JPH02234667A - ビフィズス菌の増殖促進剤とその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はビフィズス菌に選択的に利用されて、これを生
育、増殖させるオリゴ糖からなる、ビフィズス菌増殖促
進剤及びその製造方法に関するものである。

更に詳しくは、ソルビトールにグルコースがβ１−１結
合、β１−６結合或いはβ１−４結合（本明細書ではこ
れらの結合を総称してβ結合という）している二糖を有
効成分とするビフィズス菌増殖促進剤、該二糖のグルコ
ース部分又はソルビトール部分に更にグルコースが１乃
至３個β結合している三糖、四糖、若しくは五糖を有効
成分とするビフィズス菌増殖促進剤、或いは該二糖類、
該三糖類、該四糖類及び該五糖類からなる群から２種類
以上の糖を選んでなる組成物を有効成分とするビフィズ
ス菌増殖促進剤、及び以上のビフィズス増殖促進剤の製
造方法に関する。

（従来の技術及び発明が解決しようとする課題）ビフィ
ズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ＋に属する菌
種の総称）はヒトを含む咄乳動物や鳥類の腸内に生育し
ており、病原性菌の生育を抑制することによって騙内の
腐敗や有害物質の生成を抑制し、またビタミン等の有用
物質の産生を行う、等の働きを持つことが知られている
。その結果として、便秘や下痢、更には発癌を押さえる
効果があり、生体の健康を維持、増進するのに役立って
いるとされている。

そこでビフィズス菌のみを選択的に増殖させてその生育
●増殖を促進し、以て腸の機能を良好に保つ物質（ビフ
ィズス菌増殖促進剤）の探索が続けられている。

そして糖の中でビフィズス菌増殖促進剤としての機能を
持つものには、ラフィノース、ラクチュロース、庶糖の
異性体であるバラチノース（特開昭５７−９１１９３）
　、庶糖にフラクトースが１〜４分子結合したフラクト
オリゴ糖（特公昭５９−５３８３４）、グルコース分子
のα１−６結合を有する分岐オリゴ糖（特開昭６１−２
２７７７）及び該分岐オリゴ糖の還元生成物（特開昭６
２−１４５０２０）　、イソマルトシルモノグルコース
の還元物（特公昭６２−５１５８５）等が知られている
。

上記の糖は何れもビフィズス菌増殖促進作用に関しては
一応満足できるレベルにある。しかし製造方法について
見ると、工程が煩雑であったり、原料が高価なために製
造コストがかかるものが多かりた。また、従来の製造方
法でつくられた上記の糖の中で市販されている製品の中
には、原料由来の庶糖がかなりの量含まれているが、庶
糖は騙内の有害菌を増殖させるばかりではな《、虫歯や
肥満の原因にもなるものである。そこで従来の方法で製
造された製品を庶糖を含有しない純度の高い製品とする
ためには、更に精製工程を増やさなければならないが、
それによって製品のコストが更に高《なってしまうとい
う問題点があった。

このような状況の下で、庶糖を原料とせずに製造でき、
しかもコストが安価なビフィズス菌増殖促進剤とその製
造方法の開発が望まれていた。

（課題を解決するための手段） 本発明者らはビフィズス菌増殖促進剤について鋭意研究
を行った結果、ソルビトールにグルコースがβ結合して
いる二糖、或いは該二糖のグルコース部分又はソルビト
ール部分に更にグルコースが１乃至３個β結合している
三糖乃至五糖が、ビフィズス菌を選択的に増殖させ、Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，　Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉ
ｕｍ　ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓｓ　Ｂａｃｔｅｒｏｉｄ
ｅｓｖｕｌｇａｔｕｓなどの腸内の有害菌を増殖させな
いことを見い出した。

