JPH02228560A - 免疫化学アッセイへの二価陽イオンの使用 - Google Patents
免疫化学アッセイへの二価陽イオンの使用Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は二価または三価陽イオンを免疫化学的検出方法
および生物学的材料中の被分析物質（ａｎａｌｙｔｅ）
の測定方法に用いることに関する。
および生物学的材料中の被分析物質（ａｎａｌｙｔｅ）
の測定方法に用いることに関する。
既知の免疫化学アッセイ系は、免疫化学的反応に関与し
ないがこのタイプの反応結果に有益な効果を有するのに
適したタンパク質、多糖類および／または界面活性剤を
添加使用している。
ないがこのタイプの反応結果に有益な効果を有するのに
適したタンパク質、多糖類および／または界面活性剤を
添加使用している。
このタイプのアッセイ系の一つの選択である固相ＥＬＩ
ＳＡの場合、必要とされる（緩衝溶液、インキュベーシ
ョンミリュー（ｍｉｌｉｅｕ）であり）、そして被分析
物質を含有し固相と接触させるインキュベーション媒質
は、コンシュケートのおよび／または検体の随伴物質の
固相への非特異的結合が妨げられるような組成を有して
いなければならない。そのために、既知の添加剤、例え
ばタンパク質、例えばアルブミン、ＩｇＧｓカゼイン、
加水分解ゼラチンおよびそれらの誘導体およびタンパク
質混合物またはヒトまたは動物血清、および界面活性剤
などがインキュベーション媒質に用いられている。
ＳＡの場合、必要とされる（緩衝溶液、インキュベーシ
ョンミリュー（ｍｉｌｉｅｕ）であり）、そして被分析
物質を含有し固相と接触させるインキュベーション媒質
は、コンシュケートのおよび／または検体の随伴物質の
固相への非特異的結合が妨げられるような組成を有して
いなければならない。そのために、既知の添加剤、例え
ばタンパク質、例えばアルブミン、ＩｇＧｓカゼイン、
加水分解ゼラチンおよびそれらの誘導体およびタンパク
質混合物またはヒトまたは動物血清、および界面活性剤
などがインキュベーション媒質に用いられている。
ＥＰ Ｏ，１５２，８４７はカルシウム塩およびポリオ
キシエチレンを共に含有する酵素−抗原および酵素−抗
体コンジュゲートを記載しており、この場合、水性溶液
中のコンジュゲートの安定性は両物質の添加によっては
増大するがいずれが一方の物質単独では増大しない。
キシエチレンを共に含有する酵素−抗原および酵素−抗
体コンジュゲートを記載しており、この場合、水性溶液
中のコンジュゲートの安定性は両物質の添加によっては
増大するがいずれが一方の物質単独では増大しない。
ＤＥ ３，６３８．７６７は、ラクトフェリン、牛胎児
血清、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノラウレー
ト（”Ｔｗｅｅｎ ２０）および緩衝塩を含む固相免疫
化学アッセイ、例えばＥＬＩＳＡ、の為のインキュベー
ション媒質を記載している。
血清、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノラウレー
ト（”Ｔｗｅｅｎ ２０）および緩衝塩を含む固相免疫
化学アッセイ、例えばＥＬＩＳＡ、の為のインキュベー
ション媒質を記載している。
ＤＥ ３，８０７，４７８は免疫化学剤、特にそれに含
まれるインキュベーション媒質、に対する有利な添加物
としてアミン酸化物を記載している。
まれるインキュベーション媒質、に対する有利な添加物
としてアミン酸化物を記載している。
このたび驚くべきことに、検体中の被分析物質の免疫化
学反応による検出または測定に用いられる剤に対し、特
に前述の添加物と共に添加して、該被分析物質の検出お
よび測定の特異性を高める免疫化学反応に対する有益な
効果をもたらすのに二価または三価陽イオンが適してい
ることを見出した。
学反応による検出または測定に用いられる剤に対し、特
に前述の添加物と共に添加して、該被分析物質の検出お
よび測定の特異性を高める免疫化学反応に対する有益な
効果をもたらすのに二価または三価陽イオンが適してい
ることを見出した。
従って、本発明は、生物学的材料中に含まれる被分析物
質の免疫化学検出方法および免疫化学測定方法に、好ま
しくは水溶性マグネシウムおよび／またはカルシウム塩
の、二価または三価陽イオンを用い、被分析物質を未標
識反応物質と接触させる場合にそれら適切な塩を５〜５
００ｍｍｏＤ、／ Ｑの濃度で溶解された形態で存在さ
せることに関する。
質の免疫化学検出方法および免疫化学測定方法に、好ま
しくは水溶性マグネシウムおよび／またはカルシウム塩
の、二価または三価陽イオンを用い、被分析物質を未標
識反応物質と接触させる場合にそれら適切な塩を５〜５
００ｍｍｏＤ、／ Ｑの濃度で溶解された形態で存在さ
せることに関する。
それらの群から好まれる水溶性マグネシウムまたはカル
シウム塩は、それらの陰イオンが免疫及落を阻害しない
ものである。好ましい陰イオンはアセテート、クロライ
ドおよびシトレート、特に好ましくはクロライド、であ
