JPH02234682A - プロトカテキュ酸の製造方法 - Google Patents
プロトカテキュ酸の製造方法Info
- Publication number
- JPH02234682A JPH02234682A JP5736289A JP5736289A JPH02234682A JP H02234682 A JPH02234682 A JP H02234682A JP 5736289 A JP5736289 A JP 5736289A JP 5736289 A JP5736289 A JP 5736289A JP H02234682 A JPH02234682 A JP H02234682A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protocatechuic acid
- culture
- acid
- medium
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の目的〕
（産業上の利用分野）
本発明は，防錆剤，食品用抗酸化剤の製造原料，香料な
どとして用いられるバニリンの製造原料，各種医薬品の
製造の製造原料などとして広く用いられているプロトカ
テキュ酸を，微生物を利用して製造する方法に関する。
どとして用いられるバニリンの製造原料，各種医薬品の
製造の製造原料などとして広く用いられているプロトカ
テキュ酸を，微生物を利用して製造する方法に関する。
（従来の技術）
プロトカテキュ酸の製造方法としては，有機合成反応に
よるものと，高い選択特異性を有する微生物の酵素反応
によるものとがある。これらのうち，微生物の酵素反応
による醗酵法は，有機合成反応による方法に較べ．反応
が常温常圧近辺の温和な条件下でも進むこと，有害な触
媒を使用しないこと，および副生成物が少ないことから
，省エネルギー・省資源であり，公害も起こりにくい安
全性の高い．低コスト，高収率の，効率のよい製造方法
である。
よるものと，高い選択特異性を有する微生物の酵素反応
によるものとがある。これらのうち，微生物の酵素反応
による醗酵法は，有機合成反応による方法に較べ．反応
が常温常圧近辺の温和な条件下でも進むこと，有害な触
媒を使用しないこと，および副生成物が少ないことから
，省エネルギー・省資源であり，公害も起こりにくい安
全性の高い．低コスト，高収率の，効率のよい製造方法
である。
そして，従来，プロトカテキュ酸を醗酵により製造する
方法としては，プレビバクテリウム属菌の変異株あるい
はコリネハクテリウム属菌の変異株を．グルコースを主
炭素源とする培地で培養して得る方法が知られている（
特開昭５（１８９５９２号公報および特開昭６ ０−９
８ ９ ８ ９号公報参照）。
方法としては，プレビバクテリウム属菌の変異株あるい
はコリネハクテリウム属菌の変異株を．グルコースを主
炭素源とする培地で培養して得る方法が知られている（
特開昭５（１８９５９２号公報および特開昭６ ０−９
８ ９ ８ ９号公報参照）。
しかしながら５グルコースを主炭素源とするこれらの方
法では，グルコースを高濃度で使用しなければならない
とともに，高価な培地成分を使用しなければならず，ま
た．グルコースを高濃度で使用しても収率が低く，結果
として．プロトカテキュ酸の製造コストが高くなるとい
う欠点があった。
法では，グルコースを高濃度で使用しなければならない
とともに，高価な培地成分を使用しなければならず，ま
た．グルコースを高濃度で使用しても収率が低く，結果
として．プロトカテキュ酸の製造コストが高くなるとい
う欠点があった。
（発明が解決しようとする課題）
本発明者らは，鋭意検討の結果，東京都内土壌より分離
されたロドコソカス属に属すると認められる微生物を．
イソフタル酸を主炭素源とする培地で培養すると，培養
物中にプロトカテキュ酸が高収率で生産されることを見
出し．本発明を完成したものである。
されたロドコソカス属に属すると認められる微生物を．
イソフタル酸を主炭素源とする培地で培養すると，培養
物中にプロトカテキュ酸が高収率で生産されることを見
出し．本発明を完成したものである。
（発明の構成〕
（課題を解決するための手段）
本発明は．ロドコッカス属に属しプロトカテキュ酸を生
産する能力を有する微生物を，イソフタル酸を主炭素源
とする培地で培養し．得られた培養物からプロトカテキ
ュ酸を採取することを特徴とするプロトカテキュ酸の製
造方法である。
産する能力を有する微生物を，イソフタル酸を主炭素源
とする培地で培養し．得られた培養物からプロトカテキ
ュ酸を採取することを特徴とするプロトカテキュ酸の製
造方法である。