ソルビトールにグルコースがα結合しているオリゴ糖（
以下α−グルコシルソルビトールという）がビフィズス
菌増殖促進活性を持っていることは先に述べたように特
開昭６２〜１４５０２０や特公昭６２−５１６８６に記
載されているが、ソルビトールにグルコースがβ結合し
ている二糖、或０は該二糖のグルコース部分又はソルビ
トール部分に更にグルコースが１乃至３個β結合してい
る三糖乃至五糖がビフィズス菌を選択的に増殖する作用
を有することは、本発明者らが初めて見い出したもので
ある。

また本発明者らは、原料として共に安価なグルコースと
ソルビトールとを、これも又安価な酸触媒の存在下で、
単に加熱処理を行うだけで上記の二糖乃至五糖を含む組
成物が得られることを見い出した。本出願の方法は酵素
を用いる製造方法と比較してコストが安く、製造工程も
簡便な製造方法である。

以下の本発明について更に詳しく記載する。

本発明の目的の一つは、ソルビトールにグルコースがβ
結合でつながった二糖、或いは該二糖のグルコース部分
又はソルビトール部分に更にグルコースが１乃至３個β
結合している三糖乃至五糖（以下β−グルコシルソルビ
トールという）を含有するビフィズス菌増殖促進剤に関
するものである。然して本発明でいうβ−グルコシルソ
ルビトールを二糖類と三糖類について例示すると、二糖
類ではβ−Ｄ−グルコシル−（１−１）−Ｄ−ソルビト
ール、β−Ｄ−グルコシル−（１−４）−Ｄ−ソルビ１
・−ル、β一Ｄ−グルコシル−（１−６）一Ｄ−ソルビ
トール、三糖類ではβ一Ｄ−グルコシル−（　１．　−
　６　）一β−Ｄ−グルコシル−（１−１）−Ｄ−ソル
ビｌ・−ル、β一Ｄ−グルコシル−（１−６）一β一Ｄ
−グルコシル−（１−４）一Ｄ−ソルビトール、β−Ｄ
−グルコシルー（１−６）一β−Ｄ−グルコシル−（１
−８）−Ｄ−ソルビトール等が挙げられる。

本発明で使用されるβ−グルコシルソルビトールを使用
に供する形態は、製造して得られるシロップの状態のま
ま、或いは適宜の手段で該シロップを粉末化した上で用
いる等、自由に選択し得る。

β−グルコシルソルビトールのビフィズス菌増殖促進効
果を利用する具体的な例としては、まずこれを単独でビ
フィズス菌増殖剤として供することが出来る。又、適当
な食品にこれを添加して、該食品を腸内のビフィズス菌
を増やす食品となさしめることが出来る。以上のように
して供する場合、生きたビフィズス菌と混合して用〜）
れば腸内ビフィズス菌を増加させる効果は一段と高くな
る。なお、β−グルコシルソルビトールは単独では庶糖
と比較して約１／８の甘味があり、本発明製造方法によ
り得られるα−グルコシルソルビトールとの混合物では
庶糖の約１／６の甘味を脊する。そのため甘味料として
、単独で或いは他の１千味剤と混合して使用することも
出来る。更にβ−グルコシルソルビトールは、叙上のビ
フィズス菌増殖促進作用を有する食品の製造や甘味料へ
の適用の他に、発酵工業や微生物学の研究におけるビフ
ィズス菌の増殖或いは大量生産用の培地成分として用い
られることも期待出来る。

β−グルコシルソルビトールはビフィズス菌増殖促進剤
としての使用に当たっては、必要の応じて単一の化合物
にまで精製して供してもよいし、以下に記載する製造例
等に従って得られる複数の種類のβ−グルコシルソルビ
トール化合物からなる混合物を精製せずにそのまま組成
物としても供してもよい。更に実施例１乃至５に記載さ
れている反応生成物のように、β−グルコンルソルビ１
・ールとα−グルコシルソルビトールとの混合組成物と
してもビフィズス菌増殖促進剤として使用され得る。