る。
シウム塩は、それらの陰イオンが免疫及落を阻害しない
ものである。好ましい陰イオンはアセテート、クロライ
ドおよびシトレート、特に好ましくはクロライド、であ
る。
本発明による方法は、沈殿が分散液として、またはゲル
または粒子凝集物として生成するもの、あるいはそれら
を不存在とするもの、あるいは免疫化学反応が固相で行
われるものである。
または粒子凝集物として生成するもの、あるいはそれら
を不存在とするもの、あるいは免疫化学反応が固相で行
われるものである。
好ましい方法は、固相免疫化学アッセイと呼ばれるもの
である。
である。
これに関連して、固相とは非水溶性であって、−以上の
反応物質が結合される担体である。被分析物質は反応物
質に結合させることができ、あるいはいくつかの反応物
質が担体に結合して存在している場合には、少くともそ
れらのうちの一つをそれ自身の結合により脱着させてそ
れを水性相中に放出させることができる。
反応物質が結合される担体である。被分析物質は反応物
質に結合させることができ、あるいはいくつかの反応物
質が担体に結合して存在している場合には、少くともそ
れらのうちの一つをそれ自身の結合により脱着させてそ
れを水性相中に放出させることができる。
担体の例はラテックス粒子、顆粒状の膨潤性または非膨
潤性物質、ビーズ、チューブ内側面、チューブ装置の特
別な態様としてのマイクロアッセイプレート、および吸
収性マトリクスと称すべき多孔性材料である。
潤性物質、ビーズ、チューブ内側面、チューブ装置の特
別な態様としてのマイクロアッセイプレート、および吸
収性マトリクスと称すべき多孔性材料である。
免疫化学方法においては、抗原および抗体が、被分析物
としておよび反応物質として、用いられるほか反応物質
まＩ；は被分析物質に対するその他のパイオアフイニチ
イ結合相手、例えばレクチン、補体、プロティンＡまた
はＧ１および誘導体化されたビオチンおよびアビジンが
用いられる。
としておよび反応物質として、用いられるほか反応物質
まＩ；は被分析物質に対するその他のパイオアフイニチ
イ結合相手、例えばレクチン、補体、プロティンＡまた
はＧ１および誘導体化されたビオチンおよびアビジンが
用いられる。
多価陽イオンは乾燥状態で検体受容装置に、例えば検体
受容容器に、あるいはいわゆる“ドライ・ケミカル”ア
ッセイ系における検体のための受容ゾーン例えば吸収性
マトリクスに、あるいは、そのほかに緩衝塩および洗剤
および適切な場合には同じく被分析物質を安定化する物
質として安定化用添加物例えばタンパク質または多糖類
を含有する水性溶液中に含まれていてもよく、モして該
多価陽イオンは５〜５００ｍｍｏ１２／Ω、好ましくは
３０〜１００ ｍ ｍ ｏ Ｑ ／ Ｑ、特に好ましく
は５０〜６０ｍｍｏＩ２／α、の濃度で含まれる。
受容容器に、あるいはいわゆる“ドライ・ケミカル”ア
ッセイ系における検体のための受容ゾーン例えば吸収性
マトリクスに、あるいは、そのほかに緩衝塩および洗剤
および適切な場合には同じく被分析物質を安定化する物
質として安定化用添加物例えばタンパク質または多糖類
を含有する水性溶液中に含まれていてもよく、モして該
多価陽イオンは５〜５００ｍｍｏ１２／Ω、好ましくは
３０〜１００ ｍ ｍ ｏ Ｑ ／ Ｑ、特に好ましく
は５０〜６０ｍｍｏＩ２／α、の濃度で含まれる。
検体とも称される被分析物質を含む生物学的材料の例は
、生検または剖検で得た組織、血液細胞、血清または血
漿、分泌物、Ｃ３Ｆ、インフレームされたまたはされな
い組織、壊死生産物および代謝排泄物などである。
、生検または剖検で得た組織、血液細胞、血清または血
漿、分泌物、Ｃ３Ｆ、インフレームされたまたはされな
い組織、壊死生産物および代謝排泄物などである。
好ましい免疫化学方法は、反応物質のうちの一つが固相
に存在するものであるが、その場合には検体を多価陽イ
オンの存在下に固相と、そして適切な場合には固相上の
もの以外の免疫化学反応物質および被分析物質検出用試
薬と共に接触させ、次いでその固相を液相から分離しモ
して固相に結合した被分析物質を測定するかまたは未結
合の被分析物質を測定する。
に存在するものであるが、その場合には検体を多価陽イ
オンの存在下に固相と、そして適切な場合には固相上の
もの以外の免疫化学反応物質および被分析物質検出用試
薬と共に接触させ、次いでその固相を液相から分離しモ
して固相に結合した被分析物質を測定するかまたは未結
合の被分析物質を測定する。
以下の実施例では、（１）感染性ウシ鼻気管炎（ｉｎｆ
ｅｃｔｉｏｎｓ ｂｏｖｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈ
ｅｉｔｉｓ（ＩＢＲ））または感染性膿庖性外陰部膣炎
（１ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｐｕｓｔｕｌａｒ ｖｕｌｖ
ｏｖａｇｉｎｉｔｉｓ（ＩＰＶ））および（２）ウシ白
血症の原因となる作用体に対する抗体の検出方法および
