸ナトリウム等が使用できる。また、多糖
類の添加量は卵黄画分１０００ｄ４．一対し０．１〜１
０ｇとすることが好ましい、なお、これら多糖類は上記
緩衝液に溶解したものを用いて添加することが好ましい
が、この場合多糖類は０．１〜１５重量／容量％濃度で
溶解することができる。

多糖類を添加した後は、液を攪拌することが好ましく、
これによって十分脂質を凝集させることができる。また
、必要によっては、これに塩化カルシウム、炭酸カルシ
ウム、リン酸カルシウム等のカルシウム塩を加え、更に
凝集を促進させることができる。

このように凝集、沈殿が生じた液は２次いで遠心分離等
の手段により沈殿を除去し、溶液部（上清）を採取する
ことにより、本発明の有効成分画分を得ることができる
が、この場合該溶液部には。

更に硫酸アンモニウムを硫酸アンモニウムの濃度が５〜
４０重量／容量％になるように加え、生じた沈殿を遠心
分離等の手段で採取する分画沈殿処理を施すことが好ま
しい、なお、上記遠心分離操作は、限定されるものでは
ないが、８０００Ｘｇ〜１６０００Ｘｇで行なうことが
できる。

このようにして得られた本発明画分（硫酸アンモニウム
等による分画沈殿処理を行なねない場合は溶液部、その
後上記分画沈殿処理を行なった場合は沈殿部）は１次い
で好ましくはイオン交換水や蒸留水により十分透析して
塩を除去し、濾過滅菌した後、凍結保存、凍結乾燥保存
等することができる。

本発明によって製造された有効成分は、特願昭６３−２
０５１０９号、２０５１１０号に記載されたように口腔
用組成物、食品などに配合することによって使用するこ
とができるが、本発明有効成分は上述した操作により脂
質が除去され、脂質は有効成分中に５％以下の量で含有
されているものであるが、かかる脂質含有量では抗体の
組成物中への安定配合を阻害する要因とならず、このた
め本発明有効成分の効果は長期保存後においても良好に
発揮される。

〔発明の効果〕

本発明によれば、カラムクロマトグラフィー等の精密な
分画手段を採用することなく、非常に簡便な操作で配合
安定性に優れた有効成分を得ることができ、工業化に適
したものである。

以下、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、
本発明は下記の実施例に制限されるものではない、 〔実施例１〕 第１表に示す口腔内細菌の全菌体をニワトリに免疫する
ことによって得られた卵を次の工程により処理し、卵黄
から精製画分を得た。

１、卵黄を白身から分離し、黄体膜を切り除去した。１
００ｍＱの黄身を量り、４００ｍＱのトリス緩衝液（Ｔ
ＢＳ　：　０．１５ＭＮａＣＱ、１０ｍＭトリス塩酸（
ｐＨ７，２）、０．１％Ｎ　ａ　Ｎ　ｚ　）で希釈した
。

２、この溶液を室温において３０分間撹拌した。

３、この黄身の懸濁液を１４０００Ｘｇにおいて２０℃
で３０分間遠心分離し、上清を得た。

４．７．５重量／容量％デキストランサルフェートを含
むＴＢ　Ｓ　５０ｄを上清に加え、１０分間静かに撹拌
した。

５、その後ＩＭＣａＣＱ、を７〇−添加し、その溶液を
３０分間放置し、過剰のデキストランサルフェートの沈
殿を起こさせた。

６．１！１濁液を遠心分離にかけ、上清を得た。

７、更に、この上清に飽和硫酸アンモニウム液を加えて
塩析し、遠心して沈殿を得る操作を３回繰り返した。

８、この沈殿をイオン交換水又は蒸留水にて十分透析し
、塩を除去し、０．４５Ｉ１ｍの一過滅菌し、その後こ
のサンプルを凍結乾燥させた。

以上の処理の結果、黄身１００−より脂質量が約３■の
水溶性精製画分（本発明有効成分）約３００■が得られ
た。

次に、各種菌の凍結乾燥体を１■／−の濃度になるよう
に生理食塩水で分散後、５０−ずつ凝集用のプレート上
に入れ、それぞれの濃度に希釈した精製画分を加え、菌
の凝集作用を測定した。その凝集活性結果を第１表に示
す。