本発明に係るβ−グルコシルソルビトールを製造するに
は公知の方法を採ることが出来るが、後に示す表１から
も明らかなように、β−グルコシルソルビトールのビフ
ィズス菌増殖促進剤としての効果は製造方法によって何
等変わるものではなＩＩ１。腸内でビフィズス菌以外の
有害細菌をも増殖させ、虫歯や肥満の原因ともなる反応
基質由来のグルコースを反応生成物から除去するには、
活性炭素がβ−グルコシルソルビトール及びα−グルコ
シルソルビトールのようなオリゴ糖をグルコース及びソ
ルビトールのような単糖よりも強く吸着する性質（Ｎａ
ｋａｎｉｓｈｉ，　Ｋ．　ａｔ　ａｌ．　：（＋９８３
）　Ｅｎｚ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．　Ｔｅｃｈｎｏｌ．
，　５，　１１５−１２０）を利用して、種々の製造方
法で得られた二糖乃至五糖を含む反応生成物を活性炭素
カラムに通し、吸着された糖類をエタノール水溶液等で
溶出させる工程を追加すればよい。

以下の製造例では、反応生成物がα−グルコシルソルビ
トールを含まないように製造する方法として、グルコー
スとソルビトールとからなる混合水溶液にβ−グルコシ
ダーゼを作用させ、加水分解の逆反応により製造する方
法、及びソルビトールを構造の中に有していないβ結合
を有するオリゴ糖（本製造例ではセロオリゴ糖）を還元
する製造方法を示す。この他に、β結合を有するオリゴ
糖、例えばセロオリゴ糖からソルビトールへグリコシル
トランスフェラーゼを用いて糖を転移させる反応を利用
することによっても製造することができる。

（製造例１：β−グルコシダーゼの利用による）グルコ
ース　Ｉｇとソルビトール　ＩＥとを０，１Ｍ酢酸緩衝
液（ｐＨ　５．０）　０．５−に溶解し、アーモンド由
来のβ−グルコシダーゼ（シグマ社製）５ｍｇｃｉｏｏ
ユニット）を加えて３７℃に保ったまま２日間反応させ
た。加熱により酵素を失活させた後、蒸留水で希釈して
酵素を濾別除去し、得られた濾液をＩＩＰＬｃにより分
析したところ、５４％がβ−グル１〇一 コシルソルビトール組成物であった。このシロップ状の
反応生成物を活性炭素カラム（２ｃｍφ×５０ａｍ）に
吸着させ、蒸留水３００＋ｎＱを通してカラムをよく洗
浄した。次いで２００艷のｌＯ％エタノール水溶液によ
り吸着物を溶出させ、エバボレーターにより濃縮したと
ころ、０．７３ｇのシロップが得られた。

このシロップをＨＰＬＣで分析したところ、二糖類が６
５％、三糖類が２３％、四糖類がｌＯ％、五糖類が２％
からなるβ−グルコシルソルビトール組成物であった。

（製造例２：　β結合を有するオリゴ糖の還元による）
ゲンチオビオース（構造はβ一Ｄ−グルコシル−　（１
−６）　一Ｄ−グルコース）Ｉｇを蒸留水２５ｍｌ＋に
溶解させ、これにＩｇの水素化硼素ナトリウムを少量ず
つ添加した。次いで１時間攪拌し、その後２％酢酸５０
−を少しずつ添加した。更に１時間攪拌した後、反応液
をエバボレーターによって濃縮した。該濃縮物を蒸留水
５−に溶解した後、■“型にしたダウケミカル社製のダ
ウエックス５０Ｗ−Ｘ８０カラム（２ｃｍφＸ５０　ｃ
ｍ）に通過させた。

＋１− 更に得られた通過液をＯＨ一型にした東京有機化学工業
社製のアンバーライトＣＧ−４００のカラム（２ｃＩｌ
φ×５０ｃ■）を通過させた。該通過液をエバボレータ
ーにより濃縮した後、濃縮残渣を２艷の蒸留水に溶解し
、活性炭素力ラム（２ｃｍ＋φＸ５０ｃｍ）に吸着させ
た。蒸留水３００ｍ９をカラムに通すことにより活性炭
素カラムをよ《洗浄した後、ｌｏ％エタノール水溶液２
０Ｍで溶出させた。溶出液をエバボレーターで濃縮した
ところ、ほぼ純粋な３５０ｍｇのβ一Ｄグルコシル−（
１−６）−Ｄ−ソルビトールを得た。