測定方法に多価陽イオンを用いることの利点を説明する
。
ｅｃｔｉｏｎｓ ｂｏｖｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈ
ｅｉｔｉｓ（ＩＢＲ））または感染性膿庖性外陰部膣炎
（１ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｐｕｓｔｕｌａｒ ｖｕｌｖ
ｏｖａｇｉｎｉｔｉｓ（ＩＰＶ））および（２）ウシ白
血症の原因となる作用体に対する抗体の検出方法および
測定方法に多価陽イオンを用いることの利点を説明する
。
実施例
実施例 １
ＩＢＲおよびＩＰＶの原因体に対する抗体を検出するた
めのＥＬＩＳＡ １．１緩衝および試薬溶液 以下、の緩衝および試薬溶液を調整した〜１．１．Ｉ
ＰＢＳ −”Ｔｗｅｅｎ ２０１０ｇ／Ｑポリオキシエ
チレン２０ソルビタンモノラウレート（”Ｔｖｅｅｎ
２０）を含有する、リン酸緩衝生理学的食塩水、Ｉ）Ｈ
７，２（ＰＢＳ）、すなわち１４０ｒｎｒｎｏＱ／ Ｑ
ＮａＣｆ２中のｌＯｍｍｏｆ２７ Ｑ Ｎａ２ＨＰＯ
，／ ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７，２゜ １．１．２検体希釈緩衝液（ＰＴ） ４０９／ Ｑ ”Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳ。
めのＥＬＩＳＡ １．１緩衝および試薬溶液 以下、の緩衝および試薬溶液を調整した〜１．１．Ｉ
ＰＢＳ −”Ｔｗｅｅｎ ２０１０ｇ／Ｑポリオキシエ
チレン２０ソルビタンモノラウレート（”Ｔｖｅｅｎ
２０）を含有する、リン酸緩衝生理学的食塩水、Ｉ）Ｈ
７，２（ＰＢＳ）、すなわち１４０ｒｎｒｎｏＱ／ Ｑ
ＮａＣｆ２中のｌＯｍｍｏｆ２７ Ｑ Ｎａ２ＨＰＯ
，／ ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７，２゜ １．１．２検体希釈緩衝液（ＰＴ） ４０９／ Ｑ ”Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳ。
１．１．３ ５０ｍｍｏｆｆ／（２ＭｇＣＯ２を含有す
る検体希釈緩衝液（ＰＴ−Ｍｇ） １０９／ｆｆ ＭｇＣ１２ｚｘ ６Ｈ１０をＰＴに溶解
した。
る検体希釈緩衝液（ＰＴ−Ｍｇ） １０９／ｆｆ ＭｇＣ１２ｚｘ ６Ｈ１０をＰＴに溶解
した。
１．１．４ Ｔｒｉｓ／ＥＤＴＡ
５０ｒｎｍｏ（１／ Ｑ ｔｒｉｓ、 ５０ｍｍｏＱ／
Ｑエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムの水性溶液を
Ｈ（４でｐＨ７，２に調節した。
Ｑエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムの水性溶液を
Ｈ（４でｐＨ７，２に調節した。
１．１．５ ＡＰコンジュゲート
抗−ウシ免疫グロブリン−アルカリ性ホスファターゼコ
ンジュゲートと呼ばれ製品Ｎｏ 、 ０ＵＤＹ０１の下
に入手できるＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ試薬をＰ
Ｔでｌニア０に希釈した。
ンジュゲートと呼ばれ製品Ｎｏ 、 ０ＵＤＹ０１の下
に入手できるＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ試薬をＰ
Ｔでｌニア０に希釈した。
１．１．６ ＡＰ基質溶液
１００ｇ／αジェタノールアミン水溶液中の１．５ｇ／
Ｉ２ ｐ−ニトロフェニルホスフェートをＨＣＱでｐＨ
９，５に調節した。
Ｉ２ ｐ−ニトロフェニルホスフェートをＨＣＱでｐＨ
９，５に調節した。
１．２ウシヘルペスウイルスＩ （ＢＨＶ Ｉ ）によ
るマイクロアッセイのコーティング 使用マイクロアッセイプレートは丸底を有するＩｍｍｕ
ｎｏｐｌａｔｅｓ Ｉｆ ９６ Ｆ （Ｎｕｎｃ、 Ｒ
ｏｓｋｉｌｉｄｅ。
るマイクロアッセイのコーティング 使用マイクロアッセイプレートは丸底を有するＩｍｍｕ
ｎｏｐｌａｔｅｓ Ｉｆ ９６ Ｆ （Ｎｕｎｃ、 Ｒ
ｏｓｋｉｌｉｄｅ。
Ｄｅｎｍａｒｋ、製品Ｎ、ｏ、２６２１６２）とした。
ＢＨＶ Ｉを増殖させたＭａｄ １ｎ−Ｄｉｒｂｙウシ
腎細胞（ＭＤＢＫ細胞）の組織培養、およびＢＨＶ Ｉ
を全く含まない組織培養を、Ｎ１ｃｏｌａｉ−Ｓｃｈｏ
ｌ ｔｅｎらがおたふくかぜ（流行性耳下腺炎）ウィル
スについてＭｅｄ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。
腎細胞（ＭＤＢＫ細胞）の組織培養、およびＢＨＶ Ｉ
を全く含まない組織培養を、Ｎ１ｃｏｌａｉ−Ｓｃｈｏ
ｌ ｔｅｎらがおたふくかぜ（流行性耳下腺炎）ウィル
スについてＭｅｄ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。
１ｍｍｕｎｏ１．１６８．８１〜９０．１９８０に記載
した如く処理して以下ＢＨＶ Ｉ抗原（Ａｇ）および（
陰性）コントロール抗Ｋ （ｃｏＡｇ）と呼ばれる調製