本発明に使用される微生物としては，ロドコソカス属に
属し，プロトカテキュ酸生産能を有する菌があげられる
が，代表的な菌としては，本発明者らが東京都内土壌か
ら分離したロドコソカスｓｐ． Ｌｌ株（ Ｒｈｏｄ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ． Ｌ − １株，微工研菌寄第
１０６１４号）を例示できる。本菌株（Ｌ−１株）の菌
学的性質は以下に示す通りである。
属し，プロトカテキュ酸生産能を有する菌があげられる
が，代表的な菌としては，本発明者らが東京都内土壌か
ら分離したロドコソカスｓｐ． Ｌｌ株（ Ｒｈｏｄ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ． Ｌ − １株，微工研菌寄第
１０６１４号）を例示できる。本菌株（Ｌ−１株）の菌
学的性質は以下に示す通りである。
■．形態学的性質
（１１菌 形 ：桿 菌
（２） 大 き さ ： ０．８ｘ
１．５ 〜２．０ｐｍ（３）多 形 性 ：３０゜
Ｃで培養すると，１〜２日で菌糸を形成し，その後， フラグメンテーションを起こ し，桿菌となる。気菌糸は形 成しない。
１．５ 〜２．０ｐｍ（３）多 形 性 ：３０゜
Ｃで培養すると，１〜２日で菌糸を形成し，その後， フラグメンテーションを起こ し，桿菌となる。気菌糸は形 成しない。
（４）抗酸性；な し
（５） ダラム染色性： 陽 性（６） 鞭
毛 ： な し（７） 胞
子 ： な し■．培養的性質 （１）肉汁寒天平板培養：生育良好。
毛 ： な し（７） 胞
子 ： な し■．培養的性質 （１）肉汁寒天平板培養：生育良好。
コロニー形状は円形，周囲は
平滑で，色は乳白色。
（２）肉汁寒天斜面培養：糸状。
コロニーの色は乳白色。
（３）肉汁液体培養：均一に混濁。
（４）イソフタル酸寒天平板培養（培地組成，表１）：
生育良好。
生育良好。
コロニー形状は円形で，周囲
は平滑で，色は白色。
■．生理学的性質
（１１ 最適生育温度
（２）生賃温度
（３）最適ｐＨ
（４）生育ｐ Ｈ
《５）酸素要求性
（６）色素の生産
《７》ゼラチン液化性
（８）カタラーゼ活性
（９）オキシダーゼ活性
αω ウレアーゼ活性
αυ インドールの生産
（６）デンプンの加水分解活性
（ロ）硝酸塩の還元
００ クエン酸培地における生育
Ｑ５１ メチルレッド試験
Ｑ＊ＶＰ反応
（以下，余白）
２５〜３３℃
２０〜３５℃
６．０〜８．０
５．０〜１０．０
好気的
な し
陽性
陽性
陰性
陽性
陰性
陰性
陰性
生育する
陰性
陰性
：産生しない。
０の 細胞壁のジアミノビメリン酸異性体；ｍｅｓｏ−
ＤＡＰ． ００１ 細胞壁アシル型（グリコリル試験）：グリコ
リル基が存在。
ＤＡＰ． ００１ 細胞壁アシル型（グリコリル試験）：グリコ
リル基が存在。
（２１．） ミコール酸の存在：存在する。
（２２） 分 離 源 ：東京都内土壌以上の
菌学的性質から，ハージエイ・マニュアル・オブ・シス
ティマティソク・ハクテリオロジー第２巻（Ｂｅｒｇｅ
ｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌｕｍｅ ２ ）に
より同定を行なうと１本菌株はロドコソカス属（ Ｒｈ
ｏｃｌｏｃｏｃｃｕｓ属）に属すると認められ．本菌株
をロドコッカスｓｐ．Ｌ−１株（ Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃ
ｕｓ ｓｐ． Ｌ − １株）と命名した。本菌株は工
業技術院微生物工業技術研究所に倣工研菌寄第１０６１
４号として寄託されている。
菌学的性質から，ハージエイ・マニュアル・オブ・シス
ティマティソク・ハクテリオロジー第２巻（Ｂｅｒｇｅ
ｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌｕｍｅ ２ ）に
より同定を行なうと１本菌株はロドコソカス属（ Ｒｈ
ｏｃｌｏｃｏｃｃｕｓ属）に属すると認められ．本菌株
をロドコッカスｓｐ．Ｌ−１株（ Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃ
ｕｓ ｓｐ． Ｌ − １株）と命名した。本菌株は工
業技術院微生物工業技術研究所に倣工研菌寄第１０６１
４号として寄託されている。
本発明における培養には，通常の細菌の培養法を用いる
ことができる。培養のための栄養源としてはつぎのよう
なものを用いることができる。
ことができる。培養のための栄養源としてはつぎのよう
なものを用いることができる。
すなわち，主炭素源としてのイソフタル酸，ちっ素源，
無機塩類，ビタミン，その他の栄養因子を適宜含有する