次に本発明のもう一つの目的であるβ−グルコシルソル
ビトールの製造方法について述べる。本発明方法はグル
コースとソルビトールとを原料とし、酸触媒の存在下で
該原料混合水溶液を加熱することからなるβ−グルコシ
ルソルビトール組成物の製造方法である。この製造方法
を用いると、上に述べた酵素を触媒として用いる製造方
法と異なり、β−グルコシルソルビトールとα−グルコ
シルソルビトールとの混合物が生成されるが、β１２一 ーグルコシルソルビトール及びα−グルコシルソルビト
ールは共に選択的なビフィズス菌増殖促進剤であるから
、混合物のままでビフィズス菌増殖促進剤として使用に
供することができる。

ここで酸触媒とは、塩酸や硫酸等の鉱酸、酢酸、クエン
酸、リンゴ酸、コハク酸等の有機酸、更にはＨ４型陽イ
オン交換樹脂をも包含するものである。

鉱酸や有機酸を酸触媒として用いる場合は、グルコース
とソルビトールとの混合水溶液に添加する。

Ｈ４型陽イオン交換樹脂を酸触媒として用いる場合には
、鉱酸や有機酸を酸触媒として用いる場合と同様にグル
コースとソルビトールとの混合水溶液に添加するか、或
いは上記イオン交換樹脂をカラムに詰め、グルコースと
ソルビトールの混合水溶液を通過させる。次に加熱温度
について述べると、７０℃以上であれば反応が進行し、
温度が高いほど反応速度は速くなるが、１２０℃を越え
ると反応生成物が着色し始め、１５０’Ｃを越えると着
色の度合が著しくなる。そのため７０〜１５０℃が実質
的に適用し得る温度範囲であり、更に反応速度の向上と
商品としての見栄えの両者を勘案すれば８５〜１２０℃
の範囲が好ましい。

上記製造方法により得られた反応組成物から未反応のグ
ルコースやソルビトールを除去するには、製造例ｌ及び
製造例２の中にも記載があるように、該反応組成物を活
性炭素カラムに通し、カラムに吸着された糖をエタノー
ル水溶液等で溶出すればよい。

（実施例） 以下に本発明を実施例として記載するが、本発明がこれ
らに限定されるものではないことは勿論である。なお、
製造方法に関する実施例において生成されるグルコシル
ソルビトールは、先にも記したように全てβ−グルコシ
ルソルビトールとα−グルコシルソルビトールとの混合
物であるので、該混合物を実施例中では単にグルコシル
ソルビトールと記載する。

（実施例１：酸触媒として塩酸を用いた製造方法）１０
０■ｇのグルコースと３００ｍｇのソルビトールとを蒸
留水に溶解して全量を０．　５ｍ９とし、これにｌＯΔ
のｌ３ 濃塩酸を加えて８５゛Ｃに保ったままで３時間反応させ
た。反応終了後冷却し、Ｏ．ｌＮのＮａＯＨで反応液を
中和してンロップ状の反応生成物を得た。ＨＰＬＣでこ
の反応生成物の組成を分析したところ、未反応のグルコ
ースとソルビトールが合わせて４７．１％、二糖類のグ
ルコンルソルビトールが３７２％、三糖類のグルコシル
ソルビ１・−ルが１５．７％であった。

（実施例２：酸触媒としてクエン酸を用いた製造方法） ８５℃に熱せられたオイルバスの中に浸された２２の反
応容器に２５０−の蒸留水を入れ、この蒸留水を撹拌装
置で激しく撹拌しつつ、該反応容器内へ５００ｇのグル
コースと５００ｇのソルビトールを少量づつ交互に加え
ていった。グルコースとソルビトールの全量を加え終わ
った後にクエン酸２０ｇを該反応容器内に入れ、更にオ
イルバスの温度を１０５℃に」二げた。そのままの状態
で４０時間撹拌して反応を行わせた後、オイルバスの温
度を８０℃に下げて０．８ＮのＮａＯ｝Ｉを加えて反応
生成物を中和した。