物を得た。
した如く処理して以下ＢＨＶ Ｉ抗原（Ａｇ）および（
陰性）コントロール抗Ｋ （ｃｏＡｇ）と呼ばれる調製
物を得た。
コーティングには、５０μｇのＢＨＶ Ｉ抗ｊＦ［（Ａ
ｇ）およびｃｏＡｇを前述のマイクロアッセイプレート
ノウエルに交互に入れ、そしてそれらプレートを２０〜
２５℃に２０時間放置した。それらウェルの内容物を次
いで吸引により除去しそしてウェルを、充填後吸引を行
うことによりＰＢＳ−Ｔｖｅｅｎ”２０で１回、そして
ｔｒｉｓ／ ＥＤＴＡで２回洗浄した。
ｇ）およびｃｏＡｇを前述のマイクロアッセイプレート
ノウエルに交互に入れ、そしてそれらプレートを２０〜
２５℃に２０時間放置した。それらウェルの内容物を次
いで吸引により除去しそしてウェルを、充填後吸引を行
うことによりＰＢＳ−Ｔｖｅｅｎ”２０で１回、そして
ｔｒｉｓ／ ＥＤＴＡで２回洗浄した。
１．３１ＢＲ／ＩＰＶの原因体に対するＩｇｌｉｌ、
ＩｇＧ抗体の測定方法 陽性コントロールをＰＴ８よびＰＴ−Ｍｇ緩衝液を用い
て１：４０乃至１：６４０の連続希釈液とじて希釈した
。血清検体を前記緩衝液を用いてｌ：４４に希釈した。
ＩｇＧ抗体の測定方法 陽性コントロールをＰＴ８よびＰＴ−Ｍｇ緩衝液を用い
て１：４０乃至１：６４０の連続希釈液とじて希釈した
。血清検体を前記緩衝液を用いてｌ：４４に希釈した。
１５０μαの各溶液をＡｇおよびｃｏＡｇでコーティン
グしたマイクロアッセイプレートのウェルに入れた。次
にそのアッセイプレートを大気湿度を飽和させて３７°
０で１時間維持した。
グしたマイクロアッセイプレートのウェルに入れた。次
にそのアッセイプレートを大気湿度を飽和させて３７°
０で１時間維持した。
次いでそれらウェルをＰＢＳ−”’ Ｔｗｅｅｎを用い
て、ウェルを充填し該液体を吸引除去することにより、
３回洗浄した。次いで、５０μａのＡＰコンジュゲート
を添加し、そしてそれらプレートを再び３７℃に１時間
放置後、前述の如く洗浄した。ウェル中のコンジュゲー
トとして結合したＡＰの活性を測定するために、１００
μａのＡＰ基質溶液を添加し、マイクロアッセイプレー
トを３７°Ｃに４５分間放置し、そして黄色溶液の４０
５ｎｍにおける吸光度を、空のウェルを基準として用い
て測定した。
て、ウェルを充填し該液体を吸引除去することにより、
３回洗浄した。次いで、５０μａのＡＰコンジュゲート
を添加し、そしてそれらプレートを再び３７℃に１時間
放置後、前述の如く洗浄した。ウェル中のコンジュゲー
トとして結合したＡＰの活性を測定するために、１００
μａのＡＰ基質溶液を添加し、マイクロアッセイプレー
トを３７°Ｃに４５分間放置し、そして黄色溶液の４０
５ｎｍにおける吸光度を、空のウェルを基準として用い
て測定した。
血清は、Ａｇでコーティングされたウェル内の有色溶液
の吸光度とｃｏＡｇでコーティングされたウェル内の溶
液の吸光度の差がプラス２００ミリ吸光度（ｍＥ）より
大であるときは陽性と判定され、またその差がプラス２
００ｍＥ以下または負であるときは陰性と判定された。
の吸光度とｃｏＡｇでコーティングされたウェル内の溶
液の吸光度の差がプラス２００ミリ吸光度（ｍＥ）より
大であるときは陽性と判定され、またその差がプラス２
００ｍＥ以下または負であるときは陰性と判定された。
コントロール血清の力価をこの差が２００ｍＥである希
釈度きした。従って２００ｍＨの数値はカットオフと呼
ばれる。
釈度きした。従って２００ｍＨの数値はカットオフと呼
ばれる。
１．４結果
測定結果を表に示す。これより、検体希釈緩衝液ＰＴに
ＭｇＣＱ 、を添加すると、１：６４０に希釈された二
つのコントロール血清の場合に、Ａｇでコーティングさ
れたウェル内またはｃｏＡｇでコーティングされたウェ
ル内のいずれにおいても吸光度差が全く生じないことが
明らかである。しかしながら、ｌ：４４に希釈された血
清の場合には、Ｍ ｇ ＣＱ 、、の添加は、Ａｇでコ
ーティングされたウェルおよびｃｏＡｇでコーティング
されたウェルのいずれについてもその吸光度の絶対値が
該添加物を含まない緩衝液を用いたときの吸光度の絶対
値よりも低く有利である。特に、ｃｏＡｇでコーティン
グされたウェル内で、吸光度が低下することは、バック
グラウンド吸光度が減少したこと、従ってアッセイの特
異度が増大したことを意味する。
ＭｇＣＱ 、を添加すると、１：６４０に希釈された二
つのコントロール血清の場合に、Ａｇでコーティングさ
れたウェル内またはｃｏＡｇでコーティングされたウェ
ル内のいずれにおいても吸光度差が全く生じないことが
明らかである。しかしながら、ｌ：４４に希釈された血
清の場合には、Ｍ ｇ ＣＱ 、、の添加は、Ａｇでコ
ーティングされたウェルおよびｃｏＡｇでコーティング
されたウェルのいずれについてもその吸光度の絶対値が
該添加物を含まない緩衝液を用いたときの吸光度の絶対
値よりも低く有利である。特に、ｃｏＡｇでコーティン
グされたウェル内で、吸光度が低下することは、バック
グラウンド吸光度が減少したこと、従ってアッセイの特
異度が増大したことを意味する。