培地であれば．天然培地でも合成培地でも使用できる。
無機塩類，ビタミン，その他の栄養因子を適宜含有する
培地であれば．天然培地でも合成培地でも使用できる。
ちっ素源としては，硝酸アンモニウム，硝酸ナトリウム
．硫酸アンモニウム，塩化アンモニウム，リン酸アンモ
ニウムなどの無機ちっ素源，ペプトン．肉エキス，コン
スティープリカー，酵母エキス，カザミノ酸，大豆粉な
どを単独でまたは組み合わせて用いることができる。無
機塩類としてリン酸カリウム，リン酸ナトリウム．硫酸
マグネシウム．硫酸マンガン，硫酸鉄，硫酸亜鉛，硫酸
銅モリブデン酸ナトリウム，塩化カルシウム２塩化カリ
ウムなどを加えてもよい。これらの他，生育に必要な栄
養因子としては，ビタミン類，アミノ酸，核酸およびそ
の塩類などがある。また，ペプトン，肉エキス，コンス
ティープリカー．酵母エキス，カザミノ酸などの上記栄
養因子を含有する天然有機栄養物を適宜添加することも
できる。前述の各培地成分を適当量混合して，プロトカ
テキュ酸の生産に適当な条件を決定して用いられる。
．硫酸アンモニウム，塩化アンモニウム，リン酸アンモ
ニウムなどの無機ちっ素源，ペプトン．肉エキス，コン
スティープリカー，酵母エキス，カザミノ酸，大豆粉な
どを単独でまたは組み合わせて用いることができる。無
機塩類としてリン酸カリウム，リン酸ナトリウム．硫酸
マグネシウム．硫酸マンガン，硫酸鉄，硫酸亜鉛，硫酸
銅モリブデン酸ナトリウム，塩化カルシウム２塩化カリ
ウムなどを加えてもよい。これらの他，生育に必要な栄
養因子としては，ビタミン類，アミノ酸，核酸およびそ
の塩類などがある。また，ペプトン，肉エキス，コンス
ティープリカー．酵母エキス，カザミノ酸などの上記栄
養因子を含有する天然有機栄養物を適宜添加することも
できる。前述の各培地成分を適当量混合して，プロトカ
テキュ酸の生産に適当な条件を決定して用いられる。
培養は，好気的条件，例えば振盪培養法，通気攪拌培養
法が好適であるが．適宜液体静置培養法を組み合わせる
こともできる。培養温度は２０〜３５℃，特に２５〜３
３℃が良好で．培地のｐ Ｈは５〜１０であればよい。
法が好適であるが．適宜液体静置培養法を組み合わせる
こともできる。培養温度は２０〜３５℃，特に２５〜３
３℃が良好で．培地のｐ Ｈは５〜１０であればよい。
培地中のイソフタル酸の濃度は通常０．１〜１０％，好
ましくは０．５〜３、０％が好適である。イソフクル酸
を主炭素源として．培地ｐ Ｈ ７． ０付近，３０℃
で振盪培養あるいは通気攪拌培養すると．プロｌ・カテ
キュ酸は培養３日目から培養物中に生成蓄積される。培
養は，通常３〜８日で完了するが，プロ１・カテキュ酸
の生産量が最大に達した時に終了する。
ましくは０．５〜３、０％が好適である。イソフクル酸
を主炭素源として．培地ｐ Ｈ ７． ０付近，３０℃
で振盪培養あるいは通気攪拌培養すると．プロｌ・カテ
キュ酸は培養３日目から培養物中に生成蓄積される。培
養は，通常３〜８日で完了するが，プロ１・カテキュ酸
の生産量が最大に達した時に終了する。
培養物からのプロトカテキュ酸の分離は，天然有機化合
物の分離に通常用いられる方法で行なえばよい。例えば
．菌体除去後の培養液を塩酸酸性にした後，含塩素１含
酸素または炭化水素系の存機溶媒などで抽出し，減圧下
で濃縮する。本発明においては，この濃縮液をＴＬＣ
（薄層クロマトグラフィー）で分析し，目的とするスポ
ソトを分取し，ＧＣ−ＭＳ（ガスクロマトグラフィー質
量分析計）およびＦＤＭＳ （電解脱離イオン質量分析
計）により分析し，プロトカテキュ酸と同定した。また
，培養液中のブロｌ一カテキュ酸の定量は．ＨＰＬＣ（
高速液体クロマトグラフィー）により行なうことができ
る。
物の分離に通常用いられる方法で行なえばよい。例えば
．菌体除去後の培養液を塩酸酸性にした後，含塩素１含
酸素または炭化水素系の存機溶媒などで抽出し，減圧下
で濃縮する。本発明においては，この濃縮液をＴＬＣ
（薄層クロマトグラフィー）で分析し，目的とするスポ
ソトを分取し，ＧＣ−ＭＳ（ガスクロマトグラフィー質
量分析計）およびＦＤＭＳ （電解脱離イオン質量分析
計）により分析し，プロトカテキュ酸と同定した。また
，培養液中のブロｌ一カテキュ酸の定量は．ＨＰＬＣ（
高速液体クロマトグラフィー）により行なうことができ
る。
（実 施 例）
以下，実施例により．本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１
表２に示す組成の混合物を．１００ｍβ容三角フラスコ
に４ ０ｍ４２分注し，１２１℃で１５分間オートクレ
ープし，プロトカテキュ酸生産用培地を得た。