オイルバスの温度を８０℃に保ったまま５００−の蒸留
＝１５− 水をこれに加えて希釈した。シロップ状の反応生成物を
取り出して冷却後、反応生成物の組成をＨＰＬＣにより
分析したところ、グルコースとソルビトールが合わせて
４５．２％、二糖類のグルコシルソルビトールが３８．
１％、三糖類のグルコシルソルビトールが１６，７％で
あった。

上で得られた希釈後のシロップ状の反応生成物を１．５
艷取って、活性炭素力ラム（２ｃｍφＸ５０ｃｍ）に通
してこれに吸着させ、蒸留水５００艷を通してカラムを
よく洗浄した後、２０％エタノール水溶液５００叔で吸
着した全糖を溶出させ、エバポレーターによって濃縮し
たところ、０．６２ｇのシロップ状の組成物が得られた
（下の実施例５ではこの組成物を使用して実験を行った
）。この組成物をＨＰＬＣで分析したところ、グルコー
ス及びソルビトールは合わせても２％以下となっており
、二糖類のグルコシルソルビトールが６４％、三糖類の
グルコシルソルビトールが３４％であった。

（実施例３：酸触媒としてＨ１形陽イオン交換樹脂をバ
ッチ式に用いた製造方法） ８５℃のオイルバスに浸漬させた容器に蒸留水２５０艷
を入れ、これを激しく撹拌しながらグルコース５００ｇ
とソルビトール５００　ｇとを加えてこれらを溶解した
。この混合物水溶液に乾燥したＨ４型ダウエックス５０
Ｗ−Ｘ８イオン交換樹脂（ダウケミカル社製）５０ｇを
添加して、オイルバスの温度を１０５℃に上昇させてそ
のまま４０時間攪拌しつつ反応させた。

反応終了後８５℃までオイルバスを冷却し、蒸留水８０
０艷を加えて希釈してから、反応物をフィルターを通過
させて上記イオン交換樹脂を除去した。

得られた濾液に蒸留水を加え、全量で２９のシロップを
得た。

このシロップをＨＰＬＣ及びＩＯＯＭＨＺ　”Ｃ　ＮＭ
Ｒにより詳細に分析したところ、グルコースとソルビト
ールとがα１−１、α１−６、β１−１若しくはβ１−
６結合した二糖のグルコシルソルビトール及び該二糖の
グルコシルソルビトールに更にグルコースが結合した三
糖以上のグルコシルソルビトールが含まれていることが
判明した。二糖以上からなるグルコシルソルビトールの
糖全体に対する割合は５９％であった。

（実施例４：酸触媒としてＨ４形陽イオン交換樹脂力ラ
ムを用いた製造方法） グルコース５ｇとソルビトール５ｇとを蒸留水８艷に溶
解し、乾燥した３ｇのＨ４型ダウエックス５０Ｗ−Ｘ８
イオン交換樹脂を詰めたカラム（２　　ｃ誼φＸ５０ｃ
ｍ）に該水溶液をペリスクリックポンプにより約１載／
分の速度で連続循環を開始した。

そのまま１６時間循環を続けて反応を行わせた。上記カ
ラムは該水溶液を循環させている間はオイルバヌ（こ浸
漬して８５℃に保っておいた。反応終了後、ボンブを止
めてカラムからシロップ状の循環液を取り出した。該シ
ロップ中の糖組成をｌ｛ＰＬＯにより分析したところ、
グルコシルソルビトールは４５％の割合で含まれていた
。更に該シロップを１００Ｍｔｌｚ　Ｉ３Ｃ　ＮＭＲに
かけ、得られたスペクトルをより詳細に分析したところ
、グルコースとソルビトールとがα１−１、α１−６、
β１−１若しくはβ１−６結合した二糖からなるグルコ
シルソルビトール、及び該二糖からなるグルコシルソル
ビトール＋８− に更にグルコースが一つ以上結合した三糖以上のグルコ
シルソルビトールが含まれていることが判明した。