実施例 ２
ウシ白血病の原因体に対する抗体の検出方法２．１緩衝
溶液 以下の検体希釈緩衝液を調製した。
溶液 以下の検体希釈緩衝液を調製した。
２．１．ｌ ５ＴＤ
ＩＯ＋ａＱ／Ｑ牛脂児血清、１８ｍｍｏα／Ｑクエン酸
三ナト リ ウ ム Ｘ ２Ｈ，Ｏｌ １０ｍ
ｒａｏＱ／ Ｑ ＫＣＱ、 ４０９／ Ｑ
ｌ −アルキル（ｃｍ〜Ｃ＋ ｓ）アミノ−
３−ジメチルアミノプロパン３−Ｎ−オキサイドの水性
溶液。
三ナト リ ウ ム Ｘ ２Ｈ，Ｏｌ １０ｍ
ｒａｏＱ／ Ｑ ＫＣＱ、 ４０９／ Ｑ
ｌ −アルキル（ｃｍ〜Ｃ＋ ｓ）アミノ−
３−ジメチルアミノプロパン３−Ｎ−オキサイドの水性
溶液。
２−１．２ ＳＴＤ−Ｍｇ
５０ｍｍｏＩ２７１ ＭｇＣｌ２．、すなわち１０ｇ／
１２ ＭｇｃＱ、ｘ５Ｈ，Ｏ，を２．１．１に記載の検
体希釈液に溶解した。
１２ ＭｇｃＱ、ｘ５Ｈ，Ｏ，を２．１．１に記載の検
体希釈液に溶解した。
２．１．３ ＳＴＤ−Ｃａ
６８ｍｒｎｏＱ／ｆ：ｔ ＣａＣＱ、、すなわち１０ｇ
／（２ＣａＣｆｆ、Ｘ２Ｈ！Ｏ，を２．１．ｌに記載の
検体希釈液に溶解した。
／（２ＣａＣｆｆ、Ｘ２Ｈ！Ｏ，を２．１．ｌに記載の
検体希釈液に溶解した。
２．２ウシ白血症ウイルス（ＢＬＶ）によるマイクロア
ッセイプレートのコーティング マイクロアッセイプレートは実施例１．２で使用したも
のと同じにしＩ；。ＢＬＶは永久羊胎児腎セルラインを
用いて増殖させ、そしてＮ１ｃｏｌａｉ−Ｓｃｈｏｌｔ
ｅｎらがおたふくかぜウィルスについてＭｅｄ、 Ｍｉ
ｃｒｏｂｉａｌ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 １６８．８１〜
９０．１９８０に記載した如く処理してＢＬＶ抗原の調
製物を得た。コーティングには、５０ＥｇのＢＬＶ抗原
を各ウェルに入れた。ウイルス不含羊腎細胞の調製物に
よるコーティングは行わなかった。次いで、ウェルの内
容物を吸引により除去しそしてそれらウェルを、充填後
吸引を行うことにより、ＰＢＳ−”’ Ｔｗｅａｎで１
回、そしてｔｒｉｓ／ＥＤＴＡで２回洗浄した。
ッセイプレートのコーティング マイクロアッセイプレートは実施例１．２で使用したも
のと同じにしＩ；。ＢＬＶは永久羊胎児腎セルラインを
用いて増殖させ、そしてＮ１ｃｏｌａｉ−Ｓｃｈｏｌｔ
ｅｎらがおたふくかぜウィルスについてＭｅｄ、 Ｍｉ
ｃｒｏｂｉａｌ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 １６８．８１〜
９０．１９８０に記載した如く処理してＢＬＶ抗原の調
製物を得た。コーティングには、５０ＥｇのＢＬＶ抗原
を各ウェルに入れた。ウイルス不含羊腎細胞の調製物に
よるコーティングは行わなかった。次いで、ウェルの内
容物を吸引により除去しそしてそれらウェルを、充填後
吸引を行うことにより、ＰＢＳ−”’ Ｔｗｅａｎで１
回、そしてｔｒｉｓ／ＥＤＴＡで２回洗浄した。
２．３ ＢＬＶに対するＩｇＭおよびＩｇＧ抗体の測定
方法ＳＴＤ１ＳＴＤ−ＭｇＣＬおよび５ＴＤ−ＣａＣｆ
ｆ ２緩衝液を用いてＢＬＶ−陽性牛血清の１＝２０希
釈液を調製した。１５０μαのこれら希釈液を実施例２
．２に記載のマイクロアッセイプレートのＢＬＶ抗原で
コーティングされたウェル内に移した。そのマイクロア
ッセイプレートを実施例１．３に記載の如くに更に処理
した。
方法ＳＴＤ１ＳＴＤ−ＭｇＣＬおよび５ＴＤ−ＣａＣｆ
ｆ ２緩衝液を用いてＢＬＶ−陽性牛血清の１＝２０希
釈液を調製した。１５０μαのこれら希釈液を実施例２
．２に記載のマイクロアッセイプレートのＢＬＶ抗原で
コーティングされたウェル内に移した。そのマイクロア
ッセイプレートを実施例１．３に記載の如くに更に処理
した。
２．４結 果
二つの被分析物質−陰性血清はＳＴＤ中ではそれぞれ０
．４６Ｅおよび０．４８Ｅの吸光度を与えることが判明
した。ＳＤＴ−Ｍｇおよび５ＴＤ−Ｃａ中では、この数
値はそれぞれ０．１４Ｅおよび０．２２Ｅに、すなわち
それぞれ６９．６％および５４．２％減少した。これと
は対照的に、ＢＬｖ−特異抗体を含む牛血清により得ら
れた吸光度はＳＴＤ中で１．２８Ｅ、 ＳＴＤ−Ｍｇ中
で１．０６Ｅ 、 ５ＴＤ−Ｃａ中で１．０２Ｅであっ
た。すなわち、ＳＴＤ中で得られＩ；数値はこの場合に
はそれぞれわずか１７．２％および２０．３％しか減少
しなかった。
．４６Ｅおよび０．４８Ｅの吸光度を与えることが判明
した。ＳＤＴ−Ｍｇおよび５ＴＤ−Ｃａ中では、この数
値はそれぞれ０．１４Ｅおよび０．２２Ｅに、すなわち
それぞれ６９．６％および５４．２％減少した。これと
は対照的に、ＢＬｖ−特異抗体を含む牛血清により得ら
れた吸光度はＳＴＤ中で１．２８Ｅ、 ＳＴＤ−Ｍｇ中
で１．０６Ｅ 、 ５ＴＤ−Ｃａ中で１．０２Ｅであっ
た。すなわち、ＳＴＤ中で得られＩ；数値はこの場合に
はそれぞれわずか１７．２％および２０．３％しか減少
しなかった。
それらの結果を併せ考慮すれば、被分析物質−陽性およ
び一陰性血清についての吸光度差が検体希釈媒質中のＭ