に４ ０ｍ４２分注し，１２１℃で１５分間オートクレ
ープし，プロトカテキュ酸生産用培地を得た。
得られたプロトカテキュ酸生産用培地に、ロドコッカス
ｓｐ．Ｌ−１株（ Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．
Ｌ−１株，微工研菌寄第１０６１４号）を１白金耳接
種し３０℃で４日間振盪培養した。得られた培養物につ
いて，遠心分離で除菌した後．ＨＰＬＣでプロトカテキ
ュ酸生成量を測定したところ．６．０ｇ／ｊ２であった
。
ｓｐ．Ｌ−１株（ Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．
Ｌ−１株，微工研菌寄第１０６１４号）を１白金耳接
種し３０℃で４日間振盪培養した。得られた培養物につ
いて，遠心分離で除菌した後．ＨＰＬＣでプロトカテキ
ュ酸生成量を測定したところ．６．０ｇ／ｊ２であった
。
実施例２
表２に示す組成の混合物から，実施例１と同様にして．
プロトカテキュ酸生産用培地を得、ロドコッカスｓｐ．
Ｌ−１株（ Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ． Ｌ
− １株，漱工研菌寄第１０６１４号）を接種し２ ３
０℃で振盪培養し，培養開始７２時間後にイソフタル酸
０．４ｇを，培養開始１２０時間後にイソフタル酸０．
２ｇをそれぞれ添加し，培養開始１４０時間後に培養を
終了した。得られた培養物について，実施例ｌと同様に
して．プロトカテキュ酸の生成量を測定したところ，１
６．５ｇ／Ｉｌであった。
プロトカテキュ酸生産用培地を得、ロドコッカスｓｐ．
Ｌ−１株（ Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ． Ｌ
− １株，漱工研菌寄第１０６１４号）を接種し２ ３
０℃で振盪培養し，培養開始７２時間後にイソフタル酸
０．４ｇを，培養開始１２０時間後にイソフタル酸０．
２ｇをそれぞれ添加し，培養開始１４０時間後に培養を
終了した。得られた培養物について，実施例ｌと同様に
して．プロトカテキュ酸の生成量を測定したところ，１
６．５ｇ／Ｉｌであった。
実施例３
表１に示す組成比の混合物を，５１容ジャーファメンタ
ーに３ｌ分注し，１２１℃で１５分間オートクレープし
，プロトカテキュ酸生産用培地を得た。
ーに３ｌ分注し，１２１℃で１５分間オートクレープし
，プロトカテキュ酸生産用培地を得た。
得られたプロトカテキュ酸生産用培地に，ロドコッカス
ｓｐ．Ｌ−１株（ Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．Ｌ
− １株．微工研菌寄第１０６１４号）を接種し，通
気量０． ３ １ ／分．攪拌回転数３２Ｏｒｐｍ，培
養温度３０℃の条件で１２０時間培養した。得られた培
養物について，実施例１と同様にして．プロトカテキュ
酸の生成量を測定したところ，１０．６ｇ／Ｎであっ〔
発明の効果〕 本発明により．従来のグルコースを主炭素源とする醗酵
法に較べ，低コスト．高収率で．プロトカテキュ酸が製
造できるようになった。
ｓｐ．Ｌ−１株（ Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．Ｌ
− １株．微工研菌寄第１０６１４号）を接種し，通
気量０． ３ １ ／分．攪拌回転数３２Ｏｒｐｍ，培
養温度３０℃の条件で１２０時間培養した。得られた培
養物について，実施例１と同様にして．プロトカテキュ
酸の生成量を測定したところ，１０．６ｇ／Ｎであっ〔
発明の効果〕 本発明により．従来のグルコースを主炭素源とする醗酵
法に較べ，低コスト．高収率で．プロトカテキュ酸が製
造できるようになった。
Claims (1)
- １、ロドコッカス属に属しプロトカテキュ酸を生産する
能力を有する微生物を、イソフタル酸を主炭素源とする
培地で培養し、得られた培養物からプロトカテキュ酸を
採取することを特徴とするプロトカテキュ酸の製造方法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5736289A JPH0738792B2 (ja) | 1989-03-09 | 1989-03-09 | プロトカテキュ酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5736289A JPH0738792B2 (ja) | 1989-03-09 | 1989-03-09 | プロトカテキュ酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02234682A true JPH02234682A (ja) | 1990-09-17 |