第 表 第１表の結果より、本発明の有効成分は脂質が除去され
ているため、高い凝集活性を示すことが認められた。

〔実施例２〕 ストレプトコッカス・ミュータンス線維状構造物をニワ
トリに免疫することによって得られた卵を次の工程によ
り処理した。

１、卵黄を白身から分離し、黄体膜を切り除去した。１
００＋ｄの黄身を量り、４００−のクエン酸−生理食塩
液（ＣＢＳ　：　０．１５ＭＮａＣＱ。

１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ７，５）、０，１％Ｎａ
Ｎ、）で希釈した。

２、この溶液を室温において３０分間撹拌したゆ３、こ
の黄身の懸濁液を１４０００Ｘｇにおいて２０℃で３０
分間遠心分離し、上滑を得た。

４．５重量／容量％γ−カラギーナンを含むＣＢ５５０
ｍ１を上清に加え、１０分間静かに撹拌した。

５、その溶液を３０分間放置した。

６、懸濁液を遠心分離にかけ、上滑を得た。

７、更に、この上清に飽和硫酸アンモニウム溶液を加え
て塩析し、遠心して沈殿を得た。この操作を２回繰り返
した。

８、この沈殿をイオン交換水又は蒸留水にて十分透析し
、塩を除去し、０．４５−の濾過滅菌し、その後このサ
ンプルを凍結乾燥させた。

以上の処理の結果、黄身１００ａＱより脂質量が約１■
の水溶性精製画分（本発明有効成分）約２５０喀が得ら
れた。

次に、上記方法により得られる精製された抗体を含む下
記処方の練歯磨でストレプトコッカス・ミュータンスの
口腔内定着抑制試験試験を行なった。また、その使用歯
磨の保存安定性を行なった。

以下、その実験方法と結果について示す。

ＩＩＬｊＬＩＬＩＬｌＬ （処方例１） 第２リン酸カルシウム・２水和物　　　５０％グリセリ
ン　　　　　　　　　　　　２０％カルボキシメチルセ
ルロース　　　　　　１％ソジウムラウリルサルフェー
ト　　　　　１．５％ミリストイルジェタノールアマイ
ド　　　０．５％香　　　　料　　　　　　　　　　　
　　　　　　　１．０％サッカリン　　　　　　　　　
　　　　　０．１％デキストラナーゼ ０．０１％ 第　　２　　表 鶏卵抗ストレプトコッカス・ ミュータンス線維状構造物 ０．１％ 合　　計 １００．０％ ハムスター（５週令、雄）を−群５匹にし、それぞれに
ストレプトコッカス・ミュータンスＮＣＴＣ１０４４９
株＆ｌＸ１０’個接種する。

３日後それぞれの有効成分含有歯磨（０，１ｇ）で歯磨
し、１週間後及び４週間後にハムスターの口腔内の歯列
を滅菌した綿球でこすり、少量の生理食塩水中に浸して
菌を均一に分散させる。その一定量をＢＨＩ平板培地に
まいて全菌体数及びストレプトコッカス・ミュータンス
菌のコロニー数をカウントする。ストレプトコッカス・
ミュータンス菌の数は全菌数１００００個当りの菌数で
表わした。結果を第２表に示す。

歯磨１：処方例１において鶏卵抗ストレプトコッカス・
ミュータンス線維状構造 物を除いた歯磨 歯磨２：処方例１の歯磨 歯磨３：処方例１において鶏卵抗ストレプトコッカス・
ミュータンス線維状構造 物の代わりにＮａＦ　１０００ＰＰＩ配合した歯磨 にお番る　　の　　血 Ａ、鶏卵抗ストレプトコッカス・ミュータンス線維状構
造物精製抗体（脂質５％未満） Ｂ、鶏卵抗ストレプトコッカス・ミュータンス線維状構
造物抗体画分（脂質２０％以上）処方例１に従って上記
の抗体を含有する練歯磨を製造し、４０℃、１ケ月の保
存試験を行なった。

活性の測定は、ストレプトコッカス・ミュータンスの全
菌体を利用して酵素抗体法を使用して行なった。ｌｌ造
直後の抗体価を１００％としたときの。

４０℃、１ケ月保存後の活性を求めた。結果を第３表に
示す。

第３表 以上により、精製抗体は歯磨中に配合し、その有効性を
発揮することができ、更に精製抗体は歯磨中においても
４０℃、１ケ月保存で安定であることが確認された。

〔実施例３〕 バクテロイデス・ジンジバリスの莢膜抗原をニワトリに
免疫することによって得られた卵を次の工程により処理
した。

１、卵黄を白身から分離し、黄体膜を切り除去した。１
００ｄの黄身を量り、４００ｄのリン酸−生理食塩液（
ＰＢＳ　：　０．１５ＭＮａＣＱ。

２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）、０．１％ＮａＮ
、）で希釈した。

２、この溶液を室温において３０分間撹拌した。

３、この黄身の懸濁液を１４０００Ｘｇにおいて２０℃
で３０分間遠心分離し、上清を得た。

４．５重量／容量％キサンタンガムを含むＰＢＳ５０−
を上清に加え、１０分間静かに撹拌した。

５、その溶液を６０分間放置した。

６、ｓ濁液を遠心分離にかけ、上清を得た。

７、更に、この上清に飽和硫酸アンモニウム溶液を加え
て塩析し、遠心して沈殿を得た。この操作を２回繰り返
した。この上清をイオン交換水又は蒸留水にて十分透析
し、塩を除去し、０．４５−の濾過滅菌し、その後この
サンプルを凍結乾燥させた。