ｇＣｆｆ、およびＣａＣｆｆ ２の影響の下ｌこ大きく
なる、すなわち、このアッセイ系の特異性が明らかに向
上していることが明らかである。
び一陰性血清についての吸光度差が検体希釈媒質中のＭ
ｇＣｆｆ、およびＣａＣｆｆ ２の影響の下ｌこ大きく
なる、すなわち、このアッセイ系の特異性が明らかに向
上していることが明らかである。
検体希釈緩衝液
ＩＢＲ／ＩＰＶコントロール血清、
陽性、（希釈度１：６４０）
バッチ１６３２０８
バッチ１６３２０９
陰性牛血清
（希釈度１：４４）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）生物学的材料中に含まれる被分析物質を未標識反応
物質と接触させる際に二価または三価陽イオン、好まし
くはカルシウムおよび／またはマグネシウム塩を５〜５
００ｍｍｏｌ／ｌの濃度の溶解された形態で存在させる
ことより成る前記被分析物質の免疫化学検出方法および
免疫化学測定方法への多価陽イオンの使用。 ２）塩がクロライドである請求項１記載の使用。 ３）被分析物質が抗原である請求項１記載の使用。 ４）被分析物質が抗体である請求項１記載の使用。 ５）一つの反応物質が固相として存在する請求項１記載
の使用。 ６）塩が乾燥状態で吸収性マトリクス中に含まれている
か、または免疫化学方法において液体検体または他の液
体によって溶解されている請求項１記載の使用。 ７）塩が被分析物質を含有し、そして適切な場合にはそ
の被分析物質の希釈に用いられる溶液に添加される請求
項１記載の使用。 ８）二価または三価陽イオンが３０〜１００ｍｍｏｌ／
ｌの濃度で存在する請求項１〜７のいずれかに記載の使
用。 ９）二価または三価陽イオンが５０〜６０ｍｍｏｌ／ｌ
の濃度で存在する請求項１〜７のいずれかに記載の使用
。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3901458.4 | 1989-01-19 | ||
| DE3901458A DE3901458A1 (de) | 1989-01-19 | 1989-01-19 | Verwendung von zwei- oder dreiwertigen kationen in immunchemischen tests |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02228560A true JPH02228560A (ja) | 1990-09-11 |
| JP3018364B2 JP3018364B2 (ja) | 2000-03-13 |
Family
ID=6372378
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007288A Expired - Lifetime JP3018364B2 (ja) | 1989-01-19 | 1990-01-18 | 免疫化学アッセイへの二価陽イオンの使用 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6242265B1 (ja) |
| EP (1) | EP0379133B2 (ja) |
| JP (1) | JP3018364B2 (ja) |
| AT (1) | ATE125948T1 (ja) |
| AU (1) | AU630410B2 (ja) |
| CA (1) | CA2008060C (ja) |
| DE (2) | DE3901458A1 (ja) |
| ES (1) | ES2076232T5 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08508101A (ja) * | 1993-04-19 | 1996-08-27 | イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・アンド・カンパニー | 免疫検定法の信号対ノイズ比の改善方法 |
| JP2008249738A (ja) * | 2008-07-18 | 2008-10-16 | Eiken Chem Co Ltd | 免疫反応干渉物質の除去方法 |
| JP2019066270A (ja) * | 2017-09-29 | 2019-04-25 | コニカミノルタ株式会社 | 測定用抗体分散液、その製造方法、測定用抗体分散液調製用キット、および生体物質測定方法 |
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| EP0535239A4 (en) * | 1991-03-18 | 1993-11-18 | Shiseido Company Limited | Collagen assaying method and kit |
| US5962340A (en) * | 1994-11-02 | 1999-10-05 | Wako Pure Chemical Industries Ltd. | Homogeneous immunoassay method utilizing 5-300 mM magnesium |