（実施例５：グルコシルソルビトールの選択的なビフィ
ズス菌増殖促進作用） 用いた菌は、ビフィズス菌としてＢｉｆ　ｉｄｏｂａｃ
ｔｅ−ｒｉｕｍ　ｂｒｅｖｅ　（理化学研究所保存株タ
イブＳＩ；以下Ｂ．　ｂｒａｖｅという）Ｎ　　Ｂｉｆ
ｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｉｎｆａｎｔｉｓ（理化学
研究所保存株タイプＳ１２　；以下Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉ
ｓという）　、Ｂｌｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｉ
ｆｉｄｕｍ　（理化学研究所保存株ａＥ３１９；以下Ｂ
．　ｂｉｆｉｄｕｍという）、Ｂｌｆｉｄｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ　　ｌｏｎｇｕｍ　　（ＡＴＣＣ　　１５７０
８；　　以下Ｂ．ｌｏｎｇｕｍという）を、ラクトバチ
ルス菌としてＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏ
ｐｈｌｌｕｓ　（ＪＣＭ　１１３２：以下Ｌ．ａｃ　ｉ
ｄｏｐｈ　ｌ　Ｉｕｓという）を、そして対照の腸内細
菌として、Ｅｓｃｈｅｌｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　（ＪＣ
Ｍ　１６４９；以下Ｅ．ｃｏｌｉという）　Ｎ　　Ｅｎ
ｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ　（ＡＴＣＣ
１９４３３　；以下Ｅｎｔ．　　ｆａｅｃａｌｉｓとい
う）　、Ｂａｃｔｅ−ｒｏｌｄｅｓ　ｖｕｌｇａｔｕｓ
　　（ＪＣＭ　５８２８；以下Ｂａｃｔ．ｖｕｌｇａｔ
ｕｓという）Ｘ　　Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒｆ
ｒｉｎｇｅｎｓ（ＪＣＭ　３８１７；以下Ｃ．　ｐｅｒ
ｆｒｉｎｇｅｎｓという）であった。

培地は、ビフィズス菌及びラクトバチルス菌にはＬＢ発
酵試験培地を、その他の菌にはＰＹＦプロス（Ｐｅｐｔ
ｏｎｅ　ｙｅａｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　Ｆｉｌｄｅｓ　
ｓｏｌｕｔｉｏｎｂｒｏｔｈ）を用いた。培地の組成は
以下の通りである。

堕ｉ鼠跋ｌ亙１ Ｂａｃｔｏ−Ｌｉｖｅｒ　（Ｄｉｆｃｏ）浸出液　　　
１．０００ｎｔＱＰｒｏｔｅｏｓｅ　ｐｅｐｔｏｎｅ　
Ｎｏ．３　（Ｄｉｆｃｏ）　　　　１０ｇＴｒｙｐｔｉ
ｃａｓｅ　（ＢＢＬ）　　　　　　　　　　　５ｇＹｅ
ａｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　（Ｄｉｆｃｏ）　　　　　　
　　３ｇＴｗｅｅｎ　８０　　　　　　　　　　　　　
　　１　ｇＳｏｌｕｔｉｏｎ　Ｂ　　　　　　　　　　
　　　　５ｙｎｌｌＬ−ｃｙｓｔｅｉｎｅ−Ｈｃｌ−Ｈ
２０　　　　　　　　　０．２　ｇ指示薬溶液　　　　
　　　　　　　　２０艷Ａｇａｒ　（Ｄｉｒｃｏ）　　
　　　　　　　　　　１．５ｇｐｏはビフィズス菌用で
は？．２、Ｌ．　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓでは６．５に
調整した。