以上の処理の結果、黄身１００−より脂質量的１．５電
の水溶性精製画分（本発明有効成分）約２３０■が得ら
れた。

次に、上記方法により得られる精製された抗体を含む下
記処方の練歯磨でバクテロイデス・ジンジバリスの口腔
内定着抑制試験を行なった。また１、その使用練歯磨の
保存安定性試験を行なった。以下、その実験方法と結果
について示す。

暮皇１双方 （処方例２） 無水ケイＷｉ　　　　　　　　　　　　　　３０％グリ
セリン　　　　　　　　　　　　３０％ソルビット　　
　　　　　　　　　　　２０％カルボキシメチルセルロ
ース　　　　　　１．０％ソジウムラウリルサルフェー
ト　　　　　２．０％ミリストイルジェタノールアマイ
ド　　　０．６％香　　　　料　　　　　　　　　　　
　　　　　　　１．０％サッカリン　　　　　　　　　
　　　　０．１％エタノール　　　　　　　　　　　　
　　　　２．０％フッ化ナトリウム 鶏卵抗バクテロイデス・ ジンジバリスの莢膜精製抗体 ０．１０％ ０．１％ 合　　計 １００．０％ ゴールデンハムスター（８週令、雄）を−群６〜７匹に
し、下顎第一臼歯を木綿糸（Ｎｏ、　５０　）で結紮後
、バクテロイデス・ジンジバリス３８１−Ｒ’１Ｘ１０
”個／１ｌｌＩの菌液０．１−をハムスター口腔内に接
種した。菌接種３０分後に、処方例２に準じて鶏卵抗バ
クテロイデス・ジンジノ（リス莢膜抗原精製抗体を１％
含有する歯磨にて、歯周ブラシを用いて歯列を２０回ブ
ラッシングした。

期間は４週間行なった。結果を第４表に示す。

第　　４　　表 第５表 Ａ、鶏卵抗バクテロイデス・ジンジバリス莢膜抗原精製
抗体（脂質５％未満） Ｂ、鶏卵抗バクテロイデス・ジンジバリス莢膜抗原抗体
（脂質２０％以上） 処方例２に従って上記の抗体を含有する練歯磨を製造し
、４０℃、１ケ月の保存試験を行なった。

活性の測定は、バクテロイデス・ジンジバリスの全菌体
を利用して酵素抗体法を使用して行なった。

製造直後の抗体価を１００％としたときの４０℃。

１ケ月保存後の活性を求めた。結果を第５表に示す。

以上により、精製抗体は歯磨中に配合し、その有効性を
発揮することができ、更に精製抗体は歯磨中においても
４０℃、１ケ月保存で安定であることが確認された。

〔実施例４〕 ストレプトコッカス・ミュータンスのタンパク抗原をニ
ワトリに免疫することによって得られた卵を次の工程に
より処理した。

１、卵黄を白身から分離し、黄体膜を切り除去した。１
００−の黄身を量り、４００ｄのトリス緩衝液（ＴＢＳ
　：　０．１５ＭＮａｃＱ、２０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ
６，９）、０．１％ＮａＮ、）で希釈した。

２、この溶液を室温において３０分間撹拌した。

３、この黄身の懸濁液を１４０００Ｘｇにおいて２０℃
で３０分間遠心分離し、上清を得た。

４．５重量／容量％アラビアゴムを含むＴＢＳ５０−を
上清に加え、１０分間静かに撹拌した。

５、その溶液を３０分間放置した。

６、懸濁液を遠心分離にかけ、上清を得た。

７、この上清に飽和硫酸アンモニウム溶液を加えて塩析
し、遠心して沈殿を得た。この操作を２回繰り返した。

この上清をイオン交換水又は蒸留水にて十分透析し、塩
を除去し、０．４５ｐｍの濾過滅菌し、その後このサン
プルを凍結乾燥させた。

以上の処理の結果、黄身１００ｄより脂質量約２■の水
溶性精製画分（本発明有効成分）約２９０■が得られた
。

出頭人　　ラ　イ　オ　ン　株式会社 代理人　　弁理士　小　島　隆　司

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、口腔内細菌の全菌体又は菌体成分を抗原として免疫
   した家禽から得られる卵の卵黄画分に多糖類を添加して
   該卵黄画分中の脂質を凝集させて、この凝集物を分離除
   去した脂質含量が５重量％以下の画分を採取することを
   特徴とする口腔内疾患予防用有効成分の製造方法。