| US6429017B1 (en) * | 1999-02-04 | 2002-08-06 | Biomerieux | Method for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
| DE19750916A1 (de) * | 1997-11-17 | 1999-05-20 | Roche Diagnostics Gmbh | Verbessertes Verfahren zum Nachweis von PSA-ACT-Komplexen |
| CA2316130A1 (en) * | 1999-08-19 | 2001-02-19 | Masanori Fukui | Method for detection or determination of hcv core antigens and reagent for detection or determination for use therein |
| US20030211488A1 (en) * | 2002-05-07 | 2003-11-13 | Northwestern University | Nanoparticle probs with Raman spectrocopic fingerprints for analyte detection |
| US20070105125A1 (en) * | 2005-11-08 | 2007-05-10 | Tsai George P | Chemical array housing having a gas delivery element and methods of using the same |
| CN110241105A (zh) * | 2019-06-19 | 2019-09-17 | 恩碧乐(杭州)生物科技有限公司 | Stromelysin-1水溶液及免疫检测用标准品、检测试剂盒、检测方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4234316A (en) * | 1979-04-02 | 1980-11-18 | Fmc Corporation | Device for delivering measured quantities of reagents into assay medium |
| AU543007B2 (en) * | 1980-04-15 | 1985-03-28 | Technicon Instruments Corportion | Agglutination immunoassay |
| US4578349A (en) * | 1982-04-08 | 1986-03-25 | Abbott Laboratories | Immunoassay for carcinoembryonic antigen (CEA) |
| SE434680B (sv) * | 1983-01-21 | 1984-08-06 | Karl Arne Lundblad | Anvendning av en saltlosning av monoklonala antikroppar med relativt hog salthalt vid blodgruppsbestemning |
| DE3338836A1 (de) * | 1983-10-26 | 1985-05-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung der low density lipoproteine (ldl) und reagenz zu seiner durchfuehrung |
| US4891311A (en) * | 1984-02-03 | 1990-01-02 | Abbott Laboratories | Stabilized enzyme conjugate composition |
| IL74177A (en) | 1984-02-03 | 1989-09-10 | Abbott Lab | Stabilized enzyme conjugate composition containing a calcium salt and a polyethylene glycol |
| JPS61155957A (ja) * | 1984-12-28 | 1986-07-15 | Shionogi & Co Ltd | 免疫学的診断試薬 |
| DE3609217A1 (de) * | 1986-03-19 | 1987-09-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung eines reaktionspartners einer immunologischen reaktion |