上の表中でＢａｃｔｏ−Ｌｉｖｅｒ浸出液とは、Ｂａｃ
ｔｏ−Ｌｉｖｅｒ（Ｄ＋ｆｃｏ）５．５　ｇに１，０５
０＋ｕ９の精製水ー２０一 を加え、５０〜６０℃温浴中で時々攪拌しながら約１時
間浸出した後、濾紙で濾過した濾液である。　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　＼Ｓｏｌｕｔｉ
ｏｎ　　Ｂとは、Ｍｇ２ＳＯａ４｝１ｐ０　　１０ｇ１
ＦｅＳＯＡ４Ｈ２０　０．５ｇ１ＮａＣＩ　０．５ｇ．
及びＭｎＳＯ４０．３３７　ｇを２５０ｍ９の精製水に
溶解したものである。

指示薬溶液とは、Ｌ．　ａｃｌｄｏｐｈｌｌｕｓの同定
の場合、　ｌ　ｇのクロロフェノールレッドを０．１Ｎ
　ＮａＯＨで微アルカリ性にして精製水で総量５００ｍ
９にしたものであり、ビフィズス菌の同定の場合、プロ
モクレゾールパープルＩｇ少量の純メタノールに溶解さ
せた後、０．１Ｎ　ＮａＯＨで微アルカリ性とし、精製
水で総ｉ１５００ｍ９にしたものである。

ＰＹＦブロス Ｔｒｙｐｔｏｎｅ　（ＢＢＬ）　　　　　　　　　　　
１０ｇＹｅａｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　（Ｄｉｒｃｏ）　
　　　　　　　５ｇＦｉｌｄｅｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　
　　　　　　　　　４０ｗｎ９Ｓａｌｔｓ　ｓｏｌｕｔ
［ｏｎ　　　　　　　　　　　４０ｄＬ−ｃｙｓｔｅｉ
ｎｅ４ｃｌ−Ｈ２０　　　　　　　　　　　　０．５　
ｇ精製水　　　　　　　　　　　　　　９２〇一ｐＨは
７．２に調整した。

上の表中でＦｉｌｄｅｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎの作り方は
以下の通り。生理食塩水１５０ｍｌｌ，濃塩酸６艷、馬
血液５０ｄ及びペブシン（１：１０，０００、Ｄｉｆｃ
ｏ）Ｉｇを２５０ｍｌ２フラスコに入れてよく混合し、
５５℃に保ったウォーターバスで一晩放置して馬血液を
ペプシンにより消化させる。２０％のＮａＯＨ溶液１２
−を加え、Ｉ）ｌ’ｌが正確に７．６になるように　Ｎ
ａＯＨ又はＨＣＩで修正する。このようにして出来上が
ったＦｉｌｄｅｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎはクロロフォルム
２ｍｌｌを添加して冷蔵保存する。

上の表中のＳａｌｔｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎの作り方は以
下の通り。無水ＣａＣｌ２０．２ｇ＋！：ＭｇＳＯｎ　
０．２ｇとを３００艷の精製水に溶解し、次いでこの溶
液をよく攪拌しつつ精製水５００−を加えＮ　Ｋ２ＨＰ
Ｏ４１　ｇｓＫＨａＰＯａ　１　ｇ，　ＮａＨＣ０３１
０　ｇ及びＮａＣｌ２ｇを加えて完全に溶かし、更に２
００ｍ９の精製水を加えて混合する。このようにして出
来上がったＳａｌｔ＝２１− ｓｏｌｕｔｉｏｎは４℃で保存する。

これらの培地は指示薬溶液以外の成分を加熱して溶解し
、ＩｌＭを指定の値に調整して指示薬溶液を添加、１２
１℃２０分間の蒸気威菌を行った。

濾過戚菌した純度９０％のβ−グルフシルソルビトール
、本発明の製造例１、製造例２又は実施例２で最終的に
得られたグルコシルソルビトール組成物の１００Ｉｌｌ
ｇ／Ｉｕ９水溶液１　００ｄをそれぞれ無菌的に上記滅
菌済みの培地２ｄに加えた。一方対照としてグルコース
、ラフィノース、ソルビトール及び純度９０％のα−グ
ルコシルソルビトールの各１００ｍｇ／艷水溶液１００
ｄをそれぞれ無菌的に上記滅菌済みの培地２艷に加えた
培地を用意した。以上を本実施例に供する培地とした。