| JPH0738792B2 JPH0738792B2 (ja) | 1995-05-01 |
Family
ID=13053470
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5736289A Expired - Lifetime JPH0738792B2 (ja) | 1989-03-09 | 1989-03-09 | プロトカテキュ酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0738792B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014050373A (ja) * | 2012-09-10 | 2014-03-20 | Genaris Inc | イソフタル酸輸送タンパク質を保有する微生物及びその利用 |
-
1989
- 1989-03-09 JP JP5736289A patent/JPH0738792B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014050373A (ja) * | 2012-09-10 | 2014-03-20 | Genaris Inc | イソフタル酸輸送タンパク質を保有する微生物及びその利用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0738792B2 (ja) | 1995-05-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Frengova et al. | Formation of carotenoids by Rhodotorula glutinis in whey ultrafiltrate | |
| EP0280398A2 (en) | Method for producing acid urease, and use thereof | |
| JPS60244295A (ja) | （十）‐トランス‐シクロプロパンカルボン酸の製造方法 | |
| JPH084515B2 (ja) | 有機化合物の製造方法 | |
| EP0202613B1 (en) | Process for producing menaquinone-4 | |
| JPH02234682A (ja) | プロトカテキュ酸の製造方法 | |
| JPH0669381B2 (ja) | カルニチンの製造法 | |
| JP4439079B2 (ja) | プラバスタチンの製造方法 | |
| JP3957053B2 (ja) | 新規な微生物及びプラバスタチンの製造方法 | |
| CN108517306A (zh) | 一种生物法制备l-半胱氨酸的方法 | |
| JP3383342B2 (ja) | アスタキサンチンの製造法 | |
| JP2964163B2 (ja) | Ｒ（―）―１，３―ブタンジオールの製造法 | |
| US4916067A (en) | Method for the preparation of sorbic acid by oxidizing 2,4-hexadienal with a microorganism | |
| JPH0378106B2 (ja) | ||
| JPH05153982A (ja) | 新規変異株及びそれを用いるグリセリンの製造方法 | |
| JP3926914B2 (ja) | ３，４−ジヒドロキシ安息香酸の製造法 | |
| KR880001680B1 (ko) | 발효에 의한 시소마이신의 제조방법 | |
| JPH0378107B2 (ja) | ||
| JPH07327690A (ja) | インジゴの製造法 | |
| JPH04316496A (ja) | （ｒ）−（＋）−３−ハロ乳酸の製造法 | |
| JPH07236472A (ja) | 新規微生物およびそれを使用した３，４−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法 | |
| JPS6214789A (ja) | ピルビン酸の製造法 | |
| JPH02257874A (ja) | ロドコッカス属細菌及びそれを用いる２―ヒドロキシ酪酸の製造法 | |
| JPS63137685A (ja) | ｌ−メント−ルの製造法 | |
| JPS61205498A (ja) | 軸性不斉化合物の製造方法 |