| US4794090A (en) * | 1986-09-26 | 1988-12-27 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Immobilization support for biologicals |
| DE3638767A1 (de) * | 1986-11-13 | 1988-05-26 | Behringwerke Ag | Laktoferrin enthaltendes inkubationsmedium fuer festphasenimmunometrisches verfahren und seine verwendung |
| EP0435946B1 (en) * | 1988-09-14 | 1995-01-04 | La Jolla Cancer Research Foundation | Methods for modifying the binding of cell adhesion receptors |
-
1989
- 1989-01-19 DE DE3901458A patent/DE3901458A1/de not_active Withdrawn
-
1990
- 1990-01-16 EP EP90100800A patent/EP0379133B2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-01-16 ES ES90100800T patent/ES2076232T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-01-16 AT AT90100800T patent/ATE125948T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-01-16 DE DE59009452T patent/DE59009452D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-01-17 AU AU48535/90A patent/AU630410B2/en not_active Expired
- 1990-01-18 JP JP2007288A patent/JP3018364B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-01-18 CA CA002008060A patent/CA2008060C/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-05-20 US US08/246,569 patent/US6242265B1/en not_active Expired - Fee Related
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| JPH08508101A (ja) * | 1993-04-19 | 1996-08-27 | イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・アンド・カンパニー | 免疫検定法の信号対ノイズ比の改善方法 |
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| JP2019066270A (ja) * | 2017-09-29 | 2019-04-25 | コニカミノルタ株式会社 | 測定用抗体分散液、その製造方法、測定用抗体分散液調製用キット、および生体物質測定方法 |
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| DE3901458A1 (de) | 1990-07-26 |
| ATE125948T1 (de) | 1995-08-15 |
| ES2076232T3 (es) | 1995-11-01 |
| ES2076232T5 (es) | 2004-03-16 |
| EP0379133A3 (de) | 1991-06-12 |
| EP0379133A2 (de) | 1990-07-25 |
| CA2008060A1 (en) | 1990-07-19 |
| CA2008060C (en) | 2002-12-10 |
| JP3018364B2 (ja) | 2000-03-13 |
| AU4853590A (en) | 1990-07-26 |
| EP0379133B2 (de) | 2003-07-16 |
| DE59009452D1 (de) | 1995-09-07 |
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| AU630410B2 (en) | 1992-10-29 |
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