以上のようにして用意した各培地に、上記各菌を含む生
理食塩水（菌濃度は約１０”〜！０９個／艷）を５０ρ
ずつ植え付けて培養を開始した。ビフィズス菌％　　Ｂ
ａｃｔ．　ｖｕｌｇａｔｕｓ及びＣ．　ｐｅｒｆｒｉｎ
ｇｅｎｓはＧａｓＰａｃｋ法を用いて嫌気的条件下で、
他の菌はロータリーシェーカーにより攪拌しつつ好気的
条件下でそれぞれ３日間、３７℃で培養した。

菌の増殖は、培地のｐＨの低下を主な指標とし、これに
測度を加味して判定した。判定の基準は以下の通りであ
る。菌を加えずに上記培養条件と同じ状態に置いておい
た培地をコントロールとして、原則としては菌を入れた
培地のｐＨの低下が２．０以上のものを柑、１．０１〜
２．０のものを丑、０．５１〜１．０のものを士、０．
３１〜０、５０のものを士、０．３０以下のものをーと
した。これに目視による濁度の評価も考慮して最終的に
菌増殖の判断を下した。結果を表１に示す。

（以下余白） ＝２４ 表１が示すように、純度９０％のβ−グルコシルソルビ
トール或いは、本発明の製造例１、製造例２又は実施例
２により得られたグルコシルソルビトール組成物は、い
ずれもビフィズス菌の増殖促進作用があるのに対してＮ
　　Ｂａｃｔ．　ｖｕｌｇａｔｕｓｓ　　Ｅ．ｃｏｌｌ
及びＣ．　ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓの増殖促進作用は全
く無く、ビフィズス菌に対する選択性が非常に高い。

これに対し、従来ビフィズス菌を選択的に増殖させると
されているラフィノースはＢａｃｔ．　ｖｕｌｇａｔｕ
ｓ及びＣ．　ｐａｒｆｒｉｎｇｅｎｓをかなり増殖させ
る。又、本発明に係るβ−グルコシルソルビトールと構
造が極めて類似しているα−グルコシルソルビトールも
、低レベルとはいえ、Ｂａｃｔ．　ｖｕｌｇａｔｕｓ及
びＣ．ｐｅｒｆｒ　ｉｎｇｅｎｓを増殖させる作用があ
る。

以上から、ビフィズス菌に対する選択性においてβ−グ
ルコシルソルビトールは、従来知られているビフィズス
菌増殖促進剤よりも優れていることが示される。

以」二

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ソルビトールにグルコースがβ結合している二糖を
   有効成分とするビフィズス菌増殖促進剤。 ２、請求項１の二糖のグルコース部分又はソルビトール
   部分に更にグルコースが１乃至３個β結合している三糖
   、四糖、若しくは五糖を有効成分とするビフィズス菌増
   殖促進剤。３、請求項１に記載の二糖、請求項２に記載
   の三糖、四糖及び五糖、からなる群から２種類以上の糖
   を選んでなる組成物を有効成分とするビフィズス菌増殖
   促進剤。 ４、ソルビトールとグルコースとの混合水溶液を酸触媒
   の存在下、加熱することを特徴とする請求項１乃至請求
   項３のビフィズス菌増殖促進剤の製造方法。 ５、酸触媒が鉱酸、有機酸、及びＨ＾＋形陽イオン交換
   樹脂からなる群から選ばれたものである請求項４のビフ
   ィズス菌増殖促進剤の製造方法。 ６、ソルビトールに対するグルコースの重量比が０．２
   乃至５である請求項４の製造方法。 ７、加熱温度が７０℃乃至１５０℃である請求項４の製
   造方法。